JP2002513765A - 免疫応答の調節における無視された標的組織抗原の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 無視された標的組織抗原と名付けられた、異常な免疫応答（例えば、アレルギーまたは自己免疫またはより一般的には炎症）の標的としては含まれない抗原を同定するための方法が開示され；調節的応答を誘導するためにＮＴＴＡを使用し、そしてそれによって異常な炎症性の免疫応答を軽減する方法もまた、開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （米国政府の権利） 本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈに
よって与えられた助成金番号ＤＫ ４８４５５の下で、政府の支援の下で行なわ
れた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、免疫応答を調節する際の特定の非標的抗原の使用に関し、そしてよ
り詳細には、特に自己免疫カスケードの後期段階の間における、望ましくない免
疫応答（例えば、自己免疫）を軽減する際の、特定の非標的抗原の使用に関する
。

【０００３】 （発明の背景） 開始抗原が規定されている、実験的に誘発された器官特異的自己免疫疾患モデ
ルでは、開始抗原に反応性であるＴ細胞を欠失または不活化させることにより、
自己免疫の発症を回避することが可能である（Ｓｈａｒｍａ，Ｓ．Ｄ．，Ｎａｇ
，Ｂ．，Ｓｕ，Ｘ．Ｍ．ら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．Ｕ．Ｓ．Ａ．８８，１１４６５−１１４６９；Ｃｒｉｔｃｈｆｉｅｌｄ，Ｊ．
Ｍ．，Ｒａｃｋｉｅ，Ｍ．Ｋ．，Ｚｕｎｉｇａ−Ｐｆｌｕｃｋｅｒ，Ｊ．Ｃ．ら
．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３，１１３９−１１４３）。しかし、開始
標的抗原は、特異的Ｔ細胞欠失による自己反応性の開始を回避する試みを除いて
は、いくつかのヒトＴ細胞媒介自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症（ＭＳ）、
インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）または慢性関節リウマチ（ＲＡ））におい
ては同定されていない。従って、現在の治療ストラテジーは、疾患を発症する高
い危険性がある、症候性のまたは症候発生前の（ｐｒｅｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ
）個体（例えば、循環する島自己抗体を有する前糖尿病の個体）において、活性
な自己免疫応答を阻害することに焦点が置かれている。

【０００４】 薬理学的免疫抑制、抗炎症性サイトカインおよびＴ細胞表面分子に対する抗体
は、動物モデルにおける病原性自己免疫応答を阻害し得る；しかし、これらのア
プローチはまた、免疫系機能を広範に妨害する。エフェクターＴ細胞レセプター
（ＴＣＲ）、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）もしくはそれらのペプチドリ
ガンドの妨害、またはＭＨＣ−ペプチド結合体を介するアポトーシスの誘導は、
自己反応性Ｔ細胞集団をより選択的に標的とし、そして動物モデルにおいて効力
が示されている（Ｓｈａｒｍａ、前出；Ｚａｍｖｉｌ Ｓ．ら，１９９０，Ａｎ
ｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：５７９；Ｇａｕｒ Ａ．ら，１９９４，Ａ
ｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５６：２１９）。しかし、このようなストラテジーは、
その自己反応性Ｔ細胞レパートリーが、疾患の進行に伴って変化および進化し得
る、遺伝的に多様なヒト患者集団に適用することは困難である。

【０００５】 器官特異的自己免疫疾患の動物モデルの研究は、自己反応性Ｔｈ１型炎症応答
のカスケードが、この疾患のプロセスを媒介することを示唆する（４−８）。初
期の自己免疫応答は、自己抗原のその認識において制限されているようであるが
、初期の自己免疫応答は、続いて拡大し、さらなる標的組織抗原に対して反応す
るようになる（２、５〜９）。自己免疫のこの拡散に起因して、症候性および自
己抗体にポジティブな前症候性個体は、Ｔ細胞を選択的に欠失または不活化させ
るのをより困難にする、多様な自己反応性Ｔ細胞レパートリーを有するようであ
る。

【０００６】 異なるＴ細胞サブセットの拮抗作用に基づいて、種々の研究者は、調節応答を
誘発する態様における自己抗原（例えば、Ｔｈ２、Ｔｈ３、Ｔｒ１または他の抗
炎症性細胞）の投与（９〜１２）は、病原性自己免疫応答を下方調節し、そして
疾患の進行を阻害するために用いられ得る（１３〜１６）ことを提唱した。この
アプローチは、免疫系の機能を広範には妨害せず、開始標的抗原またはエフェク
ターＴ細胞の特異性についての情報を必要ともしない。自己抗原誘発性調節応答
は、標的器官におけるそれらの同族抗原を再度遭遇させる際に、それらの特異性
にかかわらず、「バイスタンダー抑制」と呼ばれるプロセスにおいてエフェクタ
ーＴ細胞を局所的に抑制する抗炎症性サイトカインを放出するからである（Ｗｅ
ｉｎｅｒ，Ｈ．Ｌ．，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１８：３３５）
。

【０００７】 自己抗原に基づく免疫治療が、「調節寛容性」を確立し、そして自己免疫媒介
性の組織損傷を阻害する、抗原特異的サプレッサーＴ細胞を誘発する能力は、動
物モデルにおいて充分に実証されている。実際、自己免疫疾患の処置のための多
くの古典的寛容化プロトコル（例えば、腹腔内経路、経口経路、または鼻腔内経
路による自己抗原投与）が、調節応答の誘発に関与することが現在公知である（
Ｗｅｉｎｅｒ，Ｈ．Ｌ．（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８，３３
５−３４３；Ｈｏｌｔ，Ｐ．Ｇ．およびＭｃＭｅｎａｍｉｎ，Ｃ．（１９８９）
Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ １９，２５５−２６２；Ｆｏｒｓｔｈｕｂ
ｅｒ，Ｔ．，Ｙｉｐ，Ｈ．Ｃ．およびＬｅｈｍａｎｎ，Ｐ．Ｖ．（１９６６）Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２７１，１７２８−１７３０）。これらの研究、ならびにサイト
カインまたは補助分子を操作した他の研究。（Ｐｏｗｒｉｅ，Ｅ．およびＣｏｆ
ｆｍａｎ，Ｒ．Ｌ．（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １４，２７０−
２７４；Ｌｅｎｓｃｈｏｗ，Ｄ．Ｊ．，Ｈｅｒｏｌｄ，Ｋ．Ｃ．Ｒｈｅｅ，Ｌ．
ら（１９６６）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ５，２８５−２９３；Ｓｈａｗ，Ｍ．Ｋ．，
Ｌｏｒｅｎｓ，Ｊ．Ｂ．，Ｄｈａｗａｎ，Ａ．ら（１９７７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅ
ｄ．１８５，１７１１−１７１４；Ｒａｐｏｐｏｒｔ，Ｍ．Ｊ．，Ｊａｒａｍｉ
ｌｌｏ，Ａ．，Ｚｉｐｒｉｓ，Ｄ．ら（１９９３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８
，８７−９９）は、調節応答の誘発は、疾患の結果の強力なモジュレーターであ
り得ることを実証した。自己反応性の前炎症（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒ
ｙ）Ｔ細胞応答が、処置後に長期の間持続し得るとはいえ（例えば、参考文献（
１６〜１８））、処置された動物はしばしば、疾患に罹らないままである。この
ことは、誘発された調節応答が長期の機能的寛容性を確立し得ることを示す。

【０００８】 免疫偏差パラダイム（ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｐａｒａｄｉｇｍ
）に基づく、抗原に基づく免疫治療の成功にもかかわらず、抗原に基づく免疫治
療に対する正確な作用態様は、非常に議論されている。異なる動物モデルでは、
インターロイキン４（ＩＬ−４）（Ｔｈ２）、トランスフォーミング増殖因子β
（ＴＧＦ−β）（Ｔｈ３）、またはＩＬ−１０（Ｔ調節１；Ｔｒ１）を分泌する
細胞、ならびに抑制性のＣＤ８⁺細胞の誘導は、疾患の進行の阻害と関連付けら
れている。抗原投与は、標的組織におけるバイスタンダー抑制を媒介する細胞を
誘導することが納得の行くように示されているが、インビトロで分化したＴ細胞
クローン（特に、Ｔｈ２型クローン）はしばしば、養子移入実験において病原性
Ｔｈ１細胞によって引き起こされた標的組織損傷を軽減することができない。

【０００９】 バイスタンダー抑制の非特異的性質（例えば、国際特許出願第ＷＯ９５／２７
５００号および同第ＷＯ９３／１６７２４号を参照のこと）は、任意の標的組織
抗原の投与が、標的組織において炎症を阻害する調節応答を惹起し得るという点
で魅力的である。実際、種々の異なるβ細胞自己抗原（βＣＡＡ）（ＧＡＤ、Ｈ
ＳＰおよびインスリンＢ鎖を含む）の投与は、ＮＯＤマウスの疾患プロセスにお
いて初期に（不完全フロイントアジュバント中で腹腔内に）与えられた場合、高
度に防御性であり得る（１）。しかし、本発明者らおよび共同実験者による実験
は、βＣＡＡが疾患プロセスの後期に投与される場合、これらは、抗炎症応答を
プライムする能力およびＩＤＤＭを予防する能力、ならびに糖尿病ＮＯＤマウス
において移植された同系の島を保護する能力が大いに異なることを示した（２、
３、および図１）。

【００１０】 他の研究者らはまた、寛容化抗原が、疾患の誘導後に経口投与された場合、寛
容性を誘導することができないことを報告した（Ｎａｇｌｅｒ−Ａｎｄｅｒｓｏ
ｎ，１９８６，ＰＮＡＳ，８３：７４４３；Ｂｉｔａｒ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８８，１１２：３６４）が、これらの結果は、自己免
疫の後期段階には容易に寄与し得ない。なぜなら、妨害し得たいくつかの他の変
数が存在し得るからである。

【００１１】 自己抗体スクリーニングによるインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）について
の危険性があると同定される個体は、自己免疫カスケードの進行した段階にある
ようであるので（そして同じ可能性が、他の自己免疫疾患に関連する自己反応性
を有する個体に関与するので）、疾患の進行経過の後期において有効なままであ
り、そして自己免疫が拡散した後に特異的なままである、抗原に基づく免疫治療
を開発する必要性が依然として存在する。

【００１２】 自己抗原性物質の投与が、寛容性を誘導する代わりに、前炎症性自己免疫応答
をブーストし得るといういくらかの恐れが存在している。調節応答の誘導に好都
合にするために、研究者は、抗炎症性応答を促進する傾向のある、アジュバント
およびサイトカイン、ならびに投与経路（例えば、経口経路）を用いた。多くの
研究では、自己抗原の投与は、確立された前炎症応答をブーストすることも、新
たな病理を生じることもなく、抗炎症応答に選択的に従事する（Ｓｔｅｉｎｍａ
ｎ，Ｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９
３，２２５３−２２５６；Ｔｉａｎ，Ｊ．，Ｃｌａｒｅ−Ｓａｌｚｌｅｒ，Ｍ．
，Ｈｅｒｓｃｈｅｎｆｅｌｄ，Ａ．ら（１９９６）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２，１３４
８−１３５３；Ｍｕｉｒ，Ａ．，Ｐｅｃｋ，Ａ．，Ｃｌａｒｅ−Ｓａｌｚｌｅｒ
，Ｍ．ら（１９９５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５，６２８−６３４；Ｅ
ｌｉａｓ，Ｄ．，Ｍｅｉｌｉｎ，Ａ．，Ａｂｌａｍｕｎｉｔｓ，Ｖ．ら（１９９
７）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４６，７５８−７６４）。それにもかかわらず、任意の
自己抗原投与に関連する危険性が存在する。

【００１３】 特定の方針の研究は、投与された自己抗原が、意図されていない方法で免疫応
答を調節し得る（このような調節は有害であることは示されていないとはいえ）
ことを示した。

【００１４】 これらの結果は、抗原に基づく免疫治療が、遺伝的に多様なヒト集団（ここで
は、さらに、個々の個体は、独特の環境曝露の免疫学的履歴を有する）において
免疫応答を、予期しなかった方法で惹起し得る可能性を強調する。しかし、自己
抗原は、異なる型の自己免疫疾患を有する数千を超える個体に供給されているが
、処置に連結した疾患の毒性または悪化は報告されていない；唯一の例外は、抗
原調製物に依存して、混合された傾向が見出された研究である。

【００１５】 自己抗原を投与する効力についてのいくつかの問題もまた存在する。

【００１６】 従って、安全性および効力についてのより少ない懸念を伴う、抗原に基づく有
効な免疫治療を開発する必要性が存在する。

【００１７】 （発明の目的） 本発明の目的は、免疫系の障害（アレルギーおよび自己免疫疾患を含むがこれ
らに限定されない）について、抗原に基づく有効な免疫治療を提供すること（免
疫治療剤およびその使用方法の両方を開発すること）である。

【００１８】 より特定の目的は、自己免疫疾患についての、抗原に基づく有効な免疫治療を
提供することである。

【００１９】 なおより特定の目的は、自己免疫カスケードの後期段階の間に、自己免疫疾患
に罹患している哺乳動物（動物またはヒト）に抗原に基づく有効な免疫治療を提
供することである。

【００２０】 なお別の目的は、免疫系障害に罹患しているヒトまたは他の哺乳動物に、抗原
に基づく安全な免疫治療を提供することである。

【００２１】 本発明の別の目的は、標的決定基に基づく免疫治療が失敗した場合でさえ、免
疫系障害に対して、抗原に基づく有効な免疫治療を提供することである。

【００２２】 本発明の別の目的は、異常な免疫事象のカスケードの後期でさえも、免疫系障
害に対して、抗原に基づく有効な免疫治療を提供することである。

【００２３】 本発明のなお別の目的は、（所望でない）免疫応答の調節または増強のいずれ
にも以前に関係付けられていないＴ細胞を所望の（調節）応答に向けてプライム
することである。

