KR20010052170A

KR20010052170A - ＣＯＰ-1 및 Ｔｈ2-증진 시토킨류를 이용한 다발성경화증의 치료 방법

Info

Publication number: KR20010052170A
Application number: KR1020007008909A
Authority: KR
Inventors: 와이너하워드엘.; 마론루쓰; 슬라빈안토니
Original assignee: 오토이뮨, 인코포레이티드
Priority date: 1998-02-13
Filing date: 1999-02-12
Publication date: 2001-06-25
Also published as: AU2868699A; HUP0100891A2; EP1054880A1; IL137761A0; WO1999041247A1; CA2320044A1; JP2002503658A; US20010007758A1

Abstract

본 발명은 다발성 경화증의 치료에 관한 것이다. L-알라닌, L-글루탐산, L-리신, 및 L-티로신을 약 6:2:5:1의 몰비로 함유하는 무작위 합성 폴리펩티드의 혼합물을 함유하는 합성 폴리머, COP-1(코폴리머-1)를 IL-4 또는 IL-10과 같은 Th2-증진 시토킨과 조합하여 환자에게 점막 투여한다. COP-1의 점막 투여와 IL-4 또는 IL-10의 조합 치료법(바람직하게는 경구 투여)는 시토킨 또는 COP-1의 단독 투여 치료법보더 현저히 큰 억제 효과를 나타낸다.

Description

ＣＯＰ-1 및 Ｔｈ2-증진 시토킨류를 이용한 다발성 경화증의 치료 방법{TREATMENT OF MULTIPLE SCLEROSIS USING COP-1 AND Th2-ENHANCING CYTOKINES}

자기 면역 반응 질환은 자기 또는 자가 이식 조직에 대한 이상 면역 반응을 특징으로 한다. 수반되는 면역 반응(또는 면역 감응)의 타입에 기초하여, 포유류의 자기 면역 질환은 일반적으로 다음의 두 가지 상이한 타입 중 한 가지로 분류된다: 셀-매개성(즉, T-셀-매개성) 또는 항체-매개성 질환. 다발성 경화증(MS: multiple sclerosis)은 T-셀 매개성 자기 면역 질환이다(Trapp et al. New Eng. J. Med. 338(5):278(1998)). 전세계적으로 30 세에서 40 세 사이의 1,000,000 이상의 젊은 성인이 MS를 앓고 있다. MS는 중추신경계의 가장 통상적인 질환이며, 젊은 성인의 신경학적 부전 현상이 가장 일반적인 원인이 된다. 병태생리학적으로, 순환 자기 반응성 T 셀은 MS 환자에서 보이는 많은 중추 신경계 파괴 현상을 매개한다(Rudick et al. New Eng. J. Med. 337. J., Med. 337:1604(1997))

MS에서, T-셀은 중추 신경계에서의 미엘린의 성분인 미엘린계 프로테인(MBP: Myelin basic protein)과 반응한다. MBP에 대해 특정된, 활성화된 T-셀은 MS 환자로부터 분리될 수 있다는 논증이 MS가 T-셀이 자기 또는 자가 신경 조직을 파괴하는 자기 면역 질환임을 지지한다(Allegretta et al. Science: 247:778(1990)). 실험적 알레르기성 뇌척수염(EAE: Experimental allergic encephalomyelitis)은 MS에 대한 주요 동물 모델이다. EAE는 적절한 부형제의 존재 하에서 MBP와 면역화 반응시킴으로써, 또는 CD4+, MBP-반응성 T-셀의 수동적 전이(passive transfer)에 의해 작은 포유류에서 쉽게 유도될 수 있다(Alvord Jr, E.C., et al. eds. in Experimental Allergic Encephalomyelitis a Useful Model for Multiple Sclerosis, A.R. Liss, N.Y., 1984; Makhtarian et al. Nature 309:356 (1984); Ben-Nun et al. J. Immunol. 129:303 (1982)). 마우스 및 래트 모두에서 EAE를 유도하는 T-셀은 클래스 II 주요 조직적합성 착물(MHC: Major Histocompatibility Complex) 분자에 대한 항원-부여 셀에 의해 제공되는 MBP의 면역 우성 범위에 해당하는 펩티드를 인식한다.

MS는 대개 임의의 소염성 면역억제제, 다음과 같은 물질을 포함하는 이러한 제제로 치료된다: (i) 면역조절성 및 면역억제성 효과를 모두 갖는, 코르티코스테로이드; (ii) 인터페론-β; (iii) 글라티라메르 아세테이트(COP-1); (iv) 아자티오프린, 셀-매개 및 체액 면역성 모두를 억제하는 퓨린 동족체; (v) 정맥내 면역 글로불린; (vi) 디하이드로폴레이트 리덕타아제(reductase)를 억제하고, 셀-매개 및 체액 면역성을 억제하는 메토트렉사트; (vii) 시클포스파미드, 세포 독성 및 면역 억제 효과를 갖는 알킬화제; 및 (viii) T 셀 활성을 억제함으로써 강력한 면역 억제 효과를 갖는 시클로스포린. 이같은 소염성 면역억제 약물에 의한 치료에도 불구하고, MS 환자 중 50% 이상이 척수, 소뇌 및 대뇌피질의 초점성 파괴(focal destruction)의 결과로서 서서히 병세가 악화되었다.

현재 사용되는 약의 대부분이 장기 효능에 있어서 한계를 갖는데, 일부분에 있어서는, 이들이 현저한 세포 독성 효과를 갖기 때문이다. 예컨대, 시클로포스파미드를 이용한 장기 치료에서는, 탈모증, 메스꺼움, 구토증, 출혈성 방광염, 백혈구감소증, 심근염, 불임증 및 간질성 폐섬유증(pulmonary interstitial fibrosis)이 초래될 수 있다. 면역억제제에 의한 치료는 최종적으로 치료를 받는 환자에게서 "전체적인" 면역 억제 반응을 유도할 수 있어, 감염의 위험성 매우 증가된다. 장기간의 전체 면역 억제증을 앓는 환자들에게서는 심각한 의약적 합병증, 악성 종양, 신부전 및 당뇨병 등이 전개될 위험성이 증가된다.

MS 치료법에 대한 또다른 시도는, T-셀 면역 반응을 조절하는 MBP의 정맥 주사 또는 경구 투여를 이용하는 것이다. MBP 또는 MBP의 면역우성 에피토프를 함유하는 그의 단편의 정맥 주사는 클론 아네르기, 또는 T-셀 비반응화를 야기시킴으로써 면역 시스템을 억제하여, MB(에 특정된 T-셀을 제활성화시킨다. 최종 결과는 MBP-특정 T 셀이 더이상 MBP에 반응하여 증식하지 않는다는 것이다. 증식하는 T 셀의 무력화는 신경 조직의 T-셀 매개성 파괴의 감소를 초래한다. MBP와 같은 자기 항원의 경구 투여는 투여되는 투여량에 따라, 활성 억제 또는 아네르기를 통해 MBP에 대한 면역 반응을 억제한다. MBP 경구 투여에 있어서, 단일 투여량으로 및 실질적으로 활성 억제를 일으키는 것보다 많은 양으로 투여하면, 클론 제거를 통한 내성이 유도될 수도 있다.

