JPH09511990A

JPH09511990A - 経口寛容および／またはＴｈ２増強サイトカインを用いた自己免疫疾患の治療

Info

Publication number: JPH09511990A
Application number: JP7526522A
Authority: JP
Inventors: エルウェイナー，ホワード; チェン，ヨウハイ
Original assignee: ブリガムアンドウィミンズホスピタル
Priority date: 1994-04-08
Filing date: 1995-04-07
Publication date: 1997-12-02
Also published as: HU9602751D0; CA2187345A1; NO964200L; BR9507452A; AU695883B2; EP0752879A4; NO964200D0; WO1995027500A1; KR970702067A; HUT76101A; IL113301A0; AU2246795A; EP0752879A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、バイスタンダー抗原に対する経口寛容を誘導して自己免疫反応を抑制するように、Ｔｈ２-増強サイトカイン活性を備えた非インターフェロンポリペプチドと組み合わせて、ミエリン塩基性タンパク質またはプロテオリピドタンパク質等のバイスタンダー抗原を経口投与することによって、多発性硬化症等の自己免疫疾患を治療する方法である。

Description

【発明の詳細な説明】経口寛容および／またはＴｈ２増強サイトカインを用いた自己免疫疾患の治療発明の技術分野本発明は、経口寛容誘導の使用による自己免疫疾患の低減力における改良に関する。特に、本発明は、自己免疫反応または応答を低減するＴｈ２-増強サイトカイン活性を備えたポリペプチドの経口投与と共に、自己抗原またはより一般的にはバイスタンダー抗原を経口（または吸入）投与することに向けられている。本発明の他の態様は、自己免疫反応の低減におけるＴｈ２-増強サイトカイン（すなわち、Ｔｈ-２反応の増強またはＴｈ-１反応の阻害によりＴｈ-２反応に免疫系を偏らせる(bias)サイトカイン）の経口使用に関する。発明の背景自己免疫疾患は、正常な自己の組織に向けられた異常な免疫反応によって特徴づけられる。哺乳動物の自己免疫疾患は、関連する免疫応答（または免疫反応）のタイプに基づいて、一般に異なる二つのカテゴリー、すなわち細胞仲介性（Ｔ細胞仲介性）疾患と抗体仲介性疾患の一方に分類される。細胞仲介性自己免疫疾患の非限定的な例は、多発性硬化症（ＭＳ）、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、自己免疫性甲状腺炎（ＡＴ）、糖尿病の自己免疫段階（若年型糖尿病あるいはＩ型糖尿病）および自己免疫ブドウ膜網膜炎（ＡＵＲ）を含む。抗体仲介性自己免疫疾患は、非限定的に、重症筋無力症（ＭＧ）および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を含む。両方のカテゴリーの自己免疫疾患が、現在のところ、非特異的に全身的に免疫反応を抑制する薬剤、すなわち異常な免疫反応を選択的に抑制することができない薬剤で治療されている。このような薬剤の非限定的な例は、メトトレキサート、シクロホスファミド、イムラン（アゾチオプリン）およびシクロスポリンＡを含む。プレドニソン及びメチルプレドニソロン等のステロイド化合物（並びに非特異的免疫抑制剤）も、多くの場合に用いられている。現在用いられている上記薬剤の全てが、細胞及び抗体仲介性自己免疫疾患に対して限界のある効力しか持たない。さらに、上記の薬剤は、顕著な毒性及び他の副作用を有し、さらに重要なことは、最終的に、治療されている患者に“全体的な”免疫抑制を引き起こしてしまう。言い換えれば、薬剤を用いた長期におよぶ治療は、病原に対する正常な防御免疫応答をダウンレギュレートし、それによって感染の危険を増加してしまう。さらに、長期にわたる全体的な免疫抑制を受けた患者は、悪性疾患、腎臓疾患および糖尿病等の、治療による合併症を引き起こす危険性が高い。自己免疫疾患の従来の治療における欠点を克服するための継続した努力により、本発明者およびその共同研究者らは、自己免疫疾患（並びに、移植片拒絶反応およびレトロウイルス性神経疾患等の関連するＴ細胞仲介性炎症疾患）の治療に使用できる方法および薬剤を工夫した。これらの治療は、寛容誘発剤（トラライザー）として、自己抗原、バイスタンダー抗原、あるいは自己抗原またはバイスタンダー抗原の疾患抑制フラグメントまたはアナログを経口または吸入で用いる寛容誘導の概念に基づく。この研究の主要部は、出願中のＰＣＴ特許出願１９９３年２月２５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０１７０５、１９９１年３月４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０１４６６、１９９０年１２月１７日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９０／０７４５５、１９９０年７月１６日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９０／０３９８９、１９９１年１０月１０日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０７４７５、１９９３年８月１７日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０７７８６、１９９３年９月２４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０９１１３、１９９１年１０月３１日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０８１４３、１９９１年３月２９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０２２１８、１９９３年４月２０日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０３７０８、１９９３年４月９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０３３６９および１９９１年１０月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０７５４２に記載されている。自己抗原およびバイスタンダー抗原は、以下に定義する。自己抗原、および好ましくは本質的に自己抗原の免疫優性エピトープ領域からなるフラグメントの非経口投与が、クローナルアネルギーと呼ばれるメカニズムを介して免疫抑制を誘発することがわかった。クローナルアネルギー、すなわちＴ細胞非応答は、特定の抗原に特異的な免疫攻撃性Ｔ細胞の非活性化を引き起こし、結果的に、前記抗原に対する免疫応答を顕著に減少する。しかして、一度、ミエリン塩基性タンパク（ＭＢＰ）等の自己抗原に特異的な自己免疫反応促進Ｔ細胞がアネルギーを受けると、その抗原に対して増加しなくなる。アネルギーを受けたＴ細胞が増殖できないことにより、ＭＳに見られる神経組織損傷等の自己免疫疾患の症状による組織損傷を引き起こす免疫攻撃反応が低減される。また、一回の投与で、トリガーアクテイブ抑制(trigger active suppression)よりも実質的に大量の、自己抗原または免疫優性フラグメントの経口投与によっても、アネルギーを介した寛容、すなわちクローン削除（clonal deletion）を誘発することができるという事実もある。しかしながら、クローナルアネルギーは、投与された抗原が、アネルギーを受けるべき免疫攻撃性Ｔ細胞によって認識される特定の抗原の場合にのみ、誘発される（純粋なバイスタンダー抗原は、アネルギーを介して寛容を誘発しない）。しかして、抑制するクローナルアネルギーに依存する体制は、ある程度の限界をそなえている。すなわち、自己抗原が解っていないこと、または、異なる抗原に特異的ないくつかのタイプの免疫攻撃性Ｔ細胞があること、あるいは、免疫攻撃性Ｔ細胞が特異的な抗原が経時的に変化しうることである。本願発明者およびその共同研究者らは、自己抗原を用い、かつ、積極的な抑制によってクローナルアネルギーとは異なるメカニズムを進める治療方法を開発した。この方法は、関連するＰＣＴ／ＵＳ９３／０１７０５に広く記載されており、“バイスタンダー抗原”と呼ばれ以下に定義されている、自己免疫攻撃下の組織に特異的な抗原の経口投与を伴う。この治療は、腸のリンパ組織（ＧＡＬＴ(t he gut-associated lymphoid tissue)）、もしくは吸入投与の場合には粘膜のリンパ組織（ＭＡＬＴ(mycosa associated lymphoid tissue)）において、制御（抑制性）Ｔ細胞を誘発する。これらの制御細胞は、血液循環もしくはリンパ循環系に放出され、自己免疫疾患に苦しむ器官または組織へと移動し、その器官または組織の自己免疫攻撃を抑制する。バイスタンダー抗原によって引き出されたＴ細胞は、それらを引き出すのに用いられたバイスタンダー抗原の少なくとも一つの抗原決定基を認識し、自己免疫攻撃の位置に向けられ、そこで形質転換成長因子β （ＴＧＦ-β）、インターロイキン４（ＩＬ-４）またはインターロイキン-１０（ＩＬ-１０）等の抑制因子およびサイトカインの放出を仲介する。この中では、ＴＧＦ-βは、抗原非特異的免疫抑制因子であり、このような現象を引き起こした抗原に関わらず全ての免疫攻撃現象を抑制する。（しかしながら、バイスタンダー抗原を用いた経口寛容は、自己免疫攻撃の近傍だけにＴＧＦ-βの放出を引き起こすため、非全身的な免疫抑制が起こる。）ＩＬ-４およびＩＬ-１０も、抗原非特異的免疫制御サイトカインである。ＩＬ-４は、特にＴｈ２反応を増強する。すなわち、Ｔ細胞前駆体に作用して優先的にＴｈ２細胞へと分化させる。ＩＬ-４も、間接的にＴｈ１の増悪を阻害する。ＩＬ-1０は、直接的なＴｈ１反応の阻害剤である。