JP6028979B2 - 核酸固相合成用リンカー及び担体 - Google Patents
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Description
先ず、合成する核酸の3'末端になるヌクレオシドを、スクシニル基などの開裂性リンカーと、3'−OH基を介してエステル結合させ、固相合成用担体上にあらかじめ担持させる(ヌクレオシドリンカー)。次に、このヌクレオシドリンカーが担持された固相合成用担体を、反応カラムに入れ、核酸自動合成装置にセットする。
以降は核酸自動合成装置の合成プログラムに従い、反応カラム中、一般に以下の工程:
(1)トリクロロ酢酸/ジクロロメタン溶液などの酸により保護ヌクレオシドの5'−OH基の脱保護を行う工程;
(2)ヌクレオシドホスホロアミダイト(核酸モノマー)を活性化剤(テトラゾール等)の存在下、脱保護した5'−OH基ヘのカップリングを行う工程;
(3)無水酢酸などにより未反応の5'−OH基をキャップする工程;及び
(4)含水ヨウ素などによりホスファイトを酸化する工程:からなる合成反応が行われる。この合成サイクルを繰り返し、3'末端から5'末端方向にオリゴヌクレオチドの伸長反応を進めることで、目的の配列を持った核酸が合成される。
最後に、アンモニア水やメチルアミン溶液などにより開裂性リンカーを加水分解させ、合成した核酸を固相合成用担体から切り離す(非特許文献1)。
3'末端がヒドロキシ基を有する核酸は、核酸医薬などの生化学の分野において幅広く求められているため、非常に有用である。このような経緯から、5'末端又は3'末端にヒドロキシ基を有する核酸を合成可能なユニバーサルリンカー及び該リンカーを担持してなるユニバーサルサポートが、求められている。
特に、本発明は、修飾オリゴヌクレオチドを合成する場合にも修飾されたヌクレオシドをあらかじめ担持した固相合成用担体を用意する必要がなく、ユニバーサルに、3'末端にヒドロキシ基を有する核酸を高純度で合成できる固相合成用担体を提供することを目的とする。
〔1〕下記一般式
X1及びX2は、それぞれ独立して、酸により脱離するヒドロキシ基の保護基を表し、
L1及びL2は、それぞれ独立して、アルカリにより切断される連結部分を表し、
R1〜R6は、それぞれ独立して、水素原子;C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基;C1−6アルコキシ基;C1−7アシル基;モノ又はジ−C1−6アルキルアミノ基;又はハロゲン原子を表すか、あるいは、
R2及びR5は一緒になって、それらが結合している炭素原子と共に、(1)オキソ基、(2)C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基、及び(3)C1−6アルコキシ−カルボニル基で置換されていてもよいフェニル基から選ばれる置換基でそれぞれ置換されていてもよい、3〜8員の炭素環又は複素環を形成する。〕
で示される化合物からなる、核酸固相合成用リンカー。
〔2〕L1又はL2の少なくとも一方が、核酸固相合成用担体と連結できる、上記〔1〕に記載の核酸固相合成用リンカー。
〔3〕X1及びX2がジメトキシトリチル基である、上記〔1〕又は〔2〕のいずれかに記載の核酸固相合成用リンカー。
〔4〕下記一般式
X1及びX2は、それぞれ独立して、酸により脱離するヒドロキシ基の保護基を表し、
L1及びL2は、それぞれ独立して、アルカリにより切断される連結部分を表し、
Spは、固相担体を表し、
R1〜R6は、それぞれ独立して、水素原子;C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基;C1−6アルコキシ基;C1−7アシル基;モノ又はジ−C1−6アルキルアミノ基;又はハロゲン原子を表すか、あるいは、
R2及びR5は一緒になって、それらが結合している炭素原子と共に、(1)オキソ基、(2)C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基、及び(3)C1−6アルコキシ−カルボニル基で置換されていてもよいフェニル基から選ばれる置換基でそれぞれ置換されていてもよい、3〜8員の炭素環又は複素環を形成する。〕
で示される構造を有する、核酸固相合成用担体。
〔5〕L1がスクシニル基である、上記〔4〕に記載の核酸固相合成用担体。
〔6〕L1及びL2がスクシニル基である、上記〔4〕又は〔5〕に記載の核酸固相合成用担体。
