JP2002521344A - 免疫疾患におけるＨＣｇｐ−３９の使用 - Google Patents
免疫疾患におけるＨＣｇｐ−３９の使用Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は炎症性疾患を予防するためのＨＣｇｐ−３９の使用に関する。より詳細には、ＨＣｇｐ−３９以外の抗原に対して反応性であり且つＨＣｇｐ−３９を発現している組織と同一組織に存在するリンパ球の反応性を調節するためにＨＣｇｐ−３９又はそのフラグメントを使用することができる。
Description
【０００１】 本発明は（自己）免疫疾患の治療に関する。より詳細には、本発明は（自己）
免疫状態を始動する初期イベント又は原因に関係なく治療用モジュレータータン
パク質としてのヒト軟骨ｇｐ−３９（ＨＣｇｐ−３９）の使用に関する。
免疫状態を始動する初期イベント又は原因に関係なく治療用モジュレータータン
パク質としてのヒト軟骨ｇｐ−３９（ＨＣｇｐ−３９）の使用に関する。
【０００２】 免疫系の主要な機能的役割は外来即ち非自己抗原をもつ侵襲病原体に対して個
体を防御することである。この機能を安全且つ有効に果たすためには、外来抗原
と個体自体の体内に由来する自己抗原を区別するメカニズムが必要である。この
自己−非自己識別プロセスが働かなくなり、自己抗原に対する免疫寛容が低下す
ると、自己抗原に対して免疫反応性となり、自己免疫疾患を誘発し、組織損傷や
臓器機能不全に至る。
体を防御することである。この機能を安全且つ有効に果たすためには、外来抗原
と個体自体の体内に由来する自己抗原を区別するメカニズムが必要である。この
自己−非自己識別プロセスが働かなくなり、自己抗原に対する免疫寛容が低下す
ると、自己抗原に対して免疫反応性となり、自己免疫疾患を誘発し、組織損傷や
臓器機能不全に至る。
【０００３】 自己免疫疾患はヒト健康管理における重大な問題であると考えられている。自
己免疫疾患は１種の抗原又は抗原複合体に特異的な免疫プロセスに起因するもの
と、多重臓器に存在する場合もある多種の抗原により生じる自己免疫反応に起因
するものがある。免疫系が自己免疫疾患の病理に関与していることはいくつかの
根拠から裏付けられる。第１に、個体が自己免疫疾患を発現する可能性はその遺
伝子バックグラウンドに密接に関連しており、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）
−ペプチド複合体を認識する応答Ｔ細胞に対する（自己）抗原をもつＭＨＣクラ
スＩＩ分子をコードする遺伝子は疾患罹病性に強い遺伝的関連を示す。第２に、
単球／マクロファージ及びＴ細胞等の免疫系の細胞は標的臓器に浸潤する。第３
に、自己免疫疾患患者のＴ細胞は潜在的に関与している自己抗原に応答してｉｎ
ｖｉｔｒｏ増殖する。第４に、単球／マクロファージ及びＴ細胞等の免疫系の
細胞が疾患活性の誘発及び発現に関与していることは自己免疫動物モデル試験に
より明白に立証されている。
己免疫疾患は１種の抗原又は抗原複合体に特異的な免疫プロセスに起因するもの
と、多重臓器に存在する場合もある多種の抗原により生じる自己免疫反応に起因
するものがある。免疫系が自己免疫疾患の病理に関与していることはいくつかの
根拠から裏付けられる。第１に、個体が自己免疫疾患を発現する可能性はその遺
伝子バックグラウンドに密接に関連しており、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）
−ペプチド複合体を認識する応答Ｔ細胞に対する（自己）抗原をもつＭＨＣクラ
スＩＩ分子をコードする遺伝子は疾患罹病性に強い遺伝的関連を示す。第２に、
単球／マクロファージ及びＴ細胞等の免疫系の細胞は標的臓器に浸潤する。第３
に、自己免疫疾患患者のＴ細胞は潜在的に関与している自己抗原に応答してｉｎ
ｖｉｔｒｏ増殖する。第４に、単球／マクロファージ及びＴ細胞等の免疫系の
細胞が疾患活性の誘発及び発現に関与していることは自己免疫動物モデル試験に
より明白に立証されている。
【０００４】 自己免疫疾患の場合に発生し得る免疫病理の１例は慢性関節リウマチ（ＲＡ）
である。ＲＡは持続炎症性滑膜炎を共通臨床徴候とする慢性多系疾患であり、滑
液細胞増殖、パンヌス形成、軟骨変質及び骨侵食を伴い、関節変形の結果、機能
不全をもたらす。
である。ＲＡは持続炎症性滑膜炎を共通臨床徴候とする慢性多系疾患であり、滑
液細胞増殖、パンヌス形成、軟骨変質及び骨侵食を伴い、関節変形の結果、機能
不全をもたらす。
【０００５】 免疫系が望ましくない不要な炎症性応答を生じる自己免疫疾患（例えばＲＡ）
の既存療法は不十分である。治療は自己免疫疾患の原因よりもその症状の緩和に
向けられている。自己免疫疾患の治療に使用されている大半の薬剤（例えばステ
ロイド及び非ステロイド系抗炎症化合物）は非特異的であり、有意毒性副作用が
ある。自己免疫疾患は薬剤の長期投与を必要とする慢性状態であるため、この点
は特に問題である。
の既存療法は不十分である。治療は自己免疫疾患の原因よりもその症状の緩和に
向けられている。自己免疫疾患の治療に使用されている大半の薬剤（例えばステ
ロイド及び非ステロイド系抗炎症化合物）は非特異的であり、有意毒性副作用が
ある。自己免疫疾患は薬剤の長期投与を必要とする慢性状態であるため、この点
は特に問題である。
【０００６】 抗原特異的な非毒性免疫抑制療法は非特異的免疫抑制に代わる非常に魅力的な
療法である。この抗原特異的療法は標的自己抗原又は自己抗原から誘導した合成
Ｔ細胞反応性ペプチドで患者を治療する。これらの合成ペプチドは自己抗原のＴ
細胞エピトープに対応し、ペプチド自体と自己抗原の両者に対して特異的なＴ細
胞寛容を誘導するために使用することができる。免疫系の活性化に関与する抗原
と同一抗原で免疫系を脱感作するのは奇異に見えるが、標的（自己）抗原を制御
下に投与すると免疫系の脱感作に非常に有効である。抗原又はエピトープを与え
るか又は吸入した動物に同一抗原又はエピトープを全身経路で導入すると、前記
抗原又はエピトープに対する全身免疫応答を発現しにくいという現象が長期的に
観察され、免疫系の脱感作又は免疫寛容が実証された。
療法である。この抗原特異的療法は標的自己抗原又は自己抗原から誘導した合成
Ｔ細胞反応性ペプチドで患者を治療する。これらの合成ペプチドは自己抗原のＴ
細胞エピトープに対応し、ペプチド自体と自己抗原の両者に対して特異的なＴ細
胞寛容を誘導するために使用することができる。免疫系の活性化に関与する抗原
と同一抗原で免疫系を脱感作するのは奇異に見えるが、標的（自己）抗原を制御
下に投与すると免疫系の脱感作に非常に有効である。抗原又はエピトープを与え
るか又は吸入した動物に同一抗原又はエピトープを全身経路で導入すると、前記
抗原又はエピトープに対する全身免疫応答を発現しにくいという現象が長期的に
観察され、免疫系の脱感作又は免疫寛容が実証された。
【０００７】 ヒト軟骨糖タンパク質３９（ＨＣｇｐ−３９）は既にＲＡで標的自己抗原とし
て同定されている（Ｖｅｒｈｅｉｊｄｅｎ ＧＦＭら，１９９７，Ａｒｔｈｒｉ
ｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，４０，１１１５）。自己抗原性はＲＡ患者からの末梢血
Ｔ細胞によるＤＲ４（ＤＲＢ１＊０４０１）結合ペプチドの選択的認識により実
証された。
て同定されている（Ｖｅｒｈｅｉｊｄｅｎ ＧＦＭら，１９９７，Ａｒｔｈｒｉ
ｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．，４０，１１１５）。自己抗原性はＲＡ患者からの末梢血
Ｔ細胞によるＤＲ４（ＤＲＢ１＊０４０１）結合ペプチドの選択的認識により実
証された。
【０００８】 Ｂａｌｂ／ｃマウスでＨＣｇｐ−３９を誘発タンパク質として使用し、自己免
疫−関節炎の慢性再発モデルが開発された。不完全フロイントアジュバント（Ｉ
ＦＡ）に懸濁した低用量（μｇ範囲）のＨＣｇｐ−３９を１回全身注射して感作
後、まず前脚に慢性関節炎が発現した。後期段階で広い活性ピークで増減する第
２期慢性関節炎が後脚に生じ、少なくとも２５０日間持続した。後脚の組織学的
分析の結果、主に踝関節の周囲に顕著な浸潤物が認められた。サフラニンＯ染色
の結果、軟骨変質を示すプロテオグリカン欠乏が判明した。このモデルは新規Ｒ
Ａ特異療法としてのＨＣｇｐ−３９による寛容誘導の研究に有用であることが判
明した。このモデルで誘発よりも数日前にμｇ量のＨＣｇｐ−３９を鼻腔投与す
ると、ＨＣｇｐ−３９により誘発される関節炎の発症を予防することができた。
ＨＣｇｐ−３９に対するＤＴＨ応答は完全に阻止されたので、この背後のメカニ
ズムはＴ細胞に媒介されると考えられる。第１期関節炎の発症後の寛容誘導によ
りＨＣｇｐ−３９の治療的使用が試験された。データによると、ＨＣｇｐ−３９
の鼻腔吸入は後脚の広い関節炎活性ピークを防止することが判明した。こうして
、ＨＣｇｐ−３９は抗原特異的免疫寛容を誘導するために非常に有効に使用でき
ることが立証された（ＷＯ９６／１３５１７）。
疫−関節炎の慢性再発モデルが開発された。不完全フロイントアジュバント（Ｉ
ＦＡ）に懸濁した低用量（μｇ範囲）のＨＣｇｐ−３９を１回全身注射して感作
後、まず前脚に慢性関節炎が発現した。後期段階で広い活性ピークで増減する第
２期慢性関節炎が後脚に生じ、少なくとも２５０日間持続した。後脚の組織学的
分析の結果、主に踝関節の周囲に顕著な浸潤物が認められた。サフラニンＯ染色
の結果、軟骨変質を示すプロテオグリカン欠乏が判明した。このモデルは新規Ｒ
Ａ特異療法としてのＨＣｇｐ−３９による寛容誘導の研究に有用であることが判
明した。このモデルで誘発よりも数日前にμｇ量のＨＣｇｐ−３９を鼻腔投与す
ると、ＨＣｇｐ−３９により誘発される関節炎の発症を予防することができた。