自己免疫疾患に罹患している哺乳動物をバイスタンダー抗原を用いて経口寛容誘導した後で、本願発明者および共同研究者らは、自己免疫攻撃の部位においてＴＧＦ-β、ＩＬ-４およびＩＬ-１０のレベルが増加したことを見出した。Chen ，Yら，Science，265: 1237-1240，1994. 最近、本願発明者および共同研究者らは、タイプＩインターフェロンもしくはタイプＩインターフェロン活性を備えたポリペプチドを単独で、あるいは自己抗原またはバイスタンダー抗原の経口もしくは吸入投与と共に、経口または非経口的に投与することが、自己免疫疾患の症状を低減するのに有益であることを見出した。実際に、タイプＩインターフェロンの最適以下の投与量でさえ、自己抗原およびバイスタンダー抗原の寛容誘導効果を増強する。この研究は、本願の優先権書類の一つにより詳細に記載されている。タイプＩインターフェロン、特にβ -ＩＦＮは、例えばγ-インターフェロン（ＩＦＮ-γ）の活性阻害等の、ある免疫調節特性を備えていることが知られている。ＩＦＮ-γが、ＭＳを悪化させることが示され、ＭＳの病害の病因に関係するかもしれない。しかして、ＩＦＮ- βは、Ｔ細胞によるＩＦＮ-γの発現阻害能力のために一部有効である。Ｔ細胞表面のクラスII主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の発現を減少するＩＦＮ-β ポリペプチドの能力、およびサプレッサーＴ細胞の活性を増す能力も、非経口的に用いられたＩＦＮ-βの寛容促進免疫調節特性の原因であると考えられる。経口投与されたＩＦＮ-βが、単独もしくは抗原と共に用いた場合の相乗剤として寛容を誘導するメカニズムは、よく解明されていない（例えば、インターフェロン-βがＴｈ２-増強サイトカインであるか否かは解っていない；いずれにせよ、それは本願の主題ではない）。このポリペプチドは、自己抗原でもバイスタンダー抗原でもない。さらには、哺乳動物の免疫システムにおける物質の効果（並びに、これらの効果がもたらされるメカニズム）は、多くの場合その物質の投与量および／または投与経路に依存して異なる。例えば、アロ抗原の皮下投与は、その抗原に対する免疫反応を誘発する。前記アロ抗原の経口投与は、経口投与された抗原に特異的なＴ抑制細胞を引き出して寛容を誘導し、もしくは（より高い投与量および少ない投与により）アネルギーを誘導する事ができる。同アロ抗原性物質の静脈内投与は、アネルギーによる寛容を誘導することができる。これまで、自己免疫疾患の治療におけるＩＬ-４等の免疫調節（例えばＴｈ２- 増強）サイトカインの経口（もしくは非経口）使用に関しては全く教示がされていない。さらに、自己抗原またはバイスタンダー抗原を用いた経口寛容と共にＴｈ２-増強サイトカインを経口（または非経口）使用することについて全く教示されていない。従って、本願発明の目的の一つは、自己免疫疾患を患っている哺乳動物を治療するための改善されたおよび／またはより簡便な方法を提供することである。本発明のさらなる目的は、もっぱら経口経路を介して自己免疫疾患を患っている哺乳動物を治療するための改善された方法である。本発明の第三の目的は、免疫調節サイトカインの経口投与を介した、自己免疫疾患に罹患している哺乳動物の治療方法である。発明の要旨驚くべきことに、 − ＩＬ-４および、Ｔｈ２-増強サイトカイン活性を備えたペプチドもしくはそのポリペプチドフラグメントの経口または吸入投与は、自己免疫疾患に係る自己免疫反応の低減（抑制）に有益であること、 − （i）自己抗原またはバイスタンダー抗原（もしくはこれらのフラグメント）の経口または吸入投与と、（ii）Ｔｈ２-増強サイトカイン活性を備えたポリペプチドの投与との組み合わせが、自己抗原またはバイスタンダー抗原のみ（あるいはＴｈ２-増強サイトカインのみ）の使用より、自己免疫疾患に係る自己免疫反応の抑制において実質的により効果的であることが解った。さらに、ＩＬ-４の非経口投与は、自己免疫疾患に係る自己免疫反応の抑制効果を備え、かつバイスタンダー抗原の抑制効果を増強する。他の非サイトカイン相乗剤の使用を、先の組み合わせにさらに組み合わせることができる。発明の詳細な説明本明細書に引用された全ての特許出願、特許、および参考文献を、その全体を参照としてここに取り込む。争いの際には、本願に開示された定義および解釈を含む記載が優先する。定義本明細書で用いられた場合に、以下の用語は、以下に記載された意味を有する。 “Ｔｈ２-増強サイトカイン”は、天然に発生する抗原非特異的免疫調節物質である。すなわち、（i）通常、制御免疫系細胞によって分泌もしくは誘導される、かつ（ii）Ｔｈ２細胞の頻度を増強する（および／またはＴｈ１細胞を阻害する）。驚くべきことに、単独もしくはバイスタンダー抗原と共にＴｈ２-増強サイトカインを経口投与することは、自己免疫反応または応答を減少することに有益である。このようなサイトカインの非限定的な例は、ＩＬ-４、およびＴｈ２-増強活性を維持したそのフラグメントを含む。しかしながら、ＩＬ-４の経口投与により観察された寛容効果、およびバイスタンダー抗原と共にＩＬ-４を投与するにより観察された寛容増強効果が、ＩＬ-４のＴｈ２-増強特性によるものであるか否かは、解っていない。 “バイスタンダー抗原”あるいは“バイスタンダー”は、タンパク質、タンパク質フラグメント、ペプチド、糖タンパク質、あるいは他の免疫原性物質（すなわち、免疫応答を引き出すことが可能な物質）であって、（i）免疫攻撃下の器官または組織に特異的な化合物もしくはその誘導体であり；かつ（ii）経口または経腸投与により、攻撃下の器官または組織に向けられた制御（サプレッサー）Ｔ細胞（ＣＤ４＋あるいはＣＤ８＋タイプ）を引き出し、そこで少なくとも一つの抗原非特異的免疫抑制因子または免疫制御サイトカイン（ＴＧＦ-β、ＩＬ-４、もしくはＩＬ-１０等）を放出させ、それによって自己免疫破壊に寄与する免疫攻撃性細胞を抑制する。この用語は、自己免疫攻撃に係る自己抗原およびそのフラグメントを含むが、これらに限定されるものではない。さらに、この用語は、免疫システムに正常には露呈されず、自己免疫組織破壊の結果として自己免疫攻撃の位置で露呈される抗原を含む。例としては、熱ショックタンパク質であり、これらは特定の組織に非特異的であるが、通常は免疫系との接触から保護されている。“純粋なバイスタンダー”は、自己抗原ではないバイスタンダー抗原である。 “バイスタンダー抑制”は、自己免疫破壊に寄与する細胞の自己免疫攻撃の位置における抑制である。すなわち、バイスタンダー抗原の摂取（または吸入）によって引き出され、かつ自己免疫破壊に寄与する細胞が観察される部位に集められたサプレッサーＴ細胞から、一つ以上の免疫抑制因子（Ｔｈ２-増強サイトカインおよびＴｈ１-阻害サイトカインを含む）が放出されることによって仲介される。この結果は、抗原非特異的であるが、組織破壊に対する自己免疫応答の局部に限定されたダウンレギュレーションである。 “哺乳動物”は、免疫系を備え、自己免疫疾患を患う疑いのあるあらゆる生物として定義する。 “自己免疫疾患”は、ヒトを含む哺乳動物の免疫系の自発的もしくは誘発された機能不全であって、免疫系が、哺乳動物内の外的免疫原性物質および／または自己由来の物質の間を区別できなくなり、その結果、自己組織および物質を外因性であるかのように扱い、それらに対して免疫応答を開始することである。この用語は、ヒトの自己免疫疾患とその動物モデルを含む。 “自己抗原”は、哺乳動物の内部に通常に見られるあらゆる物質またはその一部であり、自己免疫疾患において、免疫制御システムによる攻撃の主要な標的となる。また、この用語は、哺乳動物に投与されたときに自己免疫疾患の特徴を備える状態を誘発する抗原性物質も含む。さらに、この用語は、本質的に、自己抗原の免疫優性エピトープまたは免疫優性エピトープ領域からなる消化性サブクラスを含む。誘発された自己免疫状態における免疫優性エピトープまたは領域は、疾患を誘発するための完全な自己抗原の代わりに用いられる自己抗原のフラグメントである。自己免疫疾患に苦しむヒトでは、免疫優性エピトープまたは領域は、自己免疫攻撃下の器官または組織に特異的な抗原のフラグメントであり、自己免疫攻撃Ｔ細胞の相当な量の割合（絶対的大多数である必要はないが大多数）から認識される。 “治療”は、自己免疫攻撃を弱め、自己免疫組織破壊を予防または遅延することによる、自己免疫疾患の開始を回避または遅延するための予防処置（あるいは、例えば組織学的なその症状等の症状または無症状の兆候を予防するため）と、自己免疫疾患が現れた後の症状の治療的抑制または緩和との両方を含む。自己免疫攻撃または応答の“減少”、“抑制”もしくは“低減”は、攻撃または応答の一つ以上の兆候の部分的な減少または改善を含む。自己免疫応答における“実質的に”増加した抑制効果（あるいは減少または低減）は、自己免疫反応または疾患の一つ以上のマーカー、あるいは組織学的または臨床的な標識の実質的な減少を意味する。非限定的な例は、四肢麻痺スコア(limb paralysis score)または関節炎スコアにおける少なくとも１ユニットの減少、あるいは自己反応性Ｔ細胞(a utoreactive T-cell)頻度における顕著な減少、すなわちインスリン炎スコア(in sulitis scoring)で少なくとも約０．５ユニットの減少である（例えば、Zhang ら.，PNAS，1991，88: 10252-10256に記載されたように測定）。本明細書で用いたように、バイスタンダー抗原と“共に(in conjunction with )”（あるいは“共に(in association with)”）Ｔｈ２-増強サイトカインを投与するとは、バイスタンダー抗原の経口（または吸入）投与の前、実質的に同時、あるいは後を意味する。“実質的に同時”とは、２４時間以内、好ましくはバイスタンダー投与の前後１時間以内を意味する。 “経口”投与は、経口、経腸または胃内投与を含む。さらに、エアゾール形態で吸入投与により、同じ寛容誘導の効果をなすことができ、経口寛容誘導と同等である。（ｉ）“非経口”投与は、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、腹腔内または鞘内投与を含む。動物モデル本明細書を通して、自己免疫疾患の研究用に開発された種々のモデルシステムを挙げることができる。