CN118078875A - 一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物及其制备与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物及其制备与应用,其中复合物包括大豆提取物发酵液和白藜芦醇,制备方法为向大豆提取物发酵液中加入白藜芦醇,或将大豆提取物发酵固形物溶解于水之前,加入白藜芦醇;混合均匀即可。本发明使用的大豆提取物发酵液对白藜芦醇具有良好的增溶促稳效果,且二者具有协同抗氧化作用,形成的大豆提取物发酵液‑白藜芦醇复合物的抗氧化能力强于同质量浓度的白藜芦醇和大豆提取物发酵液;通过鸡胚绒毛尿囊膜试验可以得出样品作用前后均无出血现象,大豆提取物发酵液‑白藜芦醇复合物无刺激性,将大豆提取物发酵液‑白藜芦醇复合物制备成液晶霜还可以减少UVB致人皮肤急性光损伤。
Description
技术领域
本发明涉及白藜芦醇复合物技术领域,特别是涉及一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物及其制备与应用。
背景技术
白藜芦醇(Resveratrol,RES)是一种非黄酮类多酚化合物,在葡萄、虎杖、蓝莓、桑葚、决明子等植物中广泛存在,是一种天然的植物抗毒素,具有广泛的生物学活性,如抗炎、抗氧化、抗肿瘤、神经保护作用等,在医药、食品和化妆品领域具有广阔的应用前景。但白藜芦醇水溶性低(0.3mg·L-1),化学稳定性差以及体内半衰期短,导致其生物利用度低,临床应用受限。
要将上述水溶性低的白藜芦醇制成合适的溶液剂,必须增加其溶解度,保证其稳定性,以满足治疗需要。目前增加难溶物水溶性的方法有:加增溶剂、加助溶剂、制成可溶性盐、制成固体分散体、制成包合物、制成微乳等,但是上述方法具有以下缺点:
(1)在溶液剂中引入了其他物质,其他物质影响难溶性物质的药效,还会产生副作用,更甚者会影响难溶物质的安全性;
(2)制备过程复杂,并且需要严格的控制实验参数,不易操作;
(3)引入了其他辅料,增加了产品成本;
(4)白藜芦醇的稳定性依然较差。
因此,急需开发一种能够改善白藜芦醇水溶性和同时能够与白藜芦醇协同作用的物质,进而组成复合物进一步提高白藜芦醇的生物利用度和稳定性。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物及其制备与应用,以解决上述现有技术中增加白藜芦醇水溶性的方法具有缺陷的问题。
为实现上述目的,本发明的第一个方面提供了一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物,包括大豆提取物发酵固形物、白藜芦醇和水。
优选的,大豆提取物发酵固形物在水中的质量浓度为1~200mg/mL,白藜芦醇在水中的质量浓度为0.04~10mg/mL。
优选的,大豆提取物发酵固形物在水中的质量浓度为100mg/mL,白藜芦醇在水中的质量浓度为5.44mg/mL。
本发明的第二个方面提供了一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的制备方法,大豆提取物发酵固形物和水混合溶解形成大豆提取物发酵液,向含有大豆提取物发酵液中加入白藜芦醇,或将大豆提取物发酵固形物与白藜芦醇混合后加入水;混合均匀即可。
优选的,混合均匀的具体过程为将大豆提取物发酵液和白藜芦醇的混合物置于气浴恒温振荡器中直至溶解完全。
需要说明的是本发明的混匀过程不限于在气浴恒温振荡器中进行,也可以在磁力搅拌器中采用搅拌的方式进行,达到大豆提取物发酵固形物和白藜芦醇在水中完全溶解的目的。
优选的,气浴恒温振荡器的温度为20~45℃,振荡时间为1~20h,振荡转速为50~300rpm。
优选的,得到的复合物的粒径为1.20~1.26nm。
本发明的第三个方面提供了一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的应用,复合物在制备抗氧化产品中的应用。
抗氧化产品包括但不限于药物、化妆品、保健食品。
优选的,复合物中白藜芦醇与大豆提取物发酵固形物的质量比为1:8~18。
优选的,复合物中白藜芦醇的质量浓度为40.204μg/mL,大豆提取物发酵液的质量浓度为0.475mg/mL。
优选的,一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的应用,复合物在制备抗氧化药物或抗氧化化妆品中的应用。
在制备抗氧化药物过程中可以将水溶性白藜芦醇复合物单独或与其他功能性药物进行混合制成常规剂型,所述常规剂型包括但不限于注射剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液、滴丸剂或纳米制剂;可以将水溶性白藜芦醇复合物添加药学上可接受的辅料直接制成常规剂型,所述药学可接受的辅料包括:填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等,其中填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等;崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等;润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等;助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等;粘合剂包括,淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。
在制备抗氧化化妆品过程中,抗氧化化妆品包括化妆水、爽肤水、乳液、讲话、面膜、膏霜、洁面霜等,上述化妆品直接以水溶性白藜芦醇复合物为基础成分,再配以其他辅料,按照制备化妆品的常规工艺制成化妆品成品。上述辅料和常规工艺均为本领域常用的,在此不再赘述。
优选的,一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的应用,复合物在制备稳定性高的白藜芦醇抗氧化药物中的应用。