ＨＣｇｐ−３９に対するＤＴＨ応答は完全に阻止されたので、この背後のメカニ
ズムはＴ細胞に媒介されると考えられる。第１期関節炎の発症後の寛容誘導によ
りＨＣｇｐ−３９の治療的使用が試験された。データによると、ＨＣｇｐ−３９
の鼻腔吸入は後脚の広い関節炎活性ピークを防止することが判明した。こうして
、ＨＣｇｐ−３９は抗原特異的免疫寛容を誘導するために非常に有効に使用でき
ることが立証された（ＷＯ９６／１３５１７）。
【０００９】 （自己）免疫疾患（例えばＲＡ）における主要な問題は免疫系が有害に反応し
ている厳密な標的又は抗原が一般に不明であるため、疾患実体を抗原特異的に調
節できないという点にある。
ている厳密な標的又は抗原が一般に不明であるため、疾患実体を抗原特異的に調
節できないという点にある。
【００１０】 しかし、標的として（自己）免疫応答に関与する抗原が不明でも抗原による非
毒性形態の免疫調節療法を利用できるならば非常に有利であると思われる。この
ような抗原による療法は炎症又は組織損傷の結果として自己免疫プロセス中に放
出又は生産されると予想される抗原を使用して抗原特異的モジュレーター細胞を
生成する。自己免疫疾患の場合には、その後、局所的に生産された自己抗原がこ
のような抗原により誘導されるモジュレーター細胞を活性化又は再活性化する。
毒性形態の免疫調節療法を利用できるならば非常に有利であると思われる。この
ような抗原による療法は炎症又は組織損傷の結果として自己免疫プロセス中に放
出又は生産されると予想される抗原を使用して抗原特異的モジュレーター細胞を
生成する。自己免疫疾患の場合には、その後、局所的に生産された自己抗原がこ
のような抗原により誘導されるモジュレーター細胞を活性化又は再活性化する。
【００１１】 ＨＣｇｐ−３９はＲＡ、変形性関節炎（ＯＡ）、アルコール誘発肝線維症、炎
症性腸疾患（ＩＢＤ）及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）等の多数の炎症性（自己
）免疫状態で発現されることが分かっている。一般に、ＨＣｇｐ−３９は単球か
らマクロファージへの成熟が生じる免疫状態で発現されると予想されており（Ｋ
ｒａｕｓｅ ＳＷら，１９９６，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，６０，５４０
）、従って、ＨＣｇｐ−３９は潜在的に全炎症性自己免疫疾患に存在すると思わ
れる。しかし、ＨＣｇｐ−３９の発現は疾患の直接原因ではなく、局在炎症の結
果であると思われる。
症性腸疾患（ＩＢＤ）及び全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）等の多数の炎症性（自己
）免疫状態で発現されることが分かっている。一般に、ＨＣｇｐ−３９は単球か
らマクロファージへの成熟が生じる免疫状態で発現されると予想されており（Ｋ
ｒａｕｓｅ ＳＷら，１９９６，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，６０，５４０
）、従って、ＨＣｇｐ−３９は潜在的に全炎症性自己免疫疾患に存在すると思わ
れる。しかし、ＨＣｇｐ−３９の発現は疾患の直接原因ではなく、局在炎症の結
果であると思われる。
【００１２】 ＨＣｇｐ−３９反応性モジュレーター細胞の誘導は望ましくない免疫活性の結
果としてＨＣｇｐ−３９が発現される状態で有益であることが今般判明した。従
って、ＨＣｇｐ−３９の粘膜投与は（自己）免疫状態一般に有益であり、炎症状
態の開始に関与する（自己）抗原が不明でも使用することができる。
果としてＨＣｇｐ−３９が発現される状態で有益であることが今般判明した。従
って、ＨＣｇｐ−３９の粘膜投与は（自己）免疫状態一般に有益であり、炎症状
態の開始に関与する（自己）抗原が不明でも使用することができる。
【００１３】 本発明によると、ＨＣｇｐ−３９は標的として（自己）免疫応答に関与する抗
原に関係なく疾患活性を有効に調節できることが意外にも判明した。即ち、例え
ば単球からマクロファージへの成熟のプロセス中に生産される結果として炎症部
位又はこのような部位に通じるリンパ節にＨＣｇｐ−３９が存在するだけでＨＣ
ｇｐ−３９の使用により誘導されるモジュレーターＴ細胞を活性化でき、従って
、疾患活性のダウンモジュレーションを実現できることが判明した。
原に関係なく疾患活性を有効に調節できることが意外にも判明した。即ち、例え
ば単球からマクロファージへの成熟のプロセス中に生産される結果として炎症部
位又はこのような部位に通じるリンパ節にＨＣｇｐ−３９が存在するだけでＨＣ
ｇｐ−３９の使用により誘導されるモジュレーターＴ細胞を活性化でき、従って
、疾患活性のダウンモジュレーションを実現できることが判明した。
【００１４】 疾患誘発前−７、−５及び−２日にＩＩ型コラーゲン（ＣＩＩ）でＬｅｗｉｓ
ラットを前処置するとアジュバント関節炎モデル（ＡＡモデル）で関節炎重篤度
が抑制されることはＺｈａｎｇ ＪＺら（１９９０，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４
５，２４８９）により立証されている。少量のＣＩＩを事前に与えたラットでは
関節腫脹の顕著な抑制が生じた。この濃度のＣＩＩは自己免疫疾患の抗原免疫療
法で一般に見られるような処置プロトコール（関節炎誘発後１７日に開始して週
３回ラットに投与）では効力が非常に限られていた。
ラットを前処置するとアジュバント関節炎モデル（ＡＡモデル）で関節炎重篤度
が抑制されることはＺｈａｎｇ ＪＺら（１９９０，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４
５，２４８９）により立証されている。少量のＣＩＩを事前に与えたラットでは
関節腫脹の顕著な抑制が生じた。この濃度のＣＩＩは自己免疫疾患の抗原免疫療
法で一般に見られるような処置プロトコール（関節炎誘発後１７日に開始して週
３回ラットに投与）では効力が非常に限られていた。
【００１５】 ＣＩＩで認められる効果とは異なり、ＨＣｇｐ−３９は疾患の誘発を予防する
ように設計したスキーム（−１５、−１０及び−５日に投与）で試験すると、コ
ラーゲンにより誘発した関節炎をダウンモジュレートしない。即ち、この状況で
はＨＣｇｐ−３９は前処置プロトコールを使用する場合には関節炎活性のダウン
モジュレーションに有効でない。しかし、驚くべきことにＨＣｇｐ−３９を関節
炎誘発後２０、２５及び３０日に投与すると、ＣＩＩにより誘発した自己免疫状
態の治療に極めて有効である。従って、患者が進行中の自己免疫疾患であると医
師に診断される臨床状況に高度に関連する治療投与スケジュールでＨＣｇｐ−３
９を投与すると、関節炎活性は強く抑制された。ＨＣｇｐ−３９の投与の結果と
してのこの関節炎活性の抑制は疾患の誘発に使用した抗原であるＩＩ型コラーゲ
ンで認められる効果よりも著しく強力であった。
ように設計したスキーム（−１５、−１０及び−５日に投与）で試験すると、コ
ラーゲンにより誘発した関節炎をダウンモジュレートしない。即ち、この状況で
はＨＣｇｐ−３９は前処置プロトコールを使用する場合には関節炎活性のダウン
モジュレーションに有効でない。しかし、驚くべきことにＨＣｇｐ−３９を関節
炎誘発後２０、２５及び３０日に投与すると、ＣＩＩにより誘発した自己免疫状
態の治療に極めて有効である。従って、患者が進行中の自己免疫疾患であると医
師に診断される臨床状況に高度に関連する治療投与スケジュールでＨＣｇｐ−３
９を投与すると、関節炎活性は強く抑制された。ＨＣｇｐ−３９の投与の結果と
してのこの関節炎活性の抑制は疾患の誘発に使用した抗原であるＩＩ型コラーゲ
ンで認められる効果よりも著しく強力であった。
【００１６】 本発明によると、ＨＣｇｐ−３９以外の抗原に対して反応性であり且つＨＣｇ
ｐ−３９と同一組織に存在するリンパ球を調節するためにＨＣｇｐ−３９を使用
することができる。抗原特異的Ｔ細胞寛容の誘導により、自己免疫疾患をバイス
タンダー抑制により治療することができる。より一般には、調節する細胞は造血
細胞である。一般に、寛容原として機能するためには、タンパク質は少なくとも
２つの条件を満足しなければならず、即ち免疫調節能をもつと共に、局所的又は
局所部位に通じるリンパ節で発現される必要がある。
ｐ−３９と同一組織に存在するリンパ球を調節するためにＨＣｇｐ−３９を使用
することができる。抗原特異的Ｔ細胞寛容の誘導により、自己免疫疾患をバイス
タンダー抑制により治療することができる。より一般には、調節する細胞は造血
細胞である。一般に、寛容原として機能するためには、タンパク質は少なくとも
２つの条件を満足しなければならず、即ち免疫調節能をもつと共に、局所的又は
局所部位に通じるリンパ節で発現される必要がある。
【００１７】 従って、本発明はＨＣｇｐ−３９を含む医薬製剤の投与により、標的として免
疫応答に関与する抗原に関係なく炎症性自己免疫疾患患者を治療するための方法
を提供する。このような患者としてはグレーブス病、原発性糸球体腎炎、変形性
関節炎、若年性関節炎、シェーグレン症候群、重症筋無力症、慢性関節リウマチ
、アジソン病、原発性胆嚢硬化症、ブドウ膜炎、全身性紅斑性狼瘡、炎症性腸疾
患、多発性硬化症又は糖尿病等の患者が挙げられる。従って、本発明のポリペプ
チドはこれらの疾患の患者に寛容を誘導するための医薬の製造に使用することが
できる。慢性関節リウマチ患者の治療が最も好ましい。
疫応答に関与する抗原に関係なく炎症性自己免疫疾患患者を治療するための方法
を提供する。このような患者としてはグレーブス病、原発性糸球体腎炎、変形性
関節炎、若年性関節炎、シェーグレン症候群、重症筋無力症、慢性関節リウマチ
