CN116270345B - 防辐射、活血养颜、抗衰老的天然草本化妆品及其应用 - Google Patents
防辐射、活血养颜、抗衰老的天然草本化妆品及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本申请涉及防辐射化妆品技术领域，尤其涉及一种防辐射、活血养颜、抗衰老的护肤品原料制备方法及其应用。该护肤品可为乳液形式，利用花烟草提取物和玫瑰花提取物组成的组合物制得，其相对于一般不具有该组合物的护肤乳液而言，不仅对皮肤组织具有防辐射的功效，还能起到活血养颜，抗衰老作用，具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本申请涉及防辐射化妆品技术领域，尤其涉及一种防辐射、活血养颜、抗衰老的天然草本化妆品及其应用制备方法及其应用。
背景技术
在日常生活中，人们常接触的有太阳辐射和电磁辐射。由太阳光中紫外线所致的光照老化是一个损伤积累的过程，紫外线还会会促使肌肤干燥，加快肌肤老化，产生或加深黑斑和雀斑，或引起皮肤炎，甚至可能引起皮肤癌。目前市售的具有防辐射功能的护肤品大多添加有重金属，如铅等，对人体健康造成危害。因此，非常有必要开发一种具有防辐射功能的天然无害的护肤品。
发明内容
有鉴于此，本申请的目的在于避免选择重金属元素作为护肤品的原料，比如选择天然草本作物等原料，以减少护肤品本身对皮肤的危害。
第一方面，本申请实施例公开了一种组合物，应用于化妆品中，所述组合物包括花烟草提取物和玫瑰花提取物，所述化妆品包括所述组合物以及化妆品中可接受的其他成分；其中，以所述护肤乳的总重量计，花烟草提取物占0.001～3.5wt％，玫瑰花提取物占比为的0.001～15wt％。
在本申请实施例中，所述花烟草提取物包含花青苷、原花青素A1、原花青素C、3-羟基黄酮、查耳酮、橙酮、异鼠李素-3,7-O-二葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素3,4'-二葡萄糖苷和槲皮素3-O-(6”-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷。
在本申请实施例中，所述花烟草提取物采用混合试剂进行提取得到，所述混合试剂包含水、丙酮、甲醇、甲酸、三氟乙酸和乙酸乙酯。
在本申请实施例中，所述玫瑰花提取物包含苯乙醇、1-壬醇、芳樟醇、香叶醇、2-庚醇、乙酸、苄醇、异戊烯醇、2-甲基丁醇、2-丙醇、1-辛醇、橙花醇、丁香酚、甲基丁香酚、2,6-双(1,1-二甲基乙基)-4-甲基苯酚、烯丙基节基醚、苯甲醛、橙花醛、壬醛、癸醛、香叶醛、十一醛、香茅醛、甲基庚烯酮、2-壬酮、2-十三烷酮、2-十一烷酮、2-庚酮、香叶基丙酮、萜品烯、α-柏木烯、崖柏烯、姜黄烯、月桂烯、α-旅烯、双戊烯、α-法尼烯、甲酸橙花酯、乙酸香茅酯、乙酸香叶酯、乙酸苯甲酯、二十酸甲酯、梨醇酯、正十三烷、3-亚甲基-1,1-二甲基-α-乙烯基环己烷、盐酸羧甲氧基胺盐和环己烯巴比妥。
在本申请实施例中，可接受的其他成分选自润肤剂、成膜剂、乳化剂、保湿剂、稳定剂和溶剂中的一种或多种。
在本申请实施例中，所述化妆品的产品形式可以是粉底液、粉底霜、隔离霜、妆前乳、洁面乳、护肤乳、护肤乳液、遮瑕液和修颜霜中的一种或多种。
第二方面，本申请实施例公开了一种护肤乳，按重量百分比计，包含0.02～3.2wt％花烟草提取物、0.001～8.5wt％玫瑰花提取物以及化妆品中可接受的其他成分。
在本申请实施例中，所述护肤乳包含1.8～3.0wt％花烟草提取物、3～7wt％玫瑰花提取物、0.01～2.3wt％酪蛋白磷酸肽、3～8wt％PEG-12聚二甲基硅氧烷、8～15wt％丙二醇和0.1～0.5wt％硬脂酸镁，余量为水。
在本申请实施例中，包含1.8～2.0wt％花烟草提取物、5～6.5wt％玫瑰花提取物、0.01～1.65wt％岩藻多糖、3～8wt％山梨坦橄榄油酸酯、8～15wt％1,2-戊二醇和0.1～0.5wt％硬脂酸镁，余量为水。
第三方面，本申请实施例公开了第一方面所述的组合物或权利要第二方面所述的护肤乳在皮肤防辐射以及制备皮肤活血养颜相关制剂方面的应用。
