CN115212157B - 美白祛斑抗衰老的天然植萃复配草本原料制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种美白祛斑抗衰老的天然植萃复配草本原料制备方法及其应用，具体涉及一种组合物，该组合物包括：红花酢浆草提取物、狭叶香蒲提取物和紫荆花提取物。本申请利用此三种天然草本植物提取物制备得到了一种美白膏，经过动物实验证明该美白膏能够改善光致豚鼠皮肤色素沉积，并且经过对比发现正是由于该美白膏中添加了本申请实施例提供的组合物，由此证明本申请是实施例提供的组合物或者美白膏能够改善皮肤组织的色素沉积，为皮肤美白提供帮助。

Description

美白祛斑抗衰老的天然植萃复配草本原料制备方法及其应用

技术领域

本申请涉及抗衰老美白化妆品技术领域，尤其涉及一种美白祛斑抗衰老的天然植萃复配草本原料制备方法及其应用。

背景技术

合成来源美白剂、生物发酵以及动植物提取的美白剂是应用于美白化妆品中主来源。随着化妆品公司对美白产品开发的关注，如今己有很多可用于减少皮肤色素沉着的原料被开发，有以抑制酪氨酸酶活性的曲酸及熊果苷，曲酸的美白效果迅速，但稳定性及皮肤吸收性较差，安全性受到质疑。而熊果苷能够减缓黑色素的合成，加速皮肤组织新陈代谢，促进了黑色素的分解，其安全高效，但稳定性差，具有一定的光敏性。

有不同种类的植物或中草药提取物，如动物胎盘提取物，甘草提取物及内皮素拮抗剂等可以作为美白剂。植物提取物，例如烟酞胺和大豆等具有有抑制黑色素的黑色素细胞转移而达到美白作用；如视黄酸具有清除角质层，加快皮肤代谢而清除过多黑色素的物质的作用。

现如今，化妆品行业迅速发展，人们对天然美白中草药的呼声己成为化妆品行业的潮流，采用代中草药作为现代美白活性剂，充分开发中药材丰富资源，为推进中药美白剂的发展成为一种现实需求。

发明内容

有鉴于此，本申请的目的在于提供一种化妆品，能够抵抗衰老，同时抵抗紫外线，减少色素沉积，以起到美白作用。

第一方面，本申请实施例公开了一种组合物，包括：羟乙基纤维素、红花酢浆草提取物、狭叶香蒲提取物和紫荆花提取物；其中，所述红花酢浆草提取物由红花酢浆草地下鳞茎提取得到，所述狭叶香蒲提取物由狭叶香蒲花粉提取得到，所述紫荆花提取物是由所述紫荆花粉提取得到。

在本申请实施例中，所述红花酢浆草提取物包含18.9～28.1mg/g花生五烯酸、77.7～108.5mg/g棕榈酸、128.7～197.9mg/g儿茶素、51.5～75.7mg/g表儿茶素、50.1～84.7mg/gα-菠甾醇和29.9～38.3mg/g1-正庚基-1-环己烯。

在本申请实施例中，所述红花酢浆草提取物采用如下步骤制得：

获得红花酢浆草的根茎粗粉，浸泡，浓缩，得到浸膏；

萃取所述浸膏，采用所述浸膏2倍重量的去离子水中，3倍重量的三丁甲基乙醚、3倍重量的2-丁醇和4倍重量的乙酸乙酯进行萃取，以得到所述红花酢浆草提取物。

在本申请实施例中，所述狭叶香蒲提取物包含60000～90000Da的活性多糖，该多糖按单糖单元计包含，29.5～35.5mg/g糖醛酸、137.0～169.8mg/g鼠李糖、68.8～88.2mg/g阿拉伯糖、122.1～176.3mg/g岩藻糖、108.2～137.2mg/g木糖、135.9～148.5mg/g甘露糖、114.3～128.7mg/g葡萄糖和57.6～69.2mg/g半乳糖。

第二方面，本申请实施例公开了一种抗衰老美白化妆品，包括第一方面所述的组合物，以及用于化妆品中可接受的其他成分。

在本申请实施例中，所述化妆品中可接受的其他成分选自润肤剂、肤感调节剂、乳化剂、保湿剂、稳定剂和溶剂中的一种或多种。

在本申请实施例中，以所述化妆品的总重量计，所述红花酢浆草提取物占12～34.5wt％，所述狭叶香蒲提取物占8～26.5wt％，所述紫荆花提取物占5.5～18.5wt％。

