JP5905979B2 - 皮膚の疾患、傷害または損傷の予防および／または処置における使用のためのプテロスチルベン（ｐｔｅｒ） - Google Patents

Description

本発明は製薬技術分野に包含され得る。

果物および野菜の高い摂取は健康なライフスタイルに関係している。この関係は食物中の天然の抗酸化剤、主にポリフェノール化合物の存在による。科学コミュニティにおいてより多くの関心を起こしたポリフェノールの１つはレスベラトロール（３，４’，５−トリヒドロキシ−トランス−スチルベン；ＲＥＳＶ）という、ワイン中に有意な量が存在する小さなポリフェノールであり、様々な慢性疾患（特に癌、循環器疾患、２型糖尿病および神経変性疾患）において潜在的な有益な効果があるとされてきた。ＲＥＳＶの抗癌性質は最初にＪａｎｇら（Ｊａｎｇ Ｍ，Ｃａｉ Ｌ，Ｕｄｅａｎｉ ＧＯ，Ｓｌｏｗｉｎｇ ＫＶ，Ｔｈｏｍａｓ ＣＦ，Ｂｅｅｃｈｅｒ ＣＷ，Ｆｏｎｇ ＨＨ，Ｆａｒｎｓｗｏｒｔｈ ＮＲ，Ｋｉｎｇｈｏｒｎ ＡＤ，Ｍｅｈｔａ ＲＧ，Ｍｏｏｎ ＲＣ，Ｐｅｚｚｕｔｏ ＪＭ．（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５（５２９７）：２１８−２０）によって、癌の発達の３つのステージ（開始，促進および進行）に対する効果をもって提唱された。ＲＥＳＶの抗癌効果はその低いバイオアベイラビリティによって非常に限定されている（（Ａｓｅｎｓｉ Ｍ，Ｍｅｄｉｎａ Ｉ，Ｏｒｔｅｇａ Ａ，Ｃａｒｒｅｔｅｒｏ Ｊ Ｂａｎｏ ＭＣ，Ｏｂｒａｄｏｒ Ｅ，Ｅｓｔｒｅｌａ ＪＭ．（２００２）Ｆｒｅｅ ａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ．３３（３）：３８７−９８）。その欠点の為に、改善されたバイオアベイラビリティを備える幾つか他のポリフェノールが癌の処置用にアッセイされた。ＰＴＥＲ（３，５−ジメトキシ−４’−ヒドロキシ−トランス−レスベラトロール，ＰＴＥＲ、ＲＥＳＶの誘導体）およびＱＵＥＲ（３，３’，４’，５，６−ペンタヒドロキシフラボン（ｐｅｎｔａｈｉｄｒｏｘｉｆｌａｖｏｎａ）；ＱＵＥＲ）という，以下の化学式を有する２つの小さな天然のポリフェノールの組合せ：

は、非常に高悪性度のマウスの悪性黒色腫の転移性の増殖を阻害するのに効果的であることが示された（Ｆｅｒｒｅｒ Ｐ，Ａｓｅｎｓｉ Ｍ，Ｓｅｇａｒｒａ Ｒ，Ｏｒｔｅｇａ Ａ，Ｂｅｎｌｌｏｃｈ Ｍ，Ｏｂｒａｄｏｒ Ｅ，Ｖａｒｅａ ＭＴ，Ａｓｅｎｓｉｏ Ｇ，Ｊｏｒｄａ Ｌ，Ｅｓｔｒｅｌａ ＪＭ．（２００５）Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．７（ｌ）：３７−４７）。さらにＰＴＥＲとＱＵＥＲの関係は、化学療法と放射線療法の抗腫瘍作用を増強することによって免疫不全マウスにおいて、異種移植耐性ヒト結腸直腸癌（ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｅｄ）の除去を促進する（Ｐｒｉｅｇｏ Ｓ，Ｆｅｄｄｉ Ｆ，Ｆｅｒｒｅｒ Ｐ，Ｍｅｎａ Ｓ，Ｂｅｎｌｌｏｃｈ Ｍ，Ｏｒｔｅｇａ Ａ，Ｃａｒｒｅｔｅｒｏ Ｊ Ｏｂｒａｄｏｒ Ｅ，Ａｓｅｎｓｉ Ｍ，Ｅｓｔｒｅｌａ ＪＭ．（２００８）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．７（１０）：３３３０−４２）。ＰＴＥＲおよびＱＵＥＲは静脈内に、および／または経口的に投与された。

最近の疫学的調査は全ての皮膚癌の９０％以上が日光、特に紫外線Ｂ（ＵＶＢ）への過剰曝露によって引き起こされることを示した。これらの癌、黒色腫および非黒色腫型の両方の発生率は劇的に増加している（皮膚癌による死亡はこの２０年間で倍増した）。

そのために、放射線、特にＵＶＢ（紫外線Ｂ）への長期曝露によって引き起こされる皮膚の疾患（皮膚癌を含む）損傷または傷害を予防および／または処置することができる組成物が当該技術分野において長い間必要とされている。

しかしながら、皮膚の疾患、損傷または傷害は、放射線曝露によってだけではなく、免疫性の因子として別の因子によっても引き起こされ得る。皮膚の疾患、損傷または傷害の大半は、皮膚の病理に関係する炎症性のプロセスの存在を共有している。その上、放射線への皮膚の曝露、または、前記放射線曝露か（自己免疫性皮膚疾患または乾癬、アレルギー性接触皮膚炎、アトピー性皮膚炎のようなアレルギー性皮膚疾患）他の原因かの何れかに関係する皮膚の炎症性プロセスはまた、酸素ラジカルの生成および、一例としてぺルオキシナイトラドの窒素酸化物（ＮＯ）のような、他の酸化する種の生成による皮膚の酸化ストレスの増加を共有している。

炎症に関係する異常は幅広い多様なヒトの疾患の基礎となる、無関係の障害の大きな群を包含する。しかしながら、本発明の目的は炎症の予防／処置に限定して焦点を当てていないが、局所的な製剤の適用によって処置される、全て皮膚に関係する、兆候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓ）の特に選択された群、特に放射線曝露によって引き起こされる皮膚疾患に焦点を当てている。さらに、従来技術は炎症性障害の処置に有用であり得る経口投与される剤を開示するが、それらの経口投与される剤は皮膚のような離れた標的組織に対して潜在的な治療効果を決して働かせない。

ＱＵＥＲは皮膚に対する紫外線の有害な作用の防止において有用であることが開示された（Ｒｕｂｉａ Ｃａｓａｇｒａｎｄｅ，Ｓａｎｄｒａ Ｒ．Ｇｅｏｒｇｅｔｔｉ，Ｗａｌｄｉｃｅｕ Ａ．Ｖｅｒｒｉ Ｊｒ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｊ．Ｄｏｒｔａ， Ａｎｔｏｎｉｏ Ｃ． ｄｏｓ Ｓａｎｔｏｓ，Ｍａｒｉａ Ｊ．Ｖ．Ｆｏｎｓｅｃａ＿［２００６］；Ｊ． Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ Ｂ：Ｂｉｏｌｏｇｙ ８４：２１−２７ ａｎｄ Ａｌｅｎａ Ｓｖｏｂｏｄｏｖｄ，Ｊｉｔｋａ Ｐｓｏｔｏｖｄ，Ｄａｎｉｅｌａ Ｗａｌｔｅｒｏｖｄ［２００３］；Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐａｐｅｒｓ １４７（２）：１３７−１４５）。しかしながら、ＱＵＥＲの吸収スペクトルはＵＶＡ（３２０〜４００ｎｍ）の範囲内の波長で最大ピークのほとんどを示し、正確にはＰＴＥＲの吸収スペクトルが最大領域を有するＵＶＢ（２９０〜３２０ｎｍ）の範囲内ではない。

従来技術（ＷＯ０１／４３７０５ Ａ２）において、ＰＴＥＲに限定しない、スチルベンの化学族の幾つかのメンバーとレチノイドの組合せはスキンケアのために使用される。

本発明は上記の問題の解決に向けて新たな工程を与え、主要な活性化合物として、特にはＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せで、ＰＴＥＲによって、皮膚の疾患、損傷、または傷害を予防および／または処置することに焦点をおいて組成物を開発する。さらに、本発明はまた、任意の皮膚の疾患、傷害または損傷が現れる前に、製剤下、特には遮光剤、日焼け止め（ａｆｔｅｒ−ｓｕｎ）、アンチエイジング、抗しわ、光防護の目的を備える製剤下で哺乳動物（ヒト）に適用することができる。

本発明は主に、皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置用の医薬組成物の製造のために、随意にＱＵＥＲまたはその任意の許容可能な塩と組み合わせて、ＰＴＥＲまたはその任意の許容可能な塩の使用を指す。皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置の治療方法は、随意にＱＵＥＲまたはその任意の許容可能な塩と組み合わせて、活性化合物としてＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を含む組成物の有効な量を、必要のある被検体に投与する工程を含む。本発明はまた、随意にＱＵＥＲを好ましくは局所的製剤およびさらに好ましくはリポソームの形態で組み合わせて、活性化合物としてＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を含む組成物それ自体を指す。本発明はまた、前記リポソーム製剤を調製するプロセスを含む。

ＰＴＥＲとの組合せが相乗効果を示す場合に、ＱＵＥＲは任意の他のポリフェノールによって交換され得る。

本発明の目的について、ポリフェノールは、限定されないが、分子当たりに２つ以上のフェノールのユニットまたは基本要素（ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｂｌｏｃｋ）の存在によって特徴づけられる、植物中に見出される科学物質の群である。ポリフェノールは一般的に加水分解型タンニン（グルコースおよび他の糖類の没食子酸エステル）およびリグニン、フラボノイド、および結合型タンニンなどのフェニルプロパノイド、に分けられる。

ＰＴＥＲの作用（ａｃｔｉｏｎ）および随意に、そのＱＵＥＲとの組合せは多種多様な方法で用いられる：
ａ）両方のポリフェノールは放射線吸収を可能にする化学構造を有するので、ＵＶフィルターとして。
ｂ）照射の間および／または炎症プロセスの間に生成される活性酸素種（ＲＯＳ）の酸素フリーラジカルスカベンジャーとして。
ｃ）抗炎症の、および免疫調節の剤として。

所望の実施形態において、本発明の組成物は２つの活性化合物ＰＴＥＲおよびＱＵＥＲ、またはその任意の許容可能な塩の組合せを含む。そのため、予防および／または処置の方法はＰＴＥＲとＱＵＥＲの両方、またはその任意の許容可能な塩を含む組成物の有効な量を、必要とする被検体に投与する工程を含む。

本明細書で定義されるように、「被検体」は哺乳動物、例えばヒトである。

本明細書で定義されるように、炎症プロセスは、主に常在性マクロファージ、樹状細胞、組織球、クッパー細胞（Ｋｕｐｐｆｅｒ ｃｅｌｌ）およびマスト細胞などの全ての組織中に既に存在する細胞によって発生する急性または慢性の炎症性プロセスを含む。感染、熱傷、または他の損傷の発症時に、これらの細胞は活性化を経験し、炎症の臨床的症状の原因である炎症性メディエーターを放出する。血管拡張およびその結果として生じる血流の増加は発赤および熱の上昇を引き起こす。血管の上昇した透過性は、組織（浮腫）への血漿蛋白質および流体の浸出（漏出）をもたらし、それ自体は腫脹として現れる。ブラジキニンのような放出されたメディエーターの幾つかは疼痛に対する感度を上昇させる（痛覚過敏）。メディエーター分子はまた、白血球、主に好中球の血管の外側（血管外遊出）から組織内への遊走を可能にするように血管を変化させる。好中球は、局在性の細胞によって作りだされた走化性を示す勾配に沿って、損傷の部位に到達するように遊走する。機能の喪失は恐らく疼痛に対する反応における神経性の反射の結果である。

細胞由来のメディエーターに加えて、予め成形された血漿蛋白から成る幾つかの細胞の生化学カスケードシステムは、炎症反応を引き起こし広めるよう平行して作用する。これらは細菌によって活性化される補体系、およびネクローシス例えば熱傷または外傷、によって活性化された凝固線維素溶解系を含む。急性炎症反応は定常性の刺激が持続されることを要する。炎症性メディエーターは短半減期を有し、すぐに組織中に分解される。したがって、炎症は、一旦刺激が除去されると止む。

本発明の組成物は本明細最初に含まれる活性化合物の任意の「許容可能な塩」を含み得る。本明細書で使用されているように、前記発現は、医薬品として哺乳動物における使用にとって安全かつ有効であり、所望の生物活性を有する本発明の化合物のそれらの塩を意味する。例示される塩は、限定されないが、硫酸塩、シトラート、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチナート、乳酸塩、サリチラート、酸シトラート、酒石酸塩、オレアート、タンニン酸塩、パントテナート、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、スクシナート、マレアート、ゲンチシネート（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマラート、グルコン酸塩、グルカロネート（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、サッカラート、蟻酸塩、ベンゾアート、グルタメート、メタンスルフォナート、エタンスルフォナート、ベンゼンスルフォナート、ｐ−トルエンスルフォナート、およびパモエート塩を含む。本発明の「許容可能な塩」は、好ましくは、カルボン酸官能基のような酸性官能基、および許容可能な無機または有機の塩基を有する、ポリフェノール化合物から調製される。適切な塩基は限定されないが、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物：アルミニウムおよび亜鉛などの他の金属の水酸化物：置換されていない、またはヒドロキシで置換されたモノ−、ジ−、またはトリ−アルキルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどのアンモニア、および有機アミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−；ビス−またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンのようなモノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシ置換された低級アルキルアミン）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、またはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミンのようなＮ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシ低級アルキル）−アミン；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアルギニン、リジンなどのアミノ酸を含む。用語「許容可能な塩」はまた、ポリフェノール化合物の水化物を含む。