MS 치료에 유효한 MBP의 면역 화학적 동족체는 글라티라메르 아세테이트(glatiramer acetate), 또는 코폴리머-1(COP-1)이다(미국 특허 제 3,849,550; PCT 공보 제 WO/95/31990 호). 시판되는 형태의 COP-1은 L-알라닌, L-글루탐산, L-리신 및 L-티로신을 몰비 6.0:1.9:4.7:1.0으로 함유하는 무작위 합성 폴리펩티드의 혼합물이다. 처음에는 MBP을 모사하여 합성되었다. 예컨대, COP-1에 대한 임의의 모노클로날 항체는 MBP와 교차-반응(cross-react)을 한다(Teitelbarum et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:9528 (1991)). 또한, COP-1은 MBP에 특정된 T 억제자 셀을 유도하는 것으로 알려져 있다(Lando et al, J. Immunol. 123:2156 (1979)). 마우스로 이루어진 실험을 통해, COP-1 또한 특정적으로, EAE에서의 중추신경계 조직 파괴와 관련된 MBP-특정 T 셀을 억제하는 것으로 알려져 있다(Teitelbaum et al. Proc. Natl. Acd. USA 85:9724 (1995)).

COP-1이 면역학적으로 MBP와 유사하긴 하지만, COP-1에 대한 선형 아미노산 서열은 MBP의 아미노산 서열과 공지된 상동성이 없다. 게다가, COP-1은 어는 방면에서는 MBP와 면역학적으로 상이하다. 예컨대, COP-1은 뇌염 유발성이 아니다. 즉, 주사시에 실험적 알레르기성 뇌염(EAE)가 야기되지 않은 반면에, MBP는 상당한 뇌염 유발성이다(Teitelbaum et al. Eur. J. Immunol. 4:242 (1971)). 또한, 면역학적 교차 반응성이 없는 것이 Burns 등의 Neurology 36:92 (1986)에서 관찰되었다.

COP-1의 투여는: (i) NK 셀의 퍼센티지를 증가시킬 수 있으며; (ii) 혈청 IL-2 수용체를 감소시킬 수 있고; (iii) TNF-α를 억제시킬 수 있으며; (iv) TGF-β 및 IL-4를 증가시킬 수 있다(Ariel et al. Multiple Sclerosis 3(5), S053 (1997)).

MS 환자들은 비경구 투여된 COP-1에 의해 완전히 치료되어 왔다(Bornstein et al. Transactions American Neurological Association, 348 (1987)). 환자에게는 20 mg의 COP-1이 매일 피하 주사되었다(Bornstein et al. Annals of Neurology 11:17 (1981)). 치료 환자에 있어서, (i) 연간 재발률이 29%로 낮아졌으며, (ii) 임상학적 질환에서 재발되지 않는 환자의 비율이 높아졌으며(34 % vs. 27%), (iii) 치료군이 그들의 장기 무능화 상태 평가 - MS 환자에서 신체 기능의 표준 임상학적 측정에 대해 상당한 개선되었음이 나타났다.

최근 연구에 따르면, COP-1은 경구 투여시에 EAE를 치료하는 데 유효하다(Teitelbaum et al. Multiple SClerosis 3(5), P169 (1997)). 래트에 대한 COP-1의 경구 투여는, (i) EAE의 심각도 및 발병률을 저하시키고, (ii) T 셀 증식성 반응을 억제하였으며, (iii) Th1 시토킨 생성을 억제하였다.

자기 면역 질환은 방관자(bystander) 항원의 경구 투여를 통해 치료할 수 있다. 이러한 치료는 활성 억제 메카니즘을 통해 진행된다. 이 치료법은 PCT 특허 출원 제 PCT/US93/01705 호(공보 제 WO93/16724 호)에서 광범위하게 논의되어 있으며, 자기 면역 발작(attack) 하에서 조직 특정 항원의 경구 투여를 수반한다.

방관자 항원의 경구 투여는 발작 하에서 기관 또는 조직에 표적화되는 조절성(억제자) T-셀(CD+4 또는 CD8+ 타입이 될 수 있음)을 도출시키고, 이들은 한 가지 이상의 항원-비특정 면역 억제 인자 또는 면역 조절 시토킨(TGF-β, IL-4 또는 IL-10)의 방출을 야기시키고, 이로써 국소 면역 반응을 억제한다.

특히, "방관자 항원"에 의한 경구 투여 치료법은 소화관-관련 림프 조직(GALT)에서, 또는 흡입 투여해 의한 경우에, 점막 관련 림프 조직(MALT)에서 유발되는 조절성(억제자) T-셀을 야기시킨다. 이 조절성 셀들은 혈액 또는 림프 조직에서 방출된 후에, 자기 면역 질환에 감염된 기관이나 조직으로 이동한다. 거기에서, T-셀이 자기 면역 공격을 억제시킬 수 있다. 방관자 항원에 의해 도출된 T-셀은 이들이 형질 전환 생장 인자 베타(TGF-β), 인터로이킨-4(IL-4) 또는 인터로이킨-10(IL-10)과 같은, 임의의 면역 조절 인자 및 시토킨의 국소 방출을 매개하는 자기 면역 공격의 위치(locus)에 표적화된다. 이 중에서, TGF-β는 그의 방출을 일으키는 항원에 무관하게 모든 면역 공격을 억제하는 항원-비특정 면역 억제 인자이다. 방관자 항원에 의한 경구 내성화(tolerization)이 자기 면역 발작 부근에서만 TGF-β의 방출을 야기시킬 수 있기 때문에, 전신계통의 면역 억제 반응은 없다. IL-4 및 IL-10은 또한, 항원-비특정 면역 조절성 시토킨이다. 즉, IL-4는 특히 T-셀 전구체에 대한 작용에 의해 Th2 반응을 증진시킨다. 이는 T-셀을 Th2 셀로 바람직하게 분화시킨다. Th2 셀은 IL-4. IL-5, IL-6 및 IL-10을 포함하며, 이에 국한되는 것은 아닌, 광범위한 시토킨류를 생성시킨다. 이 시토킨류는 B 림프구에 의해 다양한 면역 글로불린 클래스류, 예컨대, IgG1의 생성을 조절한다. Th2 셀은 또한 면역계의 다른 작동체 인자(effector arms)에 의해 개시되는 세포 면역 반응의 효능을 감쇠시킬 수도 있다(Paul, W.E., Fundamental Immunology, Raven Press, pg 13-14, 1993).