第三方面，本申请实施例公开了一种第二方面所述的化妆品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

得到由B相混入A相中的粉浆，所述A相包括润肤剂、乳化剂和肤感调节剂，所述B相包括红花酢浆草提取物和狭叶香蒲提取物；

获得溶解的D相，所述D相包括溶剂、保湿剂和稳定剂；以及

将所述D相分次与所述粉浆混合至乳化，然后继续加入C相和E相混合，制得化妆品；

其中，所述C相包括紫荆花提取物，所述E相包括防腐剂和溶剂。

第四方面，本申请实施例公开了第一方面所述的组合物在抗筛美白用化妆品中的应用，所述化妆品包括粉底液、粉底霜、BB霜、妆前乳、防晒霜、遮瑕液、美白膏和修颜霜中的一种或多种。

与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：

本申请公开了一种能够作为美白膏配方的组合物，该组合物包括红花酢浆草提取物、狭叶香蒲提取物和紫荆花提取物。本申请利用此三种天然草本植物提取物制备得到了一种美白膏，经过动物实验证明该美白膏能够改善光致豚鼠皮肤色素沉积，并且经过对比发现正是由于该美白膏中添加了本申请实施例提供的组合物，由此证明本申请是实施例提供的组合物或者美白膏能够改善皮肤组织的色素沉积，为皮肤美白提供帮助。

本申请还进一步经过对该美白膏的稳定性、安全性和美白效果进行评价，结果均显示本申请提供的美白膏具有较高的稳定性，对皮肤组织无刺激作用，而且具有显著的美白效果，能够作为一款实际应用的美白膏产品进行广泛推广。

附图说明

图1为本申请动物实验提供的正常豚鼠皮肤组织切片的染色图。

图2为本申请动物实验提供的模型豚鼠皮肤组织切片的染色图。

图3为本申请动物实验提供的实验组(实施例3)豚鼠皮肤组织切片的染色图。

具体实施方式

为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。

红花酢浆草提取物

红花酢浆草(Oxalis Corymbosa DC)系垅牛儿苗目(Geraniales)酢浆草科(Oxalidaceae)酢浆草属(Oxalis)植物。红花酢浆草为多年生直立草本，无地上茎，地下部分有球状鳞茎；叶基生，叶柄长5～30cm或更长，叶呈倒心形，三叶复出；花呈淡紫色。酢浆草系苗族习用药材，据《新修本草》记载酢浆草味酸寒，无毒，有主治恶疮的作用。蔓生酢浆草全草可入药，性寒、味酸、归肝、小肠经。具有清热解毒、平肝定惊、消炎止痛、利湿消肿、凉血散疲的作用。现对于蔓生酢浆草药理作用的报道较多，但红花酢浆草主要作物景观园林植物进行研究，几乎无对其药理或者药妆机理进行研究。

本申请发明人经过长期研究发现，红花酢浆草具有作为抗衰老和美白化妆品原料的应用前景。因而，本申请发明人对其活性成分进行了提取，具体过程如下：

一、材料与方法

1、红花酢浆草的根茎粗粉

将采集来自于广西山林中的的红花酢浆草的根茎3.5kg，洗净，分别阴干，粉碎，制得粗粉。

2、浸泡

将粗粉分散于95％乙醇中浸泡7天，浸泡期间按时搅拌以便充分浸泡，对浸泡液进行过滤，得到浸出液；

3、浓缩

对浸出液进行浓缩，得到浸膏，可将上述浸泡后过滤后的粗粉进行浸泡处理多次，并合并每次的浸出液进行浓缩，以充分提取粗粉中的活性物。

4、萃取

一个具体的实施例1过程如：将浸膏混入2倍重量的去离子水中，可充分搅拌，分别加入3倍重量的三丁甲基乙醚、3倍重量的2-丁醇、4倍重量的乙酸乙酯充分搅拌30min后，静置，取2-丁醇相和乙酸乙酯相，混合旋干，即得到红花酢浆草提取物。

作为一个对比例1，其采用石油醚、正丙醇和乙酸乙酯作为萃取剂，采用上述相同的方法进行萃取，制得红花酢浆草提取物。

5、提取物检测

本申请采用气相色谱检测上述制得的红花酢浆草提取物中活性成分，该气相色谱条件具体为：DB WAX色谱柱(安捷伦，30.0m，0.18mm，膜厚0.14μm)；FID检测器温度250℃；进样口温度250℃；色谱柱升温程序：120℃保持1min，以15℃/min幅度升至210℃，保持4min，以3℃/min幅度升至240℃，保持10min；载气：N₂，分流比100:1；载气流速为30mL/min，样品溶液和混合脂肪酸甲酯标准溶液进样5μL。标准品为：花生五烯酸(Sigma)、棕榈酸(Sigma)、儿茶素(Sigma)、表儿茶素(Sigma)、α-菠甾醇(成都普瑞法科技开发有限公司)和1-正庚基-1-环己烯(Sigma)。

