KR20090029750A - 잎새버섯 추출물 및 이를 함유하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물 - Google Patents

Abstract

더 효과적으로 피지의 산생을 촉진하는 신규한 잎새버섯 추출물 및 이것을 포함하는 조성물을 제공하는 것. 건조 잎새버섯을 순에탄올에 의하여 추출하여 얻은 잎새버섯 추출물 및 이것을 함유하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물.

잎새버섯 추출물, 피지

Description

잎새버섯 추출물 및 이를 함유하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물 {MAITAKE MUSHROOM EXTRACT AND COMPOSITION FOR ENHANCING THE PRODUCTION OF SEBUM COMPRISING THE EXTRACT}

본 발명은 신규한 잎새버섯 추출물 및 이를 함유하는 피지(皮脂) 산생을 촉진하기 위한 조성물에 관한 것이다.

지선(脂腺)은 피부에 부속되어, 피지라고 불리는 유상 물질을 분비하여, 표피 표면 위에 비침투성막을 형성한다. 피지는 지질 혼합물로 이루어지는데, 트리글리세라이드, 스쿠알렌, 지방족 왁스, 유리 지방산, 콜레스테롤류 등을 포함하고 있다.

피지는 표피의 보습성을 유지하고, 표피에 윤택성이나 유연성을 부여하는 동시에, 피부의 강도를 향상시키는 중요한 기능을 담당하고 있다. 또한, 피지는 자외선에 의한 표피의 손상을 막아주고, 이물질이나 알레르겐 등으로부터 피부를 보호하는 작용도 있다.

노화나 약물 투여 등에 의하여 피지 산생이 저하되면, 표피의 탄성이나 강도가 저하되고, 손상에 대한 저항력도 낮아진다. 또한, 피지 산생의 저하는 건조 피부 등의 질환의 원인이 된다.

피지 산생을 촉진하기 위한 유효 성분으로서 리놀산의 아미드 또는 당과의 에스테르 (특허 문헌 1)나 분지 사슬 아미노산 (특허 문헌 2)이 알려져 있다.

잎새버섯의 추출물로서는, 물 또는 열수(熱水)에 의한 추출물 (특허 문헌 3 내지 6)이나 함수 에탄올에 의한 추출물 (특허 문헌 7 및 8) 등의 물 또는 수성 용매에 의한 추출물이 알려져 있다. 잎새버섯의 물 또는 수성 용매에 의한 추출물은 발암 방지제 (특허 문헌 4), 항산화제 (특허 문헌 5), 항진균제 (특허 문헌 6)나 티로시나아제 및 α-아밀라제의 효소 저해제 (특허 문헌 8)로서 사용할 수 있다고 알려져 있다.

특허 문헌 1: 일본 공표 특허 공보 2006-504752호

특허 문헌 2: 일본 공표 특허 공보 2002-521320호

특허 문헌 3: 일본 공개 특허 공보 평11-75768호 공보

특허 문헌 4: 일본 공개 특허 공보 2001-97881호 공보

특허 문헌 5: 일본 공개 특허 공보 2005-220087호

특허 문헌 6: 일본 공개 특허 공보 2004-189737호

특허 문헌 7: 일본 공개 특허 공보 평8-131133호

특허 문헌 8: 일본 공개 특허 공보 2000-319192호

본 발명은 더 효과적으로 피지의 산생을 촉진하는 신규한 잎새버섯 추출물 및 이를 함유하는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위하여 예의 검토한 결과, 건조 잎새버섯의 순에탄올 추출물이 우수한 피지 산생 촉진 효과를 가진 것을 밝혀내고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은 이하와 같다.

(1) 건조 잎새버섯을 순에탄올에 의하여 추출하여 얻는 잎새버섯 추출물;

(2) 건조 잎새버섯의 수분 함량이 8 중량% 이하인 (1)에 기재된 잎새버섯 추출물;

(3) 순에탄올이 99.0 용량% 이상인 에탄올을 함유하는 (1) 또는 (2)에 기재된 잎새버섯 추출물;

(4) (1) 내지 (3)의 어느 하나의 항에 기재된 잎새버섯 추출물을 함유하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물;

(5) 화장료의 형태인 (4)에 기재된 조성물;

(6) 의약의 형태인 (4)에 기재된 조성물.

