JP5252682B2

JP5252682B2 - 哺乳動物ｔ細胞のサイトカインの分析方法と関連する一切の疾患の評価法と予防・治療の分析

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Publication number: JP5252682B2
Application number: JP2007504833A
Authority: JP
Inventors: 正人桑原; 健夫酒井
Original assignee: Nihon University
Current assignee: Nihon University
Priority date: 2005-02-25
Filing date: 2006-02-27
Publication date: 2013-07-31
Anticipated expiration: 2026-02-27
Also published as: JPWO2006090874A1; WO2006090874A1

Description

本発明は、哺乳動物のＴ細胞サイトカインの分析方法と関連する一切の疾患の評価法と予防・治療に関するものである。

獲得免疫に関与するヘルパーＴ（Ｔｈ）リンパ球は、生産するサイトカインの相違によりＴｈ１、Ｔｈ２をはじめとするいくつかのサブセットに分類される。インターフェロン（ＩＦＮ）−γ、インターロイキン（ＩＬ）−２などを作るものをＴｈ１細胞と呼び、主としてＩＬ−４，−５，−６，−１０，−１３を作るものをＴｈ２細胞と呼んでいる。Ｔｈ１サイトカインであるＩＦＮ−γはＴｈ２反応を抑制することが知られ、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−１０はＴｈ１反応を抑制する事が知られている。

近年Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞の応答性に対して抑制的に機能するＴｈ細胞とＴ細胞（Ｔｒ）の存在が証明され、特に潜在型ＴＧＦ−β_１を高濃度に生産する細胞をＴｈ３細胞と呼んでいる。腫瘍やアレルギーをはじめとする様々な疾患において、このような複数のＴｈ反応の強弱やバランスの破綻と疾患の関連性が示唆されている。

関連する従来例として、例えば、特開２００５−２０２８号公報に記載のものがある。このものは、Ｔｈ１細胞またはＴｈ１細胞に分泌されるサイトカインの反応（Ｔｈ１反応）により腫瘤の形成が誘導される疾患はＴｈ１−Ｄ（Ｔｈ１疾患）、Ｔｈ２細胞またはＴｈ２細胞に分泌されるサイトカインの反応（Ｔｈ２反応）により腫瘤形成が誘導される疾患はＴｈ２−Ｄ（Ｔｈ２疾患）、Ｔｈ３細胞またはＴｈ３細胞とトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βとの反応（Ｔｈ３反応）により腫瘤形成が誘導される疾患はＴｈ３−Ｄ（Ｔｈ３疾患）のいずれかの疾患において誘導される腫瘤に、インターフェロン−γを主成分とする哺乳動物の免疫反応性腫瘤形成抑制剤を適用することを特徴とするものである。
特開２００５−２０２８号公報

本発明者は、腫瘍やアレルギーをはじめとするレドックス制御、各Ｔｈ反応すなわちThパラダイムパターンの変動する様々な疾患において、このようなＴｈ反応の強弱やバランスの破綻と疾患の関連性があるとの知見に基づいて、Ｔ細胞サブセットが産出するサイトカインの組み合せと疾患の相関関係を明らかにすることにより個体に対する疾患情報の制御が必要であると思い至った。

本発明は、このような課題を達成するために、哺乳動物のＴｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３の各サイトカインを測定する工程と、測定結果から各サイトカインのパラダイムパターンを求める工程と、前記パラダイムパターンとその関連疾患の評価法と予防・治療を関連付ける工程と、を備える、哺乳動物のサイトカインの分析方法であることを特徴とするものである。

本発明者が鋭意検討したところ、Ｔｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３の各サイトカインのパラダイムパターンは、個体によって異なり、それによって固体ごとの免疫力の強さが異なり、また、感染症や癌などの疾患を患っている場合にはこのパターンが異なってくる事が判った。この結果、Ｔｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３の各サイトカインのパラダイムパターンを調べる事により、感染症や癌などの疾患の診断や、これら疾患に対する抵抗力など固体の状態を判断することができる。したがって、このパラダイムパターンを求めることによって固体ごとにもっとも適した治療（テーラーメード医療）を適用する事が可能となる。