优选的,复合物制备成液晶霜应用于UVB致人皮肤急性光损伤药物中。
因此,本发明采用上述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物及其制备方法与应用,具有以下有益效果:
(1)利用安全性高和副作用小的大豆提取物发酵液和白藜芦醇混合,提高白藜芦醇的水溶性,提高了白藜芦醇的生物利用度;
(2)大豆提取物发酵液和白藜芦醇在水中形成的复合物不仅可以增加白藜芦醇的水溶性,而且能够在减少大豆提取物发酵液和白藜芦醇添加量的情况下,显著提高其抗氧化活性;
(3)相比于现有技术中增加白藜芦醇水溶性的方法,制备方法简单,易操作。
(4)复合物中的白藜芦醇稳定性和活性较高。
下面通过附图和实施例,对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
图1是本发明中白藜芦醇的标准曲线;
图2是本发明中不同中药提取物发酵液对RES水溶性的影响;
图3是本发明大豆提取物发酵液中不同组分对RES水溶性的影响;
图4是本发明不同质量浓度大豆提取物发酵液对RES水溶性的影响;
图5是本发明不同温度下对RES水溶性的影响;
图6是本发明不同时间对RES水溶性的影响;
图7是本发明不同转速对RES水溶性的影响;
图8是本发明制备的SEFL、SEFL-RES的粒径分布图;
图9是本发明中不同物质的红外光谱图,RES(a)、SEFL(b)、SEFL-RES(c)、PM(d);
图10是RES和SEFL-RES的DPPH自由基清除能力;
图11是SEFL的DPPH自由基清除能力;
图12是RES和SEFL-RES的ABTS自由基清除能力;
图13是SEFL的ABTS自由基清除能力;
图14是光照和避光环境下SEFL-RES中RES残存率;
图15是光照和避光环境下SEFL-RES对DPPH自由基清除能力;
图16是光照和避光环境下SEFL-RES对ABTS自由基清除能力;
图17是SEFL-RES作用在CAM前后对比图;
图18是MED UVB照射所致皮肤红斑反应(照射后第3d)(A:空白;B:UVB;C:基质+UVB;D:VC+UVB;E:SEFL+UVB;F:RES+UVB;G:PM+UVB;H:SEFL-RES+UVB);
图19是SEFL-RES减轻UVB照射引起的皮肤红斑程度(照射后第3d);
图20是SEFL-RES减轻UVB照射引起的皮肤不适(照射后第3d);
图21是SEFL-RES对UVB照射后人皮肤角质层含水量的影响(注:与UVB照射组相比,*、#P<0.05);
图22是SEFL-RES液晶霜对UVB照射后人皮肤TEWL的影响(注:与UVB照射组相比,*、#、△P<0.05);
图23是SEFL-RES对UVB照射后人皮肤EI的影响(注:与UVB照射组相比,*、#、△P<0.05);
图24是棘层RCM特征(UVB照射后第3d)(图中显示低折光区域(蓝色圆圈),对应细胞间水肿;甚至可见表皮内水疱(红色圆圈),或伴有嗜色素细胞(红色箭头)和低折光的单一炎性细胞游入(绿色箭头);A:空白;B:UVB;C:基质+UVB;D:VC+UVB;E:SEFL+UVB;F:RES+UVB;G:PM+UVB;H:SEFL-RES+UVB(RCM,0.5×0.5mm));
图25是基底层RCM特征(UVB照射后第3d)(图中显示基底细胞环消失(红色圆圈),伴圆形至多角形高折光噬色素细胞(红色箭头),散在炎性细胞浸润(绿色箭头);A:空白;B:UVB;C:基质+UVB;D:VC+UVB;E:SEFL+UVB;F:RES+UVB;G:PM+UVB;H:SEFL-RES+UVB(RCM,0.5×0.5mm));
图26是真皮乳头层RCM特征(UVB照射后第3d)(图中显示低折光区域(黄色箭头),对应血管扩张,散在炎性细胞浸润(绿色箭头);A:空白;B:UVB;C:基质+UVB;D:VC+UVB;E:SEFL+UVB;F:RES+UVB;G:PM+UVB;H:SEFL-RES+UVB(RCM,0.5×0.5mm));
图27是真皮网状层RCM特征(UVB照射后第3d)(图中显示灰色、粗大、中度折光部位为胶原蛋白束(粉色箭头);A:空白;B:UVB;C:基质+UVB;D:VC+UVB;E:SEFL+UVB;F:RES+UVB;G:PM+UVB;H:SEFL-RES+UVB(RCM,0.5×0.5mm))。
具体实施方式
以下将对本发明进行进一步的描述,需要说明的是,本实施例以本技术方案为前提,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本发明并不限于本实施例。
实验试剂与原料
马齿苋提取物、薄荷提取物、地肤子提取物、蛇床子提取物、金银花提取物、黄柏提取物、苦参提取物、白鲜皮提取物、大豆提取物、大豆多糖,质量分数≥99%、大豆磷脂,质量分数≥95%、大豆皂苷,质量分数≥80%、大豆异黄酮,质量分数≥90%、白藜芦醇原料药,质量分数99%,南京普怡生物科技有限公司;白藜芦醇标准品,质量分数≥98%,北京索莱宝科技有限公司;甲醇,色谱纯,赛默飞世尔科技公司;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH),质量分数>98%,东京化成工业株式会社;2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS),质量分数≥99%,赛默飞世尔科技公司;去离子水(实验室自制)。
Agilent 1290型超高效液相色谱仪,安捷伦科技有限公司;AB135-S型十万分之一天平,梅特勒-托利多有限公司;ZWF-200型气浴恒温振荡器,上海智城分析仪器有限公司;DK-98-Ⅱ型电热恒温水浴锅,天津市泰斯特仪器有限公司;XW-18D型涡旋混合器,绍兴市苏珀仪器有限公司;SB-5200型超声波清洗机,宁波新芝生物科技股份有限公司;H1650R型高速离心机,湖南湘仪实验室仪器开发有限公司;EYELA冷冻干燥机,东京理化器械;BT-90+型动态光散射粒径分析仪,丹东百特仪器公司;Perkin-Elmer型傅里叶变换红外光谱仪,珀金埃尔默仪器有限公司。