【００２４】 本発明のさらなる目的は、免疫障害に罹患している宿主の以前に捕捉されてい
ないＴ細胞集団を利用すること、およびそれらを異常な免疫応答の調節に向けて
補充することを含む。

【００２５】 （発明の要旨） 本発明者らは、活発なＴｈ２応答を自己免疫カスケードの後期においてマウン
トする能力が、非標的抗原に関して減少しないが、自己抗原に向けてのみ減少す
ることを示した実験結果に注目した。

【００２６】 本発明は、無視された標的組織抗原（ＮＴＴＡ）（自己免疫カスケードの後期
段階の間でさえ、自己免疫応答に関与しない（そして関与するようにならない）
）（自己免疫が拡散した場合）は、高度に有効な免疫治療因子であり得るという
発見に基づく。ＮＴＴＡを用いて、自己免疫疾患に関連した１以上の自己免疫応
答を軽減する調節性免疫応答を誘発し得る。

【００２７】 本発明者らのデータは、とりわけ、標的器官または標的組織において発現され
る抗原の無視される決定基（すなわち、自己抗原の一部を形成するか否かによら
ず、自己免疫応答のカスケードに関与するようにならない決定基）を含むペプチ
ドが、調節応答に向けてプライムまたは偏向され得、そして有用な処置を提供し
得る、方向付けられていないＴ細胞の実質的集団によって認識され得ることを示
す。特に、ＮＴＴＡは、寛容化因子として用いられる標的の決定基が、有効な調
節性Ｔ細胞応答を誘発できなかった場合でさえ、所望でない免疫応答を調節する
際に有効であり得る。

【００２８】 ＮＴＴＡの寛容化因子としての使用は、標的決定基の使用よりも安全であるこ
とが予想される。

【００２９】 この発見は、自己免疫疾患よりも広い適用性を有する。なぜなら、これは、免
疫応答の直接調節を含み、そして炎症性免疫応答の最終的な原因とは独立してい
るからである。従って、本発明の教示は、ＮＴＴＡの罹患したヒト（または動物
）への寛容化投与による自己免疫疾患の処置のための方法のみならず、異常な免
疫応答に罹患した器官または組織由来のＮＴＴＡの投与による他の異常な炎症性
免疫応答の処理方法もまた含む。

【００３０】 本発明の別の局面は、所望でない免疫応答（例えば、自己免疫応答またはアレ
ルギーまたはより一般的な炎症）を軽減する際に用いるのに適切な抗原に基づく
免疫治療薬剤の同定方法に関する。これは、異常な免疫応答に罹患している宿主
の活性化Ｔ細胞または抗体によって認識される標的組織において発現される（必
ずしも組織特異的でない）、抗原全体または抗原のセグメントを同定することを
含む。

【００３１】 従って、本発明の方法は、一般に、異常な免疫応答の調節に適用可能である。

【００３２】 （発明の詳細な説明） 本明細書中で引用される全ての文献および他の参照は、その全体が参考として
援用される。

【００３３】 （定義） 「無視された標的器官抗原」または「ＮＴＴＡ」は、自己免疫疾患に罹患して
いるか、またはその疑いがある（その危険がある）動物またはヒトの抗原（抗原
全体またはそのペプチドセグメント）である。ＮＴＴＡは、自己免疫疾患に関連
する異常な自己免疫応答（特に自然発生的自己免疫応答）におけるそれらが関与
しないことによって特徴付けられる。従って、ＮＴＴＡは、免疫系により認識さ
れ得る抗原であるが、それらは、自己免疫（自己免疫疾患またはそのモデルの後
期段階でさえも、自己免疫および特異的にＴｈ１自己免疫は、標的器官または組
織の他の抗原に広がっている、「決定因子分布」と名付けられた現象）に関与し
ない。ＮＴＴＡは、「このように」それらが自己免疫事象により無視されるとい
う点で無視されている。ＮＴＴＡは、自己免疫応答の標的である器官 または
組織において発現される（必ずしも特異的に発現されない）無視された抗原全体
だけではなく、自己免疫応答に無視される自己抗原のペプチドフラグメントまた
は一部もまた含む。特定のＮＴＴＡは、以下に規定されるように「潜在的決定基
」であり得る（しかし、全ての潜在的決定基がＮＴＴＡであるわけではない）。
自己免疫疾患ＩＤＤＭが関与する特定の実施態様において、ＮＴＴＡの非制限的
例は、β細胞グルタミン酸デカルボキシラーゼ（「ＧＡＤ」）の一部（例えば、
ＧＡＤペプチド１８またはＧＡＤペプチド２７）、クローン３８、カルビンジン
（ＮＴＴＡ ＃２）、潜在的決定基（ＮＴＴＡ ＃６、７）、および以下に参照
される未知のβ細胞ｃＤＮＡオープンリーディングフレーム由来のＮＴＴＡ ＃
４を含む。

【００３４】 「自己抗原」または「標的決定基」は、本明細書中で使用される場合、開始抗
原、すなわち、異常な自己免疫応答の開始標的（自己免疫疾患の誘導された動物
モデルの場合、誘導抗原とも呼ばれる）であるか、または自己免疫が広がった場
合に、自己免疫応答の標的であるＴｈ１ Ｔ細胞に対する著名な標的（例えば、
熱ショックタンパク質）になる抗原のいずれかである抗原である。

【００３５】 「バイスタンダー抗原」は自己免疫疾患の標的組織である器官または組織に存
在する免疫系に曝露された抗原である。バイスタンダー抗原は、自己抗原であり
得るが、そうである必要はない。バイスタンダー抗原が活性な寛容において成功
して使用された場合、（例えば、それが経口投与された場合）これは、調節Ｔ細
胞を誘発する、この調節Ｔ細胞は、標的組織を目指し、そして種々の調節サイト
カイン（例えば、インターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン１０（Ｉ
Ｌ−１０）、および形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β））の分泌による自己免疫
応答を減ずる。しかし、ＮＴＴＡとは異なり、いくつかのバイスタンダー抗原は
、異常な自己免疫応答に関与するようになり得る。例えば、プロテオリピドタン
パク質（ＰＬＰ）は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）で免疫することによ
って誘導された動物モデルＥＡＥ（実験的急性脳脊髄炎）においてバイスタンダ
ー抗原である。しかし、ＰＬＰは、ＮＴＴＡではない。なぜなら、これは、ＭＢ
Ｐで誘導された動物モデルＥＡＥ（例えば、決定基分布により特徴付けられる疾
患に関連する自己免疫の後期段階の間に）においてか、またはＰＬＰで誘導され
たＥＡＥモデル（ＰＬＰ自体が開始自己抗原である）においてか、または実際の
ヒト自己免疫疾患多発性硬化症（ＭＳ患者集団は、ＰＬＰを認識する自己反応性
Ｔ細胞を活性化したことが示されている）においてのいずれかにおいて自己免疫
の標的であり得るからである。従って、ＮＴＴＡは、バイスタンダー抗原の狭い
サブセットであると見なされ得、そして、自己免疫に関与しないバイスタンダー
抗原の決定基をさらに含み得る。

【００３６】 「自己免疫疾患」は、免疫系の機能不全、すなわち、哺乳動物（ヒトを含む）
の免疫系が自身（すなわち、自己由来抗原）を認識するのを止めるか、または認
識せず、そして結果として、これらの物質が外来の抗原であるかのように処置し
、そしてこれらに対する免疫応答をマウントする病理的状態（または、誘導され
たかもしくは自然発生的なその動物モデル）である。代表的に、器官特異的また
は組織特異的である自己免疫疾患は、Ｔｈ１表現型（調節性Ｔ細胞により発現さ
れるＴｈ２表現型よりもむしろ）を発現する自己反応性細胞の全体または一部の
プライムまたは活性化を含む。自己免疫疾患の非制限的な例は、多発性硬化症（
ＭＳ）、Ｉ型糖尿病（ＩＤＤＭ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、ブドウ網膜炎（
ＵＲ）、および自己免疫甲状腺炎（ＡＴ）を含む。

【００３７】 「潜在的決定基」または「潜在的抗原」は、宿主（哺乳動物またはヒト）が抗
原全体で免疫されている場合に、その免疫系が応答をマウントしないにもかかわ
らず、免疫系のＴ細胞により認識され得る抗原のペプチドセグメントを意味する
。しかし、実質的に潜在的決定基からなるペプチドが宿主の免疫のために使用さ
れる場合、宿主は、この決定基に対する免疫応答を発現する。Ｓｅｒｃａｒｚ、
Ｅ．Ｅ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１：７２９−７６６、１
９９３。いくつかの潜在的決定基はＮＴＴＡであり、そしていくつかは標的決定
基である。

【００３８】 「免疫系障害」または「異常な免疫応答」は、以下を含むが、これらに制限さ
れない：アレルギー、および自己免疫疾患に関連する異常な自己免疫応答。本発
明は、Ｔ細胞を操作し、そして調節性応答を誘導することにより炎症性応答を軽
減するので、その適用性は、自己免疫疾患に限定されず、アレルギー、および実
際器官または組織の炎症を伴う他の任意の障害に広がることが理解されるべきで
ある。このような障害は、以下を含む：アディソン病、成人性呼吸窮迫症候群、
アレルギー、貧血、喘息、アテローム硬化症、気管支炎、胆嚢炎、クローン病、
潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、皮膚筋炎、真性糖尿病、気腫、萎縮性胃炎、
糸球体腎炎、痛風、グレーブス病、過好酸球増加症、過敏性腸症候群、エリテマ
トーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、心筋または心膜炎症、変形性関節症、
骨粗鬆症、膵臓炎、多発性筋炎、慢性関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候
群および自己免疫甲状腺炎；癌の合併症、血液透析、体外循環；ウイルス、細菌
性、真菌性、寄生生物性、原生動物性および蠕虫性感染、外傷、ならびに再灌流
障害。

【００３９】 「処置」は、予防的レジメンまたは治療的レジメン、あるいその両方を意味す
る。「予防」は、障害の完全な予防だけでなく、臨床症状開始の遅延、または臨
床開始の遅延を生じる異常な免疫応答上の減少また含む。

【００４０】 自己免疫疾患の「臨床開始」は、認識される例えば、以下のような臨床症状の
出現を意味する：ＩＤＤＭにおける持続性の高血糖症または低インスリン血症；
関節腫脹、関節炎症、慢性関節リウマチにおける関節圧痛；疲労、感覚異常症、
眼振、病弱（ｗｅａｋｎｅｓｓ）、認識機能不全、末梢神経障害、磁気共鳴画像
法（ＭＲＩ）により検出されるオリゴクローナルバンドおよび脳プラーク、およ
び多発性硬化症についての痙性；網膜の炎症、ベーチェット病、扁平部炎、眼サ
ルコイド（ｏｃｕｌａｒ ｓａｒｃｏｉｄ）、バードショット（ｂｉｒｄｓｈｏ
ｔ）網膜脈絡膜病、交感性眼炎、およびブドウ膜網膜炎におけるフォークト・小
柳・原田症候群；ならびに甲状腺腫、甲状腺機能低下不全症、自己免疫甲状腺炎
における増加したＰＢＩおよび増加したＲＡＩ取り込み（橋本甲状腺炎）。

【００４１】 「前臨床症状」は、以下を含む：標的組織での活性化Ｔ細胞（Ｔｈ１）の出現
；および免疫事象（例えば、ＩＤＤＭの発症の有意な危険があるヒトにおける島
細胞抗体の同時出現（単独または抗インスリン抗体の同時出現）；多発性硬化症
に関する、視神経炎、あるいはＭＲＩにおけるオリゴクローナルバンドまたは脳
プラーク；慢性関節リウマチについてのリウマチ因子；ならびに甲状腺炎におけ
る増加したＰＢＩおよび／または自己抗体。

【００４２】 「決定基」は、その抗原に特異的なＴ細胞により認識される抗原の一部である
。

【００４３】 「自己免疫の後期段階」は、自己免疫が１つより多い抗原、より具体的には、
２つより多い抗原または３つ以上の抗原にまで広がった後、または臨床症状が出
現した後さえ、自己免疫の発症における段階を意味する。しかし、自己免疫は、
なお実質的な程度まで進行中でなければならないことが、留意されるべきである
。例えば、ＩＤＤＭの患者の場合、自己免疫の後期段階は２つ以上の抗原への決
定基分布とともに開始し、そして、島細胞の約９０−９５％が破壊された後、自
己免疫応答の実質的な停止とともに終止する。しかし、他の自己免疫疾患におけ
るよりも明確に区切られ得ないことが、留意されるべきである。

【００４４】 「ペプチド」は、アミノ酸残基からなる配列を有する任意の化合物である。本
発明において、ペプチドＮＴＴＡは、少なくとも８−９個のアミノ酸（クラスＩ
Ｉ拘束の場合、少なくとも１３−１４個）、そして約１００まで個までのアミノ
酸、好ましくは、約５０個まで、最も好ましくは、約２０個までのアミノ酸の配
列を有する。