MBP와 Th2-증진 시토킨을 병용 투여하는 것은 EAE의 발병 지연 및 질환 발병률 모두의 측면에서 MBP의 억제 효과를 증가시킨다(PCT/US95/04512, 공보 제 WO95/27500). 예컨대, EAE는 적절한 간격으로 미코박테리움 튜베르쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis) 및 백일해 독소와 함께, 마우스 MBP 0.4 mg으로 면역화함으로써 SJL/J 마우스들로 유도되었다. 마우스를 몇 개의 실험으로 나누어 다음과 같은 제제를 경구 투여하였다: (i) 대조군으로서 달걀 리소자임; (ii) 마우스 IL-4; (iii) 마우스 MBP; 또는 (iv) MBP 플러스 IL-4. 동물들은 35일 동안 질병 발병에 대해 관찰되었다. 경구성 IL-4(100 units) 및 MBP의 병용 치료는 질병 발병률 및 임상 등급 양측면 모두를 억제시켰다. 또한, 질병의 발병을 지연시키기도 하였다. 사실, 질병 발병을 지연시키는 것은 실질적으로 IL-4 또는 MBP 단독에 의한 치료(각각, 21 및 22 days)보다는 병용 치료에서 좀더 크게 나타났다(30 days).

지금까지, 경구 COP-1이 IL-4 또는 IL-10과 병용 투여됨으로써, MS의 효과적인 치료법을 얻을 수 있다는 것이 알려진 바 없다. 또한, Th2 시토킨을 통상의 다른 자기 면역 억제제의 경구 투여와 병용하는 것이 EAE 또는 MS의 치료에 유리한지도 알려진 바 없다. COP-1가 MBP과 유사한 소정의 면역학적 특성을 갖긴 하지만, 무작위 아미노산 서열을 갖는 것으로 MBP와 구조적 상동성이 없는 것으로 알려져 있다. 게다가, 이 COP-1은 그의 면역학적 특성의 어느 면에서는 MBP와 상이하다. 따라서, 점막 투여되는 COP-1과 점막 또는 비경구 투여되는 IL-4 또는 IL-10을 병용하는 것이 MS 또는 EAE의 치료에 효과적인지에 대해서는 예측할 수 있는 것이 아니다.

따라서, 본 발명의 한 가지 목적은 MS를 앓는 포유류를 치료하는, 개선된 및/또는 좀더 편리한 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 바람직하게는 오직 경구 경로를 통해서만 투여될 수 있는 MS를 앓는 포유류를 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 세 번째 목적은 COP-1 투여에 대한 부가 치료법을 제공하는 MS를 앓는 포유류를 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

발명의 요약

(i) COP-1의 점막 투여 및 (ii) Th2-증진 시토킨 활성을 갖는 폴리펩티드의 투여를 병용하는 것이 실질적으로, COP-1의 단독 투여 또는 Thh2-증진 시토킨 활성을 갖는 펩티드 단독 투여보다 MS에 관련된 자기 면역 반응을 억제하는 데 좀더 효과적임을 알게 되었다. 특히, IL-4 또는 IL-10의 점막 또는 비경구 투여와 조합하여 COP-1을 점막 투여하는 것이 MS 치료에 유리하다는 것을 알 수 있었다.

본 발명은 다발성 경화증과 관련한 자기 면역 반응을 감소시키는 능력을 향상시키는 것에 관한 것이다.

본문에서 인용된 모든 특허 출원, 특허 및 참고문헌들은 전문이 본 발명의 참고문헌이 된다. 분쟁이 있는 경우, 본문에 개시된 바에 대한 정의 및 해석은 유리하게 이용할 수 있다.

정의

본문에서 사용되는 다음 용어들은 하기한 바와 같은 의미를 갖는 것이다:

"Th2-증진 시토킨류"는 (i) 조절 면역계 셀에 의해 정상적으로 분비되거나 유도되고; (ii) Th2 셀의 빈도를 증진시키는 항원-비특정 면역 조절 물질을 자연 발생시킨다.

본문 중 "포유류"란 면역계를 갖으며 자기 면역 질환에 걸리기 쉬운 태생의 온혈 유기체를 말한다.

"치료"는 자기 면역 공격을 감소시키고, 자기 면역 조직의 파괴를 억제 또는 저하시킴으로써 다발성 경화증의 어떠한 징후, 임상적 또는 잠재적, 예컨대, 조직학적 그의 증상을 예방 또는 지연하는 치료, 및 이들의 발병 이후 증상의 치료학적 억제 또는 경감, 모두를 포함하는 것이다. 자기 면역 발작 또는 반응의 "경감", "억제" 또는 "감소"는 이 발작 또는 반응의 한 가지 이상의 증상을 일부 감소시키거나 완화시키는 것을 포함하는 것이다. "자기 면역 반응"의 "실질적으로" 증가된 억제 효과(또는 경감 또는 감소)는, MS의 하나 이상의 표시 또는 조직학적 또는 임상학적 표지에서 현저한 감소를 의미하는 것이다. 사지 마비 등급에서 1 단위 이상의 감소를 예로 들 수 있는데, 이에 국한되는 것은 아니다.

본문에 사용되는 바와 같이, Th2-증진 시토킨의 투여와 COP-1의 투여를 "조합하여", 또는 "함께", 또는 "병용"한다고 함은, COP-1의 투여 이전, 실질적으로 동시에, 또는 이후를 의미한다. "실질적으로 동시"라고 함은 동일 24-시간 기간 이내, 바람직하게는 1 시간 전후 이내를 의미한다.

"경구" 투여에는 경구, 장 또는 위내 투여가 포함된다.

"점막" 투여에는 경구, 장, 위내, 비내, 흡입식 및 구강 투여, 및 항원에 림프 조직(MALT)과 관련된 점막을 노출시킬 수 있는 그 외의 어떠한 투여 방법이 포함된다. 위장계 림프 조직(GALT)에 투여하는 것도 "점막 투여"에 포함되는 것이라 할 수 있다.

"비경구" 투여에는 피하 주사, 피내 주사, 근육 주사, 정맥 주사, 복강내 주사 또는 척수강 주사가 포함된다.

동물 모델

본문 전반에 걸쳐, MS:EAE를 연구하기 위해 개발되었던 모델 시스템을 참고적으로 수행하였다. 이 분야의 당업자에게는 다수의 MS에 대한 주요 면역 치료법이 먼저 이같은 동물 모델 시스템으로 테스트된다는 것이 알려져 있다. 이 질환은 MBP 또는 프로테오리피드 프로테인(pLP) 및 부형제(프로인트 완전 보조액 "CFA" 등)에 의해 면역화함으로써 유도된다. 이 질환을 유도하기 위해 사용되는 항원은 자기 항원, MBP Ehss PLP이다. 이들 항원에 의한 면역화 반응은 미엘린-제거 질환의 단일상 또는 악화/경감 형태를 유도한다(설치류의 종과 타입, 및 유도에 있어서 잘 알려진 바와 같은 상세 사항에 따라). 유도된 질환은 자기 면역 질환 성분들의 다수의 특성들을 지니는데, 이에 따라, 이 질환의 동물 모델로서 제공된다. 또한, 경구 내성화(tolerization)에 의한 EAE의 성공적인 치료법, 및 미엘린을 경구 투여함으로써, 많은 경우에서 MS의 증상을 완화시키고, 인간의 질환 유도 셀 빈도를 감소시키는 것의 동시 성공이, 다양한 내성화 양생법의 성공을 예측하는 모델 시스템으로서 EAE의 용도를 유효하게 해왔다.