二、结果

表1红花酢浆草提取物活性成分含量(mg/g)

活性成分	实施例1	对比例1
			花生五烯酸	23.5±4.6	95.2±7.2
棕榈酸	93.1±15.4	135.4±13.2
			儿茶素	163.3±34.6	212.3±52.1
表儿茶素	63.6±12.1	174.6±16.4
			α-菠甾醇	67.4±17.3	24.2±4.8
1-正庚基-1-环己烯	34.1±4.2	6.5±0.6

由表1可知，采用上述方法，本申请实施例制得的红花酢浆草提取物中含有花生五烯酸、棕榈酸、儿茶素、表儿茶素、α-菠甾醇和1-正庚基-1-环己烯，并且实施例1和对比例1分别采用了不同的萃取溶剂，分别得到的花酢浆草提取物中活性成分有显著差异。

狭叶香蒲提取物

狭叶香蒲俗称蒲菜、蒲笋、水烛香蒲，学名Z勿}ha angustifolia，属被子植物门，单子叶植物纲，露兜树目，香蒲科，香蒲属，是多年生、水生或沼生草本植物。

狭叶香蒲的全草、蒲棒和花粉己有诸多开发利用。香蒲属植物的花粉又称蒲黄，是一种重要的活血化瘀类中药。从东汉时期的《神农本草经》开始，蒲黄活血化疲的功效被逐渐揭示并炮制入药，其用于医药行业己经有几千年的历史，近现代临床研究还显示蒲黄在治疗冠心病、动脉粥样硬化、糖尿病及高脂血症等疾病方面也发挥着重要的作用。蒲黄中的有效成分为黄酮类，包括袖皮素、异鼠李素、泡桐素、榭皮素、香蒲新苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷等。

本申请利用狭叶香蒲的花粉，进行提取，得其提取物，经检测其中主要成分为多糖类物质，可以作为一种化妆品的草本原料。

一、材料与方法

1、提取过程

(1)取1000g新鲜狭叶香蒲花粉，加入蒸馏水，70℃热水浴提取，放冷后纱布过滤，提取液浓缩后加入乙醇溶液至终浓度为80％，静置过夜后离心，沉淀依次用95％乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤4～5遍，干燥即可粗品335g；

(2)将粗品溶解于2M SDS溶液2500mL中，搅拌处理20min后，于2770g常温离心30min，收集上清液(524mL)用旋转蒸发仪45℃减压旋蒸，得到浓缩液117mL；

(3)将浓缩液置于-20℃冷冻5h，迅速转至45℃水浴解冻30min，将溶液于2770g常温离心30min，收集上清液，45℃旋干浓缩，冷冻干燥即可得到狭叶香蒲提取物。

本申请采用上述提取过程得到实施例2提供的狭叶香蒲提取物。另外，本申请还采用下述方法得到对比例2提供的狭叶香蒲提取物。

对比例2的提取过程为：

取1000g新鲜狭叶香蒲花粉，加入蒸馏水，70℃热水浴提取，放冷后纱布过滤，提取液浓缩后加入乙醇溶液至终浓度为80％，静置过夜后离心，沉淀依次用95％乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤4～5遍，预冻后于-48℃冷冻干燥即得狭叶香蒲提取物。

2、狭叶香蒲提取物的多糖含量

采用硫酸苯酚法测定实施例2和对比例2提供的狭叶香蒲提取物的总糖含量。

3、狭叶香蒲提取物的理化性质

参照“New method for quantitative determination of uronic acids[J].Analytical Biochemistry,1973,54(2):484-489.”方法实施例2和对比例2提供的糖醛酸的含量。

本申请采用高效凝胶渗透色谱测定其分子量，采用气相色谱法测定其单糖组成。狭叶香蒲提取物采用“Structural characterization,sulfation and antitumoractivity of a polysaccharide fraction from Cycling sinensis[J].CarbohydratePolymers,2015,115:200-206.”报道的方法进行其单糖组成，将水解后的单糖和各标准单糖分别进行糖睛乙酸脂衍生化，再进气相色谱仪检测。