実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）のモデルとしてマウスおよび別の齧歯類で研究されている。当業者は、ＭＳに係る多くの潜在的な免疫治療が、この動物モデルシステムで最初に調べられることを知っている。この疾患は、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）またはプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）とアジュバント（フロイント完全アジュバント、ＦＣＡ等）で免疫することによって誘発される。疾患の誘発に用いられる抗原は、モデルにおける自己抗原である。抗原を用いたこの処置は、単一疾患もしくは脱随疾患の増悪／軽減形態を誘発する（齧歯類のタイプおよび種と誘発のよく知られた詳細に依存する）。誘発された疾患は、自己免疫疾患ＭＳの特徴の多くを備え、その動物モデルとして用いられる。さらに、ミエリンの経口投与を用いた、経口寛容によるＥＡＥの処置の成功、ヒトにおける疾患誘発細胞の頻度を減少することにおける平行した成功、および、いずれにしても、ＭＳの症状の改善が、種々の経口寛容方法の成功を予言するためのモデルシステムとしてのＥＡＥの使用を確証する。疑いのある哺乳動物の後根尾部に油状のヒト型結核菌（Mycobacterium tuberculosis）またはフロイント完全アジュバントを用いて免疫することにより、ヒト慢性関節リウマチのモデルとして使用される疾患が誘発される。同様に、タイプIIコラーゲンと共にアジュバントで免疫しても、ヒト慢性関節リウマチのモデルとして使用できる疾患（コラーゲン誘発関節炎すなわち “ＣＩＡ”）を誘発する。これらの動物モデルも、バイスタンダー抗原を用いた経口寛容の良好な予備実験動物として使用できる。Ｓ抗原またはＩＲＢＰ抗原（インターフォトレセプター結合タンパク質(Inter PhotoReceptor Binding Protein)）とアジュバントでルイスラットを免疫することにより、自己免疫ブドウ膜網膜炎が誘発される。最後に、Ｉ型糖尿病のモデルは、ＮＯＤマウスで自発的に発現する。一つ以上の上記モデルシステムを、本願発明によって提供された効果および改善された治療を証明するために用いることができる。実際に、この抑制機構が抗原非特異的であることから、動物モデルは、バイスタンダー抑制を伴う治療を調べるのに特に適している。それゆえ、経口寛容誘導の場合には、モデルで得られた症状の抑制は、ヒトの自己免疫疾患と動物モデルとの間の実際のまたは潜在的な差異の多くに依存しない。サイトカインは、一般的に、ヒトにおける活性と同じまたは類似した活性を動物モデルが備えているため、Ｔｈ２-増強サイトカインの使用に基づく治療を調べるには、同じ動物モデルが適している。上記動物モデルは、哺乳動物（ヒトを含む）における本発明の利用性を確立するために用いることができる。例えば、二重ブラインド研究(a double-blind st udy)でヒトに経口投与された多発性硬化症自己抗原であるウシミエリンは、重要な患者のサブセット(subset)に相当な利益をもたらした（Weiner，H.ら，Scienc e 259: 1321-1324，1993）。さらに、関節の圧痛、ＡＭ硬直、グリップ強度等の慢性関節リウマチの症状を、コラーゲンが経口投与されたヒトにおいて抑制することに成功した（一日に一回０．１〜０．５ｍｇの投与）（Trentham，Dら.，Sc ience 261: 1727，1993）。最後に、Ｓ抗原を経口で用いた予備的なヒトにおける試みは、ブドウ膜網膜炎に非常に励みとなる結果を示した。大規模なヒトにおける試みが、現在、多発性硬化症、ブドウ膜網膜炎、慢性関節リウマチおよび糖尿病で行われている。現在、これらのヒトにおける試みの全てが、適切な疾患モデルを用いた経口寛容誘導における動物データを確証している。しかして、今や、自己免疫疾患の経口寛容誘導治療に対して予想される動物モデルの有用性は、ヒトの臨床的研究によって実質的に支持されている。以下は、本発明の治療方法に結びつけられた個々の治療について記載したものである。個々に可能な治療の効果について記載し、組み合わせた治療について議論することによって、本願明細書から、当業者であれば、組み合わせて用いた場合に、自己免疫疾患の組織のダメージを低減または減少するという治療効果を理解することができるだろう。バイスタンダー抑制に関する記載−−経口投与クローナルアネルギーとは対照的に、バイスタンダー抗原の経口（または吸入）投与によって仲介される抑制は、自己免疫攻撃の位置に、形質転換成長因子β（ＴＧＦ-β）および／またはインターロイキン４（ＩＬ-４）等のＴｈ２-増強サイトカイン；および／またはインターロイキン１０（ＩＬ-１０）等の一つ以上の免疫抑制因子を放出するターゲッタブル免疫制御Ｔ細胞（targetable immunor eg ulatory T-cells）を引き出すことによって引き起こされる。これらの制御Ｔ細胞は、高レベルのＩＬ-２またはγ-ＩＦＮを放出しない。制御Ｔ細胞が引き出されていることから、その作用メカニズムを積極的抑制と称する。経口（吸入）投与された抗原と同じ抗原決定基によって誘導された場合にのみ、制御Ｔ細胞が免疫抑制サイトカインを放出（または放出を誘発）したとしても、引き出された制御細胞によって放出された免疫抑制サイトカインは、抗原に特異的ではない。器官または組織の自己免疫破壊に寄与している細胞が集中している哺乳動物内の箇所に免疫制御Ｔ細胞を集めることにより、自己免疫攻撃の近傍で免疫制御物質が放出され、攻撃に係る全ての種類の免疫系細胞が抑制される。サプレッサーＴ細胞は、組織または器官特異的抗原を用いた経口（または吸入）寛容誘導に反応して引き出されたため、サプレッサーＴ細胞の標的は、破壊的な細胞が集中するであろう自己免疫疾患における免疫攻撃を受ける器官または組織である。しかして、バイスタンダー抗原は、自己抗原または自己抗原の免疫優性エピトープとすることができる。あるいは、バイスタンダーは、自己抗原ではない別の組織特異的抗原とすることができ、このため関連する自己抗原が同定される必要はない。より詳細には、組織特異的（バイスタンダー）抗原に関するバイスタンダー抑制の積極的な抑制メカニズムの例は、以下の通りである。組織特異的（バイスタンダー）抗原が経口（または経腸、すなわち直接胃に）投与された後、小腸に到達し、そこで小腸壁下に位置する多数の免疫担当細胞の集合であるいわゆるパイアー斑および絨毛と接触する。次いで、これらの細胞が、脾臓やリンパ節を含む免疫系と伝達する。その結果、サプレッサー（ＣＤ８＋またはＣＤ４＋）Ｔ細胞が誘発され、血液またはリンパ循環系に放出され、自己免疫攻撃の領域に集められ、そこで哺乳動物自身の組織に向けられたＢ細胞および活性化されたヘルパーＴ細胞をダウンレギュレートするＴＧＦ-βおよび／または他の免疫制御物質の放出を引き起こす。Chen，Yら，Science，1994，上掲。このように誘導された抑制は、抗原非特異的である。しかしながら、バイスタンダー抗原が攻撃下の組織に特異的であり、バイスタンダー抗原の摂取によって引き出されたサプレッサー細胞がダメージを受けている組織またはその近傍に見られる免疫攻撃細胞を抑制するという事実により、結果的に得られた寛容は特定の自己免疫疾患（すなわち自己免疫攻撃下の特定の組織）に特異的である。バイスタンダー抗原および自己抗原（並びにそれらのフラグメントおよびアナログ）は、天然材料（前記抗原が正常に見出される組織または器官）から精製することができ、また、当業者によく知られた技術を用いて、細菌、酵母、昆虫（例えばバキュロウイルス(baculovirus)）および哺乳動物細胞に組換えＤＮＡ技術を用いて得ることもできる。可能性のある現行の多くのバイスタンダー抗原のアミノ酸配列が知られている。例えば、Hunt，Cら PNAS(USA)，82: 6455-6459， 1985（ヒートショックタンパク質ｈｓｐ７０）；Burkhardt，Hら，Eur．J．Im munol．21: 49-54，1991（抗原性コラーゲンIIエピトープ）；Touhy，V.K.ら，J ．Immunol．142: 1523-1527，1989（マウスにおけるマウスＰＬＰの脳炎誘発性決定基）；Shinohara，Tら，網膜研究の進歩(In Progress in Retinal Research )，Osborne，N．& Chader，J．Eds，Pergamon Press 1989，pp.51-55（Ｓ抗原）；Donoso，L.A.ら，J．immunol．143: 79-83，1989（ＩＲＢＰ）；Borst，D.E. ら，J．Biol．Chem．264: 115-1123，1989（ＩＲＢＰ）；Yamaki，Kら，FEBS 23 4: 39-43，1988（Ｓ抗原）；Donoso，L.A.ら，Eye Res．7: 1087，1988（ＩＲＢＰ）；Wyborski，R.J.ら，Mol．Brain Res．8: 193-198，1990（ＧＡＤ）を参照。ウシおよびマウスＰＬＰ；ウシ、ヒト、チンパンジー、ラット、マウス、ブタ、ウサギ、モルモットＭＢＰ；ヒトおよびウシコラーゲンα−１（II）およびウシコラーゲンα-１（I）；並びにヒトインシュリンのアミノ酸配列は、周知かつ公開されており、これらの抗原は、当該技術分野でよく知られた組換え技術で合成することができる。これらの抗原のフラグメントは、化学的または組換え技術によって合成することができる。ある組織特異的抗原、例えば、インシュリン、グルカゴン、ミエリン、ミエリン塩基性タンパク質、プロテオリピドタンパク質、コラーゲンＩ、コラーゲンII 等は、商業的に利用できる。バイスタンダー抗原は、機械的な実験で同定することができる。疾患を患っている組織からのあらゆる抗原が、可能性のあるバイスタンダーである。可能性のあるバイスタンダーを動物に与え、その哺乳動物から、ＥＡＥまたはＭＳの場合には血液または脳脊髄液等の脾臓細胞または循環Ｔ細胞を取り出し、同じ抗原を用いてin vitroで刺激する。刺激によって引き出されたＴ細胞を精製し、上清をＴＧＦ-β、ＩＬ-４、ＩＬ-１０または他の免疫制御物質の含有について調べることができる。