在本申请实施例中，
与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：
本申请实施例利用花烟草提取物和玫瑰花提取物组成的组合物制得得到一种护肤乳，其相对于一般不具有该组合物的护肤乳液而言，不仅对皮肤组织具有防辐射的功效，还能起到活血养颜，抗衰老作用，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为本申请动物实验正常组提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图2为本申请动物实验模型组提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图3为本申请动物实验阳性对照组提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图4为本申请动物实验实验组(实施例2)提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图5为本申请动物实验实验组(实施例3)提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图6为本申请动物实验实验组(对比例1)提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图7为本申请动物实验实验组(对比例2)提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图8为本申请动物实验实验组(对比例3)提供的大鼠皮肤组织电镜图。
图9为本申请动物实验实验组(对比例4)提供的大鼠皮肤组织电镜图。
具体实施方式
为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
下方将结合实施例具体进行说明，下述实施例中未特别说明的试剂或仪器均可从商业途径获得，未特别说明的实验方法均为常规实验方法。
花烟草提取物
花烟草(学名：Nicotiana alata Link et Otto)是茄科，烟草属有限的多年生草本植物，高可达1.5米，全体被粘毛。叶片基部稍抱茎或具翅状柄，向上成卵形或卵状矩圆形，近无柄或基部具耳，接近花序即成披针形。假总状花序式，疏散生几朵花；花萼杯状或钟状，裂片钻状针形，不等长；花冠淡绿色，雄蕊不等长，蒴果卵球状，种子灰褐色。原产阿根廷和巴西。中国哈尔滨、北京、南京等市有引种栽培。花烟草主要作为盆栽养殖的花卉，花色明艳，色彩丰富，具有很好的观赏价值。而本申请实施例对其进行相关提取步骤，得到一种花烟草提取物，并将其应用于护肤品中。关于花烟草提取过程如下：
一、材料与方法
1、花烟草以及提取初材料
本申请花烟草采购于北京某花卉市场。于晴朗天气采集其盛花期柱头分泌粘液时期的花朵，取有颜色的花瓣部分，封闭保存。
2、提取过程
取上述提取材料，用液氮研磨至粉末状，使用提取试剂进行提取，提取试剂的用量为10mL/每g，可提取多次后，合并提取液，每次时间不低于24h，提取过程进行封闭处理，旋转蒸发浓缩，干燥得到花烟草提取物。
具体的，作为实施例1的提取试剂为水、丙酮、甲醇、甲酸、三氟乙酸和乙酸乙酯的混合溶液，其配方的体积比为65:65:80:2:1:1。作为对比例1的提取试剂为水、甲醇、甲酸和三氟乙酸的混合溶液，其配方的体积比为27:70:2:1。
3、花色素相关成分含量的测定
将实施例1和对比例1提取物分别用对应的提取试剂溶解后，用滤纸和0.22μm的滤纸依次过滤，滤液作为上样样品。
标准品为：花青苷(北京百灵威科技有限公司)、原花青素A1(上海源叶生物科技有限公司)和原花青素C(上海源叶生物科技有限公司)。
采用HPLC-TOF-MS方法测定上述提取物中的相关花色素含量，其色谱条件为：色谱柱为Alltima HP HILIC 86466(北京豫维科技有限公司，250mm×4.6mm)；工作站为EZchromElite,version 3.2.1；检测器:UV6000；检测波长:290nm；柱温:25℃；进样量:10μL；