발명의 효과

본 발명에 의하여, 피지의 산생을 효과적으로 촉진할 수 있기 때문에, 피지의 감소에 기인하는 피부의 장해·이상이나 질환을 효과적으로 개선할 수 있다.

도 1은 지선 세포에 있어서의 지방 방울 [脂肪滴] 형성에 대한 잎새버섯 추출물 및 아가리쿠스 엑기스의 영향을 보여주는 사진이다.

도 2는 잎새버섯 추출물 및 아가리쿠스 엑기스로 처리한 지선 세포에 있어서의 피지량을 도시하는 도면이다.

도 3은 지선 세포의 TG 산생에 대한 잎새버섯 추출물 및 아가리쿠스 엑기스의 효과를 도시하는 도면이다.

도 4는 피지선의 피지 축적에 대한 잎새버섯 추출물의 효과를 나타내는 사진이다. 조직 절편 중의 검은 타원은 피지선 (▲)을 나타낸다.

도 5는 피지선의 피지 축적에 대한 아가리쿠스 엑기스의 효과를 나타내는 사진이다. 조직 절편 중의 검은 타원은 피지선 (▲)을 나타낸다.

도 6은 잎새버섯 추출물 및 아가리쿠스 엑기스로 처리한 지선 세포에 있어서의 피지량을 나타내는 도면이다.

도 7은 잎새버섯 추출물 존재하에서 배양한 햄스터 지선 세포에 있어서의 피지 조성을 나타내는 도면이다. ChoE, 콜레스테롤에스테르 (표준 지질로서 사용한 팔미트산콜레스테롤에 대응한다); WaxE, 왁스에스테르 (표준 지질로서 사용한 팔미틸팔미트산에 대응한다); TG, 트리아실글리세롤 (표준 지질로서 사용한 트리팔미틴에 대응한다); FFA, 유리 지방산 (표준 지질로서 사용한 팔미트산에 대응한다); Cho, 콜레스테롤 (표준 지질로서 사용한 콜레스테롤에 대응한다)을 의미한다. 통계 처리에는 피셔(Fisher)의 다변량 분산 분석법에 따른 각 처리간의 유의차 검정을 사용하였다.

도 8은 잎새버섯 추출물 함유 크림에 의한 피험자(5)의 치료 전과 후의 피부의 사진이다.

발명을 실시하기 위한 최선의 실시 상태

본 발명은 건조 잎새버섯을 순에탄올에 의하여 추출하여 얻는 잎새버섯 추출 물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서의 잎새버섯은 사르노코시카케과 잎새버섯속의 버섯을 말하고, 잎새버섯 (Grifola frondosa), 다박잎새버섯 (Grifola albicans), 저령 (Grifola umbellatus), 왕잎새버섯 (Grifola gigantean) 등을 예시할 수 있다. 본 발명에 있어서의 잎새버섯은 좋기로는 글리포라 프론도사 (Grifola frondosa)인 잎새버섯이다. 잎새버섯은 자실체 및 균사체 중 어느 것이라도 좋지만, 자실체가 바람직하다.

추출 원료의 건조 잎새버섯은 수분 함량이 10 중량% 이하인 잎새버섯을 말한다. 건조 잎새버섯은 수분 함량이 좋기로는 8 중량% 이하, 더 좋기로는 7 중량% 이하이다. 건조 잎새버섯은 생(生) 잎새버섯을 임의의 방법 (예를 들면, 천일 건조, 가열 건조, 진공 건조, 동결 건조 등)에 의하여 탈수·건조함으로써 얻을 수 있다. 건조 잎새버섯은 분말 형태인 것이 좋다.