二、结果

表2狭叶香蒲提取物活性成分以及组成

活性成分	实施例2	对比例2
			总糖含量(mg/g)	886.2±72.7	895.2±7.2
糖醛酸含量(mg/g)	32.6±2.9	16.5±1.4
			鼠李糖(mg/g)	153.4±16.4	212.3±52.1
阿拉伯糖(mg/g)	78.5±9.7	174.6±16.4
			岩藻糖(mg/g)	149.2±27.1	24.2±4.8
木糖(mg/g)	122.7±14.5	6.5±0.6
			甘露糖(mg/g)	142.2±6.3	16.4±0.8
葡萄糖(mg/g)	121.5±7.2	239.4±27.4
			半乳糖(mg/g)	63.4±5.8	185.7±17.3
分子量分布范围	60000～90000Da	80000～250000Da

由表2可知，实施例2和对比例2制得的狭叶香蒲提取物中总糖含量相差不大，但是二者在单糖组成和分子量上具有较大差异。

紫荆花提取物

紫荆(Cercis chinensis Bunge)是豆科紫荆属植物。紫荆花具有清热凉血、去风解毒的功效，其色素含量较高，但一般都作为废弃物丢掉。利用微波技术提取天然产物，具有速度快，能耗低，溶剂用量少等特点。

本申请采用下述方法对紫荆花进行提取，一个具体的提取过程为：

取紫荆花瓣晒干，并研磨成干粉。取5.0g紫荆花花粉，加人无水乙醇100mL在70℃下用蛇形冷凝管进行冷凝回流提取1小时，停止加热，抽滤，得滤液，旋蒸，得到油状物即为紫荆花提取物。

组合物以及化妆品

本申请发明人发现利用上述制得的红花酢浆草提取物、狭叶香蒲提取物和紫荆花提取物，将其制作一种组合物，该组合物包括红花酢浆草提取物、狭叶香蒲提取物和紫荆花提取物；其中，所述红花酢浆草提取物由其地下鳞茎提取得到，所述狭叶香蒲提取物由狭叶香蒲花粉提取得到，所述紫荆花提取物是由所述紫荆花粉提取得到。将该组合物应用于化妆品中，能够抵抗衰老，同时抵抗紫外线，减少色素沉积，以起到美白作用。

在利用该组合物制备的化妆品中，该化妆品的产品形式可以是粉底液、粉底霜、BB霜、妆前乳、防晒霜、遮瑕液、美白膏和修颜霜中的一种或多种，但不限于此，优选为美白膏。

具体的，该抗衰老美白化妆品不仅包括上述的组合物，还包括于化妆品中可接受的其他成分。可接受的其他成分选自润肤剂、肤感调节剂、乳化剂、保湿剂、稳定剂和溶剂中的一种或多种，其用量均为化妆品的常规用量。

在本申请实施例中，润肤剂选自环五聚二甲基硅氧烷、苯基聚三甲基硅氧烷、生育酚乙酸酯、季戊四醇四异硬脂酸酯、丁二醇二辛酸/二癸酸酯、异十二烷、二异硬脂醇苹果酸酯·辛基聚甲基硅氧烷、长链醇苯甲酸酯、油溶性羊毛脂、肉豆范酸异丙酯、甘油三辛酸酯、甘油三癸酸酯和异十三醇异壬酸酯中的一种或多种。但不限于此，本领域常用的润肤剂均可，本申请优选为环五聚二甲基硅氧烷、苯基聚三甲基硅氧烷、生育酚乙酸酯、季戊四醇四异硬脂酸酯以及丁二醇二辛酸/二癸酸酯。

在本申请实施例中，所述肤感调节剂选自聚二甲基硅氧烷/聚甘油-3交联聚合物、聚二甲基硅氧烷交联聚合物、聚甲基硅倍半氧烷、三甲基硅烷氧基硅酸酯和丙烯酸(酯)类/聚二甲基硅氧烷共聚物中的一种或多种。

在本申请实施例中，所述乳化剂选自PEG-12聚二甲基硅氧烷、PEG-12聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷、鲸蜡基聚PEG-10/PPG-10/1聚二甲基硅氧烷、山梨坦橄榄油酸酯和PEG-10/PPG-18/18聚二甲基硅氧烷中的一种或多种。但不限于此，本领域常用的乳化剂均可。

在本申请实施例中，所述保湿剂选自甘油、丁二醇、1,2-戊二醇、透明质酸钠和丙二醇中的一种或多种。

在本申请实施例中，所述稳定剂选自氯化钠、EDTA-2Na、硬脂酸镁和硫酸镁中的一种或多种。

在本申请实施例中，所述溶剂选自水或/和乙醇。但不限于此，本领域常用的溶剂均可，本申请优选为水和乙醇，水为去离子水、纯净水或蒸馏水等。

本申请实施例提供的化妆品，以化妆品的总重量计，其中，红花酢浆草提取物占12～34.5wt％，狭叶香蒲提取物占8～26.5wt％，紫荆花提取物占5.5～18.5wt％。本申请中，术语“wt％”表示质量百分比。