特に、ＴＧＦ-βは、商業的に利用可能なＴＧＦ-βに対抗するポリクローナル抗体、好ましくはモノクローナル抗体（例えば、RSD System，Minn eapolis，MN または Celtrix Pharmaceuticals，Santa Clara，CAのものが利用可能である）を用いたＥＬＩＳＡによって定量的または定性的に調べることができる。Miller，A.ら，J．Immunol.，148: 1106，1992.あるいは、商業的に利用可能なミンク肺上皮細胞系(mink lung epithelial cell line)を用いた後述する実施例２に記載したような、ＴＧＦ-β検出のための他の既知のアッセイを用いることができる。もし、バイスタンダー抗原が、ＴＧＦ-βを放出しないサプレッサーＴ細胞を引き出したのなら、そのＴ細胞は、同様にＩＬ-４またはＩＬ-１０の分泌についても試験することができる（ＩＬ-４およびＩＬ-１０に対する抗体は、例えばPharmigen，San Diego，CA等から商業的に利用可能である。）。有効なバイスタンダー抗原でない組織特異的抗原は、（自己免疫攻撃の）炎症部位からあまりに隔離されているため、放出された免疫制御サイトカインが、炎症部位からあまりに遠く離れているため、抑制効果を発揮することができないものである。経口的に誘発されたバイスタンダー抑制の効果は、例えば、自己免疫攻撃の標的である器官または組織に向けられた活性化されたＴ細胞クローンの数のような炎症マーカー(inflammation markers)の減少；同じ部位におけるＩＬ-２またはＩＦＮ-γレベルの減少；疾患を患っている器官または組織の組織学的評価（例えば、バイオプシーまたは磁気共鳴画像）；自己免疫疾患に係る臨床的症状の数および／または深刻さの減少によって、評価することができる。バイスタンダー抗原の使用 − 投与量本発明に係るバイスタンダー抗原によって誘導された寛容は、経口（または経腸）もしくは吸入による広範囲の適用量にまたがって投与量に依存する。しかしながら、最少および最大の有効投与量がある。言い換えれば、自己免疫疾患の臨床的および組織学的症状の積極的抑制は、特定の投与量の範囲内で起こるが、疾患、哺乳動物およびバイスタンダー抗原によって変わる。例えば、疾患がマウスにおけるＰＬＰ誘発性ＥＡＥである場合には、バイスタンダーとしてＭＢＰを用いた場合の抑制投与量の範囲は、約０．１〜１ｍｇ／マウス／給餌である（給餌は、例えば１０〜１４日間で５〜７回のように、一日おきに行う）。最も好ましい投与量は、０．２５ｍｇ／マウス／給餌である。ラットにおける同じ疾患の抑制には、ＭＢＰの抑制投与量の範囲は、約０．５〜約２ｍｇ／ラット／給餌であり、最も好ましい投与量は１ｍｇ／ラット／給餌である。ヒトのＭＳ患者に有効な投与量は、ＭＢＰを経口寛容誘導剤(oral tolerizer)として用いた場合には、一日あたり約１〜約１００ｍｇ、好ましくは約１〜約５０ｍｇであり、約３０ｍｇ／日が最適である（数ヶ月から数年間にわたって毎日もしくは一日おきに投与する）。慢性関節リウマチでは、タイプＩ、タイプIIまたはタイプIIIコラーゲンのいずれかを投与されるヒトにおける有効投与量は、約０．１〜約１ｍｇ／日、好ましくは０．１〜０．５ｍｇ／日である。ラットにおけるアジュバント誘発性リウマチでは、有効なコラーゲン投与量は、ＥＡＥと同じ給餌スケジュールで約３〜約３０マイクログラム／給餌である。投与量または頻度を最適化するために、患者を観察することが望ましい。患者に対する正確な投与量および頻度は、当該技術分野でよく認識されているように、患者の疾患の段階、兆候の頻度および深刻さ、並びに患者の体調に依存して変化させることができる。このような最適化は、好ましくは個々に状況に応じて行われる。免疫抑制に必要な投与量の最適化は、ここに記載したガイドラインがあれば、機械的な実験だけを含む。疾患の深刻さの評価は、疾患のタイプに依存して周知の方法に基づいて行うことができる。このような方法は、限定することなく、以下の方法を含む：ＭＳ：一定時間経過後の攻撃の深刻さおよび数；障害の進行的蓄積（例えば、発展した障害状態スケール(the Expanded Disability Status Scale)等で測定可能）；脳における病変の数および大きさ（例えば磁気共鳴画像によって観察可能）；並びに自己攻撃性Ｔ細胞の頻度。ＥＡＥ：以下のように採点される四肢麻痺：０−疾患なし；１−低下した活性、びっこをひいた尾部（limp tail）；２−軽い麻痺、不安定な歩行；３−中位の麻痺、四肢が広げられた状態；４−四肢麻痺；５−死亡。ＲＡ：関節の腫れ、関節の圧痛、朝の痛み（morning stiffness）、握力、関節画像技術(joint imaging techniques)。ＡＵＲ：視力；目のＴ細胞の数および目の“くもり(cloudiness)”。Ｉ型糖尿病：膵臓β細胞機能（例えば、ＯＧＴＴグルコース寛容試験によって評価される）。ＮＯＤモデル：インスリン炎および糖尿病発症の遅延。ＣＩＡ：４本の各足における病変した関節の数、および０=正常；１=赤みのみ；２=赤みと腫れ；３=深刻な腫れ；および４=関節の奇形の、１-４の独断的なスケールのいずれかに段階付けることに基づいた関節炎のスコア。全体の関節炎のスコアは、全ての足のスコアの合計である。最大の関節炎スコアは、疾患の進行を通してその動物に最も高いスコアである。この段階付け方法によれば、最も高い関節炎スコアは１６である（４本の足ｘ足あたりのスコア４）。対照の患者または動物が症状を悪化させる条件下における症状の安定化は、抑制治療の効果の一つの指標である。改善に関する他の基準は、ステロイドまたは他の抗炎症薬物等の他の薬物、およびメトトレキサート、皮下インターフェロン等の生物反応調節剤の投与量の減少または廃止の能力である。バイスタンダー抗原の最適な投与量は、上述のように評価された最も有益な効果を生むものである。有効投与量は、上述したように疾患が治療されていることを特徴付ける少なくとも一つのマーカー、症状もしくは組織学的証拠の、少なくとも統計的または臨床的に顕著な低減を引き起こすものである。（臨床的に顕著な低減とは、特定の自己免疫疾患の当業者である臨床医によって観察されるものである。）ＩＬ-４処置と組み合わせた場合には、その組み合わせが自己免疫反応を低減することにおいてより効果的である場合を除いて、バイスタンダー抗原の投与量は、バイスタンダー抗原の経口または経腸投与が単独で行われる場合の投与量と同じにするべきである。しかしながら、ＩＬ-４のレベルは、ＩＬ-４を単独で用いた場合の量、すなわち最適以下の量(suboptimal)と同じにすることができる（すなわち、ＩＬ-４を単独で使用した際には効果がないが、バイスタンダー抗原の寛容効果を高めるには十分な量）。バイスタンダー抗原の有効投与量および最適な量を確認することは、当業者であれば容易である。例えば、哺乳動物およびヒトにおける投与量は、比較的低い投与量（例えば１マイクログラム）から始め、徐々に増加させ（例えば対数的増加）、ＴＧＦ-β（および／またはＩＬ-４および／またはＩＬ-１０）分泌細胞の数を測定し、かつ／または血中の免疫攻撃Ｔ細胞の数および活性化を評価し（例えば、限界希釈分析および増殖能力等）、かつ／または上述したように疾患の深刻さを評価する。最適な投与量は、血中に最大量の抑制サイトカインを生成する量および／または疾患の症状を最大限に低減する量である。有効投与量は、疾患が処置されたことを特徴付ける少なくとも一つの症状の、少なくとも統計的もしくは臨床的に顕著な低減を引き起こす量である。バイスタンダーの最大有効投与量は、動物において徐々により高い投与量を調べ、次いでヒトに推定することによって確認することができる。例えば、齧歯類に対する上記の投与量に基づいて、ヒトに対するＭＢＰの最大有効投与量は、約５０〜１００ｍｇ／摂食と推定される。同様に、ヒトに対するコラーゲンIIの最大有効投与量は、約１ｍｇ／日と推定される。本発明は、自己免疫疾患の危険性のある個人における自己免疫疾患の開始を予防するために有利に用いることができる。例えば、Ｉ型糖尿病に罹る危険のある患者の同定方法は、現在行われ、信頼性があり、最近、米国糖尿病協会（Americ an Diabetes Association(ADA)）から支持されている。（特に組み合わせた形態で）Ｉ型糖尿病の疑いを評価する高い診断価値を備えた種々のアッセイ系が開発されている（Diabetes Care 13: 762-775，1990．一つの好ましいスクリーニング試験の詳細は、当業者が利用できる。（Bonifacio，E.ら，The Lancet 335:1 47-149，1990）。実質的な観点から、ほとんどの自己免疫疾患の開始を予防することは、糖尿病の場合に最も重要である。他の自己免疫疾患ＭＳ、ＲＡ、ＡＴおよびＡＵＲは、実質的な組織損傷が起こる前に、組織破壊のより早期段階で宣告されるので、これらの疾患の予防処置は、糖尿病の場合ほど重要ではない。糖尿病では、実質的に全ての膵臓島細胞が実質的に破壊される前に、有効な処置を行うことが重要である。島細胞が破壊された後では、この治療は効果がない。自己免疫疾患、並びに、経口または吸入形態で投与した場合に前記疾患を処置するのに有効とされる、組織または器官特異的な、確認済みのあるいは可能性のあるバイスタンダー抗原に関する非限定的なリストを、以下の表１に記載する。それぞれの疾患について挙げられた抗原の組み合わせの投与（ＩＬ-４と共に、または組み合わせずに）も、疾患の治療に効果的であることが予想される。バイスタンダー抗原およびＴｈ２-増強サイトカインは、吸入によって投与することができる。吸入されるべきバイスタンダーの量は、一般的に経口投与の投与量よりも少量である。吸入によって投与されるべきＴｈ２-増強サイトカインの量も同様に少量であると予想される。吸入治療の有効量は、上記と同様の方法を用いて査定することができる。どの自己免疫疾患に関しても、関連する組織の抽出物および特定のバイスタンダー抗原またはそのフラグメントは、経口寛容誘導剤として用いることができる。言い換えれば、バイスタンダー抗原は精製される必要がない。例えば、ミエリン（異なる種から誘導することができる）はＭＳに用いられ、膵臓細胞抽出物はＩ型糖尿病に用いられ、脾性細胞抽出物は、移植拒絶反応（厳密に言えば自己免疫現象ではない）の防止に用いられ、かつ筋抽出物は筋炎の治療に用いられる。しかしながら、一つ以上の各抗原またはフラグメントを投与することが好ましい。