パラダイムパターンとはヘルパーＴ細胞であるＣＤ４陽性細胞、Ｔｈ１であるＩＦＮ−γ陽性ＣＤ４陽性細胞、Ｔｈ２であるインターロイキン４陽性ＣＤ４細胞、Ｔｈ３であるトランスフォーミンググロウスファクターβ１陽性ＣＤ４陽性細胞の各細胞数をフローサイトメトリー法により測定し、得られた散布図からヘルパーＴ細胞中のＴｈ１，Ｔｈ２，Ｔｈ３の各細胞の割合を算出したパターンであり、このパターンから免疫反応の質といえるＴｈ１／Ｔｈ２バランスと免疫制御の強さを示すＴｈ３の割合を導き出すことができる

Ｔｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３の各サイトカインのバランスの正常レベルからのずれは、後述の適した薬剤を哺乳動物個体に適用することによって補正することができる。治療の過程で、このバランスをチェックすれば、治療効果の程度を評価することが可能となる。

本発明において、前記Ｔｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３のサイトカインの代表例は、順番に、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−4、ＴＧＦ−β１である。さらに、本発明は、前記Ｔｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３の少なくとも一つのＴｈ反応を制御する薬剤を哺乳動物に投与する工程を含む方法である。さらに、本発明において、パラダイムパターンを求めるために必要なサイトカインの測定の代表例は、各サイトカイン反応を発揮するＴｈ細胞数、即ち、各サイトカインを生成する細胞の数をフローサイトメータを用いて測定することである。これに代えて各サイトカインの濃度を測定してもよい。サイトカインの反応には、人為的な活性化刺激を加えていない無刺激のＴｈ細胞におけるＴｈ反応と人為的な活性化刺激を加えたＴｈ細胞におけるＴｈ反応がある。前者のＴｈ反応は哺乳動物個体における免疫反応を表すものであるので、表現型Ｔｈ反応あるいは活性型Ｔｈ反応と言うことにする。後者のＴｈ反応は哺乳動物が持っている潜在的な免疫反応を表すものであるので、細胞内在型Ｔｈ反応或いは潜在型Ｔｈ反応という。

本願の第２の発明は、哺乳動物のＴｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３の各サイトカインを測定する第１工程と、測定値をコンピュータに入力する第２工程と、コンピュータを用いて各サイトカインのパラダイムパターンを求める第３工程と、前記パラダイムパターンをモニターに表示する工程と、コンピュータの演算手段が、当該パラダイムパターンと、予めメモリに記憶された、各疾患に於ける既知のパラダイムパターンとを比較する第４工程と、を備える、哺乳動物のサイトカインの分析方法である。

このパラダイムパターン同士を比較するために、パラダイムパターンのグレートを示す、基準線(グレーティング直線)をパラダイムパターンから求め、この基準線のグレートをデータベースと比較して、哺乳動物固体のＴｈ反応の傾向、或いは哺乳動物個体の疾病診断、或いは疾病予測を知ることができる。正常でないパラダイムパターンを正常タイプに変化或いは復帰させるために、パラダイムパターンから使用可能な薬剤を予測することができる。

更に本発明は、コンピュータの演算手段が、前記比較の結果、測定されたパラダイムパターンから、測定対象固体の疾患或いは疾患の治療状態を特定する第５工程を備える。さらに他の発明は、この分析方法を実施するためのコンピュータ装置である。

ＴＧＦ-β_１は活性型（酸化）と潜在型(latent form)があり、潜在型は、酸やプラスミンなどにより活性型(activated form)に変換される。本発明では、ＴＧＦ-β_１は腫瘍性疾患の評価の修飾因子となることを明らかにした。このサイトカインはレドックス制御と関連して病態を進展させる。

レドックス制御とは、酸化ストレスにより細胞が発現する機能を修飾することをいう。レドックス(redox)とは酸化・還元が関与する化学反応やその環境をいう。生体内で生じた酸化ストレスは、情報分子としてシグナル伝達系を作動してレドックス制御系に影響する。酸化ストレスの原因となる活性酸素は、ミトコンドリア電子伝達系、好中球のオキシダーゼ、放射線、重金属、アルキル化剤などによって生じる。レドックス制御状態が酸化型に傾いた状態では、細胞が活性酸素などを除去する能力は低下し、高い酸化ストレス下ではＤＮＡが損傷するなどさまざまな障害が発生して、Ｔｈ反応性は低下する。ＴＧＦ−βは抗酸化酵素であるカタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼＧＰＸ、スーパーオキシドジスムターゼＳＯＤ、などの遺伝子発現を抑制する。特に、慢性炎症などでＴＧＦ-βの産生が高まると、このような抗酸化酵素の発現が抑制され、ますます活性酸素の蓄積を招く結果となる。本発明者は、レドックス制御がＴｈ３反応の動態を規定するとの知見を得た。さらに、活性型ＴＧＦ-β_１はＴｈ１反応に抑制的に作用して、繰り返し産生されることにより、症状が悪化していく方向性を固定する作用を有することを明らかにした。本発明における哺乳動物とは、ヒト、ヒト以外の犬や猫などの家畜やその他のものをいう。