本明細書に定義されているように、賦形剤は、組成物中に含まれる活性化合物（ＰＴＥＲおよび／またはＱＵＥＲ）についての担体またはビヒクルとして使用される不活性物質である。本発明の組成物は任意の賦形剤を含み、好ましくは局所的な組成物（すなわち、皮膚科学の許容可能な賦形剤）に含まれるのに適している。以下に言及される次の補助的薬剤は本発明の組成物中に互いに独立して存在し得る：ゲル化剤、油、ろう、粘稠化剤、親水性のまたは疎水性のポリマー、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、皮膚軟化薬、脂肪酸、有機溶媒、抗酸化剤、安定剤、金属イオン封鎖剤、酸性化または塩基性化剤、乳化剤（ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓ）、皮膚軟化薬、界面活性剤、塗膜形成要素、アミノ酸、蛋白質、バニラ、アロエエキスまたはバイオフラビノイド（ｂｉｏｆｌａｖｉｎｏｉｄｓ）などの性能および／または消費者への魅力を増強するための生物学的添加剤、バッファー、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）またはシュウ酸のようなキレート剤、着色剤、色素、噴射剤、消泡剤、湿潤剤、ビタミン、乳化安定剤、ｐＨ調整剤、粘稠化剤、香料、防腐剤、乳白剤、水および／またはアルコール。本発明の組成物についての前述の補助的薬剤は当業者によって知られる通常の量で使用される。

本発明の組成物について適切な油は動物または野菜あるいは合成油から選択される。特に好ましい油は鉱油、流動パラフィン、揮発性および非揮発性のシリコン油、イソパラフィン、ポリアルファオレフィン、フッ素酸塩および過フッ素酸塩（ｐｅｒｆｌｕｏｒａｔｅｄ）の油からなる群から選択される。

本発明の組成物について適切な安定剤は、非イオンの、アニオンの、カチオンのおよび両親媒性の性質であり得る。好ましい安定剤はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびその誘導体、ツイーン、トリトン、スパン、ポリグリセリン（ｐｏｌｙｇｙｃｅｒｉｎｅｓ）、ポリアルキルグリセリド、アルキルスルフォナート、アリールスルフォナート、アルキルリン酸塩、アルキル−ベタインおよびホスファチジルグリセロールの誘導体から成る群から選択される。

乳化剤は、好ましくは、本発明の組成物において前記組成物の成分の均一な混合を提供するのに有効な量で使用される。適切な乳化剤は脂肪酸石鹸のような陰イオン剤、例えばカリウムステアラートステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸アンモニウム、およびステアリン酸トリエタノールアミン；脂肪酸石鹸を含むポリオール脂肪酸モノエステル、例えば、カリウムかナトリウム塩の何れかを含むグリセロールモノステアレート；硫酸エステル（ナトリウム塩）、例えばナトリウムラウリル５スルファートおよびナトリウムアセチルスルファート；および硫酸エステルを含むポリオール脂肪酸モノエステル、例えばナトリウムラウリルスルファート（ｓｕｒｆａｔｅ）を含むモノステアリン酸グリセリン；（ｉｉ）Ｎ（ステアロイルコルアミノホルミルメチル）ピリジウムのような陽性イオン塩化物；Ｎ−大豆−Ｎ−エチルモルホリニウムエトスルファート；アルキルジメチルベンジル塩化アンモニウム；ジイソブチルフェノキシテオキシエチルジメチルベンジル塩化アンモニウム；およびアセチル塩化ピリジウム；および（ｉｉｉ）ポリオキシエチレン脂肪族アルコールエーテルのような非イオン物質、例えばモノステアラート；ポリオキシエチレンラウリルアルコール；ポリオキシプロピレン脂肪族アルコールエーテル、例えば、プロポキシラート（ｐｒｏｐｏｘｙｌａｔｅｄ）オレイルアルコール；ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、例えばポリオキシエチレンステアラート；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアラート；ソルビタン脂肪酸エステル、例えば、ソルビタン；ポリオキシエチレングリコール脂肪酸エステル、例えば、ポリオキシエチレングリコールモノステアラート；およびポリオール脂肪酸エステル、例えば、モノステアリン酸グリセリンおよびプロピレングリコールモノステアラート；およびエトキシレート（ｅｔｈｏｘｙｌａｔｅｄ）ラノリン誘導体、例えば、エトキシレートラノリン、エトキシレートラノリンアルコールおよび／またはエトキシレートコレステロール。

皮膚軟化薬はまた、乾燥を予防または和らげるような量で本発明の組成物中に使用され得る。適切な皮膚軟化薬は、限定されずに、炭化水素油および蝋；シリコン油；トリグリセリドエステル；アセトグリセリドエステル；エトキシレートグリセリド；アルキルエステル；アルケニルエステル；脂肪酸；脂肪族アルコール；脂肪族アルコールエーテル；エーテルエステル；ラノリンおよび誘導体；多価アルコール（ポリオール）およびポリエーテル誘導体；多価アルコール（ポリオール）エステル；蝋エステル；蜜蝋誘導体；植物蝋；リン脂質；ステロール；および／またはアミド。

界面活性剤はさらに本発明の組成物中にも使用されることができる。適切な界面活性剤は、例えば、クレンジング剤、乳化剤、起泡力増進剤、ヒドロトロープ、可溶化剤、懸濁剤として通常分類される界面活性剤、および液体中の固体の分散を促進する非界面活性剤である。

好ましくは本発明の組成物中に使用され得る塗膜形成要素は、組成物を滑らか且つ平らに保ち、好ましくは制限がない。適切な塗膜形成要素はアクリルアミド／ナトリウムアクリレートコポリマー；アンモニウムアクリレートコポリマー；バルサムペルー；セルロースガム；エチレン／マレイン酸無水物コポリマー；ヒドロキシエチルセルロース；ヒドロキシプロピルセルロース；ポリアクリルアミド；ポリエチレン；ポリビニルアルコール；ｐｖｍ／ＭＡコポリマー（ビニルメチルエーテル／マレイン酸無水コポリマー）；ＰＶＰ（ポリビニルピロリドン）；無水マレイン酸ポリマー、ビニルピロリドン／ヘキサデセンコポリマー；アクリルアクリレート（ａｃｒｙｌｉｃｌａｃｒｙｌａｔｅ）コポリマーなどから成る群から選択される。

ｐＨ調整剤もまた、本発明の組成物中に使用され得る。これらのｐＨ調整剤は好ましくは：水酸化アンモニウム、トリエタノールアミンまたはクエン酸から選択される。

本発明の組成物のために使用される増粘剤は好ましくは：キャンデリア、カルナウバ、および微小蝋、架橋アクリル酸ポリマー、カルボマー、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースおよびポリエチレン増粘剤から選択される。

本発明の組成物にとって好ましい有機溶媒の例は、低級脂肪族アルコールおよびポリオールを含む。

本発明で使用される組成物にとって適切な抗酸化剤は、好ましくはアスコルビン酸（ビタミンＣ）、ナトリウム−Ｌ−アスコルベート、カルシウム−Ｌ−アスコルベート、アスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシオキソトルエン、カルシウム−二ナトリウム−ＥＤＴＡ、イソアスコルビン酸、レシチン（ｌｅｃｉｔｉｎｅ）、乳酸、ポリホスファート、［アルファ］−トコフェロール、［ガンマ］−トコフェロール、［デルタ］−トコフェロールのようなトコフェロール（ビタミンＥ）、没食子酸プロピル、没食子塩オクチル、没食子酸ドデシル、ナトリウム−イソアスコルベート、クエン酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウムおよびスズ−ｌｌ−塩化物を含む群から選択される。

好ましくは本発明の組成物中に使用されるゲル化剤は、天然のまたは合成ポリマーであり得る。天然ポリマーは好ましくは：寒天、アルギナート、ペクチン、カルボマー、カラギーナン、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、アラビアゴム、ケラチン（ｋｅｒａｔｉｎｅ）、ローカストビーンガム、キサンタンガムから選択される。本発明の組成物中に使用されることができる、好ましい合成ポリマーは：アクリル酸（ａｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ）ポリマー、ポリアクリルアミドおよびアルキレンオキシドポリマーから選択される。

被検体に対して本発明の組成物を投与するために任意の投与経路が使用されることができ、好ましい投与経路は静脈内、経口および局所的である。好ましい実施過程において、本発明の組成物は、液体のまたは半固体の形態で、好ましくは液体、流体、気泡、クリーム、ゲル，ペースト、バルサム、スプレー、軟膏、ローション、コンディショナー、トニック、ミルク、ムース、エマルジョン、血清、油、スティック（ｓｔｉｃｋ）、シャンプー、ゼリー、懸濁液、分散液、ラッカー、ペイント、エリキシル、滴剤またはエアロゾルとして製剤され得る局所的な製剤である。特定の実施形態において、本発明の活性化合物はリポソームの調製において局所的に投与された。本発明で使用されるように、「リポソーム」は、特に身体の細胞に物質（すなわりＰＴＥＲおよび／またはＱＵＥＲ）を送達するために使用される、１つ以上の同心性の層から成る人工の小胞である。

本発明の組成物の局所的な投与は、活性化合物ＰＴＥＲおよび／またはＱＵＥＲの高いバイオアベイラビリティを導き、投与された被検体の５０％において治療反応をもたらす本発明の組成物の量を減らし、すなわち有効薬量（ＥＤ５０）を減らす。薬理学において、生物学的利用率は、薬剤の主要な薬物動態学的特性の１つである、体循環に至る同一薬剤の投与量の割合（ｆｒａｃｔｉｏｎ）を説明するために使用される。そのために、生物学的利用率は薬物動態学において基本的な手法の１つであり、それは投与の非静脈経路のための用量を計算する際に考慮されなければならない。

皮膚癌を含む任意の皮膚の疾患、傷害、または損傷は本発明の組成物によって予防および／または処置されることができる。本発明の好ましい実施形態において、皮膚の疾患、傷害、損傷は炎症性プロセスに関係している。そのため、好ましい実施形態において、本発明は炎症性皮膚疾患に罹患しやすい、または苛まされている被検体を予防および／または処置することに焦点を当て、冒された皮膚の領域（唇、顔、または皮膚一般）に対して本発明の組成物を投与する工程、および／または任意の他の代替的な投与の方法で投与する工程を含む。用語「炎症性皮膚病（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｅｍａｔｏｓｉｓ）」は、限定されないが、皮脂腺障害，丘疹鱗屑状皮疹（ｐａｐｕｌｏｓｑｕａｍｏｕｓ ｄｅｒｍａｔｏｓｅｓ）、アレルギー性皮膚病、掻痒性皮膚病、血管性皮膚病、細菌性皮膚病、ウイルス性皮膚病、ミコール皮膚感染（ｍｙｃｏｌｉｃ ｓｋｉｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）、肉芽腫性皮膚病、寄生虫性皮膚病、剥脱性皮膚炎、水疱症、色素性皮膚病、光線過敏性皮膚病、膠原病によって引き起こされる皮膚病、および内科的疾患による皮膚病を含む皮膚障害の範囲を含む。炎症性皮膚病はまた、自己免疫の疾病にも関係し得、その場合それは本明細書で「自己免疫性皮膚病」として呼ばれる。

本発明の好ましい実施形態において、炎症性皮膚病は皮脂腺障害であり、例えば尋常性ざ瘡、集簇性ざ瘡（ａｃｎｅ ｃｏｎｇｌｏｍｂａｔａ）、汗腺膿瘍、酒さ性ざ瘡、脂漏、脂漏性皮膚炎、グラム陰性菌、毛包炎、顔面膿皮症、多発性皮脂嚢腫症、脂腺過形成、または鼻瘤のようなざ瘡障害である。本発明のさらに好ましい実施形態において、ＰＴＥＲまたはその任意の許容可能な塩を含む組成物／製剤は、随意にＱＵＥＲまたはその任意の許容可能な塩と組み合わせて、尋常性ざ瘡を処置するために使用される。周知のように、尋常性ざ瘡は、にきびおよび丘疹によって特徴付けられた慢性の皮膚疾病であり、大変重度になり得；特に重度の場合、膿疱、包嚢、および永続的な瘢痕が生じ得る。

本発明のまた別の好ましい実施形態において、予防および／または処置される炎症性皮膚病は、例えば、乾癬、バラ色粃糠疹、癜風、または扁平苔癬などの丘疹鱗屑皮疹である。本発明の方法および製剤は、乾癬、従来の剤では処置が困難とされてきた自己免疫性炎症障害の処置に特に有用である。

本発明のさらに好ましい実施形態において、処置される炎症性皮膚病は、一例としてアトピー性皮膚炎、肥満細胞疾患、水疱性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、壊死性脈管炎、円板状紅斑性狼瘡、全身性エリテマトーデス、または疱疹状皮膚炎などの自己免疫皮膚病である。