상기한 바와 같은 모델 시스템은 본 발명에 의해 제공되는 개선된 치료법과 효용성을 입증하는 데 이용된다. 이 모델은 특히, EAE의 면역학적 메카니즘이 MS의 것과 매우 비슷하기 때문에 치료법을 테스트하는 데 적절하다. 경구 내성화의 경우에, 이 모델에서 얻어지는 자기 면역화의 억제는 인체 MS 자기 면역 이상과 동물 모델 사이에서의 실제 또는 잠재적 차이와는 무관한 것이다. 이 모델은 특히, Th2-증진 시토킨이 일반적으로 인체에서와 같은 또는 유사한 동물 모델내에서의 활성을 갖기 때문에 이러한 시토킨의 이용을 기초로 한 치료법을 테스트하는 데 적절하다.

COP-1, IL-4 및 IL-10의 제조

본 발명에 따르면, Th-2 증진 시토킨 활성을 갖는 펩티드의 점막 또는 비경구 투여와 조합하여 COP-1의 점막 투여가 MS와 관련된 자기 면역 반응을 억제하는 데 사용된다.

본 발명에 있어서, COP-1는 이 기술 분야에서 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예컨대, COP-1은 티로신, 알라닌, γ-벤질 글루타메이트 및 ε-N-트리플루오로-아세틸리신의 N-카르복시언하이드라이드가 억제제로서 디에틸아민과 무수 디옥산 존재 하에서 상온으로 폴리머화된 미국 특허 제 3,849,550 호에 개시된 바와 같은 방법으로 제조될 수 있다. 글루탐산의 γ-카르복시기의 탈보호기화는 빙초산 존재 하에서 브롬산으로 수행된 후에, 1M의 피레리딘에 의해 리신 잔기로부터 트리플루오로아세틸기가 제거된다. 폴리펩티드의 생성된 혼합물은 필수적으로, 알라닌, 글루탐산, 리신 및 티로신을 약 6:2:5:1의 몰비로 함유한다.

COP-1은 또한 Teva Pharmaceuticals, Kfar-Saba, Israel로부터 시판된다.

COP-1은 그의 치료 유용성을 유지하는 어떠한 형태로든 제조되어 본 발명에서 이용될 수 있다. 여기에는 다양한 분자량 범위를 갖는 펩티드의 혼합물들이 포함된다. 바람직한 분자량 범위를 갖는 COP-1은 이 기술 분야에서 공지된 방법에 의해 얻어질 수 있다. 이러한 방법에는 WO 95/31990에 개시된 바와 같이 고분자량의 종류를 제거하는 COP-1의 겔 여과 고압 액체 크로마토그로피가 포함된다. 일례에서, COP-1은 약 2 KDa 내지 약 20 KDa 분자량 범위 이내의 폴리머 종류를 약 70% 함유한다. 또다른 일례에서, COP-1은 약 4 KDa 내지 9 KDa의 평균 분자량 범위를 갖는다. COP-1이 공지 방법에 따라 통상의 COP-1과 다른 길이의, 또는 변형된 폴리머 종류를 함유할 수 있도록 효소적 또는 기타 분해 반응을 시킬 수 있다.

바람직한 일례에서, COP-1은 IL-4 또는 IL-10과 함께 투여된다. IL-4 및 IL-10은 Pharmingen, San Diego, CA에서 시판된다. 이들은 또한, 정상적으로 이 중 떠한 시토킨을 생성시키는 천연 물질(T 셀)로부터 분리될 수 있다(John E. Coligen et al eds., Current Protocols in Immunology, Volume 1, Chapter 6, John H. Wiley ＆ Sons, Inc., 1997). 두 가지 시토킨 모두가 또한, 이 기술 분야의 당업자에게 잘 알려지 기술을 이용하는, 박테리아, 이스트, 곤충 및 포유류 셀에서의 재조합 DNA 기법을 이용하여 얻어질 수 있다. 예컨대, 인간 IL-4를 코드화한 DNA 서열이 Yokota 등의 Proc.Natl.Acad.SCi.USA 83:5894(1986)에 개시되어 있다.

경구 배합물

본 발명에 따르면, COP-1 및 IL-4 또는 IL-10의 투여 경로는 바람직하게는 경구 또는 장이다. 바람직한 경구 또는 장 투여용 의약 배합물은 예컨대, 다발성 경화증을 치료하기 위해 배합되는 데 유효한 IL-4 또는 IL-10 및 COP-1의 양을 함유하는 환약, 액상 또는 캡슐을 포함한다.

본 발명의 따른 각각의 경구(또는 장) 배합물이 이 기술 분야에서 잘 알려진 의약적으로 허용 가능한 담체, 희석제, 충진제, 가용제 또는 에멀젼화제 및 염들을 포함하 비활성 성분들을 함유할 수도 있다. 예컨대, 정제는 이 기술 분야에서 잘 알려진 고체 담체를 사용하여 통상적인 방법에 따라 배합될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 캡슐은 의약적으로 허용 가능한 물질, 예컨대 젤라틴, 또는 셀룰로오스 유도체로부터 제조될 수 있다. 1987년 11월 3일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,704,295 호; 1985년 12월 3일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,556,552 호: 1982년 1월 5일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,309,404 호; 및 1982년 1월 5일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,309,406 호에 개시된 바와 같이, 경구 투여되는 투여 형태용의 지속 방출 경구 전달 시스템 및/또는 장 코팅 또한 고려될 수 있다.

고체 담체의 예로는 스타치, 벤토나이트, 실리카 및 기타 통상적으로 사용되는 담체들을 들 수 있다. 본 발명의 배합물에 사용될 수 있는 담체 및 희석제의 추가적인 비한정성 예로는 소금물, 시럽, 덱스트로오스, 및 물을 들 수 있다.

필요 유효량이 다수의 투여 단위(캡슐 또는 정제 또는 그의 병용 등)를 투여함으로써 도달될 수 있으므로, 각 투여 형태의 개별 투여량에 포함된 활성 성분 또는 성분들 자체가 유효량으로 구성되어야만 하는 것은 아니다.