本発明によれば、Ｔｈ反応の強弱やバランスの破綻と疾患の関連性があるとの知見に基づいて、Ｔ細胞サブセットが産出するサイトカインの組み合せと疾患の相関関係を明らかにすることにより個体に対する疾患情報の制御が可能となった。

実施例１
５才令の雄のゴールデンレトリバー（顔面腫瘍及び左眼球突出の症状）を使用した。ＭＲ撮像によりシストを伴った腫瘤を確認し、ダイナミックＭＲ撮像法により悪性腫瘍と診断した。

ヘパリン０．５ｍｌを加えたシリンジにて頚静脈より採血し、血液をＰＢＳに倍希釈し、Ficoll氏液に重層、遠心して末梢血中単核球(PBMC)を分離した。この単核球を４×１０^６個／ｍｌとなるように１０％牛血清加ＲＰＭＩ１６４０メディウムに浮遊させる。この細胞浮遊液を刺激群（細胞内在型）と無刺激群（表現型）に分ける。刺激群には、ＰＭＡ４０ｎｇ／ｍｌ、Ionomycin４μｇ／ｍｌを添加しポリクローナルなリンパ球活性化刺激を加える。その後、使役群、無刺激群とも３７℃、５．０％二酸化炭素存在下で一定時間インキューベーションする。それぞれのサイトカインの産生量は、ＩＬ−４が刺激後４時間程度でピークを迎え、ＩＦＮ−γ、ＴＧＦ−βは４時間程度でプラトーとなる。このため、インキューベーションは４時間行う。

インキュベート終了２時間前に、細胞内タンパク質輸送阻害剤であるＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡを４０μｇ／ｍｌ加え、産生サイトカインを細胞内（ゴルジ装置内に）にトラップする。インキュベート終了後、冷ＰＢＳを加えて活性化リンパ球の反応を止め、４℃にて遠心洗浄を２回行う。上清を除去し、５０μｌ×サンプル数の１０％ＦＢＳ加ＲＰＭＩ１６４０を加える。各サンプルに細胞表面抗原に対する標識抗体を加え、氷上で４５分培養してＣＤ４やＣＤ８などの細胞表面タンパク質を染色する。

それぞれのサンプルにIntraprep Reagent1(Beckman Coulter社)を１００μｌ加える。室温で１５分インキュベートし、ＰＢＳを加えて遠心洗浄する。上清を除去し、それぞれのサンプルにIntraprep Reagent2(Beckman Coulter社)を１００μｌ加え、室温で５分間インキュベートする。表面タンパクの染色後、５．５％ホルムアルデヒドにより細胞を固定し、サポニン処理により細胞膜透過性を高め、表現型あるいは細胞内在型Ｔｈサイトカインを測定するサンプルにそれぞれのサイトカインに対する標識抗体を入れ、室温にて２０分間インキュベートする。ＰＢＳを加えて遠心洗浄する。次いで、０．５％ホルムアルデヒド加ＰＢＳ５００μｌに浮遊させ、フローサイトメーターによりＴＨ１／２／３反応を分析する。

得られたデータからＴｈ１／２／３パラダイムパターン（paradigm pattern）を解析し、病期、病態・病勢、薬剤耐性、薬効の評価、薬剤の選択などを評価する。Ｔｈ１，Ｔｈ２，Ｔｈ３の濃度のバランスをグラフ化するに際して、ＣＤ４〔グラフの軸〕とＣＤ８（グラフの軸）というふたつの基準によって、Ｔｈ１サイトカイン（ＩＮＦ−γ）、Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬー４）、Ｔｈ３サイトカイン（TGF-β1）の産生細胞のそれぞれの数を「点」とした散布図をフローアイトメトリーによって得た。なお、Ｔｈ反応とはＣＤ４という印のついたリンパ球（ヘルパーＴ細胞）と各Ｔｈサイトカインの作用と機能を併せ持った集合体の事である。次いで、各Ｔｈ反応を有するＣＤ４(＋)ＣＤ８(−)細胞の数を散布図のなかからカウントし、これを三つの棒グラフとして表した。