他の実施形態において、本発明の方法および製剤が有効である様々なタイプの炎症性皮膚病の例は以下のとおりである。
・アレルギー性皮膚病：接触皮膚炎；光アレルギー性皮膚炎；産業によって使用される接触刺激物（ｃｏｎｔａｃｔ ｉｒｒｉｔａｎｔｓ）である様々な化合物に曝されることによって引き起こされる産業性皮膚障害；アトピー性湿疹（幼児および成人）；薬品および貨幣状湿疹によって引き起こされる皮膚病。
・掻痒性皮膚病：冬期、老人性および本態性掻痒症；肛門掻痒；絶え間ない（ｅｔｅｒｎａｌ）耳炎；冬季掻痒症；外陰部掻痒症；および陰嚢掻痒症（ｐｒｕｒｉｔｕｓ ｓｃｒｏｔａｅ）。
・血管性皮膚病：多形性紅斑；結節性紅斑；うっ血性皮膚炎；血小板減少性紫斑病、血小板非減少性紫斑病、異常蛋白紫斑病（ｄｙｓｐｒｏｔｅｉｎｅｍｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ）、光化性紫斑病（ａｃｔｉｎｉｃ ｐｕｒｐｕｒａ）、壊血病性紫斑病、およびヘノッホ紫斑病に関係しているような紫斑性皮膚病（ｐｕｒｐｕｒｉｃ ｄｅｒｍａｔｏｓｅｓ）；斑状出血；うっ血性紫斑；主要および副次的な毛細管拡張症。
・細菌性皮膚病：膿痂疹、膿瘡、毛包炎、せつ麦粒腫（ｆｕｒｕｎｃｌｅｓ ｓｔｙｅｓ）、カルブンケル、汗腺感染、丹毒、紅色陰癬、感染した潰瘍、および感染した湿疹様皮膚炎、のような膿皮症；猩紅熱、鼠径肉芽腫、軟性下疳、結核、ハンセン病、淋疾、リケッチア症、放線菌症、および梅毒、のような全身性の細菌感染に関係する細菌性皮膚疾患。
・ウイルス性皮膚病：単純性疱疹ウイルス、カポジ水痘様発疹、帯状疱疹、水痘、天然痘、種痘疹、伝染性軟属腫、性病性リンパ肉芽腫症、風疹とバラ疹のような発疹性疾患、および伝染性紅斑などによって引き起こされるようなウイルス性皮膚病。
・ミコール皮膚感染：股部白癬（体の様々な部位における皮膚の表層真菌感染症）；足白癬（毛瘡白癬菌への感染に生じる足の皮膚糸状菌症）；爪白癬（爪真菌症）；スポロトリコーシス；コクシジオイデス症；ヒストプラズマ症；
および北アメリカブラストミセス症。
・肉芽腫性皮膚病：サルコイドーシス；環状肉芽腫；細網組織球腫；およびシリカ誘発性の肉芽腫。
・寄生虫性皮膚感染：疥癬、ダニ性皮膚炎（ｃｈｅｙｌｅｔｉｅｌｌａ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）；毛嚢虫症；シラミ症
・色素性皮膚病：肝斑（黒皮症）および尋常性白斑。
・膠原病：強皮症および皮膚筋炎。
・内科的疾患による皮膚病：潰瘍性大腸炎および糖尿病による潰瘍に関係する壊疽性膿皮症。
・光線過敏性皮膚病：薬剤誘発性の光線皮膚炎および光アレルギー性成分による接触皮膚炎などの外因性型；および、ポルフィリン症および多型光線疹と関係しているような内因性型。

好ましい実施形態において、皮膚の疾患、傷害、または損傷は、急性か慢性の何れか、放射線曝露によって引き起こされる。その際に疾患は：皮膚癌、黒色腫、多型光線疹、紫外線角化症、日光蕁麻疹、色素性乾皮症、光線加齢、慢性の光線性皮膚炎または日焼けから選択される。用語「放射線」は皮膚において損傷または傷害を引き起こすことができる任意の種の放射線を含み、例えば、癌を処置するための放射線療法または紫外線（ＵＶ）、好ましくは太陽から放射されるＵＶＢである。

本発明に使用されるように、用語「予防」は、酸化ストレス、放射線への、特に日焼けに関連するＵＶ放射線への、特に日焼けに起因するＵＶＢ放射線への、特に日焼け、アレルギー、免疫反応および炎症性プロセスに起因するＵＶＢ放射線への過剰曝露に関係する皮膚の病態生理学のプロセスの出現を完全に、または部分的に回避することを意味する。

本発明で使用されるように用語「光防護」は被検体が放射線、主にＵＶＢ放射線に曝される前に本発明の組成物を投与し、傷害を被るリスクを減らす、または軽減することを指す。したがって用語「光防護」は用語「予防」のもとに含まれているということが本発明では理解される。

他方で、用語「処置」は、被検体が皮膚の疾患、傷害、または損傷の症状を被った後の、本発明の組成物の投与に関連している。一例として、用語「処置」は、好ましくは、放射線に、主にＵＶＢ放射線に、曝されたヒトに対して本発明に開示される任意の組成物の投与に適用され、皮膚の傷害した部分を修復し、元の機能および完全性を回復する。さらに用語「処置」は、炎症性プロセスに関係する任意の皮膚の疾患、傷害、または損傷を被る被検体に対する本発明の組成物の投与に関連している。

随意にＱＵＥＲと共にＰＴＥＲは、またはその任意の許容可能な塩は、他の活性化合物と組み合わせて製剤され得る。それらの他の活性化合物の中では、鎮痛剤、抗炎症剤、抗アレルギー薬、免疫調節剤、治癒剤（ｈｅａｌｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）および放射フィルターが好ましい。ＰＴＥＲ、および随意にＱＵＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を伴う、本発明の医薬製剤の成分に適切なＵＶフィルターのリストについては、ＷＯ２００８０６７９２８に開示されたＵＶ吸収物質を参照する。最も好ましいＵＶフィルターは以下から選択される。

皮膚の疾患、病変、または傷害を予防および／または処置するにあたって本発明の組成物の効果または効率を解明するために、放射線に曝露される前と後の両方で皮下脂肪または表皮の厚さの測定などの、幾つかの技術が本発明では実施された。それら全ての技術は当業者によく知られており、共通の一般知識に属する。さらに、両方の技術は、異なる化合物が皮膚の疾患、傷害、損傷を予防または処置する能力を試験するために日常的に使用されている。表皮の厚さまたは襞が小さければ小さいほど、処置はより有効である。実施例に示されるように、活性化合物ＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩は、皮膚の疾患、傷害または損傷の予防および／または処置のための局所的な組成物の製造のために使用されることができる。さらに、活性化合物ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、またはその任意の許容可能な塩は、以下に説明されるように、幾つかのアッセイにおいて、別々に摂取される各々の活性化合物の機能を向上させる相乗効果を示す。したがって用語「相乗的な」は、本発明との関連で使用される場合、放射線への暴露によって引き起こされる皮膚の疾患、傷害または損傷を予防および／または処置するための併用療法として投与される際に、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、またはその任意の許容可能な塩の全体的な治療効果が、各々が独立して投与される場合のこれらの活性化合物の治療効果よりも大きいことを意味する。

実施例において示されるように、皮下脂肪厚の測定が実行された。図１はＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、およびまた単独でのＰＴＥＲが、ＵＶＢへの曝露の前に適用される場合、市販のクリーム剤：Ｖｉｃｈｙ（ＶＩＣＨＹ Ｃａｐｉｔａｌ Ｓｏｌｅｉｌ ５０＋ＵＶＢ＋ＵＶＡ）、Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ（Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ ｕｌｔｒａ ９０ ＵＶＢ／ＵＶＡ）およびＩｓｄｉｎ（ＩＳＤＩＮ Ｅｘｔｒｅｍ ４０ ｈｉｇｈ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ＵＶＡ ａｎｄ ＵＶＢ）、よりも、光防護剤（ｐｈｏｔｏｐｒｏｔｅｃｔｏｒ）としてより有効であることを示し、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは僅かにより良い結果を示している。それら３つの市販のクリーム剤は本願明細書全体に渡って比較効果のために使用される。また、本願に渡ってＲＥＳＶもまた、同じ条件のアッセイにおいて、ＰＴＥＲおよびＰＴＥＲとＱＵＥＲ、と比較される。ＲＥＳＶは、従来は、皮膚癌の化学保護剤として開示されている（Ｍｏａｍｍｉｒ Ｈａｓａｎ Ａｚｉｚ，Ｓｈａｎｎｏｎ Ｒｅａｇａｎ−Ｓｈａｗ，Ｊｉａｎｑｕｉａｎｇ Ｗｕ，Ｂ．Ｊａｃｋ Ｌｏｎｇｌｅｙ ａｎｄ Ｎｉｈａｌ Ａｈｍａｄ；ＦＡＳＥＢ Ｊ．ｅｘｐｒｅｓｓ ａｒｔｉｃｌｅ １０．１０９６（２００５）：１−１８）。図１では、ＰＴＥＲ単独またはＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは、ＵＶＢ曝露の後または前の何れにおいてもＲＥＳＶよりも皮膚の光防護についてより大きな効果を示している。

したがって、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、またはＰＴＥＲ単独の何れも、太陽放射線への暴露によって誘発される皮膚疾患の予防において有効に使用され得る。ＰＴＥＲはその放射線の特にＵＶＢ成分を吸収するが、ＱＵＥＲ（図１３を参照）はまた、放射線（太陽）曝露による発癌の原因の一部でもある太陽放射線のＵＶＡ成分に相当する波長において吸収スペクトルをさらに有する。したがって、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せの本明細書の幾つかのアッセイにおいて相乗効果が観測される。

さらに、図１はまた、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せが、ＵＶＢへの曝露の後に適用される場合に市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）、およびＰＴＥＲ単独よりも、放射線による皮膚の疾患、損傷、傷害の処置においてより有効であることを示している。したがって、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは、紫外線Ｂ放射線によって誘発される皮膚の疾患、損傷、傷害の処置において有効に使用され得る。

実施例に示されるように、表皮の厚さの測定は、照射（２４時間）の前に実効された。
図２は、ＰＴＥＲの単独での、またはＱＵＥＲと組み合わせての使用は、ＵＶＢへの曝露の前に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）よりも光防護剤としてより有効であることを示している。したがって、単独での、またはＱＵＥＲとの組合せでのＰＴＥＲは紫外線Ｂ放射線によって誘発される皮膚疾患の予防に有効に使用され得る。

さらに図２はまた、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、または単独でのＰＴＥＲは、ＵＶＢへの曝露の後に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）よりも、放射線によって引き起こされる皮膚の疾患、損傷、または傷害の処置においてより有効であることを示しており、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せが僅かにより良い結果を示している。したがって、ＰＴＥＲ単独と並びにＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは、紫外線Ｂ放射線によって誘発される皮膚の疾患、傷害、または損傷の処置において有効に使用され得る。

実施例に示されるように、表皮の厚さの測定は照射（１週間）の前に実行された。図３はＰＴＥＲの単独での使用が、ＵＶＢの曝露の前に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）よりも、光防護剤としてより有効であることを示している。したがって、単独でのＰＴＥＲは、紫外線Ｂ放射線によって誘発される皮膚の疾患、傷害、損傷の予防において有効に使用され得る。

さらに図３はまた、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、および単独でのＰＴＥＲが、ＵＶＢへの曝露の後に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）よりも、放射線によって引き起こされる皮膚の疾患、損傷、または傷害の処置においてより有効であることを示しており、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せが最も良い結果を示している。したがって、ＰＴＥＲ単独と並びにＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは、紫外線Ｂ放射線によって誘発される皮膚の疾患、損傷、または傷害の処置において有効に使用され得る。

したがって、本発明の第１の実施形態は、皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置で使用するための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を参照する。好ましい実施形態において、本発明はまた、皮膚癌の予防および／または処置における使用のための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を参照する。本発明の別の好ましい実施形態は、皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置における使用のための、ＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を参照する。本発明の別の好ましい実施形態は、皮膚癌の予防および／または処置における使用のための、ＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を参照する。本発明の別の好ましい実施形態は、放射線への曝露によって引き起こされる皮膚疾患の処置における使用のための、ＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を参照する。本発明の別の好ましい実施形態は、皮膚疾患または乾癬の予防および／または処置における使用のための、ＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩を参照する。局所的投与による上記の使用が好ましい。

本発明の第２の実施形態は、皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置用の医薬組成物の製造のための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩の使用を参照する。好ましい実施形態において、本発明はまた、皮膚癌の予防および／または処置用の医薬組成物の製造のための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩の使用を参照する。好ましい実施形態において、本発明は皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置用の医薬組成物の製造のための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩の使用を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、皮膚癌の予防および／または処置用の医薬組成物の製造のための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩の使用を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、放射線への曝露によって引き起こされた皮膚病の処置用の医薬組成物の製造のための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩の使用を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、皮膚病または乾癬の予防および／または処置用の医薬組成物の製造のための、随意にＱＵＥＲと組み合わせたＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩の使用を参照する。好ましく製造された医薬組成物は、局所的に投与されるものである。

本発明の第３の実施形態は、局所的投与用の、より好ましくはリポソームの形態で製剤されたＰＴＥＲを含む医薬組成物を参照する。好ましい実施形態において、医薬組成物はＱＵＥＲと組み合わせて製剤されたＰＴＥＲを含む。好ましい実施形態において、医薬組成物は遮光剤または日焼け止めの製剤の形態で製剤される。

本発明の第４の実施形態は、以下の工程を含むリポソーム製剤を製造するプロセスを参照する：活性化合物ＰＴＥＲ、またはその任意の許容可能な塩、およびレシチンを有機溶媒中に溶解し、溶媒を蒸発させ、ＰＢＳバッファーを添加し、形成されたリポソームを収集し超音波処理し、乳化安定剤、好ましくはカルボマー、さらに好ましくはカーボポールで１：１に希釈し、随意に防腐剤、好ましくはフェノニプ（Ｐｈｅｎｏｎｉｐ）を添加する工程。好ましい実施形態において、リポソーム製剤の製造するためのプロセスはまた、第１の工程でＰＴＥＲと組み合わせてＱＵＥＲを、またはその任意の許容可能な塩を溶解する工程を含む。カーボポールはカルボマーである。カルボマーはまた、医薬品および化粧品における乳化安定剤または増粘剤として使用されるアクリル酸の合成ポリマーについての総称である。それらは、アリルエーテルペンタエリトリトール、スクロースのアリルエーテル、またはプロピレンのアリルエーテルと架橋結合した、アクリル酸のホモポリマーであり得る。