流速为0.8mL/min。
洗脱条件为：流动相采用A相(乙睛)、B相(甲醇:水体积比为98.5:1.5)进行梯度洗脱，洗脱程序为0→3min(100％A)；3→20min(100％→70％A)；20→30min(70％→0％A)；30→32min(0％→100％A)；32→35min(100％A)。
4、黄酮醇及其糖苷类化合物的含量测定
检测样品：将实施例1和对比例1提取物分别用对应的提取试剂溶解后，用滤纸和0.22μm的滤纸依次过滤，滤液作为上样样品。。
标准品为：山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(CAS:16290-07-6，艾科试剂，色谱纯)，山奈酚-3-O-芸香糖苷(CAS:17650-84-9，爱必信(上海)生物科技有限公司，纯度98％)，槲皮素3,4'-二葡萄糖苷(CAS:29125-80-2，上海源叶生物科技有限公司，HPLC≥98.5％)，槲皮素3-O-(6”-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷(CAS:56316-75-7，HPLC≥98.5％，上海联迈生物工程有限公司)，3-羟基黄酮(CAS号:577-85-5，北京百灵威科技有限公司，纯度：98.5％)、查耳酮(CAS号:94-41-7，北京百灵威科技有限公司，纯度：98.0％)和橙酮(CAS号:38216-53-4，北京颖诺凯胜科技有限公司，纯度：98％)、异鼠李素-3,7-O-二葡萄糖苷(CAS号:6758-51-6，西亚试剂)、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(CAS号:5041-82-7，上海吉至生化科技有限公司，纯度：98.0％)
HPLC-DAD分析条件：三重四极杆液质联用仪(赛默飞)，DAD检测器，波长350nm；流动相：A相为乙睛，B相为80.1％甲酸水溶液；色谱柱为Angilent Eclipse plus C18(150×2.1mm，5μm)；流速为0.3mL/min；柱温为35℃；进样量为5μL；梯度洗脱。
根据各标准品配置的不同浓度对应的峰面积制作标准曲线，根据标准曲线和样本对应峰面积，计算样本中相关活性成分浓度，根据该浓度计算每种活性成分在提取物中的含量。
二、结果
表1
表1列出来实施例1和对比例1分别制得的花烟草提取物中的花青素相关成分、黄酮醇类物质以及糖苷类物质成分含量，其中，“－”表示未检出。由表1可知，实施例1和对比例1分别制得的花烟草提取物中均含有花青苷、原花青素A1和原花青素C，但有实施例1制得的提物物中花青苷含量较低，而原花青素A1和原花青素C含量较高，而对比例1则反之。实施例1和对比例1制得的提取物中均含有含量相差不大的3-羟基黄酮、查耳酮、橙酮、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素3,4'-二葡萄糖苷和槲皮素3-O-(6”-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷。而对比例1制得的提取物中不包含异鼠李素-3,7-O-二葡萄糖苷和异鼠李素-3-O-葡萄糖苷。
玫瑰花提取物
玫瑰花为蔷薇科蔷薇属，果实可食，无糖，富含维他命C，常用于香草茶、果酱、果冻、果汁和面包等；鲜花可以蒸制芳香油，油的主要成分为左旋香芳醇，含量最高可达千分之六，供食用及化妆品用，花瓣可以制饼馅、玫瑰酒、玫瑰糖浆，干制后可以泡茶，花蕾入药治肝、胃气痛、胸腹胀满和月经不调。
本申请实施例对其进行相关提取步骤，得到一种玫瑰花提取物，并将其应用于护肤品中。关于玫瑰花的提取过程如下：
1、玫瑰花提取过程
本申请涉及的玫瑰花购自北京某花卉市场。提取过程如下：