〔7〕X1及びX2がジメトキシトリチル基である、上記〔4〕〜〔6〕のいずれかに記載の核酸固相合成用担体。
〔8〕Spが多孔質合成ポリマー粒子又は多孔質ガラス粒子の固相担体である、上記〔4〕〜〔7〕のいずれかに記載の核酸固相合成用担体。
〔9〕上記〔4〕〜〔8〕のいずれかに記載の核酸固相合成用担体上で核酸合成反応を行う工程を含む、核酸の製造方法。
〔10〕該核酸合成反応が、固相ホスホロアミダイト法により行われる、上記〔9〕に記載の製造方法。
従って、本発明の核酸合成用担体は、3’末端にヒドロキシ基を有する核酸の自動合成に好適に用いられる。更に、本発明の核酸合成用担体を用いた核酸の製造方法は、従来法のように合成された核酸の3’末端に別途ヒドロキシ基を導入する必要がない。
X1及びX2は、それぞれ独立して、酸により脱離するヒドロキシ基の保護基を表す。
該保護基としては、例えば、トリチル基(Tr)、モノメトキシトリチル基(MMTr)、ジメトキシトリチル基(DMTr)などが挙げられる。これらの保護基は、トリクロロ酢酸又はジクロロ酢酸などのブロンステッド酸のジクロロメタン又はトルエン溶液を用いて脱離することができる。酸による脱保護が容易であることから、X1及びX2はDMTrが好ましい。
R2及びR5は一緒になって、それらが結合している炭素原子と共に、(1)オキソ基、(2)C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基、及び(3)C1−6アルコキシ−カルボニル基で置換されていてもよいフェニル基から選ばれる置換基でそれぞれ置換されていてもよい、3〜8員の炭素環又は複素環を形成する。
(1)ホルミル基、
(2)カルボキシ基、
(3)C1−6アルキル−カルボニル基、
(4)C1−6アルコキシ−カルボニル基、
等が挙げられる。
「C1−6アルキル−カルボニル基」としては、アセチル基、プロパノイル基、ブタノイル基、イソブタノイル基、ペンタノイル基、イソペンタノイル基、ヘキサノイル基などが挙げられる。中でもアセチル基が好ましい。
「C1−6アルコキシ−カルボニル基」としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、n−プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、n−ブトキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基、ヘキシルオキシカルボニル基などが挙げられる。中でもメトキシカルボニル基が好ましい。
上記した「C1−7アシル基」の中でも、C1−6アルコキシ−カルボニル基が好ましく、メトキシカルボニル基が特に好ましい。
シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロヘプタン、シクロオクタンなどのC3−8シクロアルカン;
シクロプロペン、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテンなどのC3−8シクロアルケン;
が挙げられる。中でもC5−6シクロアルカン又はC5−6シクロアルケンが好ましい。
アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、チオモルホリン、ピペラジン、ヘキサメチレンイミン、オキサゾリジン、チアゾリジン、イミダゾリジン、オキサゾリン、チアゾリン、イミダゾリン、ジオキソール、ジオキソラン、ジヒドロオキサジアゾール、ピラン、ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、チオピラン、テトラヒドロチオピラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、ピラゾリジン、ピラゾリン、ジヒドロピリジン、テトラヒドロピリジン、ジヒドロピリミジン、テトラヒドロピリミジン、ジヒドロトリアゾール、テトラヒドロトリアゾールなどの3〜8員の非芳香族複素環;
等が挙げられる。中でも5又は6員の非芳香族複素環(好ましくはテトラヒドロフラン、ピロリジン)が好ましい。
R3は、好ましくは水素原子である。
R4は、好ましくは水素原子である。
R6は、好ましくは水素原子である。
R2は、好ましくはC1−7のアシル基であり、より好ましくはC1−6アルコキシ−カルボニル基であり、特に好ましくはメトキシカルボニル基である。