、アジソン病、原発性胆嚢硬化症、ブドウ膜炎、全身性紅斑性狼瘡、炎症性腸疾
患、多発性硬化症又は糖尿病等の患者が挙げられる。従って、本発明のポリペプ
チドはこれらの疾患の患者に寛容を誘導するための医薬の製造に使用することが
できる。慢性関節リウマチ患者の治療が最も好ましい。
【００１８】 こうして、リンパ球の反応性を調節するための医薬製剤の製造にＨＣｇｐ−３
９又はそのフラグメントを使用することができる。これらのリンパ球はＨＣｇｐ
−３９以外の抗原に対して反応性のものとすることができる。他方、これらのリ
ンパ球はＨＣｇｐ−３９と同一組織に存在する。その結果、炎症性疾患が予防さ
れる。
９又はそのフラグメントを使用することができる。これらのリンパ球はＨＣｇｐ
−３９以外の抗原に対して反応性のものとすることができる。他方、これらのリ
ンパ球はＨＣｇｐ−３９と同一組織に存在する。その結果、炎症性疾患が予防さ
れる。
【００１９】 ＨＣｇｐ−３９による自己免疫疾患の治療は、同じ場所に局在する無関係の抗
原にバイスタンダー抑制が誘導されるという事実を利用するものである。調節細
胞は免疫応答をダウンモジュレートすることが可能なサイトカイン等の多面発現
性タンパク質を抗原特異的に分泌する。
原にバイスタンダー抑制が誘導されるという事実を利用するものである。調節細
胞は免疫応答をダウンモジュレートすることが可能なサイトカイン等の多面発現
性タンパク質を抗原特異的に分泌する。
【００２０】 場合により、ＤＭＡＲＤ（疾患調節抗リウマチ薬、例えばスルファサラジン、
抗マラリア剤（クロロキン、ヒドロキシクロロキン）、注射用又は経口金、メト
トレキセート、Ｄ−ペニシラミン、アザチオプリン、シクロスポリン、ミコフェ
ノレート）、ＮＳＡＩＤ（非ステロイド系抗炎症薬）、コルチコステロイド又は
炎症性疾患患者で疾患の経過に作用することが知られている他の薬剤等の他の医
薬の投与と治療を組み合わせてもよい。
抗マラリア剤（クロロキン、ヒドロキシクロロキン）、注射用又は経口金、メト
トレキセート、Ｄ−ペニシラミン、アザチオプリン、シクロスポリン、ミコフェ
ノレート）、ＮＳＡＩＤ（非ステロイド系抗炎症薬）、コルチコステロイド又は
炎症性疾患患者で疾患の経過に作用することが知られている他の薬剤等の他の医
薬の投与と治療を組み合わせてもよい。
【００２１】 当然のことながら、関連抗原部分をもつ寛容原のフラグメントも免疫応答のダ
ウンレギュレーションに十分に利用できる。このようなフラグメントは実施例１
及び２に記載すると同一アッセイにより同定することができる。
ウンレギュレーションに十分に利用できる。このようなフラグメントは実施例１
及び２に記載すると同一アッセイにより同定することができる。
【００２２】 「フラグメント」なる用語は本発明の範囲に該当し且つ完全抗原に機能的に等
価の共通起源、構造及び作用メカニズムの要素をもつ上記ポリペプチドの一部を
構成する任意アミノ酸配列を意味する。
価の共通起源、構造及び作用メカニズムの要素をもつ上記ポリペプチドの一部を
構成する任意アミノ酸配列を意味する。
【００２３】 本明細書で使用する「機能的に等価」なる用語は、ＨＣｇｐ−３９の配列又は
エピトープフラグメントの機能特性即ち免疫特性又は寛容原特性を維持しながら
ＨＣｇｐ−３９又はそのフラグメントの変異をもつ化合物を意味する。
エピトープフラグメントの機能特性即ち免疫特性又は寛容原特性を維持しながら
ＨＣｇｐ−３９又はそのフラグメントの変異をもつ化合物を意味する。
【００２４】 配列に存在し得る変異は、完全配列のアミノ酸差異でもよいし、前記配列にお
けるアミノ酸の欠失、置換、挿入、逆位又は付加でもよい。生物及び免疫活性を
実質的に変えないと予想されるアミノ酸置換は従来記載されている。関連アミノ
酸間のアミノ酸置換又は進化の過程で頻繁に生じている置換は特にＳｅｒ／Ａｌ
ａ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｉｌｅ／Ｖａｌである
（Ｄａｙｈｏｆ，Ｍ．Ｄ．，Ａｔｌａｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎ
ｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎ
ｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９７８，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．
３参照）。この情報に基づき、ＬｉｐｍａｎとＰｅａｒｓｏｎは迅速且つ高感度
でタンパク質を比較し（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２７，１４３５−１４４１，１９８
５）、相同ポリペプチド間の機能的類似性を決定するための方法を開発した。
けるアミノ酸の欠失、置換、挿入、逆位又は付加でもよい。生物及び免疫活性を
実質的に変えないと予想されるアミノ酸置換は従来記載されている。関連アミノ
酸間のアミノ酸置換又は進化の過程で頻繁に生じている置換は特にＳｅｒ／Ａｌ
ａ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｉｌｅ／Ｖａｌである
（Ｄａｙｈｏｆ，Ｍ．Ｄ．，Ａｔｌａｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎ
ｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎ
ｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９７８，ｖｏｌ．５，ｓｕｐｐｌ．
３参照）。この情報に基づき、ＬｉｐｍａｎとＰｅａｒｓｏｎは迅速且つ高感度
でタンパク質を比較し（Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２７，１４３５−１４４１，１９８
５）、相同ポリペプチド間の機能的類似性を決定するための方法を開発した。
【００２５】 本発明のペプチドの製造は公知有機化学ペプチド合成法の１種により実施され
る。ＨＣｇｐ−３９とペプチドは組換えＤＮＡ技術により製造することもできる
。この目的では、ＨＣｇｐ−３９又は本発明のペプチドもしくは前記ペプチドの
多量体をコードする核酸配列を発現ベクターに挿入する。利用可能な発現ベクタ
ーは特に複製と発現に必要な制御領域を含むプラスミド、コスミド、ウイルス及
びＹＡＣ（酵母人工染色体）である。発現ベクターは宿主細胞で発現させること
ができる。利用可能な宿主細胞は例えば細菌、酵母細胞及び哺乳動物細胞である
。このような技術は当技術分野で周知である（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，１９８９）。
る。ＨＣｇｐ−３９とペプチドは組換えＤＮＡ技術により製造することもできる
。この目的では、ＨＣｇｐ−３９又は本発明のペプチドもしくは前記ペプチドの
多量体をコードする核酸配列を発現ベクターに挿入する。利用可能な発現ベクタ
ーは特に複製と発現に必要な制御領域を含むプラスミド、コスミド、ウイルス及
びＹＡＣ（酵母人工染色体）である。発現ベクターは宿主細胞で発現させること
ができる。利用可能な宿主細胞は例えば細菌、酵母細胞及び哺乳動物細胞である
。このような技術は当技術分野で周知である（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，１９８９）。
【００２６】 ペプチドはエキソペプチダーゼに触媒される加水分解を減らすＣ及び／又はＮ
末端修飾により安定化することができる。このような修飾としては、Ｃ末端アシ
ル化（例えばアセチル化＝Ａｃ−ペプチド）、Ｎ末端アミド導入（例えばペプチ
ド−ＮＨ２）、アシル化とアミド導入の併用（例えばＡｃ−ペプチド−ＮＨ２）
及びＬ−アミノ酸に代わるＤ−アミノ酸の導入が挙げられる（Ｐｏｗｅｌｌら，
Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８１：７３１−７３５，１９９２）。
末端修飾により安定化することができる。このような修飾としては、Ｃ末端アシ
ル化（例えばアセチル化＝Ａｃ−ペプチド）、Ｎ末端アミド導入（例えばペプチ
ド−ＮＨ２）、アシル化とアミド導入の併用（例えばＡｃ−ペプチド−ＮＨ２）
及びＬ−アミノ酸に代わるＤ−アミノ酸の導入が挙げられる（Ｐｏｗｅｌｌら，
Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８１：７３１−７３５，１９９２）。
【００２７】 エンドペプチダーゼによる加水分解を防止する修飾も可能である。これらの修
飾の例はＬ−アミノ酸に代わるＤ−アミノ酸の導入、修飾アミノ酸の導入、ペプ
チド内の環化、修飾ペプチド結合（例えば還元ペプチド結合Ψ（ＣＨ２ＮＨ））
及び例えばペプトイド（Ｎ−アルキル化グリシン誘導体）の導入である（Ａｄａ
ｎｇら，Ｒｅｃｌ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．Ｐａｙｓ−Ｂａｓ，１１３：６３−７
８，１９９４及びＳｉｍｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８９：９３６７−９３７１，１９９２）。
飾の例はＬ−アミノ酸に代わるＤ−アミノ酸の導入、修飾アミノ酸の導入、ペプ
チド内の環化、修飾ペプチド結合（例えば還元ペプチド結合Ψ（ＣＨ２ＮＨ））
及び例えばペプトイド（Ｎ−アルキル化グリシン誘導体）の導入である（Ａｄａ
ｎｇら，Ｒｅｃｌ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．Ｐａｙｓ−Ｂａｓ，１１３：６３−７