【００４５】 本発明者らは、抗原に基づく免疫療法の効力が、調節性応答への誘導に利用可
能である大きなＴ細胞亜集団の利用可能性に部分的に依存すると仮定した。本発
明者らは、非標的組織抗原に対するＴｈ２応答をプライムする能力は、ＮＯＤマ
ウスにおける自然発生疾患プロセスにより影響されないが、自己抗原に対するＴ
ｈ２応答をプライムする能力は、疾患の進行とともに実質的に減少することを見
出した（２、１７）。疾患プロセスの後期に、いくつかのβＣＡＡによる処置は
、Ｔｈ２分布をもはや促進し得ないか、または検出可能なＴｈ２応答をプライム
することさえし得ない（図２および３）．自己抗原に対する誘導可能なＴｈ２免
疫のこの減弱は、自然発生疾患プロセスへの自己抗原反応性Ｔ細胞の補充が、さ
もなければ調節性応答に対してプライムするために利用可能な、中立の自己抗原
反応性Ｔ細胞のプールを枯渇させることを示す。実際、本発明者らは、疾患プロ
セスの各段階で、より多くの抗原特異的Ｔｈ２応答をプライムした自己抗原が、
他の自己抗原に対するＴｈ２免疫のより広範な分布を促進する傾向があることを
観察した。顕著なことに、疾患プロセスの後期にＴｈ２免疫をより効果的に促進
した自己抗原は、糖尿病ＮＯＤマウスにおいて、移植された同系の島の生存をよ
り良好に延長し得た（２、３）。

【００４６】 これらの知見の内容は、疾患プロセスの後期に大きな中立のＴ細胞前駆体プー
ルを有する標的組織抗原がより効果的な免疫調節剤であり、従って、抗原に基づ
く免疫療法において使用され得るということである。本発明者らは、これらの減
弱を、このような免疫療法のための候補としての無視された標的組織抗原へと変
えた。

【００４７】 広範な研究の後、齧歯類およびヒトのＩＤＤＭにおいて自己免疫応答の標的に
なるわずか約１ダースの異なる抗原が同定された。より少ない自己抗原でさえ、
ＥＡＥまたはＥＡＵ（実験的自己免疫ブドウ膜網膜炎）において、あるいは慢性
関節リウマチの誘導されたモデルにおいて記載されなかった。明らかに、β細胞
抗原決定基の大多数は、自己免疫応答の標的に（少なくとも、検出可能なレベル
まで）ならない。しかし、ＮＴＴＡでの免疫が激しいＴ細胞応答を誘発し得る場
合、潜在的にＮＴＴＡに対して反応性であるＴ細胞がＮＯＤマウスに存在するこ
とが、明らかである。さらに、他は、すでに、自然発生自己免疫応答に無視され
るが、抗原全体での免疫後にリコール応答を誘発する、ＧＡＤ決定基がすでに同
定されている（２３）。本発明者らは、ほとんどのβ細胞抗原決定基について、
ネガティブ選択が、炎症性環境においてでさえ、活性化および拡大に十分なレベ
ルのペプチド／ＭＨＣ複合体と相互作用しないＴ細胞のみを残したと考える。従
って、β細胞抗原決定基の階層があるようである。 １）自己寛容の最初の喪失の間に最初にＴ細胞により認識される１次決定基。自
然発生的に末梢性寛容誘導を活性化および回避する、最も早いβ細胞反応性Ｔ細
胞（同時刺激性因子の最初の低レベルに起因する）は、βＣＡＡ決定基に対する
高アビディティーを有するＴ細胞であるはずである。（ＧＡＤｐ３５は、例えば
、決定基を制限し得る）。 ２）一旦、前炎症性応答が定着すると、これはさらに、サイトカイン生成ならび
にＡＰＣ（抗原提示細胞）の補充および活性化による炎症性環境を促進する。結
果的に、より低いアビディティーのβＣＡＡ反応性Ｔ細胞は、抗原／ＭＨＣ複合
体および活性化についての上記の閾値レベルの同時刺激性因子（インスリンおよ
びＨＳＰは、このカテゴリーに入り得る）と相互作用し得る。 ３）最後に、自己免疫応答により無視されるようである３次の決定基が存在する
。しかし、これらの決定基は、これらの決定基に対して実験的にプライムされた
記憶Ｔ細胞により認識され得る。

【００４８】 ＮＴＴＡは、「決定基潜在性（ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｃｒｙｐｔｉｃｉｔ
ｙ）」”または「レパートリー潜在性」のいずれかに起因し得る（２４−２６）
。有効に提示される自己決定基は、中枢または末梢寛容誘導機構により、決定基
に対する高いまたは中程度のアビディティーを有するＴ細胞を不活性化するはず
である（２４）。従って、低いアビディティーの潜在的に反応性のＴ細胞のみが
残り、これは、自己免疫疾患プロセスの間に活性化についての閾値レベルに達し
得ない。ネガティブに選択されたＴ細胞レパートリーによる、強力な自己決定基
に対する応答のこの欠如は、「レパートリー潜在性」（２６）と呼ばれている。
自己決定基もまた無視され得る。なぜなら、抗原全体のプロセシング後に、自己
決定基は、非常に非効率的に提示されるからである。これらの決定基は、Ｔ細胞
選択に対してほとんど影響を及ぼさず、その結果、高いアビディティーから低い
アビディティーの潜在的に反応性のＴ細胞の大きなレパートリーが、存在しつづ
ける。しかし、炎症性環境の状況においてでさえ、これらの自己決定基は非常に
弱く提示され、その結果、これらは、一般的に、自然のＴ細胞を活性化しない。
選択されないＴ細胞により潜在的に認識され得るこのような弱い自己決定基は、
Ｓｅｒｃａｒｚ（２５）により規定された古典的な「潜在的決定基」であり、そ
してＮＴＴＡのサブセットのままである。

【００４９】 本発明者らは、自己免疫プロセスの進行した段階においてでさえ、自然発生的
自己免疫応答により無視されたいくつかの標的組織抗原決定基に特異的である大
きな中立のＴ細胞プールが、存在するはずであると理由付けた。本発明者らは、
異なるβ細胞ＮＴＴＡのパネルを同定し始め、そしてこれらが、疾患プロセス後
期においてより有効な免疫療法を提供し得るか否かを試験しはじめた。本発明者
らは、自然発生的自己免疫プロセスにより認識されない、無視された決定基がβ
細胞タンパク質内、ならびに自己抗原内に存在するはずであると理論付けた（Ｇ
ＡＤがモデルとして選択された）。種々の候補ＮＴＴＡを選択するための方法お
よび理論は、以下の実施例４に詳説される。

【００５０】 ＩＤＤＭの養子移入を予防するためのＮＴＴＡ処置の能力が、試験された。Ｎ
ＴＴＡ処置されたＮＯＤマウス由来のＴ細胞は、ＩＤＤＭの養子移入を阻害した
（図５）、これは、ＮＴＴＡ投与が、養子移入可能な調節性応答を誘導すること
を示す。進行した自己免疫によりＮＯＤマウスにおける疾患を阻害するためのＮ
ＴＴＡおよびβＣＡＡ標的決定基の能力が、比較された。任意のβＣＡＡ標的決
定基（インスリンＢ鎖、ＨＳＰ ２７７、ＧＡＤｐ３５、ＧＡＤｐ３４）での処
置は、コントロールの非標的組織自己ペプチドで処置されたマウスまたは操作さ
れていないＮＯＤマウスと比較した場合、防御に対する有意でない傾向しか提供
しなかった（図６）。対照的に、ＮＴＴＡでの処置は、コントロール群およびβ
ＣＡＡ標的決定基で処置された群と比較して、疾患を有意に阻害した（図６およ
び７）。

【００５１】 別のセットの実験において、ＧＡＤ標的決定基を投与することの治療的効果が
、ＧＡＤに無視された決定基の効果と比較された。ＧＡＤ標的決定基を含むペプ
チドが、新生児ＮＯＤマウスに対して与えられた場合にＩＤＤＭを有効に予防す
ることを示した（２７）が、これらの処置は、１２週齢で投与された場合に、何
の防御も付与しなかった。。対照的に、無視されたＧＡＤ決定基での処置は、疾
患からの長期の防御を付与した（図８および９）。βＣＡＡ標的決定基での処置
とＮＴＴＡでの処置との間の効力の明らかな差異は、自己免疫後期においてでさ
え、標的抗原により誘導され得ないが、調節性表現系を発現するようにＮＴＴＡ
により操作されるためにのみ利用可能である中立の細胞が存在するという見方を
、強力に支持する。

【００５２】 これらのＮＴＴＡに対する低レベル（検出のレベルを下回る）のＴ細胞応答の
存在は除外され得ないが、このような低い反応性は、本発明の原則に影響しない
。この原則は、大きなＴ細胞前駆体プールがＮＴＴＡに対して利用可能であり、
かつ前駆体の利用可能性は、抗原に基づく免疫療法の効力を決定する際の重要な
因子であるということである。全てのＮＴＴＡが、同程度の効力を有すると予期
されるわけではないことが、留意されるべきである。

【００５３】 本発明者らは、新生児期に、ＩＦＡ中のインスリンＢ鎖またはＨＳＰ ２７７
で処置されたＮＯＤは、４週齢で注射された自己抗原に対して、Ｔｈ２応答およ
びＴｈ１応答の両方を提示したことを観察した（図１０）。通常、ＮＯＤマウス
は、インスリンＢ鎖およびＨＳＰ ２７７に対する検出可能なＴｈ１応答を、数
週間後まで発症しない。βＣＡＡ標的決定基での処置は、注射された抗原に対す
る促進されたＴｈ１応答をプライムした。なぜなら、注射された抗原に対して部
分的にプライムされたＴ細胞が、すでに存在したからである。このようなＴ細胞
は通常、疾患プロセス後期まで完全な活性型にならないが、より前炎症性環境が
確立された場合、注射された自己抗原の非常に増加したＡＰＣ上での提示は、明
らかに、Ｔｈ１表現型に対して部分的に活性化されて、完全に活性型になり、そ
して検出可能なレベルへと拡大されたいくつかのＴ細胞を駆動した。従って、非
標的組織抗原と異なり、自己抗原の投与は、注射された抗原に対する促進された
前炎症性応答をプライムし得、これは、自己抗原投与が、この疾患プロセスを悪
化させ得るという恐れと一致する。

【００５４】 本明細書中に詳説される実験に基づいて、標的組織以外の組織由来の抗原に対
して反応性であるＴ細胞と同様に、ＮＴＴＡに対して反応性であるＴ細胞は、活
性化されない（少なくとも検出のレベルまで）しかし、これらのＴ細胞は、免疫
化を介して周辺において活性化され得る。部分的にＮＴＴＡに対してプライムさ
れたＴ細胞が島に存在しない場合、これらの抗原の投与は、周辺のネイティブＴ
細胞のみをプライムし、これは、アジュバントにより、単極性のＴｈ２応答に対
して誘導され、自己ＭＢＰ、ＭＳＡまたは外来の抗原の投与後に観察される。（
部分的に活性化されたＮＴＴＡ反応性Ｔ細胞が島に存在する場合でさえ、これら
のＴ細胞は、標的決定基に対して反応性であるものよりもかなり低い頻度で存在
する、このことは、ＮＴＴＡの投与の安全性を支持する）。従って、標的決定基
（またはその変化したペプチドリガンド）の投与は、確立された病原性応答を追
加免疫することに固有の危険を有するが、ＮＴＴＡの投与は、ＮＴＴＡに対する
極性化された調節性Ｔ細胞応答を誘導する能力によって、この危険を回避し得る
。

【００５５】 本発明は、自己免疫疾患、特にＩＤＤＭに関して記載されているが、この知見
および結論は、原因に関わらず他の異常な炎症性免疫応答に対して推定され得る
。本発明は、Ｔ細胞の操作、すなわち症状の軽減を含み、症状が全ての炎症にお
いて偏在して存在することにも関わらない。本発明は、多様であり得る根本的な
原因の処置を含まない（まして治癒は含まない）。

【００５６】 ＩＤＤＭを発症する危険性があるとして同定される（自己抗体スクリーニング
に基づいて）個体か、あるいはＭＳもしくはＲＡの最初の臨床的症状または症状
発現前の症状を示す個体は、ＶＡまたはＡＴが、すでに発達した疾患過程を有す
るようである。本発明者らは、βＣＡＡが、糖尿病性ＮＯＤマウス中でそれらが
移植された同系の島を防御する能力が大いに異なること、および調節免疫を誘導
するβＣＡＡ処置の能力と移植された自己免疫疾患の進行の生存を延長するその
能力との間に相関が存在するが、標的組織以外の組織由来の抗原がＮＯＤ疾患過
程の全ての段階で激しい応答を誘導し得たことを示した。従って、本発明者らは
、大きな前駆体プールがいくつかのＮＴＴＡに対して利用可能であり得、そして
自己免疫疾患過程の後期に、いくつかのＮＴＴＡの投与は調節応答をより多く誘
発し得ると推論した。本発明のデータに基づいて、ＮＴＴＡ処置は実際、βＣＡ
Ａ標的決定基での処置よりもより有効であり、そして自己抗原標的決定基を投与
することよりも安全であり得る。

【００５７】 （抗原） 本明細書中でＩＤＤＭおよび他の自己免疫疾患またはそれらのモデルについて
使用される（または使用され得る）自己抗原およびＮＴＴＡの配列は、以下に提
供されるかまたは言及されるかのいずれかである。上記のように、ＮＴＴＡは抗
原全体または抗原の一部分として同定され得る。それらは、自己抗原中に同定さ
れさえし得る（例えば、自己抗原の潜在的決定基として）。

【００５８】 従って、この節では以下を提供する：（ａ）ＮＴＴＡとして既に同定されてい
る抗原；（ｂ）自己免疫が報告されていない自己免疫疾患（またはアレルギー）
に罹患した組織において発現される抗原（これらは部分的ＮＴＴＡとして見なさ
れ得、そして試験され得るか、またはそれらのペプチドフラグメントが試験され
得る）；ならびに（ｃ）自己免疫応答により認識されない上記の自己抗原中の決
定基に対応するペプチドＮＴＴＡに関する潜在的な供給現としての公知の自己抗
原。

