CN102639126A

CN102639126A - 用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的紫檀芪（pter）

Info

Publication number: CN102639126A
Application number: CN2010800488655A
Authority: CN
Inventors: 何塞·马里亚·埃斯特雷拉阿里奎尔; 米格尔·A·阿森西米拉莱斯
Original assignee: Green Molecular SL
Current assignee: Green Molecular SL
Priority date: 2009-10-30
Filing date: 2010-10-29
Publication date: 2012-08-15
Anticipated expiration: 2030-10-29
Also published as: EP2493462A1; US20180008555A1; KR20120094167A; KR101795495B1; MX2012005013A; CA2778151A1; JP2016006060A; AU2016234952A1; JP2013509385A; RU2012122241A; ES2432236T3; AU2010311326B2; AU2016234952B2; CN102639126B; US20160158164A1; DK2493462T3; WO2011051483A1; EP2322159A1; IL219318A; JP5905979B2

Abstract

本发明涉及PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的药物组合物中的用途。这些预防和/或治疗的方法包括向受试者施用有效量的组合物，该组合物包含作为活性化合物的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐。本发明还涉及组合物本身，其包含作为活性化合物的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，其特征在于所述组合物被配制成脂质体的形式，以及用于制备所述脂质体制剂的方法。

Description

用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的紫檀芪(PTER)

技术领域

本发明可以涵盖在制药学技术领域内。

背景技术

水果和蔬菜的高摄取与健康生活方式相关。这种相关是由于食物中存在天然抗氧化剂，主要是多酚化合物。在科学界产生更大兴趣的多酚之一是白藜芦醇(resveratrol)(3，4′，5-三羟基-反式-均二苯代乙烯；RESV)，一种大量存在于葡萄酒中的小(分子)多酚，在不同慢性疾病(特别是癌症，心血管病，II型糖尿病和神经变性疾病)中有归属于其的潜在有益作用。RESV的抗癌性能首先由Jang等人提出(Jang M，CaiL，Udeani GO，Slowing KV，Thomas CF，Beecher CW，Fong HH，Farnsworth NR，KinghornAD，Mehta RG，Moon RC，Pezzuto JM.(1997)Science(科学)275(5297)：218-20)，对癌症发生的三个阶段(引发，促进和进展)有作用。RESV的抗癌作用由于其低生物利用度而非常有限(Asensi M，Medina I，Ortega A，Carretero J，Bano MC，Obrador E，Estrela JM.(2002)Free adicBiol Med.33(3)：387-98)。由于该缺陷，具有改善的生物利用度的一些其他多酚被测试用于癌症治疗。具有下式：

的PTER(3，5-二甲氧基-4′-羟基-反式-白藜芦醇，PTER，RESV的一种衍生物)和QUER(3，3′，4′，5，6-五羟基黄酮(pentahidroxiflavona)，QUER)(两种小的天然多酚)的组合显示有效抑制高侵袭性鼠恶性黑素瘤的转移生长(Ferrer P，Asensi M，Segarra R，Ortega A，Benlloch M，Obrador E，Varea MT，Asensio G，Jorda L，Estrela JM.(2005)Neoplasia.(肿瘤形成)7(1)：37-47)。此外，PTER和QUER的结合，通过增强化学疗法加放射疗法的抗肿瘤作用，有利于消除免疫缺陷小鼠中异种移植的顽固性人结直肠癌(Priego S，Feddi F，Ferrer P，Mena S，Benlloch M，Ortega A，Carretero J，Obrador E，Asensi M，Estrela JM.(2008)Mol Cancer Ther.(分子癌症治疗学)7(10)：3330-42)。PTER和QUER是经静脉内和/或口服施用的。

近期流行病学研究已表明，超过90％的所有皮肤癌是由过度暴露于阳光、特别是紫外线B(UVB)引起的。这些癌症(黑素瘤和非黑素瘤型两种)以惊人方式增长(来自皮肤癌的死亡在最近20年中已翻倍)。

因此，在本领域中对于能够预防和/或治疗由于长时间暴露于辐射，特别是UVB(紫外线B)引起的皮肤疾病(包括皮肤癌)、损伤或损害的组合物存在长期的需求。

然而，皮肤疾病、损伤或损害可以不仅由辐射暴露引起，而且由于另外的因素如免疫因子引起。大多数的皮肤疾病、损伤或损害共同存在与皮肤病理学相关的炎性过程。此外，皮肤暴露于辐射或与所述辐射暴露或其他病因相关的皮肤炎性过程，例如自身免疫皮肤疾病或变应性皮肤疾病，如银屑病、变应性接触性皮炎或特应性皮炎(atopic dermatitis)，也共同存在皮肤的氧化应激增加，例如，通过产生氧自由基和另外的氧化性物种如过氧化亚硝酸盐的氮氧化物(NO)。

与炎症相关的异常包括大量不相关的一组病症，其成为大量的各种各样的人类疾病的基础。然而，本发明的目的具体不集中于预防/治疗炎症，而是集中于特别选择的一组适应证，它们都与皮肤相关，其通过施用局部制剂来进行治疗，更具体地说是由于暴露于辐射引起的那些皮肤疾病。此外，现有技术已公开了可能对于治疗炎性病症有用的口服给药的药物，然而，这些口服给药的药物从未对远隔的靶组织如皮肤发挥它们的潜在治疗作用。

QUER已被披露(Rubia Casagrande，Sandra R.Georgetti，Waldiceu A.Verri Jr，Daniel J.Dorta，

C.dos Santos，Maria J.V.Fonseca_[2006]；J.Photochem Photobiol B：Biology 84：21-27和Alena Svobodová，JitkaPsotová，Daniela Walterová[2003]；Biomed.Papers 147(2)：137-145)为有效防止UV辐射对皮肤的有害作用。然而，QUER的吸收光谱在UVA范围(320-400nm)，而不在UVB范围(290-320nm)内的波长处表现出其大多数的最大峰值，准确地说其中PTER的吸收光谱具有其最大面积。

在现有技术(WO01/43705A2)中，均二苯代乙烯(stilbene)化学家族的一些成员(不特别地是PTER)与维甲酸类(retinoids)的组合用于皮肤护理。

本发明提供了一种新的进步，对于以上问题的解决方案，基于作为主要活性化合物的PTER并且更具体地基于PTER和QUER的组合，开发了集中于预防和/或治疗皮肤疾病、损伤或损害的组合物。此外，本发明还可以在可能出现任何皮肤疾病、损害或损伤之前作为制剂而应用于哺乳动物(人)皮肤，尤其是防晒霜(sunscreen)、日晒后用品(after-sun)、抗衰老(anti-aging)、抗皱(anti-wrinkles)、具有光防护目的的制剂。

发明内容

本发明主要涉及PTER或其任何可接受的盐、任选地联合QUER或其任何可接受的盐在制备用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的药物组合物中的用途。预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的治疗学方法包括向有需要的受试者施用有效量的组合物，该组合物包含作为活性化合物的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐。本发明还涉及药物组合物本身，其包含作为活性化合物的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，优选地为局部用制剂的形式，并且更优选地为脂质体形式；本发明还覆盖用于制备所述脂质体制剂的方法。

QUER可以被任何其他多酚代替，条件是与PTER的组合表现出协同效应。

对于本发明的目的，多酚是这样的一组化学物质，其可能在植物中发现，但不排他地，特征在于每个分子存在多于一个的酚单元或结构单元(building block)。多酚通常被分成可水解单宁类(葡萄糖和其他糖类的没食子酸酯)和苯丙素类(phenylpropanoids)，如木素(lignins)、黄酮类(flavonoids)和缩合单宁类(condensed tannins)。

PTER以及任选地其与QUER的组合的作用将以多种途径发挥：

a)作为UV滤光片，因为二种多酚都具有允许辐射吸收的化学结构。

b)作为在辐照期间和/或炎性过程期间产生的反应性氧物种(ROS)的氧自由基清除剂。

c)作为抗炎剂和免疫调节剂。

在一个优选实施方案中，本发明的组合物包含两种活性化合物PTER和QUER或它们的任何可接受的盐的组合。因此，预防和/或治疗的方法包括向有需要的受试者施用有效量的包含PTER和QUER二者、或它们的任何可接受的盐的组合物。

如本说明书中定义的，“受试者”是哺乳动物，例如人。

如本发明定义的，炎性过程包括由所有组织中已经存在的细胞(主要是定居巨噬细胞、树突细胞、组织细胞、枯否细胞(Kuppfer cell)和肥大细胞)引发的急性或慢性炎症过程。在感染、烧伤或其它损伤发作时，这些细胞经过激活并释放负责炎症的临床体征的炎性介质。血管扩张及其导致的血流增加引起发红和热量增加。血管通透性增加导致血浆蛋白和流体渗出(泄漏)到组织中(水肿)，其本身表现为肿胀。释放的介质的一部分如缓激肽(bradykinin)增大对疼痛的敏感度(痛觉过敏)。介质分子还改变血管以允许白细胞(主要是中性白细胞)迁移到血管外部(外渗)而进入组织中。中性白细胞沿着由局部细胞(local cell)产生的趋化性梯度迁移而到达损伤部位。功能丧失可能是响应于疼痛的神经反射的结果。

除了细胞来源的介质，由预先形成的血浆蛋白构成的若干细胞生物化学级联系统平行地起作用而引发并传播炎性反应。这些包括由细菌激活的补体系统，以及由坏死(例如烧伤或创伤)激活的凝血纤溶系统。

急性炎性反应要求维持恒定的刺激。炎性介质具有短的半周期并且在组织中快速降解。因此，一旦消除刺激则炎症停止。

本发明的组合物可以包含其内包括的活性化合物的任何“可接受的盐”。如本文中使用的，所述表述是指本发明化合物的那些盐，这些盐作为药物用于哺乳动物是安全且有效的，并且具有期望的生物学活性。举例说明性的盐包括但不限于硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、单宁酸盐、泛酸盐(pantothenate)、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、gentisinate、富马酸盐、葡糖酸盐、glucaronate、蔗糖酸盐(saccharate)、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(pamoate)。本发明的“可接受的盐”优选由具有酸性官能团如羧酸官能团的多酚化合物，和可接受的无机或有机碱制备。合适的碱包括但不限于碱金属如钠、钾和锂的氢氧化物；碱土金属如钙和镁的氢氧化物；其他金属如铝和锌的氢氧化物；氨，以及有机胺，如未取代或羟基取代的一-、二-或三-烷基胺，二环己胺；三丁胺；吡啶；N-甲胺、N-乙胺；二乙胺；三乙胺；一-、二-或三-(2-羟基取代的低级烷基胺)，如一-、二-或三-(2-羟乙基)胺，2-羟基-叔丁胺，或三-(羟甲基)甲胺，N，N-二低级烷基-N-(羟基低级烷基)-胺，如N，N-二甲基-N-(2-羟乙基)胺或三-(2-羟乙基)胺；N-甲基-D-葡糖胺；以及氨基酸如精氨酸、赖氨酸等。术语“可接受的盐”还包括多酚化合物的水合物。