R5は、好ましくはC1−7のアシル基であり、より好ましくはC1−6アルコキシ−カルボニル基であり、特に好ましくはメトキシカルボニル基である。
あるいは、R2及びR5は一緒になって、それらが結合している炭素原子と共に、(1)オキソ基、(2)C1−6アルコキシ基で置換されたC1−6アルキル基、及び(3)C1−6アルコキシ−カルボニル基で置換されたフェニル基から選ばれる置換基でそれぞれ置換されていてもよい、5又は6員の非芳香族複素環(好ましくはテトラヒドロフラン又はピロリジン)を形成する。
ここで「ガラス系多孔質担体」とは、ガラスを構成成分として含む多孔質担体をいい、例えば、粒子形状の多孔質ガラス粒子(CPG)等が挙げられるが、これらに限定されない。より具体的には、前記CPGとしては、長鎖のアミノアルキルスペーサーを有するCPG固相担体(LCAA−CPG固相担体)が好適に用いられ、更には、長鎖ヌクレオチドの合成の場合においては、CPGの孔が20〜400nm、より好ましくは50〜200nm、更に好ましくは100nmのものが最も好ましく用いられる。
)アクリルアミド等を挙げることが出来る。
核酸合成に寄与する官能基の含有量は、特に限定されるものではないが、該官能基の含有量が少なすぎると核酸の収量が低下し、他方、該官能基の含有量が多すぎると、得られる核酸の純度が低下する。従って好ましくは10〜2000μmol/g、より好ましくは、50〜1000μmol/g、更に好ましくは100〜800μmol/gである。
する。これとは別に試料を入れずに上記と同様の操作により、ブランクの測定を行う。上記2つの測定のモル数の差が、試料のヒドロキシ基のアセチル化に消費された無水酢酸のモル数(即ち、試料のヒドロキシ基量)であるので、この値を試料重量で割って試料1g当たりのヒドロキシ基量を求める。
本明細書にて、「粒子」とは、厳密な球状を呈することを意味するのではなく、一定形状(例えば、楕円球状などの略球状、多面体形状、円柱形状、金平糖形状などの異型形状など)を有していればよいことを意味する。
多孔質合成ポリマー粒子の1粒の大きさ(体積)は、特に限定されないが、多孔質粒子のレーザー回折(散乱式)により測定される平均粒径が1μmよりも小さいと、カラムに充填して使用した場合に背圧が高くなりすぎる、又は送液速度が遅くなるという不具合が生じ、他方、平均粒径が1000μmよりも大きいと、カラムに充填したとき、担体粒子間の空隙が大きくなり、一定容量のカラムに効率よく担体粒子を充填することが困難となる。従って好ましくは1〜1000μm、より好ましくは5〜500μm、更に好ましくは10〜200μmである。
本発明の核酸固相合成用担体の製造方法は、特に限定されないが、例えば、以下のような方法で製造することができる。
本発明の核酸固相合成用担体を用いた核酸合成は、核酸自動合成装置を用い、自体公知の種々の合成法を用いることができる。本明細書において、「核酸合成反応」とは、特に核酸を構成するヌクレオチドの伸長反応を意味する。即ち、固相担体上に結合したヌクレオシド、ヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに、ヌクレオチドを順次結合させることにより、伸長されたオリゴヌクレオチドを得る。
該核酸合成反応としては、H−ホスホネイト法、ホスホエステル法、固相ホスホロアミダイト法などが挙げられるが、なかでも、核酸の合成能力が高く、高純度の核酸が得られることから、固相ホスホロアミダイト法が好ましい。
(a)本発明の核酸固相合成用担体を核酸自動合成装置の反応カラムに入れる工程;
(b)ジクロロ酢酸溶液等の酸を反応カラムに流し、ヒドロキシメチル基の保護基を脱保護し、洗浄する工程;
(c)テトラゾール等により活性化した、3'末端に該当するヌクレオシドホスホロアミダイトを、前記ヒドロキシメチル基に結合させるカップリング、未反応ヒドロキシ基のキャップ、ホスファイトの酸化の各工程を順次行い、更にこの一連の工程を目的配列になるまで繰り返す工程;
(d)装置での合成工程が終了後、核酸固相合成用担体をアンモニア水等に浸漬して連結部分を切断し、目的の核酸を得る工程;
から構成される方法が挙げられる。
核酸固相合成用担体(A)の作製