８，１９９４及びＳｉｍｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８９：９３６７−９３７１，１９９２）。
【００２８】 ＨＣｇｐ−３９及び／又はＨＣｇｐ−３９のサブ配列を含むペプチドを制御下
に投与すると、免疫系の調節に有効であり得る。本発明によると、組織が自己応
答Ｔ細胞の攻撃下にある患者をＨＣｇｐ−３９又は本発明の１種以上のペプチド
と許容可能な医薬キャリヤーを含む医薬組成物で治療し、炎症性応答を減らすよ
うに例えばバイスタンダー抑制を行うＴ細胞をこれらの患者で生成することがで
きる。
に投与すると、免疫系の調節に有効であり得る。本発明によると、組織が自己応
答Ｔ細胞の攻撃下にある患者をＨＣｇｐ−３９又は本発明の１種以上のペプチド
と許容可能な医薬キャリヤーを含む医薬組成物で治療し、炎症性応答を減らすよ
うに例えばバイスタンダー抑制を行うＴ細胞をこれらの患者で生成することがで
きる。
【００２９】 本発明の医薬組成物で使用するのに非常に適したペプチドはＷＯ９６／１３５
１７の配列番号１（ＦＧＲＳＦＴＬＡＳ）、配列番号２（ＦＴＬＡＳＳＥＴＧ）
、配列番号３（ＹＤＤＱＥＳＶＫＳ）、配列番号４（ＦＳＫＩＡＳＮＴＱ）、配
列番号５（ＰＴＦＧＲＳＦＴＬＡＳＳＥ）、配列番号６（ＲＳＦＴＬＡＳＳＥＴ
ＧＶＧ）、配列番号７（ＶＧＹＤＤＱＥＳＶＫＳＫＶ）及び配列番号８（ＳＱＲ
ＦＳＫＩＡＳＮＴＱＳＲ）に示すアミノ酸配列を含むペプチドである。
１７の配列番号１（ＦＧＲＳＦＴＬＡＳ）、配列番号２（ＦＴＬＡＳＳＥＴＧ）
、配列番号３（ＹＤＤＱＥＳＶＫＳ）、配列番号４（ＦＳＫＩＡＳＮＴＱ）、配
列番号５（ＰＴＦＧＲＳＦＴＬＡＳＳＥ）、配列番号６（ＲＳＦＴＬＡＳＳＥＴ
ＧＶＧ）、配列番号７（ＶＧＹＤＤＱＥＳＶＫＳＫＶ）及び配列番号８（ＳＱＲ
ＦＳＫＩＡＳＮＴＱＳＲ）に示すアミノ酸配列を含むペプチドである。
【００３０】 本発明により利用可能なペプチドは全長５５アミノ酸までのフランキング配列
をもつ配列番号１〜８の配列を含むペプチドである。ペプチドは２５アミノ酸長
がより好ましい。ペプチドのアミノ酸配列は配列番号１〜８の配列に一致してい
ることが更に好ましい。
をもつ配列番号１〜８の配列を含むペプチドである。ペプチドは２５アミノ酸長
がより好ましい。ペプチドのアミノ酸配列は配列番号１〜８の配列に一致してい
ることが更に好ましい。
【００３１】 ＨＣｇｐ−３９に関連するタンパク質を使用して自己免疫応答を生じることも
できる。従って、これらのタンパク質も後期寛容化に使用できると予想される。
本発明の医薬組成物でＨＣｇｐ−３９に代用するのに適したタンパク質は例えば
ブタヘパリン結合３８ｋＤａタンパク質、ウシ３９ｋＤａ乳漿タンパク質、ヒト
ＹＫＬ−３９タンパク質、マウス乳腺退行３９ｋＤａタンパク質（ｂｒｐ３９）
、ヒト卵管特異的糖タンパク質、マウス卵管特異的糖タンパク質、ハムスター卵
管特異的糖タンパク質、ウシ卵管特異的糖タンパク質、ヒトキトトリオシダーゼ
前駆体タンパク質及びマウス分泌タンパク質ＹＭ−１前駆体である。
できる。従って、これらのタンパク質も後期寛容化に使用できると予想される。
本発明の医薬組成物でＨＣｇｐ−３９に代用するのに適したタンパク質は例えば
ブタヘパリン結合３８ｋＤａタンパク質、ウシ３９ｋＤａ乳漿タンパク質、ヒト
ＹＫＬ−３９タンパク質、マウス乳腺退行３９ｋＤａタンパク質（ｂｒｐ３９）
、ヒト卵管特異的糖タンパク質、マウス卵管特異的糖タンパク質、ハムスター卵
管特異的糖タンパク質、ウシ卵管特異的糖タンパク質、ヒトキトトリオシダーゼ
前駆体タンパク質及びマウス分泌タンパク質ＹＭ−１前駆体である。
【００３２】 ＨＣｇｐ−３９又は本発明のペプチドもしくはタンパク質の１種以上をコード
するＤＮＡを含むＤＮＡ（発現）ベクターも本発明の医薬組成物で使用するのに
非常に適している。送達後、ＤＮＡ（発現）ベクターはＨＣｇｐ−３９タンパク
質又はペプチドを含む医薬組成物の直接投与により達成されるレベルと同等レベ
ルで本発明の組換えＨＣｇｐ−３９タンパク質又はそのフラグメントを発現によ
り提供することができる。
するＤＮＡを含むＤＮＡ（発現）ベクターも本発明の医薬組成物で使用するのに
非常に適している。送達後、ＤＮＡ（発現）ベクターはＨＣｇｐ−３９タンパク
質又はペプチドを含む医薬組成物の直接投与により達成されるレベルと同等レベ
ルで本発明の組換えＨＣｇｐ−３９タンパク質又はそのフラグメントを発現によ
り提供することができる。
【００３３】 高用量又は低用量の本発明の寛容原又はペプチドを投与することにより寛容を
達成できる。寛容原又はペプチドの量は投与経路、投与時間、患者の年齢並びに
一般健康状態及び食事により異なる。
達成できる。寛容原又はペプチドの量は投与経路、投与時間、患者の年齢並びに
一般健康状態及び食事により異なる。
【００３４】 一般に、体重１ｋｇ当たりペプチド又はタンパク質０．０１〜１００００μｇ
、好ましくは０．０５〜２０００μｇ、より好ましくはペプチド又はタンパク質
０．１〜１００μｇの用量を使用することができる。
、好ましくは０．０５〜２０００μｇ、より好ましくはペプチド又はタンパク質
０．１〜１００μｇの用量を使用することができる。
【００３５】 許容可能な医薬キャリヤーは当業者に周知であり、例えば滅菌生理食塩水、ラ
クトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストリン、寒天、ペ
クチン、落花生油、オリーブ油、ゴマ油及び水が挙げられる。他のキャリヤーと
しては例えば所望によりリポソームに封入したＭＨＣクラスＩＩ分子が挙げられ
る。
クトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストリン、寒天、ペ
クチン、落花生油、オリーブ油、ゴマ油及び水が挙げられる。他のキャリヤーと
しては例えば所望によりリポソームに封入したＭＨＣクラスＩＩ分子が挙げられ
る。
【００３６】 更に、本発明の医薬組成物は１種以上のアジュバントを含むことができる。利
用可能なアジュバントとしては特に水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、
アンフィジェン、トコフェノール、モノホスホリル脂質Ａ、ムラミルジペプチド
及びサポニン（例えばＱｕｉｌｌ Ａ）が挙げられる。アジュバントの量はアジ
ュバント自体の種類によって異なる。
用可能なアジュバントとしては特に水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、
アンフィジェン、トコフェノール、モノホスホリル脂質Ａ、ムラミルジペプチド
及びサポニン（例えばＱｕｉｌｌ Ａ）が挙げられる。アジュバントの量はアジ
ュバント自体の種類によって異なる。
【００３７】 更に、本発明の医薬組成物は例えば炭水化物（例えばソルビトール、マンニト
ール、澱粉、スクロース、デキストリン及びグルコース）、タンパク質（例えば
アルブミン又はカゼイン）、及び緩衝液（例えばアルカリリン酸塩）等の１種以
上の安定剤を含むことができる。
ール、澱粉、スクロース、デキストリン及びグルコース）、タンパク質（例えば
アルブミン又はカゼイン）、及び緩衝液（例えばアルカリリン酸塩）等の１種以
上の安定剤を含むことができる。
【００３８】 利用可能な投与経路は筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射又は腹膜組織内注射
、経口及び鼻腔内投与である。経口投与と鼻腔内投与が好ましい投与経路である
。特に、粘膜、例えば鼻粘膜を通して抗原を投与することにより抗原に特異的な
モジュレーター細胞を生成することができる。抗原の粘膜投与はこのような抗原
に対する免疫寛容を誘導することが分かっている。
、経口及び鼻腔内投与である。経口投与と鼻腔内投与が好ましい投与経路である
。特に、粘膜、例えば鼻粘膜を通して抗原を投与することにより抗原に特異的な
モジュレーター細胞を生成することができる。抗原の粘膜投与はこのような抗原
に対する免疫寛容を誘導することが分かっている。
【００３９】 本発明は非関連抗原により誘発される自己免疫疾患をダウンモジュレートする
ためにＨＣｇｐ−３９を使用できることを立証し、ＨＣｇｐ−３９により誘導さ
れるモジュレーター細胞が自己免疫プロセスに作用するという概念を裏付けるも
のである。
ためにＨＣｇｐ−３９を使用できることを立証し、ＨＣｇｐ−３９により誘導さ
れるモジュレーター細胞が自己免疫プロセスに作用するという概念を裏付けるも
のである。
【００４０】 以下、実施例により本発明を説明するが、これによって発明の範囲を制限する
ものではない。
ものではない。
【００４１】 図面の簡単な説明 図１はＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び
進行に及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示す。 図１Ａはマウス群における臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。 図１Ｂは個体マウスにおける臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。 図１Ｃは変質抑制の組織分析結果を浸潤物スコアにより示す。 図１Ｄは変質抑制の組織分析結果を膝関節の写真により示す。 図１Ｅは損傷抑制の放射線分析結果をＸ線撮像スコアにより示す。 図１Ｆは損傷抑制の放射線分析結果を踝関節の写真により示す。