본 발명에 있어서의 순에탄올은 15℃에서 에탄올을 98.0 용량% 이상 함유하는 에탄올을 말한다. 순에탄올은 좋기로는 99.0 용량% 이상, 더 좋기로는 99.5 용량% 이상의 에탄올을 포함한다.

건조 잎새버섯의 순에탄올에 의한 추출은 원료인 건조 잎새버섯에 순에탄올을 가한 후, 상온에서 또는 가열하에서 일정 시간 교반함으로써 추출한다. 가열 온도는 통상 에탄올의 비등점 이하의 온도이지만, 밀폐 용기 중에서는 120℃ 이하의 온도로 할 수도 있다. 바람직한 추출 온도는 상온 (실온)이다. 추출 시간은 특히 한정되지 않지만, 예를 들면 5 분 내지 10 시간 정도이다. 추출은 1회 또는 2회 이 상 실시할 수 있다.

추출에 있어서의 건조 잎새버섯에 대한 순에탄올의 사용량은 건조 잎새버섯 10O 중량부에 대하여 순에탄올을 100 내지 1000 중량부, 좋기로는 200 내지 600 중량부, 더 좋기로는 300 내지 500 중량부이다.

추출 처리 후, 여과지 또는 여과포에 의한 여과 또는 원심 분리 등의 분리 수단에 의하여 순에탄올 추출액을 얻을 수 있다.

본 발명에 있어서 잎새버섯의 순에탄올 추출물은 상기 에탄올 추출액 상태이어도 좋다. 또는, 순에탄올 추출물은 추출액으로부터 통상의 방법에 의하여 에탄올을 전면적으로 또는 부분적으로 제거한 추출 엑기스 상태이어도 좋다. 즉, 에탄올을 실질적으로 포함하지 않는 추출 분말 또는 에탄올을 1 내지 50 중량% 함유하는 추출 엑기스 상태라도 좋다. 10 내지 15 중량%의 에탄올을 포함하는 추출 엑기스는 보존성이 좋기 때문에 바람직한 형태이다. 순에탄올 추출물은 건조 잎새버섯에 대하여 2 내지 10 중량%, 더 특정적으로는 3 내지 5 중량% (고형분으로서)의 수량 (收量)으로 얻을 수 있다. 순에탄올 추출물 중의 유효 성분은 불분명하지만, 순에탄올 추출물은 인지질, 식물성 스테로이드가 포함되어 있다.

본 발명은 상기 추출물을 포함하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물을 포함한다.

본 발명의 조성물은 피지 산생을 촉진하기 위하여, 표피의 보습성을 유지하고, 표피에 윤택성이나 유연성을 부여하는 동시에 피부의 강도를 향상시킬 수 있고, 또한 자외선에 의한 표피의 손상을 막아, 이물이나 알레르겐 등으로부터 피부 를 보호할 수도 있다. 따라서, 본 발명은 화장료의 형태인 상기 추출물을 포함하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물을 포함한다.

화장료의 형태인 본 발명의 조성물은 화장료에 배합되는 관용의 담체, 부형제, 첨가물 등을 포함할 수 있다. 피부 거칠어짐 방지용, 피부결 개선용, 피부의 유연성 개선용, 피부의 보습성 개선용 등의 화장료로서 사용할 수 있다. 화장료의 제형으로서는, 세안용 (세안 크림·폼·젤 화장료 등), 피부 정돈용 (로션·미용액 등), 보호용 (밀크·모이스쳐 크림 등), 팩·오일·마사지 화장료, 베이스 메이크업용 (파운데이션·백분 등 선블록·선탠 화장료 등), 포인트 메이크업용 (립스틱·아이섀도우·아이라이너 등), 목욕용 (비누·보디샴푸·입욕용 화장료 등), 선 케어용 (선크림·선탠 화장료 등), 육모·양모용 (육모료·헤어토닉 등)을 들 수 있다. 이들 화장료에 잎새버섯 추출물을 유효량, 예를 들면 엑기스 환산으로 0.1 내지 99.9 중량%, 좋기로는 1 내지 99 중량%를 배합한다. 나머지 부분에는 관용의 담체, 부형제, 또는 첨가제 등을 배합한다.