アセチレンジカルボン酸ジメチルエステル及びフランをシュレンク型反応管に加えて、室温で29日間反応させた。この反応の収率は、22%であった。触媒として四酸化オスミウムを用いて、生成物を酸化させた。次に、4,4’−ジメトキシトリチルクロリドなどを反応させて、一部のヒドロキシ基をDMTr基で保護した。その後、ヒドロキシ基を有する多孔質ポリスチレン系固相担体(日東電工株式会社製、NittoPhase(登録商標))にスクシニル基を導入したものをアセトニトリルに分散し、前記の化合物、HBTU、N,N−ジイソプロピルエチルアミンを加えて、28℃で23時間反応させ、前記の化合物を固相担体に担持した。続いて、4−ジメチルアミノピリジン、アセトニトリル、エタノール、ジイソプロピルエチルアミン及びHBTUを加えて、28℃で20時間反応させて未反応のカルボキシ基をキャップし、無水酢酸、N−メチルイミダゾール、ピリジン、4−ジメチルアミノピリジン、アセトニトリルを加えて、28℃で22時間反応させて未反応のヒドロキシ基をキャップし、下記式:
前記のようにして得られた本発明のリンカーの固相担体ヘの結合量は、41μmol/gであった。
核酸固相合成用担体(A)を用いた、DNA20merの合成
実施例1で作製した本発明の核酸合成用固相担体(A)24.3mgを反応カラムに充填し、DNA/RNA自動合成装置 ABI3400(アプライドバイオシステムズ製)を用いて、20mer(5’−ATACCGATTAAGCGAAGTTT−3’:配列番号1)のDNAオリゴヌクレオチドをDMT−on(5’末端保護基を外さない方法)で合成した(合成スケール1μmol)。合成後に、該DNAオリゴヌクレオチドが結合した固相担体を30%アンモニア水/エタノール(3:1)混合溶液に55℃で15時間浸漬して、固相担体からの該DNAオリゴヌクレオチドの切出しを行った。
DMT−dT−3’−succinateを結合した固相合成用担体を用いた、DNA20merの合成
実施例1と同様にして市販の固相担体NittoPhase(登録商標)(日東電工株式会社製)に、開裂性リンカーDMT−dT−3’−succinate(Beijing OM Chemicals製)を結合した。該化合物の固相担体ヘの結合量は42μmol/gであった。この固相担体23.8mgを反応カラムに充填し、実施例2と同様にして20mer(5’−ATACCGATTAAGCGAAGTTT−3’:配列番号1)のDNAオリゴヌクレオチドをDMT−on(5’末端保護基を外さない方法)で合成した(合成スケール1μmol)。合成後に、固相担体からの該DNAオリゴヌクレオチドの切出しを行った。
実施例2及び比較例1にて得られたDNAオリゴヌクレオチド溶液について、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による測定を行った(測定条件:カラム;Waters XBridge OST C18 2.5μm 50×4.6mm、UV検出;260nm、BufferA;100mM HFIP/7mM TEA in Water、pH8.0、BufferB;メタノール、温度;30℃)。図1(a)、(b)にそれぞれのHPLCチャートを示した。
また、実施例2及び比較例1にて得られたDNAオリゴヌクレオチド溶液について、LC−MS分析を行った。(測定条件:カラム;Waters XBridge OST C18 2.5μm 50×4.6mm、UV検出;254nm、BufferA;HFIP/7mM TEA in Water、pH8.0、BufferB;メタノール、温度;30℃)を行った。
その結果、実施例2で作製したDNAオリゴヌクレオチドのメインピークは、3’末端にヒドロキシ基を有するDNAオリゴヌクレオチド20merであることが確認された(分子量(測定値);6439)。一方、比較例1で作製したDNAオリゴヌクレオチドのメインピークも、3'末端にヒドロキシ基を有するDNAオリゴヌクレオチド20merであることが、確認された(分子量(測定値);6439)。
核酸固相合成用担体(B)の作製
アセチレンジカルボン酸ジメチルエステル及びフランをシュレンク型反応管に加えて、室温で29日間反応させた。この反応の収率は、22%であった。触媒として四酸化オスミウムを用いて、生成物を酸化させた。次に、4,4’−ジメトキシトリチルクロリドなどを反応させて、一部のヒドロキシ基をDMTr基で保護した。次に、無水コハク酸などを加え、前記の化合物にスクシニル基を導入した。ヒドロキシ基を有する架橋ポリスチレン系固相担体であるNittoPhase(登録商標)(日東電工株式会社製)をアセトニトリルに分散し、前記の化合物、HBTU、N,N−ジイソプロピルエチルアミンを加えて、28℃で23時間反応させ、固相担体に担持した。その後、4−ジメチルアミノピリジン、アセトニトリル、エタノール、ジイソプロピルエチルアミン及びHBTUを加えて、28℃で20時間反応させ、未反応のカルボキシ基をキャップし、無水酢酸、N−メチルイミダゾール、ピリジン、4−ジメチルアミノピリジン、アセトニトリルを加えて、28℃で22時間反応させて未反応のヒドロキシ基をキャップし、下記式:
前記のようにして得られた本発明のリンカーの固相担体ヘの結合量は、141μmol/gであった。
核酸固相合成用担体(B)を用いた、DNA20merの合成
実施例3で作製した本発明の核酸合成用固相担体(B)7.1mgを反応カラムに充填し、DNA/RNA自動合成装置、ABI3400(アプライドバイオシステム製)を用いて、20mer(5’−ATA CCG ATT AAG CGA AGT TT−3’:配列番号1)のDNAオリゴヌクレオチドをDMT−on(5’末端保護基を外さない方法)で合成した(合成スケール1μmol)。合成後に、該DNAオリゴヌクレオチドが結合した固相担体を30%アンモニア水/エタノール(3:1)混合溶液に55℃で15時間浸漬し、固相担体からの該DNAオリゴヌクレオチドの切出しを行った。
DMT−dT−3’−succinateを結合した固相合成用担体を用いたDNA20merの合成
比較例1と同様にして、結合量が96μmol/gのDMT−dT−3’−succinateを結合した固相担体NittoPhaseを作製した。この固相担体10.4mgを反応カラムに充填し、実施例4と同様にして、20mer(5’−ATA CCG ATT AAG CGA AGT TT−3’:配列番号1)のDNAオリゴヌクレオチドをDMT−onで合成した(合成スケール1μmol)。合成後に、固相担体からの該DNAオリゴヌクレオチドの切出しを行った。
実施例4及び比較例2にて得られたDNAオリゴヌクレオチド溶液について、HPLC測定を行った(測定条件:カラム;XBridge OST C18 2.5μm 50×4.6mm(Waters製)、UV検出;260nm、BufferA;100mM HFIP/7mM TEA/水(pH8.0)、BufferB;メタノール、温度;30℃)。図2(a)、(b)にそれぞれのHPLCチャートを示した。
その結果、実施例4で作製したDNAオリゴヌクレオチドのメインピークは、実施例2と検出時間が同じであることから、3'末端にヒドロキシ基を有するDNAオリゴヌクレオチド20merであることが確認された。一方、比較例2で作製したDNAオリゴヌクレオチドのメインピークも、比較例1と検出時間が同じであることから、3’末端にヒドロキシ基を有するDNAオリゴヌクレオチド20merであることが確認された。
核酸固相合成用担体(C)の作製
アセチレンジカルボン酸、テトラヒドロフラン及びフランをシュレンク型反応管に加えて、室温で18日間反応させた。この反応の収率は、67%であった。得られたジカルボン酸に、硫酸ジメチル、炭酸カリウム、及び、アセトンを混合して還流し、対応するジメチルエステルに変えた。触媒として四酸化オスミウムを用いて、生成物を酸化させた。次に、4,4’−ジメトキシトリチルクロリドなどを反応させて、一部のヒドロキシ基をDMTr基で保護し、カラムクロマトグラフィー精製を行った。次に、無水コハク酸などを加え、前記の化合物にスクシニル基を導入した。ヒドロキシ基を有する架橋ポリスチレン系固相担体であるNittoPhase(登録商標)(日東電工株式会社製)をアセトニトリルに分散し、前記の化合物、HBTU、N,N−ジイソプロピルエチルアミンを加えて、28℃で23時間反応させ、固相担体に担持した。その後、4−ジメチルアミノピリジン、アセトニトリル、エタノール、ジイソプロピルエチルアミン及びHBTUを加えて、28℃で20時間反応させ、未反応のカルボキシ基をキャップし、無水酢酸、N−メチルイミダゾール、ピリジン、4−ジメチルアミノピリジン、アセトニトリルを加えて、28℃で22時間反応させて未反応のヒドロキシ基をキャップし、下記式:
前記のようにして得られた本発明のリンカーの固相担体ヘの結合量は、62μmol/gであった。
核酸固相合成用担体(C)を用いた、DNA20merの合成
実施例5で作製した本発明の核酸合成用固相担体(C)16.1mgを反応カラムに充填し、DNA/RNA自動合成装置、ABI3400(アプライドバイオシステム製)を用いて、20mer(5’−ATA CCG ATT AAG CGA AGT TT−3’:配列番号1)のDNAオリゴヌクレオチドをDMT−on(5’末端保護基を外さない方法)で合成した(合成スケール1μmol)。合成後に、該DNAオリゴヌクレオチドが結合した固相担体を30%アンモニア水/エタノール(3:1)混合溶液に55℃で15時間浸漬し、固相担体からの該DNAオリゴヌクレオチドの切出しを行った。