フェノ二プは多数の用途において作用する防腐用の透明な液体である。それは、油中で可溶性であり水中で分散性である点において独特である。この防腐剤は、油ベースの生成物と併用される場合に特に有効であるが、水溶液中においても非常によく作用する。このことは、それが鎮静薬および軟膏のような油のみを含む製品おいても作用するであろうことを意味する。フェノ二プはまた、より広い温度域に耐えることができる。試験は、それが防腐効果の質を下げることなく殺菌温度まで熱せられることを示している。それは３〜８のｐｈの範囲で作用する。使用率は（用途に応じて）総体の化学式の重量の１％から３％まで変化する。フェノ二プは以下から成り立ち、および以下のものとして標識化されなければならない：フェノキシエタノール、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、プロピルパラベン。

本発明の第５の実施形態は、随意にＱＵＥＲ、またはその任意の許容可能な塩と組み合わせてＰＴＥＲを投与する工程を含む、皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置のための方法を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、随意にＱＵＥＲと組み合わせてＰＴＥＲを、またはその任意の許容可能な塩を投与する工程を含む、皮膚癌の予防および／または処置のための方法を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、ＱＵＥＲと組み合わせてＰＴＥＲを、またはその任意の許容可能な塩を投与する工程を含む、皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防および／または処置のための方法を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、随意にＱＵＥＲと組み合わせてＰＴＥＲを、またはその任意の許容可能な塩を投与する工程を含む、皮膚癌の予防および／または処置のための方法を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、ＱＵＥＲと組み合わせてＰＴＥＲを、またはその任意の許容可能な塩を投与する工程を含む、放射線への曝露によって引き起こされる皮膚疾患の処置のための方法を参照する。好ましい実施形態において、本発明は、ＱＵＥＲと組み合わせてＰＴＥＲを、またはその任意の許容可能な塩を投与する工程を含む、皮膚病または乾癬の予防および／または処置のための方法を参照する。より好ましくは、本発明の方法は局所的に適用される。

ＵＶＢに曝露される前（左列）または後（右列）に異なる組成物で処置されたマウスの皮下脂肪厚（％）を示している。市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ−Ｈｅｌｉｏ−およびＩｓｄｉｎ）。Ｃ＋ＵＶＢ＝一切の処置なしで照射された対照；Ｃ Ｌｉｐｏ＋ＵＶＢ＝（活性化合物を一切含まない）リポソームのみが適用される照射された対照。ＲＥＳＶ＝レスベラトロール；Ｐ＋Ｑ＝ＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ。図１〜３の全てにおいて、ヒストグラムのバー（ｂａｒｓ ｈｉｓｔｏｇｒａｍ）に示されるアスタリスク＊は、対照値と比較した場合の統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）を表わす。 照射（２４時間）に曝される前（左列）または後（右列）に異なる組成物で処置された表皮の厚さ（μｍ）を示している。市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ−Ｈｅｌｉｏ−およびＩｓｄｉｎ）。対照＝照射せず、処置せず；Ｃ＋ＵＶＢ＝一切の処置なしで照射された対照；Ｃ Ｌｉｐｏ＋ＵＶＢ＝（活性化合物を一切含まない）リポソームのみが適用される照射された対照。ＲＥＳＶ＝レスベラトロール；Ｐ＋Ｑ＝ＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ。図１〜３の全てにおいて、ヒストグラムのバーに示されるアスタリスク＊は、対照値と比較した場合の統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）を表わす。 照射（１週間）に曝される前（左列）または後（右列）に異なる組成物で処置された表皮の厚さ（μｍ）を示している。市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ−Ｈｅｌｉｏ−およびＩｓｄｉｎ）。Ｃ Ｌｉｐｏ＋ＵＶＢ＝（活性化合物を一切含まない）リポソームのみが適用される照射された対照。ＲＥＳＶ＝レスベラトロール；Ｐ＋Ｑ＝ＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ。図１〜３の全てにおいて、ヒストグラムのバーに示されるアスタリスク＊は、対照値と比較した場合の統計的に有意な差（ｐ＜０．０５）を表わす。 ＴＮＣＢを用いた実験用のアトピー性皮膚炎の誘発に関する試験における（ＴＮＣＢへの事前の露出から１週間後、および隔日の継続曝露の開始である）０日目に関する皮下脂肪の増加を示している。 ＴＮＣＢを用いた実験用のアトピー性皮膚炎の誘発に関する試験における、ＴＮＣＢへの４°曝露の２４時間後の経皮の流体喪失（ＴＥＷＬ）を示している。 ＴＮＣＢを用いた実験用のアトピー性皮膚炎の誘発に関する試験における、ＴＮＣＢへの４°曝露の２４時間後の病変を示している。 ＴＮＣＢを用いた実験用のアトピー性皮膚炎の誘発に関する試験において展開されたプロトコルを図示している。 ＴＰＡを用いた実験用の乾癬の誘発に関する試験において、ＴＰＡ処置の０日目に関する皮下脂肪の増加を示している。 ＴＰＡを用いた実験用の乾癬の誘発に関する試験における、ＴＰＡへの７°曝露の２４時間後の経皮の流体喪失（ＴＥＷＬ）を示している。 ＴＰＡを用いた実験用の乾癬の誘発に関する試験における、ＴＰＡへの曝露についての病変の進化を示している。 Ａ．ＴＰＡ２ｎモルを３日間曝露して２４時間後のマウスの画像； Ｂ．ＴＰＡ２ｎモルを６日間曝露して２４時間後の同じマウスの画像； Ｃ．ヒトの指上の実際の乾癬の画像（皮膚科学イメージアトラス（Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ Ｉｍａｇｅ Ａｔｌａｓ）からの画像）； Ｄ．患者の膝上の実際の乾癬の画像（皮膚科学イメージアトラスからの画像）。 ＴＰＡを用いた実験用の乾癬の誘発に関する試験において展開されたプロトコルを示している。 オキサゾロンへの接触による実験用の過敏症の誘発に関する試験において展開されたプロトコルを示している。 ポリフェノールのメカニカルフィルター能力の評価に関する試験において、純粋なエタノール中の、ポリフェノールの吸収作用、特に各々のポリフェノール（ＰＴＥＲ、レスベラトロールおよびＱＵＥＲ）の異なる溶液１ｍＭの吸収スペクトルを示している。 ポリフェノールの光防護剤役割の評価に関する試験における、ＵＶ−Ｂへの慢性的な曝露の後のマウスの状態を示している。それは（１週間３回）２５週間の１８０ｍＪ／ｃｍ^２への慢性的な曝露の後の異なる実験群の写真である。基準化合物と本研究の対象（１０μモル／マウスのポリフェノール、または光防護剤各２００μｌ）の両方がＵＶ−Ｂへの曝露前にマウスの背部に２０分間適用された。 ポリフェノールの光防護剤役割の評価に関する試験における、病変の発達の進化を示している。（１週間に３回）３０週間の１８０ｍＪ／ｃｍ^２への慢性的な曝露の後の異なる実験群における、直径が１ｍｍよりも大きい前癌性病変の最初の兆候。基準化合物と本研究の対象（１０μモル／マウスのポリフェノール、または光防護剤各２００μｌ）の両方がＵＶ−Ｂへの曝露前にマウスの背部に２０分間適用された。 ＵＶ−Ｂへの慢性的な曝露の後の皮膚の解剖病理学的（ａｎａｔｏｍｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ）研究を示している。（１週間に３回）３０週間の１８０ｍＪ／ｃｍ^２への慢性的な曝露の後のマウスの組織学的部分の解剖病理学的評価。基準化合物と本研究の対象（１０μモル／マウスのポリフェノール、または光防護剤各２００μｌ）の両方がＵＶ−Ｂへの曝露前にマウスの背部に２０分間適用された。 皮膚炎に対する様々なポリフェノールの効果の評価に関する試験において、処置の継続する実施の後の皮下脂肪を示している。１０μモル／マウスのポリフェノールおよび０．５μモル／マウスのデキサメタゾンの処置の適用は６日間毎日マウスの背部の３分の１になされた。皮下脂肪はノギスを活用して測定された。^＊対照に関してはｐ＞０．００１である。分散分析の後にチューキー法が続いた。 放射線ＵＶ−Ｂへの重度の曝露からの保護の評価に関する試験における様々な実験条件を表わす組織学的部分を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、または２００μｌの各光防護剤）の適用は３６０ｍＪ／ｃｍ^２のＵＶ−Ｂによる照射の前後に２０分間なされた。マウスはＵＶ−Ｂへの照射の２４時間後処分された。当該図は表皮の厚みにおける変化を示している。 ＴＮＣＢによって誘発されるアトピー性皮膚炎の実験モデルでの保護に関する試験における、最初のＴＮＣＢ投与の２４時間後の皮下脂肪の増加を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、既に１ＴＮＣＢに対して感作されたマウスに対して１％のＴＮＣＢ１００μｌを適用する２４時間前（０日目）になされた。皮下脂肪はノギスを活用して測定され、０日目についての増加が計算された。^＊対照に関してはｐ＞０．０５である；^＋ＴＮＣＢで処置された対照に関してはｐ＞０．０５である。分散分析の後にチューキー法が続いた。 障害の巨視的評価（ｍａｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）に関する実験における、アトピー性皮膚炎のモデルでの病変評価を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、既に１ＴＮＣＢに感作されたマウスに対して１％のＴＮＣＢ１００μｌを適用する２４時間前になされた。Ｔｅｗａｍｅｔｅｒシステム ＴＭ ２１０（ＣＫ エレクトロニクス、ドイツ）を用いて流行性伝播（ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）の水分喪失の測定が評価された。対照に関しては^＊ｐ＞０．０５である；中空リポソーム（ｅｎｐｔｙ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）で処置された対照に関しては^＋ｐ＞０．０５である。分散分析の後にチューキー法が続いた。 病変の巨視的評価に関する試験における、アトピー性皮膚炎モデルのマウスでの評価を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、既に１ＴＮＣＢに感作されたマウスに対して２日毎に１％のＴＮＣＢ１００μｌを適用する前になされ、ＴＮＣＢの適用は４回までなされた。 オキサゾロンに誘発される接触過敏性（ｃｏｎｔａｃｔ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｖｉｔｙ）のモデルに対する保護に関する試験における、オキサゾロンの投与から２４時間後の皮下脂肪の増加を示している。処置（１μモル／マウスのポリフェノール、２０ｍｇのディプロゾン（ｄｉｐｒｏｓｏｎｅ））の適用は、予めオキサゾロンに感作されたマウスの耳上にエタノール中の２．５％のオキサゾロン２０μｌの適用の２４時間前（０日目）になされた。皮下脂肪はノギスによって測定され、０日目についての増加が計算された。^＊オキサゾロンで処置された対照に関してはｐ＞０．０５である。オキサゾロンの適用の前に、^＋ディプロゾンで処置された対照に関してはｐ＞０．０５である。分散分析の後にチューキー法が続いた。 ＴＰＡによって誘発される乾癬モデルに対する保護に関する試験における、手順を通して０日目に関する皮下脂肪の増加の進化を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、２ｎモル／マウスのＴＰＡが適用される前に３０分間なされた。投与ガイドラインは６日間毎日繰り返された。皮下脂肪はノギスによって測定され、０日目についての増加が計算された。 ＴＰＡによって誘発される乾癬モデルに対する保護に関する試験における、最初のＴＰＡ投与の２４時間後の皮下脂肪の増加を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、２ｎモル／マウスのＴＰＡの投与の前に３０分間なされた。皮下脂肪はノギスによって測定され、０日目についての増加が計算された。^＊対照に関してはｐ＞０．０５である。分散分析の後にチューキー法が続いた。 ＴＰＡによって誘発される乾癬モデルに対する保護に関する試験における、第３のＴＰＡ投与の２４時間後の皮下脂肪を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、２ｎモル／マウスのＴＰＡの適用の前に３０分間なされた。皮下脂肪はノギスを活用して測定され、０日目についての増加が計算された。^＊対照に関してはｐ＞０．０５である；^＋ＴＮＣＢの群に関してはｐ＞０．０５である。分散分析の後にチューキー法が続いた。 ＴＰＡによって誘発される乾癬モデルに対する保護に関する試験における、乾癬モデルのマウスの巨視像を示している。写真は、（Ａ）ＴＰＡの投与の２４時間後および（Ｂ）７ａＴＰＡの投与の２４時間後に撮られた。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、２ｎモル／マウスのＴＰＡの適用の前に３０分間なされた。 ＴＰＡによって誘発される乾癬モデルに対する保護に関する実験における、７回のＴＰＡ投与の２４時間後の表皮剥離（ｄｅｓｃａｌｉｎｇ）の評価を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、２ｎモル／マウスのＴＰＡの適用の前に３０分間なされた。皮膚の表皮剥離の態様は０〜３の段階に定量化され、０はなにも無く、１は軽度、２は中度、３は重度である。および各々の群の媒体は炎症の程度を示した。 乾癬手順の組織学的分析を示している。処置（１０μモル／マウスのポリフェノール、０．５μモル／マウスのデキサメタゾン）の適用は、２ｎモル／マウスのＴＰＡが適用される前に３０分間なされた。７日間に渡って毎日２ｎモルのＴＰＡで処置されて（Ａ）２４時間後、（Ｂ）７２時間後、のマウスからのヘマトキシリン−エオシン染色を伴った５μｍの片の顕微鏡像の画像。

紫外線Ｂ放射線によって誘発される（皮膚癌などの）皮膚疾患を予防するための本発明の組成物の能力を評価するための研究を３６０ｍＪ／ｃｍ^２の用量での急照射によって実行した