【００５９】 （ＩＤＤＭ） ＧＡＤ：グルタミン酸デカルボキラーゼ６５（膵臓島および脳、６５ｋＤ）Ｇ
ｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００８０９ （これは公知の自己抗原である）

【００６０】

【化１】 ヒトグルタミン酸デカルボキシラーゼ、６７ｋｄアイソフォーム（ＧＡＤ−６
７）（６７ｋ グルタミン酸デカルボキシラーゼ） ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ
９９２５９

【００６１】

【化２】 クローン３８：Ｐ．Ｎｅｏｐｈｙｔｏｕら，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４５：１２７
−１３３，１９９６。

【００６２】 カルビンジン：潜在性ＮＴＴＡ：この抗原に対する自己免疫は報告されていな
い。本発明者らは、Ｎｏｒｄｑｕｉｓｔ，Ｄ．Ｔ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｎｓｃｉ．、
８：４７８０（１９８８）によって単離されて解明されたマウスカルビンジンを
使用した。

【００６３】 カルビンジン：Ａ鎖、ＣａロードされたカルビンジンＤ９ｋの溶媒和精製（Ｓ
ｏｌｖａｔｅｄ Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ Ｏｆ Ｃａ−Ｌｏａｄｅｄ Ｃａｌｂ
ｉｎｄｉｎ Ｄ９ｋ）ＧｅｎＢａｎｋ登録番号１Ｂ１Ｇ

【００６４】

【化３】 カルビンジン２（２９ｋＤ、カルレチニン）ヒト ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｎ
Ｐ＿００１７３１．１

【００６５】

【化４】 カルビンジン１ ヒト ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＤ０８７２４．１

【００６６】

【化５】 ２７ｋＤａ カルビンジン ヒト ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ６２２３０
．１

【００６７】

【化６】 島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）：これは、潜在性ＮＴＴＡである：自
己免疫は報告されていない ヒト島アミロイドポリペプチド前駆体（糖尿病関連ペプチド）（ＤＡＰ）（ア
ミリン）（インスリノーマアミロイドペプチド）ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１０
９９７

【００６８】

【化７】 島アミロイドポリペプチド前駆体； アミリン 登録番号ＮＰ＿０００４０６
．１

【００６９】

【化８】 ニューロペプチドｙ：ニューロペプチドＹ ヒト登録番号ＮＰ＿０００８９６．
１

【００７０】

【化９】 他の自己免疫疾患について、以下の抗原はヒトについて（実際または推定いず
れかの）ＮＴＴＡを構成するか、またはＮＴＴＡペプチドの供給源として適切で
ある： （慢性関節リウマチ） 以下に与えられる多くの抗原は、自己免疫におけるいくらかの動物またはヒト
の関与を有すると報告された。それにも関わらず、それらは、実施例４に記載さ
れるような方法に従う、少なくともＮＴＴＡペプチドを「採掘すること」に有用
である。

【００７１】 プロテオグリカン：（ヒト変形性関節症に関与する）Ｃｓ−Ｓｚａｂｏ，Ｇ．
ら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，４：１０３７，１９９７． 軟骨オリゴマーマトリックスタンパク質：Ｌａｒｓｏｎ，Ｅ．ら，Ｂｒ．Ｊ．
Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，３６：１２５８，１９９７． デコリン：デコリン ヒト ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１９１１

【００７２】

【化１０】 リンクタンパク質：リンクタンパク質前駆体ヒト登録番号ＡＡＣ０４３１１．
１

【００７３】

【化１１】 （Ａ． Ｇｕｅｒａｓｓｉｍｏｖら，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２４：９５９
， １９９７を参照のこと） ヒトプロテオグリカンリンクタンパク質前駆体（軟骨リンクタンパク質）（Ｌ
Ｐ）ヒトＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ１０９１５

【００７４】

【化１２】 プロテオグリカンリンクタンパク質前駆体（軟骨リンクタンパク質）（ＬＰ）
（ニワトリ）ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ０７３５４

【００７５】

【化１３】 リンクタンパク質２−ラット 登録番号ＬＫＲＴ２

【００７６】

【化１４】 プロテオグリカンリンクタンパク質前駆体−ヒト 登録番号ＬＫＨＵ

【００７７】

【化１５】 慢性関節リウマチにおけるさらなる潜在的なＮＴＴＡ抗原については、一般に
、Ｇ．Ｌｓ−Ｓｚａｂｏら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，４０（６）：
１０３７，１９９７および同書，３８：６６０，１９９５を参照のこと。

【００７８】 （ブドウ膜網膜炎） ロドプシン：ロドプシンキナーゼ ヒト 登録番号ＮＰ＿００２９２０

【００７９】

【化１６】 ロドプシンＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＤ２４７５１

【００８０】

【化１７】 レチノイド結合タンパク質ｉｒｂｐ マウス ＧｅｎＢａｎｋ登録番号 Ａ
ＡＡ３９３３１．２

【００８１】

【化１８】 光受容器間レチノイド結合タンパク質 ＧＡＬＬＵＳ ＧｅｎＢａｎｋ登録番
号 ＡＡＤ２６３３４

【００８２】

【化１９】 光受容器間マトリックスプロテオグリカン１ ヒト登録番号 ＮＰ＿００１５
５４．１

【００８３】

【化２０】 （網膜ホスホジエステラーゼ） さらに、Ｓ−抗原のような標的抗原および光受容器間レチノイド結合タンパク
質は、フラグメント化の際に潜在性決定基ぺプチドからなるペプチドのようなペ
プチドＮＴＴＡを生じるようである。ヒト自己免疫が全く報告されていない他の
網膜抗原は以下である：

【００８４】

【化２１】 （多発性硬化症） ｃｎｐａｓｅ以外の任意のミエリン関連酵素は、自己免疫が全く報告されてい
ないので、潜在的なＮＴＴＡである。このような酵素としては、以下を含むがこ
れらに制限されない： コレステロールエステルヒドロラーゼ− ３．１．１．１３ コレステロールエステルシンテターゼ− ２．３．１．２６ テストステロン５α−レダクターゼ− Ｍｅｌｃａｎｇｉら， Ｄｅｖ． Ｂ
ｒａｉｎ Ｒｅｓ．， ４４：１８１ （１９８８） ＵＤＰ−ガラクトース：セラミドガラクトシルトランスフェラーゼ− ２．４
．１．６２ セレブロシドアシルトランスフェラーゼ− Ｔｈｅｒｅｔら， Ｎｅｕｒｏｃ
ｈｅｍ． Ｒｅｓ．， １４：１２３５ （１９８９） ノイラミニダーゼ− ３．２．１．１８ ＣＤＰ−エタノールアミン：１，２−ジアシルグリセロールエタノールアミン
ホスホトランスフェラーゼ− ２．７．８．１． ＣＤＰ−コリン：１，２−ジアシルグリセロールコリンホスホトランスフェラ
ーゼ− ２．７．８．２ ＣＴＰ：エタノールアミンホスフェートシチジルトランスフェラーゼ− ２．
７．７．１４ コリンキナーゼ− ２．７．１．８２ エタノールアミンキナーゼ− ２．７．１．３２ ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェートホスホジエステラー
ゼ（ホスホリパーゼ Ｃ）− ３．１．４．１１ ホスファチデートホスファターゼ（ホスファチジン酸ホスファターゼ）− ３
．１．３．４． ホスホリパーゼ Ｄ（ホスファチジルコリンコリンホスホヒドロラーゼ）−
３．１．４．４ カルモジュリン−刺激化キナーゼ− Ｓｕｌａｋｈｅら， Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｊ．， １８６：４６９ （１９８０ａ）； Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９：５３６３ （１９８０ｂ）． ＭＢＰ−ホスフェートホスファターゼ− Ｅ． ＭｉｙａｍｏｔｏおよびＳ．
Ｋａｋｉｕｃｈｉ， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， ３
８４：４５８ （１９７５）． ロイシンアミノペプチダーゼ− Ｎ．Ｌ． ＢａｎｉｋおよびＡ．Ｎ． Ｄａ
ｖｉｄｓｏｎ， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ．， １１５：１０５１ （１９６９）
． カルパイン（ＣＡＮＰ）− Ｓａｔｏら， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，
３９：９７ （１９８２）． メタロプロテイナーゼ− Ｃｈａｎｔｒｙ，ら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅ
ｍ．， ２６４：２１６０３ （１９８９）． プロテオリピドタンパク質アシルトランスフェラーゼ（自己触媒） − Ｒｏ
ｓｓおよびＢｒａｕｎ， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｒｅｓ．， ２１：３５
（１９８８）． アシル−プロテオリピドタンパク質エステラーゼ− Ｂｉｚｚｏｚｅｒｏ，
Ｏ．Ａ．， Ｔｒａｎｓ． Ａｍ． Ｓｏｃ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．， ２２
：２６５ （１９９１）． カルボニックアンヒドラーゼ（カルボニックヒドロラーゼ）− ４．２．１．
１。

【００８５】 他のこのようなミエリン関連タンパク質は、Ｍａｒｔｅｎｓｏｎ， Ｒ．Ｅ．
， Ｍｙｅｌｉｎ： Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ＣＲＣ
Ｐｒｅｓｓ １９９２，５３２−５３４頁中に開示される。

【００８６】 ミエリン塩基性タンパク質 ヒト ＧｅｎＢａｎｋ登録番号 ＮＰ ００２３
７６．１ （これは、自己免疫に関与する）

【００８７】

【化２２】 稀突起神経膠細胞ミエリン糖タンパク質 ヒト ＧｅｎＢａｎｋ登録番号 Ｎ
Ｐ＿００２５３５．１ （これは、自己免疫に関与する）

【００８８】

【化２３】 プロテオリピドタンパク質（これはまた、自己免疫に関与する）。

【００８９】 （アレルギー） 以下は、上皮組織（例えば皮膚粘膜など）において発現される抗原の潜在的な
決定基および他のＮＴＴＡについて探索され得るアレルゲンの非制限的な例であ
る： （ＮＴＴＡの同定） ＮＴＴＡは以下のように得られ得るかまたは同定され得る： 患者の（または動物の）血液からリンパ球を得、そして目的の器官または組織
中に発現される抗原に曝露する。次いで、任意の周知の技術により培養体（ｉｎ
ｃｕｂａｎｔ）をＴ細胞またはＢ細胞の増殖について探索する。Ｔ細胞増殖もＢ
細胞増殖も存在しない場合、その抗原は推定ＮＴＴＡである。このＮＴＴＡの特
徴は、簡単な増殖アッセイにより確認され得る。例えば、リンパ球増殖は、トリ
チウム化チミジン取り込みアッセイにより測定され得る［Ｂｒａｄｌｅｙら，
Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ， Ｍｉｓｈｅｌｌ， Ｂ．Ｂ．およびＳｈｉｉｇｉ， Ｓ．Ｍ．編，
Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ： Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉ
ｓｃｏ，１６４頁（１９８０）］。あるいは、代謝色素（例えば、ＭＴＳ様テト
ラゾリウム化合物（Ｐｒｏｍｅｇａ）またはＭＴＴ）の発色形成を使用して、増
殖を評価し得る［Ｇｅｒｌｉｅｒ Ｄら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ． ９４：５７−６３ （１９８６）； Ｄｅｎｉｚｏｔ Ｆら， Ｊ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． ８９：２７１−７ （１９８６）； Ｈｅｅｇ
Ｋら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ． ７７：２３７−４６ （１
９８５）］。

【００９０】 あるいは、Ｅｌｉｓａ Ｓｐｏｔ （”Ｅｌｉｓｐｏｔ”）アッセイを使用し
て、抗体およびサイトカイン産生（例えば、ＴＮＦおよび／またはＩＦＮ−γ）
のレベルの増大を検出することにより、リンパ球活性化を検出し得る（例えば米
国特許第５，８４３，４２６号、米国特許第５，７５０，３５６号およびＴ．
Ｆｏｒｓｔｈｕｂｅｒら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２７１：１７２８， １９９６
およびＳｕｒｃｅｌら， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ８１：１７１， １９９４
に記載されるように）。低頻度のヒトＴリンパ球は、ＥＬＩＳＰＯＴを使用して
検出され得る［ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎら、 Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ２１０：１４９−６６ （１９９７）］。種々のサイトカイン（例えば、イ
ンターロイキン−２、インターロイキン−１０、γインターフェロン［Ｓａｒａ
ｗａｒおよびＤｏｈｅｒｔｙ， Ｊ Ｖｉｒｏｌ ６８：３１１２−９ （１９
９４）］およびインターロイキン−４［Ｅｌ Ｇｈａｓａｌｉら， Ｅｕｒ Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ ２３：２７４０−５ （１９９３）］）は、ＥＬＩＳＰＯＴ
で同時に検出される。

【００９１】 ＮＴＴＡを構成する標的抗原のペプチドまたはペプチドセグメントは、ＮＴＴ
Ａを構成するセグメントを特定するために、類似の様式であるが、周知の重複ペ
プチドスクリーニング方法（例えばＷａｌｄｅｎ， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ８：６８， １９９６に記載されるように２０〜４０アミ
ノ酸長の抗原フラグメントが最初に合成され、次いでこれが使用されて、患者由
来のＴ細胞を刺激することによる）を使用して同定され得る。ＮＴＴＡペプチド
は自己抗原から抽出され得る。