進行に及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示す。 図１Ａはマウス群における臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。 図１Ｂは個体マウスにおける臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。 図１Ｃは変質抑制の組織分析結果を浸潤物スコアにより示す。 図１Ｄは変質抑制の組織分析結果を膝関節の写真により示す。 図１Ｅは損傷抑制の放射線分析結果をＸ線撮像スコアにより示す。 図１Ｆは損傷抑制の放射線分析結果を踝関節の写真により示す。
【００４２】 図２はＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び
進行に及ぼす３、１０又は３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示す。マウ
ス群における臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
進行に及ぼす３、１０又は３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示す。マウ
ス群における臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
【００４３】 実施例 実施例１：コラーゲンにより誘発した関節炎の３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投
与による緩和 方法 試薬 ウシＩＩ型コラーゲンは１〜２歳の子牛から得た膝関節の関節軟骨から単離し
た（Ｍｉｌｌｅｒ ＥＪ，Ｒｈｏｄｅｓ ＲＫ．Ｉｎ： Ｃｏｌｏｗｉｃｋ Ｓ
Ｐ，Ｋａｐｌａｎ ＮＯ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖ
ｏｌ ８２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８２：
３３−６５）。コラーゲンは０．０５Ｍ ＨＡｃ（５ｍｇ／ｍｌ）に溶かし、−
７０℃で保存した。ＨＣｇｐ−３９はトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の上清か
ら単離した。ＨＣｇｐ−３９はヘパリンアフィニティークロマトグラフィー、次
いでｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５クロマトグラフィーにより培養上清から精製した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度を確認した。対照タンパク質オボアルブミンはＳｉ
ｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡから入手した。
与による緩和 方法 試薬 ウシＩＩ型コラーゲンは１〜２歳の子牛から得た膝関節の関節軟骨から単離し
た（Ｍｉｌｌｅｒ ＥＪ，Ｒｈｏｄｅｓ ＲＫ．Ｉｎ： Ｃｏｌｏｗｉｃｋ Ｓ
Ｐ，Ｋａｐｌａｎ ＮＯ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖ
ｏｌ ８２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８２：
３３−６５）。コラーゲンは０．０５Ｍ ＨＡｃ（５ｍｇ／ｍｌ）に溶かし、−
７０℃で保存した。ＨＣｇｐ−３９はトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の上清か
ら単離した。ＨＣｇｐ−３９はヘパリンアフィニティークロマトグラフィー、次
いでｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５クロマトグラフィーにより培養上清から精製した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度を確認した。対照タンパク質オボアルブミンはＳｉ
ｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡから入手した。
【００４４】 関節炎の誘発及び緩和 Ｂｏｍｈｏｌｔｇａａｒｄから雄ＤＢＡ／１マウスを入手した。完全フロイン
トアジュバント（ＣＦＡ）に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇでマウス
を免疫した（０日）。生理食塩水に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇを
マウスに腹膜組織内ブースター注射した。２０、２５及び３０日にＨＣｇｐ−３
９（ｎ＝１１；３０μｇ／頭／用量）、ウシＩＩ型コラーゲン（ｎ＝１１；１０
０μｇ／頭／用量）、対照タンパク質（ｎ＝１０；オボアルブミン；１００μｇ
／頭／用量）又は緩衝液単独（ｎ＝１０）をマウスに鼻腔内投与した。ＰＴ４５
微量導管とハミルトン注射器を使用してエンフルラン麻酔下に鼻腔寛容誘導を実
施した。鼻腔経路投与を行わない対照群（ｎ＝１０）も実験に加えた。
トアジュバント（ＣＦＡ）に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇでマウス
を免疫した（０日）。生理食塩水に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇを
マウスに腹膜組織内ブースター注射した。２０、２５及び３０日にＨＣｇｐ−３
９（ｎ＝１１；３０μｇ／頭／用量）、ウシＩＩ型コラーゲン（ｎ＝１１；１０
０μｇ／頭／用量）、対照タンパク質（ｎ＝１０；オボアルブミン；１００μｇ
／頭／用量）又は緩衝液単独（ｎ＝１０）をマウスに鼻腔内投与した。ＰＴ４５
微量導管とハミルトン注射器を使用してエンフルラン麻酔下に鼻腔寛容誘導を実
施した。鼻腔経路投与を行わない対照群（ｎ＝１０）も実験に加えた。
【００４５】 関節炎の臨床経過 関節炎活性の進行を経時的（関節炎誘発後２３、２５、２７、２９、３１及び
３４日）に目視追跡し、疾患の重篤度を採点した（指及び／又は脚の発赤及び／
又は腫脹に基づく肉眼スコア）。後期時点では強直症もこの採点系に加えた。関
節炎の臨床重篤度は発赤及び／又は腫脹の外観に従って以下の０〜２点で各脚を
採点した。０点：変化なし、０．５点：有意変化、１．０点：中度変化、１．５
点：著変、２．０点：最大腫脹及び発赤と後期強直症を伴う重度関節炎。この採
点を更に細かくした（０．２５点刻みの採点系）。
３４日）に目視追跡し、疾患の重篤度を採点した（指及び／又は脚の発赤及び／
又は腫脹に基づく肉眼スコア）。後期時点では強直症もこの採点系に加えた。関
節炎の臨床重篤度は発赤及び／又は腫脹の外観に従って以下の０〜２点で各脚を
採点した。０点：変化なし、０．５点：有意変化、１．０点：中度変化、１．５
点：著変、２．０点：最大腫脹及び発赤と後期強直症を伴う重度関節炎。この採
点を更に細かくした（０．２５点刻みの採点系）。
【００４６】 組織病理分析 膝関節に組織病理異常が存在するか否かを調べた。関節全体を取り出して４％
ホルマリンに４日間固定した。５％ギ酸で脱灰後、試料をパラフィン包埋処理し
た。組織切片（７μｍ）をヘマトキシリンとエオシン（ＨＥ）で染色して炎症性
変化を検出するか、又はサフラニンＯで染色して軟骨損傷の徴候であるプロテオ
グリカン欠乏を検出した。組織病理変化を以下のパラメーターに従って採点した
。細胞浸潤は滑液腔及び滑液組織における炎症細胞の量に基づいて０〜３点で採
点した。プロテオグリカン欠乏はサフラニンＯ染色を使用して判定し、完全軟骨
染色から軟骨脱色又は関節軟骨の完全な損失までの０〜３点でプロテオグリカン
減少を採点した。ＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の特性パラメーターで
ある関節軟骨の進行性損失も軟骨破壊に基づいて採点した。この破壊は死軟骨細
胞（空の小腔）の出現から関節軟骨の完全な損失まで０〜３点で採点した。膝関
節の組織病理変化は膝蓋／大腿領域で関節の５個の半連続切片について採点した
。踝関節については踝骨領域を採点した。
ホルマリンに４日間固定した。５％ギ酸で脱灰後、試料をパラフィン包埋処理し
た。組織切片（７μｍ）をヘマトキシリンとエオシン（ＨＥ）で染色して炎症性
変化を検出するか、又はサフラニンＯで染色して軟骨損傷の徴候であるプロテオ
グリカン欠乏を検出した。組織病理変化を以下のパラメーターに従って採点した
。細胞浸潤は滑液腔及び滑液組織における炎症細胞の量に基づいて０〜３点で採
点した。プロテオグリカン欠乏はサフラニンＯ染色を使用して判定し、完全軟骨
染色から軟骨脱色又は関節軟骨の完全な損失までの０〜３点でプロテオグリカン
減少を採点した。ＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の特性パラメーターで
ある関節軟骨の進行性損失も軟骨破壊に基づいて採点した。この破壊は死軟骨細
胞（空の小腔）の出現から関節軟骨の完全な損失まで０〜３点で採点した。膝関
節の組織病理変化は膝蓋／大腿領域で関節の５個の半連続切片について採点した
。踝関節については踝骨領域を採点した。
【００４７】 放射線分析 実験の終わり（３４日）に各マウスの後脚を放射線写真撮影（Ｘ線撮像）した
。低倍率の立体顕微鏡を使用して放射線写真を採点した。以下の基準に従って各
脚を０〜５点で採点した。０点：変化なし、１点：微変、２点：中度変化、３点
：著変、４点：重度変化、５点：多数の動物で外観から明白な重度関節炎を示す
完全な破壊。
。低倍率の立体顕微鏡を使用して放射線写真を採点した。以下の基準に従って各
脚を０〜５点で採点した。０点：変化なし、１点：微変、２点：中度変化、３点