（ＵＶＢ放射線への曝露についてのプロトコル）
ＵＶＢへ曝露するために、特別にアップグレードされたカメラ（最大放射３１２ｎｍを備えた、ＵＶＢとして８０％の放射線を放射する５つのチューブを備えたクロスリンカー）を使用した。

ＵＶＢ急性曝露プロトコルを使用した：マウスに１回の３６０ｍＪ／ｃｍ２の曝露をさせた。曝露から２４時間後に研究を行った。当該プロトコルを研究される化合物の光防護効果を評価するために使用した。同じ急性期プロトコル（ａｃｕｔｅ−ｐｈａｓｅ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）で、全ての群のマウスを照射した。次に、炎症反応および浮腫の進化を見るためにマウスを動物保管領域に１週間留めた。

（研究下の化合物の投与および用量）
（慢性または急性の）ＵＶＢ曝露の研究に関して、マウスの背部への局所的投与を行った。市販の遮光剤をマウスに直接塗布した。当該研究のポリフェノールをリポソームのビヒクルとなるカーボポールポリマーで１：１に希釈したリポソーム調製物の形で投与した。投与した各々のポリフェノールの用量は、遊離酸として１０μモル／マウスであった。

（皮膚の傷害のパラメーター指標（Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ））
１．浮腫形成：最初の曝露から２４時間後にキャリパで皮下脂肪厚を測定した。
２．急照射へ曝された後の表皮の厚さの研究（３６０ｍｊ／ｃｍ^２ 照射から２４時間および７日後）。
３．組織学的研究：組織学的セクションから得られた写真において表皮の厚さの測定。

（組織学的研究）
急性の曝露の研究について、皮膚のサンプルをマウスの背部から取った。これらのサンプルを４％のパラホルムアルデヒドで固定し（２４時間）、パラフィンに包埋した。サンプルをカットした後、ヘマトキシリンおよびエオジンで染色した。

（様々な化合物の吸収スペクトルの研究）
各々のポリフェノール（ＰＴＥＲ、レスベラトロール、およびＱＵＥＲ）の１ｍＭの溶液を無水エタノール（ＨＰＬＳ品質；Ｑｕｉｍａ）中に調製し、吸収スペクトルをＭｕｌｔｉｓｋａｎ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、２００〜８００ｎｍの間で研究した。

（光発癌の手順（放射線ＵＶ−Ｂへの慢性的な曝露））
腫瘍形成におけるＵＶ−Ｂ放射線の役割はよく知られている。ＵＶ−Ｂへの継続的な曝露は、様々な転写因子（それらの中にはＮＦ−κＢおよびＡＰ−１がある）を活性化するＤＮＡ、蛋白質、などの変性に伴う酸化／ニトロソ化ストレスの形成および、発癌を次々に誘発するテロメラーゼ活性、ストレスなどの増加を促進する。

さらに、ＵＶ−Ｂへの曝露は抗アポトーシス性の蛋白質の発現およびレベルを増加させ、それは増殖および一定の炎症性マーカーの増加と相関する。

この研究用に選択されたマウスはＳＫＨ−１であった。これらのマウスは低用量のＵＶ放射線に対する慢性的な曝露を受けて腫瘍を進化させるリスクがより大きい（ヒトが日常に受ける曝露と比較して）。

使用したプロトコルは標準化されたプロトコルであり、そこでは数匹のマウスを２４週間の曝露を１８０ｍＪ／ｃｍ２の用量で週に３回照射した。しかしながら、試験の期間中、使用した異なる処置に対する光防護効果についてより多くの証拠を得るために曝露の時間を２８週に長くすることでプロトコルを修正した。

曝露の用量は１８０ｍＪ／ｃｍ２であった。なぜなら従来の試験において、これがこの種のげっ歯類にとって最小紅斑量であると測定されたためである。

この研究では、さまざまな異なる市販の光防護剤を含んでいる：
・Ｖｉｃｈｙ：Ｃａｐｉｔａｌ Ｓｏｌｅｉｌ ＳＰＦ−５０＋ （Ｖｉｃｈｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ）。
・Ｉｓｄｉｎ：光防護剤 Ｉｓｄｉｎ Ｅｘｔｒｅｍ （ＳＰＦ−４０（Ｉｓｄｉｎ ＳＡ）
・Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ：Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ ｇｅｌ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ Ｕｌｔｒａ ９０ （Ｄｉｆａ Ｃｏｏｐｅｒ Ｓ．Ｐ．Ａ．）

ＵＶ−Ｂの曝露の前に、基準化合物と本研究の対象の両方をマウスの背部に20分間適用した。

この評価について２０匹のマウスの群は以下の通りである：
・未処置。
・事前の基準化合物Ｖｉｃｈｙ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＩｓｄｉｎ。
・事前の基準化合物Ｉｓｄｉｎ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＩｓｄｉｎ。
・事前の基準化合物Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＨｅｌｉｏｃａｒｅ。
・事前の媒体：照射の２０分前に適用された真空化された２００μｌのリポソーム。
・事前のレスベラトロール：照射の２０分前に適用された２００μｌのレスベラトロールリポソーム（合計で１０μモル）。
・事前のＰＴＥＲ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＰＴＥＲリポソーム （合計で１０μモル）。
・事前のＱＵＥＲ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＱＵＥＲリポソーム （合計で１０μモル）。
・事前のＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。

ＵＶ−Ｂは短期的に浮腫および紅斑を誘発する。この炎症は過剰増殖プロセスにとって必要不可欠である。

ＵＶに曝露された皮膚細胞は、より高いレバルの核転写ＮＦ−κＢ因子を有し、この因子はＣＯＸ−２およびｉＮＯＳの生成を制御し、とりわけこれがＵＶ−Ｂが皮膚の炎症の明らかな原因である理由の１つである。

研究される光防護化合物の効果を評価する目的で、生後６〜８週の雌のマウスＳＫＨ−１を１回の３６０ｍＪ／ｃｍの曝露にさらした。

紫外線Ｂ（ＵＶＢ）照射の曝露について、我々の研究所で利用可能な特別に準備された、（クロスリンカー；Ｂｉｏ−Ｌｉｎｋ ＢＬＸ ２５４）３１２ｎｍの最大放射を備えた、ＵＶＢ放射線の８０％を生成する５つのチューブが備え付けられたカメラを使用した。

使用したＵＶ−Ｂ曝露の２つのプロトコルは以下である：
・１回の３６０ｍＪ／ｃｍ^２の曝露の後の強烈な曝露。曝露から２４時間後に研究を行った。研究される化合物の光防護効果を評価するためにこのプロトコルを使用した。
・１回の３６０ｍＪ／ｃｍ^２の曝露の後の強烈な曝露。曝露から１週間後に研究を行った。炎症および浮腫の反応の進化を観測するために、マウスを１週間格納庫に保管した。

参照として、幾つかの市販の光防護製品を使用した（Ｖｉｃｈｙ、ＩｓｄｉｎおよびＨｅｌｉｏｃａｒｅ）。観測された反応が太陽光フィルターによるものか否かを決定するために、本研究の対象の製品ならびに基準化合物を、ＵＶ−Ｂによる照射の前後に２０分間マウスの背部に適用した。

この評価について５匹のマウスの群は以下の通りである：
・未処置。
・事前の基準化合物Ｖｉｃｈｙ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＩｓｄｉｎ。
・事後の基準化合物Ｖｉｃｈｙ：照射の２０分後に適用された２００μｌのＩｓｄｉｎ。
・事前の基準化合物Ｉｓｄｉｎ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＩｓｄｉｎ。
・事後の基準化合物Ｉｓｄｉｎ：照射の２０分後に適用された２００μｌのＩｓｄｉｎ。
・事前の基準化合物Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＨｅｌｉｏｃａｒｅ。
・事後の基準化合物Ｈｅｌｉｏｃａｒｅ：照射の２０分後に適用された２００μｌのＨｅｌｉｏｃａｒｅ。
・事前の媒体：照射の２０分前に適用された真空化された２００μｌのリポソーム。
・事後の媒体：照射の２０分後に適用された真空化された２００μｌのリポソーム。
・事前のレスベラトロール：照射の２０分前に適用された２００μｌのレスベラトロールリポソーム（合計で１０μモル）。
・事後のレスベラトロール：照射の２０分後に適用された２００μｌのレスベラトロールリポソーム（合計で１０μモル）。
・事前のＰＴＥＲ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＰＴＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・事後のＰＴＥＲ：照射の２０分後に適用された２００μｌのＰＴＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・事前のＱＵＥＲ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＱＵＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・事後のＱＵＥＲｒ：照射の２０分後に適用された２００μｌのＱＵＥＲレスベラトロールリポソーム（合計で１０μモル）。
・事前のＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ：照射の２０分前に適用された２００μｌのＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・事後のＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ：照射の２０分後に適用された２００μｌのＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。

異なる処置の実施から２４時間または１週間後に、マウスを処分し、その皮膚を４％のＰＦＡで固定した。

（耳の厚さ）
反応の結果の前の耳の厚さと２４時間後の耳の厚さの差として浮腫を計算し、ノギスによって測定した。

変化を０日目に関して相対的な増加として表わした。

（皮膚の巨視的評価）
皮膚の外観の変化または任意の一般的な変化を検出するために、マウスを毎日観測した。

また、マウスを処分する前の特定の日に、それらを獣医に診せ、獣医は皮膚病変を分析し、皮膚病変を以下の機能において限定した：
・紅斑：血管の拡張によって過剰な血液灌流（ｂｌｏｏｄ ｉｒｒｉｇａｔｉｏｎ）による炎症に条件づけられる皮膚の発赤。
・擦過創：または、はがれやすい（ｆｌａｋｙ）態様の皮膚の刺激作用、過角化症をもたらし得る皮膚の表皮剥離の増加。
・皮膚の破かれた箇所（ｓｏａｒｓ）または潰瘍をもたらしかねない真皮に届く、病変の深さ。

各々の変数は０〜４のスケールで評価され、０はなにも無く；１は軽度；２は中度；３は顕著；および４は非常に顕著、である。各々のマウスに加えられた３つの値は炎症の程度を示す。

光発癌のプロセスの間、様々な腫瘍が存在し、プロセスを通して定量化された。直径１ｍｍよりも大きい任意の病変は、病変として認識される。

（顕微鏡分析）
顕微鏡レベルで、異なる手順の皮膚の組織を研究するために組織学的技術を使用した。

組織をＰＢＳ中の４％のホルムアルデヒド中に２２℃で２４時間以上固定した。組織を固定した後、ミクロトームでそれらを薄く切るために充分な一貫性を提供するようにパラフィンに組織を貫通させるようにすべく、組織を大量のエタノール中で脱水させ、疎水性かつキシレン混合物中に入れなければならなかった。

パラフィン中のサンプルは、約５〜１０μｍの薄片を有するミクロトームでパラフィンのサンプルを処理した。サンプルを、３７℃で１滴のゼラチン上に広げ、ゼラチン化されたスライド中に集めた。

他の手順については、キシリンでサンプルを洗浄することによって、およびエタノールを用いてサンプルに水を加えて元に戻すことによって、パラフィンを６０℃以上の温度で除去する必要があった。

ヘマトキシリンはカチオンの着色料であり、一方でエオシンはキサンテンに属するアニオンの着色料である。したがって、その核は青に染色され、および細胞質はピンクに染色される。

サンプルを染色するために使用したプロトコルは以下である。：
１．１０〜１５分間のマイヤーヘマトキシリンでのインキュベーション。
２．青みを帯びるまで流水下で洗浄する。
３．エオシン（１％）で２〜４分間インキュベートする。
４．７０°のエタノール中の残りのエオシンを除去する。
５．脱水。
６．キシロールで３分間すすぐ。
７．トレーを３７°でストーブ上で乾かす。

（統計分析）
結果を平均±標準偏差で表示した。標準偏差はエラーバーの形態で表わされ、幾つかの場合では、グラフを単純化するために正のセミバー（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｍｉ ｂａｒｓ）のみが示される。

データを必要に応じて１つ以上の因子または試験の偏差に基づいて分析（分散分析）した。変量の均質度をルービン法で分析した。値Ｆが０．０５よりも大きい値ｐに対して有意でない試験の全ての値について帰無仮説を採用した。値Ｆが有意であるデータを０．０５の値ｐを伴うチューキー法で分析した。

使用したコンピュータプログラムは、計算およびグラフ用のエクセルであり、そして統計についてはＷｉｎｄｏｗｓ用のＳＰＳＳ１４．０版（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ）を使用し、バレンシア大学がこのユーザーライセンスを有している。

（実施例）
（実施例１：実験動物モデル）
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙによって提供されたＳＫＨ−１マウス種を実験動物として使用した。それらは無毛の免疫応答性のマウスである。実験群を、表２で示されるように、生後３〜４週間の雌のマウスで形成した。光防護の実験群を５〜６匹の動物で構成した。これらの研究にでは、各々の実験群を２０匹のマウスで構成した。

さらに、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒからの生後４週間の無毛の雌のマウスＳＫＨ１−Ｅに、または生後６〜８週間のＢＡＬＢ／ｃマウスに、インビボ試験を行った。

ＴＮＯ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ（ライデン、オランダ）でなされたオキサゾリンに対する過敏性についての研究を除いては、バレンシア大学の、動物生産科からの動物実験分野における実験調査セントラルサポートサービス（ＣＳＳＥＲ）で研究を行った。

一旦、２週間後に動物が順応すると、温度：２２±２℃、相対湿度：６５〜８０％、１時間につき１２回の換気および１２時間中１２の光周期：現行の国際規則［欧州共同体理事会指令（８６／６０９，ＯＪ Ｌ ３５８．１，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １２，１９８７）ナショナルヘルスインスティテュート（実験動物のケアと使用に関するガイド、ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．８５−２３，１９８５，ＵＳＡ）］に従った、制御条件下で防護壁が備え付けられた部屋で実験を行った。