【００９２】 あるいは、実施例４の方法を用い得る：抗原全体の配列を、処置されるべき宿
主のＴＣＲ／ＭＨＣ複合体により認識されることが公知であるかまたは信じられ
ているモチーフの存在について検索し得る。（以下の参考文献５４およびＷｕｃ
ｈｅｒｐｆｅｎｉｇ Ｋ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９７、
１００：１１１４；およびＳｔｅｉｎｍａｎ Ｌ．、Ｂｅｈｒｉｎｇ．Ｉｎｓｔ
．Ｍｉｔｔ、１９９４、９４：１４８を参照のこと）。次いで、ペプチドをこの
ようなモチーフを組み込んで構築し、そしてペプチドが自己免疫（または事例が
あり得るような、アレルギー性反応または炎症）に対する標的であるか否かに関
して試験する。このことは、ＮＴＴＡを同定するプロセスを実質的に単純化し得
る。

【００９３】 抗原全体をＮＴＴＡとして用いる場合、組織特異的抗原を使用することが好ま
しい。上記で開示される（記載されるかまたは参照される）ＮＴＴＡの範囲は、
組織特異的ではないが、標的器官以外の組織（例えば、ＩＤＤＭにおける膵臓）
において発現され、原則的に、それらは、同様に他の自己免疫疾患の処置に、お
よび実際には、炎症の処置に用いられ得る（例えば、熱ショックタンパク質のＮ
ＴＴＡフラグメント）。

【００９４】 ＮＴＴＡは、宿主種特異的であり得ることが留意されるべきである。従って、
ヒトにおいてＮＴＴＡである物質は、マウスにおける標的抗原であり得、そして
その逆でもあり得る可能性がある。しかし、２以上の種により共有される決定基
もまた存在し、そしてＮＴＴＡは、それらの仲間であり得る。

【００９５】 たとえ、将来的には、免疫応答についての検出限界がより低くなり、そして存
在するＮＴＴＡに対する非常に少量の免疫を示しても、抗原はＮＴＴＡの資格が
ある。実施例１１は、本発明の技術の検出限界が非常に低いことを示すことによ
って、この題目に関与する。

【００９６】 ペプチドＮＴＴＡは、寛容原として好ましい。ペプチドＮＴＴＡは、少なくと
も８〜９（クラスＩ制限提示について）アミノ酸残基および少なくとも１３〜１
４（クラスＩＩ制限提示について）アミノ酸残基の配列を有するべきであり、そ
して無視される決定基全体を具体化するはずである。さらなるアミノ酸残基は、
それらが決定基の構造をかき乱さない場合に含まれ得、その結果、調節応答を誘
発するその能力の全てまたは一部を損失する。従って、本発明に有用なペプチド
は、たとえペプチドがまたこのようなさらなる残基を含むとしても、無視される
標的決定基から「本質的になる」といわれ得る。しかし、本発明はまた、１以上
のペプチドＮＴＴＡが別の物質または別の分子あるいは互いに連結されるペプチ
ド構築物を意図する。

【００９７】 （投与の様式および投薬量） 一旦同定されると、ＮＴＴＡは、１または複数に分割された用量において、１
日当たり０．０１μｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは０．０１μｇ〜１００ｍｇお
よび最も好ましくは０．０１μｇ〜１０ｍｇの広範な範囲の量で患者に投与され
得る。投与の様式は、寛容原性、すなわち調節寛容性の誘導（例えば、Ｔｈ２応
答の誘発）に対する補助であるはずである。従って、ＮＴＴＡは、経口、腸内、
口腔内、または鼻腔内の経路（より一般的には、粘膜の経路）によってか、ある
いは皮下、筋肉内、または皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）の経路によって、アジュ
バントなしかまたは非増悪アジュバント（例えば、明礬）を使用してか、または
ＮＴＴＡをコードするＤＮＡベクターを使用して、投与され得る。

【００９８】 投与の頻度は、毎日、または週に３回以下で、例えば、パルス様式またはボー
ラス様式においてか、または投与の様式に従うワクチン形態においてであり得る
。

【００９９】 投与される量、および投与頻度は、患者の処置される疾患の型および病期、用
いられる特定のＮＴＴＡの活性、体重、年齢、および体調、ならびに投与方法に
依存し、従って慣用的な最適化に供される。

【０１００】 治療の持続時間は、必要とされる限りで有り得、そして当該分野の技術範囲内
である場合、有益性が持続する限りいつまでも続き得る。

【０１０１】 本発明内の経口薬学的処方物は、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、充填
剤、可溶化剤または乳化剤および当該分野で周知である型の塩を含む、不活性な
構成成分を含み得る。例えば、錠剤またはカプセル剤は、当該分野で周知である
ような、固体キャリア（例えば、デンプンおよびベントナイト）を用いる従来の
手順に従って処方され得る。固体キャリアの例としては、ベントナイト、シリカ
、デキストロースおよび他の一般に使用されるキャリアが挙げられる。本発明の
処方物に使用され得る、キャリアおよび希釈剤のさらなる非限定的な例としては
、生理食塩水および任意の生理学的緩衝化生理食塩水溶液（例えば、リン酸緩衝
化生理食塩水、ｐＨ７〜８および水）が挙げられる。

【０１０２】 ＮＴＴＡを含むカプセル剤は、任意の薬学的に受容可能な材料（例えば、ゼラ
チンまたはセルロース誘導体）から作製され得る。ＮＴＴＡは、米国特許第４，
７０４，２９２号（１９８７年１１月３日発行）、米国特許第４，３０９，４０
４号（１９８２年１月５日発行）、または米国特許第４，３０９，４０６号（１
９８２年１月５日発行）に記載されるような、持続性放出経口送達系の形態およ
び／または腸溶性コート化経口投薬形態において投与され得る。

【０１０３】 個々の経口用量に含まれるＮＴＴＡの量は、免疫応答を抑制するための有効量
をそれ自体構成することを必要としない。なぜなら、必要な有効量は、１用量よ
りも多い投与により達され得るからである。ＮＴＴＡは、少なくとも３ヶ月にわ
たって毎日または１週間に２×もしくは３×で投与され得、そしてこの治療は、
有益性が続く限り続け得る。一般に、ＮＴＴＡの経口投与は、ＮＴＴＡ投与の他
の粘膜様式または非経口様式よりも高い用量（およそ１０倍）を必要とする。従
って、経口用量は、１００μｇ〜１０００ｍｇ（好ましくは１００μｇ〜２００
ｍｇ）の範囲内である。

【０１０４】 有益性は、当該分野で一般の種々の方法（例えば、活性化自己反応性Ｔ細胞の
数の低下、Ｔｈ１サイトカイン産生における低下、炎症における低下、臨床症状
が明らかになるまでの時間の実質的な延長、臨床症状または前臨床症状における
寛解あるいは臨床症状進行または前臨床症状進行の停止）において評価され得る
。

【０１０５】 非経口（例えば、腹腔内または皮下、筋肉内、皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ））
非粘膜投与について、ＮＴＴＡは、生理学的に受容可能な溶液または懸濁液中に
組み込まれ得る。これらの調製物は、好ましくは、約１０ｎｇのＮＴＴＡから約
１０ｍｇ（１ｍｇが代表的な用量である）を含み得る。投与は、２週間後の１回
のブースターで、意図されるワクチン接種の定期的な繰り返し（例えば、アレル
ギーについては季節的に）で生じ得る。アジュバントまたはキャリアが含まれ得
る。ＤＮＡワクチンまたは遺伝子治療はまた、例えば、Ｗａｉｓｍａｎ，Ａ．ら
、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９６、２：８９９；またはＫａｎ−Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，
Ｊ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１９９３、３
７：１５により記載される様式において意図される。

【０１０６】 溶液または懸濁液はまた、以下の成分を含み得る：例えば、注射用水、生理食
塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリ
コール、他の合成溶媒などのような滅菌希釈剤；例えば、ベンジルアルコール、
メチルパラベンなどのような抗菌剤；例えば、アスコルビン酸、亜硫酸水素ナト
リウムなどのような抗酸化剤；例えば、エチレンジアミン四酢酸などのようなキ
レート剤；例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩などのような緩衝液、および
例えば、塩化ナトリウム、デキストロースなどのような毒性の調整についての薬
剤。アジュバントが使用される場合、アジュバントは、非増悪アジュバント（例
えば、明礬）であるべきである。

【０１０７】 非経口的な複数用量のバイアルは、ガラス材料またはプラスチック材料であり
得る。

【０１０８】 粘膜投与において、投薬は、一般に、吸入可能な投薬形態を除く、皮下（ｓ．
ｃ．）、筋肉内（ｉ．ｍ）または皮下（ｓ．ｄ．）、経口投与と同じであること
が予期される。ＮＴＴＡは、口腔粘膜、鼻腔粘膜、気管支粘膜または肺粘膜と接
触して配置される。粘膜投与に有用な処方物としては、粘膜の膜を横切るポリペ
プチドの投与に適切な処方物が挙げられる。例えば、米国特許第４，２２６，８
４８号および同第４，６９０，６８３号は、鼻腔内への薬剤の投与の際に有用な
ポリマーマトリックスを記載する。米国特許第４，９５２，５６０号は、水溶性
タンパク質を含む軟膏処方物および本発明の投与の際の使用に適切であり得る１
価アルコールを開示する。なぜなら、これらは、上皮の障壁を横切る薬物の吸収
を増加させるからである。材料の経皮吸収を改善する方法は、米国特許第４，２
７２，５１６号に記載される。これらの処方物および当該分野で周知の他の処方
物の各々は、本発明に記載されるようなバイスタンダー（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ）
抗原の粘膜送達に使用され得る。

【０１０９】 さらなる適切な処方物としては、市販されているビヒクルおよび表面活性剤お
よび吸収促進剤のような他の皮膚浸透剤を含み得るがそうである必要がない処方
物が挙げられる。具体的には、米国特許第５，４０７，９１１号は、高分子量の
ポリペプチドに対する吸収促進剤としてのアキサシクロアルカン（ａｘａｃｙｃ
ｌｏａｌｋａｎｅ）誘導体の使用を記載する。米国特許第５，３９７，７７１号
は、粘膜の膜を横切る薬学的組成物の投与方法において、ｎ−グリコフロールの
使用を記載する。さらに、米国特許第４，５４８，９２２号は、吸収を増加させ
る水溶性の両親媒性ステロイドの使用を開示する。Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（Ｃｈｅ
ｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３５（７）：３０４１〜３０４４）に記載されるよ
うなゲルベースの組成物もまた、本発明に適切である。

【０１１０】 ＮＴＴＡが吸入により粘膜的に投与される場合、例えば、吸入によるエアロゾ
ル投薬形態において投与されるペプチドの量は、好ましくは、１用量当たり約０
．００５ｍｇ〜２００ｍｇの間、好ましくは０．０１ｍｇ〜５０ｍｇの間である
。本発明の吸入形態は、単一の投薬形態または複数の投薬形態において、患者に
投与され得る。投与されるべき正確な量は、処置されるべき任意の疾患の病期お
よび重篤度、患者の免疫系の活性および患者の体調に依存して変動し得、そして
最適に供され得る。

【０１１１】 吸入可能なエアロゾル薬学的処方物またはスプレー薬学的処方物は、任意の成
分として、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、安定化剤または乳化剤、およ
び当該分野において周知である型の塩を含み得る。本発明のエアロゾル薬学的処
方物において有用であるキャリアおよび／または希釈剤の特定の非限定的な例と
しては、水、通常の生理食塩水および生理学的に受容可能な緩衝化生理食塩水溶
液（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水溶液、ｐＨ７．０〜８．０）が挙げられる
。

【０１１２】 有用な可溶化剤および乳化剤の例は、生理学的に平衡化した塩溶液、リン酸緩
衝化生理食塩水および等張な生理食塩水である。本発明の粘膜投薬形態を調製す
る際に用いられ得る塩としては、ナトリウムおよびカリウムの薬学的に受容可能
な塩が挙げられる。

【０１１３】 エアロゾル組成物は、例えば、乾燥粉末としてか、または好ましくは微細に分
割した水溶液相において投与され得る。好ましいエアロゾルの薬学的処方物は、
例えば、生理学的に受容可能な緩衝化生理食塩水溶液を含み得る。

【０１１４】 液体中に溶解も懸濁もしていない微細に分割した固体粒子の形態における乾燥
エアロゾルもまた、本発明の実施に有用である。本発明に使用される組成物は、
塵状粉末の形態であり得、そして約１〜５ミクロンの間、好ましくは２〜３ミク
ロンの間の平均粒子サイズを有する微細に分割された粒子を含む。微細に分割さ
れた粒子は、当業者に周知である従来の技術を使用する、粉末化およびスクリー
ン濾過（ｓｃｒｅｅｎ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）によって調製され得る。この粒
子は、乾燥噴霧化粉末の形態であり得る、所定の量の微細に分割された材料を吸
入することによって投与され得る。ネブライザまたは吸入器は、当該分野で周知
である投与をもたらすように使用され得る。

【０１１５】 所望される場合、アジュバント（例えば、明礬）が添加され、そして当該分野
において周知であるキャリアも投与され得る。調節性サイトカイン（例えば、Ｉ
Ｌ−４およびＩＬ−１０）もまた添加され得る。

【０１１６】 本発明は、以下の実施例により例示され、本実施例は、その範囲を限定するこ
となく本発明を例示することが意図される。

【０１１７】 （方法） マウス：ＮＯＤマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗ
ｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）から購入し、そして特定の病原体が存在しない条件下で
飼育した。雌性ＮＯＤマウスのみを本研究に使用した。このＮＯＤコロニーにお
いて、インスリン炎は、４週齢に始まる。疾患発症の平均齢は、２２週であり、
３０週齢でＩＤＤＭを示すマウスは約８０％である。ＩＤＤＭは、反復性高血糖
症による貧血である。