COP-1 및 IL-4 또는 IL-10은 단일 투여 형태로 또는 다중 투여 형태로 투여될 수 있다. 더욱이, 이들은 각각 또는 함께 투여될 수 있다.

COP-1 또는 Th2-증진 시토킨은 또한, PCT/US90/07455(공보 WO91/08760)에 개시된 바와 같이 흡입법에 의해 투여될 수도 있다. 본 발명의 이같은 선택적 일례에서는, 투여는 에어로졸 또는 흡입 형태가 된다. COP-1 또는 시토킨은 건조 분말 입자들로서 또는 담체 가스(예컨대, 공기 또는 N₂)내에 현탁된 분무 수용액으로서 투여될 수 있다.

본 발명의 흡입에 의한 투여용 의약 배합물에는, 선택적 성분으로서 의약적으로 허용되는 담체, 희석제, 가용제 및 에멀젼화제 및 이 분야에서 잘 알려진 타입의 염들이 포함될 수 있다. 이러한 물질들의 예로는, 생리학적 완충 식염수 용액과 같은 정규 식염수 용액 및 항원을 약 1 mg 내지 약 300 mg 함유하는 물을 들 수 있다.

액상에 용해되거나 현탁되지 않은 활성 물질의 미분된 고체 입자 형태의 건조 에어로졸 또한, 본 발명을 수행하는 데 이용될 수 있다. 활성 물질은 먼지 살포 분말들 형태가 되거나, 약 1 내지 5 미크론 사이, 바람직하게는 약 2 내지 3 미크론 사이의 평균 입자 크기를 갖는 미분된 입자들을 함유할 수 있다. 미분 입자들은 이 기술 분야에서 잘 알려진 분쇄 및 스크린 여과법에 의해 제조될 수 있다. 입자들은 분말 형태가 될 수 있는 소정량의 미분된 물질을 흡입함으로써 투여될 수 있다. 본 발명의 의약 배합물은 예컨대, 1986년 11월 25일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,624,251 호; 1972년 11월 21일자로 특허허여된 미국 특허 제 3,703,173 호; 1971년 2월 9일자로 특허허여된 미국 특허 제 3,561,444 호; 및 1971년 1월 13일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,635,627 호에 개시된 바와 같은 분무기(nebylizer)를 이용한 에어로졸 스프레이 형태로 투여될 수 있다. 이 에어로졸 물질은 치료를 받는 환자에 의해 흡입된다.

흡입식 의약 배합물에 유용한 담체 및/또는 희석제의 특정 비한정성 예로는 물 및, pH 7.0-8.0의 인산염 완충 염수 용액과 같은 생리적으로 허용 가능한 완충 염수 용액이 포함된다. 본 발명의 흡입식 의약 배합물 또는 투여 형태에 유용한 적절한 담체 또는 희석제 추가적인 비한정성 예들은 1987년 4월 21일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,659,696 호; 1989년 9월 5일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,863,720 호; 및 1987년 10월 6일자로 특허허여된 미국 특허 제 4,698,332 호에 개시되어 있다.

DAvia, D. eds. pg. 197-224, Bitterworths, London, England, 1984, 및 Aerosols and the Lung, Clarke, S.W.의 Newman, S.P.에 개시된 바와 같은 가압 계량 투여량의 흡입기(MDI) 및 건조 분말 흡입기 등의, 그외의 에어로졸 전달 시스템이 본 발명을 실시하는 데 사용될 수 있다.

본문에 기술된 바와 같은 타입의 에어로졸 전달 시스템은 Fison Coporation (Bedford, MA), Schering Corp.(Kenilworth, NJ) 및 American Pharmoseal Co.(Valencia, CA)를 포함한 다수의 시판원으로부터 이용 가능하다.

IL-4 또는 IL-10의 비경구 투여는 피하, 근육내 또는 복강내 경로들을 통하여 이루어질 수 있으며, 피하 경로가 치료 목적에 바람직하다. 비경구 투여의 경우, IL-4 또는 IL-10은 이 기술 분야에서 잘 알려진 멸균 식염수 또는 기타 담체들에 배합될 수 있으며, 이 분야에서 표준화된 부형제 및 안정제를 포함할 수도 있다.

조합 요법에 의한 MS의 치료

놀랍게도, IL-4 또는 IL-10의 점막 또는 비경구 투여와 조합한 COP-1의 점막 투여는, MS 및 그에 따른 포유류 모델에서의 자기 면역 반응을 억제하는 치료를 초래한다. 이 조합 요법(combination therapy)의 효과는 각각의 개별 치료 효과와 비교시 현저히 증가된 것이다. 예컨대, 경구 COP-1과 경구 IL-4 또는 IL-10의 조합 치료는 COP-1, 또는 시토킨 단독과 비교시에 EAE의 임상학적 등급에서 현저히 큰 억제 효과를 나타낸다.

자기 면역 질환의 임상학적 조직학적 증상의 억제는 특정 최소 투여량 투여 후에 발생하지만, 질환, 포유류의 종류 및 시토킨에 따라 다양하다. 경구 IL-4의 경우, 이 조합 치료에서 인간에 유효한 투여량 범위는 바람직하게는 매일당 500 내지 1,000,000 국제 단위(international units), 좀더 바람직하게는 매일당 약 5,000 내지 약 20,000 국제 단위이다. 유사한 투여량이 IL-10 투여에도 이용될 수 있다. 최대 투여량은 검사를 통해 가장 잘 확인된다. 좀더 많은 투여량도 가능하지만, 불필요한 것이다.

IL-4의 비경구 투여 또한, COP-1 요법의 부가물로서 사용될 수 있으나, 비경구 IL-4의 전신 효과 때문에 경구 IL-4가 바람직하다. 그러나, 비경구 IL-4는 자기 면역 질환을 억제하는 데 매우 효과적이다. 포유류의 비경구 투여량 범위는 일반적으로, 이 범위의 상한선은 실험을 통해서 좀더 잘 설정되긴 하지만, 약 500 국제 단위 내지 약 1,000,000 구제 단위가 될 수 있다. 상한선은 비경구 Il-4의 최대 억제 효과가 관찰되는 시점의 양이라고 할 수 있다(즉, 좀더 많은 양을 사용함으로써 효용성이 떨어지지 않을 수 있지만, 불필요할 수 있음). 비경구 투여는 전형적으로 매 격일당 한 번씩의 단일 또는 여러번의 투여량의 피하 주사로 수행될 수 있다. 마찬가지의 투여량과 투여 횟수가 IL-10에 대해 이용될 수 있다.

본 발명에서는 IL-4의 투여량이 그 자체로 효과적일 필요는 없다. COP-1의 효과를 강화시킬 수 있는 Th2-증진 시토킨의 서브-최적 투여량이 이용될 수 있다.