如本说明书中定义的，赋形剂是作为用于包含在组合物中的活性化合物(PTER和/或QUER)的载体或媒介物使用的惰性物质。本发明的组合物可以包含任何赋形剂，优选适合被包含在局部用组合物(即，皮肤病学可接受的赋形剂)。下面提及的以下助剂可以彼此独立地存在于本发明的组合物中：胶凝剂，油，蜡，增稠剂，亲水或疏水性聚合物，乳化剂，软化剂(emollient)，脂肪酸，有机溶剂，抗氧化剂，稳定剂，掩蔽剂(sequesteringagent)，酸化或碱化剂，乳化剂，软化剂，表面活性剂，成膜剂(film former)，用于增强性能和/或消费者需要的生物添加剂如氨基酸，蛋白质，香草(vanilla)，芦荟提取物(aloe extract)或生物类黄酮(bioflavinoid)，缓冲剂，螯合剂如乙二胺四乙酸(EDTA)或草酸，着色剂，染料，推进剂(propellant)，消泡剂，润湿剂，维生素，乳化稳定剂，pH调节剂，增稠剂，香料，防腐剂，遮光剂(opacifying agent)，水和/或醇。上述用于本发明组合物的助剂以本领域技术人员已知的常用量使用。

用于本发明的组合物的合适油选自动物油或植物油或合成油。特别优选的油选自包括液体矿脂、液体石蜡、挥发性和非挥发性硅油、异链烷烃、聚α烯烃、氟化油和全氟化油的组。

用于本发明的组合物的合适稳定剂可以是非离子、阴离子、阳离子和两性性质的。优选的稳定剂选自包括聚乙二醇(PEG)及其衍生物、吐温(triton)、曲拉通(triton)、司盘类(spans)、聚甘油(polygycerines)、聚甘油烷基酯、磺酸烷基酯、磺酸芳基酯、磷酸烷基酯、烷基-甜菜碱和磷脂酰甘油类的衍生物的组。

乳化剂优选以有效提供所述组合物的成分的均匀掺混的量用于本发明的组合物中。合适的乳化剂包括阴离子类(anionics)如脂肪酸皂，例如硬脂酸钾，硬脂酸钠，硬脂酸铵和三乙醇胺；含有脂肪酸皂的多元醇脂肪酸单酯，例如含有钾盐或钠盐的单硬脂酸甘油酯；硫酸酯(钠盐)，例如月桂基硫酸钠和乙酰基硫酸钠；以及含有硫酸酯的多元醇脂肪酸单酯，例如含有月桂基硫酸钠的单硬脂酸甘油酯；(ii)阳离子类氯化物如N(硬脂酰氧基乙基氨基甲酰甲基)吡啶鎓；N-豆油烷基-N-乙基吗啉鎓乙磺酸盐；烷基二甲基苄基氯化铵；二异丁基苯氧基乙氧基乙基二甲基苄基氯化铵；和氯化乙酰基吡啶；以及(iii)非离子类如聚氧乙烯脂肪醇醚，例如单硬脂酸酯；聚氧乙烯月桂醇；聚氧丙烯脂肪醇醚，例如丙氧基化油醇；聚氧乙烯脂肪酸酯，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯，例如聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯；失水山梨醇脂肪酸酯，例如山梨聚糖；聚氧乙二醇脂肪酸酯，例如聚氧乙二醇单硬脂酸酯；和多元醇脂肪酸酯，例如单硬脂酸甘油酯和丙二醇单硬脂酸酯；以及乙氧基化羊毛脂衍生物，例如乙氧基化羊毛脂，乙氧基化羊毛脂醇和/或乙氧基化胆固醇。

软化剂也可以以防止或减轻干燥度的量用于本发明的组合物中。合适的软化剂包括但不限于烃油(hydrocarbon oil)和蜡；硅油；三甘油酯；乙酰甘油酯；乙氧基化甘油；烷基酯；烯基酯；脂肪酸；脂肪醇；脂肪醇醚；醚酯；羊毛脂和衍生物；多元醇(多羟基化合物)和聚醚衍生物；多元醇(多羟基化合物)酯；蜡酯；蜂蜡衍生物；植物蜡；磷脂；甾醇；和/或酰胺。

表面活性剂也可以进一步用于本发明的组合物。合适的表面活性剂例如是这样的表面活性剂，其通常分为清洗剂、乳化剂、泡沫促进剂、助水溶物(hydrotrope)、增溶剂、悬浮剂和非表面活性剂，其有利于固体状液体中的分散。

可以优选用于本发明的组合物的成膜剂应保持该组合物平滑和均匀并且优选地是没有限制的。合适的成膜剂选自包括丙烯酰胺/丙烯酸钠共聚物；丙烯酸铵共聚物；秘鲁香脂(Balsam Peru)；纤维素胶；乙烯/马来酸酐共聚物；羟乙基纤维素；羟丙基纤维素；聚丙烯酰胺；聚乙烯；聚乙烯醇；pvm/MA共聚物(乙烯基甲基醚/马来酸酐共聚物)；PVP(聚乙烯吡咯烷酮)；马来酸酐聚合物，乙烯吡咯烷酮/十六烷烯共聚物；丙烯酸丙烯酸酯共聚物等的组。

pH调节剂也可以用于本发明的组合物中。这些pH调节剂优选选自：氢氧化铵，三乙醇胺或柠檬酸。

用于本发明的组合物的增稠剂优选选自：蜡大戟(candelilla)，巴西棕榈蜡(carnauba)，和微晶蜡，交联丙烯酸聚合物，卡波姆(carbomer)，甲基羟乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素或羟乙基纤维素，以及聚乙烯增稠剂。

用于本发明的组合物的优选有机溶剂的实例包括低级脂肪醇和多元醇。

本发明中使用的用于组合物的合适抗氧化剂优选选自包括抗坏血酸(维生素C)、L-抗坏血酸钠、L-抗坏血酸钙、抗坏血酸棕榈酸酯(ascorbylpalmitate)、丁基羟基茴香醚、钙-二钠-EDTA、异抗坏血酸、卵磷脂(lecitine)、乳酸、多磷酸酯(盐)，生育酚(维生素E)，如[α]-生育酚、[γ]-生育酚、[δ]-生育酚，没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸十二酯，异抗坏血酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、柠檬酸钾和氯化锡-II的组。

优选用于本发明的组合物中的胶凝剂可以是天然或合成聚合物。天然聚合物优选选自：琼脂-琼脂，藻酸盐，果胶，卡波姆，角叉菜胶(carrageenan)、酪蛋白(casein)、糊精、明胶、阿拉伯胶、角蛋白、卡罗布胶(locust bean gum)，黄原胶等。可以用于本发明的组合物中的优选合成聚合物选自：丙烯酸聚合物，聚丙烯酰胺和烯化氧聚合物。

任何给药途径可以用于将本发明的组合物施用受试者，优选地给药途径是静脉内、经口和局部。在一个优选实施方案中，本发明的组合物是局部用制剂，其可以被配制成液体或半固体形式，优选作为液体、流体、泡沫、霜剂、凝胶、糊剂、香胶(balsam)、喷雾剂、软膏剂、洗剂、调理剂、补剂(tonic)、乳状物(milk)、摩丝(mousse)、乳剂、血清、油、贴剂(stick)、香波、胶冻剂(jelly)、混悬剂、分散剂、漆(lacquer)、涂料、酏剂、滴剂或气溶胶。在一个具体实施方案中，本发明的活性化合物以脂质体制剂局部地施用。如本发明中使用的，“脂质体”是一种由一个或多个同心层构成并特别用于将物质(即PTER和/或QUER)递送至体细胞的人工囊泡(artificial vesicle)。

本发明的组合物的局部施用导致活性化合物PTER和/或QUER的高生物利用度，降低在50％的给药受试者中产生治疗反应的本发明组合物的量，即降低有效剂量(ED50)。在药理学中，生物利用度用来描述到达全身循环的未改变药物的施用剂量的分数，是药物的主要药代动力学性能之一。因此，生物利用度是药代动力学中的基本工具之一，并且在计算用于非静脉内给药途径的剂量时必须考虑它。

任何皮肤疾病、损害或损伤，包括皮肤癌，可以利用本发明的组合物来预防和/或治疗。在本发明的一个优选实施方案中，皮肤疾病、损害或损伤与炎性过程有关。因此，本发明，在一个优选实施方案中，集中于预防和/或治疗易感染或患有炎性皮肤病(dermatosis)的受试者，包括将本发明的组合物施用受累皮肤区域(一般为唇，脸或皮肤)和/或通过任何其他备选的给药方式。术语“炎性皮肤病(inflammatory dermatosis)”包括一定范围的皮肤病症，包括但不限于皮脂腺病症、丘疹鳞屑型皮肤病(papulosquamousdermatoses)、变应性皮肤病、瘙痒性皮肤病(pruritic dermatoses)、血管性皮肤病、细菌性皮肤病、病毒性皮肤病、霉菌皮肤感染(mycolic skininfection)、肉芽肿性皮肤病(granulomatous dermatoses)、寄生性皮肤病、剥脱性皮炎(exfoliative dermatitis)、大疱性皮肤病(bullous dermatoses)、色素性皮肤病(pigmented dermatoses)、光敏性皮肤疾病、由胶原疾病引起的皮肤病、以及由于内部疾病导致的皮肤病。炎性皮肤病也可以与自身免疫状况有关，在这种情况下，本文中将其称为“自身免疫皮肤病”。

在本发明的一个优选实施方案中，炎性皮肤病是皮脂腺病症，例如，痤疮样病症如寻常痤疮(acne vulgaris)、聚合性痤疮(acne conglombata)、化脓性汗腺炎(hidradenitis suppurativa)、红斑痤疮(acne rosacea)、皮脂溢出(seborrhea)、脂溢性皮炎(seborrheic dermatitis)、革兰氏阴性毛囊炎(gram negative folliculitis)、面部脓皮病(pyoderma faciale)、多发性皮脂囊肿(steatocystoma multiplex)、皮脂腺增生(sebaceous hyperplasia)、或肥大性酒渣鼻(rhinophyma)。在本发明的一个更优选实施方案中，包含PTER或其任何可接受的盐、任选地联合QUER或其任何可接受的盐的组合物/制剂用来治疗寻常痤疮。如熟知的，寻常痤疮是一种慢性皮肤疾患，其特征在于黑头粉刺和丘疹，并且可以是十分严重的；在特别严重的病例中，可能出现脓疱、囊肿、以及永久的瘢痕形成。

在本发明又一个优选实施方案中，预防和/或治疗的炎性皮肤病是丘疹鳞屑性皮肤病，例如银屑病、玫瑰糠疹(Pityriasis rosea)、花斑癣(tineaversicolor)或扁平苔藓(lichen planus)。本发明的方法和制剂特别有用于治疗银屑病、已被证实很难用常规药剂治疗的自身免疫炎性病症。

在本发明的一个进一步优选实施方案中，治疗的炎性皮肤病是自身免疫皮肤病，其可以例如是特应性皮炎、肥大细胞疾病、大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid)、寻常天疱疮(pemphigus vulgaris)、坏死性脉管炎(necrotizing vasculitis)、盘状红斑狼疮(discoid lupus erythematosus)、全身性红斑性狼疮(systemic lupus erythematosis)、或疱疹样皮炎(dermatitisherpetiformis)。

在其他实施方案中，本发明的方法和制剂对其有效的各种炎性皮肤病的实例为如下：

·变应性皮肤疾病：接触性皮炎；光变态反应皮炎；由于暴露于工业使用的各种各样化合物(其是接触刺激物)引起的工业皮肤病；特应性湿疹(atopic eczema)(婴儿和成人)；以及由药物引起的皮肤病和钱币状湿疹(nummular eczema)。