しかして、本発明によれば、Ｉ型糖尿病を治療する際に、有効量（上述のように決定された量）のグルカゴンを経口投与することができる。グルカゴンは、膵臓に特異的に存在する。しかしながら、グルカゴンは、Ｉ型糖尿病によって破壊される膵臓β細胞に発現されないので、明確には自己抗原ではない（グルカゴンは、もっぱらα細胞、異なる細胞タイプに見出される）。しかして、グルカゴンは、“純粋な”バイスタンダーではない、すなわち、自己抗原活性を有するようには見えない。（おそらく、グルカゴンのバイスタンダー活性は、α細胞からの分泌による膵臓細胞間環境における高い部位濃度によるものであろう。）インシュリンは、Ｉ型糖尿病に対してバイスタンダー活性を有する。現在のところ、インシュリンが自己抗原であるか否かについては解っていないが、抗インシュリン自己抗体はＩ型患者に見出されている。しかしながら、その作用メカニズムはどうであれ、経口、経腸または吸入用インシュリン製剤は、膵臓β細胞の自己免疫破壊を予防することによってＩ型糖尿病およびその動物モデルの抑制に効果的である。多発性硬化症およびその動物モデルでは、ＭＢＰの疾患誘発および非誘発フラグメントの両方が、ＭＢＰ誘発疾患だけでなくＰＬＰ誘発疾患に対してもバイスタンダー活性を備えている。ラットでは、バイスタンダーの給餌によって、ほとんどクラスＩに限定されたＣＤ８⁺サプレッサー細胞を産生するが、マウスではＣＤ８⁺サプレッサーとＣＤ４⁺制御細胞の両方が産生される（ＣＤ４⁺細胞は、おそらくクラスIIに限定される）。Chen，Y.ら，Science，1994，上掲。慢性関節リウマチおよびその動物モデルでは、タイプＩ、タイプIIおよびタイプIIIコラーゲンが経口寛容誘導剤としての活性を備えている。他のコラーゲンも、おそらく類似した活性を有する。ブドウ膜網膜炎およびその動物モデルでは、Ｓ抗原およびＩＲＢＰおよびこれらのフラグメントがバイスタンダー活性を備えている。バイスタンダー抗原のフラグメントも用いることができる。使用可能なフラグメントは、オーバーラッピングペプチド法(the overlapping peptide method)を用いて同定することができ、給餌された動物のＴ細胞は、ＴＧＦ-β、および／またはＩＬ-４および／またはＩＬ-１０の分泌について試験することができ、さらにサブタイプ（ＣＤ８⁺および／またはＣＤ４⁺）によって同定することができる。経口投与された自己抗原およびバイスタンダー抗原は、制御Ｔ細胞を引き出し、それによってＴＧＦ-βおよび／またはＩＬ-４およびＩＬ-１０の産生および／または放出を誘発する。このようなＴ細胞の一つは、ＣＤ４⁺サプレッサーＴ細胞としてＥＡＥに対して経口寛容誘導されたマウスに同定され、ＣＤ８⁺サプレッサーＴ細胞は、ラットに同定される。例えばＭＢＰの自己抗原の免疫優性エピトープでさえも、このような制御Ｔ細胞を誘発することができる。他の上記エピトープは、哺乳動物にバイスタンダー抗原を与え、抗原のフラグメントを認識する哺乳動物のＴ細胞から単離すること（しかして、抑制フラグメントを同定すること）によって、あるいは純粋な（未給餌）動物に防御を養子移入することができるバイスタンダー給餌哺乳動物からＴ細胞を同定することによって同定することができる。バイスタンダー抗原は、単独で、もしくは自己抗原と組み合わせて投与することができる。自己抗原投与は、上述した、１９９３年２月２５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０１７０５、１９９１年３月４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０１４６６、１９９０年１２月１７日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９０／０７４５５、１９９０年７月１６日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９０／０３９８９、１９９１年１０月１０日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０７４７５、１９９３年８月１７日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０７７８６、１９９３年９月２４日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０９１１３、１９９１年１０月３１日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０８１４３、１９９１年３月２９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０２２１８、１９９３年４月２０日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０３７０８、１９９３年４月９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９３／０３３６９および１９９１年１０月１５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１／０７５４２に記載の通りに行われる。少なくとも二つの自己抗原（および／または自己抗原のフラグメント）、より広くは少なくとも二つの他のバイスタンダー抗原（および／またはバイスタンダーフラグメント）の共投与(co-administration)により、自己免疫疾患の有効な抑制がもたらされることが予想される。さらに、他のサイトカインおよび非サイトカイン相乗剤を、バイスタンダー抗原のみ、あるいはバイスタンダー抗原とＴｈ２-増強サイトカインを用いた経口寛容効果を増強するために、治療に組み合わせることができる。他のサイトカイン相乗剤（タイプＩインターフェロン）の経口使用は、出願中の米国特許出願第０８／２２５３７２号に記載されている。本発明で使用される非サイトカイン相乗剤の非限定的な例は、種々のサブタイプのE.coliおよびSalmonella等の広範囲のグラム陰性細菌の細菌性リポポリサッカリド類（LPS，Sigma Chemical Co.，S t．Louis，MO; Difco，Detroit，MI; BIOMOL Res．Labs.，Plymouth，PA）、リピトＡ（Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO; ICN Biochemicals，Cleveland， OH; Polysciences，Inc.，Warrington，PA）；Deres，K.ら，Narure，342: 561- 564，1989に記載の通りに得られるトリパルミトイル-Ｓ-グリカリルシステイニル-セリル-セリンに共有結合したペプチド（Ｐ₃Ｃ５５）、もしくはBraun，V.， Biochim．Biophys．Acta 435: 335-337，1976に記載されたように得られるE.col iの“ブラウンズ(Brauns)”リポタンパク質等の免疫制御リポタンパク質；およびその相乗能力が（自己免疫反応の低減と組みではないが）Sun，J-Bら.，1994 PNAS（USA）91，1994年11月に記載されているコレラトキシンβ-鎖（ＣＴＢ）を含む。ＬＰＳが好ましいが、リピドＡは特に好ましい。リピドＡは、完全なＬＰＳ分子より毒性が低いので、本発明における使用に特に好ましい。本願発明に用いられるＬＰＳは、グラム陰性細菌から抽出され、Galanesら(Eur．J．Biochem ．9: 245，1969)およびSkelly，R.R.,ら(Infect．Immun．23: 287，1979)の方法を用いて精製される。哺乳動物への非サイトカイン相乗剤の有効投与量は、Ｋｇ重量あたり約１５μｇ〜約１５ｍｇであり、好ましくはｋｇ重量あたり３００μ ｇ〜１２ｍｇである。哺乳動物に対する経口タイプＩインターフェロンの有効投与量は、最大有効投与量を確認していないが、１０００〜１５００００ユニットである。本発明におけるＴｈ２-増強サイトカインのみの経口使用本発明に基づいて、自己免疫疾患を抑制するために、Ｔｈ２-増強サイトカインの経口、経腸、あるいは吸入投与を用いることができる。Ｔｈ２-増強サイトカインの例は、ＩＬ-４である。ＩＬ-４は、天然源（正規にＩＬ-４を産生するＴ細胞）から精製することができ、当業者によく知られた技術を用いて、細菌、酵母、昆虫および哺乳動物細胞に組換えＤＮＡ技術を用いて得ることもできる。さらに、ＩＬ-４は、商業的なものを利用できる。ヒトＩＬ-４をコードするＤＮＡ配列は、Yokotaら，Proc．N atl．Acad．Sci．USA 83: 5894，1986に記載されている。本発明によれば、ＩＬ-４の投与経路は、好ましくは経口または経腸である。好ましい経口または経腸薬学的製剤は、例えば、有効量のＩＬ-４を含む丸薬、液体、またはカプセルを含むことができる。本発明に係る経口（または経腸）製剤は、それぞれ、当該技術分野で周知であるように、薬学的に使用できるキャリア、希釈剤、充填剤、可溶化または乳化剤および塩類を含む不活性な成分を含んでもよい。例えば、タブレットは、当該技術分野で周知である固形状キャリアを用いた通常の工程に従って調製してもよい。本発明で用いられるカプセルは、ゼラチンまたはセルロース誘導体等の薬学的に使用できる物質から調製することができる。経口投与形態の放出持続経口輸送システムおよび／または腸コーティングについても十分に考察されており、例えば、１９８７年１１月３日に発行された米国特許第４７０４２９５号；１９８５年１２月３日に発行された米国特許第４５５６５５２号；１９８２年１月５日に発行された米国特許第４３０９４０４号；および１９８２年１月５日に発行された米国特許第４３０９４０６号に記載されている。固形状キャリアの例は、デンプン、糖、ベントナイト、シリカ、および他の共通に用いられるキャリアを含む。本発明の製剤で用いられるキャリアおよび希釈剤のさらなる非限定的な例は、塩溶液、シロップ剤、ブドウ糖および水を含む。複数の投薬ユニットの投与により（カプセルまたはタブレットもしくはこれらを組み合わせること等により）必須有効量が達成されるため、各投薬形態の一回の投薬量に含まれる活性成分のユニット含量は、それ自体が有効量を構成する必要はない。