优选的本申请实施例中，以化妆品的总重量计，其中，红花酢浆草提取物占18～30wt％，狭叶香蒲提取物占15～26.5wt％，紫荆花提取物占12～16wt％。

更优选的本申请实施例中，以化妆品的总重量计，其中，红花酢浆草提取物占25～30wt％，狭叶香蒲提取物占22～26.5wt％，紫荆花提取物占12～14wt％。

具体的，本申请提供的美白膏配方结果如表3所示。表3中，红花酢浆草提取物简称为“T1”，狭叶香蒲提取物简称为“T2”，紫荆花提取物简称为“T3”。表3中，每相中的组分含量为其占美白膏总重重量百分比。

表3美白膏配方

基于此，本申请进一步公开了一种美白膏的制备方法，包括以下步骤：

(1)得到均质的A相、B相、C相和D相，其中，所述A相包括润肤剂、乳化剂和肤感调节剂，所述B相包括红花酢浆草提取物、保湿剂、稳定剂和溶剂，所述C相包括狭叶香蒲提取物和紫荆花提取物，所述D相包括溶剂；

(2)将所述B相分次与所述A相混合至乳化，然后继续加入C相和D相混合，制得化妆品。

在上述步骤中，A相和B相可分别将其中含有的组分混合后加入至80℃，实现充分均质，保温备用。

在上述步骤中，B相边搅拌边将A相缓慢倒入，搅拌均匀后立即均质3～5min，加入C相，缓慢搅拌降温；待温度降至45℃时，再缓慢加入D相，充分搅拌降温至常温。

动物实验

一、材料与方法

1、实验动物

购自西安迪乐普生物医学有限公司的4只健康雄性白色豚鼠，2月龄，平均体重250g左右。

2、建立色素沉着模型豚鼠

在上述的健康豚鼠背部剔除形成一个4.5cm×4.5cm的无毛区，采用UVB紫外灯灯管(南京华强公司)的光谱值为280～320nm于无毛区15cm处对无毛区进行照射处理，一次性照射剂量为500mJ/cm²。

3、外用药物

将建立的模型豚鼠分别为模型组和实验组，对建立的模型豚鼠无毛区进行用药处理，每日涂抹供试品0.1g，连续涂抹1个月。其中，供试品为上述实施例3～8和对比例3～7分别提供的化妆品。

4、无毛区皮肤颜色测定

分别在UVB照射前、照射后1周、用药后1周、2周和3周时用CR-300测量仪(宝洁公司提供)测量豚鼠背部皮肤各部分的颜色变化，采用三色刺激比色计的方法，即L×a×b值来衡量豚鼠皮肤颜色的变化。L值(lumination)代表亮度，其值在0～100之间，0表示黑色，100表示白色；a表示红色至绿色之间的颜色饱和度，变化值在+60～-60之间，正值表示红色饱和度，负值表示绿色饱和度；b表示黄色至蓝色之间的颜色饱和度，变化值在+60～-60之间，正值表示黄色饱和度，负值表示蓝色饱和度。

5、无毛区的组织切片以及免疫组化实验

分别于治疗前、治疗后1月取其背部皮肤，常规石蜡包埋，制作切片，后行HMB45免疫组化染色观察其光镜下大体变化。

6、无毛区模型豚鼠皮肤组织黑色素水平检测

黑素含量指数(MCI)：使用多媒体彩色病理图文分析系统，用Schmorl法染色切片进行MCI计算。MCI-1表示基底层和棘细胞层内黑素颗粒面积占该处表皮基底层和棘细胞层总面积的百分比平均值。MCI-2表示基底层细胞黑素颗粒面积占该细胞总面积的百分比平均值。

二、结果

如图1、2，豚鼠背部无毛区皮肤照射UVB(总量500mJ/cm²)后，1天后照射部位出现红斑，4天左右红斑开始消退，7天后出现色素沉着，15天左右色素沉着稳定，表明造模成功。而图3中，豚鼠无毛区的色素沉着较少。

表4

由表2可知，对豚鼠无毛区皮肤L值测定发现，模型组相对正常组值显著降低，说明豚鼠无毛区产生了色素沉积，造模成功。而在实验组中，对造模成功的豚鼠无毛区涂抹本申请实施例3～8提供的美白膏后，豚鼠无毛区皮肤L值有显著升高，并且显著高于对比例4～7，而对比例3与模型组无显著差异，表明本申请实施例3～8提供的美白膏能够改善紫外光致豚鼠皮肤色素沉积。