DMT−dT−3’−succinateを結合した固相合成用担体を用いたDNA20merの合成
比較例2で作製したDMT−dT−3’−succinateを結合した固相担体10.4mgを反応カラムに充填し、実施例4と同様にして、20mer(5’−ATA CCG ATT AAG CGA AGT TT−3’:配列番号1)のDNAオリゴヌクレオチドをDMT−onで合成した(合成スケール1μmol)。合成後に、固相担体からの該DNAオリゴヌクレオチドの切出しを行った。
実施例6及び比較例3にて得られたDNAオリゴヌクレオチド溶液について、HPLC測定を行った(測定条件:カラム;XBridge OST C18 2.5μm 50×4.6mm(Waters製)、UV検出;260nm、BufferA;100mM HFIP/7mM TEA/水(pH8.0)、BufferB;メタノール、温度;30℃)。図3(a)、(b)にそれぞれのHPLCチャートを示した。
その結果、実施例6で作製したDNAオリゴヌクレオチドのメインピークは、実施例2と検出時間が同じであることから、3'末端にヒドロキシ基を有するDNAオリゴヌクレオチド20merであることが確認された。一方、比較例3で作製したDNAオリゴヌクレオチドのメインピークも、比較例1と検出時間が同じであることから、3’末端にヒドロキシ基を有するDNAオリゴヌクレオチド20merであることが確認された。
Claims (8)
- 下記一般式
X1及びX2は、それぞれ独立して、トリチル基、モノメトキシトリチル基及びジメトキシトリチル基からなる群より選ばれるヒドロキシ基の保護基を表し、
L1及びL2 の一方が、スクシニル基を表し、且つ他方が、スクシニル基又はアセチル基を表し、
R1〜R6は、それぞれ独立して、水素原子;C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基;C1−6アルコキシ基;C1−7アシル基;モノ又はジ−C1−6アルキルアミノ基;又はハロゲン原子を表すか、あるいは、
R2及びR5は一緒になって、それらが結合している炭素原子と共に、(1)オキソ基、(2)C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基、及び(3)C1−6アルコキシ−カルボニル基で置換されていてもよいフェニル基から選ばれる置換基でそれぞれ置換されていてもよい、3〜8員の炭素環又は複素環を形成する。〕
で示される、核酸固相合成用リンカー。 - L1又はL2の少なくとも一方が、アミノ基又はヒドロキシ基を有する核酸固相合成用担体と連結できる、請求項1に記載の核酸固相合成用リンカー。
- X1及びX2がジメトキシトリチル基である、請求項1又は2に記載の核酸固相合成用リンカー。
- 下記一般式
X1及びX2は、それぞれ独立して、トリチル基、モノメトキシトリチル基及びジメトキシトリチル基からなる群より選ばれるヒドロキシ基の保護基を表し、
L1 は、スクシニル基を表し、
L2は、アセチル基又はエトキシスクシニル基を表し、
Spは、固相担体を表し、
R1〜R6は、それぞれ独立して、水素原子;C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基;C1−6アルコキシ基;C1−7アシル基;モノ又はジ−C1−6アルキルアミノ基;又はハロゲン原子を表すか、あるいは、
R2及びR5は一緒になって、それらが結合している炭素原子と共に、(1)オキソ基、(2)C1−6アルコキシ基で置換されていてもよいC1−6アルキル基、及び(3)C1−6アルコキシ−カルボニル基で置換されていてもよいフェニル基から選ばれる置換基でそれぞれ置換されていてもよい、3〜8員の炭素環又は複素環を形成する。〕
で示される構造を有する、核酸固相合成用担体。 - X1及びX2がジメトキシトリチル基である、請求項4に記載の核酸固相合成用担体。
- Spが多孔質合成ポリマー粒子又は多孔質ガラス粒子の固相担体である、請求項4又は5に記載の核酸固相合成用担体。
- 請求項4〜6のいずれか1項に記載の核酸固相合成用担体上で核酸合成反応を行う工程を含む、核酸の製造方法。
- 該核酸合成反応が、固相ホスホロアミダイト法により行われる、請求項7に記載の製造方法。
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