·瘙痒性皮肤病：冬季瘙痒、老年瘙痒症(senile pruritus)和自发性瘙痒(essential pruritus)；冬令瘙痒(pruritis hiemalis)；外阴瘙痒(pruritisvulvae)；和阴囊瘙痒(pruritus scrotae)。

·血管性皮肤病：多形红斑(erythema multiforme)；结节性红斑(erythema nodosum)；淤滞性皮炎(stasis dermatitis)；紫癜性皮肤病(purpuric dermatoses)如与血小板减少性紫癜(thrombocytopenicpurpura)、非血小板减少性紫癜(nonthrombocytopenic purpura)、异常蛋白血症性紫癜(dysproteinemic purpura)、光化性紫癜(actinicpurpura)、坏血病性紫癜(scorbutic purpura)和过敏性紫癜(Henochspurpura)有关的那些；瘀斑(ecchymoses)；淤积性紫癜(stasispurpura)；原发性和继发性毛细管扩张(telangiectases)。

·细菌性皮肤病：脓皮病(pyoderma)如脓疱病(impetigo)、臁疮(ecthyma)、毛囊炎(folliculitis)、丁疮麦粒肿(furuncles styes)、痈(carbuncles)、汗腺感染(sweat gland infection)、丹毒(erysipelas)、红癣(erythrasma)、感染的溃疡(infected ulcer)、和感染湿疹样皮炎(infected eczematoid dermatitis)；以及与全身性细菌感染有关的细菌性皮肤病如猩红热(scarlet fever)、腹股沟肉芽肿(granulomainguinale)、软下疳(chancroid)、肺结核(tuberculosis)、麻疯病(leprosy)、淋病(gonorrhea)、立克次体病(rickettsial disease)、放线菌病(actinomycosis)和梅毒(syphilis)。

·病毒性皮肤病：如由单纯疱疹病毒引起的那些皮肤疾病，卡波西水痘样疹(Kaposi′s varicelliform eruption)，带状疱疹(zoster)，水痘(chickenpox)，天花(smallpox)，牛痘(vaccinia)，触染性软疣(molluscum contagiosum)，性病淋巴肉芽肿(lymphogranulomavenereum)，发疹病(exanthematous disease)如德国麻疹(Germanmeasles)、蔷薇疹(roseola)和传染性红斑(erythema infectiosum)。

·霉菌皮肤感染：股癣(tinea cruris)(各种身体部位的皮肤的浅表真菌感染)；足癣(athlete′s foot)(被须疮癣菌感染引起的足部的皮肤癣菌病)；甲癣(tinea unguium)(甲真菌病(onychomycosis))；孢子丝菌病(sporotrichosis)；球孢子菌病(coccidioidomycosis)；组织胞浆菌病(histoplasmosis)；和北美芽生菌病(North Americanblastomycosis)。

·肉芽肿性皮肤病：肉瘤样病(sarcoidosis)；环形肉芽肿(granulomaannulare)；网状组织细胞瘤(reticulohistiocytoma)；和硅石诱发的肉芽肿(silica-induced granulomas)。

·寄生性皮肤感染：疥疮(scabies)，姬螨皮炎(cheyletiella dermatitis)；毛囊虫症(demodicosis)；虱病(pediculosis)。

·色素性皮肤病：黄褐斑(Chloasma)(黑斑病(melasma))和白癜风(vitiligo)。

·胶原疾病：硬皮病(scleroderma)和皮肌炎(dermatomyositis)。

·由于内部疾病导致的皮肤病：与溃疡性结肠炎有关的坏疽性脓皮病(pyoderma gangrenosum)，和由于糖尿病导致的溃疡。

·光敏性皮肤病：外源型如药物诱发的光照性皮炎和与光变应性组分的接触性皮炎；以及内源型如与卟啉症有关的那些和多形日光疹(polymorphous light eruptions)。

在一个优选实施方案中，皮肤疾病、损害或损伤由暴露于辐射引起(急性或慢性的)。则该疾病选自以下：皮肤癌，黑素瘤，多形日光疹，光化性角化病(actinic keratosis)，日光性荨麻疹(solar urticaria)，着色性干皮病(xeroderma pigmentosum)，光老化(photoageing)，慢性光化性皮炎(chronic actinic dermatitis)或晒伤。术语“辐射”包括能够引起皮肤损伤或损害的任何种类的辐射，例如用于治疗癌症的放射疗法或紫外辐射(UV)，优选由太阳发射的UVB。

如本发明中使用的，术语“预防”是指完全或部分地避免与氧化应激、过度暴露于辐射、特别是与身体晒黑(body-tanning)关联的UV辐射、尤其是归因于日光浴的UVB辐射、变态反应、免疫应答和炎性过程有关的皮肤病理生理学过程的出现。

如本发明中使用的，术语“光防护(photo-protection)”是指在受试者暴露于辐射，主要是UVB辐射之前施用本发明的组合物，降低或减轻遭受损害的危险。因此，该术语“光防护”在本发明中理解为包含在术语“预防”的范围内。

另一方面，术语“治疗”与在受试者已患有皮肤疾病、损害或损伤症状之后施用本发明的组合物相关。作为举例，术语“治疗”优选应用于将本发明披露的任何组合物施用于已暴露于辐射，主要是UVB辐射的人，修复皮肤受损害部分并恢复其初始功能和完整性。此外，术语“治疗”与将本发明的组合物施用于患有与炎性过程有关的任何皮肤疾病、损害或损伤的患者相关。

PTER或其任何可接受的盐，任选地与QUER或其任何可接受的盐一起，可以联合其他活性化合物进行配制。在这些其他活性化合物中，优选镇痛药、抗炎剂、抗变应性药、免疫调节剂、康复剂(healing agent)和辐射滤光片。对于适合作为伴随PTER和任选地QUER、或它们的任何可接受的盐的本发明的药物制剂的成分的UV滤光片列表，我们提及WO2008067928中公开的UV吸收物质(A和/或B)。最优选的UV滤光片选自：

表1

在本发明中实施若干技术，如确定皮褶或表皮厚度(在暴露于辐射之前和之后)，以阐明本发明组合物在预防和/或治疗皮肤疾病、病变或损害中的有效性或效力。所有这些技术在本领域是熟知的并且属于公知常识。此外，两种技术常规用于测试不同化合物预防或治疗皮肤疾病、损害或损伤的能力。表皮的厚度或皱褶越小，治疗就越有效。这可以在实施例中看出，活性化合物PTER或其任何可接受的盐可以用于制备用来预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的局部用组合物。此外，活性化合物PTER和QUER、或它们的任何可接受的盐的组合表现出协同效应，所述协同效应在以下解释的一些测定中改善单独采用的每种活性化合物的功能。因此，当结合本发明使用时，术语“协同作用的”是指，当作为联合疗法施用以预防和/或治疗由暴露于辐射引起的皮肤疾病、损害或损伤时，PTER和QUER、或它们的任何可接受的盐的组合的总体疗效大于这些活性化合物在各自独立施用时的疗效。

如实施例中证实的，进行皮褶厚度的确定。图1示出了当在暴露于UVB之前施用时，PTER+QUER的组合，以及单独的PTER作为光防护剂比以下商购霜剂更有效：Vichy(VICHY Capital Soleil 50+UVB+UVA)，Heliocare(Heliocare ultra 90UVB/UVA)和Isdin(ISDIN Extrem 40高防护UVA和UVB)，其中PTER+QUER的组合表现出稍微更好的结果。这三种商购霜剂用于与本申请说明书一起比较效果。而且，与本申请一起，在相同条件的测定中，RESV也与PTER和PTER+QUER进行比较。之前已披露RESV作为皮肤癌的防癌剂(Moammir Hasan Aziz，ShannonReagan-Shaw，Jianquiang Wu，B.Jack Longley和Nihal Ahmad；FASEB J.express article 10.1096(2005)：1-18)。在图1中，PTER单独或PTER+QUER的组合在UBV暴露之前或之后对于皮肤光防护表现出比RESV更有效力。

因此，PTER+QUER的组合、或单独PTER可以有效地用于预防由暴露于太阳辐射诱发的皮肤疾病。PTER特别吸收该辐射的UVB成分，而且QUER(参见图13)，其另外地还在对应于太阳辐射的UVA成分的波长内具有吸收光谱，部分地也是由于辐射(太阳)暴露导致的致癌作用的原因。因此，在本说明书中对组合PTER+QUER的一部分测定中观察到协同效应。

此外，图1还显示，PTER+QUER的组合，当在暴露于UVB之后施用时，在治疗皮肤疾病、损伤或损害中比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)更有效，也比单独的PTER更有效。因此，PTER+QUER的组合可以有效地用于治疗由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损伤或损害。

如在实施例中证实的，实施在辐照前(24小时)的表皮厚度的测量。图2显示当在暴露于UVB之前施用时，单独或联合QUER地使用PTER作为光防护剂比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)更有效。因此，PTER单独地或联合QUER可以有效地用于预防由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病。

此外，图2还显示当在暴露于UVB之后施用时，PTER+QUER的组合或单独的PTER在治疗由辐射引起的皮肤疾病、损伤或损害中比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)更有效，其中PTER+QUER的组合显示出稍微更好的结果。因此，PTER+QUER的组合、以及单独的PTER可以有效地用于治疗由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损害或损伤。

如在实施例中证实的，实施在辐照之前(1周)的表皮厚度的测量。图3显示当在暴露于UVB之前施用时，单独地使用PTER作为光防护剂比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)更有效。因此，单独PTER可以有效地用于预防由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损害或损伤。

此外，图3还显示当在暴露于UVB之后施用时，PTER+QUER的组合、以及单独PTER在治疗由辐射引起的皮肤疾病、损伤或损害中比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)更有效，PTER+QUER的组合显示出最好的结果。因此，PTER+QUER的组合、以及单独PTER可以有效地用于治疗由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损害或损伤。

因此，本发明的第一实施方案涉及PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，其用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤。在一个优选实施方案中，本发明还涉及PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，其用于预防和/或治疗皮肤癌。本发明的另一个优选实施方案涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，其用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤。本发明的另一个优选实施方案涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，用于预防和/或治疗皮肤癌。本发明的另一个优选实施方案涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，其用于治疗由暴露于辐射引起的皮肤疾病。本发明的另一个优选实施方案涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，其用于预防和/或治疗皮肤疾病或银屑病。以上使用优选通过局部给药进行。

本发明的第二实施方案涉及PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的药物组合物中的用途。在一个优选实施方案中，本发明涉及PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤癌的药物组合物中的用途。在一个优选实施方案中，本发明涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的药物组合物中的用途。在一个优选实施方案中，本发明涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤癌的药物组合物中的用途。在一个优选实施方案中，本发明涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于治疗由暴露于辐射引起的皮肤疾病的药物组合物中的用途。在一个优选实施方案中，本发明涉及PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤疾病或银屑病的药物组合物中的用途。优选制备的药物组合物是局部给药的药物组合物。

本发明的第三实施方案涉及一种包含PTER的药物组合物，其用于局部给药，并且更优选地，被配制成脂质体形式。在一个优选实施方案中，该药物组合物包含联合QUER进行配制的PTER。在一个优选实施方案中，该药物组合物被配制成防晒霜(sunscreen)或日晒后用品(after-sun)制剂的形式。