動物を頸椎脱臼によって処分した。組織学用に後部から取ったサンプルを４％のホルムアルデヒドで一晩固定した。強烈なＵＶ−Ｂ曝露の手順と、それに続く炎症および酸化／ニトロソストレスの評価のために、サンプルの一部を液体Ｎ_２で保った。

続いて、２０μｌの血液を取り８０μｌのＮ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）に加えた。

４％の過塩素酸（ＰＣＡ）１００μｌを約１０分間のインキュベーションのあとで加えた。サンプルを激しく振った（ｖｉｏｒｏｕｓ ｓｈａｃｋｉｎｇ）後で、氷中に保存した。最終的に全てのサンプルを４℃で１５分間、１３０００ｒｐｍで遠心分離機にかけた。上澄液を集め、ＧＳＨ（グルタチオンの還元型）／ＧＳＳＧ（グルタチオンの酸化型）比率の分析まで、−２０℃で格納した。ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率は、細胞内の酸化還元状態、および特には細胞内チオールの酸化還元状態を反映するパラメーターである。したがって、この比率の変化を酸化ストレスを評価するために使用する。

後部の皮膚から４つのサンプルを取った。１つは組織学的検査用（４％のホルムアルデヒド中に一晩固定した）であり、および３つを生化学分析用に液体窒素で凍結した。

（実施例２：リポソームの調製）
ポリフェノールに関わらず、リポソームの調製方法を均等に使用した：大豆レシチン；ＰＴＥＲおよび／またはＱＵＥＲの場合は有機溶媒としてジクロロメタン、および、ジクロロメタン中で溶解できないためにレスベラトロールについては有機溶媒としてエチルエーテル。有機溶媒の蒸発をバキュームに繋がれた回転蒸発装置を使用して、４０℃の温度で行った。有機溶媒を取り除いた後で、リポソームを１ｍＭに希釈したＰＢＳ中に再懸濁した。最終リポソーム濃度において、カーボポールを加える前、各々のポリフェノールの濃度は、ＨＰＬＣ／ＭＳ−ＭＳで測定されたように２０μＭポリフェノールであった。

リポソームを調製する工程は以下のように要約され得る。
１．重量ポリフェノールおよびレシチン
ＰＴＥＲ：０，５１７ｇｒ
ＱＵＥＲ：０，６７６ｇｒ
ＲＥＳＶ：０．４５８ｇｒ
レシチン：２．３７６
２．ポリフェノールおよびレシチンを４０ｍｌのジクロロメタン中に溶かし（ＰＴＥＲおよび／またはＱＵＥＲの場合）、または１４０ｍｌのエチルエーテルも溶かす（レスベラトロールの場合）。
３．溶液を回転蒸発装置フラスコに導入し、装置（ｄｅｖｉｃｅ）に取り付けた。一旦、全ての溶媒が蒸発すれば、予期される真空をカットし、なり得た溶媒の全ての痕跡を除去するために１５分間待つ。
４．希釈したＰＢＳ（１ｍＭ）２０ｍｌを回転蒸発装置フラスコに加え、今回は真空なしで装置に再度取り付ける。
５．形成されたリポソームを５０ｍｌチューブに集める。
６．リポソームの音波処理（６秒間、２５周期、各周期間に３秒の間隔をおく；高強度）。
７．カーボポールで１：１に希釈（終濃度１０μモル／２００μｌ）
８．起こり得る感染を防ぐためにフェノ二プ（１０００ｍｌ中６ｍｌのフェノ二プの調製）を加える。

ＰＴＥＲおよびＱＵＥＲと同様の方法で対照リポソームを作ったが、レシチン（２．３７６ｇ）のみを含む。

リポソームを獲得する手順は、コロイドリサーチユニット（バレンシア大学、化学物理学部）との共同で我々の研究所で行った。

リポソームにはポリフェノールのような様々な有効成分を負荷させることができる。皮膚に浸透する能力のために、リポソームはこれらの有効成分を皮膚中で長距離運ぶことができ、定められた地点で止まることができる。このため、リポソームを皮膚疾患の治療に使用することができる。緑茶に由来するポリフェノールを含む様々な製品（Ｒｅｐｌｅｎｉｘ；Ｋａｐｌａｎ ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｃｅｎｔｅｒｓ）と、およびブドウに由来するレスベラトロール（Ｒｅｓｖｅｒａｄｅｒｍ； ＳｅｓＤＥＲＭＡ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｏｓ）がある。

リポソームを得るために大豆レシチンの混合物を使用した。これは９０％のホスファチジルコリンおよび他の脂肪酸の天然の混合物である。ＧＵＩＮＡＭＡ Ｓ．Ｌ（バレンシア，スペイン）が大豆レシチン（純度９９％）を提供した。

ＰＴＥＲ（ＣＭＬヨーロッパＢＶ）およびＱＵＥＲ（シグマ）のためにジクロロメタン（シグマ）、レスベラトロール（シグマ）のためにエーテル（シグマ）、などのように溶解性（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ）のために極性有機溶媒を使用した。

リポソームを獲得するための理想的な混合物は以下を含む：
・ジクロロメタン中に溶解した、５．９（ｗ／ｖ）のレシチン、１．２８（ｗ／ｖ）のＰＴＥＲおよび１．６９（ｗ／ｖ）のＱＵＥＲ。
・エーテル中に溶解した、１．６９（ｗ／ｖ）のレシチンおよび１．１５（ｗ／ｖ）のレスベラトロール。

真空回転蒸発装置で大豆レシチンを４０℃で脱水することによって、異なるポリフェノールの微視的パッケージングを達成し、後にレシチンを、最終溶液中の化合物につき０．１ｍＭの終濃度に向けて２０℃で１ｍＭ、ｐＨ７のホスファート溶液によって水和した。

顕微鏡を介して形態を観測することでリポソームを粒子の大きさに関して標準化した。リポソーム懸濁液中のポリフェノールの濃度をＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって定量化した。

溶液をカーボポール９４０（Ｇｕｉｎａｍａ）で希釈度１：１に安定化し、０．６％（ｖ／ｖ）の抗菌性の防腐剤フェノ二プ（Ｇｕｉｎａｍａ）を加え、それによって各ポリフェノール／２００μｌに対して１０μモルのリポソームの溶液を得た。

自動マイクロピペットを用いて、クリーム剤の均質なフィルムをマウスの背部に適用し平滑化することでリポソームを投与した。

投与プロトコルに従って化合物を適用した。前記プロトコルは以下の各手順に記載されている。：
・中空リポソーム：荷電されていないリポソーム。
・ＰＴＥＲリポソーム：１μモル／２０μＬのクリーム剤。
・ＱＵＥＲリポソーム：１μモル／２０μＬのクリーム剤。
・ＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲリポソーム：各々の化合物の１μモル／２０μＬのクリーム剤。
・レスベラトロールリポソーム：１μモル／１０μＬのクリーム剤。

（実施例３：照射から２４時間後の皮下脂肪の測定）
マウスの脇の下から臀部までの、背部からの皮膚上に襞をつくることで皮下脂肪を測定した。襞をノギスによって測定した。

反応の作用の前の最初の時点、および各時点における厚さの差異によって、襞の増大を計算した。

図１はマウスの後部の皮膚の厚さを測定して得られた結果を示している（そこでは、様々な処置を適用した）。結果を分散分析によって統計的に分析しチューキー法によって対比し、そして有意な差異に基づき分類した。標準偏差を図１に組み入れている。図１に示されるように、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、および単独でのＰＴＥＲは、ＵＶＢへの曝露の前に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）およびＲＥＳＶよりも、光防護剤としてより有効である。したがって、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、または単独でのＰＴＥＲは、紫外線Ｂ放射線に誘発される皮膚疾患の予防に有効に使用され得る。

さらに、図１はまた、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、または単独でのＰＴＥＲが、ＵＶＢへの曝露後に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）およびＲＥＳＶよりも、放射線による皮膚の疾患、傷害、または損傷の処置により有効であることを示している。したがって、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは、紫外線Ｂ放射線に誘発される皮膚の疾患、傷害、または損傷の処置に有効に使用され得る。

（実施例４：照射後（２４時間）の表皮の厚さの測定）
起こり得る過形成を評価するよう表皮の厚さを測定するために、コンピュータプログラム、Ｉｍａｇｅ Ｊを使用し、表皮の測定を可能にするノイバウアーカメラ（Ｎｅｕｂａｕｅｒ ｃａｍｅｒａ）を活用して測定した。得られた結果を分散分析によって分析し、チューキー法で対比し、そして有意な差異に基づいて分類した。図２に示されるように、ＰＴＥＲ単独の使用は、ＵＶＢの曝露の前に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）よりも光防護剤としてより有効である。したがって、ＰＴＥＲは単独で紫外線Ｂ放射線に誘発される皮膚の疾患、損傷または傷害の予防に有効に使用され得る。

さらに、図２はまた、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せが、ＵＶＢへの曝露後に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）およびＲＥＳＶよりも放射線によって誘発される皮膚の疾患、傷害、または損傷の処置についてより有効であることを示している。したがって、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せ、並びに単独でのＰＴＥＲは、紫外線Ｂ放射線に誘発される皮膚の疾患、傷害または損傷の処置に有効に使用され得る。この実験における対照は放射線および処置が与えられないことを意味する。

（実施例５：照射後（１週間）の表皮の厚さの測定）
皮膚の厚さの評価をコンピューターソフトウェア（ＩＭＡＧＥ Ｊ）を使用して行った。分散分析によって得られた結果をチューキー法で対比し、有意な差異に基づいて分類した。図３に示されるように、ＰＴＥＲの単独での使用は、ＵＶＢの曝露の前に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）よりも光防護剤としてより有効である。したがって、ＰＴＥＲは単独で、紫外線Ｂ放射線に誘発される皮膚の疾患、傷害、または損傷の予防に有効に使用され得る。

さらに、図３はまた、ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは、ＵＶＢへの曝露後に適用される場合、市販のクリーム剤（Ｖｉｃｈｙ、ＨｅｌｉｏｃａｒｅおよびＩｓｄｉｎ）およびＲＥＳＶよりも放射線によって引き起こされる皮膚の疾患、傷害、または損傷の処置についてより有効であることを示している。したがって、ＰＴＥＲ単独と並びにＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せは、紫外線Ｂ放射線によって誘発される皮膚疾患の処置において有効に使用され得る。

（実施例６：ＴＮＣＢを用いた実験的アトピー性皮膚炎の誘発）
一般に塩化ピクリル（Ｐｙｃｒｉｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）としても知られる剤「２−クロロ−１，３，５−トリニトロベンゼンまたは２，４，６−トリニトロクロロベンゼン」（ＴＮＣＢ）について、これはマウスの皮膚の炎症と組み合わせてアレルギー性プロセスを誘発する化学剤である。さらに、ＴＮＣＢ軟膏の継続投与は、アトピー性皮膚炎をもつヒトの患者の中で起こるように、血清中のＴリンパ球、マスト細胞およびＩｇＥの生成を増加させる。

アトピー性皮膚炎病変を生じさせるために、マツモトによって説明されたプロトコルを使用し、ＳＫＨ−１マウスの背部にアセトン中の１％のＴＮＣＢ溶液１００μＬを［その量が広がるのを防ぎ、病変の部分をより局部的に保つために（自動マイクロピペットのディスペンサーを活用して）３３μＬの３回適用で］適用した。

ＴＮＣＢを用いた事前の試験期間に後続してＴＮＣＢによる処置が３２日間続く、マツモトによって提唱されたプロトコルとは対照的に、ＴＮＣＢを用いた１回の試験、および１週間後に２日毎のＴＮＣＢによる４回の投与から成るプロトコルを展開した。より短いプロトコルは、図４で示されるように皮下脂肪の増大をもたらし、同様に図５で示されるように経皮の流体喪失の増大をもたらし、これらの病変は図６で示されるように巨視的レベルで明らかである。

したがって、この手順で展開されたプロトコルは図７で示されるものである。標準的な処置として、以下はデキサメタゾン（アセトン中のシグマ溶液２５ｍＭ）を使用した。試験される生成物の投与および標準的な処置を、最初のＴＮＣＢの継続的な適用の２４時間前およびマウスがＴＮＣＢに曝露された後（１週間前）に開始して、隔日で施した。

この評価について５匹のマウスの群は以下の通りである：
・未処置。
・基準化合物：０．５μモルのデキサメタゾン（アセトン中の２０μｌ溶液２５ｍＭ）。
・媒体：２００μｌの真空化されたリポソーム。
・レスベラトロール：２００μＬのレスベラトロールリポソーム（合計で１０μモル）。
・ＰＴＥＲ：２００μＬのＰＴＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・ＱＵＥＲ：２００μＬのＱＵＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・ＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ：２００μＬのＰＴＥＲリポソーム＋ＱＵＥＲ（合計で１０μモル）。

異なる処置の最後の投与から２４時間後（９日目）、マウスを処分しそれらの皮膚を４％のＰＦＡで固定した。

（実施例７：ＴＰＡを用いた乾癬の実験的誘発）
乾癬の誘発のために、剤「１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３アセテート」（ＴＰＡ）を使用した。一般に「ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート」（ＰＭＡ）としても知られる、剤「１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３アセテート」（ＴＰＡ）に関して、これは、蛋白質Ｃのキナーゼ酵素（ＰＫＣ）を介して信号の形質導入を活性化するために、生物医学研究において通常使用される、ホルボールのジエステルおよび腫瘍の強力な促進剤である。