【０１１８】 抗原。マウスＧＡＤ６５（Ｌｅｅら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃ
ｔａ．１２１６：１５７〜１６０、１９９３）およびコントロールのＥｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ β−ガラクトシダーゼを、Ｋａｕｆｍａｎ，Ｄ．ら、
Ｎａｔｕｒｅ ３６：６９、１９９３に記載されるように精製した。種々のペプ
チドを、標準的なフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）化学により
合成し、そしてクロマトグラフィー（本当？）により精製した。ＮＯＤマウスに
おいて免疫原性である、コントロールのニワトリ（ｈｅｎ）卵白リゾチームペプ
チドＨＥＬは、学術的な贈り物であるが、市販されている。各々のペプチドのア
ミノ酸組成物を、質量分析により確認した。インスリンβ鎖をＳｉｇｍａから購
入した。

【０１１９】 アッセイ：以下で特定した種々の時間で、ＮＯＤマウスは、５０％ＩＦＡ（Ｇ
ｉｂｃｏ ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）において、
１００μｇのβ−ガラクトシダーゼ（または他の特定の抗原）の腹腔内（ｉ．ｐ
．）の単回注射を受けた。４週間後に、血清サンプルを、ＥＬＩＳＡによって抗
原およびβ−ガラクトシダーゼに対する抗体について試験した。１０μｇ／ｍｌ
でβ−ガラクトシダーゼまたは抗原（市販されているかまたは組み換えられるか
もしくは合成される）を、０．１Ｍ ＮａＨＣＯ、ｐＨ９．６（β−ガラクトシ
ダーゼ）またはｐＨ８．５（ＧＡＤ６５）中にて４℃で一晩、９６ウェルプレー
ト（Ｎｕｎｃ、Ｒｕｓｋｉｌｄｅ、Ｄｅｎｍａｒｋ）に結合させた。このウェル
を、ＰＢＳでリンスし、次いで１時間、ＰＢＳ中にて３％ＢＳＡでブロックした
。マウスの血清を添加し（０．１ｍｌの１／５００希釈）、そして３７℃で１時
間インキュベートした。洗浄の後に、結合した免疫グロブリンを、アフィニティ
ー精製西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）共役ヤギ抗マウスＩｇＧ＋Ａ＋Ｍ
（Ｈ＋Ｌ）（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、またはＩ
ｇＧ１およびＩｇＧ２ａに対するＨＲＰ共役ヤギ抗マウスアイソタイプ特異的抗
体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｂｉｒｍｉｎ
ｇｈａｍ、Ａｌａｂａｍａ）および２，２‘−アジノ（ａｚｉｎｏ）−ビス（３
−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン）（ＡＢＴＳ）を使用して特徴付けし
た。未処置ＢＡＬＢ／ｃおよびＡＫＲマウス由来の血清サンプルをネガティブコ
ントロールとして使用した。

【０１２０】 ＥＬＩＳＰＯＴ分析。特定の時間で、マウスは、５０％ＩＦＡにおいて、１０
０μｇのβガラクトシダーゼもしくはＧＡＤ６５または他の特定の抗原の腹腔内
の単回注射を受けた。１４日後に、脾臓Ｔ細胞を単離し、そしてβ−ガラクトシ
ダーゼおよびＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＦＮ−γを分泌するＧＡＤ６５特異的
Ｔ細胞の頻度を、記載されるように（Ｆｏｒｓｔｈｕｂｅｒ，Ｔ．ら、Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ、２７１：１７２８、１９９６）ＥＬＩＣＰＯＴ技術を使用することによ
って、抗原およびβ−ガラクトシダーゼ（１００μｇ／ｍｌ）の処置を抗原とし
て使用した例外を除いて、決定し、そしてビオチン化ＢＶＤ−２４Ｇ２（Ｐｈａ
ｒＭｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）とともに１１Ｂ
１１を補足およびＩＬ−４の検出に使用した。得られたスポットを手動で計数し
た。

【０１２１】 糖尿病の養子（ａｄｏｐｔｉｖｅ）移入。特定の時間に、ＮＯＤマウスを、１
００μｌの５０％ＩＦＡにおいて、１００μｇのＧＡＤ６５（または他の特定の
抗原）あるいはコントロールのβ−ガラクトシダーゼを腹腔内に注射し、そして
１４週齢で再注射した。５週間後に、脾臓単核細胞の単一細胞懸濁液を、各群か
ら、ならびに未操作の糖尿病ＮＯＤマウスから調製した。未操作の糖尿病マウス
由来の１．０×１０⁷の脾臓単核細胞を、ＧＡＤ６５ β−ガラクトシダーゼ処
置したマウス由来の同数の脾臓単核細胞と混合し、そして５００ｒａｄのγ放射
線照射を受けた５週齢の雌性ＮＯＤマウスに静脈内注射した。別のコントロール
群は、未操作の糖尿病マウスからのみ得られる、１×１０脾臓単核細胞を受けた
。

【０１２２】 Ｔ細胞増殖アッセイ。雌性ＮＯＤマウスに、１００μｌの５０％ＩＦＡ中の１
００μgの抗原、またはコントロールβガラクトシダーゼを、８週齢時点でｉ．
ｐ．注射した。このマウスを２週間後に再注射した。１２週齢時点で、脾臓性Ｔ
細胞を、前述のように、ＧＡＤ６５、ｈｓｐ２７７、βガラクトシダーゼおよび
ＨＥＬペプチドに対する増殖応答について試験した。

【０１２３】 ＩＤＤＭ頻度。特定の時点で、１０匹の雌性ＮＯＤマウスの群に、１００μｌ
の５０％ＩＦＡ中の５０μgの抗原、またはコントロールβガラクトシダーゼを
、ｉ．ｐ．注射した。別のコントロール群は１００μｌの５０％ＩＦＡのみを受
けた。持続的な抗原提示が必要とされ得るので、このマウスに４０週齢まで６週
ごとに再注射した。ウリングルコースレベルをＴｅｓ−ｔａｐｅ（Ｌｉｌｌｙ，
Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄｉａｎａ）により糖尿病について毎週モニタ
ーした。本発明者らがウリン中で異常なグルコースレベルを観察した後、血液グ
ルコースレベルを週２回モニターした。２回連続の１３ｍｍｏｌ／ｌをこえる血
液グルコースレベルの記録をＩＤＤＭ発症とみなした。

【０１２４】 島の移植。雌性ＮＯＤマウスをＩＤＤＭの発症についてモニターし、その後マ
ウスを１日あたり１．０〜１．５単位のインスリン（ホップ腺 Ｕ，Ｌｉｌｌｙ
）で維持した。ＩＤＤＭ発症の時点で、マウスに、５０％ＩＦＡ中の１００μｇ
のＧＡＤ６５、ｈｓｐ２７７、インスリンＢ鎖またはコントロールのβガラクト
シダーゼのいずれかをｉ．ｐ．注射した。１０日後、このマウスに再注射した。
この第２の処置の１０日後、新生ＮＯＤマウスから新鮮に単離された３０００の
島を腎臓被膜下の空隙に移植し、そしてホップ腺投与を中断した。このマウスに
２週間ごとに再注射した。糖尿病の再発を、２回連続の１３ｍｍｏｌ／ｌを超え
る血液グルコースレベルで規定した。

【０１２５】 （実施例１：Ｔｈ１拡充的なカスケードは疾患の進行に関連する）。自発的な
自己免疫プロセスおよび寛容性状態の両方におけるＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞
の関与は、本来、非トランスジェニックマウスにおいて位置付けることが困難で
あった。これは、Ｔ細胞プール内の非常に低頻度の自己反応性Ｔ細胞のためであ
る。単一細胞レベルでＴ細胞を特徴づけることができるＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
を用いて（Ｆｏｒｓｔｈｕｂｅｒら、前出、１９９６）、本発明者らは、ＮＯＤ
マウスにおけるＢ細胞自己免疫性の自然発生を試験した。操作されていないＮＯ
Ｄマウスがインスリン炎の発現で試験された場合（４週齢）、本発明者らは活発
なＩＦＮγを検出したが、単極性Ｔｈ１応答と一致する単一のＧＡＤの決定基（
ＧＡＤ ｐ３５）へのＩＬ−４またはＩＬ−５特異的なＴ細胞応答は検出しなか
った（２，１７）。１２週齢で、Ｔ細胞自己免疫性は、さらなるＧＡＤ決定基へ
分子内に広がり、そしてインスリンＢ鎖およびＨＳＰへ分子間に広がった；これ
らの２次的な自己免疫プロセスのすべては、単極性Ｔｈ１型抗βＣＡＡ反応性の
広がりにより特徴付けられる。

【０１２６】 （実施例２：自己抗原は、糖尿病性ＮＯＤマウスにおいて移植された同質遺伝
子的な島グラフトを防御する能力において異なる）。前糖尿病性のＮＯＤマウス
において疾患を阻害する自己抗原処置の能力に基づき（１）本発明者らは、この
処置がまた、移植された同質遺伝子的なβ細胞を、糖尿病性ＮＯＤマウスにおい
て樹立された自己免疫応答から防御し得るか否かを試験した。島をβガラクトシ
ダーゼで処置された糖尿病性ＮＯＤマウスへ移植した。レシピエントの糖尿病性
ＮＯＤマウスへ、移植前に腹腔内的にＧＡＤ／ＩＦＡを投与することは、同質遺
伝子的島グラフトの生存を大いに延長した。ＨＳＰペプチド（ＨＳＰｐ２７７）
処置は、防御への有意でない傾向を付与するが、インスリンＢ鎖処置はいくらか
の防御的効果を欠いていた。この結果を図１に示す。ここでデータは、高血糖症
が再発した移植後時間として表される。これらの知見は、それぞれの自己抗原が
新しい高血糖症動物においてＴｈ２免疫性を促進し得る程度と相関する（以下、
実施例３を参照）。

【０１２７】 （実施例３：疾患の進行にともなう誘導性Ｔｈ２免疫の減弱）。コントロール
の外来抗原またはβＣＡＡを用いて、６週齢時点で、または高血糖症の発生時点
（＝１８週齢）で処置されたＮＯＤマウス由来の脾臓性Ｔ細胞を、単離し、そし
て注射された抗原に対する応答におけるＩＬ−４を分泌するＴ細胞の頻度をＥＬ
ＩＳＰＯＴにより決定した。データは、脾臓性Ｔ細胞１００万あたりのＩＬ−４
分泌スポット形成コロニー（ｓｐｏｔ ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｏｌｏｎｙ：ＳＦＣ
）の平均数として表される。同様のパターンをＩＬ−５分泌抗原反応性Ｔ細胞に
ついて観察した。この結果を図２に示す。

【０１２８】 コントロールの抗原またはβＣＡＡを用いて、疾患経過の異なる段階で処置し
たマウス由来の脾臓性Ｔ細胞を、ＥＬＩＳＰＯＴにより、抗原誘導のＩＬ−４Ｔ
細胞応答およびＩＬ−５Ｔ細胞応答について試験した。このデータは、脾臓性Ｔ
細胞１００万あたりのＩＬ−４分泌ＳＦＣの平均数として表される。この結果を
図３に示す。同様のパターンをＩＬ−５分泌抗原反応性Ｔ細胞について観察した
。それぞれの場合、非標識組織抗原は、注射された抗原に対して活発なＴｈ２応
答をプライムしたが、これはβＣＡＡには広がり得なかった（データ示さず）。

【０１２９】 簡略に言えば、前述の実験は以下を示す：１）コントロールの非標的組織抗原
に対する応答は、疾患経過により影響を受けなかった；２）疾患経過の早期にお
けるβＣＡＡの投与は、他のβＣＡＡに広範に広がる注射抗原に対して活発なＴ
ｈ２応答を誘導した；３）より強いＴｈ２応答をプライムしたβＣＡＡは、他の
関連のないβＣＡＡへのＴｈ２免疫のより広範な広がりを促進した（図２）；お
よび４）疾患の進行にともない、Ｔｈ２応答およびＴｈ２の広がりをプライムす
るそれぞれのβＣＡＡの能力が定常的に低下し、このことは、プライミングに利
用可能な方向付けられていないβＣＡＡ反応性のＴ細胞プールが徐々に減縮して
いくことを示唆した（図２および３）。異なるβＣＡＡが疾患経過においてＴｈ
２後期免疫を誘導する能力と、糖尿病性ＮＯＤマウスにおいて、これらの処置が
移植された同種遺伝子性β細胞を防御する成功との間に相関関係が存在した。こ
れは、疾患進行にともなうβ細胞自己抗原に対して活性な寛容性を誘導する能力
の低下が、免疫原性応答の内因性の欠失に起因するのではないが、自己抗原を認
識する（しかし、炎症性または調節性表現型を発現するという点では方向付けら
れていないままである）Ｔ細胞のランクの枯渇に一致していることを確認する。
言換えれば、活性な寛容性の誘導は、ゲームの数であり、利用可能なＴ細胞が少
ないほど、活性な寛容化の効果が低下する。

【０１３０】 （実施例４：β細胞ＮＴＴＡの同定）。トランスジェニック動物モデルは、末
梢組織で低レベルで発現される新生抗原が、しばしばＴ細胞教育にほとんど影響
を有さず、そして免疫化後に強力な免疫応答を誘発することを示している（４〜
８）。従って、低レベルでβ細胞に特異的に発現されたＮＴＴＡを同定すること
が好ましい。ＤＮＡ配列バンクをマウスβ細胞サブトラクションライブラリーか
ら単離したｃＤＮＡ配列についてスクリーニングした。マウスｃＤＮＡ配列を既
知および未知のβ細胞ｃＤＮＡの両方から、ならびにβ細胞特異的抗原および偏
在性抗原（これらのいくつかは、わずかに低レベルでβ細胞において特異的に発
現されるようである）の両方から選択した。β細胞または他の組織で高いレベル
で発現される他のｃＤＮＡは、比較の目的のためにノーザン分析により選択され
た。候補ｃＤＮＡのオープンリーディングフレームから、本発明者らは共通のＮ
ＯＤクラスＩＩ ＭＨＣ結合モチーフを含んだ１ダースのペプチドを合成した（
５４，５５）。本発明者らは、ＮＯＤマウスにおいて免疫原性である３つの異な
るマウスβ細胞タンパク質から４つのペプチド（配列は上記に提供）を同定した
（図４）。本発明者らは、ＮＯＤマウス発生の任意の段階でこれらのペプチドに
応答する自発性増殖性の脾臓性Ｔ細胞リコールを検出せず、これらのペプチドを
ＮＴＴＡと規定した。