本发明的第四实施方案涉及一种用于制备脂质体制剂的方法，包括：将活性化合物PTER、或其任何可接受的盐、和卵磷脂溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂，添加PBS缓冲液，收集和声波处理所形成的脂质体，用乳化稳定剂，优选卡波姆(carbomer)并且更优选卡波普(Carbopol)进行1∶1稀释，任选地添加防腐剂，优选Phenonip。在一个优选实施方案中，用于制备脂质体制剂的方法还包括在第一步骤中联合PTER或其任何可接受的盐，溶解QUER或其任何可接受的盐。

卡波普是一种卡波姆。卡波姆也是对于在药品和化妆品中用作乳化稳定剂或增稠剂的丙烯酸的合成聚合物的总称。它们可以是与烯丙醚季戊四醇，蔗糖的烯丙醚，或丙烯的烯丙醚交联的丙烯酸均聚物。

Phenonip是一种防腐透明液体，其在大量应用中起作用。其独特性在于它在油中可溶并且在水中可分散。这种防腐剂当联合基于油的产品使用时特别有效而且在水溶液中极好地起作用。这意味着，它在仅含有油的产品如香膏(balm)和软膏中也起作用。Phenonip还能够承受更宽的温度范围。试验表明，它可以被加热到灭菌温度而不会降低其防腐效果的质量。它在3-8的宽pH范围起作用。使用比率在总配方重量的1％至3％变化(取决于应用)。Phenonip的组成并且应被标记为：苯氧乙醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙酯，对羟基苯甲酸丁酯，对羟基苯甲酸丙酯。

本发明的第五实施方案涉及一种用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的方法，包括施用PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐。在一个优选实施方案中，本发明涉及一种用于预防和/或治疗皮肤癌的方法，包括施用PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐。在一个优选实施方案中，本发明涉及一种用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的方法，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。在一个优选实施方案中，本发明涉及一种用于预防和/或治疗皮肤癌的方法，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。在一个优选实施方案中，本发明涉及一种用于治疗由暴露于辐射引起的皮肤疾病的方法，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。在一个优选实施方案中，本发明涉及一种用于预防和/或治疗皮肤疾病或银屑病的方法，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。更优选地，本发明的方法是局部施用的。

附图说明

图1：其示出了在暴露于UVB之前(左列)或之后(右列)用不同组合物治疗的小鼠的皮褶厚度(％)。商购霜剂(Vichy，Heliocare-Helio-和Isdin)。C+UVB＝在没有任何治疗下辐照的对照；C Lipo+UVB＝其中仅施用脂质体(不含有任何活性化合物)的辐照的对照。RESV＝白藜芦醇；P+Q＝PTER+QUER。

图2：其示出了在暴露于辐照(24小时)之前(左列)或之后(右列)用不同组合物治疗的表皮厚度(μm)。商购霜剂(Vichy，Heliocare-Helio-和Isdin)。对照＝无辐照，无治疗；C+UVB＝没有任何治疗下辐照的对照；C Lipo+UVB＝其中仅施用脂质体(不含有任何活性化合物)下辐照的对照。RESV＝白藜芦醇；P+Q＝PTER+QUER。

图3：其示出了在暴露于辐照(1周)之前(左列)或之后(右列)用不同组合物治疗的表皮厚度(μm)。商购霜剂(Vichy，Heliocare-Helio-和Isdin)。C Lipo+UVB＝其中仅施用脂质体(不含有任何活性化合物)下辐照的对照。RESV＝白藜芦醇；P+Q＝PTER+QUER。

在所有图1-3中，柱状图中示出的星号*表示当相比于对照值，差异是统计学显著性的(P＜0.05)。

图4：其示出了在关于用TNCB诱发实验性特应性皮炎的试验中，关于第0天(暴露于TNCB后1周，并开始每隔一日地继续暴露)皮褶厚度的增加。

图5：其示出了在关于用TNCB诱发实验性特应性皮炎的试验中，在4°暴露于TNCB后24小时经表皮的流体损失。

图6：其示出了在关于用TNCB诱发实验性特应性皮炎的试验中，在4°暴露于TNCB后24小时的病变。

图7：其图示了在关于用TNCB诱发实验性特应性皮炎的试验中开发的方案。

图8：其示出了在关于用TPA诱发实验性银屑病的试验中，关于TPA治疗的第0天皮褶厚度的增加。

图9：其示出了在关于用TPA诱发实验性银屑病的试验中，在7°暴露于TPA后24小时经表皮流体流失(TEWL)。

图10：其示出了在关于用TPA诱发实验性银屑病的试验中，在暴露于TPA后的病变的演变。

A.在每天3次暴露于2nmol的TPA后24小时的小鼠的照片；

B.在每天6次暴露于2nmol的TPA后24小时的同一小鼠的照片；

C.患者手指上的真实银屑病的照片(来自Dermatology Image Atlas的照片)；

D.患者膝盖上的真实银屑病的照片(来自Dermatology Image Atlas的照片)。

图11：其示出了在关于用TPA诱发实验性银屑病的试验中开发的方案。

图12：其示出了在关于通过接触

唑酮诱发实验性超敏反应的试验中开发的方案。

图13：其示出了在关于评价多酚的机械滤光片能力的试验中，多酚的吸收，具体地在纯乙醇中每种多酚(PTER，白藜芦醇和QUER)的不同1mM溶液的吸收光谱。

图14：其示出了在关于评价多酚的光防护剂作用的试验中，在长期暴露于UV-B之后的小鼠的状况。其是在25周长期暴露于180mJ/cm²(每周三次)之后的不同实验组的照片。这个研究的参照化合物和主题化合物(10μmol多酚/小鼠，或200μl的每种光防护剂)在小鼠暴露于UV-B之前施用于它们的背部持续20分钟。

图15：其示出了在关于评价多酚的光防护剂作用的试验中的病变形成的演变。在长期暴露于180mJ/cm²(每周3次)30周之后在不同实验组中，大于1mm直径的癌前期病变的第一体征。这个研究的参照化合物和主题化合物(10μmol/多酚小鼠，或200μl的每种光防护剂)在小鼠暴露于UV-B之前施用于它们的背部持续20分钟。

图16：其示出了在长期暴露于UV-B之后皮肤的解剖病理学研究。在长期暴露于180mJ/cm²(每周3次)30周之后对小鼠的组织学切片进行组织病理学评价。这个研究的参照化合物和主题化合物(10μmol/多酚小鼠，或200μl的每种光防护剂)在小鼠暴露于UV-B之前施用于它们的背部持续20分钟。

图17：其示出了在关于评估不同多酚对皮炎的作用的试验中，在持续施用治疗之后的皮褶厚度。连续6天对小鼠的1/3背部每天进行治疗(10μmol多酚/小鼠和0.5μmol地塞米松(dexamethasone)/小鼠)的施加。借助于游标卡尺测量皮褶厚度。*相对于对照的p＞0.001。ANOVA之后是图基检验(Tukey test)。

图18：其示出了在关于评估对严重暴露于辐射UV-B的防护的试验中的表示不同实验条件的组织学切片。在用360mJ/cm²的UV-B辐照之前或之后20分钟，进行治疗(10μmol多酚/小鼠，或200μl的各种光防护剂)的施加。在辐照UV-B之后24小时处死小鼠。该图表明表皮厚度的变化。

图19：其示出了在关于在由TNCB诱发的特应性皮炎的实验模型中的防护作用的试验中，在第一次施用TNCB之后24小时的皮褶厚度的增加。在已对1TNCB致敏的小鼠上施用100μl的1％TNCB之前24小时(第0天)进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。用游标卡尺测量皮褶厚度并计算相对于第0天的增加。*相对于对照的p＞0.05；⁺相对于用TNCB处理的对照的p＞0.05。ANOVA之后是图基检验。

图20：其示出了在关于病变的肉眼评估的试验中，特应性皮炎的模型中对病变的评价。在已对1TNCB致敏的小鼠上施用100μl的1％TNCB之前24小时进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。用Tewameter系统TM 210(CK electronics，德国)评价经表皮失水(TEWL)的量度。*相对于对照的p＞0.05；⁺相对于用空脂质体治疗的对照的p＞0.05。ANOVA之后是图基检验。

图21：其示出了在关于病变的肉眼评估的试验中，特应性皮炎的模型中对小鼠的评价。在已对1TNCB致敏的小鼠上每2天施用100μl的1％TNCB并且至多达4次TNCB施用之前24小时，进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。

图22：其示出了在关于针对由

唑酮诱发的接触超敏反应(hypersensivity)的模型的防护作用的试验中，施用

唑酮24小时的皮褶厚度的增加。在之前对

唑酮致敏的小鼠耳朵上施用20μL的2.5％

唑酮前(第0天)24小时，进行治疗(每只小鼠1μmol多酚，20mg的二丙酸倍他米松(diprosone))的施加。用游标卡尺测量皮褶并计算相对于第0天的增加。*相对于用

唑酮处理的对照的p＞0.05；⁺相对于在施用唑酮之前用二丙酸倍他米松处理的对照的p＞0.05。ANOVA之后是图基检验。

图23：其示出了在关于针对由TPA诱发的银屑病模型的防护作用的试验中，在整个程序过程中参照第0天皮褶厚度增加的演变。在施用2nmolTPA/小鼠前30分钟进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。这种施用方针连续6天重复。用游标卡尺测量皮褶厚度并计算相对于第0天的增加。

图24：其示出了在关于针对由TPA诱发的银屑病模型的防护作用的试验中，在第一次施用TPA后24小时皮褶厚度的增加。在施用2nmol TPA/小鼠前30分钟进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。用游标卡尺测量皮褶厚度并计算相对于第0天的增加。*相对于对照的p＞0.05。ANOVA之后是图基检验。

图25：其示出了在关于针对由TPA诱发的银屑病模型的防护作用的试验中，在第三次施用TPA后24小时的皮褶厚度。在施用2nmol TPA/小鼠前30分钟进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。用游标卡尺测量皮褶厚度并计算相对于第0天的增加。*相对于对照的p＞0.05；⁺相对于组TNCB的p＞0.05。ANOVA之后是图基检验。

图26：其示出了在关于针对由TPA诱发的银屑病模型的防护作用的试验中，该银屑病模型中的小鼠的肉眼视图。这些照片是(A)在TPA施用后24小时和(B)在7^aTPA施用后24小时取得的。在施用2nmol TPA/小鼠前30分钟进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。

图27：其示出了在关于针对由TPA诱发的银屑病模型的防护作用的试验中，在7次施用TPA后24小时对脱鳞(descaling)的评价。在施用2nmol TPA/小鼠前30分钟进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。皮肤的脱鳞外观以0-3等级进行量化，为0，无；1，弱；2，中度；3，严重。并且每个组的中值指示炎症程度。

图28：其示出了银屑病程序的组织学分析。在施用2nmol TPA/小鼠前30分钟进行治疗(10μmol多酚/小鼠，0.5μmol地塞米松/小鼠)的施加。来自在7天内每天用2nmol的TPA处理后24小时(A)和72小时(B)的小鼠的用苏木素-伊红染色的5μm切片的显微照片视图。