准确称取200g干燥的玫瑰花花瓣粉末，置于500mL圆底烧瓶内，加200mL蒸馏水，充分混匀后于微波水热合成仪器(XH-800SP，北京祥鹄)中，27kW处理20min后，再转至连接水蒸气蒸馏装置中进行提取，向馏出液中加入NaCl，静置后用50mL乙醚萃取3次，合并萃取液，无水Na2SO4干燥，过滤，旋蒸回收乙醚，40℃真空干燥1h，即可得到玫瑰花提取物。
2、相关成分检测
采用气相色-质谱联用技术(GC-MS)对玫瑰花提取物中的相关成分分析。色谱柱为HP-5MS(安捷伦，19091S-433-INT)，规格为30m×0.25mm×0.25μm；载气为氮气，进气量1.0mL/min；进样口温度260℃；升温速度50℃/min，升到250℃；进样量1匹，不分流；EI离子源，70eV，扫描范围50～650amu，传输线温度250℃。通过WILEY和MAINLIB谱库自动检索，同时采用保留指数和参考文献来辅助质谱检索定性，定量分析结果依据总离子流色谱峰的峰面积归一化法来计算各组分的相对含量。
3、结果
表2玫瑰花提物物成分相对含量(％)
表2列出了该玫瑰花提取物中的醇类、酚类、醛类、酮类、烯类、酯类以及成分，总共48种成分的相对含量，其中醇类物质含量较高。
组合物以及护肤品
本申请发明人发现利用上述制得的花烟草提取物和玫瑰花提取物混合得到一种组合物，该组合物可应用于化妆品中。该化妆品包括该组合物以及化妆品中可接受的其他成分；其中，以所述护肤乳的总重量计，花烟草提取物占0.001～3.5wt％，玫瑰花提取物占比为的0.001～15wt％。将该组合物应用于化妆品中，不仅对皮肤组织具有防辐射的功效，还能起到活血养颜，抗衰老作用。
其中，该花烟草提取物由实施例1制得，具体的，该花烟草提取物包含花青苷、原花青素A1、原花青素C、3-羟基黄酮、查耳酮、橙酮、异鼠李素-3,7-O-二葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、槲皮素3,4'-二葡萄糖苷和槲皮素3-O-(6”-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷。
其中，该玫瑰花提取物由上述实施方式制得。具体，该玫瑰花提取物包含苯乙醇、1-壬醇、芳樟醇、香叶醇、2-庚醇、乙酸、苄醇、异戊烯醇、2-甲基丁醇、2-丙醇、1-辛醇、橙花醇、丁香酚、甲基丁香酚、2,6-双(1,1-二甲基乙基)-4-甲基苯酚、烯丙基节基醚、苯甲醛、橙花醛、壬醛、癸醛、香叶醛、十一醛、香茅醛、甲基庚烯酮、2-壬酮、2-十三烷酮、2-十一烷酮、2-庚酮、香叶基丙酮、萜品烯、α-柏木烯、崖柏烯、姜黄烯、月桂烯、α-旅烯、双戊烯、α-法尼烯、甲酸橙花酯、乙酸香茅酯、乙酸香叶酯、乙酸苯甲酯、二十酸甲酯、梨醇酯、正十三烷、3-亚甲基-1,1-二甲基-α-乙烯基环己烷、盐酸羧甲氧基胺盐和环己烯巴比妥。
在利用该组合物制备的化妆品中，该化妆品的产品形式可以是粉底液、粉底霜、隔离霜、妆前乳、洁面乳、护肤乳、护肤乳液、遮瑕液和修颜霜中的一种或多种，但不限于此，优选为护肤乳。
具体的实施例中，可接受的其他成分选自润肤剂、成膜剂、乳化剂、保湿剂、稳定剂和溶剂中的一种或多种，其用量均为化妆品的常规用量。
在本申请实施例中，润肤剂选自乙氧基改性硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷、苯基聚三甲基硅氧烷、生育酚乙酸酯、季戊四醇四异硬脂酸酯、丁二醇二辛酸/二癸酸酯、异十二烷、二异硬脂醇苹果酸酯·辛基聚甲基硅氧烷、长链醇苯甲酸酯、油溶性羊毛脂、肉豆蔻酸豆酯、辛酸辛酯、油醇油酸酯、月硅酸已酯、棕榈酸异丙酯、PEG-6辛酸/癸酸甘油三酯、PEG-60玉米油甘油混合酯、PEG-7橄榄油酸酯、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯和异十三醇异壬酸酯中的一种或多种。但不限于此，本领域常用的润肤剂均可，本申请优选为PEG-6辛酸/癸酸甘油三酯、油溶性羊毛脂以及长链醇苯甲酸酯。
在本申请实施例中，成膜剂选自蛋白成膜剂、丙烯酸树脂成膜剂、聚乙烯类共聚物、各类烃的共聚物、有机硅聚合物和硅丙烯酸酯类中的一种或多种，但不限于此，本领域常用的成膜剂即可。本申请实施例优选的成膜剂为蛋白成膜剂，例如酪蛋白、岩藻多糖等。