図１は、表現型Ｔｈ１／２／３反応における、正常犬と担癌犬とにおける、Ｔｈ１／２／３のパラダイムパターンを示し、図２は細胞内在型Ｔｈ１／２／３反応における、正常犬と担癌犬とにおける、Ｔｈ１／２／３のパラダイムパターンを示した。

パラダイムパターンの映像化は、次のようにして行われる。哺乳動物のＴｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ３の各細胞数をコンピュータに入力し、コンピュータを用いて各サイトカイン細胞のパラダイムパターンが計算され、これがモニターに表示される。

図１及び図２に示すように、固体（正常犬か担癌犬）の相違によって、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）のサブセットが呈する複数のサイトカインの強弱のバランスが異なることが確認できた。したがって、サイトカインのパラダイムパターンと固体の性質や状態を関連付けることができ、このことは、パターンを調べる事によって遺伝子の診断をすること無く、固体の状態を診断することができることを実証したものである。図１及び図２において、図の縦軸はＣＤ４陽性細胞に対する各Ｔｈサイトカイン陽性ＣＤ４陽性細胞の割合（％）を意味する。すなわち、
（Thサイトカイン陽性CD4陽性細胞数／CD4陽性細胞数）×１００（％）、
によって定義される。

次に、Ｔｈ１／２／３反応の少なくとも一つを制御する物質を投与することによって、Ｔｈ１／２／３のパターンを変えることができた。克元勝（マンネンタケ菌糸抽出物）の４５g/headを1日1回を哺乳固体に経口投与した。この物質は、Ｔｈ２反応を抑制し、同時にＴｈ１反応を増強する薬剤である。これを用いて表現型Ｔｈ２反応が優位であった症例に投与した。その結果、Ｔｈ１反応が上昇して病的Ｔｈ反応のインバランスが改善された。

ＤＢ菌（枯草菌の一種の菌体成分）、120mg/head s.i.dを1日1回哺乳固体に経口投与した。この菌は数日間の投与により薬剤耐性を誘導する薬剤である。この薬剤耐性は、ＴＧＦ-β_１の増量によりＳｍａｄ−７が同時に増加し、結果的にNK/NKT活性を抑制した。

担癌宿主では血漿中のＴＧＦ−β_１は正常犬と比較して高値を示し、特に第５病日に高い値を認めた。細胞内サイトカインについては正常犬と比較するとＰＭＡ添加Ionomycine刺激に対するリンパ球の活性は弱かった。各サイトカインの動態は第５病日にＩＦＮ−γが高値を示し、ＩＬ−４は低値を示した。ＴＧＦ−β_１は大きな変動は見られなかった。ＮＫ細胞活性は第３，５病日に著しく上昇したが第７病日には低下が認められた。

本症例のＴｈ反応パラダイムは高濃度のＴＧＦ−β_１の抑制によるアナジーの状態であると考えられた。ＮＫ細胞活性は通常、放射線治療により著しく低下するが、ＢＲＭ投与によりＮＫ細胞活性を増強すると、Ｔｈ２細胞からＩＬ−４産生が抑制され、ＩＦＮ−γ産生が促進されることから、腫瘍の増大、転移の抑制に有効なＴｈ１反応が強化されると考えられる。

実施例２
次に良性腫瘍の例について説明する。レドックス状態が酸化を呈したので、腫瘤中の活性型ＴＧＦ−β_１（Transforming Growth Factor-β１：Th3反応）を測定した結果は以下の通りである。
活性型あるいは潜在型Th2反応サイトカイン/ＴＧＦ−β_１の産生
潜在型/活性型ＴＧＦ−β_１( ng /ml )
血漿中正常値1.70（イヌの潜在型、活性型は検出-）
血漿中潜在型4.94 活性型 -
腫瘤内潜在型＋↑ 活性型18.88
このような結果、治療法を変更して治療したところ活性型ＴＧＦ−β_１は検出されず臨床症状（治療法変更後５６日現在）は著しく改善された。

実施例３
次に、パラダイムパターンから、疾病の診断や予測を自動的に可能にする例について説明する。正常犬、非正常犬（悪性腫瘍、良性腫瘍や感染症など）について、実施例１に基づいて各サイトカイン反応を測定する。Ｔｈ１，Ｔｈ２，Ｔｈ３の各軸からなる３次元の座標空間に、各サイトカインの反応量(細胞数)をトラップする。次いで、この素データを最小二乗法によって因子軸を決定する。この因子軸に直角に交わる因子軸を追加して、この二つの２次元の座標軸に基づいて、各測定値の相関係数を算出する。