：著変、４点：重度変化、５点：多数の動物で外観から明白な重度関節炎を示す
完全な破壊。
【００４８】 結果 ＨＣｇｐ−３９の免疫調節活性：臨床効果 ＩＩ型コラーゲンで免疫したＤＢＡ／１マウスは予定及び予想通りにコラーゲ
ン誘発関節炎を発現した。疾患を誘発するために使用した抗原即ちＩＩ型コラー
ゲンで処置したマウスは処置の初期段階で軽症疾患活性に向かう傾向を示した。
ＨＣｇｐ−３９を投与したマウスはその臨床的疾患活性発現が強く抑制された（
図１Ａ）。関節炎の臨床重篤度の抑制は実験の２５日で最初に検出することがで
き、実験の終わりである３４日まで続いた。ＨＣｇｐ−３９を投与した１１頭の
動物のうちで中度又は重度の関節炎を発現したのは４頭のみであり、１１頭のう
ちの７頭は多少なりとも防御された（図１Ｂ）。オボアルブミン又は緩衝液を投
与したマウスは対照マウスに認められる臨床的関節炎と同等の臨床的関節炎を示
した（図１Ａ及び１Ｂ）。このように、以上の実験から明らかなように、ＨＣｇ
ｐ−３９投与は非関連抗原即ちＩＩ型コラーゲンの使用による関節炎の誘発を防
害する調節又は制御メカニズムを始動することができる。従って、ＨＣｇｐ−３
９の治療投与は誘発抗原が不明の（自己）免疫状態に有益であると結論すること
ができる。
ン誘発関節炎を発現した。疾患を誘発するために使用した抗原即ちＩＩ型コラー
ゲンで処置したマウスは処置の初期段階で軽症疾患活性に向かう傾向を示した。
ＨＣｇｐ−３９を投与したマウスはその臨床的疾患活性発現が強く抑制された（
図１Ａ）。関節炎の臨床重篤度の抑制は実験の２５日で最初に検出することがで
き、実験の終わりである３４日まで続いた。ＨＣｇｐ−３９を投与した１１頭の
動物のうちで中度又は重度の関節炎を発現したのは４頭のみであり、１１頭のう
ちの７頭は多少なりとも防御された（図１Ｂ）。オボアルブミン又は緩衝液を投
与したマウスは対照マウスに認められる臨床的関節炎と同等の臨床的関節炎を示
した（図１Ａ及び１Ｂ）。このように、以上の実験から明らかなように、ＨＣｇ
ｐ−３９投与は非関連抗原即ちＩＩ型コラーゲンの使用による関節炎の誘発を防
害する調節又は制御メカニズムを始動することができる。従って、ＨＣｇｐ−３
９の治療投与は誘発抗原が不明の（自己）免疫状態に有益であると結論すること
ができる。
【００４９】 組織及び放射線分析評価 膝関節の組織分析試験の結果、ＨＣｇｐ−３９を投与した動物は炎症活性が著
しく低減することが判明した（図１Ｃ及び１Ｄ）。ＨＣｇｐ−３９を投与した動
物はサフラニンＯ染色の低減により立証される通り、プロテオグリカン欠乏が著
しく抑制され、関節軟骨の損傷も抑制された（図１Ｃ及び１Ｄ）。放射線写真試
験の結果、ＨＣｇｐ−３９投与が有効であった動物には軟骨損傷と骨侵食の抑制
が判明した（図１Ｅ及び１Ｆ）。結論すると、ＨＣｇｐ−３９の治療投与は疾患
発現の臨床パターンを変えるだけでなく、組織及び放射線写真分析により検出可
能な変質の進行を防止し、関節破壊と機能不全をもたらす炎症及び侵食過程を抑
制する。このように、ＨＣｇｐ−３９投与は疾患の経過を実際に変えることがで
きる。
しく低減することが判明した（図１Ｃ及び１Ｄ）。ＨＣｇｐ−３９を投与した動
物はサフラニンＯ染色の低減により立証される通り、プロテオグリカン欠乏が著
しく抑制され、関節軟骨の損傷も抑制された（図１Ｃ及び１Ｄ）。放射線写真試
験の結果、ＨＣｇｐ−３９投与が有効であった動物には軟骨損傷と骨侵食の抑制
が判明した（図１Ｅ及び１Ｆ）。結論すると、ＨＣｇｐ−３９の治療投与は疾患
発現の臨床パターンを変えるだけでなく、組織及び放射線写真分析により検出可
能な変質の進行を防止し、関節破壊と機能不全をもたらす炎症及び侵食過程を抑
制する。このように、ＨＣｇｐ−３９投与は疾患の経過を実際に変えることがで
きる。
【００５０】 実施例２：コラーゲンにより誘発した関節炎の３、１０又は３０μｇＨＣｇｐ
−３９鼻腔投与による緩和 方法 試薬 ウシＩＩ型コラーゲンは１〜２歳の子牛から得た膝関節の関節軟骨から単離し
た（Ｍｉｌｌｅｒ ＥＪ，Ｒｈｏｄｅｓ ＲＫ．Ｉｎ： Ｃｏｌｏｗｉｃｋ Ｓ
Ｐ，Ｋａｐｌａｎ ＮＯ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖ
ｏｌ ８２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８２：
３３−６５）。コラーゲンは０．０５Ｍ ＨＡｃ（５ｍｇ／ｍｌ）に溶かし、−
７０℃で保存した。ＨＣｇｐ−３９はトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の上清か
ら単離した。ＨＣｇｐ−３９はヘパリンアフィニティークロマトグラフィー、次
いでｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５クロマトグラフィーにより培養上清から精製した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度を確認した。対照タンパク質オボアルブミンはＳｉ
ｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡから入手した。
−３９鼻腔投与による緩和 方法 試薬 ウシＩＩ型コラーゲンは１〜２歳の子牛から得た膝関節の関節軟骨から単離し
た（Ｍｉｌｌｅｒ ＥＪ，Ｒｈｏｄｅｓ ＲＫ．Ｉｎ： Ｃｏｌｏｗｉｃｋ Ｓ
Ｐ，Ｋａｐｌａｎ ＮＯ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖ
ｏｌ ８２．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８２：
３３−６５）。コラーゲンは０．０５Ｍ ＨＡｃ（５ｍｇ／ｍｌ）に溶かし、−
７０℃で保存した。ＨＣｇｐ−３９はトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の上清か
ら単離した。ＨＣｇｐ−３９はヘパリンアフィニティークロマトグラフィー、次
いでｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５クロマトグラフィーにより培養上清から精製した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度を確認した。対照タンパク質オボアルブミンはＳｉ
ｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡから入手した。
【００５１】 関節炎の誘発及び緩和 Ｂｏｍｈｏｌｔｇａａｒｄから雄ＤＢＡ／１マウスを入手した。完全フロイン
トアジュバント（ＣＦＡ）に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇでマウス
を免疫した（０日）。生理食塩水に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇを
マウスに腹膜組織内ブースター注射した。２０、２５及び３０日に３μｇ／頭／
用量、１０μｇ／頭／用量又は３０μｇ／頭／用量のＨＣｇｐ−３９（ｎ＝１０
／群）、ウシＩＩ型コラーゲン（ｎ＝１０；１００μｇ／頭／用量）又は対照タ
ンパク質（ｎ＝１０；オボアルブミン；１００μｇ／頭／用量）をマウスに鼻腔
内投与した。ＰＴ４５微量導管とハミルトン注射器を使用してエンフルラン麻酔
下に鼻腔寛容誘導を実施した。
トアジュバント（ＣＦＡ）に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇでマウス
を免疫した（０日）。生理食塩水に懸濁したウシＩＩ型コラーゲン１００μｇを
マウスに腹膜組織内ブースター注射した。２０、２５及び３０日に３μｇ／頭／
用量、１０μｇ／頭／用量又は３０μｇ／頭／用量のＨＣｇｐ−３９（ｎ＝１０
／群）、ウシＩＩ型コラーゲン（ｎ＝１０；１００μｇ／頭／用量）又は対照タ
ンパク質（ｎ＝１０；オボアルブミン；１００μｇ／頭／用量）をマウスに鼻腔
内投与した。ＰＴ４５微量導管とハミルトン注射器を使用してエンフルラン麻酔
下に鼻腔寛容誘導を実施した。
【００５２】 関節炎の臨床経過 関節炎活性の進行を経時的（関節炎誘発後２３、２５、２６、２８及び３０日
）に目視追跡し、疾患の重篤度を採点した（指及び／又は脚の発赤及び／又は腫
脹に基づく肉眼スコア）。後期時点では強直症もこの採点系に加えた。関節炎の
臨床重篤度は発赤及び／又は腫脹の外観に従って以下の０〜２点で各脚を採点し
た。０点：変化なし、０．５点：有意変化、１．０点：中度変化、１．５点：著
変、２．０点：最大腫脹及び発赤と後期強直症を伴う重度関節炎。この採点を更
に細かくした（０．２５点刻みの採点系）。
）に目視追跡し、疾患の重篤度を採点した（指及び／又は脚の発赤及び／又は腫
脹に基づく肉眼スコア）。後期時点では強直症もこの採点系に加えた。関節炎の
臨床重篤度は発赤及び／又は腫脹の外観に従って以下の０〜２点で各脚を採点し
た。０点：変化なし、０．５点：有意変化、１．０点：中度変化、１．５点：著
変、２．０点：最大腫脹及び発赤と後期強直症を伴う重度関節炎。この採点を更
に細かくした（０．２５点刻みの採点系）。
【００５３】 結果 各種用量のＨＣｇｐ−３９の免疫調節活性：臨床効果 ＩＩ型コラーゲンで免疫したＤＢＡ／１マウスは予定及び予想通りにコラーゲ
ン誘発関節炎を発現した。疾患を誘発するために使用した抗原即ちＩＩ型コラー
ゲンで処置したマウスはこの場合も処置の初期段階で軽症疾患活性に向かう傾向
を示した。重要な点として、３０μｇＨＣｇｐ−３９を投与したマウスはその臨
床的疾患活性発現が強く抑制された（図２）。３又は１０μｇＨＣｇｐ−３９を