采用高效液相色谱法测定白藜芦醇的含量,色谱条件如下:
色谱柱:Waters C18柱(100mm×2.1mm,1.7μm);流动相:甲醇-水(40∶60);流速0.2mL/min;进样体积2μL;柱温30℃;检测波长306nm。
白藜芦醇标准曲线的的绘制:取白藜芦醇标准品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含白藜芦醇1.00mg的溶液,即得1mg/mL的标准品储备液,待用。分别精确移取100、200、400、600、800、1000、1200、2400μL标准品储备液于10mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得到质量浓度分别为10、20、40、60、80、100、120、240μg/mL的标准品溶液。按色谱条件进样测定,记录色谱图。以峰面积为纵坐标,白藜芦醇标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。绘制出白藜芦醇标准曲线如图1所示。线性回归方程为y=51.538x-13.052,r=0.999。说明白藜芦醇在10~240μg/mL范围内线性良好。
对比例1不同中药提取物发酵液对白藜芦醇水溶性的影响
中药提取物发酵液的制备:分别取单一2g中药提取物与100mL超纯水于500mL锥形瓶中混合,并于121℃灭菌30min,吸取OD值2.0的乳酸杆菌菌液在无菌操作台接种到中药提取物与水的混合液中,于37℃摇床中震摇48h,获得中药提取物发酵产物;产物于100℃灭菌30min后,于5000r/min离心25min,收集上清液,即得乳酸杆菌中药提取物发酵液,或将发酵液进一步浓缩干燥制得中药提取物发酵固形物,再加水配置成乳酸杆菌中药提取物发酵液。
取过量的白藜芦醇原料药加入1.0mL上述中药提取物发酵液中混匀,置于37℃气浴恒温振荡器中,200r/min转速下振摇过夜,达到溶解平衡后在10000r/min条件下离心10min,取上清液过0.22μm微孔滤膜,用甲醇稀释适当倍数超声2min得样品溶液,采用上述色谱条件测定各个样品溶液中白藜芦醇的含量。根据标准曲线计算出各中药提取物发酵液中白藜芦醇含量,结果如图2所示。图2中增溶倍数是指白藜芦醇在中药提取物发酵液中的溶解度与白藜芦醇直接在水中溶解度的比值。
从图2中可以看出不同中药提取物发酵液均有增加白藜芦醇水溶性的作用,但增加的程度有所不同,其中以大豆提取物发酵液增溶倍数最大,蛇床子提取物发酵液次之,地肤子提取物发酵液的影响最低。故选取增溶效果最好的大豆提取物发酵液(SEFL)进行后续实验。
一般认为中药提取物发酵液中含有多糖、皂苷、磷脂等成分,上述成分可作为表面活性剂,但是中药提取物发酵液发挥作用不仅仅是只有单个成分,更主要的是活性成分之间复配形成的超分子结构,该结构可以增加中药活性成分的溶解度、改善其体内吸收,提高生理活性。目前对于中药成分促进难溶化合物的溶解性的机理无法精确的测定,这种影响过程应该是多种因素综合作用的结果。从图2中也可以看出使用多种中药提取物发酵液增加白藜芦醇的水溶性,并非是每种中药提取物发酵液都可以达到较好的效果,其中大豆提取物发酵液的增溶倍数远高于其他几种中药提取物发酵液。
对比例2大豆中不同组分对白藜芦醇水溶性的影响
选取大豆中几种常见组分(大豆多糖、大豆磷脂、大豆异黄酮和大豆皂苷)进行试验,试验过程与对比例1的不同之处在于:将中药提取物发酵液替换为大豆多糖、大豆磷脂、大豆异黄酮或大豆皂苷,根据标准曲线计算出各组分水溶液中白藜芦醇的含量,测试结果如图3所示。图3中增溶倍数是指白藜芦醇在中药提取物发酵液中的溶解度与白藜芦醇直接在水中溶解度的比值。
从图3中可以看出大豆多糖、大豆磷脂对白藜芦醇基本无增溶作用,大豆提取物发酵液的增溶作用最强,20mg/mL大豆提取物发酵液中白藜芦醇的浓度可达0.904mg/mL。在实验过程中还发现大豆异黄酮和大豆皂苷水溶性差,未能完全溶于体系中,但对白藜芦醇仍有一定的增溶作用,另外直接混合大豆异黄酮和大豆皂苷无法达到与大豆提取物发酵液相同的增溶效果,二者可能只是大豆提取物发酵液增溶的因素之一。
实施例1
从对比例1中可知在加入大豆提取物发酵液(SEFL)后白藜芦醇在水中的溶解度,取相应重量的白藜芦醇(RES)原料药加入20mg大豆提取物发酵固形物的粉末中,然后加入去离子水1.0mL混匀,或取相应重量的白藜芦醇原料药加入1.0mL 20mg/mL的大豆提取物发酵液中混匀,置于37℃气浴恒温振荡器中,200r/min转速下振摇过夜,达到溶解平衡后得到SEFL-RES,SEFL-RES即为提高白藜芦醇稳定性的复合物。
实施例2大豆提取物发酵液浓度对白藜芦醇溶解度的影响
实施例2与实施例1的区别在于:大豆提取物发酵液的浓度为1、5、10、25、50、75、100、150、200mg/mL,测试结果见图4。从图4中可以看出,白藜芦醇在水中的溶解度随大豆提取物发酵液质量浓度的增加而增大。对大豆提取物发酵液在1~200mg/mL质量浓度范围内的取样点进行线性拟合,得回归方程y=47.728x-49.826,线性拟合度为0.999。说明将白藜芦醇加入大豆提取物发酵液中可以显著增加白藜芦醇的水溶性。
实施例3不同温度对白藜芦醇溶解度的影响
实施例3与实施例1的区别在于:气浴恒温振荡器的温度为20、25、30、35、40、45℃,测试结果见图5。从图5中可以看出,在所选定温度范围内(20~45℃),随着温度的升高,大豆提取物发酵液对白藜芦醇的增溶效果也随之提升。一方面可能是温度的升高使分子运动加剧,有利于白藜芦醇溶解于大豆提取物发酵液中;另一方面也可能是大豆提取物发酵液与白藜芦醇的结合,是一个需要能量的吸热过程。从图5中可知45℃为最佳制备温度。
实施例4不同振荡时间对白藜芦醇溶解度的影响
实施例4与实施例1的区别在于:气浴恒温振荡器的振荡时间为1、2、4、8、12、16、24、48h,测试结果见图6。从图6中可以看出,振荡时间对白藜芦醇溶解度影响较大,白藜芦醇溶解度随振荡时间的延长呈现先增大,后趋于平缓的趋势。当振荡时间达到12h时,白藜芦醇溶解度达到最大,为4.93mg/mL,再继续延长时间,白藜芦醇溶解度的变化不太明显,表示白藜芦醇已达溶解平衡,溶解度不再随时间成本增加而发生变化。从图6中可知12h为最佳制备时间。