COP-1은 일반적으로 0.01 mg/day 내지 1000 mg/day의 투여량으로 MS를 치료하기 위해 투여된다. 일례에서는, 0.5-50 mg 범위의 투여량이 사용된다. 좀더 많거나 적은 투여량이 가능하고, COP-1의 투여량이 그 자체로 효과적이여야할 필요는 없음을 알 수 있다.

효과적인 투여량 범위 및 최적량의 설정은 이 섹션에서 주어진 정보에 비추어 이 분야의 기술 수준내에서 충분히 가능하다. 예컨대, 포유류에 대한 투여량, 특히 인간에 대한 투여량은 비교적 적은량의 시토킨 및 COP-1로 시작하여(예컨대, COP-1 1 mg/day 및 IL-4의 500 units), 점차적으로 이를 증가시키고(예컨대, 대수적으로), 이 치료에 대한 다음과 같은 생물학적 반응을 측정함으로써 최적화된다: 예컨대, (i) 조절 셀(CD4⁺및/또는 CD8⁺)의 유도 측정(Chen, Y et al., SCience, 255:1237(1994)); (ii) T-셀 순환에 대한 글래스 II 표면 마커에서의 감소 측정; (iii) TGF-β(및/또는 IL-4 또는 IL-10) 분비 셀의 수 측정; (iv) 혈액내에서 면역 발작 T-셀의 수 및 활성화 측정(예컨대, 증식 성능 및 희석 분석을 한정시킴으로써); 또는 (v) 공지의 등급화 방법에 따라, 질병의 심각도를 등급화(예컨대, 약물 치료를 줄이거나 중지하는 능력, 시각적 정밀성, 경직성, 그립 강도, 조인트 팽윤, 공격의 수를 측정함으로써). 효과적인 투여량은, 적어도 이상의 마커들 중 하나에서의 통계학적으로 또는 임상학적으로 현저한 감쇠 현상을 야기시키는 어떠한 투여량이며, 바람직하게는 투여량 연구 동안에 MS의 특징적 증상 하나 이상을 감쇠시키는 것이다.

IL-4 또는 IL-10과의 COP-1의 투여는 30 일 내지 수개월(예컨대, 3-6)까지 또는 수년(예컨대, 2-6)까지 범위 기간 동안 매일 1회씩 수행될 수 있다. 바람직하게는, COP-1이나 IL-4(또는 IL-10)가 며칠동안 단일 투여되고, 다음 며칠 동안에는 다른 제제와 조합하여 투여될 수 있다. 치료법은 경구 경로 투여에 의해 제공되는 부작용의 위험이 낮게 주어지도록 무한정으로 계속될 수도 있다(얻어지는 이익이 지속되기만 한다면).

프로테아제 억제자(소이빈 트립신 억제자, 아프로티닌, 안티페인 등)가 흡수량을 증가시키기 위해 COP-1와 조합하여 IL-4 또는 IL-10를 함유하는 경구 투여 형태에 첨가될 수 있다. 이 경우에, IL-4의 투여량이 감소될 수 있다.

투여량 및 투여 횟수를 최적화할 수 있도록 환자를 관찰하는 것이 바람직할 수 있다. 환자에게 투여하는 정확한 약과 빈도는, 이 기술 분야에서 잘 알려진 바와 같이, 환자의 신체적 조건 및 환자의 질병의 심각도, 발병 빈도, 상태 등에 다라 다양해질 수 있다. 이러한 최적화는 바람직하게는 각 경우에 기초하여 결정된다. 면역 억제에 필요한 투여량의 최적화는 단지, 본문에 개시된 지침이 주어지는 통상적인 실험을 수반하는 것일 뿐이다.

이 질환의 심각도의 평가는 질병 타입에 따라 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 방법들에는 다음과 같은 것들이 포함되는데, 이에 국한되는 것은 아니다:

MS: 기간 동안의 공격의 횟수 및 심각도; 무력화의 점진적인 축적(예컨대, 장기 무력화 상태 척도(Expanded Disability Status Scale)에 대해 측정될 수 있음); 뇌손상의 정도 및 수(예컨대, 자기 공명 영상에 의해 밝혀지는 바와 같이); 및 자기 반응성 T-셀의 횟수.

EAE: 다음과 같이 등급화될 수 있는 사지 마비: 0 - 질병 없음; 1 - 활동성 감소, 사지 끌기(limp tail); 2 - 약간의 마비, 불안정한 걸음걸이; 3 - 중간 마비, 각각의 사지 뒤틀림; 4 - 사지마비; 및 5 - 죽음.

대조군 환자 또는 동물들에게서 증상의 악화가 나타나는 조건 하에서, 증상의 안정화는 치료 효용성의 한 지표가 된다. 향상시키는 또다른 방법으로, 다른 약물 치료, 예컨대, 스테로이드류 또는 그외의 소염제 및 메토트렉세??, 피하 인터페론 등과 같은 생물학적 반응 변형제를 줄이거나 중지시킬 수 있다. COP-1 및 IL-4 또는 IL-10의 최적 투여량은 전술한 바와 같이 측정된 최대로 유리한 효과를 생성시키는 것이 될 것이다. 임상학적으로 현저한-감쇠는 MS 분야의 통상적인 기술을 갖는 임상의에 의해 관찰되는 것이다.

추가로, 기타 시토킨성 및 비-시토킨성 공력제(synergist)가 Th2-증진 시토킨 활성을 갖는 폴리펩티드의 투여 및 점막 투여되는 COP-1의 효용성을 증진시키는 치료에 사용될 수 있다. 기타 시토킨성 공력제(타입 I 인터페론)의 경구 용도가 공동-계류중인 미국 특허 출원 제 08/225,372 호, 상응하는 WO 95/27499에 개시되어 있다. 본 발명에 사용될 수 있는 비-시토킨성 공력제의 비한정성 예로는, 다양한 서브-타입의 대장균 및 살모넬라균과 같은 광범위한 그램 음성 박테리아로부터의 박테리아 리포폴리사카로이드(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO; ICN Biochemicals, Cleveland, OH; Polysciences, Inc., Warrington, PA); Deres 등(Nature, 342:561(1989))에 의해 개시된 바와 같이 얻어질 수 있는 트리팔미토일-S-글리카리시스테이닐-세릴-세린(P₃C55)과 공유 결합된 펩티드와 같은 면역 조절성 리포프로테인; 또는 Braun Biochim. Biophys. Acta 435:335(1976)에 개시된 바와 같이 얻어질 수 있는 대장균 "Braun's" 리포프로테인을 들 수 있다. LPS가 바람직하며, 전체 LPS 분자 보다 독성이 적기 때문에 리피드 A가 특히 바람직하다. 본 발명에 사용될 수 있는 LPS는 그램-음성 박테리아로부터 추출되고, Galanes 등(Eur. J. Biochem. 9:245(1969)) 및 Skelly 등(Infect. Immun. 23;287(1979))의 방법을 이용하여 정제될 수 있다. 포유류에 대한 비-시토킨성 공력제의 효과적인 투여량 범위는 중량 kg 당 약 15 ㎍ 내지 15 mg, 바람직하게는 중량 kg 당 약 300 ㎍ 내지 12 mg이다. 포유류에 대한 경구 타입 I 인터페론의 효과적인 투여량 범위는 최대 효과 투여량이 식별되지 않는 1,000 내지 150,000 units이다.