無毛のマウスＳＫＨ−１に疾患を進化させるために必要とされるＴＰＡの用量に関して、幾人かの著者は引き上げられた用量１０〜１７ｎモル／マウスを使用し、達成された過形成の再生は、予め徐毛した、乾癬を有するＢａｌｂ／Ｃマウスについてのそれの起こり方と類似しており、このモデルは乾癬の研究において広く使用される。しかしながら、これらのモデルは、ほんの１回のＴＰＡ投与の後の生化学的なまたは分子のパラメーターを評価するためにしか使用されない。乾癬によって引き起こされる病変の進行をポリフェノールの使用を組み合わせて評価することが我々の目的であるため、連続曝露モデルおよびより薄い濃度のＴＰＡを、１週間の期間に渡ってＴＰＡ１日量２ｎモルの用量で使用し、それにより乾癬の進行を観測することができた。

誘発を１ｃｍ^２の部位上に、２ｎモルのＴＰＡ／マウスによって行い、アセトン中の２００μＭの溶液の１０μＬを適用した。この適用のプロトコルを、モデルに明示されているよう、２０μＬを適用する場合、容量が相当に増大しその濃度を失うことを考慮しながら実施したので、より濃縮させるよう決定した。

より短いプロトコルは、図８で示されるように皮下脂肪の増大をもたらし、同様に図９で示されるように経皮の流体喪失（ＴＥＷＬ）の増大をもたらし、これらの病変は図１０で示されるように巨視的レベルで明らかである。

したがって、この手順で展開されたプロトコルは図１１で示されるものである。標準的な処置として、デキサメタゾンを使用した（アセトン中のシグマ溶液２５ｍＭから）。ＴＰＡの投与の３０分前に標準的な処置および試験される生成物を投与し、両方とも同じ日に開始した。

この評価について６匹のマウスの群は以下の通りである：
・未処置。
・基準化合物：０．５μモルのデキサメタゾン（アセトン中の２５ｍＭの溶液２０μｌ）。
・媒体：２００μｌの真空化されたリポソーム。
・レスベラトロール：２００μＬのレスベラトロールリポソーム（合計で１０μモル）。
・ＰＴＥＲ：２００μＬのＰＴＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・ＱＵＥＲ：２００μＬのＱＵＥＲリポソーム（合計で１０μモル）。
・ＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ：：２００μＬのＰＴＥＲリポソーム＋ＱＵＥＲ（合計で１０μモル）。

異なる処置およびＴＰＡの最後の実施から２４時間後（７日目）、各群からの３匹のマウスを処分し、それらの皮膚を４％のＰＦＡで固定した。残りのマウスをＴＰＡの曝露を伴わず処置の状態に保ち、皮膚が自力よりも処置による方がより早く回復するか否かを確認した。異なる処置の最後の実施から２４時間後（９日目）、残りのマウスを処分し、それらの皮膚を４％のＰＦＡで固定した。

（実施例８：オキサゾロンへの接触による過敏性の実験的誘発）
同じ物質への感作の後のオキサゾロンの適用は、リンパ球およびマクロファージ浸潤、表皮の浮腫を伴う湿疹性の反応のように見える、接触による過敏症の反応をもたらす。

ＢＡＬＢ／ｃマウスを、徐毛した腹部上へ、アセトン（ｗ／ｖ）中の１．５％でのオキサゾロンの１００μＬの適用を介して０日目に感作する。過敏症の誘発の前に、耳の厚さをノギス（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒ）を使って測定した。エタノール中の２．５％ｍｐオキサゾロン２０μＬを適用することで（右耳の各側へ１０μＬ）、反応を７日目に引き起こした。

したがって、この手順で展開されたプロトコルは図１２に示されるものであった。対照測定（ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｅａｓｕｒｅ）として左耳を使用し、そこに２０μＬのエタノールを適用した。そして標準的な処置、Ｄｉｐｒｏｓｏｎｅ（登録商標）クリーム剤を使用し：（シェーリング プロー Ｂ．Ｖ． ユトレヒト、オランダ）、それは０．５ｇのベータメタゾン／ｇを含んでいる。

この評価について８匹のマウスの群は以下の通りである：
・未処置。
・基準化合物：７日目にオキサゾロンを適用して３０分後に、１０ｍｇのＤｉｐｒｏｓｏｎｅ（登録商標）クリーム剤を耳の各側に適用。
・媒体：７日目のオキサゾロン適用の３０分前に、１０μｌの中空リポソームを耳の各側に適用。
・事前のレスベラトロール：７日目のオキサゾロン適用の３０分前に、１０μｌのレスベラトロールリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。
・事後のレスベラトロール：７日目のオキサゾロン適用の３〜４時間後に、１０μｌのレスベラトロールリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。
・事前のＰＴＥＲ：７日目のオキサゾロン適用の３０分前に、１０μｌのＰＴＥＲリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。
・事後のＰＴＥＲ：７日目のオキサゾロン適用の３〜４時間後に、１０μｌのＰＴＥＲリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。
・事前のＱＵＥＲ：７日目のオキサゾロン適用の３０分前に、１０μｌのＱＵＥＲリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。
・事後のＱＵＥＲ：７日目のオキサゾロン適用の〜４時間後に、１０μｌのＱＵＥＲリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。
・事前のＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ：７日目のオキサゾロン適用の３０分前に、１０μｌのＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。
・事後のＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲ：７日目のオキサゾロン適用の３〜４時間後に、１０μｌのＰＴＥＲ＋ＱＵＥＲリポソームを耳の各側（合計で１μモル）に適用。

オキサゾロンの投与から２４時間後（１日目）、マウスを処分し両耳を４％のＰＦＡで固定した。

（実施例９：経皮の水分喪失）
幾つかの皮膚の疾病は、強皮症および乾癬においてのように、皮膚の機械的特性を損なうことで特徴づけられる。

それにもかかわらず、これらの特徴の客観的な評価は複雑であり、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ ＴＭ ２１０ システム（ＣＫ エレクトロニクス，ドイツ）を介して評価される経皮の水分喪失（ＰＴＥＡまたはＴＥＷＬ）を測定は皮膚の「障壁」（ｇ／ｈ／ｃｍ２）の機能の指標と考えられる。

このタイプの測定の物理学的基板は１８８５年にアドルフ フィックによって確立された拡散法則に基づいている：

式中：
Ａ＝ｍ^２単位の表面積
ｍ＝水の輸送量（単位ｇ）
ｔ＝時間（ｈ）
Ｄ＝拡散の定数（＝０．０８７７ｇ／ｍ・ｈ・ｍｍＨｇ）
ｐ＝大気中の蒸気圧力（ｍｍＨｇ）
ｘ＝皮膚から測定点までの距離（ｍ）

拡散法則ｄｍ／ｄｔは、時間のある区間において輸送されたｃｍ^２単位の質量を指し、それは面積Ａおよび距離ｄｃ／ｄｘによる濃度の変化量に比例する。Ｄは空気中の水蒸気の拡散係数を表わす。この法則は一方拡散の領域内においてのみ有効であり、それは空のシリンダーとよく似た形を有している。結果として生じる密度勾配（ｇｒａｄｉｅｎｔ ｄｅｎｓｉｔｙ）はマイクロプロセッサーによって分析される２つの検出器（温度および相対湿度）に間接的に記録される。

Ｔｅｗａｍｅｔｅｒ ＴＭ ２１０ システムのプローブにおいて、温度および水和作用の検出器、並びにキャリブレーションのための測定およびデータ用の回路類は、センサーの内部に位置付けられている。センサーの頭部は中空および狭いシリンダー（直径＝１０ｍｍ、長さ＝２０ｍｍ）、およびその機能はセンサー中の大気乱流を減少させることである。

マウスを固定した後、プローブをそれらの背部、異なる化学剤で処置した同じ部位、に置いた。ＴＥＷＬ読み取り（ｒｅａｄｉｎｇｓ）は、測定基準が安定化するまで継続的に行われ、それは３０〜６０秒の間の読み取りを生じさせ得る。

（実施例１０：ＵＶ−Ｂ照射への慢性的な曝露の間の光防護剤および抗発癌性の作用）
（ポリフェノールのメカニカルフィルター能力）
本研究で使用されるポリフェノールの能力を研究する目的で、図１３に示されるように紫外線スペクトル全体に渡って光の吸収を評価することを決定した。

レスベラトロール並びにＰＴＥＲが、紫外線Ｂの範囲においてピークまたは最大の吸収を有し、対照的にＱＵＥＲがＵＶ−Ａ内の波長においてより大きな割合で吸収されることが確認された。

（ポリフェノールの光防護役割）
研究の以下の段階は、光発癌に対するポリフェノールの起こし得る修復能力（ＵＶ−Ｂへの曝露の後のポリフェノールの添加）に対する、光防護成分（ＵＶ−Ｂへの曝露の前のポリフェノールの添加）を評価することである。

この目的のために、図１４に示されるように、ＵＶ−Ｂへの慢性的な曝露の後に光防護能力を評価した。マウスを曝露につき１８０ｍＪ／ｃｍ^２のＵＶ−Ｂの用量で２８週間に渡って１週間につき３回の曝露に晒した。このプロトコルによって、１２週目から現れ始める異常形成が誘発される。手順の全体に渡って、図１５に示されるように、前癌性病変を評価し定量化した。

病変の兆候に関連して異なる処置の効果を比較すると、対照群ならびに中空リポソームで処置された群が、ＵＶ−Ｂへの継続的な曝露の１２週に始まって、５０％以上のマウスが腫瘍を有したことが認識できるであろう。対照的に、ポリフェノールによる処置は、ＲｅｓｖおよびＱｕｅｒの場合、およそ２０週目まで腫瘍の発現を遅らせた。しかしながら、Ｐｔｅｒの処置の下、ＵＶ−Ｂへの３０週間の慢性曝露の後では、Ｐｔｅｒ単独またはＱｕｅｒと組み合わせた場合、マウスのほんの１０％しか病変を示さなかった。この防護効果は市販の光防護剤で見出されたものよりも優れていた。

マウス当たりの病変の数に関して、ＰｔｅｒおよびＱｕｅｒと組み合わせたＰｔｅｒは、他の任意の処置と比較してマウス当たりの病変の数がゼロであったため、最大の防護を提供したものであった。以下の表３はマウス当たりの病変：１８０ｍＪ/ｃｍ^２での３０週間の慢性曝露（１週間に３回）後の異なる実験群において、直径が１ｍｍより大きい前癌性病変の最初の兆候、を示している。基準化合物および本研究の対象の化合物の両方とも、(１０μモル／マウスのポリフェノール、または２００μｌの各光防護材)を、ＵＶ−Ｂへの曝露の２０分前にマウスの背部に適用した。２０匹のマウスの群。

（解剖病理学的研究）
ＳＫＨ１マウスにおけるＵＶへの慢性照射によって誘発される腫瘍の組織病理学試験に関して、ＵＶ−Ｂによる処置が、主として炎症性プロセスによって強烈な表皮肥厚を生じさせることが確認された。これは最初の兆候に取ってかわり、大抵は癌腫型であり、黒色腫型ではない。

２つの非黒色腫型の皮膚癌の大半は：基底細胞癌および鱗状細胞癌（ｆｌａｋｙ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）である。

市販の光防護剤の使用は、主に炎症から防護したが、Vichyのみが起こり得る腫瘍の進化を減退させた。

ポリフェノールの使用は、抗炎症形成および抗腫瘍形成の効果を有した。ＰＴＥＲが最も大きな有益性を備える化合物であった。しかしながら、その相当物であるレスベラトロールと比較した場合、抗炎症性形成および抗腫瘍形成のレベルで大きな差異が観測された。それはまた、異なる市販の光防護材と比較した場合にも、より良い結果を示した。

ＰＴＥＲとＱＵＥＲの組合せについて、光防護効果に関しては、Ｐｔｅｒ単独での使用または組合せての使用の間に差異は見出されなかったが、後に議論されるように、抗炎症性効果に関して差異があった。図１６に示されるように、以下の表４は、ＵＶ−Ｂへの慢性曝露、特に１８０ｍＪ／ｃｍ^２への３０週間の慢性曝露（１週間に３回）後の皮膚の解剖病理学的研究を示している。基準化合物および本研究の対象の両方とも（１０μモル／マウスのポリフェノール、または各２００μｌの光防護材）を、ＵＶ−Ｂへの曝露の前にマウスの背部に20分間適用した。２０匹のマウスの群の媒体。パラメーターを、重症度の程度、（＋）軽度〜（＋＋＋）重度に従って測定した。

（実施例１１：皮膚炎への効果）
皮膚炎の様々なモデルに対する様々な処置の結果を評価する前に、マウスの皮膚上へのポリフェノールの継続投与の潜在的な副作用を図１７で示すように評価しなければならなかった。この目的のために、この毎日の評価のための用量が６日にわたって連続投与された。

観察されるように、その処置だけでは長期的な処置後の皮下脂肪に影響しなかったが、コルチコイド（デキサメタゾンのような）の長期間の使用は、皮膚の構造に副作用をもたらした。

（照射線ＵＶ−Ｂへの急性曝露からの保護）
ポリフェノールの抗炎症性の特徴を光発癌に対する防護とみなしていることから、抗炎症性の役割についてＵＶ−Ｂへの重度の曝露後に研究した。４匹のマウスの背部の皮膚の厚みの測定で得られた結果が図１に示される。

ポリフェノールＰｔｅｒおよびＲｅｓｖは個々に、および、Ｐｔｅｒ＋Ｑｕｅｒによる組み合わせは、浮腫の形成が減少したため、ＵＶＢ照射の曝露後に有益な効果を示した。

皮膚の厚みのこの増加は、主として炎症プロセスによって、または、表皮の細胞の過剰増殖によって引き起こされる容積による場合がある。したがって、それは図２に示されるような表皮の厚みを測定するために必要とされた。