一般的に、経口または経腸投与する際に、ＩＬ-４は、一回の投与形態または複数回の投与形態で投与することができる。自己免疫疾患の臨床的および組織学的症状の抑制は、特定の最少投薬後に起こるが、疾患、動物の種、およびサイトカインによって変わる。経口ＩＬ-４では、ヒトに対する有効投与量は、一日に約２０００〜５００００国際単位、好ましくは一日に約５０００〜２００００国際単位の間である。最大投薬量は、実験によって最もよく確認できる。より高い投与量が使用できるが、その必要はないと推定される。もし、ＩＬ-４（または他のＴｈ２-増強サイトカイン）を自己抗原またはバイスタンダーと共に用いるのなら、ＩＬ-４の投薬量がそれ自体で有効である必要はない。しかして、バイスタンダーまたは自己抗原の効果を増強するＴｈ２-増強サイトカインの最適以下の投与量を用いることができる。有効投与量および最適な量を調べることは、この部分に与えられた情報の範囲で当業者の技術範囲である。例えば、哺乳動物およびヒトにおける投与量は、比較的低量のサイトカイン（例えば５００ユニットのＩＬ-４）から始め、徐々に増加させ（例えば対数的に）、例えば、Chen，Y.ら，Science，1994，上掲に記載されているように制御細胞（ＣＤ４⁺および／またはＣＤ８⁺）の誘発、循環Ｔ細胞上のクラスII表面マーカーの減少および／またはよく知られた採点方法で疾患のひどさを採点することによって治療に対する生物学的反応を測定する（例えば、１〜５のスケールで、攻撃数を測定することにより、もしくは関節の腫れ、握力、痛み、視力、薬物治療の減少または中止等による。疾患のタイプに依存する）。最適投与量は、制御Ｔ細胞を最大限に誘発するかあるいは免疫攻撃細胞を最大限に減少し、かつ／または症状を最大限に減少する、測定される生物学的現象に最大の影響を示すものである。有効投与量は、疾患が処置されたことを特徴付ける少なくとも一つの症状の、少なくとも統計的もしくは臨床的に顕著な低減、もしくはマーカー（制御または活性化されたＴ細胞の頻度等）の顕著な変化を引き起こす量である。ＩＬ-４の投与は、３０日から数ヶ月（例えば３−６ヶ月）もしくは数年（例えば２−６年）の間、毎日一回とすることができる。実際に、経口経路の投与によって与えられる副作用の危険性が低ければ、無期限（得られた利益が持続するのであれば）に治療を続けることができる。吸収量を増加するために、プロテアーゼ阻害剤（例えば、大豆トリプシン阻害剤、アプロチニン、アンチパイン(antipain)）を、ＩＬ-４を含む経口投薬形態に添加することもできる。この場合には、ＩＬ-４の投与量を減少することができる。ＩＬ-４の非経口投与を、単独または経口寛容治療に付け足して用いることもできるが、非経口ＩＬ-４が全身的に影響を与えることから、経口ＩＬ-４が好ましい。しかしながら、以下に示すように、非経口ＩＬ-４は、自己免疫疾患の抑制に非常に効果的である。哺乳動物への非経口投与量は、一般的にＩＬ-４の約５００国際単位〜約１００００００国際単位とすることができるが、この領域の上限は、実験によって最もよく確立される。この上限は、非経口ＩＬ-４の最大抑制効果が見られる量であると推定される（すなわち、高い量を用いても効果は失われないが、その必要性がない）。非経口投与は、皮下に、典型的に、一回または分けた投与形態で一日おき（限定ではない）に行われる。治療の組み合わせ驚くべきことに、ＩＬ-４の経口または非経口もしくは吸入投与と共にバイスタンダー抗原を経口（または吸入）投与することが、自己免疫反応を抑制する治療に結果をもたらすことが見出された。組み合わせ治療の効果は、別々に各治療の効果と比較した際に実質的に議論できる。この組み合わせ治療は、ＭＳの動物モデル、ＥＡＥを用いて齧歯類において研究された。これらの研究の実験プロトコルは、以下の実施例に記載されている。ＥＡＥ誘導の前に１０００国際単位のＩＬ-４を経口的に５回投与したマウスの治療では、疾患事件を減少させ、最大臨床スコアを減少させた。経口ラットＩＬ-４（１０００ユニット）とＭＢＰを用いた経口寛容誘導とを組み合わせた治療は、疾患の開始と臨床スコアを低減し、疾患の開始を遅延させた。実際に、疾患開始の遅延は、ＩＬ-４またはＭＢＰを単独で用いた場合（それぞれ、２１日または２２日）より、組み合わせ治療を用いた場合（３０日）の方が実質的に優れていた。バイスタンダーとＴｈ２エンハンサーのそれぞれの量を減少しても効果を示すことができれば、腹腔内ＩＬ-４とバイスタンダー抗原を用いた経口寛容との組み合わせは、ＥＡＥの臨床スコアに相乗的抑制効果を示す。この治療は、各治療を単独で達成した効果と比べて組み合わせて用いた場合に、明らかに、実質的により明瞭な抑制効果を備えている。本発明を行う際に、上述したように、バイスタンダー抗原は必須に投与される。ＩＬ-４は、バイスタンダー抗原と共に投与される。ＩＬ-４の経口または経腸投与は、上述したように行うことができる。非経口投与は、皮下、筋内、または腹腔内経路を介して行うことができ、治療目的から皮下経路が治療に好ましい（しかしながら、以下の実験では腹腔内経路を用いた）。非経口投与の場合には、ＩＬ-４は、殺菌した食塩水または当該技術分野において周知な他のキャリアに製剤することができ、当該技術分野で標準的な賦形剤および安定化剤を含んでもよい。バイスタンダー抗原およびＴｈ２-増強サイトカインの両方を投与することに関する最適な生活規則(regimen)は、ここに記載した情報の範囲で当業者が行うことができる。バイスタンダー抗原またはＴｈ２-増強サイトカインを個々に投与する場合には、決まった変量の投与量、組み合わせ、および治療期間が、自己免疫反応のひどさを測定することができる条件下で成し遂げられる。使用できる投与量および投与パラメーターは、自己反応性Ｔ細胞の数の減少、もしくは疾患の少なくとも一つの臨床的または組織学的兆候の発現またはひどさの減少を含む自己免疫反応の減少を引き起こす量である。治療される種と同じ種から誘導されたＴｈ２-増強サイトカインを利用することが好ましい。以下の例は、本発明を例証するものであって、本発明の範囲を限定するものではない。材料および方法以下に記載した実験では、以下の材料および方法を用いた。動物６〜８週令の雌のルイスラットは、Harlan-Sprague Dawley Inc.(Indianapoli s，IN)から得た。８週令のＳＪＬ／Ｊマウスは、Jackson Laboratories，Bar Ha rbor，MEから得た。随意に与えられた標準的な実験用の餌と水で飼育した。動物は、実験的研究評議会の実験動物の飼育に関する委員会(the Committee on Care of Laboratory Animals of the Laboratory Research Council)（Pub．♯DHEW: NIH，85-23，1985年改訂）のガイドラインにそって飼育された。抗原および試薬モルモットＭＢＰおよびマウスＭＢＰは、Deiblerらが調節した方法で脳組織から精製された（Prep．Biochem．2: 139，1972）。タンパク質含量および純度は、ゲル電気泳動およびアミノ酸分析によって調べられた。ヒストン、鶏卵リゾチームおよびオボアルブミンは、Sigma(St．Louis，MO)から得た。ペプチドは、 Bringham and Women's Hospitalの神経疾患センターのペプチド施設で合成され、ＨＰＬＣで精製された。合成されたＭＢＰペプチドのアミノ酸配列は、７１− ９０、ＳＬＰＱＫＳＱＲＳＱＤＥＮＰＶＶＨＦ（ラットにおける免疫優性脳炎誘発性領域）であり；マウスＰＬＰペプチド１４０−１６０（ラットにおける疾患誘発性エピトープ）および１３９−１５３（マウスにおける疾患誘発性エピトープ）も用いた。マウスＩＬ-４は、Collaborative Biomedical Products，Bedford，MAから得た。寛容誘導経口寛容誘導または積極的抑制のために、ラットに、１８ゲージのステンレススチール動物給餌針（Thomas Scientific，Swedesboro，NJ）を胃内に挿管して、１ｍｌのＰＢＳに溶けた１ｍｇのＭＢＰまたはＰＢＳのみを給餌した。動物は、２〜３日の間をおいて５回給餌され、免疫の２日前に最後の給餌をした。マウスを実験に用いた場合の寛容誘導の摂生は、０．５ｍｇのＭＢＰおよび／または１０００もしくは５０００ユニットのＩＬ-４を寛容誘導に用いること以外は、実質的に同じである。マウスの実験についてのさらなる詳細は、以下に示されている。ＥＡＥの誘導積極的に誘導した疾患に関しては、４ｍｇ／ｍｌのヒト結核菌（Mycobacteriu m tuberculosis）（Difco）を含む等量の完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）に懸濁した５０μｌＰＢＳ中の２５μｇモルモットＭＢＰを用いて、左足の肉趾においてルイスラットの免疫を行った。実験にマウスを用いた場合には、４ｍｇ／ｍｌのヒト結核菌を含む０．１ｍｌのＰＢＳ／ＣＦＡ中の４００μｇのＭＢＰを用いる。臨床的評価ＥＡＥの現象に関して、動物を毎日盲目的に評価した。ＥＡＥの臨床的なひどさを以下のように採点した：０、疾患なし；１、尾を引きずる；２、後足の麻痺；３、後足の対麻痺、失禁；４、四肢麻痺；および５、死亡。疾患の存続期間は、各動物の疾患開始（通常、対照ラットでは能動免疫１０〜１１日後；対照マウスでは、免疫から９日後）から完全回復（または死亡）までの全日数を計算することによって測定した。組織学病理学的変化の組織学的分析を、ＥＡＥを誘導した動物で行うことができる。脊髄を、養子移入（または疾患誘発）から１５日後に除去し、１０％の中性に緩衝したホルマリンで固定した。通常の方法（Sobelら，J．Immunol．132: 2393， 1984）で、パラフィン断片を調製し、ルクソール・ファスト・ブルー-ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。脊髄組織を各動物で同様に採取して、実質および髄膜の断面あたりの炎症病巣数（２０以上の凝集した炎症細胞のクラスター）を無作為に採点した（Sorbelら、上掲）。