具体实施方式

通过以360mJ/cm²的剂量的急性辐照，实施用于评价本发明组合物预防由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病(如皮肤癌)的能力的研究。

用于暴露于UVB辐射的方案。

为了形成对UVB的暴露，使用专门改进的相机(装配有发射80％的作为UVB的辐射的5个管的Crosslinker，其最大发射在312nm)。

使用UVB急性暴露方案：小鼠经历360mJ/cm²的单次暴露。在暴露后24小时进行该研究。使用这种方案来评价所研究的化合物的光防护作用。利用相同的急性期(acute-phase)方案，对来自所有组的小鼠进行辐照。接着将小鼠留在动物存放区达一周以观察炎性反应和水肿的演变。

研究的化合物的施用和剂量。

对于UVB暴露研究(长期或急性)，进行对小鼠背部的局部施用。商购防晒霜直接施用在小鼠上。研究中的多酚在用卡波普聚合物(其是用于脂质体的载体)1∶1稀释的脂质体制剂中施用。施用的每种多酚剂量为10μmol/小鼠(作为游离酸)。

皮肤损害的参数指标。

1.水肿形成：在第一次暴露后24小时用卡尺确定皮褶厚度。

2.对暴露于急性辐照(360mj/cm²辐照后24h和7天)后表皮的厚度的研究。

3.组织学研究：在获自组织学切片的照片中，测量表皮的厚度。

组织学研究。

对于急性暴露的研究，从小鼠背部获取皮肤样品。这些样品用4％多聚甲醛固定(24小时)并埋入石蜡中。在切片之后，样品用苏木素和伊红染色。

对不同化合物的吸收光谱的研究。

在无水乙醇(HPLS质量；Quima)中制备每种多酚(PTER，白藜芦醇和QUER)的1mM溶液并利用Multiskan Spectrum(ThermoScientific)在200nm和800nm之间研究吸收光谱。

光致癌作用的程序(长期暴露于UV-B辐射)。

肿瘤形成中UV-B辐射的作用是熟知的。持续暴露于UV-B促进氧化性/氮化应激(nitrosative stress)的形成，以及激活各种转录因子(其中有NF-κB和AP-1)的DNA、蛋白质等的改变，端粒酶(telomerase)活性增加、应激等，其又诱发致癌作用。

而且，暴露于UV-B增加抗凋亡蛋白的表达和水平，后者与增生和某些炎症标志物的增加相关联。

选择用于这个研究的小鼠是SKH-1。这些小鼠在长期暴露于低剂量的UV辐射(相当于人每天具有的暴露量)后具有形成肿瘤的较大危险。

使用的方案是一种标准化方案，由此若干小鼠用180mJ/cm²的剂量每周辐照三次，暴露达24周；然而，在试验期间，该方案通过将暴露时间延长至至多达28周而进行改变，以获得对于所使用的不同治疗的光防护剂作用的更多证据。

暴露的剂量为180mJ/cm²，因为在之前的试验中已经确定这是用于这种类型的啮齿动物的最小红斑剂量(MED)。

这个研究中包括一定范围的不同商购光防护剂：

·Vichy：Capital Soleil SPF-50+(Vichy Laboratoires)

·Isdin：Photoprotector Isdin Extrem(SPF-40(Isdin SA))

·Heliocare：Heliocare gel Protection Ultra 90(Difa Cooper S.P.A.)

这个研究的参照化合物和主题化合物在小鼠暴露于UV-B之前施用于它们的背部持续20分钟。

用于此评估的各个20只小鼠组成的分组为：

·未治疗的。

·参照化合物Vichy之前：在辐照前20分钟施用200μl的Isdin。

·参照化合物Isdin之前：在辐照前20分钟施用200μl的Isdin。

·参照化合物Heliocare之前：在辐照前20分钟施用200μl的Heliocare。

·媒介物之前：在辐照前20分钟施用200μl的真空化脂质体(vacuumed Liposome)。

·白藜芦醇之前：在辐照前20分钟施用200μL的白藜芦醇脂质体(共10μmol)。

·PTER之前：在辐照前20分钟施用200μL的PTER脂质体(共10μmol)。

·QUER之前：在辐照前20分钟施用200μL的QUER脂质体(共10μmol)。

·PTER+QUER之前：在辐照前20分钟施用200μL的PTER+QUER脂质体(共10μmol)。

UV-B诱发短期的水肿和红斑。这种炎症对于过度增生是至关重要的。

暴露于UV的皮肤细胞具有较高水平的核转录NF-κB因子，这种因子控制COX-2和iNOS的输出，尤其是UV-B为什么是皮肤炎症的明确病因的一个原因。

为了评估所研究的光防护化合物的作用的目的，使6-8周龄的雌性小鼠SKH-1经受360mJ/cm²的单次暴露。

对于紫外线B(UVB)辐照暴露，使用专门制造的可从我们的实验室获得的照相机(Crosslinker；Bio-Link BLX 254)，其装配有产生80％的UVB辐射的5个管，其中最大发射在312nm。

使用的UV-B暴露的两个方案为：

·在360mJ/cm²的单次暴露之后强烈暴露。该研究在暴露后24小时实施。这个方案用来评估所研究化合物的光防护作用。

·在360mJ/cm²的单次暴露之后强烈暴露。该研究在暴露后1周实施。将小鼠保持在棚中一周以观察炎性和红斑反应的演变。

作为参照，使用若干商购的光防护产品(Vichy，Isdin和Heliocare)。这个研究的参照化合物以及主题产品在用UV-B辐照之后20分钟或之前20分钟施用到小鼠背部，以确定所观察到的反应是否是由于日光滤光片的作用引起的。

用于此评估的各个5只小鼠组成的分组为：

·未治疗的。

·参照化合物Vichy之前：在辐照前20分钟施用200μl的Isdin。

·参照化合物Vichy之后：在辐照后20分钟施用200μl的Isdin。

·参照化合物Isdin之前：在辐照前20分钟施用200μl的Isdin。

·参照化合物Isdin之后：在辐照后20分钟施用200μl的Isdin。

·参照化合物Heliocare之后：在辐照后20分钟施用200μl的Heliocare。

·媒介物之前：在辐照前20分钟施用200μl的真空化脂质体。

·媒介物之后：在辐照后20分钟施用200μl的真空化脂质体。

·白藜芦醇之后：在辐照后20分钟施用200μL的白藜芦醇脂质体(共10μmol)。

·PTER之前：在辐照前20分钟施用200μL的PTER脂质体(共10μmol)。

·PTER之后：在辐照后20分钟施用200μL的PTER脂质体(共10μmol)。

·QUER之前：在辐照前20分钟施用200μL的QUER脂质体(共10μmol)。

·QUER之后：在辐照后20分钟施用200μL的QUER脂质体(共10μmol)。

·PTER+QUER之后：在辐照后20分钟施用200μL的PTER+QUER脂质体(共10μmol)。

在施用不同治疗后24小时或1周，处死小鼠并将它们的皮肤用4％PFA固定。

耳朵厚度。

水肿计算为反应结果之前耳朵中产生的厚度和它们24小时后的厚度之间的差，并用游标卡尺测量。

变化表示为相对于第0天的相对增加。

皮肤的肉眼评估。

每天观察小鼠以检测皮肤外观的任何变化或任何大体变化。

而且，在处死它们之前的某些特定天数，由分析皮肤疾病变的兽医评估小鼠，以以下的作用对它们进行评判：

·红斑：皮肤的发红受由于血管扩张引起的过度血液灌注导致的炎症决定。

·表皮脱落(excoriation)：或具有鳞状外观的皮肤的刺激，皮肤脱鳞增加，这可导致过度角化(hyperkeratosis)。

·产生瘢痕或溃疡的可能达到真皮的病变的深度。

每一个变量以0-4等级评价，0，无；1，弱；2，中度；3，显著；和4，非常显著。每只小鼠的3个值相加指示炎症程度。

在光致癌过程期间，在整个过程中跟踪不同肿瘤的存在并量化。大于1mm直径的任何病变认为是一个病变。

显微镜分析。

利用组织化学技术来在微观水平研究不同处理的皮肤组织。

将组织在22℃下在PBS中的4％甲醛中固定24h。在组织被固定后，它们必须在大量乙醇中进行脱水并且置于无水二甲苯混合物中以允许石蜡渗透组织，从而为在切片机中薄薄地对它们切片提供充分的一致性。

石蜡中的样品用切片机加工，获得约5-10μm的切片。样品在37℃下铺展在一滴明胶上并收集在凝胶化载玻片中。

对于其他处理，必需在高于60℃的温度下去除石蜡并通过用二甲苯洗涤样品，以及用乙醇使它们再水化。

苏木素是一种阳离子着色剂而伊红是一种属于氧杂蒽类(xanthens)的阴离子着色剂。因此，细胞核染成蓝色而细胞质染成粉红色。

用于染色样品的方案为：

1.用迈尔苏木素(Mayer’s Hematoxylin)孵育10-15分钟。

2.在自来水下清洗直至浅蓝色。

3.与伊红(1％)孵育2-4分钟。

4.在70°乙醇中去除剩余伊红。

5.脱水。

6.用二甲苯漂洗3分钟。

7.在37℃的炉上使托盘干透。

统计学分析。

结果用均值±标准差表示。标准差以误差棒的形式表示，在一些情况下，仅显示正半棒以简化图示。

根据需要基于一个或多个因素的变化(ANOVA)或检验对数据进行分析。变量(variant)的齐性用Levene检验进行分析。对于所有的检验值接受零假设，其中p值为大于0.05时，F值是不显著的。F值为显著的数据用p值为0.05的图基检验进行分析。

用于计算和图示的计算机程序是Excel，而用于统计学的是SPSS的Windows 14.0版本(SPSS Inc)，巴伦西亚大学具有其用户许可。

实施例

实施例1：实验动物模型。

由Charles River Company提供的SKH-1品系小鼠用作实验动物。它们是无毛免疫感受态小鼠。如表2所示，实验组用3至4周龄雌性小鼠形成。每个光防护实验组由5至6只动物构成。在这些研究中，每个实验组由20只小鼠构成。

表2

组	名称	治疗	UVB暴露
				I	阴性对照	脂质体载体	无
IIt	UVBa	脂质体载体	治疗后20min
				IIa	UVBb	脂质体载体	治疗前20min
IIIt	RESa	RES脂质体	治疗后20min
				IIIa	RESb	RES脂质体	治疗前20min
IVt	PTERa	PTER脂质体	治疗后20min
				IVa	PTERb	PTER脂质体	治疗前20min
Vt	QUERa	QUER脂质体	治疗后20min
				Va	QUERb	QUER脂质体	治疗前20min
VIt	(PTER+QUER)a	PTER+QUER脂质体	治疗后20min
				VIa	(PTER+QUER)b	PTER+QUER脂质体	治疗前20min
VIIt	ISDINa		治疗后20min
				VIIa	ISDINb		治疗前20min
VIIIt	HELICAREa		治疗后20min
				VIIIa	HELIOCAREb		治疗前20min
IXt	VICHYa		治疗后20min
				IXa	VICHYb		治疗前20min

b是指“之前”

a是指“之后”

此外，体内试验中来自Charles River的4周龄雌性裸小鼠SKH1-E上或在6-8周BALB/c小鼠上进行。

这些研究在来自动物饲养服务机构的动物实验区重点实验研究中心支持服务机构(CSSER)的巴伦西亚大学进行，除了由TNO Quality of Life(Leiden，Netherlands)对于唑酮的超敏反应进行的研究。