【０１３１】 （ペプチド２）：β細胞で高度に発現されるが多数の他の細胞ではまた中度に
発現されるタンパク質、カルビンジンＤ２８由来。

【０１３２】 （ペプチド４）：β細胞で低レベルで発現され、そしてノーザン分析に基づい
てβ細胞特異的であるようである、機能未知のｃＤＮＡ由来。

【０１３３】 （ペプチド６）：中度のレベルで発現され、そしてまたその発現がβ細胞特異
的であるようである、機能未知の別のｃＤＮＡ由来。

【０１３４】 （ペプチド７）：ペプチド６と同じｃＤＮＡ由来の別の決定基。

【０１３５】 試験した残りのペプチドは、以下であった：配列ＥＥＦＭＫＴＷＲＫＹＤＴＤ
ＨＳを有するカルビンジン由来の１５マーであるペプチド１； 配列ＬＫＤＬＣＥＫＮＫＱＥＬＤＩＮを有するカルビンジン由来の、これも１５
マーであるペプチド３； 配列ＩＬＫＭＤＨＨＣＰＷＶＮＮＣＶを有するβ細胞特異的ｃＤＮＡライブラリ
ー（Ｎｅｏｐｈｙｔｏｕ，Ｐ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４５：１２７，１９９６
）由来のクローン３８由来の次の１５マーであるペプチド５；および 配列ＧＫＲＮＡＡＧＤＰＮＲＥＳＬＤＦＬを有する島アミロイドポリペプチド由
来のペプチド８。 これらのペプチドは決定基を含まなかった。

【０１３６】 さらに、重複するＧＡＤペプチドのセットを用いて、ＮＯＤマウスで免疫原性
である２つのＧＡＤペプチド（ＧＡＤｐ１８およびＧＡＤｐ２７；上記、ＡＮＴ
ＩＧＥＮＳで提供される配列）が同定された。しかしこれは自発性の自己免疫応
答からは無視される（データ示さず）。上記の前述のＮＴＴＡとともに、これら
の無視されたＧＡＤ決定基は、いくつかの自己抗原決定基に対して自己寛容性が
樹立されることを実証するために用いられ得る物質を提供するが、一方、同じタ
ンパク質由来の他の決定基は、自己免疫カスケードに関与する。さらに、無視さ
れたＧＡＤ決定基を投与することに基づく免疫療法が疾患経過の後期ステージで
ＧＡＤ標的決定基に対して非常に優れている（以下参照）ので、これらの結果は
、他の寛容化因子（ｔｏｌｅｒｉｚｅｒ）ができない場合でさえ調節的な寛容性
が誘導され得ることを実証する。これらの結論が用いられ、自己免疫疾患および
他の異常な炎症性免疫応答のための免疫療法としてヒトＮＴＴＡの発達に利点を
与え得る。

【０１３７】 前述のＮＴＴＡは、ヒト免疫療法のためにそれ自身は不適切であり得る。なぜ
なら、ヒトＭＨＣは、マウスＭＨＣとは異なるからである。しかし、本明細書に
おいて記載される方法を用いて、ヒトのために用いられ得るさらなるＮＴＴＡが
同定され得る。ＮＯＤモデルの前述のアレイにおいて、ＮＴＴＡは異なる発現パ
ターンを有する。寛容化因子としてのそれらの能力は、β細胞抗原決定基のヒエ
ラルキーに従って、抗原を基礎とするヒト免疫治療剤を選択する手引きに用いら
れ得る。ペプチド（抗原全体よりも）の使用が好ましい。なぜなら潜在的な可変
が限定されそしてその治療的有効性がより便利に評価され得るからである。

【０１３８】 前述の方法は、炎症により影響される任意の組織においてさらなるＮＴＴＡを
同定するために適用され得る。

【０１３９】 （実施例５：ＮＴＴＡでの処置は、ＩＤＤＭの養子性トランスファーを妨げる
）。ＮＴＴＡペプチド処置マウス由来の脾臓性Ｔ細胞を、糖尿病性ＮＯＤマウス
由来のＴ細胞とともに、放射線照射された若年ＮＯＤマウスに同時トランスファ
ーした。コントロールの免疫原性マウス血清アルブミンペプチド（ＭＳＡ_{560-57 4} ）で処置したマウス由来の細胞を受けたマウスの全てが５週間以内にＩＤＤＭ
を発症した。対照的に、ＮＴＴＡ処置マウス由来のＴ細胞を受けた群の全てはＩ
ＤＤＭの頻度を有意に低下させた（ｎ＝９〜１２／群）（図５）。従って、ＮＴ
ＴＡは、病原性Ｔ細胞を下方調節し得る伝導性の調節応答を養子性に誘導し得る
。

【０１４０】 （実施例６：ＮＴＴＡでの処置（ただしβＣＡＡ標的決定基での処置ではない
）は疾患の進行を阻害する）。６週齢の雌性ＮＯＤマウスの群を、コントロール
のＭＳＡ（ＭＳＡ ５６０〜５７４）ペプチド、またはβＣＡＡ標的決定基（Ｇ
ＡＤｐ３５、ＧＡＤｐ３４、ＨＳＰ２７７もしくはインスリンＢ鎖）、またはＮ
ＴＴＡペプチド＃２、４、６もしくは７（それぞれの場合、ＩＦＡ中に１００μ
ｇのｉｐ）を含むペプチドのいずれかを用いて処置した。このマウスを１０日後
、１回ブーストした。すべてのマウス群を同時に注射して、そして同じＳＰＦ室
内で飼育した。コントロールのＭＳＡペプチドで試験したＮＯＤマウスは、未操
作のＮＯＤマウス群の疾患の頻度と類似した疾患の頻度を示した（図６）。βＣ
ＡＡ標的決定基で処置したマウスの平均７０％が４０週齢でＩＤＤＭを発症した
。２回連続して３００ｎｇ／ｄｌを超える血液グルコースレベルを疾患の発症と
みなした。それぞれの群についてＮ＝１０。（インスリンＢ鎖およびＨＳＰ２７
７処置が疾患の進行を阻害したことを示した他の研究は、これらの処置をより早
期齢で開始するか、または複数回ブーストしていた）。

【０１４１】 対照的に、ＮＴＴＡでの処置は、コントロール群と比べて疾患を有意に阻害し
た（ログランク検定を用いて ｐ＜０．００１）。さらに、ＮＴＴＡで処置した
マウスの群は、βＣＡＡ標的決定基で処置された群よりも疾患から有意により良
好に防御された（ｐ＜０．０００６）。異なるＮＴＴＡで処置されたＮＯＤマウ
スの平均４０％が４０週齢までにＩＤＤＭを発症した。最低の防御しか与えなか
ったＮＴＴＡは、偏在的に発現したカルビンジン分子由来であった。従って、投
与された抗原に依存して治療的有効性の可変性が存在するが、すべての防御効果
は本発明の範囲内である。

【０１４２】 ＮＴＴＡまたはβＣＡＡのいずれかで処置されたマウスの群由来のデータ（図
６に示す）を、図７に組み合わせる。これは、ＮＴＴＡ 対 βＣＡＡに関して
時間と疾患の組み合わせを示す。図７において、ＮＴＴＡは破線で、βＣＡＡは
点線で、そしてコントロールのＭＳＡは実線で示される。データをＫａｐｌａｎ
−Ｍｅｉｅｒ分析を用いて組み合わせた。

【０１４３】 （実施例７：同じタンパク質由来の無視された決定基（ただし標的決定基では
ない）は進行した疾患を有するＮＯＤマウスにおいて疾患の進行を阻害する）。
１２週齢の雌性ＮＯＤマウスを、ＧＡＤ標的決定基（ＧＡＤｐ３５、ＧＡＤｐ３
４、もしくはＧＡＤｐ３２）、またはＧＡＤのＮＴＴＡ（すなわち、自己免疫応
答により無視されるにもかかわらず免疫原性決定基）（ＧＡＤｐ１８またはＧＡ
Ｄｐ２７）［どのくらいの量？ｉｐ？どんな頻度？］、または陽性コントロール
ＭＳＡ５６０−５７４（ＩＦＡ中、１００μｇ、ｉｐ）のいずれかで処置した。
このマウスを１０日後、再度ブーストした。自己抗原ＧＡＤｐ３５またはＧＡＤ
ｐ３４での処置は誕生時に投与された場合防御を付与した（２７）が、これらの
処置は、１２週齢で与えた場合、有意な防御を提供しなかった（ＧＡＤｐ３５ま
たはＧＡＤｐ３４で処置したマウスと、コントロールのＭＳＡペプチドで処置し
たＮＯＤマウスまたは未操作のＮＯＤマウス（陰性コントロール）との間に有意
な差異は存在しなかった（図８））。対照的に、無視されたＧＡＤの決定基での
処置は、コントロール群と比べて疾患を有意に阻害した（ｐ＜０．００８）。さ
らに、無視されたＧＡＤ決定基で処置したマウスの群は、ＧＡＤ処置決定基で処
置された群よりも疾患から有意により良好に防御された（ｐ＜０．０１）。ＮＴ
ＴＡ 対 βＣＡＡペプチドで処置されたマウスの組み合わせた群の平均の頻度
を図９に示す。処置された群をＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ分析を用いて組み合わ
せた。

【０１４４】 （実施例８：自己抗原によりプライムされた前炎症性反応）。ＧＡＤ、インス
リンＢ鎖またはＨＳＰ２７７（１００μｇ ｉ．ｐ．ＩＦＡ中）で新生児的に処
置したＮＯＤマウスは、４週齢で注射された自己抗原に対してＴｈ２およびＴｈ
１応答の両方を示した（ＥＬＩＳＰＯＴにより評価して）（図１０）。このデー
タは、上記背景の脾臓性Ｔ細胞百万あたりの平均スポット形成コロニー数として
表される。それぞれの群内の変異は１５％未満であった。実験のマウスおよびコ
ントロールマウスを２つの別々の実験（ｎ＝５／群）において同時に（３連で）
試験した。

【０１４５】 通常、ＮＯＤマウスは、数週間後までこれらの抗原に対して検出可能なＴｈ１
応答を発生しなかった。この結果は、これらの自己抗原が他のβ細胞自己抗原に
対してＴｈ２応答および関連するＴｈ２の広がりを誘導するだけでなく、注射さ
れた抗原に対して促進されたＴｈ１応答もプライムしたことを示す。なぜなら、
ＮＯＤモデルにおけるＴ細胞は誕生後まもなくβＣＡＡに部分的にプライムされ
たからである。このようなＴ細胞は、通常、疾患経過の後期まで活性化されない
が、前炎症性環境が、より樹立される場合は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上の注射
された抗原の非常に増大した提示は、検出可能レベルまで完全に活性化されそし
て増大されるように、Ｔｈ１表現型に対して部分的に活性化されたＴ細胞を駆動
し得る。従って、自己抗原の投与は、注射された抗原に対して前炎症性の応答を
プライムし得る。ＮＴＴＡが極性化されたＴｈ２応答を誘導し、前炎症性応答を
回避することが予期される。

【０１４６】 （実施例９：ＮＴＴＡおよびβＣＡＡ反応性クローンの発生）。ＮＯＤマウス
を、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のＮＴＴＡペプチドまたはＧＡ
Ｄｐ３５で免疫化した。リンパ節および脾臓性Ｔ細胞を、抗原とともに培養した
２週間後、ＩＬ−２およびＩＬ−４と一緒に、放射線照射したＮＯＤ脾臓性細胞
およびＴ細胞クローンを限界希釈で生成した。ＮＴＴＡ７およびＧＡＤｐ３５反
応性クローンをＥＬＩＳＰＯＴおよび抗原刺激化培養上清の分析により特徴づけ
た。両方のクローンは、対応する抗原に応答して、ＩＬ−４を分泌し、そしてＩ
ＦＮ−γは分泌しなかった。従って、これらのＴ細胞クローンはＴｈ２型である
ようである。

【０１４７】 （実施例１０：ＮＴＴＡ決定基を含有する抗原全体のクローニングおよび発現
）。ＮＴＴＡペプチドが抗原全体の天然の処理後、優先的なまたは潜在的な決定
基を構成するか否かを決定するためには抗原全体が必要である。ＮＴＴＡ（カル
ビンジン Ｄ２８およびＧＡＤの場合）を含むことが確認された抗原全体または
ペプチド４、６、および７の配列を含む推定オープンリーディングフレームコー
ド配列は、ＰＣＲ−クローニングされ、組換え的に発現され、そしてそれらのコ
ードされるタンパク質は、金属アフィニティークロマトグラフィーにより精製さ
れた。

【０１４８】 （実施例１１：膵臓の島浸潤由来の単一抗原特異的Ｔ細胞の特徴づけ）。単球
を１０週齢の雌性ＮＯＤマウスの島から単離した。１０００、１００または１０
の単球を百万の放射線照射された脾臓性Ｔ細胞と混合し、そしてＥＬＩＳＰＯＴ
により、β細胞自己抗原およびコントロール抗原に対するＩＦＮγ応答およびＩ
Ｌ−５応答について試験した。この結果をＴ細胞の数として表１に示す。これら
のデータは、島浸潤内の低頻度の抗原特異的Ｔ細胞が特徴付けられ得、そして自
己免疫における抗原の関係を評価するために使用され得ることを実証する。