投与したマウスも程度は劣るがその臨床的疾患発現の抑制を示した。関節炎の臨
床重篤度の抑制は２３、２５及び３０日の評価で関節炎であると判断された各マ
ウスの後脚のデータにより更に詳細に裏付けられ、ＨＣｇｐ−３９投与の臨床効
果が立証され、３０μｇ／頭／用量が最も有効である。従って、以上の実験から
明らかなように、特に３０μｇ／頭／用量のＨＣｇｐ−３９投与は非関連抗原即
ちＩＩ型コラーゲンの使用による関節炎の誘発を妨害する調節又は制御メカニズ
ムを始動することができる。即ち、ＨＣｇｐ−３９の治療投与は誘発抗原が不明
の（自己）免疫状態に有益であると結論することができる。
ン誘発関節炎を発現した。疾患を誘発するために使用した抗原即ちＩＩ型コラー
ゲンで処置したマウスはこの場合も処置の初期段階で軽症疾患活性に向かう傾向
を示した。重要な点として、３０μｇＨＣｇｐ−３９を投与したマウスはその臨
床的疾患活性発現が強く抑制された（図２）。３又は１０μｇＨＣｇｐ−３９を
投与したマウスも程度は劣るがその臨床的疾患発現の抑制を示した。関節炎の臨
床重篤度の抑制は２３、２５及び３０日の評価で関節炎であると判断された各マ
ウスの後脚のデータにより更に詳細に裏付けられ、ＨＣｇｐ−３９投与の臨床効
果が立証され、３０μｇ／頭／用量が最も有効である。従って、以上の実験から
明らかなように、特に３０μｇ／頭／用量のＨＣｇｐ−３９投与は非関連抗原即
ちＩＩ型コラーゲンの使用による関節炎の誘発を妨害する調節又は制御メカニズ
ムを始動することができる。即ち、ＨＣｇｐ−３９の治療投与は誘発抗原が不明
の（自己）免疫状態に有益であると結論することができる。
【００５４】 実施例３：ＲＡ患者におけるＨＣｇｐ−３９応答 方法 患者と試薬 米国リウマチ協会（ＡＲＡ）基準（Ａｒｎｅｔｔら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒ
ｈｅｕｍ ３１：３１５，１９８８）に従ってＲＡ患者を診断した。これらの患
者の疾患の重篤度をＸ線スコアにより０〜ＩＶ段階に分類した。ＨＣｇｐ−３９
はアフィニティークロマトグラフィー、次いでｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５クロマト
グラフィーにより培養上清から精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度を確認し
た。Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓはＨａｌアレルギー研究所から入手した
。
ｈｅｕｍ ３１：３１５，１９８８）に従ってＲＡ患者を診断した。これらの患
者の疾患の重篤度をＸ線スコアにより０〜ＩＶ段階に分類した。ＨＣｇｐ−３９
はアフィニティークロマトグラフィー、次いでｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５クロマト
グラフィーにより培養上清から精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより純度を確認し
た。Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓはＨａｌアレルギー研究所から入手した
。
【００５５】 増殖アッセイ ヘパリン化静脈末梢血からＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ勾配で標準遠心分離によ
り末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を採取した。ＨＣｇｐ−３９に対する増殖応答を
測定するために使用したアッセイは文献（Ｓａｌｖａｔら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
１５３：５３２１，１９９４）に記載されているアッセイの変法である。要約
すると、上記のように採取したＰＢＭＣを２４ウェルプレートのウェルに５×１
０５細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。細胞を培地単独又は抗原の存在下にインキュ
ベートした（ＨＣｇｐ−３９は２、１０、２５及び５０μｇ／ｍｌの用量範囲で
試験し、対照抗原であるＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓは１及び１０μｇ／
ｍｌで試験した）。３種の異なるバックグラウンドウェルで自然増殖又はバック
グラウンド増殖をアッセイした。培養液を５％ＣＯ２の加湿雰囲気下に６日間３
７℃でインキュベートした。次に細胞を懸濁し、培地２００又は１５０μｌ容量
を９６ウェル丸底プレートのウェルに４又は５倍に分配した。最後の１８時間の
培養中に培養液に０．５μＣｉ（１．８５×１０４Ｂｑ）［３Ｈ］チミジン（［ ３ Ｈ］ＴｄＲ）をパルスした。細胞をガラス繊維フィルターで回収し、［３Ｈ］
ＴｄＲ取り込みをガスシンチレーションにより測定した。ガスシンチレーション
による計数は液体シンチレーションに比較して５分の１の効率であることに留意
されたい。フィルターを５分間測定した（Ｐａｃｋａｒｄ Ｍａｔｒｉｘ ９６
βカウンター；Ｍｅｒｉｄｅｎ ＣＴ）。
り末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を採取した。ＨＣｇｐ−３９に対する増殖応答を
測定するために使用したアッセイは文献（Ｓａｌｖａｔら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
１５３：５３２１，１９９４）に記載されているアッセイの変法である。要約
すると、上記のように採取したＰＢＭＣを２４ウェルプレートのウェルに５×１
０５細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。細胞を培地単独又は抗原の存在下にインキュ
ベートした（ＨＣｇｐ−３９は２、１０、２５及び５０μｇ／ｍｌの用量範囲で
試験し、対照抗原であるＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓは１及び１０μｇ／
ｍｌで試験した）。３種の異なるバックグラウンドウェルで自然増殖又はバック
グラウンド増殖をアッセイした。培養液を５％ＣＯ２の加湿雰囲気下に６日間３
７℃でインキュベートした。次に細胞を懸濁し、培地２００又は１５０μｌ容量
を９６ウェル丸底プレートのウェルに４又は５倍に分配した。最後の１８時間の
培養中に培養液に０．５μＣｉ（１．８５×１０４Ｂｑ）［３Ｈ］チミジン（［ ３ Ｈ］ＴｄＲ）をパルスした。細胞をガラス繊維フィルターで回収し、［３Ｈ］
ＴｄＲ取り込みをガスシンチレーションにより測定した。ガスシンチレーション
による計数は液体シンチレーションに比較して５分の１の効率であることに留意
されたい。フィルターを５分間測定した（Ｐａｃｋａｒｄ Ｍａｔｒｉｘ ９６
βカウンター；Ｍｅｒｉｄｅｎ ＣＴ）。
【００５６】 結果 ＲＡ患者のＨＣｇｐ−３９応答 ＲＡ患者（ｎ＝１０）から採取したＰＢＭＣがＨＣｇｐ−３９に応答して増殖
したか否かを試験した。被験ＰＢＭＣ試料の品質を確認するために、多数の場合
にＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓを陽性対照抗原として使用した。１０人の
患者のうち６人がＨＣｇｐ−３９応答者（ＳＩ＞１０）と分類することができ、
１０人のうち４人はＨＣｇｐ−３９に応答しなかった（ＳＩ＜１０）（表１）。
採血時点で疾患が活性であるか不活性であるかに関係なく疾患の各段階で応答者
（Ｒ）と非応答者（ＮＲ）が認められた。このように、慣用増殖アッセイを使用
してＲＡ患者をＨＣｇｐ−３９応答個体とＨＣｇｐ−３９非応答個体に分類する
ことができる。
したか否かを試験した。被験ＰＢＭＣ試料の品質を確認するために、多数の場合
にＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓを陽性対照抗原として使用した。１０人の
患者のうち６人がＨＣｇｐ−３９応答者（ＳＩ＞１０）と分類することができ、
１０人のうち４人はＨＣｇｐ−３９に応答しなかった（ＳＩ＜１０）（表１）。
採血時点で疾患が活性であるか不活性であるかに関係なく疾患の各段階で応答者
（Ｒ）と非応答者（ＮＲ）が認められた。このように、慣用増殖アッセイを使用
してＲＡ患者をＨＣｇｐ−３９応答個体とＨＣｇｐ−３９非応答個体に分類する
ことができる。
【００５７】
【表１】 疾患段階はＳｔｅｉｎｂｒｏｃｋｅｒ基準による。ａｃｔ＝１個以上の関節が
炎症を起こしている場合に疾患が活性であるとする。ＢＧは５分当たりのバック
グラウンド計数である。ＨＣｇｐ−３９応答はＳＩ値として示す。ＳＩ値＞５を
陽性とみなし、太字で示す。Ｒ＝応答者。ＮＲ＝非応答者。使用したＰＢＭＣの
品質を確認するために、対照としてＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓに対する
応答を測定した。ｎｄ＝測定不能。
炎症を起こしている場合に疾患が活性であるとする。ＢＧは５分当たりのバック
グラウンド計数である。ＨＣｇｐ−３９応答はＳＩ値として示す。ＳＩ値＞５を
陽性とみなし、太字で示す。Ｒ＝応答者。ＮＲ＝非応答者。使用したＰＢＭＣの
品質を確認するために、対照としてＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓに対する
応答を測定した。ｎｄ＝測定不能。
【図１Ａ】 ＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び進行に