ポリフェノールで処置されたマウスの表皮の厚みの有意な差は、ＵＶ−Ｂでのみ処置された群に関して見出された。実際に、ＱＵＥＲを含むまたは含まないＰＴＥＲによる処置は、市販の光防護剤およびレスベラトロールよりも優れた結果を生み出した。

処置が適用された時間に関して、その優れた光防護の役割（ただし、修復体（ｒｅｐａｉｒｅｒ）としてではなく）に関して適用時間について異なる結果を示したレスベラトロールを除けば、ＵＶ−Ｂへの曝露前後に適用間の重要な違いはなかった。

同様に、表皮の厚みをＵＶ−Ｂの３６０ｍＪ／ｃｍ^２の照射の１週間後に分析した際、ＵＶ−Ｂへの曝露前にポリフェノールで処置したマウスがＵＶ−Ｂの損傷から守られていたこと、マウスが照射の２４時間後に得られた表皮の厚みと同じ結果を維持したこと、統計的な違いはなかったことが見出された。ポリフェノールは照射後に塗布された場合、ＵＶ−Ｂへの曝露後に塗布された場合に最悪の予後をもたらしたＱＵＥＲを除けば、同じ結果が得られ、その結果は図３および図１８に示されたように、市販の光防護剤で観察された結果に類似していた。

（ＴＮＣＢによって誘発されたアトピー性皮膚炎の実験モデルでの保護）
ＴＮＣＢの最初の投与後２４時間の皮下脂肪の増加を、図１９で示されるように研究した。

このモデルでは、皮膚の厚さを正確に測定することができなかった工程を通して生産される病変があったため、皮下脂肪を測定することはできなかった。しかしながら、ＴＮＣＢによる先の感作の１週間後、ＴＮＣＢへの最初の曝露の２４時間後に皮下脂肪の増加があることが分かった。図で観察されるように、ＰＴＥＲ（単独で、または、ＱＵＥＲと組み合わせて）と同様にデキサメタゾンは、ＴＮＣＢ薬剤によってそれらの炎症作用を減少させた。

当然のことながら、中空リポソームは皮下脂肪に何の影響も与えておらず、このことは、リポソームはそれ自体はメカニカルフィルタとして働かず、予期される病変を生産する標的にＴＮＣＢを到達させることができないということを示している。

（病変の巨視的評価）
図２０および図２１に示されるように、病変は異なる処置間の違いを定量化する目的で評価された。

ＴＮＣＢの最初の連続的な適用を開始してから皮膚の態様に変化があり、ＴＮＣＢへの最初の曝露から、および、工程の全体にわたって水和レベルの変化があったことが観察された。

短期間では、ＴＥＷＬ値の分析は、デキサメタゾンまたは中空リポソームによる前処置と同様に、ＴＮＣＢＡによる処置について、基底値に関して表皮の水和が統計的に有意に増加したことを示した。

しかしながら、結果の分析によって同じく示されたことは、ポリフェノール、とりわけ、Ｐｔｅｒ−Ｑｕｅｒとの組み合わせによる処置の場合、未処置の皮膚（基底値）に関連した統計的に有意な差はなかったということであった。このことは、ポリフェノールが表皮に対して水和効果を有すること、したがって、水のみの場合よりよりも水和効果を有するか、または、ＴＮＣＢによって生じる攻撃への防護効果を有することを示している。

このとき、その差はＴＮＣＢで得られる値に対して統計的に有意でなくなった。というのは、おそらく、デキサメタゾンで処置した群を含むすべての群で病変があったためである。

病変に関して、低レベルの程度の病変が他のモデルと対照をなしているため、ＴＮＣＢを投与するためのプロトコルは、わずかな病変であるが実際の病変にもっと類似した病変を生成した低用量のそれであるという兆候が見られる。

論評すべき最も重要な事実は、アトピー性皮膚炎の可能な予防または治療について、デキサメタゾンが、病変の指標に関して、または、皮下脂肪の増加に関して、いずれの有益な効果を生み出さなかったということであろう。Ｔｅ ＰＴＥＲは、デキサメタゾンを使用するよりも、または、処置の不足した場合に関しても、さほど重大でない病変しかもたらさなかった。

（オキサゾロンによって誘発された接触過敏症のモデルに対する保護）
接触過敏症、アトピー性皮膚炎、および、乾癬のような皮膚疾患は、皮膚の過剰増殖性の、および、炎症性の疾患を特徴とする。

皮膚疾患の現在の処置は、グルココルチコイドおよび抗増殖性薬剤のような抗炎症剤の使用を含んでいる。この研究では、天然のポリフェノールの使用は、図２２に示されるような皮膚炎の臨床的な改善をもたらすと言われている。

皮膚疾患に対するＰＴＥＲの効果は動物で行なわれた処置によって確立され、この処置は、耳の浮腫の予防においてオキサゾランを用いて測定される真皮の炎症との接触に対して同様の過敏症を示した。

皮膚の免疫に関連する炎症性疾患を模倣したインビボのこの薬理学的試験の結果によると、病変に塗布された（オキサゾランの投与後に塗布された）特定のＰＴＥＲにおけるポリフェノールは、オキサゾロンによって誘発された炎症の結果として炎症性の変化を防ぐことができるということが示唆されている。同様の結果はディプロゾンによって観察することができる。

（実施例１２：ＴＰＡによって誘発される乾癬に対する効果）
（乾癬における浮腫の研究）
皮膚上のＴＰＡの塗布が血管拡張、白血球の浸潤、および、浮腫をもたらすため、組織の重量として皮下脂肪の変動だけでなく、図２３に示されるように、皮膚の炎症の周囲長として測定することは面白い。

手順全体にわたる皮下脂肪の増加を評価しながら（６日間連続で）、３つの異なる群を観察した。第１の群は、対照群と、デキサメタゾン（ＴＰＡを投与する３０分前の０．５μモル／マウス）で処置した群とに対応し、処置全体を通じてこれらには違いはなく、このことは、デキサメタゾンが乾癬の進行を防いだことを示している。第２の群は、ＴＰＡ、中空リポソームおよびＲｅｓｖによって形成された群であり、手順の少なくとも前半の間にわたって、その進化は浮腫の形成の増加と同様であった。

そして、最後に、第３の群は、Ｐｔｅｒ、Ｑｕｅｒ、および、Ｐｔｅｒ＋Ｑｕｅｒの群によって形成され、ＴＰＡの群全体で皮下脂肪の増加の重要な減少がみられ、図２４に示されるように最初の投与から少なくとも２４時間後は有意差があった。

皮下脂肪の増加によって観察されるように、マウスの皮膚上へのＴＰＡの塗布は、投与から２４時間後の浮腫、非常に強い炎症をもたらす。引例における製品、すなわち、デキサメタゾン（０．５μモル／マウス）の、ＴＰＡの局所投与の３０分前の塗布は、皮下脂肪の増加を有意に減少させた。

同時に、ＰＴＥＲ、ＱＵＥＲ、および、その両方の組み合わせによる処置は、浮腫の出現を著しく減少させた。中空リポソーム（荷電させていない）の使用は浮腫の出現にまったく効果がなく、Ｐｔｅｒ、Ｑｕｅｒ、または、Ｐｔｅｒ＋Ｑｕｅｒによって観察される効果はリポソームの組成によるものではなく、その代わりにポリフェノールの特定の効果によるものであったことを示しているということに注意することは重要である。この効果は、問題になっているポリフェノール、レスペラトロールで荷電されたリポソームとの比較で実証され、これは、ＴＰＡの群と比較して、皮下脂肪の増加に対するなんの効果を生まなかった。

皮下脂肪がＴＰＡの３度の投与後に比較される場合（巨視的レベルでの病変が明白である場合）、それは図２５のように得られる。

このとき、Ｐｔｅｒ、Ｑｕｅｒ、および、その両方の組み合わせを用いることが、ＴＰＡによって生成される炎症に対していかにして減少効果を生み出すのかということが明白であった。

（病変の巨視的評価）
図２６で示されるように、病変は異なる処置の差を定量化する目的で評価された。

ＴＰＡの７度の投与の２４時間後の病変の剥脱（ｅｘｃｏｒｉｔａｔｉｏｎ）に応じて１つの数値が病変に与えられた。というのも、これが認められた唯一の変化であり、紅斑または潰瘍の兆候はまったくなかったからである。

皮膚の鱗状の態様は０−３の段階で定量化され、０は何もなく、１は軽度であり、２は中程度であり、３は重度であり、そして、各群の媒体は、図２で示されるような炎症の程度を示した。

それ自体でＰＴＥＲを含むか、または、ＱＵＥＲと組み合わせてＰＴＥＲを含む群だけが、剥脱または表皮剥離の指標を少し含む群であることが観察される。

（病変の組織学的分析）
この分析は図２８で例証される。

組織学的に、内部部分（乾癬状の過形成（ｐｓｏｒｉａｓｉｆｏｒｍ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ））の厚さをした乳頭間突起の伸張、乳頭の伸張と浮腫、（Ｋｏｇｏｊの）スポンジ状の角膜内の膿疱を含む乳頭上の（ｓｕｐｒａｐａｐｉｌｌａｒｙ）の表皮萎縮、顆粒層の不足または低顆粒症（ｈｙｐｏ ｇｒａｎｕｌｏｓｉｓ）、不全角化、ムンロ（Ｍｕｎｒｏ）の表皮内微小膿瘍（ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｍｉｃｒｏａｂｓｃｅｓｓ）、拡張した、および、蛇行した乳頭毛細血管、血管周囲のリンパ組織球性（ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｉｃ）浸潤、および、わずかの好酸球と形質細胞がある。

乾癬は、豊富な真珠のような白くて光沢のある表皮剥離を含む丘疹と落屑性紅斑の形をした病変によって臨床的に特徴付けられる慢性的な炎症性の皮膚病である。一般に、乾癬は増悪と寛解の周期により長期的に進化するが、その経過は注意深く取り組む必要がある。同じ患者内でもばらつきがあり得るため、一般的に定められた枠組みは存在しないが、様々な臨床的な記載があった。我々は、実験の間、または、病気の異なる進化の段階の間に、その多くを見ることができる。

乾癬における表皮の過形成は、増殖段階での発芽細胞の数と、表皮での成長の分裂を特徴とする角化細胞の過剰増殖に伴うものであることが何年にもわたって知られてきた。有糸分裂の指標と臨床段階中の細胞の数の増加が検出されている。

安定した乾癬病変の典型的な組織病理学的特徴は、「表皮の乾癬状過形成（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｐｓｏｒｉａｓｉｆｏｒｍ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）」（Ｌｅｖｅｒ’ｓ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｋｉｎ. １０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）である。それは、底部で広く上方部分上で狭い乳頭間隆起を含む規則的な表皮肥厚を特徴とし、通常、乳頭上の表皮の菲薄化がある。

我々のモデルでは、ＴＰＡを含む群における乾癬の誘発によって、この乳頭腫症が観察された。しかしながら、乳頭上の表皮の狭小化はなかった。同様に、不全角化角化症（ｈｙｐｅｒｋｅｒａｔｏｓｉｓ ｐａｒａｋｅｒａｔｏｓｉｓ）が観察された。

処置で用いられなくなったマウスが切断されると、巨視的レベルで明瞭な病変の証拠はなにもなかった。ゆえに、剥脱のレベルが誤差につながりかねないため、我々はその値を分析しなかった。しかしながら、組織学的分析は皮膚が健康な皮膚ではないことを示した。したがって、徹底的にそれを分析すると、乾癬病変が退行期間に突入した際に、正常な角化（ｃｒｏｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ）は回復する傾向にあり、不全角化は消え始め、さらに、表皮は減少（ｔｈｉｎ ｏｕｔ）し始める。同様に、その形態が正常な皮膚のそれであるためのレベルに達しなかったが、乳頭腫症は消滅する。

処置の異なる群を比較する際、デキサメタゾンで処置された群は乳頭腫症または不全角化のない非常に薄い表皮を示すことが観察された。幾つかの点で、皮脂腺に対する病変の証拠も存在した。

ＰＴＥＲで処置された群に関連して、最も重要な違いは、乳頭腫症の兆候がまったくなかったが、過度の増殖による表皮肥厚は存在したということであった。そして、我々がＴＰＡのみで処置した群と、中空リポソームで処置した群とを比較した場合、表皮肥厚はさほど目立たず、不全角化の場合と同じであった。

これはＰＴＥＲと同様の構造であるレスベラトロールで処置した群では生じなかった。なぜなら、この群では、ＰＴＥＲで処置した群におけるほど増殖と表皮肥厚が明白ではなかったためである。その上、様々な処置を比較すると、レスベラトロールで処置した群は、ＰＴＥＲで処置した群よりも、ＴＰＡで処置した群により似ている。

同様に、ＱＵＥＲとＰＴＥＲの組み合わせによって、ＰＴＥＲのみで見つかった表現型に類似した表現型が見つかった。

Claims (2)

1. 以下の工程を含むリポソーム製剤を製造するための方法。
   ａ）活性化合物プテロスチルベン（ＰＴＥＲ）またはその任意の許容可能な塩、および、レシチンを有機溶媒中に溶解させる工程、
   ｂ）溶媒を蒸発させる工程、
   ｃ）ＰＢＳバッファーを添加する工程、
   ｄ）形成されたリポソームを収集し超音波処理する工程、
   ｅ）乳化安定剤、例えばカルボマーで１：１に希釈する工程。
2. ケルセチン（ＱＵＥＲ）またはその任意の許容可能な塩が工程（ａ）で同様に溶解させられることを特徴とする請求項１に記載の方法。