一旦动物在2周时间后被驯化，则在装配有防护屏障的室内进行实验，在可控条件下，其中温度为：22±2℃，相对湿度：65-80％，12次空气变化/小时和12/12小时的光照周期，符合当前国际规定[EuropeanCommunity Council Directive(欧共体规章)(86/609，OJ L 358.1，December12，1987)，National Health Institute(国立卫生研究院)(Guide for the Care andUse of Laboratory Animals(实验动物护理和使用指南)，NIH Publ.No.85-23，1985，USA)]。

这些动物通过颈椎脱位处死。从后腿及臀部提取样品用于组织学，并在4％甲醛中固定过夜。一部分的样品保持在液氮中用于强UV-B暴露程序，以及用于随后的炎症和氧化性/氮化应激的评价。

接着，取20μl血液并加入到80μl的N-乙基马来酰亚胺(NEM)中。

在孵育约10min后加入100μl高氯酸(PCA)4％。在剧烈震摇后样品保存在冰中。最后所有样品在4℃下以13000rpm离心15分钟。收集上清并储存在-20℃直至分析GSH(谷胱甘肽的还原形式)/GSSG(谷胱甘肽的氧化形式)比率。GSH/GSSG比率是反映细胞内氧化还原状态的参数，尤其是细胞内硫醇氧化还原状态。因此，这个比率的变化用来评价氧化性应激。

从后腿及臀部取四个样品。一个用于组织学(在4％甲醛中固定过夜)而3个用液氮冷冻用于生化分析。

实施例2：脂质体的制备。

与多酚无关，制备脂质体的方法同样使用：大豆卵磷脂；二氯甲烷作为PTER和/或QUER情况下的有机溶剂，而乙醚由于其不能溶解二氯甲烷而作为用于白藜芦醇的有机溶剂。利用连接于真空和40℃的温度的旋转蒸发仪进行有机溶剂的蒸发。在除去有机溶剂之后，将脂质体再悬浮在稀释至1mM的PBS中。在最终脂质体浓度中，在添加卡波普之前，每种多酚的浓度如通过HPLC/MS-MS确定为20μM多酚。

用于制备脂质体的步骤可以概括如下：

1.称重多酚和卵磷脂

PTER	QUER	RESV	卵磷脂
				0,512g	0,676g	0,458g	2,376

2.将多酚和卵磷脂溶解在40ml的二氯甲烷中(在PTER和/或QUER的情况下)或140ml的乙醚中(在白藜芦醇的情况下)。

3.将该溶液引入到旋转蒸发烧瓶中并连接该装置。一旦所有溶剂被蒸发，切断预期真空并等待15min，以消除可能还有的所有痕量溶剂。

4.在旋转蒸发烧瓶中加入20ml的稀PBS(1mM)并再连接该装置，但这次没有真空。

5.将形成的脂质体收集在50ml管中。

6.声波处理脂质体(6秒，25个循环，其中每个循环之间有3秒间隔；高强度)。

7.用卡波普1∶1稀释(最终浓度为10μmol/200μl)。

8.为了避免可能的污染，加入Phenonip(每1000ml的制剂，6mlPhenonip)。

对照脂质体以与PTER和QUER相同的方式制备，但仅包含卵磷脂(2.376g)。

与胶体研究单位(Colloids Research Unit)(巴伦西亚大学化学物理系)合作，在我们的实验室进行获得脂质体的程序。

脂质体可以加载有各种各样的活性成分如多酚。由于它们渗透皮肤的能力，它们能够在皮肤内长距离携带这些活性成分，并在确定点停止。这是为什么脂质体能够用于皮肤病治疗的原因。存在各种各样的含有来自绿茶的多酚的产品(Replenix；Kaplan cosmetic Surgery Centers)和来自葡萄的白藜芦醇(Resveraderm；SesDERMA Laboratorios)。

使用大豆卵磷脂的混合物来获得脂质体；这是一种约90％磷脂酰胆碱和其他脂肪酸的天然混合物。大豆卵磷脂(99％纯度)由GUINAMA S.L(西班牙巴伦西亚)提供。

极性有机溶剂用于溶解，如二氯甲烷(Sigma)用于PTER(CML EuropeBV)和QUER(Sigma)，而乙醚(Sigma)用于白藜芦醇(Sigma)。

获得脂质体的理想混合物包含：

·5.9(w/v)的卵磷脂，1.28(w/v)的PTER和1.69(w/v)的QUER，溶解在二氯甲烷中。

·1.69(w/v)的卵磷脂和1.15(w/v)的白藜芦醇，溶解在乙醚中。

不同多酚的微小包装通过在真空旋转蒸发仪中在40℃下对大豆卵磷脂脱水而实现，其之后对最终溶液中0.1mM终浓度的每种化合物在20℃下用1mM pH 7磷酸盐溶液进行水化。

通过经由显微镜观察形态而将脂质体关于颗粒尺寸进行标准化。脂质体悬液中的多酚的浓度通过HPLC-MS/MS定量。

该溶液用卡波普940(Guinama)稳定化至稀释度1∶1，加入0.6％(v/v)的抗微生物防腐剂Phenonip(Guinama)，利用其获得具有10μmol每种多酚/200μl的脂质体的溶液。

通过利用自动微量加液器将该霜剂的均匀膜涂擦至小鼠的背部并抹平而完成脂质体的施用。

这些化合物依照每种操作程序中描述的给药方案涂擦，它们是：

·空脂质体：没有载荷的脂质体。

·PTER脂质体：1μmol/20μL的霜剂。

·QUER脂质体：1μmol/20μL的霜剂。

·PTER+QUER脂质体：1μmol的每种化合物/20μL的霜剂。

·白藜芦醇脂质体：1μmol/20μL的霜剂。

实施例3：辐照后24h的皮褶厚度的测定。

通过将来自小鼠背部的皮肤(从腋窝至髋)形成褶皱而测量皮褶厚度；该褶皱用游标卡尺进行测量。

褶皱厚度的增加由初始点(反应作用之前)和每个点的厚度之间的差值来计算。

图1示出了在测量小鼠后腿及臀部(已经施加各种治疗的地方)皮肤的厚度时获得的结果。这些结果通过ANOVA进行统计学分析并通过图基检验进行比较，并根据显著性差异进行分组。标准差加入至图1中。如图1所示，当在暴露于UVB之前施加时，PTER+QUER的组合以及PTER单独地作为光防护剂比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)和RESV更有效。因此，PTER+QUER的组合或单独PTER可以有效地用于预防由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病。

此外，图1还示出了当在暴露于UVB之后施加时，PTER+QUER的组合或单独PTER与商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)和RESV相比更有效用于治疗由于辐射导致的皮肤疾病、损害或损伤。因此，PTER+QUER的组合可以有效地用于治疗由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损害或损伤。

实施例4：测量辐照后(24h)的表皮的厚度。

为了测量表皮的厚度以评价可能的过度增生，使用计算机程序ImageJ，在允许测量表皮的Neubauer照相机辅助下进行校准。获得的结果通过ANOVA进行统计分析并通过图基检验进行对比，并根据显著性差异进行分组。如图2所示，当在暴露于UVB之前施加时，单独使用PTER作为光防护剂比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)更有效。因此，单独PTER可以有效地用于预防由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损伤或损害。

此外，图2还示出了当在暴露于UVB之后施加时，PTER+QUER的组合与商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)和RESV相比更有效用于治疗由辐射引起的皮肤疾病、损害或损伤。因此，PTER+QUER的组合以及单独PTER可以有效地用于治疗由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损害或损伤。这个实验中的对照是指没有辐射和没有治疗。

实施例5：测量辐照之后(1周)的表皮厚度。

通过利用计算机软件(IMAGE J)实施皮肤厚度的评价。通过ANOVA获得的结果通过图基检验进行对比并根据显著性差异分组。如图3所示，当在暴露于UVB之前施加时，单独使用PTER作为光防护剂比商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)更有效。因此，单独PTER可以有效地用于预防由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病、损害或损伤。

此外，图3还示出了当在暴露于UVB之后施加时，PTER+QUER的组合与商购霜剂(Vichy，Heliocare和Isdin)和RESV相比也更有效用于治疗由辐射引起的皮肤疾病、损害或损伤。因此，PTER+QUER的组合以及单独PTER可以有效地用于治疗由紫外线B辐射诱发的皮肤疾病。

实施例6：用TNCB诱发实验特应性皮炎。

对于试剂“2-氯-1，3，5-三硝基苯或2，4，6-三硝基氯苯”(TNCB)(也称为Pycril氯化物)，这是一种诱发小鼠皮肤的变应性过程连同炎症的化学试剂。而且，持续施用TNCB软膏增加血清中T-淋巴细胞、肥大细胞和IgE的产生，如其在患有特应性皮炎的人患者中出现那样。

为了产生特应性皮炎病变，使用由Matsumoto描述的方案，在SKH-1小鼠的背部上涂擦100μL的在丙酮中的1％TNCB溶液[3次施用33μL(借助于自动微量加液器的分配器)以防止体积扩大并维持病变区域更局部化]。

与由Matsumoto提出的方案(其中在用TNCB的前期测试期之后，用TNCB的处理持续32天)相反，开发了由用TNCB的一个试验和一周后4个剂量，接着每2天的TNCB构成的一种方案。更短的方案产生皮褶厚度的增加(如图4所示)，如同经表皮的流体损失(如图5所示)，这些病变用肉眼观察是明显的(如图6所示)。

因此，在此操作程序中开发的方案是图7所示的方案。作为标准治疗，以下使用地塞米松(来自Sigma，丙酮中的25mM溶液)。每隔一天给予待测试产品和标准治疗的施用，在第一次持续涂擦TNCB之前24小时和小鼠暴露于TNCB之后(1周之前)开始。

用于此评估的各个5只小鼠组成的分组为：

·未治疗的。

·参照化合物：0.5μmol的地塞米松(20μl的在丙酮中的25mM溶液)。

·媒介物：200μl的真空化脂质体。

·白藜芦醇：200μL的白藜芦醇脂质体(共10μmol)。

·PTER：200μL的PTER脂质体(共10μmol)。

·QUER：200μL的QUER脂质体(共10μmol)。

·PTER+QUER：200μL的PTER脂质体+QUER(共10μmol)。

在最后一次施用不同治疗后24小时(第9天)时，处死小鼠并将它们的皮肤用4％PFA固定。

实施例7：用TPA实验诱发银屑病。

为了诱发银屑病，使用试剂“12-O-四癸酰基佛波醇-13乙酸酯”(TPA)。关于试剂“12-O-四癸酰基佛波醇-13乙酸酯”(TPA)，还通常已知为“佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯”(PMA)，这是佛波醇的二酯并是在生物医学研究中通常用于激活经由蛋白激酶C(PKC)的信号转导的强肿瘤促进剂。

参照在无毛小鼠SKH-1上形成疾病所需的TPA的剂量，一些作者使用10-17nmol/小鼠的高剂量，所实现的过度增生的再现类似于在患有银屑病的Balb/C小鼠(预先剃毛)中发生的那样，并且此模型广泛用于银屑病的研究。然而，这些模型被用来评价在仅一次涂擦TPA之后的生化或分子参数。因为我们的目的是联合多酚的使用来评估由银屑病引起的病变的进展，所以使用持续暴露的模型和较弱浓度的TPA，在一周时间内每天的剂量为2nmol的TPA，其允许我们观察银屑病的进展。