統計学的分析スコアサンプルについてツー・テイルド・ウィルコキソン・ランク・サム・テスト(a two-tailed wilcoxon rank sum test)で臨床的スケールを分析して、グループ間の疾患の発生率を比較するのにカイ自乗分析を用い、平均の比較をスチューデントのｔ−テスト(student's t-test)を用いて行った。それぞれの実験について、グループあたり５匹の動物を用いた。実施例１：ＴＧＦ-β誘発のアッセイ血清を含まない培養上清のＴＧＦ-β活性の測定。血清を含まない培養上清を、先に開示されたようにして抗原寛容誘導ラットから回収した（Kehriら，J．Ex p．Med．163: 1037-1050，1986; Wahlら，J．Immunol．145: 2514-2419，1990）。簡潔に述べれば、モジュレーター細胞を、増殖培地で抗原と（５０μｌ／ｍｌ）８時間最初に培養した。その後、細胞を３度洗浄し、７２時間培養するために血清を含まない溶媒に再懸濁し、回収して、アッセイまで冷凍した。上清におけるＴＧＦ-β含有量およびイソ型タンパク質の調査を、Danielpourら（Danielpou r，D.ら，J．Cell．Physiol．138: 79-86，1989）に基づいてミンク肺上皮細胞系（American Type Culture Collection，Bethesda，MD ♯CCL-64）を用いて行い、先に開示されたようにして（Danielpourら．Growth Factors 2: 61-71，198 9）サンドイッチ酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＳＥＬＩＳＡ）を行って確認した。活性ＴＧＦ-βのパーセントは、サンプルの先の酸活性化をしないアッセイで調べた。このアッセイは、バイスタンダーとして用いるための候補とされるあらゆる抗原を試験するために用いることができる。このアッセイで測定して最も高い濃度のＴＧＦ-βを産生する、上記抗原、抗原フラグメントおよび／または抗原の量を、本発明の治療方法における使用に最も適した抗原および／または量と見なすことができる。あるいは、以下に記載するトランスウェル培養系(a transwell c ulture system)を、産生されたＴＧＦ-βのレベルを示すために使用することができる。この培養システムは、細胞増殖の抑制の関数としてＴＧＦ-βの産生を測定する。抗原刺激細胞の培養上清中のＩＬ-４および／またはＩＬ-１０の存在は、抗原がバイスタンダーとして使用するのに適していることの指標として役に立つこともある。ＩＬ-４、ＩＬ-１０（およびＴＧＦ-β）は、Chen，Y.ら，Science，19 94，上掲に記載したように各ポリペプチドに向けられた商業的に利用できる抗体を用いてＥＬＩＳＡによって評価することができる。トランスウェル培養孔の大きさが０．４μｍのポリカーボナート半透膜に分けられた二つの区画からなり、直径が２４．５ｍｍであるデュアルチャンバートランスウェル培養システム（Costar，Cambringe，MA）を用いた。細胞と細胞とが直接接触しないように接近させて細胞を共インキュベート(coincubated)できるように、二つのチャンバーを１ｍｍ離す。トランスウェル培養における増殖反応のin vitro抑制を測定するために、例えば先に記載されているようにして（Ben-Nun，A.ら，Eur．J．I mmunol．11: 195，1981）培養および維持された５x１０⁴の抗原系細胞(antigen line cells)を、１０⁶の照射された（２５００rad）胸腺細胞と共に、下方のウェルで６００μｌの増殖培養液中で培養した。経口寛容誘導されたラットまたは対照（ＢＳＡを給餌）の脾臓細胞（２００μｌ中に５ｘ１０⁵細胞）を上方のウェルに添加した。脾臓細胞は、最後の給餌から７−１４日後に除去されたものであり、単一の細胞懸濁液をステンレススチールメッシュを通して脾臓を加圧することによって調製した。抗原（５０μｇ／ｍｌ）は２０μｌの量に添加される。半透膜によってモジュレーター細胞がレスポンダー細胞から隔てられているため、照射する必要がない。ある実験では、モジュレーター細胞はレスポンダー細胞と共に下方のウェルに添加されるが、このような場合には、培養に移す直前にモジュレーター細胞を照射する（１２５０rad）。増殖培地は、２x１０⁵Ｍの２-メルカプトエタノール、１％のピルビン酸ナトリウム、１％のペニシリンおよびストレプトマイシン、１％のグルタミン、１％のＨＥＰＥＳバッファー、１％の非必須アミノ酸、および１％の自己の血清を補足したＲＰＭＩ１６４０（Gibco La boratories，Grand Island，NY）からなる。各トランスウェルにつき４回行った。トランスウェルは、３７℃、湿気を含んだ６％ＣＯ₂と９４％の空気雰囲気中で、７２時間インキュベートした。５４時間培養した後、各下方ウェルを４μＣｉの［³Ｈ］チミジンを用いてパルスし、７２時間おいて、丸底の９６ウェルプレート（Costar）の３つのウェルに再度接種(reseed)し、ファイバーグラスフィルター上に取り入れて標準液体シンチレーション技術を用いてカウントした。抑制のパーセント=１００ｘ（１−モジュレーターと培養されたレスポンダーのΔ ｃｐｍ／レスポンダーのΔｃｐｍ）。実施例２：ウシＰＬＰまたはマウスＭＢＰを用いた経口寛容バイスタンダー抑制を証明するために、５−６匹の雌の７週令ＳＪＬ／Ｊマウスのグループ（Jackson Labs，Bar Harbor，ME）を、マウスＰＬＰペプチド１４０−１６０を用いて、０日目および７日目に免疫して、以下の処置をした。グループ１．ヒストン給餌（０．２５ｍｇ／マウス）２．マウスＭＢＰ給餌（０．２５ｍｇ／マウス）３．ウシＰＬＰ給餌（０．２５ｍｇ／マウス）（自己抗原抑制）使用したＰＬＰペプチドは、ウシＰＬＰの疾患誘発フラグメント１４０−１６０であった。このペプチドは、アミノ酸配列ＣＯＯＨ−ＰＬＡＹＴＩＧＶＦＫＤＰＨＧＬＷＫＧＬＣＮＨ₂であり、先のアミノ酸残基に対応している。マウスＭＢＰとウシＰＬＰの両方は、経口投与した際にＰＬＰペプチド誘導ＥＡＥのダウンレギュレートに同等に効果的である。非特異的タンパク質であるヒストンは、経口投与した際にＥＡＥ抑制に効果がない。しかして、バイスタンダー抗原、この場合にはマウスＭＢＰは、ウシＰＬＰでＥＡＥを誘導した動物に経口投与した場合に、効果的にＥＡＥを抑制した。モルモットＭＢＰ残基７１−９０（実施例１に示したようにラットにおけるモルモットＭＢＰの主要な免疫優性エピトープ）でＥＡＥを誘発したルイスラットに種々のペプチドを給餌する効果についても、研究した。ＥＡＥは、０．２５ｍｇのモルモットＭＢＰアミノ酸残基７１−９０と完全フロイントアジュバントとを免疫することによって誘導し、ＥＡＥにおける種々のモルモットＭＢＰペプチドの給餌効果を調べた。経口投与された全体のモルモットＭＢＰおよび２１−４０のモルモットペプチドは、モルモットＭＢＰ７１−９０によって誘導されたＥＡＥのダウンレギュレートにおいて、７１−９０残基自体を経口投与した場合と同様に効果的であった。モルモットＭＢＰペプチド１３１−１５０は、ラットにおける寛容誘導には効果がなかった。また、胃液による分解を防止し、その生物学的効果を増強するＳＴＩと共にペプチドを給餌した。全体のＭＢＰに対するＤＴＨ反応（ＰＢＳ中２５μｇのＭＢＰの注入に対する）は、ＭＢＰまたは、ＭＢＰペプチド２１−４０または７１−９０のいずれかを給餌することにより抑制された。しかしながら、モルモットＭＢＰペプチド７１−９０に対するＤＴＨ反応は、全体のＭＢＰもしくはモルモットペプチド７１−９０を給餌した場合にのみ抑制され、モルモットＭＢＰペプチド２１−４０によって影響を受けない。これは、ペプチド７１−９０を用いて疾患誘導したマウスに給餌した場合に、ＭＢＰフラグメント７１−９０がバイスタンダー抑制と関係しないという結論に一致する。Chen，Y.ら，Scienc e，1994，上掲参照。上記実験は、経口投与された抗原がバイスタンダーサプレッサーとして作用するか否かを決定するアッセイ系を例証するものである。全体の抗原は、フラグメントの代わりに用いることができた。実施例３：ＭＢＰを用いた経口寛容誘導と経口ＩＬ-４との組み合わせによるマウスＥＡＥの抑制４ｍｇ／ｍｌのヒト結核菌（ＭＴ）を含む０．１ｍｌの懸濁液中の４００μｇのマウスＭＢＰで０日目に免疫し、０および２日目に百日咳毒素を注入（１００ｎｇ／マウス）することによって、８週令の雌のＳＪＬ／ＪマウスにＥＡＥを誘発した。−１０、−８、−６、−４、および−２日目に、マウスの異なるグループに以下の処置を行った。グループ１．鶏卵リゾチーム（ＨＥＬ）給餌（０．２５ｍｇ／マウス）２．マウスＩＬ-４給餌（１０００国際単位／マウス）３．マウスＭＢＰ給餌（０．５ｍｇ／マウス）４．マウスＭＢＰ給餌（グループ３と同じ）＋ＩＬ-４（グループ２と同じ）３５日間、疾患の開始を観察した。０〜５までのスケールで、９日目から毎日疾患の兆候を採点した。結果は、以下の通りであった：経口ＩＬ-４とＭＢＰの実質的に同時の投与は、疾患に関するＭＢＰの抑制効果を明らかに増大し、開始を遅延させた。１０００国際単位／マウス／給餌のＩＬ-４のみでは、ＭＢＰを単独で給餌した場合と同様の疾患抑制効果を示した。この種の実験は、Ｔｈ２-増強サイトカインのみあるいはＴｈ２エンハンサーとバイスタンダーとの組み合わせによる治療効果を評価するために使用することができる。投与量は、投与量の変化の効果を観察するために調節できる。実施例４：ＭＢＰを用いた経口寛容誘導と経口ＩＬ-４との組み合わせによるマウスＥＡＥの抑制４ｍｇ／ｍｌのヒト結核菌（ＭＴ）を含む０．１ｍｌの懸濁液中の４００μｇのマウスＭＢＰで０日目に免疫し、０および２日目に百日咳毒素を注入（１００ｎｇ／マウス）することによって、８週令の雌のＳＪＬ／ＪマウスにＥＡＥを誘発した。−１０、−８、−６、−４、および−２日目に、マウスの異なるグループに以下の処置を行った。グループ１．マウスＩＬ-４給餌（５０００国際単位／マウス）２．マウスＭＢＰ給餌（０．５ｍｇ／マウス）３．マウスＭＢＰ給餌（グループ２と同じ）＋ＩＬ-４（グループ１と同じ）３５日間、疾患の開始を観察した。０〜５までのスケールで、９日目から毎日疾患の兆候を採点した。この実験は、上記の投与量におけるＩＬ-４のみの給餌が、実質的に疾患の開始を遅延し、死亡を減少し、および／または平均および最大臨床スコアを低減することを示す。