在本申请实施例中，乳化剂选自选自PEG-12聚二甲基硅氧烷、PEG-12聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷、鲸蜡基聚PEG-10/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、山梨坦橄榄油酸酯和PEG-10/PPG-18/18聚二甲基硅氧烷中的一种或多种。但不限于此，本领域常用的乳化剂均可。
在本申请实施例中，所述保湿剂选自甘油、丁二醇、1,2-戊二醇、透明质酸钠和丙二醇中的一种或多种。
在本申请实施例中，所述稳定剂选自磷酸氢钠、硬脂酸钠和硬脂酸镁中的一种或多种。
在本申请实施例中，所述溶剂选自水或/和乙醇。但不限于此，本领域常用的溶剂均可，本申请优选为水和乙醇，水为去离子水、纯净水或蒸馏水等。
具体的，本申请实施例提供了一种护肤乳，按重量百分比计，包含0.02～3.2wt％花烟草提取物、0.001～8.5wt％玫瑰花提取物以及化妆品中可接受的其他成分。
优选的，该护肤乳包含1.8～3.0wt％花烟草提取物、3～7wt％玫瑰花提取物、0.01～2.3wt％酪蛋白磷酸肽(陕西绿莱生物科技有限公司)、3～8wt％PEG-12聚二甲基硅氧烷、8～15wt％丙二醇和0.1～0.5wt％硬脂酸镁，余量为水。
优选的，该护肤乳包含1.4～2.0wt％花烟草提取物、5～6.5wt％玫瑰花提取物、0.01～1.65wt％岩藻多糖(西安展迅，纯度98％)、5～9.5wt％山梨坦橄榄油酸酯、10～18wt％1,2-戊二醇和0.1～0.5wt％硬脂酸镁，余量为水。
对于本申请提供的护肤乳的配方，具体可见表3所示。
表3护肤乳配方
实施例2～7和对比例1～2的制备方法具体为：
1)将A相配方成分加热充分混合实现均质；
2)将B相成分溶解于水，得到水相溶液；
3)将A相和B相加入至均质乳化机中，充分均质后，经过微射流增压处理多次，过滤后，即可得到护肤乳。
对比例3的护肤乳的制备方法为：
1)称取50g大黄、50g黄柏洗净混合，水煎煮两次，合并煎煮液。乙醇沉淀48小时，抽滤留滤液，滤液减压浓缩，得浓缩液，200mL；
2)称取西黄蓍胶15g(含量99％，西安天正药用辅料有限公司)、丙酸辜丸酮1.0g和清鱼肝油500mL，混合作为油相；
3)另称取处方氢化可的松1.0g，盐酸丁卡因10.0g、蜂蜜250g、尼泊金0.8g，加入500mL蒸馏水，使各种成分溶解，作为水相。在强烈搅拌下，将水相浓液和中药液呈细流缓缓倒入油相溶液中进行乳化，乳化完全后即得护肤乳。
护肤乳性能表征
1、稳定性考察
将制备的纳米护肤乳液分别于4℃，25℃和60℃条件下放置30d，每Sd测定1次护肤乳液的平均粒径和Zeta电位值。
取适量的待测纳米护肤乳液用去离子水稀释1 000倍后，摇晃均匀，用英国Malvern公司ZS90型纳米粒度及Zeta电位分析仪，分别测定制备的纳米护肤乳液的平均粒径及Zeta电位。
2、结果
表4平均粒径(nm)
表5 Zeta(mV)
由表4列出了实施例2～7和对比例1～4提供的纳米护肤乳液分别于4℃、25℃和50℃环境下存储30天后的平均粒径，结果发现实施例2～7和对比例1～2提供的纳米护肤乳液在此三种温度环境下的平均粒径在30天内变化较小。而对比例3提供的纳米护肤乳液在存储至0～30天时，其平均粒径增大较多。而对比例4提供的纳米护肤乳液起始平均粒径就超过200nm，在50℃环境下基本能发生了沉聚，纳米构型破坏。
由表5列出了实施例2～7和对比例1～4提供的纳米护肤乳液分别于4℃、25℃和50℃环境下存储30天后的Zeta电位，结果发现实施例2～7和对比例1～2提供的纳米护肤乳液在此三种温度环境下的Zeta电位较低，而且在30天内的变化较小。而对比例3～4提供的纳米护肤乳液在存储至0～30天时，其Zeta电位增大较低，表面二者提供的护肤乳液纳米构型产生了严重的破坏，稳定性较差。
护肤乳的抗紫外辐射活性
本申请进一步通过细胞试验验证了各实施例和对比例提供的护肤乳具有抗紫外辐射活性，具体如下：
1、UVA辐射人表皮角质细胞损伤模型