【０１４９】

【表１】 （ヒトＮＴＴＡ同定および処置の実施例）。抗島細胞自己抗体、もしくは抗島
細胞抗体および抗インスリン自己抗体の両方に陽性な個体について、または自己
免疫応答をまだ受けている（例えば、ＩＤＤＭの「ハネムーン期間」における）
個体について、以下の手順が後に続き得る： 全ＩＡＰＰ（またはカルビンジン）は、推定ＮＴＴＡとして選択されそして試
験され得る。

【０１５０】 患者由来の末梢リンパ球は、抗原に曝され得、そしてその増殖は、（増殖アッ
セイにより）測定され得るか、またはそれらのサイトカインプロフィールは、（
例えば、ＥＬＩＳＰＯＴにより）評価され得るか、または抗体分泌は、（例えば
、ＥＬＩＳＡもしくは他の免疫アッセイにより）定量され得る。

【０１５１】 予想に反して、ＩＡＰＰがＮＴＴＡでない場合、それは、ＩＡＰＰの配列のセ
グメントを含むペプチドを用いてＮＴＴＡ決定基についてプローブとなり得る。

【０１５２】 実施例４の方法に従い得、そしてＩＡＰＰの切片は、ＨＬＡ結合モチーフ適合
についてプローブとなり得、そしてこれらの切片を含むペプチドは、構築され得
、そして同じ様式で試験され得る。例えば、Ｇｒｅｙ，ＨＭら、Ｃａｎｃｅｒ
Ｓｕｒｖ．，１９９５，２３：３７；Ｒｏｔｚｓｃｈｋｅ，Ｏら、Ｃｕｒｒ．Ｏ
ｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４ ６：４５を参照のこと。次いで、このよう
に選択されたＮＴＴＡを、以下のように患者に投与する：皮下に（ｓｕｂｃｕｔ
ａｎｅｏｕｓｌｙまたはｓｕｂｄｅｒｍａｌｌｙ）、みょうばんアジュバント中
の１ｍｇの全ＩＡＰＰ（またはＮＴＴＡであることが決定されたそのペプチドフ
ラグメント）、その２週間後に同じ用量のブースターの投与。

【０１５３】 インスリンおよび／または血液グルコースおよび／またはアミリンレベルおよ
び／または進行したグリコシル化最終産物の安定化についての反復した評価によ
り利点を評価し得る。第２の用量の２〜４週間後の末梢リンパ球からの炎症性サ
イトカインのレベルの減少はまた、利点を示す。同様に、低インスリン血症また
は高血糖症をまだ有さないが、抗−島抗体および抗インスリン抗体を有する患者
の場合、循環中の自己抗体レベルにおける低下または少なくとも６ケ月間（およ
び好ましくは１年間）明白な糖尿病を発症し得ないことが成功と考えられる。

【０１５４】 本発明の別の実施態様は、当業者により認識され、そして特許請求の範囲内に
含まれることが意図される。

【０１５５】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、島が移植された糖尿病ＮＯＤマウスにおける高血糖（糖尿病）の再発
パーセントのグラフである。このマウスは、全て不完全フロイントアジュバント
中で、β−ガラクトシダーゼ（黒三角；ポジティブコントロール）；ＧＡＤ（白
丸）；インスリンＢ鎖（白四角）；またはＨＳＰペプチド２７７（熱ショックタ
ンパク質ペプチド）（白菱形）で処置（腹腔内注射）された。

【図２】 図２は、ＮＯＤマウスにおけるβ細胞自己抗体に対する誘導性Ｔｈ２免疫の減
衰を示すグラフである。このグラフは、インスリンＢ鎖（白三角）；熱ショック
タンパク質ペプチド（黒三角）；ＧＡＤ（黒丸）；無関係な抗原β−ガラクトシ
ダーゼ（白四角）；およびＨＥＬ（ニワトリ卵白リゾチーム）（白丸）でマウス
を処置した処置年齢に対する、１０⁶個の脾臓Ｔ細胞あたりの脾臓Ｔ細胞のＩＬ
−４分泌スポット形成コロニー（ＳＦＣ）の平均数としてプロットされる。

【図３】 図３は、疾患の進行に伴う、Ｔｈ２拡散の減少（惹起されたＴｈ２細胞を減少
させて、他の抗原に対する免疫応答を調節する能力）、すなわち、ＧＡＤ／ＩＦ
Ａ；ＨＳＰ／ＩＦＡまたはインスリン／ＩＦＡを用いて異なる齢で処置されたマ
ウスについての１０⁶個の脾臓Ｔ細胞あたりのＩＬ−４分泌ＳＦＣの平均数（新
生児；６週間；１８週間）を示す棒グラフである。この棒は、マウスをＧＡＤ、
ＨＳＰまたはインスリンで処置した場合のＧＡＤ（黒）、ＨＳＰ（ストライプ）
またはインスリンによる刺激に対する応答を示す。

【図４】 図４は、免疫剤（ｉｍｍｕｎｉｚａｎｔ）として用いた場合、ＮＴＴＡが実際
に免疫原性であることを示す、種々の無視された標的組織抗原（ＮＴＴＡ）につ
いてのＮＴＴＡ濃度に対する増殖性Ｔ細胞応答（刺激指数）のプロットである（
＃２ 黒丸；＃４ 白四角；＃６ 白三角；および＃７ 黒三角）。

【図５】 図５は、照射した若いＮＯＤマウスへ、ＮＴＴＡ処置マウスまたはコントロー
ルマウス由来の脾臓Ｔ細胞を、糖尿病ＮＯＤマウス由来のＴ細胞と同時移入した
場合のマウスの齢（週齢）に対する糖尿病（高血糖）発症パーセントによって測
定した場合の調節性応答の養子移入を示すグラフである。マウスの血清アルブミ
ンペプチド５６０〜５７４を、コントロール（白丸）として用いた。

【図６】 図６は、マウスをコントロールのＭＳＡペプチドで処置したマウスの齢に対す
る糖尿病（高血糖）発症パーセントを示す類似のプロットである（黒四角；最も
上のプロット）；β細胞自己抗原標的決定基（熱ショックタンパク質ペプチド２
７７；インスリンβ細胞、ＧＡＤペプチド３５、ＧＡＤペプチド３４；中間のプ
ロット群）またはＮＴＴＡペプチド（＃２、４、６または７；下のプロット群）
。

【図７】 図７は、ＮＴＴＡもしくはβ細胞抗体、またはコントロールとしてのＭＳＡで
処置した群において糖尿病でないままであるマウスの比率のプロットである（図
６と同じデータに基づく）。

【図８】 図８は、標的ＧＡＤ決定基（自己抗原）が阻害しない場合に、ＮＴＴＡがＩＤ
ＤＭを阻害することを示すプロットである。糖尿病発症パーセントは、ＭＳＡ（
ポジティブコントロール）、ＧＡＤ標的決定基、ＧＡＤペプチド３５、ＧＡＤペ
プチド３４、ＧＡＤペプチド３２およびＧＡＤ ＮＴＴＡ：ＧＡＤペプチド１８
、ＧＡＤペプチド２７で処置されたマウスの群についてマウスの齢に対してプロ
ットされる。

【図９】 図９は、図８を生じたのと同じデータのプロットであるが、ＮＴＴＡ処置（「
無視された」）マウスおよび標的決定処置（「標的化された」）マウスまたはコ
ントロール処置（ＭＳＡ）マウスについて、年齢に対する糖尿病でないマウスの
比率としてプロットされている。

【図１０】 図１０は、コントロール抗原βガラクトシダーゼまたは標的抗原ＧＡＤもしく
はＨＳＰまたはインスリンＢ鎖を新生仔期に注射されたマウス、およびＧＡＤ、
ＨＳＰ、またはインスリンＢ鎖で刺激されたマウス、に由来する脾臓細胞のスポ
ット形成コロニーの棒グラフである。上のグラフ−図１０Ａ：ＩＦＮγ分泌細胞
（Ｔｈ１応答）；下のグラフ−図１０Ｂ：ＩＬ−４分泌細胞（Ｔｈ２応答）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 29/00 １０１ 25/00 37/02 27/02 43/00 29/00 １０１ Ａ６１Ｋ 37/02 37/02 37/26 43/00 37/48 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ティアン， ジデ アメリカ合衆国 カリフォルニア 90034， ロサンゼルス， エス． セパルベダ ブールバード 3241 (72)発明者 オルコット， アンジェリカ アメリカ合衆国 カリフォルニア 90024， ロサンゼルス， セルビー アベニュー 1028 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 DB34 DC01 NA14 ZA022 ZA332 ZA962 ZB072 ZB112 ZB152 ZC062 ZC352 4C085 AA02 BA01 BB11

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 自己免疫疾患を処置するための方法であって、該方法は、該
   疾患に関連する自己免疫応答に罹患している宿主に、抗原に基づく免疫治療剤と
   して、該自己免疫応答に対して調節的な寛容性を誘導しそしてそれによって該自
   己免疫応答を調節するに効果的な量で、無視された標的組織抗原（ＮＴＴＡ）を
   含有する組成物を投与する工程を包含する、方法。
2. 【請求項２】 前記宿主の罹患している前記自己免疫応答が、自己免疫応答
   の後期にある、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記薬剤が、実質的にバイスタンダー抗原のセグメントから
   なるペプチドＮＴＴＡである、請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記薬剤が、前記自己免疫応答の標的である器官または組織
   中で発現される抗原ＮＴＴＡの全体である、請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 前記薬剤が、実質的に自己抗原のセグメントからなるペプチ
   ドＮＴＴＡである、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 請求項１に記載の方法であって、前記自己免疫疾患がインス
   リン依存性糖尿病であり、前記宿主がヒトであり、そして前記薬剤が、インスリ
   ン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、アミリン、カルビンジン、および島アミ
   ロイドポリペプチド前駆体およびニューロペプチドＹからなる群より選択される
   抗原のＮＴＴＡペプチドセグメントである、方法。
7. 【請求項７】 前記抗原からグルカゴンが除外される、請求項４に記載の方
   法。
8. 【請求項８】 前記自己免疫疾患が多発性硬化症であり、前記宿主がヒトで
   あり、そして前記薬剤がミエリン関連酵素ＮＴＴＡである、請求項１に記載の方
   法。
9. 【請求項９】 前記自己免疫疾患が多発性硬化症であり、前記宿主がヒトで
   あり、そして前記薬剤がミエリン塩基性タンパク質、プロテオリピドタンパク質
   、および稀突起神経膠細胞ミエリン糖タンパク質のＮＴＴＡペプチドフラグメン
   トからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記自己免疫疾患が慢性関節リウマチであり、前記宿主が
    ヒトであり、そして前記薬剤が軟骨オリゴマー性マトリックスタンパク質、デコ
    リン、連結タンパク質およびそれらの前駆体のＮＴＴＡペプチドセグメントから
    なる群より選択される、請求項１に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記自己免疫疾患がブドウ膜網膜炎であり、前記宿主がヒ
    トであり、そして前記薬剤がロドプシン、光受容体間のレチノイド結合タンパク
    質、レチノイド結合タンパク質、レチナールホスホジエステラーゼ、ベストロフ
    ィン、およびペリフェリンのＮＴＴＡペプチドセグメントからなる群より選択さ
    れる、請求項１に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記自己免疫疾患がインスリン依存性糖尿病である、請求
    項１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項１に記載
    の方法。
14. 【請求項１４】 前記自己免疫疾患が自己免疫性甲状腺炎である、請求項１
    に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記自己免疫疾患がブドウ膜網膜炎である、請求項１に記
    載の方法。
16. 【請求項１６】 前記自己免疫疾患が慢性関節リウマチである、請求項１に
    記載の方法。
17. 【請求項１７】 異常な炎症性免疫応答を処置するための方法であって、該
    方法は、該応答と関連する病理に罹患している宿主に、抗原に基づく免疫治療剤
    として、該応答に対して調節的な寛容性を誘導しそしてそれによって該応答を調
    節するに効果的な量で、無視された標的組織抗原（ＮＴＴＡ）を含有する組成物
    を投与する工程を包含し、ここで該調節的な寛容性誘導は、該ＮＴＴＡを認識す
    るが該免疫応答には関与しないＴ細胞の中の調節的なＴ細胞の誘発を含む、方法
    。
18. 【請求項１８】 自己免疫疾患を処置するための方法であって、該方法は、
    該疾患と関連する自己免疫応答に罹患している宿主に、抗原に基づく免疫治療剤
    として、該自己免疫応答に対して調節的な寛容性を誘導しそしてそれによって該
    自己免疫応答を調節するに効果的な量で、無視された標的組織抗原（ＮＴＴＡ）
    を含有する組成物を投与する工程を包含し、ここで該調節的な寛容性誘導は、該
    ＮＴＴＡを認識するが該免疫応答には関与しないＴ細胞の中の調節的なＴ細胞の
    誘発を含む、方法。
19. 【請求項１９】 異常な炎症性の免疫応答を処置するための方法であって、
    該方法は、該応答と関連する病理に罹患している宿主に、抗原に基づく免疫治療
    剤として、該応答に対して調節的な寛容性を誘導しそしてそれによって該応答を
    調節するに効果的な量で、無視された標的組織抗原（ＮＴＴＡ）を含有する組成
    物を投与する工程を包含し、ここで該調節的な寛容性誘導は、該ＮＴＴＡと反応
    性であるが該免疫応答には関与しない調節的なＴ細胞の誘発を含む、方法。