进一步的，本申请还对色素沉积豚鼠皮肤涂抹治疗后的皮肤组织中MCI-1和MCI-2进行分析，结果发现，模型组相对于正常组MCI-1和MCI-2值均显著升高，表明造模成功。而在实验组中，对造模成功的豚鼠无毛区涂抹本申请实施例3～8提供的美白膏后，豚鼠无毛区皮肤MCI-1和MCI-2值均显著降低，并且显著低于对比例4～7，而对比例3与模型组无显著差异，说明本申请实施例3～8提供的美白膏能够改善豚鼠皮肤组织中黑素颗粒在基底层和棘细胞层中的沉积，改善由紫外皮肤致黑趋势。

稳定性、安全性和美白效果评价

1、美白膏的稳定性实验

根据化妆品国标GB/T 29665-2013，对实施例3～8和对比例3～7提供的美白膏添加不同用量的川芍活性物的美白膏进行耐寒、耐热及离心的稳定性研究。

表5稳定性

表5中，“+”表示美白膏出现分层或者絮状物等非均质现象，“－”表示美白膏并未出现非均质现象。由表5可知，实施例3～8和对比例6、7分别提供的美白膏在24h、1个月和3个月均有较好的稳定性，而对比例3～5稳定性欠佳。

2、美白膏的安全性实验

化妆品中砷、汞、铅是必检物质，采用原子吸收光度计测定化妆品川芍膏中的重金属含量。

1)测定汞的样品处理方法：准确称取混匀试样约1.00g，置于250mL圆底烧瓶中。随同试样做试剂空白。加入硝酸30mL、水5mL、硫酸5mL及数粒玻璃珠。置于电炉上，接上球形冷凝管，通冷凝水循环。加热回流消解2h。消解液一般呈微黄色或黄色。从冷凝管上口注入水10mL，继续加热10mim，放置冷却。用预先用水湿润的滤纸过滤消解液，除去固形物。用蒸馏水洗滤纸数次，合并洗涤液于滤液中。加入盐酸经胺溶液1.0mL，用水定容至50mL，备用。

2)测定砷的样品处理方法：准确称取混匀试样约100g同时作试剂空白。加数粒玻璃珠，加入硝酸10mL～20mL，置于125mL锥形瓶中放置片刻后，缓缓加热，反应开始后移去热源，稍冷后加入硫酸2mL。继续加热消解，放置冷却后加水20mL继续加热煮沸至产生白烟，将消解液定量转移至50mL具塞比色管中，加入碘化钾一抗坏血酸溶液5mL，加水定容至刻度，放置10min后测定。

3)测定铅的样品处理方法：准确称取混匀试样约1.00g置于消解管中，同时做试剂空白。预先在水浴中加热使瓶壁上样品融化流入瓶的底部，加入数粒玻璃珠，然后加入硝酸10mL，由低温至高温加热消解，当消解液体积减少到2mL～3mL，移去热源，冷却。加入高氯酸2mL～3mL，继续加热消解，不时缓缓摇动使均匀，消解至冒白烟，消解液呈淡黄色或无色，浓缩消解液至1mL左右，冷至室温后定量转移至10mL具塞比色管中，以水定容至刻度，备用。

表6

实施方式	As(μg/kg)	Hg(μg/kg)	Pb(μg/kg)
				实施例3	1.62±0.23	1.69±0.15	0.89±0.12
实施例4	1.54±0.37	1.62±0.22	0.67±0.15
				实施例5	1.69±0.11	1.74±0.18	0.83±0.09
实施例6	1.58±0.30	1.72±0.32	0.49±0.06
				实施例7	1.60±0.15	1.96±0.28	0.67±0.07
实施例8	1.57±0.24	1.84±0.17	0.72±0.06
				对比例3	1.24±0.46	1.93±0.05	0.89±0.10
对比例4	3.87±0.41	1.78±0.14	0.97±0.05
				对比例5	4.49±0.15	1.88±0.08	0.94±0.07
对比例6	1.96±0.08	1.84±0.23	0.96±0.09
				对比例7	1.74±0.32	1.86±0.18	0.93±0.07

根据化妆品卫生学规范，汞的限量为1ppm，砷的限量为40ppm，铅的限量为10ppm，由表6中样品的重金属含量可知，各实施例和对比例提供的重金属含量均符合化妆品卫生学，安全可靠。