물질 및 방법

하기 실험에서 다음 물질 및 방법들이 이용된다.

동물. 8주령의 SJL/J 마우스를 잭슨 연구소(Jackson Laboratories, BAr Harbor, ME)로부터 구입하였다. 동물들은 표준 실험실 먹이와 물이 자유로운 상태로 유지되었다. 동물들은 실험실 연구 협회의 실험 동물 취급에 관한 협정의 지침에 따라 유지되었다(the guideline for the Committe on Care of Laboratory Animals of the Laboratory Research Council: Pub. #DHEW:NIH, 85-23, 1985년 수정).

항원 및 시약. MBP는 Deibler 등(Prep. Biochem. 2:139 (1972))의 변형 방법의 의해 뇌조직으로부터 정제되었다. 프로테인 함량 및 순도는 겔 전기 영동법 및 아미노산 분석에 의해 관찰되었다. 히스톤, 달걀 리소자임(hen egg lysozyme) 및 오발부민을 Sigma(St. Louis, MO)로부터 구입하였다.

내성의 유발. 경구 내성 또는 활성 억제를 위해, 마우스에 1 mL 인산염 완충 식염수(PBS)에 용해된 0.5 mg의 MBP 또는 0.25 mg의 COP-1, 또는 PBS 단독을, 1-게이지 스테인레스 스틸 동물 주사용 니들(Thomas Scientific, Swedesboro, NJ)을 이용한 위관삽입법으로 주입하였다. 동물들에게는 2-3 일 간격으로 5 회 주입하였으며, 면역화 이틀전에 마지막 주입을 하였다.

EAE의 유도. 적극적으로 유도되는 질환을 위해, 미코박테리움 튜베르쿨로시스 4 mg/mL 및 완전 프로인트 보조액(CFA)을 함유하는 PBS 0.1 mL에성의 MBP 100 ㎍으로 마우스의 왼쪽 발에서 마우스를 면역화하였다.

임상학적 평가. 동물들은 EAE의 발병에 대해 매일 블라인드 방식으로 검측되었다. EAE의 임상학적 심각도는 다음과 같이 등급지워진다: 0, 질병 없음; 1, 사지 끌기; 2, 뒷다리 마비; 3, 뒷다리 대마비; 4, 사지마비; 및 5, 죽음. 각각의 동무이 완전히 회복할(죽을) 때까지 질병이 발병한 때(대조군 마우스의 경우, 대개 활성 면역화 이후 9 일 경과)부터 총일자를 산측함으로써 질병 기간을 측정하였다.

조직학. 병리학적 변화들의 조직학적 분석이 EAE가 유도된 동물들에서 수행될 수 있다. 채용 전이(adoptive transfer, 또는 질병 유도) 후에 15 일째에 척수가 제거되고, 10% 중성 완충 포르말린으로 고정되었다. 파라핀 섹션을 제조하고, 표준 방법(Sobel et al. J. Immunol. 132:2393(1984))에 의해 룩솔 패스트 블루-헤마톡실린(Luxol fast blue-hematoxylin) 및 에오신으로 염색하였다. 척수 조직은 각 동물에 대해 동일한 방식으로 샘플링되고, 연조직 및 뇌막에서 섹션당 염증성 병소의 수(20 이상의 클러스터 집적된 염증성 셀들)를 블라인드 방식으로 등급화하였다(Sobel et al., 전술한 바와 같은 인용 문헌).

통계학적 분석. 임상학적 스케일을 등급 샘플들에 대한 이-테일드 윌콕슨 랭크 총합 테스트(two-tailed Wilcoxon rank sum test)로 분석하고, 각 군 사이의 발병률을 비교하는 데 질병 카이-제곱 분석을 이용하고, 스튜던트 t-테스트(Student's t-test)를 이용함으로써 평균 비교를 수행하였다. 개별 실험의 경우, 각 군당 5 마리의 동물들이 일반적으로 이용되었다.

다음의 실시예들은 본 발명을 예시하고자 하는 것이며, 본 발명의 범위가 이에 국한되는 것은 아니다.

〈실시예 1: TGF-β 유도의 평가〉

혈청이 없는 배양 상등액에서 TGF-β 활성의 측정

혈청이 없는 배양 상등액을, Kehri 등의 J. Exp. Med. 163:1037(1986) 또는 Wahl 등의 J.Immunol. 145:2514(1990)에 개시된 바와 같이, 내성화된 마우스로부터 수집하였다. 간략하게는, 먼저, 조절자 셀을 증식 배지에서 항원(50 μL/mL)으로 8 시간 동안 배양하였다. 그 후에, 셀들을 3 회 씻어주고, 혈청이 없는 배지에 재현탁시켜, 72 시간 동안 배양하고 수집한 후에 평가 전까지 냉동시켰다.

상등액내에서 TGF-β 함량 및 동일 형태 타입의 측정을, Danielpour 등(Danielpour et al, J. Cell. Physiol. 138:79(1989))에 따라 밍크 폐 상피 조직 셀 라인(American Type Culture Collection, Bethesda, MD#CCL-64)을 이용하여 수행하고, 전술한 바(Danielpour et al, Growth Factors 2:61(1989))와 같은 샌드위치 엔자임 결합 면역 흡수 분석(ELISA: Enzyme Linked Immunosorbent Assay)였다. 활성 TGF-β 퍼센트를 샘플의 선행 산 활성화가 없는 분석에 의해 측정하였다.

또는, 트랜스웰(transwell) 배양 시스템을 사용하여 생성되는 TGF-β의 레벨을 표시할 수도 있다. 이 배양 시스템은 셀 증식의 억제 작용으로서 TGF-β의 생성을 측정한다.

이러한 평가, 또는 유사한 평가들은 본 발명의 방법을 이용하는 효과적인 면역 억제 작용을 측정하는 한 가지 방법으로서 사용될 수 있다.

〈실시예 2: 경구 COp-1 및 경구 IL-4 또는 경구 IL-10의 조합에 의한

마우스에서의 EAE의 억제〉

다음 실험을 통해, 경구 COP-1를 경구 IL-4 또는 IL-10과 조합하는 효용성을 나타내었다. 앞에서 약술된 방법은 다음과 같다:

마우스 군

마우스에게 다음과 같이 5회 주입하였다.