实施例5不同振荡转速对白藜芦醇溶解度的影响
实施例5与实施例1的区别在于:气浴恒温振荡器的振荡转速为50、100、150、200、250、300r/min,测试结果见图7。从图7中可以看出,白藜芦醇溶解度随转速的增加而呈现先增大后降低的趋势。适当的转速可使大豆提取物发酵液与白藜芦醇分子运动加剧,增大二者的碰撞几率,促使白藜芦醇更均匀稳定的分散在大豆提取物发酵液中;而过于激烈的振荡速度不利于氢键的稳定,使白藜芦醇在增溶体系中的溶解度反而随之大幅降低。从图7中可知250rpm为最佳制备转速。
实施例6
大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物的最佳制备条件为:大豆提取物发酵液质量浓度100mg/mL,温度45℃,转速250r/min,振荡时间12h。此条件下,制备所得的大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物(SEFL-RES)中白藜芦醇溶解度为5.89mg/mL,比水中溶解度(0.3μg/mL)大了近19633倍。
实施例7实施例6制备的大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物的表征
(1)采用粒径分析仪对实施例6制备的大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物(SEFL-RES)进行粒径分析,测试过程为取制备的样品溶液适当稀释后注入比色皿中,用激光粒度分析仪测量其平均粒径,每个样品均测试3次,测试结果见图8。
从图8中可以看出,大豆提取物发酵液的平均粒径为(1.107±0.074)nm,而SEFL-RES的平均粒径为(1.230±0.027)nm,二者粒径大小无明显差距,均位于1nm左右,且粒径均呈正态分布,说明该SEFL-RES稳定性良好,在水中形成均一稳定的溶液。
(2)采用傅里叶变换红外光谱仪对实施例6制备的SEFL-RES进行红外光谱分析,测试结果见图9。测试过程为将SEFL-RES溶液经真空冷冻干燥,得其固体粉末。采用压片法,将SEFL固形物、RES、SEFL-RES固体粉末及大豆提取物发酵固形物与白藜芦醇的物理混合物(PM)粉末分别与干燥的KBr细粉研磨混匀,后用粉末压片机制成均匀的薄片,以溴化钾为空白扣除背景,测量范围为4000~400cm-1,分别测定待测样品红外吸收光谱。
从图9中可以看出,各样品的红外光谱特征如下:大豆提取物发酵固形物在3385.36、2929.85、1648.66cm-1等处有明显吸收。白藜芦醇在3261.44、1609.15、1584.51、1510.56、1459.21、964.20cm-1等处或附近具有吸收峰。其中3261.44cm-1附近吸收峰为白藜芦醇酚羟基的特征吸收峰,1610~1440cm-1等处为苯环的特征吸收峰,964.20cm-1附近为反式—C=C—的特征吸收峰。其中,白藜芦醇酚羟基特征峰在SEFL-RES粉末中被掩盖了,表明白藜芦醇与大豆提取物发酵液发生了络合。而PM几乎是SEFL固形物和RES谱图的简单叠加,白藜芦醇的酚羟基特征峰仍然存在,说明大豆提取物发酵固形物和白藜芦醇简单的物理混合不能使两者之间产生氢键,不能增加白藜芦醇的水溶性。此外,SEFL-RES在3377.64cm-1出现了一个宽阔的-OH伸缩峰,表明白藜芦醇与大豆提取物发酵液之间可能存在分子间或分子内氢键。且在扫描范围为内没有出现新的吸收峰,说明在此复合体系没有新的化学键产生。
实施例8大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物体外抗氧化活性测定
(1)DPPH自由基清除能力测定
取DPPH粉末适量,精密称定,加入无水乙醇配制成0.1mmol/L的DPPH溶液。取96孔板,加入100μL DPPH溶液,再加入不同浓度待测样品溶液100μL,避光放置摇床上反应30min,在517nm波长处测其吸光度A1。以无水乙醇代替样品溶液作为空白组,测得吸光度A0。以无水乙醇代替DPPH溶液作为对照组,测得吸光度A2。按照公式:DPPH清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%。计算DPPH自由基清除率。
(2)ABTS自由基清除能力测定
将等体积比的7mM ABTS溶液与2.45mM过硫酸钾溶液混合均匀,放置黑暗处反应12h得到ABTS储存液。用前用无水乙醇稀释ABTS储备液,使其吸光值于734nm波长下检测为0.700±0.002,即得ABTS工作液。取96孔板,加入100μL ABTS工作液,再加入不同浓度待测样品溶液100μL。避光放置摇床上反应10min,在734nm波长处测其吸光度A1。以无水乙醇代替样品溶液作为空白组,测得吸光度A0。以无水乙醇代替ABTS工作液作为对照组,测得吸光度A2。按照公式:ABTS清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%。计算ABTS自由基清除率。
(3)CI值统计
CI=IC50Amix/IC50A+IC50Bmix/IC50B
IC50A和IC50B分别为A、B单独作用时对应的IC50值;IC50Amix、IC50Bmix分别为药物进行复配时A、B两种物质对应的IC50值。计算结果中,若CI=1,表示两物质的相互作用为相加;若CI<1,表示两物质相互作用的结果为协同作用,并且CI值越小表示协同作用越强;若CI>1,表示相互作用为拮抗作用。
(4)不同配比大豆提取物发酵固形物和白藜芦醇形成的复合物的体外抗氧化活性测定。
a.大豆提取物发酵液-白藜芦醇不同配伍比复合物对DPPH自由基清除作用
由图10、11可知,白藜芦醇清除DPPH自由基的IC50(对自由基清除率达到50%时所需的抑制剂质量分数)为94.806μg/mL,大豆提取物发酵液的IC50为26.287mg/mL,SEFL-RES对DPPH自由基有一定清除作用。RES和SEFL按照1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18的比例进行复配时的IC50值见表1。