3、美白膏的皮肤刺激性实验

通过皮肤刺激实验，确定其安全用量范围。皮肤刺激性是指皮肤接触受试物后产生的不可逆行炎性症状。操作步骤如下:

选动物为五指山小型猪(WZSP)近交系，购自中国农科院畜牧研究所。小型猪50名，在小型猪的健康无破损的肚皮上任取9个区，标记测试区域5cm×5cm，其中1个区作为对比，其他各区分别涂抹0.1～2mg/cm²的样品，样品分别为实施例3～8和对比例3～7提供的美白膏。然后用一层油纸覆盖，再用医用胶布和绷带加以固定，敷贴4h。实验结束后用温水除去残留的样品。

于除去样品后的1、24和48h观察涂抹部位皮肤反应，每位小型猪按表6进行皮肤刺激反应评分，其积分均值按表6进行皮肤刺激强度评价。

表6皮肤刺激性反应评分标准

刺激反应情况	分值	刺激反应情况	分值
				无红斑	0	无水肿	0
红斑勉强可见	1	水肿勉强可见	1
				红斑明显可见	2	水肿可见，边缘略高出周围皮肤	2
中度至严重红斑	3	皮肤隆起约lcm，轮廓清楚	3
				紫红班并有焦痂形成	4	紫红色红斑并有焦痴形成	4
红斑反应最高分	8	水肿反应最高总分	8

每组试验的得分为红斑和水肿评分总分与受试动物的平均分值。平均分值处于0～0.49则为无刺激性，处于0.5～2.99之间，则为轻度刺激性，处于3.0～5.99之间，则为中度刺激性，处于6.0～8.0之间，则为强度刺激性。

表7皮肤刺激性评分

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根据表7的皮肤刺激性评分，实施例3～8和对比例3～7提供的美白膏均无明显的小型猪的皮肤刺激性。

4、美白膏的美白效果试验

采用非创伤性在体实验法测定小型猪皮肤的黑色素和血红素含量，以评价实施例3～8和对比例3～7分别提供的美白膏的美白效果。

1)皮肤黑色素和血红素测定原理

黑色素和血红素仪主要是通过仪器上面的探头发挥作用，该探头是由光源发射器和接收器组成，基于光谱吸收的原理，发射器发射特定波长的光照到皮肤上，其波长分别为568nm、660nm和880nm，通过接收器测定皮肤的反射量来确定皮肤的黑色素和血红素含量。由于发射光的量是一定的，因此可以测出被皮肤吸收的光的量，而测出皮肤黑色素和血红素的量。

测试时，将探头垂直压在小型猪的皮肤表面，探头中有一个保证每次测试时压力恒定的弹簧，每次测完后，皮肤黑色素和血红素的值就在显示屏上显示出来。探头的测量范围为0～999，显示的数值越高，说明黑色素和血红素的含量越高。

2)测试步骤与要求

测试环境条件：湿度45±1％，温度18℃。

测试步骤：测试前小型猪需清洁测试部位(也即涂抹美白膏的部位)，需在测试条件下稳定30min，30min内不得饮水、进食或剧烈运动。

在小型猪肚皮内侧标记测试区域(5cm×5cm)，样品用量(1.0±0.1)mg/cm²，均匀涂抹于受试区，一天涂抹两次，早晚各一次，分别测定小型猪使用前和连续使用14天后皮肤中的黑色素和血红素含量，记录数据，计算均值。

3)数据处理

采用SPSS17.0数据统计系统分别对涂抹的实施例3～8和对比例3～7对应的小型猪肚皮皮肤组织中黑色素含量和血红素含量的数据进行处理，对各组之间的数据进行多重比较，并进行显著性差异标记，结果如表8所示。

表8美白效果

实施方式	黑色素含量	血红素含量
			实施例3	176.12±15.52b	197.83±21.68c
实施例4	172.29±17.43b	191.86±16.82c
			实施例5	176.46±21.05br	201.34±18.42c
实施例6	168.72±13.24c	199.65±24.23c
			实施例7	163.82±16.91c	194.54±19.86c
实施例8	164.54±20.05c	197.36±15.78c
			对比例3	203.12±16.54a	234.23±22.56a
对比例4	204.86±26.40a	232.36±19.35a
			对比例5	199.64±18.43a	233.69±15.34a
对比例6	197.82±19.05a	229.81±17.93b
			对比例7	194.27±12.62a	227.64±16.57b
使用前	196.31±23.14a	231.02±32.02a