将人表皮角质细胞Sciencell，货号：2110)分为6组:正常细胞对照组和5个UVA损伤组。用DMEM培养基将人表皮角质细胞培养至融合度70％～80％，置于96孔板中，每孔加入100μL细胞悬液，每组4个复孔，孵育24h后，各UVA损伤组进行紫外辐照处理，细胞距辐照光源15cm，辐照强度5.4W/m2，辐照时间分别为15、20、30、60和120min，继续培养24h后，采用MTT法进行检测。当UVA辐照时间在30min时，细胞死亡率处在半数死亡值左右，是建模的理想剂量。
2、体外抗UVA辐射实验
将细胞随机分为对照组、模型组和实验组。
将人表皮角质细胞接种至96孔细胞培养板中(6 000个/孔)，置于体积分数为5％的CO2培养箱中在37℃下培养24h；先将模型组和实验组按损伤模型结果接受UVA辐射，正常组不进行UVA辐射；然后实验组和对照组细胞液中分别加入系列质量浓度(5mg/L、1mg/L和0.1mg/L)的纳米护肤乳液，而模型组则加入相同量的DMEM培养基，孵育24h后，采用MTT法进行检测。
3、MTT法检测
在细胞培养板每孔加入20μL的质量浓度为5g/L的MTT溶液，继续培养4h后，弃去上清液，加入100μL/孔的DMSO避光振荡15min酶标仪检测光密度(OD)值，检测波长为570nm时的吸光值，计算细胞存活率。细胞存活率＝实验吸光值于/空白对照吸光值×100％。
5、数据处理
所有实验数据均以平均值和标准偏差表示，应用SPSS13.0软件处理数据，并进行多重比较和显著性差异标记。
6、结果
表6细胞存活率(％)
表6列出了本申请提供的护肤乳对人表皮角质细胞体外抗UVA辐射实验的结果。
由表6可知，模型组的人表皮角质细胞在照射紫外线后其细胞活性均有51.6％，表明造模成功。对照组的人表皮角质细胞在不同浓度的实施例2提供的护肤乳培养下，其细胞活性反而而增长趋势，表明本申请实施例提供的护肤乳可能具有促进人表皮角质细胞增殖的作用。
在实验组中，实施例2～7提供的护肤乳对紫外照射下的人表皮角质细胞的活性具有促进作用。而对比例1、2和4提供的护肤乳对紫外照射下的人表皮角质细胞的活性，而且对比例4提供的护肤乳甚至导致人表皮角质细胞的活性降低。对比例3提供的护肤乳虽然也具有对紫外照射下的人表皮角质细胞的活性具有促进作用，对抗紫外辐射作用，但是结合上述对其提供的护肤乳乳液稳定性分析发现，其稳定性较差，不具有实际的储存以及应用价值。
动物实验
1、实验动物
SPF级SD雌性大鼠(广东省医学实验动物中心)，包括自然衰老的老齿大鼠，体重(490±20)g；青龄大鼠，体重(170±20)g，温度(25±1)℃，相对湿度:70％。
2、供试品
实施例2～7和对比例1～4提供的护肤乳，市售修护乳霜(相宜本草)作为阳性对照。科玛脱毛膏，购自广州安婷化妆品有限公司。
3、实验分组以及实验
取自然衰老的SPF级SD雌性老龄大鼠，随机分成实验组、阳性对照组和模型组3组，每组10只；另取SPF级SD雌性青龄大鼠10只，作为正常对照组。
将各组大鼠置于同等环境下，用相同饲料喂养，于实验前24h用科玛脱毛膏给大鼠背部脱毛，脱毛面积为2.5cm×2.5cm。
观察皮肤无刺激反应后，在脱毛受试皮肤区分别进行如下操作：实验组涂抹实施例2～7和对比例1～4提供的护肤乳100mg；阳性对照组涂抹市售修护乳霜100mg；模型对照组不做处理。
在受试皮肤处轻轻按摩至药物安全吸收后，各组均用保鲜膜覆盖、胶布固定保护1小时。每日2次，连续30天，3个疗程。
4、第31天时，将所有大鼠颈椎脱臼处死，先用眼科小剪刀分别剪取每只大鼠脱毛处1cm2面积的受伤皮肤，除去粘连的脂肪后，在电子精密天平上各称取其受试皮肤100mg，再分别用2mL 6M HCL溶液进行消化，等完全消化后将消化液分别进行离心，然后取上清液作为检测样本。
5、透射电镜检测
经药物干预后的各组细胞，消化后，用预冷的PBS(pH7.4)洗1次，1500r/min离心5min，弃上清，加入1ml 2.5％戊二醛溶液，4℃固定24
h，逐级乙醇脱水，树脂包埋切片后透射电镜观察。
6、DNA总体甲基化水平检测