さらに、上記投与量のＩＬ-４の給餌は、ＭＢＰと組み合わせた場合に、ＭＢＰのみを給餌した場合に見られる抑制効果を顕著に増大させた。実施例５：ＭＢＰを用いた経口寛容誘導と経口ＩＬ-４との組み合わせによるマウスのＰＬＰ誘発性ＥＡＥの抑制４ｍｇ／ｍｌのヒト結核菌（ＭＴ）を含む０．１ｍｌの懸濁液中の１００μｇのマウスＰＬＰ１３９−１５１で０日目に免疫し、０および２日目に百日咳毒素を注入（１００ｎｇ／マウス）することによって、８週令の雌のＳＪＬ／ＪマウスにＥＡＥを誘発した。−１０、−８、−６、−４、および−２日目に、マウスの異なるグループに以下の処置を行った。グループ１．マウスＩＬ-４給餌（５０００国際単位／マウス）２．マウスＭＢＰ給餌（０．５ｍｇ／マウス）３．マウスＭＢＰ給餌（グループ２と同じ）＋ＩＬ-４（グループ１と同じ）３５日間、疾患の開始を観察した。０〜５までのスケールで、９日目から毎日疾患の兆候を採点した。この実験は、上記の投与量におけるＩＬ-４のみの給餌が、ＰＬＰ誘発性疾患の開始を顕著に遅延させ、死亡を減少し、および／または平均および最大臨床スコアを低減することを示す。さらに、上記投与量のＩＬ-４の給餌は、純粋なバイスタンダー抗原ＭＢＰと組み合わせた場合に、ＭＢＰのみを給餌した場合に見られる抑制効果を顕著に増大させた。実施例６：タイプIIコラーゲンを用いた経口寛容誘導と経口ＩＬ-４との組み合わせによるマウスのアジュバント関節炎の抑制４ｍｇ／ｍｌのＭＴを含む懸濁液中の３００μｇのウシタイプIIコラーゲンで皮下に免疫することにより、オスのＤＢＡ／１ＬａｃＪマウスに関節炎を誘発した。−１４、−１２、−１０、−８、−６、−４、および−２日目に、マウスの異なるグループに以下の処置を行った。グループ１．マウスＩＬ-４給餌（５０００国際単位／マウス）２．マウスコラーゲンタイプII給餌（０．５ｍｇ／マウス）３．マウスコラーゲンタイプII給餌（グループ２と同じ）＋ＩＬ-４（グループ１と同じ）６０日間、関節炎の開始を観察した。＋１０日目から、０〜４までのスケールで、関節炎の兆候を採点した。各動物の関節炎のスコアは、４本の各足のスコアの合計である。この実験は、上記の投与量におけるＩＬ-４のみの給餌が、実質的に疾患の開始を遅延し、および／または平均および最大臨床スコアを低減することを示す。さらに、上記投与量のＩＬ-４の給餌は、タイプIIコラーゲンと組み合わせた場合に、コラーゲンのみを給餌した場合に見られる抑制効果を顕著に増大させた。実施例７：ＮＯＤ糖尿病の抑制における経口ＩＬ-４のみ、およびインシュリンとの組み合わせ４週令の非肥満性糖尿病（ＮＯＤ：non-obese diabetic）マウスのグループ（各グループあたり３匹）を以下のように処置した。１．オボアルブミン給餌（１ｍｇ／マウス）２．ウマのインシュリン給餌（１ｍｇ／マウス）３．マウスＩＬ-４給餌（５０００ユニット／マウス）４．インシュリン給餌（グループ２と同じ）＋ＩＬ-４（グループ３と同じ）一日おきに１０回投与した。実験から約３週後に、以下のパラメータを評価した：インシュリン炎および／または糖尿病開始の時期この実験は、上記の投与量のＩＬ-４のみの給餌が、上記臨床的指標を顕著に減少することを示す。さらに、上記投与量のＩＬ-４の給餌は、インシュリンと組み合わせた場合に、インシュリンのみを給餌した場合に見られる抑制効果を顕著に増大させた。実施例８：ＭＢＰを用いた経口寛容誘導とＩＬ-４の腹腔内投与との組み合わせによるマウスのＥＡＥの抑制４ｍｇ／ｍｌのヒト結核菌（ＭＴ）を含む０．１ｍｌの懸濁液中の４００μｇのマウスＭＢＰで０日目に免疫し、０および２日目に百日咳毒素を注入（１００ｎｇ／マウス）することによって、８週令の雌のＳＪＬ／ＪマウスにＥＡＥを誘発した。マウスの異なるグループに以下の処置を行った。グループ１．０日目および３日目におけるマウスＩＬ-４腹腔内注入（５０００国際単位／マウス／注入）２．−１０、−８、−６、−４、および−２日目におけるマウスＭＢＰ給餌（０．５ｍｇ／マウス）３．マウスＭＢＰ給餌（グループ２と同じ）＋ＩＬ-４注入（グループ１と同じ）３５日間、疾患の開始を観察した。０〜５までのスケールで、９日目から毎日疾患の兆候を採点した。この実験は、上記の投与量におけるＩＬ-４のみの注入が、疾患を減少し、疾患の開始を遅延させ、臨床スコアを低減することを示す。この効果が大きいため、ＩＬ-４の非経口投与が、経口ＭＢＰのみによって与えられた防御力を増大できるか否かを評価することができず、また、自己免疫反応の顕著な抑制を示した（上記指標によって測定）。実施例９：ＭＢＰを用いた経口寛容誘導とＩＬ-４の腹腔内投与との組み合わせによるマウスのＥＡＥの抑制４ｍｇ／ｍｌのヒト結核菌（ＭＴ）を含む０．１ｍｌの懸濁液中の４００μｇのマウスＭＢＰで０日目に免疫し、０および２日目に百日咳毒素を注入（１００ｎｇ／マウス）することによって、８週令の雌のＳＪＬ／ＪマウスにＥＡＥを誘発した。マウスの異なるグループに以下の処置を行った。グループ１．−１０、−８、−６、−４、および−２日目におけるマウスＭＢＰ給餌（０．５ｍｇ／マウス）２．マウスＩＬ-４腹腔内注入（５００国際単位／マウス）３．マウスＩＬ-４腹腔内注入（１０００国際単位／マウス）４．マウスＩＬ-４腹腔内注入（２０００国際単位／マウス）５．マウスＭＢＰ給餌（グループ１と同じ）＋ＩＬ-４（グループ２と同じ）６．マウスＭＢＰ給餌（グループ１と同じ）＋ＩＬ-４（グループ３と同じ）７．マウスＭＢＰ給餌（グループ１と同じ）＋ＩＬ-４（グループ４と同じ）ＩＬ-４注入は、実施例８のように投与する。３５日間、疾患の開始を観察した。０〜５までのスケールで、９日目から毎日疾患の兆候を採点した。この実験は、上記の減少した投与量におけるＩＬ-４の非経口投与が、ＭＢＰと組み合わせた場合に、ＭＢＰのみを経口投与して得られる抑制効果を顕著に増大できることを示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/28 ＡＢＧ 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/12 ＡＤＰ 38/43 ＡＢＬ 37/02 ＡＣＶ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＮＯ (72)発明者チェン，ヨウハイアメリカ合衆国ペンシルバニア 19008 ブルーモールチェリーヒルレイン 205

Claims

【特許請求の範囲】１．哺乳動物に、（i）経口または経腸投与経路を介して投与される、一定量のバイスタンダー抗原および（ii）Ｔｈ２-増強サイトカイン活性を備えた一定量の非インターフェロンポリペプチドを投与することを含み、前記抗原およびポリペプチドの量が、それらを単独で用いた場合よりも、それらを組み合わせて投与した場合に、前記自己免疫反応を低減するのに効果的であることを特徴とする、Ｔ細胞仲介型もしくはＴ細胞依存型の自己免疫疾患であると診断された哺乳動物の自己免疫反応を抑制する方法。２．前記抗原およびポリペプチドの量が、それらを単独で投与した場合に得られる抑制効果と比べて、それらを組み合わせて投与した場合に前記反応を抑制するのにより効果的である、請求項１記載の方法。３．前記ポリペプチドが、Ｔｈ２-増強サイトカイン活性を備えたＩＬ-４およびそのフラグメントからなる群から選択された、請求項１記載の方法。４．前記ポリペプチドが、ＩＬ-４である、請求項１記載の方法。５．前記ＩＬ-４が、前記哺乳動物と同じ種から得られた、請求項４記載の方法。６．前記ポリペプチドが経口投与される、請求項１記載の方法。７．前記哺乳動物が齧歯類であって、前記疾患が多発性硬化症の齧歯類のモデルである、請求項１記載の方法。８．前記哺乳動物がヒトであって、前記疾患が多発性硬化症である、請求項１記載の方法。９．前記バイスタンダー抗原が、ミエリン、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、これらのタンパク質の免疫寛容を誘導するフラグメント、およびこれらの少なくとも二つの組み合わせからなる群から選択される、請求項７記載の方法。１０．前記バイスタンダー抗原が、ミエリン、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、これらのタンパク質の免疫寛容を誘導するフラグメント、およびこれらの少なくとも二つの組み合わせからなる群から選択される、請求項８記載の方法。１１．前記疾患が、慢性関節リウマチ、コラーゲン誘発性関節炎、およびアジュバント誘発性関節炎からなる群から選択され、前記バイスタンダー抗原が、タイプＩコラーゲン、タイプIIコラーゲン、タイプIIIコラーゲン、これらの免疫寛容を誘導するフラグメント、およびこれらの二つ以上の組み合わせからなる群から選択された、請求項１記載の方法。１２．前記疾患が、Ｉ型糖尿病からなる群から選択され、前記バイスタンダー抗原が、ＧＡＤ、グルカゴン、インシュリン、これらの免疫寛容を誘導するフラグメント、およびこれらの二つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１記載の方法。１３．前記疾患が、ブドウ膜網膜炎およびその動物モデルからなる群から選択され、前記バイスタンダー抗原が、Ｓ抗原、インターフォトレセプターレチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、これらのタンパク質のフラグメント、およびこれらの二つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１記載の方法。１４．哺乳動物に、前記疾患の少なくとも一つの臨床的または組織学的症状を低減するのに効果的な量の、Ｔｈ２-増強サイトカイン活性を備えた非インターフェロンポリペプチドを投与することを含む、Ｔ細胞仲介型もしくはＴ細胞依存型の自己免疫疾患であると診断された哺乳動物の自己免疫反応を低減する方法。１５Ｔｈ２-増強サイトカイン活性を備えたＩＬ-４およびそのフラグメントからなる群から選択されたポリペプチドを投与することを含む、請求項１４記載の方法。１６．前記哺乳動物がヒトである、請求項１４記載の方法。１７．前記ポリペプチドが、経口または経腸投与経路を介して投与されたＩＬ -４である、請求項１４記載の方法。