表1SEFL和RES不同配伍比对DPPH清除率统计分析结果
IC50值越小,说明药物对自由基的清除能力越强,即不同配伍比的SEFL-RES对DPPH自由基清除能力均强于浓度相当的白藜芦醇单体溶液和大豆提取物发酵液,且相互作用系数CI值均小于1,从表1中可以看出其中CI1:8<CI1:10<CI1:14<CI1:18<CI1:16<CI1:12,即协同作用顺序为1:8>1:10>1:14>1:18>1:16>1:12。
从图10和表2中可以看出SEFL-RES对DPPH自由基清除率为50%时,其中含有40.204μg/mL白藜芦醇和0.475mg/mL大豆提取物发酵液。其CI指数为0.515<1,表现为协同作用。
表2SEFL和RES对DPPH清除率统计分析结果
b.大豆提取物发酵固形物-白藜芦醇不同配伍比复合物对ABTS自由基清除作用
由图12、13和表3可知,RES清除ABTS自由基的IC50值为6.814μg/mL,SEFL的IC50值6.303mg/mL。RES和SEFL复配物对ABTS自由基有一定清除作用。RES和SEFL按照1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:18的比例进行复配时的IC50值见表3。
表3SEFL和RES不同配伍比对ABTS清除率统计分析结果
不同配伍比的SEFL-RES对ABTS自由基清除能力均强于浓度相当的的白藜芦醇单体溶液和大豆提取物发酵液,且不同配伍比的SEFL-RES的相互作用系数CI值均小于1,其中CI1:16<CI1:18<CI1:14<CI1:12<CI1:10<CI1:8,即协同作用顺序为1:16>1:18>1:14>1:12>1:10>1:8。
综上所述,与游离的白藜芦醇相比,SEFL-RES对DPPH和ABTS自由基清除能力均更强,一方面可能是作为增溶剂的大豆提取物发酵液本身对自由基有一定清除能力,另一方面也可能因为白藜芦醇与大豆提取物发酵液之间发生相互作用后,能更好的分散在溶液中,从而促进白藜芦醇与自由基的动力学反应。
由于SEFL-RES能够较好的清除自由基,具有协同抗氧化活性,可利用上述性能将其作为活性成分用于制备抗氧化产品的过程中。
实施例9大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物光稳定性测试
(1)白藜芦醇含量的测试方法为:分别称取等量的SEFL-RES复合物于密封的玻璃瓶中保存。该项下实验分为两组,一组样品置于太阳光下照射;另一组样品置于阴暗避光处,两组均于室温下放置15d,第0,1,3,6,9,12,15d时取样,按上述高效液相色谱法测定白藜芦醇含量,计算其残存率。测试结果见图14。
从图14可以看出,随着时间的延长,不管在光照条件下还是在避光条件下,白藜芦醇的残存率均在逐渐下降。在相同的取样时间点,SEFL-RES在避光条件下的残存率均最高,稳定性最强,在避光环境中放置15d,白藜芦醇损失量仅为4.55%。与光照条件下相比,避光条件下复合物中白藜芦醇的稳定性均比相应的光照条件下高,猜测可能是在光照条件下,少量反式白藜芦醇转变为顺式结构,或是被紫外线破坏,转变为其他杂质。
从图14中还可以看出本发明的SEFL-RES在光照环境中放置15d,白藜芦醇的损失量为6.68%,而纯的白藜芦醇在光照环境中放置15d后,白藜芦醇的损失量为10.09%,本发明中复合物在光照下白藜芦醇损失量明显小于纯的白藜芦醇,说明本发明在纯的白藜芦醇中加入大豆提取物发酵液不仅能提高其溶解性,还可以提高白藜芦醇的光稳定性。
(2)体外抗氧化活性稳定性测试方法为:取(1)中不同取样点下的样品,无水乙醇将RES浓度分别稀释至100μg/mL和20μg/mL,按上述实施例8测定DPPH自由基和ABTS自由基清除能力的方法测定样品溶液对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力。
SEFL-RES在光照与避光条件下0~15天内的DPPH、ABTS清除能力如图15、16所示。结果显示,随着光照时间的增加,SEFL-RES的体外抗氧化活性无明显变化,与0d相比,光照15d后SEFL-RES对DPPH、ABTS清除能力略有下降,清除率分别降低了2.46%和4.93%。与光照条件下相比,避光条件下复合物的体外活性均比相应的光照条件下的高。清除率下降的原因:猜测是少量反式白藜芦醇在光照条件下转变为顺式结构或被紫外线破坏,降低了体外抗氧化活性。
实施例10大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物安全性评价
参照《化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验》(SN/T2329-2009)进行,试验采用反应时间法。取9日龄SPF级鸡胚进行照蛋检查,除去气室顶端蛋壳,暴露尿囊膜(CAM)。取0.3mL受试物直接滴加于CAM表面,观察并记录5min内开始出现出血、血管融解、凝血的时间。每个受试物进行6次平行实验。同时设立阴性对照(质量分数0.9%氯化钠注射液)和阳性对照(0.1mol/L氢氧化钠溶液)。
按照公式:IS=(301-sec H)×5/300+(301-sec L)×7/300+(301-sec C)×9/300。计算刺激评分。
式中:sec H为CAM膜上观察到开始发生出血的平均时间,单位为秒(s);sec L为CAM膜上观察到开始发生血管融解的平均时间,单位为秒(s);sec C为CAM膜上观察到开始发生凝血的平均时间,单位为秒(s)。
刺激性分类:IS<1,无刺激性;1≤IS<5,轻刺激性;5≤IS<9,中度刺激性;IS≥10,强刺激性/腐蚀性。
样品作用于绒毛尿囊膜试前后对比图结果及见图17。样品刺激评分结果见表3。