次いで、正常犬の群と、各異常犬の群（例えば、悪性腫瘍、或いは良性腫瘍）について、各群の相関係数からＴｈ反応のパラダイムパターンを作成する。各群についえ、各Ｔｈの相関係数の平均を算出する。図３は、パラダイムパターンの一例である。このパラダイムパターンの傾向(グレーティング)が、基準線によって決定される。図３において、３０が基準線の一例である。Ｔｈ１とｔｈ２との関係が相互に相反する状態、即ち、Ｔｈ１サイトカインである、ＩＮＦ−γはＴｈ２を抑制し、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−１０はＴｈ１を抑制する関係にあることから、Ｔｈ１の最大値とＴｈ２の最小値（零）との結線と、Ｔｈ２の最大値とＴｈ１の最小値との結線との交点を通過するものとして、基準線が定義される。この基準線の傾き３２がグレーティングとして評価される。

正常犬の群と、各症例の異常群のそれぞれについて、グレーティングを求めることにより、グレーティングのレベル、例えば、正常レベル、小異常レベル（＋）、中異常レベル（＋＋＋）、大異常レベル（＋＋＋）を策定することができる。グレーティングが高くなるほど、異常レベルが高いことになり、例えば、癌であれば悪性度が高いことを示している。例えば、ａ＜ｂ＜（ａ，ｂは、正の値）としたときに、
正常レベル：グレーティング≦ａ
良性腫瘍：ａ＜グレーティング≦ｂ
悪性腫瘍：ｂ＜グレーティング
の関係を定めることができる。したがって、ある検査対象である固体についての各Ｔｈ反応を測定し、その測定値に基づいてパラダイムパターンを形成して基準線を求め、これを予め定まっているグレーティングのレベルと比較することによって、外科的な検査や遺伝子診断などの、本願発明の検査項目として説明されたもの以外の検査を行うことなしに、検査固体の疾病診断或いは将来の発症を予見することができる。なお、グレーティングのレベルの決定に必要な検査対象固体として、種別、体重別、年齢別、性別などの区別は必要ではないが、ある項目について検査対象固体を区別してもよい。

このグレーティングのレベルはデータベース化されて、コンピュータシステムのメモリに予め記憶されている。検査固体のＴｈ測定値から既述の基準線、グレーティングを求める過程はコンピュータプログラムによって自動化されている。また、検査して得られたグレーティング値とデータベースのグレーティングレベルとの比較、比較のための演算もコンピュータプログラムによって自動化されている。図４は、コンピュータシステムを示すものであり、検査データを入力する入力装置１０と、データベース１６を備えるメモリ１４と、測定値とデータベースを比較して各種演算を実行する演算装置を備えている。データベースは、ＣＤやＤＶＤのような外部記録媒体によって提供されてもよい。

実施例４
図５は、実施例１と同様にして得た、良性腫瘍の場合におけるパラダイムパターンである。表現型Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３反応、細胞内在型Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３反応のいずれにおいても、Ｔｈ３の割合が少ないことが分かる。即ち、既述のグレーティングの評価とＴｈ３の割合の評価によって、悪性腫瘍と良性腫瘍の区別をＴｈ反応のパラダイムパターンから可能になることが分かる。なお、悪性腫瘍および良性腫瘍の場合のパラダイムパターンにおいて、Ｔｈ１に対してＴｈ２の値が増加している点において共通するものの、Ｔｈ３の値については、後者のものが前者のものに比較して顕著に小さくなっていることがわかる。すなわち、Ｔｈ１に比較してＴｈ２が大きい場合に腫瘍の存在が疑われ、Ｔｈ３の値が大きいことによって悪性腫瘍の存在が疑われる。さらに、良性腫瘍の場合、各Ｔｈ反応のパラダイムパターンを表現型および内在型で比較すると、表現型のものではＴｈ３では、基準線より上に相関係数の値が位置しているのに対して、内在型ものでは基準線より下に相関係数の値が位置している。悪性腫瘍の場合は、Ｔｈ３の相関係数の値は表現型および内在型とも基準線より上に位置している。これによっても、悪性腫瘍および良性腫瘍の区別が可能となる。

表現型ＴＨ１／２／３（無刺激群）におけるサイトカイン産生の割合をビジュアル化したグラフである。細胞内在型ＴＨ１／２／３（刺激群）におけるサイトカイン産生の割合をビジュアル化したグラフである。各Ｔｈ反応の相関係数と基準線戸の関係を示す特性図である。各Ｔｈ反応の結果の測定値に基づいて、疾患の予測、診断を自動化するコンピュータシステムのブロック図である。良性腫瘍における、各Ｔｈ反応のパラダイムパターンを示したものであり、（１）は表現型のパラダイムパターンであり、（２）は内在型のパラダイムパターンである。