对1cm²的区域用2nmol TPA/小鼠实施诱发，涂擦10μL在丙酮中的200μM溶液。实施这种涂擦方案考虑了当在模型中如所述的那样涂擦20μL时，体积的增加相当大并且丧失其浓度，因此决定使其浓度更高一些。

更短的方案产生如图8所示的皮褶厚度的增加，如图9所示的经表皮流体流失(TEWL)，这些病变如图10所示用肉眼观察是明显的。

因此，在这个操作程序中开发的方案是图11所示的方案。作为标准治疗，使用地塞米松(来自Sigma，在丙酮中的25mM溶液)。在涂擦TPA之前30分钟给予标准治疗和待测试产品的施用，两者在同一天开始。

用于此评估的各个6只小鼠组成的分组为：

·未治疗的。

·参照化合物：0.5μmol的地塞米松(20μl在丙酮中的25mM溶液)。

·媒介物：200μl的真空化脂质体。

·白藜芦醇：200μL的白藜芦醇脂质体(共10μmol)。

·PTER：200μL的PTER脂质体(共10μmol)。

·QUER：200μL的QUER脂质体(共10μmol)。

·PTER+QUER：200μL的PTER脂质体+QUER(共10μmol)。

在最后一次施用不同治疗和TPA后24小时(第7天)，处死来自每个组的3只小鼠并将它们的皮肤用4％PFA固定。余下的小鼠保持在没有暴露于TPA的治疗下，以验证皮肤在治疗后是否比其本身恢复更快。在最后一次施用不同治疗后24小时(第9天)，处死剩余的小鼠并将它们的皮肤用4％PFA固定。

实施例8：通过接触

唑酮实验诱发超敏反应。

在对相同物质的致敏后涂擦

唑酮，通过接触而产生超敏反应，这作为湿疹性反应出现，具有淋巴细胞和巨噬细胞的浸润，具有表皮的水肿。

BALB/c小鼠通过在剃光的腹部上涂擦100μL在丙酮中的1.5％(w/v)唑酮在第0天进行致敏。在诱发致敏之前，借助于游标卡尺(Mitutoyomicrometer)测量耳朵的厚度。通过涂擦20μL在乙醇中的2.5％

唑酮(右耳每侧10μL)在第7天引起反应。

因此，在这个操作程序中开发的方案是图12所示的方案。作为对照测量，使用左耳，对其涂擦20μL的乙醇。作为标准治疗，使用霜剂：(Schering Plough B.V.，Utrecht，The Netherlands)，其含有0.5mg的倍他米松(betamethasone)/g。

用于此评估的各个8只小鼠组成的分组为：

·未治疗的。

·参照化合物：在第7天涂擦

唑酮后30分钟，向耳朵的每一侧涂擦10mg的

霜剂。

·媒介物：在第7天涂擦

唑酮之前30分钟，向耳朵的每一侧涂擦10μl的空脂质体。

·白藜芦醇之前：在第7天涂擦

唑酮之前30分钟，向耳朵的每一侧涂擦10μl的白藜芦醇脂质体(共1μmol)。

·白藜芦醇之后：在第7天涂擦

唑酮后3-4小时，向耳朵的每一侧涂擦10μl的白藜芦醇脂质体(共1μmol)。

·PTER之前：在第7天涂擦

唑酮之前30分钟，向耳朵的每一侧涂擦10μl的PTER脂质体(共1μmol)。

·PTER之后：在第7天涂擦

唑酮后3-4小时，向耳朵的每一侧涂擦10μl的PTER脂质体(共1μmol)。

·QUER之前：在第7天涂擦唑酮之前30分钟，向耳朵的每一侧涂擦10μl的QUER脂质体(共1μmol)。

·QUER之后：在第7天涂擦

唑酮后3-4小时，向耳朵的每一侧涂擦10μl的QUER脂质体(共1μmol)。

·PTER+QUER之前：在第7天涂擦

唑酮之前30分钟，向耳朵的每一侧涂擦10μl的PTER+QUER脂质体(共1μmol)。

·PTER+QUER之后：在第7天涂擦

唑酮后3-4小时，向耳朵的每一侧涂擦10μl的PTER+QUER脂质体(共1μmol)。

在施用

唑酮后24小时(第1天)，处死小鼠并将两个耳朵用4％PFA固定。

实施例9：经表皮失水。

一些皮肤病症的特征在于损害皮肤的机械性能，如在硬皮病和银屑病中。

然而，这些特性的客观评价复杂，并且认为通过Tewameter TM 210系统(CK electronics，Germany)评估的对经表皮失水(PTEA或TEWL)的测量是皮肤“屏障”的功能的指标(g/h/cm²)。

这种测量的物理基础基于在1885年由AdolfFick建立的扩散定律：

\frac{dm}{dt} = - D \times A \times \frac{dp}{dx}

而：

A＝表面积(m²)

m＝水转运(g)

t＝时间(h)

D＝扩散常数(＝0.0877g/m·h·mmHg)

p＝大气蒸汽压(mmHg)

x＝从皮肤至测量点的距离(m)

扩散定律dm/dt表示在一个时间间隔中每cm²转运的质量，其与面积A和浓度对距离的变化dc/dx成比例。D表示空气中水蒸汽的扩散系数。这个定律仅在均匀扩散区内有效，该区具有大致空圆柱体的形状。所得梯度密度间接地由通过微处理器分析的两组检测器(温度和相对湿度)记录。

在Tewameter TM 210系统的探头中，温度和水化检测器，以及用于测量的电路和用于校准的数据定位在传感器内部。传感器的头部由中空和窄圆柱体(直径＝10mm，长度＝20mm)制成并且其功能是减少传感器中的空气湍流。

在固定小鼠后，将探头置于它们的背部上用不同化学试剂治疗的相同区域中。连续实施TEWL读数直至度量稳定，这可产生在30-60秒之间的读数。

实施例10：光防护剂和在长期暴露于UV-B辐照期间的抗致癌作用。

多酚的机械滤光片能力。

在研究这个研究中使用的多酚的能力的目的下，我们决定在如图13所示的整个紫外光谱上评价光的吸收。

证实了白藜芦醇以及PTER在紫外线B的范围内具有峰或最大吸收，相反QUER在UV-A范围的波长中以较大比例被吸收。

多酚的光防护剂作用。

以下的研究阶段用来针对在多酚对抗光致癌作用(在暴露于UV-B后加入多酚)的可能修复能力评价光防护剂成分(在暴露于UV-B之前加入多酚)的作用。

为此，如图14所示，在长期暴露于UV-B之后评价光防护剂能力。使小鼠在28周内每周接受每次暴露的剂量为180mJ/cm²的UV-B的3次暴露。利用这种方案，诱发瘤形成，其开始显示起于第十二周。整个操作程序中，如图15所示评价癌前病变并量化。

如果我们比较不同治疗关于病变体征的效果，我们将能够理解对照组以及用空脂质体治疗的组，在连续暴露于UV-B的第12周开始，超过50％的小鼠具有肿瘤。相反，用多酚的治疗延缓肿瘤的显现直至大约第20周(在Resv和QUER的情况下)。然而，在Pter的情况下并且在长期暴露于UV-B 30周后，仅10％的小鼠呈现病变(Pter单独或联合Quer)。这种防护作用优于在商购光防护剂中发现的作用。

关于每只小鼠的病变数量，Pter以及联合Quer的组合是提供最大防护的试剂，因为相比于任何一种其他治疗，每只小鼠的病变数量为零。下表3示出了每只小鼠的病变数：在长期暴露于180mJ/cm² 30周(每周3次)后，不同实验组中，超过1mm直径的癌前病变的第一体征。将此研究的参照化合物和主题化合物(10μmol多酚/小鼠，或200μl的每种光防护剂)在小鼠暴露于UV-B之前涂擦至它们的背部上持续20分钟。每组20只小鼠。

表3

解剖病理学研究。

关于在SKH1小鼠中通过长期辐照UV诱发的肿瘤的组织病理学检查，证实了用UV-B处理产生强烈的棘层肥厚，其主要由于炎性过程引起；这被肿瘤的第一体征代替，大多数是癌症型而不是黑素瘤。

两种非黑素瘤皮肤癌的大多数是：基底细胞癌和鳞状细胞癌。

商购光防护剂的使用主要防止炎症，然而，仅Vichy消除了可能的肿瘤形成。

多酚的使用具有抗炎和抗肿瘤形成作用；PTER是具有最大益处的化合物。然而，当相比于其类似物白藜芦醇时，在抗炎和抗肿瘤形成水平上观察到巨大差异。当相比于不同的商购光防护剂时，也呈现更好的结果。

关于Pter和Quer的组合，在Pter单独或组合的使用之间关于其光防护剂作用没有发现差异，但关于其抗炎作用则存在差异，这将在后面讨论。如在图16中呈现的，下表4显示了在长期暴露于UV-B之后的皮肤的解剖病理学研究，具体地说是长期暴露于180mJ/cm² 30周(每周3次)后。将本研究的参照化合物和主题化合物(10μmol多酚/小鼠，或200μl的每种光防护剂)在小鼠暴露于UV-B之前涂擦至它们的背部上持续20分钟。各组的中值为20只小鼠。每个参数根据严重程度(+)轻-(+++)严重进行测量。

表4

实施例11：对皮炎的作用。

在评价不同治疗对皮炎的不同模型的结果之前，必须评价在小鼠的皮肤上连续施用多酚的可能副作用，如图17所示。为此，用于每日评价的剂量连续6天施用。

如可以观察到的，单独的治疗不影响长期治疗后的皮褶厚度，然而，皮质激素类(如地塞米松)的长期使用确实对皮肤的结构具有副作用。

对急性暴露于辐射UV-B的防护。

在已经观察到多酚的抗炎特性对抗光致癌的防护作用后，在严重暴露于UV-B后研究抗炎作用。图1示出了通过测量四只小鼠背部的皮肤厚度获得的结果。

多酚Pter和Resv单个地以及以Pter+Quer的组合，显示出在暴露于UVB辐照后的有益作用，因为水肿形成减少。

皮肤厚度的这种增加可能是由于主要因一些炎性过程、或由表皮细胞的过度增生引起的体积所致。因此，需要测量表皮的厚度，如图2所示。

对于仅用UV-B处理的组，注意到用多酚治疗的小鼠的表皮厚度中的显著差异。事实上，在有或没有QUER时用PTER治疗产生比甚至商购光防护剂和白藜芦醇更好的结果。

关于施加治疗的时间，在暴露于UV-B之前或之后施加之间没有重大差异，除了白藜芦醇以外，其关于施加时间显示出不同结果(就其良好的光防护作用而言，而不是作为修复剂)。

而且，当在辐照360mJ/cm²的UV-B后一周分析表皮厚度时，注意到在UV-B暴露之前用多酚治疗的小鼠免于UV-B的损害，它们维持在辐照后24小时获得的表皮厚度的相同结果，不存在统计学差异。如果多酚在辐照后施加，则获得相同结果，除了QUER以外，如果其在暴露于UV-B后施加则提供最差预后，该结果类似于在商购光防护剂中观察到的结果，如图3和图18所示。