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、マウス群における臨床的
関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、マウス群における臨床的
関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
【図１Ｂ】 ＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び進行に
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、個体マウスにおける臨床
的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、個体マウスにおける臨床
的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
【図１Ｃ】 ＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び進行に
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、変質抑制の組織分析結果
を浸潤物スコアにより示す。
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、変質抑制の組織分析結果
を浸潤物スコアにより示す。
【図１Ｄ】 ＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び進行に
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、変質抑制の組織分析結果
を膝関節の写真により示す。
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、変質抑制の組織分析結果
を膝関節の写真により示す。
【図１Ｅ】 ＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び進行に
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、損傷抑制の放射線分析結
果をＸ線撮像スコアにより示す。
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、損傷抑制の放射線分析結
果をＸ線撮像スコアにより示す。
【図１Ｆ】 ＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び進行に
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、損傷抑制の放射線分析結
果を踝関節の写真により示す。
及ぼす３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示し、損傷抑制の放射線分析結
果を踝関節の写真により示す。
【図２】 ＤＢＡ／１マウスでＩＩ型コラーゲンにより誘発した関節炎の発症及び進行に
及ぼす３、１０又は３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示す。マウス群に
おける臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
及ぼす３、１０又は３０μｇＨＣｇｐ−３９鼻腔投与の効果を示す。マウス群に
おける臨床的関節炎スコアに及ぼす効果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ， ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，Ｌ Ｔ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ
Claims (3)
- 【請求項１】 ＨＣｇｐ−３９以外の抗原に対して反応性であり且つＨＣｇ
ｐ−３９と同一組織に存在するリンパ球の反応性を調節して免疫疾患を予防する
ための医薬製剤の製造におけるＨＣｇｐ−３９又はそのフラグメントの使用。 - 【請求項２】 フラグメントが配列番号１（ＦＧＲＳＦＴＬＡＳ）、配列番
号２（ＦＴＬＡＳＳＥＴＧ）、配列番号３（ＹＤＤＱＥＳＶＫＳ）、配列番号４
（ＦＳＫＩＡＳＮＴＱ）、配列番号５（ＰＴＦＧＲＳＦＴＬＡＳＳＥ）、配列番
号６（ＲＳＦＴＬＡＳＳＥＴＧＶＧ）、配列番号７（ＶＧＹＤＤＱＥＳＶＫＳＫ
Ｖ）又は配列番号８（ＳＱＲＦＳＫＩＡＳＮＴＱＳＲ）に示すアミノ酸配列を含
む群から選択されることを特徴とする請求項１に記載のフラグメントの使用。 - 【請求項３】 ＨＣｇｐ−３９以外の抗原に対して反応性であり且つＨＣｇ
ｐ−３９と同一組織に存在するリンパ球の反応性を調節して慢性関節リウマチを
予防するための医薬製剤の製造における請求項１又は２に記載のＨＣｇｐ−３９
又はそのフラグメントの使用。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP98202471.3 | 1998-07-23 | ||
| EP98202471 | 1998-07-23 | ||
| PCT/EP1999/005331 WO2000004917A2 (en) | 1998-07-23 | 1999-07-19 | USE OF HC gp-39 IN IMMUNE DISEASES |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002521344A true JP2002521344A (ja) | 2002-07-16 |
Family
ID=8233962
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000560910A Withdrawn JP2002521344A (ja) | 1998-07-23 | 1999-07-19 | 免疫疾患におけるＨＣｇｐ−３９の使用 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1100526A2 (ja) |
| JP (1) | JP2002521344A (ja) |
| AU (1) | AU5287599A (ja) |
| WO (1) | WO2000004917A2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7214373B2 (en) | 2001-07-24 | 2007-05-08 | Yale University | Methods, compositions and kits relating to chitinases and chitinase-like molecules and inflammatory disease |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL115744A (en) * | 1994-10-27 | 2000-07-16 | Akzo Nobel Nv | Peptides comprising a subsequence of human cartilage glycoprotein - 39 |
| US5843449A (en) * | 1996-03-25 | 1998-12-01 | Akzo Nobel N.V. | Proteins and novel peptides derived from autoantigen for use in immunotherapy of autoimmune diseases |
| EP0805206A3 (en) * | 1996-05-03 | 1999-09-15 | Smithkline Beecham Corporation | Human cartilage glycoprotein |
| US5811535A (en) * | 1996-08-09 | 1998-09-22 | Smithkline Beecham Corporation | Human cartilege gp39-like gene |
-
1999
- 1999-07-19 WO PCT/EP1999/005331 patent/WO2000004917A2/en not_active Application Discontinuation
- 1999-07-19 AU AU52875/99A patent/AU5287599A/en not_active Abandoned
- 1999-07-19 JP JP2000560910A patent/JP2002521344A/ja not_active Withdrawn
- 1999-07-19 EP EP99938340A patent/EP1100526A2/en not_active Withdrawn
Also Published As
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|---|---|
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| WO2000004917A2 (en) | 2000-02-03 |
| AU5287599A (en) | 2000-02-14 |
| WO2000004917A9 (en) | 2000-08-24 |
| WO2000004917A3 (en) | 2000-07-20 |
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