Claims

哺乳動物のTh1、Th2、及びTh3生体反応の各Th細胞内サイトカインを測定する工程と、各サイトカインのパラダイムパターンを求める工程と、パラダイムパターンと癌又は腫瘍とを関連付ける工程と、を備え、前記Th1、Th2、及びTh3生体反応の各Th細胞内サイトカインが順番に、インターフェロン−γ、インターロイキン−4、TGF-β₁である、哺乳動物のサイトカインの分析方法。
前記パラダイムパターンと癌又は腫瘍とを関連付ける工程が、前記パラダイムパターンのグレーティングのレベルを予め定まっている癌又は腫瘍に関するグレーティングのレベルと比較することを含む、請求項１に記載の方法。
前記Th1、Th2、及びTh3の少なくとも一つのあるいは複数のTh生体反応を制御する薬剤を前記Th細胞を含む液に添加する工程を含む、請求項１または２に記載の方法。
体液中の前記サイトカインを測定する工程をさらに備える、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
前記Th細胞内サイトカインを測定する工程は、表現型Th生体反応と細胞内在型Th生体反応を測定する工程を備える、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
前記パラダイムパターンに、レドックス制御、Th3生体反応に加えTGF-β₁の活性化の行程の評価結果、ならびにΝΚ及び／又はΝΚΤ細胞活性の測定値の少なくとも一つを組み合わせて、癌又は腫瘍を関連付ける、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
前記レドックス制御が、表現型あるいは細胞内在型TGF-β₁に規定される前記Th3生体反応を調整する、請求項６に記載の方法。
哺乳動物のTh1、Th2、及びTh3生体反応の各Th細胞内サイトカインを測定する第1工程であって、前記Th1、Th2、及びTh3生体反応の各Th細胞内サイトカインが順番に、インターフェロン−γ、インターロイキン−4、TGF-β₁である工程と、測定値をコンピュータに入力する第2工程と、コンピュータを用いて各Th生体反応のパラダイムパターンを求める第3工程と、前記パラダイムパターンをモニタに表示する工程と、コンピュータの演算手段が、当該パラダイムパターンと、予めメモリに記憶された、癌又は腫瘍に於ける既知のパラダイムパターンとを比較する第4工程と、を備える、哺乳動物の各Th生体反応の型及びその組み合わせならびに癌又は腫瘍の病態の分析方法。
前記第4工程が、前記パラダイムパターンのグレーティングのレベルを予め定まっている癌又は腫瘍に関するグレーティングのレベルと比較することを含む、請求項８に記載の方法。
前記コンピュータの演算手段が、前記比較の結果、測定されたパラダイムパターンの図示化から、測定対象個体の癌又は腫瘍或いは癌又は腫瘍の病態とその治療方法を特定する第5工程を備える、請求項９に記載の方法。
前記サイトカインを測定する工程は、表現型Th生体反応と細胞内在型Th生体反応を測定する工程を備える、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の方法。
前記パラダイムパターンに、レドックス制御、Th3生体反応に加えTGF-β₁の活性化の行程の評価結果、ならびにΝΚ及び／又はΝΚΤ細胞活性の測定値の少なくとも一つを組み合わせて、癌又は腫瘍を関連付ける、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の方法。
前記レドックス制御が、表現型あるいは細胞内在型TGF-β₁に規定される前記Th3反応を調整する、請求項１２に記載の方法。
Th3生体反応とTh3サイトカインである表現型TGF-β₁の増加と異常な上昇の確認と、これに関連したTh3生体反応の優位性(増強）、さらにレドックス制御の偏重固定化、その結果誘導されるTh1生体反応及び細胞内在型Th1生体反応とTh2生体反応とのアンバランスならびに生体反応の低下に基づく、癌又は腫瘍のテーラーメイド療法の評価方法であって、Th1、Th2、及びTh3生体反応の各Th細胞内サイトカインの測定に基づき、かつ、前記Th1、Th2、及びTh3生体反応の各Th細胞内サイトカインが順番に、インターフェロン−γ、インターロイキン−4、TGF-β₁である、評価方法。
前記パラダイムパターンのグレーティングのレベルを予め定まっている癌又は腫瘍に関するグレーティングのレベルと比較することを含む、請求項１４に記載の評価方法。