在由TNCB诱发的特应性皮炎的实验模型中的防护作用。

对第一次施用TNCB后24小时皮褶厚度的增加进行研究，如图19所示。

在此模型中，不可能测量皮褶厚度，因为在整个过程中产生的病变不能够正确地测量皮肤厚度。然而，注意到，在第一次暴露于TNCB后24小时、在用TNCB预先致敏后1周，存在皮褶厚度的增加。如可在图中观察到的那样，地塞米松以及PTER(单独或与QUER联合)降低了它们由于TNCB试剂导致的炎性作用。

还应观察到，空脂质体对皮褶厚度没有作用，表明脂质体本身不作为机械滤光片起作用，使TNCB不能够到达它们产生预期病变的靶位。

病变的肉眼评估。

为了量化不同治疗之间的差异，对病变进行评价，如图20和图21所示。

观察到，从第一次持续施加TNCB开始，皮肤外观上存在一些变化，在从开始第一次暴露于TNCB和整个过程的水化程度上存在一些变化。

简言之，TEWL值的分析表明，对于用TNCBA的处理，以及对于用地塞米松或空脂质体的预治疗，相对于基线值存在统计学显著的表皮水化增加。

然而，通过对结果的分析还表明的是，在用多酚，特别是组合Pter-Quer进行治疗的情况下，相对于未治疗皮肤(基线值)不存在统计学显著的差异。这表明多酚对表皮具有水化作用，与单独水相比尤其更大，或者针对由TNCB产生的侵害具有保护作用。

这时，相对于用TNCB获得的值不再具有统计学显著的差异，可能是因为在所有组(包括用地塞米松治疗的组)中存在病变。

关于病变，存在这样的迹象，即低水平的病变程度的原因是与其他模型相比，用于施用TNCB的方案采用较低的剂量，其还产生较少的病变但更类似于真实病变。

要评论的最重要的事实是关于特应性皮炎的可能预防或治愈，地塞米松在病变指数方面或在皮褶厚度的增加方面不产生任何有益作用。PTER与使用地塞米松相比或相对于没有治疗产生较不严重的病变。

针对由

唑酮诱发的接触超敏反应模型的防护作用。

皮肤病症如接触超敏反应、特应性皮炎和银屑病的特征在于皮肤的过度增生和炎性病症。

对于皮肤疾病症的当前治疗包括使用抗炎剂如糖皮质激素类和抗增生剂。在本研究中，说明了使用天然多酚产生皮炎的临床改善，如图22所示。

PTER对皮肤疾病症的作用根据在动物上实施的操作程序建立，该动物表现与在真皮炎症上接触类似的超敏反应，通过在预防耳水肿中使用

唑酮测量。

模仿皮肤免疫相关的炎性病症的这种体内药理学试验的结果表明，涂擦于病变(在施用

唑酮后涂擦)的多酚，尤其是PTER可以防止由于

唑酮诱发的炎症导致的炎性变化。利用二丙酸倍他米松(diprosone)也可以观察到类似的结果。

实施例12：对由TPA诱发的银屑病的作用。

银屑病中的水肿的研究

由于在皮肤上涂擦TPA产生血管扩张、白细胞浸润和水肿，所以有兴趣测量不仅作为组织重量而且作为皮肤炎症的周长的皮褶厚度的变化，如图23所示。

在整个操作程序(连续6天)期间评价皮褶厚度的增加时，观察到3个不同的组。第一组对应于对照组和用地塞米松治疗(0.5μmol/小鼠，在施用TPA之前30分钟)的组，通过所述治疗在这些组之间没有差异，表明地塞米松预防了银屑病的形成。第二组是由TPA、空脂质体和Resv形成的组，其中至少在操作程序的前一半期间，演变是类似的，具有水肿形成的增加。

以及最后，第三组由Pter、Quer和Pter+Quer的组形成，其中注意到皮褶厚度增加的明显减少，在整个TPA组中，并且在第一次施用的24小时后显著不同，如图24所示。

由于可通过皮褶厚度增加观察到，在小鼠皮肤上涂擦TPA在施用后24小时产生水肿(一种显著的强烈炎症)。在局部施用TPA之前30分钟涂擦参照产品地塞米松(0.5μmol/小鼠)显著减少皮褶厚度的增加。

同时，用PTER、QUER以及二者的组合的治疗也显著消除水肿的外观。重要的是注意到，使用空脂质体(无载荷)对水肿的外观没有作用，表明通过Pter、Quer或Pter+Quer观察到的作用不是由于脂质体的组成导致的，相反是由于多酚的特异性作用导致的。与装有所讨论的多酚、白藜芦醇的脂质体相比这种作用得到确证；与TPA组相比，这对皮褶厚度的增加不产生任何作用。

如果在3次施用TPA后比较皮褶厚度，其中在肉眼观察时病变是并线的，则获得图25。

这时，Pter、Quer以及二者的组合的使用对由TPA产生的炎症如何产生消除作用是显而易见的。

病变的肉眼评估。

为量化不同治疗之间的差异，对病变进行评价，如图26所示。

根据在7次施用TPA后24小时的病变的表皮脱落，对病变赋予数值，因为这是注意到的仅有变化，没有红斑或溃疡的指征存在。

皮肤的鳞状外观以0-3等级进行量化，为0，没有；1，弱；2，中度；3，严重。并且每个组的中值指示炎症的程度，如图2所示。

可以观察到，仅有用PTER本身或联合QUER的组是表皮脱落或脱鳞指数较小的组。

病变的组织学分析。

该分析图示在图28中。

组织学上，存在表皮突下部厚度的伸长(牛皮癣状过度增生)，乳头的伸长和水肿，具有海绵状角膜内脓疱的乳头上方表皮萎缩(Kogoj的)，缺乏颗粒层或颗粒层减少，角化不全，蒙罗表皮内微脓肿(Munro’sintraepidermal microabscess)，扩张和扭曲的乳突毛细血管，血管周淋巴细胞组织细胞浸润以及很少的嗜酸性粒细胞(eosinophil)和浆细胞(plasmocyte)。

银屑病是慢性炎性皮肤病，临床特征在于丘疹和鳞状红斑形式的病变，具有大量珍珠状白色的脱鳞。其过程繁琐，尽管通常它具有长期的演变过程，具有加重和缓解期。已经存在不同的临床描述，尽管通常没有固定模式，因为在同一患者内也可以存在变化。我们可以在检查期间或疾病的不同演变阶段期间看到这些变化中的许多。

多年来，已经知晓银屑病中表皮的过度增生继发于角蛋白细胞的过度增生，其特征在于处于增殖阶段的发芽细胞的数量和表皮生长的分裂数量。已经检测到临床阶段期间有丝分裂指数和细胞数的增加。

稳定的银屑病病变的典型组织病理学特征是“表皮牛皮癣状过度增生”(Lever′s Histopathology of the Skin(Lever氏皮肤组织病理学)，第10版)。其特征在于规则的表皮棘层肥厚，在基底层具有宽的表皮突并且在上部较窄，其中通常存在乳头上方表皮变薄。

在我们用TPA诱发银屑病的组的模型中，观察到这种乳头状瘤病(papillomatosis)；然而，不存在乳头上方表皮的变窄。也观察到角化过度和角化不全。

当对从治疗退出的小鼠进行切片时，没有肉眼可见的清晰病变的证据；因此，我们没有分析表皮脱落水平，因为可能导致错误。然而，组织学分析表明，该皮肤不是健康皮肤。因此，当彻底地对它进行分析时，确认了当银屑病病变进入消退期时，正常角化趋于恢复，角化不全开始消失并且表皮开始变薄。而且，乳头状瘤病消失，尽管形态没有达到正常皮肤的水平。

在比较不同的治疗组时，观察到用地塞米松治疗的组呈现非常薄的表皮同时没有乳头状瘤病或角化过度。在一些点处，还存在病变至皮脂腺的证据。

参照用PTER治疗的组，最重大的差异在于，没有乳头状瘤病的体征，但有由于大量增生导致的棘层肥厚。并且如果我们比较仅用TPA或用空脂质体治疗的组，棘层肥厚较不显著，与角化不全相同。

这在利用白藜芦醇(具有与PTER类似的结构)治疗的组中没有出现，因为在这个组中，增生和棘层肥厚与用PTER治疗的组相比不太明显。除此之外，将不同的治疗进行比较，与用PTER治疗的组相比，用白藜芦醇治疗的组更类似于用TPA治疗的组。

而且，PTER与QUER的组合发现的表型类似于用单独PTER所发现的表型。

Claims

1.PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤。

2.根据权利要求1所述的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，用于预防和/或治疗皮肤癌。

3.根据权利要求1或2所述的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，通过局部给药而使用。

4.根据权利要求1所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤。

5.根据权利要求1所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，用于预防和/或治疗皮肤癌。

6.根据权利要求1所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，用于治疗由暴露于辐射引起的皮肤疾病。

7.根据权利要求1所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，用于预防和/或治疗皮肤病或银屑病。

8.根据权利要求4至7中任一项所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，通过局部给药而使用。

9.PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的药物组合物中的用途。

10.根据权利要求9所述的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤癌的药物组合物中的用途。

11.根据权利要求9或10中任一项所述的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于局部给药的药物组合物中的用途。

12.根据权利要求9所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的药物组合物中的用途。

13.根据权利要求9所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤癌的药物组合物中的用途。

14.根据权利要求9所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于治疗由暴露于辐射引起的皮肤疾病的药物组合物中的用途。

15.根据权利要求9所述的PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于预防和/或治疗皮肤病或银屑病的药物组合物中的用途。

16.根据权利要求12至15中任一项所述的PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐，在制备用于局部给药的药物组合物中的用途。

17.药物组合物，其包含PTER，任选地联合QUER，所述药物组合物用于局部给药。

18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中PTER联合QUER进行配制。

19.根据权利要求17所述的药物组合物，被配制成防晒霜或日晒后用品制剂的形式。

20.根据权利要求17所述的包含PTER的药物组合物，被配制成脂质体形式。

21.用于制备脂质体制剂的方法，包括：

a)将活性化合物PTER，或其任何可接受的盐，和卵磷脂溶解在有机溶剂中；

b)蒸发所述溶剂；

c)添加PBS缓冲液；

d)收集并声波处理所形成的脂质体；

e)用乳化稳定剂，优选卡波姆并且更优选卡波普进行1∶1稀释；

f)任选地添加防腐剂，优选Phenonip。

22.根据权利要求21所述的方法，其中QUER，或其任何可接受的盐也在步骤(a)中被溶解。

23.用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤的方法，包括施用PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐。

24.根据权利要求23所述的方法，用于预防和/或治疗皮肤癌，包括施用PTER或其任何可接受的盐，任选地联合QUER或其任何可接受的盐。

25.根据权利要求23所述的方法，用于预防和/或治疗皮肤疾病、损害或损伤，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。

26.根据权利要求23所述的方法，用于预防和/或治疗皮肤癌，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。

27.根据权利要求23所述的方法，用于治疗由暴露于辐射引起的皮肤疾病，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。

28.根据权利要求23所述的方法，用于预防和/或治疗皮肤病或银屑病，包括施用PTER或其任何可接受的盐联合QUER或其任何可接受的盐。

29.根据权利要求23至28中任一项所述的方法，通过局部给药施用。