采用体积分数0.9%氯化钠注射液作阴性对照,刺激评分为0,即无刺激性;以0.1mol/L氢氧化钠溶液作为阳性对照,刺激评分为17.2,在体式显微镜下可观察到出血、凝血等现象;SEFL-RES的刺激评分为0,血管无溶血,表明SEFL-RES无眼刺激性。SEFL-RES有很大的潜力作为功效性原料应用于化妆品中。
表3胚绒毛尿囊膜试验结果
机理分析:
首先中药提取物发酵液中包括多糖、皂苷和磷脂等多种活性成分,活性成分之间复配形成的超分子结构可增加中药活性成分的溶解度、改善其体内吸收,提高生理活性。但是不同中药提取物发酵液中的活性成分的化学结构、分子量、空间结构均不相同,并且针对不同的难溶中药活性成分作用也不同。在本发明中大豆提取物发酵液对白藜芦醇增溶作用显著。
大豆提取物发酵液中的主要活性成分包括大豆多糖、大豆磷脂、大豆皂苷、大豆异黄酮,其中大豆多糖支链多且长,可形成类似刷子结构,有利于超分子结构的形成,且以阿拉伯聚糖和半乳聚糖为分支的中性糖对大豆多糖发挥乳化性能具有重要作用,其中大豆磷脂分子结构中含有亲水基团和疏水基团,具有天然表面活性作用,但是结果显示大豆多糖和大豆磷脂单体在本实验条件下对白藜芦醇均无增溶作用,二者在大豆提取物发酵液中可能作为“助溶剂”,促进大豆提取物发酵液中超分子结构的形成,进而促进大豆提取物发酵液增溶白藜芦醇。大豆异黄酮和大豆皂苷水溶性较差,未能完全溶于体系中,但对白藜芦醇仍有一定的增溶作用,因此在大豆提取物发酵液中的大豆异黄酮和大豆皂苷可以与其中的大豆多糖和大豆磷脂形成超分子结构,整个超分子结构整体作用于白藜芦醇,显著增加了白藜芦醇的水溶性,提高了其生物利用度。
另外,大豆提取物发酵液中成分复杂,其增溶的物质基础不仅是每种单体成分增溶的总和,而且包括成分间的相互作用,活性成分的共同存在,使得难溶化合物白藜芦醇在大豆提取物发酵液中的水溶性显著增加。
实施例11
(1)复合物液晶霜的制备过程
根据表4配方比例制备空白液晶霜。称取A相各原料,于80℃加热溶解均匀,保温备用;称取B相中卡波姆-980分散至甘油中,再加入B相中其他原料,于70℃溶解均匀后,将A相匀速地加入到B相中,搅拌2min,7000r/min下剪切5min,降温至45℃后,加入C、D相,搅拌均匀,得到空白液晶霜。
将SEFL、RES、SEFL-RES或二者物理混合物(PM)粉末加入空白液晶霜中,搅拌均匀,分别得到SEFL液晶霜,RES液晶霜,SEFL-RES液晶霜和PM液晶霜,其中保持SEFL含量均为2%、RES含量均为0.1%。同法制备维生素C(VC)液晶霜,其中VC含量为0.1%。
表4液晶霜基础配方
(2)对复合物液晶霜的性能进行测定
实验对象选取:选取10名健康女性志愿者(年龄22~28岁,Fitzpatrick皮肤类型Ⅲ-Ⅳ型),所有志愿者无光线相关皮肤病及系统性疾病;实验前1个月内及实验过程中无药物使用情况。实验区域在整个实验期间内避免接受阳光照射。志愿者完全理解志愿原则,对研究中得到的利益及可能存在的风险完全知情,并随时可以退出实验,签署知情同意书签署知情同意书。
①最小红斑量(minimum erythema dose,MED)测定
UVB计量测算:应用上海希格玛高技术有限公司配套UVB照射测试仪标定照射强度;UVB剂量=UVB照射强度×照射时间(秒)。
实验开始前两周测定每位志愿者MED。以志愿者非曝光区域左小腿内侧部位为测试区域,选取8个孔径为1.2cm圆孔,分别予30、40、50、60、70、80、90、100mJ/cm2剂量的UVB照射。测试区皮肤与紫外线光疗仪保持15cm距离。结果判断照射后24h在充足自然光线下观察,以肉眼所见与孔格一致、轮廓清楚、色泽均匀的最弱红斑所需的照射剂量为MED。MED越低表示受试者受试区对紫外线越敏感。
实验分组:选取与测定MED部位相对应的右小腿内侧作为实验部位,UVB照射剂量选取1.5MED。选取8个孔径1.2cm圆孔作为实验区域,包括区域1:空白对照组;2:UVB照射组;3:基质+UVB组;4:VC液晶霜+UVB组;5:SEFL液晶霜+UVB组;6:RES液晶霜+UVB组;7:PM液晶霜+UVB组;8:SEFL-RES液晶霜+UVB组。
UVB照射及液晶霜涂抹:分别于照射前半小时涂抹液晶霜,待紫外线光疗仪照射强度稳定后以每位志愿者的1.5MED照射相应区域。各实验区域每天照射1次,连续照射4d。照射前及结束后1d、3d及10d进行相关指标检测。
数据统计:采用SPSS26.0软件进行统计学分析,数据采用平均数±标准差(x±s)表示。多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),两两比较采用LSD-t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
②红斑程度
由3名医生独立评估、记录、照相。采用分级法对照射结束后的实验部位进行评分。无红斑—0级;淡红斑—1级;明显红斑—2级;显著红斑或有浸润—3级。
测试结果如下:
10名志愿者UVB照射部位均出现了不同程度的红斑,且在第3d时最为明显。UVB组和基质+UVB组皮损处红斑最明显,且二者无显著性差异,表明基质无防治UVB作用;涂抹SEFL、RES和PM液晶霜的部位均出现明显红斑;涂抹SEFL-RES和VC液晶霜的部位红斑颜色最浅,呈隐约的淡红色;未经照光空白部位的皮肤颜色与周围正常皮肤一致,无红斑出现(图18,19)。结果显示,SEFL、RES、二者复合物及物理混合物对UVB照射所致皮肤红斑均有抑制作用,且SEFL-RES抑制作用最为显著。
表5 SEFL-RES减轻UVB照射引起的红斑程度分类(照射后第3d)
0级 | 1级 | 2级 | 3级 | |
空白组 | 10 | 0 | 0 | 0 |
UVB组 | 0 | 0 | 2 | 8 |
基质+UVB组 | 0 | 0 | 3 | 7 |
VC+UVB组 | 5 | 5 | 0 | 0 |
SEFL+UVB组 | 0 | 2 | 8 | 0 |
RES+UVB组 | 0 | 3 | 7 | 0 |
PM+UVB组 | 0 | 5 | 5 | 0 |
SEFL-RES+UVB组 | 6 | 4 | 0 | 0 |
③不适指数
由3名医生协助评估、记录。采用分级法对照射结束后的实验部位进行评分。正常皮肤感觉—0级;轻度瘙痒—1级;明显瘙痒—2级;疼痛—3级。