如表8可知，相对于使用前，实施例3～8提供的美白膏涂抹小型猪肚皮修复后，小型猪肚皮上黑色素和血红色含量均显著降低，而对比例3～7无显著变化，说明本申请实施例提供的美白膏具有美白效果。

以上所述，仅为本申请较佳的具体实施方式，但本申请的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本申请的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种抗衰老美白化妆品，其特征在于，包括红花酢浆草提取物、狭叶香蒲提取物和紫荆花提取物的组合物，以及用于化妆品中可接受的其他成分；其中，所述红花酢浆草提取物由红花酢浆草地下鳞茎提取得到，所述狭叶香蒲提取物由狭叶香蒲花粉提取得到，所述紫荆花提取物是由所述紫荆花粉提取得到；

所述红花酢浆草提取物包含18.9~28.1mg/g花生五烯酸、77.7~108.5mg/g棕榈酸、128.7~197.9mg/g儿茶素、51.5~75.7mg/g表儿茶素、50.1~84.7mg/g α-菠甾醇和29.9~38.3mg/g1-正庚基-1-环己烯；

所述狭叶香蒲提取物包含60000~90000Da的活性多糖，该多糖按单糖单元计包含，29.5~35.5mg/g糖醛酸、137.0~169.8mg/g鼠李糖、68.8~88.2mg/g阿拉伯糖、122.1~176.3mg/g岩藻糖、108.2~137.2mg/g木糖、135.9~148.5mg/g甘露糖、114.3~128.7mg/g葡萄糖和57.6~69.2mg/g半乳糖；

所述红花酢浆草提取物采用如下步骤制得：

获得红花酢浆草的根茎粗粉，浸泡，浓缩，得到浸膏；

萃取所述浸膏，采用所述浸膏2倍重量的去离子水，3倍重量的三丁甲基乙醚、3倍重量的2-丁醇和4倍重量的乙酸乙酯进行萃取，以得到所述红花酢浆草提取物；

所述狭叶香蒲提取物采用如下步骤值得：

取1000g新鲜狭叶香蒲花粉，加入蒸馏水，70℃热水浴提取，放冷后纱布过滤，提取液浓缩后加入乙醇溶液至终浓度为80％，静置过夜后离心，沉淀依次用95％乙醇、无水乙醇、丙酮洗涤4~5遍，干燥即可粗品335g；

将335g粗品溶解于2M SDS溶液中，搅拌后，于2770g常温离心30min，收集上清液524mL用旋转蒸发仪45℃减压旋蒸，得到浓缩液117mL；

将117mL浓缩液置于-20℃冷冻5h，迅速转至45℃水浴解冻30min，将溶液于2770g常温离心30min，收集上清液，45℃旋干浓缩，冷冻干燥即可得到狭叶香蒲提取物。

2.根据权利要求1所述的化妆品，其特征在于，所述化妆品中可接受的其他成分包括润肤剂、肤感调节剂、乳化剂、保湿剂、稳定剂和溶剂。

3.根据权利要求2所述的化妆品，其特征在于，以所述化妆品的总重量计，其中，所述红花酢浆草提取物占12~34.5wt%，所述狭叶香蒲提取物占8~26.5wt%，所述紫荆花提取物占5.5~18.5wt%。

4.根据权利要求1~3任一项所述的化妆品，所述化妆品选自粉底液、粉底霜、BB霜、妆前乳、防晒霜、遮瑕液、美白膏和修颜霜中的一种。

5.一种权利要求2所述的化妆品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

得到由B相混入A相中的粉浆，所述A相包括润肤剂、乳化剂和肤感调节剂，所述B相包括红花酢浆草提取物；

获得溶解的D相，所述D相包括溶剂、保湿剂和稳定剂；以及

将所述D相分次与所述粉浆混合至乳化，然后继续加入C相和D相混合，制得化妆品；

其中，所述A相为占所述化妆品重量百分比为2wt%的PEG-12聚二甲基硅氧烷、2wt%的山梨坦橄榄油酸酯、1wt%的异十三醇异壬酸酯、1wt%的油溶性羊毛脂、0.5wt%的肉豆范酸异丙酯、3wt%的甘油三癸酸酯、2wt%的环聚二甲基硅氧烷、1.5wt%的环聚二甲基硅氧烷、6wt%的丙二醇、2wt%的丁二醇；

所述B相为占所述化妆品重量百分比为0.3wt%的黄胶、0.1wt%的EDTA-2Na、25wt%~30wt%的所述红花酢浆草提取物；

所述C相为占所述化妆品重量百分比为22wt%的所述狭叶香蒲提取物和12wt%的所述紫荆花提取物；

所述D相为双蒸水。