经药物干预后的各组样本，根据试剂盒说明书提取DNA，按说明书加样，确保每孔中液体在底部，放于37℃孵育60min后上洗板机冲洗3次，加5-me Detection ComplexSolution，室温孵育50min，加入DS，室温放置5min，当50％PC孔变成深蓝色时，终止反应，待颜色变化完全，
酶标仪450nm处读取OD值。
6、数据处理
所有实验数据均以平均值和标准偏差表示，应用SPSS13.0软件处理数据，并进行多重比较和显著性差异标记。
7、结果
如图1所示，正常组大鼠的皮肤成纤维细胞，细胞形态饱满，电子密度较为均匀，细胞核膜完整，可见核仁，胞浆丰富，细胞器结构完整，线粒体形态规则，体靖完整，基质丰富。如图2，模型组大鼠的细胞形态发生明显改变，细胞电子密度减低，细胞核膜、核仁不清楚，胞浆成分显著减少，胞浆中可见大量空泡形成，线粒体显著肿胀变形，形态不规则。如图3～5所示，实验组(实施例2～3)以及阳性对照组细胞，其细胞形态基本完整，电子密度不均匀，核膜仍完整，核仁可见，胞浆成分缩减，胞浆中结构清晰的细胞器数量减少；可见较多的双层或单侧闭合膜结构，内吞有线粒体或其他细胞器的胞浆成分，提示自噬体形成。如图6～9所示，而实验组(对比例1～4)的大鼠细胞形态明显发生盖板，电子密度降低，细胞核膜、核仁不清楚，胞浆减少，细胞损伤严重，尤其是对比例4，由此说明对比例1～4提供的护肤液不能对模型组大鼠皮肤细胞起到抗衰老作用。
表7OD450
/>
由表7可知，与正常组相比，模型组DNA总体甲基化水平明显下降，而阳性对照组DNA总体甲基化水平均有所升高。实验组中，实施例2～7提供的护肤乳对模型鼠干预后，其DNA总体甲基化水有显著提升，而对比例1～4并未显著促进作用。
由上述结果可见，与模型组相比，大中剂量组人皮肤成纤维细胞内细胞器尤其是线粒体的破坏明显减轻，细胞形态也有明显地改善。细胞DNA总体甲基化水平明显下降，细胞超微结构出现线粒体肿胀、细胞核膜内折等显著衰老改变。而本申请实施例提供的护肤乳干预衰老大鼠后，其DNA甲基化水平较高，提示本申请实施例提供的护护乳具有对抗大鼠衰老进程的作用，起到护肤养颜功效，而且对大鼠皮肤细胞器尤其是线粒体的破坏减轻，细胞形态也有所改善。
综上所述，本申请实施例利用花烟草提取物和玫瑰花提取物组成的组合物制得得到一种护肤乳，其相对于一般不具有该组合物的护肤乳液而言，不仅对皮肤组织具有防辐射的功效，还能起到活血养颜，抗衰老作用，具有广泛的应用前景。
以上所述，仅为本申请较佳的具体实施方式，但本申请的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本申请的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种化妆品，其特征在于，包含组合物，所述组合物包括花烟草花瓣提取物和玫瑰花提取物；以所述化妆品的总重量计，花烟草花瓣提取物占0.001~3.5wt%，玫瑰花提取物占比为0.001~15wt%；
所述花烟草花瓣提取物采用混合试剂进行提取得到，所述混合试剂为水、丙酮、甲醇、甲酸、三氟乙酸和乙酸乙酯的混合溶液，其配方体积比为65:65:80:2:1:1。
2.根据权利要求1所述的化妆品，其特征在于，所述花烟草花瓣提取物含有花青苷、原花青素A1、原花青素C、3-羟基黄酮、查耳酮、橙酮、异鼠李素-3,7-o-二葡萄糖苷、异鼠李素-3-o-葡萄糖苷、山奈酚-7-o-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-o-芸香糖苷、槲皮素3,4'-二葡萄糖苷和槲皮素3-o-(6''-没食子酰基)-β-D-葡萄糖苷。
3.根据权利要求1所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品的产品形式是粉底液、粉底霜、隔离霜、妆前乳、洁面乳、护肤乳、遮瑕液和修颜霜中的一种。
4.权利要求1~3任一项所述的化妆品在制备皮肤防辐射制剂以及制备皮肤活血养颜制剂的应用。
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