测试结果如下:
10名志愿者UVB照射部位均出现了不同程度的不适反应,且在第3d时最为明显。空白组及VC+UVB组和SEFL-RES+UVB组皮损处基本无不适反应,其余各处均有不同程度的瘙痒、水肿或疼痛,其中UVB组和基质+UVB组皮损处不适感最为明显;涂抹SEFL、RES和PM液晶霜的部位对UVB引起的皮肤不适的减轻程度相当。具体见表6和图20。
表6 SEFL-RES减轻UVB照射引起的皮肤不适程度分类(照射后第3d)
④多功能皮肤测试仪检测
使用MPA9多功能皮肤测试仪的CM825、TM300和Mexameter MX18分别测量各实验区域的皮肤含水量、TEWL值和EI值。
测量条件:于不通风、无阳光直射室内,室温25~26℃,相对湿度50~60%;志愿者于测量前用温水洗净实验部位后不涂抹任何护肤品及药物。
皮肤含水量测试结果如下:
皮肤含水量对维持皮肤弹性、角质层酶活性及皮肤光滑等生理功能发挥着重要功能,UVB的照射可导致皮肤中水分含量显著下降,进而出现干燥、脱屑、起皱、松弛等现象,降低皮肤的生理功能。
UVB照射结束后第1d、3d及10d,UVB组和基质+UVB组皮肤角质层含水量较空白组下降明显(P<0.05);与UVB组相比,UVB照射结束后第1d和10d,VC+UVB组和SEFL-RES+UVB组皮损处皮肤含水量均升高(P<0.05);在UVB照射结束后第3d时,各照光组皮肤可能因各皮损处血管扩张引起局部红斑和细胞间水肿,使得水分含量略有增加;至第10d时,除VC+UVB组和SEFL-RES+UVB外,各照光组皮肤含水量较第3d均有所下降,可能因各皮损处经UVB照射后引起皮肤砖墙结构的破坏,加快了表皮脱屑的过程,使得水分含量降低。具体见表7,图21。
表7SEFL-RES对UVB照射后人皮肤含水量的影响(x±s)
注:与UVB照射组相比,*、#P<0.05
TEWL测试结果如下:
TEWL是指皮肤表皮层的水分通过扩散和蒸发作用进入周围环境的水量,是描述皮肤水屏障的重要参数,TEWL值越大,表明表皮经皮水分丢失的越多,皮肤水屏障功能受损越严重。
UVB照射结束后第1d、3d及10d,UVB组和基质组+UVB皮肤TEWL值较空白组下降明显(P<0.05);与UVB组相比,UVB照射结束后第1d、3d及10d,所有给药组皮损处皮肤TEWL值均降低(P<0.05);其中在第3d时和10d时,VC+UVB组和SEFL-RES+UVB与空白组皮肤TEWL值无显著性差异(P>0.05),皮肤水屏障功能未发生明显损伤。结果表明,外涂SEFL-RES液晶霜能很好改善皮肤的水通透屏障,维持皮肤组织水合完整。具体见表8,图22。
表8SEFL-RES对UVB照射后人皮肤TEWL的影响(x±s)
注:与UVB照射组相比,*、#、△P<0.05
EI指数测试结果如下:
各组UVB照射结束后第1d,除SEFL-RES+UVB组外,其余照光组人皮肤EI值较空白组均有明显升高(P<0.05);在UVB照射结束后第3d时,各照光组EI值较第1d均上升,与空白组间有显著性差异(P<0.05);至第10d时,各照光组EI值均大幅下降,其中SEFL-RES+UVB与空白组皮肤EI值无显著性差异(P>0.05)。
与UVB组相比,UVB照射结束后第1d、3d及10d,所有给药组皮损处皮肤EI值均降低(P<0.05),其中在第1d时和10d时,SEFL-RES+UVB与空白组皮肤EI值无显著性差异(P>0.05),皮肤色素屏障功能未发生明显损伤。结果表明,外涂SEFL-RES液晶霜能很好改善皮肤的色素通透屏障,降低UVB照射引起的皮肤损伤。具体见表9,图23。
表9SEFL-RES对UVB照射后人皮肤EI的影响(x±s)
注:与UVB照射组相比,*、#、△P<0.05
⑤RCM诊断
皮肤光损伤主要是由于紫外线作用于人体皮肤,破坏皮肤表面角质层,细胞出现应急反应,引起多种生物学效应,最终造成皮肤表面的红肿、热痛,甚至破坏皮肤水屏障和色素屏障完整性。红斑是最常见的晒伤反应,其本质是一种急性光毒性炎症反应,其中真皮内血管反应是产生红斑的基础。RCM是一种非侵入性的实时动态成像工具,具有“活体组织病理”之称,主要用于皮肤肿瘤、色素性、炎症性及感染性皮肤疾病的鉴别和诊断,在皮肤科的应用十分广泛。
RCM具有约30倍放大倍率的水浸物镜,数值孔径0.9mm,深度可达300~400μm,横向分辨率可达0.5~1.0μm。使用前对RCM进行校正,使零平面位于角质层最浅层。使用Vivastack模式并以2~3μm的间隔获取从表皮层到真皮层的水平图像。
志愿者取坐位,选取实验部位,显微光源调至830nm,医用耦合剂挤入镜头中间后盖上塑料组织帽。用棉签蘸取蒸馏水轻涂于实验部位使其湿润。扫描观察区域为500μm×500μm,扫描范围为2mm×2mm(XY水平方向),扫描深度为350μm以内的表皮层及真皮浅层,由上而下进行扫描,采集各层次的RCM图像。
1)表皮层
棘层
正常皮肤棘层通常由5~10层细胞组成,位于皮肤表面以下约20~100μm的深度,在RCM下,棘层角质形成细胞大小约为15~25μm,呈多边形,含有一个圆形至卵圆形的深色区域,对应着核,周围有一圈明亮的胞质。棘层细胞较小,有清晰的细胞边界并呈蜂巢状排列(图24A)。在1.5MED UVB连续照射4d后,照射结束后第3d,此时皮损区皮肤不适感最为明显,EI值最高,在RCM下,观察到UVB组和基质+UVB组皮损处较之周围正常皮肤折光度降低,有界限清晰的水疱产生,并伴有炎症细胞游入(图24B、24C);涂抹SEFL、RES和PM液晶霜的部位对UVB引起的棘层损伤均有一定程度的减轻,可观察到棘层细胞间液体增多,细胞间隙增宽,发生了细胞间水肿(图24E、24F、24G);而涂抹VC和SEFL-RES液晶霜的部位,在RCM下,棘层细胞与正常皮肤相比无明显异常(图24D、24H)。
基底层