제 1 군: 대조군으로서 오발부민(OVA: 500 ㎍)

제 2 군: OVA(1 mg) + IL-4(1 ㎍)

제 3 군: OVA(1 mg) + IL-10(1 ㎍)

제 4 군: MBP(500 ㎍)

제 5 군: MBP + IL-4(1 ㎍)

제 6 군: MBP + IL-10(1 ㎍)

제 7 군: COP-1(250 ㎍)

제 8 군: COP-1(250 ㎍) + IL-4(1 ㎍)

제 9 군: COP-1(250 ㎍) + IL-10(1 ㎍)

마지막 주입하여 2일 경과 후에, 마우스를 CFA내의 MBP로 면역화하였다. 미코박테리움 튜베르쿨로시스(MT) 4 mg/mL을 함유하는 현탁액 0.1 mL내의 마우스 MBP 100 ㎍으로 면역화함으로써, SJL/J, 8주령 암컷 마우스 내에서 EAE가 유도되었다. 그 후에, 0 일째와 2 일째에 백일해 독소(150 ng/마우스)를 주사하였다. 질환 발병에 대해 35일 동안 동물들이 관찰되었다. 동물들이 9 일째부터 시작하여 매일 질병의 징후에 대해 0 내지 5의 스케일 측면으로 관찰되었다.

이 실험 결과로부터, COP-1 + IL-4, 또는 COP-1 + IL-10의 주입이 질환의 발병을 현저히 지연시키고, 치사율을 감소시키고, 및/또는 평균 및 최대 임상학적 등급을 감소시킨다는 것을 알 수 있었다. 게다가, COP-1과 조합하여, 전술한 바와 같은 투여량으로 IL-4 또는 IL-10을 주입함으로써, COP-1, MBP, 또는 시토킨 단독을 주입하는 것과 비교하여 그의 억제 효과가 현저히 증가됨을 알 수 있었다.

〈실시예 3: COP-1 및 IL-4의 경구 투여에 의한 다발성 경화증의 억제〉

MS의 악화-경감 형태를 갖는 환자 60 명을 무작위적으로 3 군으로 나누었다. 제 1 군에는 COP-1이 20 mg/day의 투여량으로 경구적으로 제공되었다. COP-1은 전술한 바와 같이 인산염-완충 식염수(PBS)로 투여되었다. 제 2 군에는 매일 10,000 units의 투여량으로 경구 IL-4가 제공되었다. 제 3 군에는 PBS내의 COP-1(20 mg) 및 IL-4(10,000 units)가 매일 경구 투여로 제공되었다. 각 치료법은 2 년 동안 매일 실시되었다.

환자들의 임상학적 통계는 Kurtzke 장기 무력화 상태 척도(Expanded Disability Status Scale)을 이용하여 치료 시작 전에 측정되었다. 각 군의 환자들은 치료 수행중에 매 3 개월씩 평가 측정되었다. IL-4와 COP-1가 투여된 환자들은 장기 무력화 상태 척도에 대한 COP-1이나 IL-4만으로 단독 치료된 환자들의 등급보다도 현저히 큰, 그들의 Kurtzke 단위 등급의 향상을 나타내었다.

Claims

다발성 경화증에 걸린 포유류에서의 자기 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 상기 자기 면역 반응이 다발성 경화증과 관련된 것이며, 상기 포유류에 다음과 같이 투여하는 것으로 이루어지는 방법:

(i) 소정량의 COP-1를 점막 경로로 투여하고,

(ii) Th2-증진 시토킨 활성을 갖는 소정량의 비-인터페론성 폴리펩티드를 투여하고, 상기 COP-1 및 상기 폴리펩티드의 양은 조합하여 상기 자기 면역 반응을 억제할 수 있도록 하는 데 유효한 양임.
제 1 항에 있어서, 상기 COP-1을 경구 투여하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 COP-1 및 폴리펩티드의 양이 조합하여, COP-1 및 상기 폴리펩티드를 단독으로 투여함으로써 얻어지는 치료 효과와 비교시에, 상기 반응을 치료하는 데 실질적으로 좀더 효과적인 것인 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 폴리펩티드가 Th2-증진 시토킨 활성을 갖는 IL-4 및 그의 단편으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 방법.
제 4 항에 있어서, 상기 폴리펩티드가 IL-4인 방법.
제 5 항에 있어서, 상기 IL-4의 아미노산 서열이 상기 포유류와 동일한 종으로부터 유도된 것이며, 이를 경구 투여하는 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 폴리펩티드가 Th2-증진 시토킨 활성을 갖는 IL-10 및 그의 단편으로 이루어진 군 중에서 선택된 것인 방법.
제 7 항에 있어서, 상기 폴리펩티드가 IL-10인 방법.
제 8 항에 있어서, 상기 IL-10이 상기 포유류와 동일한 종으로부터 유도된 것인 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 포유류가 설치동물이고, 상기 질환이 다발성 경화증의 설치동물 모델인 방법.
제 1 항에 있어서, 상기 포유류가 인간이고, 상기 질환이 다발성 경화증인 방법.
COP-1 및 IL-4의 조합으로 이루어지며, 상기 COP-1 및 IL-4의 양이 조합하여 다발성 경화증의 치료에 유효한 것인, 점막 투여 가능한 다발성 경화증 치료용 의약 조성물.
제 12 항에 있어서, 경구용 의약 조성물로 이루어진 조성물.
제 12 항에 있어서, 상기 COP-1 및 IL-4의 조합이 다발성 경화증 치료에 대해 COP-1이나 IL-4의 단독인 경우보다 좀더 유효한 조성물.
제 12 항에 있어서, 상기 COP-1 및 IL-4가 정제로 조합된 조성물.
제 12 항에 있어서, COP-1 및 IL-4가 캡슐로 조합된 조성물.
COP-1 및 IL-4의 조합으로 이루어지며, 상기 COP-1 및 IL-10의 양이 조합하여 다발성 경화증의 치료에 유효한 것인, 다발성 경화증 치료용 경구 의약 조성물.
제 17 항에 있어서, 상기 COP-1 및 IL-10의 조합이 다발성 경화증 치료에 대해 COP-1이나 IL-10의 단독인 경우보다 좀더 유효한 조성물.
제 17 항에 있어서, 상기 COP-1 및 IL-10이 정제로 조합된 조성물.
제 17 항에 있어서, COP-1 및 IL-10이 캡슐로 조합된 조성물.
(1) 알라닌, 글루탐산, 리신, 및 티로신의 폴리머를 약 6:2:5:1의 혼합물내 몰비로 필수적으로 함유하는 폴리펩티드의 혼합물, 및 (2) IL-4를, 조합하여 유효량으로 경구 투여하는 것으로 이루어지는 다발성 경화증의 치료 방법.
(1) 알라닌, 글루탐산, 리신, 및 티로신의 폴리머를 약 6:2:5:1의 혼합물내 몰비로 필수적으로 함유하는 폴리펩티드의 혼합물, 및 (2) IL-10을, 조합하여 유효량으로 경구 투여하는 것으로 이루어지는 다발성 경화증의 치료 방법.