正常皮肤基底层位于皮肤表面以下约40~130μm的深度,由单层柱状角质形成细胞组成,其中随机散在黑素细胞,呈现为小而圆形至星形分散于角质形成细胞之中。在RCM下,基底层细胞大小约为7~12μm,呈多角形,较棘层细胞更亮,呈环状围绕暗色的真皮乳头排列,被称为“基底细胞环”(图25A)。于UVB结束后第3d对皮损处进行RCM检测,观察到UVB组和基质+UVB组皮损处基底细胞液化变性,基底细胞环结构消失,表真皮交界不清,有较多高折光噬色素细胞及中低折光炎性细胞浸润(图25B、25C);涂抹SEFL、RES和PM液晶霜的部位对UVB引起的基底层损伤均有一定程度的减轻,其中SEFL+UVB组和RES+UVB组皮损处基底层无明亮的基底细胞环,真皮乳头结构不完整,周围有嗜色素细胞和炎性细胞聚集(图25E、25F);PM+UVB组基底细胞环部分消失,伴有嗜色素细胞和炎性细胞游入,但表真皮交界处仍有明确的真皮乳头结构(图25G);而涂抹VC和SEFL-RES液晶霜的部位,在RCM下,基底细胞环明亮,与正常皮肤相比无明显异常(图25D、25H)。
2)真皮层
真皮乳头层
正常皮肤真皮乳头层位于皮肤表面以下约50~150μm的深度,为突向表皮基底层的乳头状隆起,内含丰富的毛细血管和毛细淋巴管。在RCM下,真皮乳头层呈低折光,被一圈明亮的基底层细胞围绕,在实时影像或视频捕获中,可以见到毛细血管襻中循环的血细胞(图26A)。于UVB结束后第3d对皮损处进行RCM检测,观察到UVB组和基质+UVB组皮损处无明确可辨的真皮乳头,毛细血管充血、扭曲扩张,管周可见淋巴细胞及以低折光单一核细胞为主的炎性细胞浸润等炎症反应(图26B、26C);涂抹SEFL、RES和PM液晶霜的部位对UVB引起的真皮乳头层损伤均有一定程度的减轻,基底细胞环结构消失,且有多处低折光暗色区域的真皮毛细血管扩张(图26E、26F、26G);涂抹VC和SEFL-RES液晶霜的部位,在RCM下,真皮乳头结构完整,基底细胞环结构清晰可见,仅少量毛细血管扩张(图26D、26H)。
真皮网状层
正常皮肤真皮网状层位于皮肤表面以下约>150μm的深度。在RCM下仅能观测到真皮网状层的上部,其呈现灰色、粗大、中度折射的胶原(图27A)。于UVB结束后第3d对皮损处进行RCM检测,观察到UVB组和基质+UVB组皮损处胶原发生变形,呈均质化(图27B、27C);而所有给药组真皮网状层纤维均未见明显异常(图27D~H)。
本发明采用UVB照射人体腿部皮肤,照射前半小时涂抹SEFL、RES、SEFL-RES和PM液晶霜,观察红斑程度和不适反应,测定照射前后的皮肤含水量、TEWL、EI值,进行皮肤RCM检测。结果显示,与其他给药组相比,UVB照射前涂抹SEFL-RES液晶霜能有效抑制UVB引起的皮肤红斑反应,减轻不适反应,增加皮损区皮肤含水量,降低TEWL和EI值,保护皮肤水屏障和色素屏障功能,减轻皮肤内炎症细胞浸润和血管扩张。
因此,本发明采用上述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物及其制备与应用,大豆提取物发酵液不仅能够增加白藜芦醇的水溶性,提高白藜芦醇的生物利用度,增加白藜芦醇的稳定性,而且能够与白藜芦醇形成大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物,大豆提取物发酵液-白藜芦醇复合物对DPPH和ABTS自由基清除能力均更强,存在协同抗氧化活性。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其进行限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而这些修改或者等同替换亦不能使修改后的技术方案脱离本发明技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物,其特征在于:包括大豆提取物发酵固形物、白藜芦醇和水。
2.根据权利要求1所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物,其特征在于:大豆提取物发酵固形物在水中的质量浓度为1~200mg/mL,白藜芦醇在水中的质量浓度为0.04~10mg/mL。
3.根据权利要求1~2任一项所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的制备方法,其特征在于:大豆提取物发酵固形物和水混合溶解形成大豆提取物发酵液,向含有大豆提取物发酵液中加入白藜芦醇,或将大豆提取物发酵固形物与白藜芦醇混合后加入水;混合均匀即可。
4.根据权利要求3所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的制备方法,其特征在于:混合均匀的具体过程为将大豆提取物发酵液和白藜芦醇的混合物置于气浴恒温振荡器中直至溶解完全。
5.根据权利要求4所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的制备方法,其特征在于:气浴恒温振荡器的温度为20~45℃,振荡时间为1~20h,振荡转速为50~300rpm。
6.根据权利要求5所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的制备方法,其特征在于:得到的复合物的粒径为1.20~1.26nm。
7.根据权利要求1所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的应用,其特征在于:复合物在制备抗氧化药物或抗氧化化妆品中的应用。
8.根据权利要求7所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的应用,其特征在于:复合物中白藜芦醇与大豆提取物发酵固形物的质量比为1:8~18。
9.根据权利要求8所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的应用,其特征在于:复合物中白藜芦醇的质量浓度为40.204μg/mL,大豆提取物发酵液的质量浓度为0.475mg/mL。
10.根据权利要求7所述的一种提高白藜芦醇稳定性和活性的复合物的应用,其特征在于:复合物制备成液晶霜应用于UVB致人皮肤急性光损伤药物中。
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