또한, 본 발명에 있어서의 추출물은 피지 산생의 감소에 기인하는 피부 장해 또는 피부 질환에 대하여 개선 효과가 있다. 따라서, 본 발명은 외용 의약의 형태인, 상기 추출물을 포함하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물을 포함한다.

외용 의약의 형태인 본 발명의 조성물은 의약에 배합되는 관용의 담체, 부형제, 첨가물 등을 포함할 수 있다. 피지 산생의 감소에 기인하는 피부 장해 또는 피부 질환에는, 예를 들면 건피증, 피지 감소성 피부염, 화폐상 피부염, 아토피성 피부염을 들 수 있다. 의약품의 제형은, 예를 들면 용액, 현탁액, 로션, 크림, 연고, 겔 등을 들 수 있다. 이들 외용 의약에, 잎새버섯 추출물을 유효량, 예를 들면 0. 1 내지 99. 9 중량%, 좋기로는, 1 내지 99% 배합한다. 나머지 부분에는 관용의 담체, 부형제 또는 첨가제 등을 배합한다.

화장료 또는 의약에 배합되는 관용의 담체, 부형제, 또는 첨가제 등으로는 용매, 식물유 (예를 들면, 아몬드유, 피마자유, 카카오유, 코코넛유, 옥수수유, 면실유, 아마인유, 올리브유, 팜유, 낙화생유, 양귀비씨유, 채종유 (菜種油), 참기름, 대두유, 해바라기유 및 차실유 (茶實油) 등의 식용유), 광유, 지방유, 유동 파라핀, 완충제, 보존제, 습윤제, 킬레이트제, 항산화제, 안정화제, 유화제, 현탁화제, 겔 형성제, 연고 기제, 좌제 기제, 침투 촉진제, 방향제 및 피부 보호제 등을 들 수 있다.

용매로는 물, 알코올, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 글리세롤, 액체 폴리알킬실록산 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

완충제로는 구연산, 초산, 주석산, 젖산, 인산수소, 디에틸아민 및 그 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

습윤제로는 글리세린, 프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 소르비톨, 젖산, 요소, BG (1,3-부틸렌글리콜), 대두 스테롤 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

킬레이트제로는 EDTA 나트륨, 구연산 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

항산화제로는 부틸화히드록시아니솔 (BHA), 아스코르브산 및 그 유도체, 토코페롤 및 그 유도체, 시스테인과 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

유화제로는 천연 고무 (예를 들면, 아카시아 고무), 트라가간트 고무, 크산탄검; 천연 호스파치드 (예를 들면, 대두 레시틴); 모노올레산 소르비탄 유도체; 양모유; 양모 알코올 소르비탄에스테르; 모노글리세라이드; 지방 알코올 (예를 들면 베헤닐알코올); 지방산 에스테르 (예를 들면, 트리(카프릴/카프린산) 글리세릴, 스테아르산글리세릴 (SE)과 같은 지방산의 트리글리세라이드);와 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

현탁화제로는 셀룰로오스 및 그 유도체 (예를 들면 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로오스 등), 카라게난, 아카시아 고무, 아라비아검, 트라가간트 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

겔 기제 및 증점 성분에는 유동 파라핀, 폴리에틸렌, 지방유, 콜로이드 실리카 또는 알루미늄, 아연 비누, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 트라가간트, 카르복시비닐폴리머, 규산마그네슘알루미늄, 친수성 폴리머 (예를 들면, 전분, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸 셀룰로오스 및 기타 셀룰로오스 유도체 등의 셀룰로오스 유도체), 물 팽윤성 친수 콜로이드, 카라게난, 히알론산염 (예를 들면, 염화나트륨을 선택적으로 포함하는 히알론산 겔), 알긴산에스테르 (예를 들면, 알긴산프로필렌글리콜) 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

연고 기제로는 밀랍, 파라핀, 세탄올, 팔미트산세틸, 세테아릴알코올, 스테아르산폴리글리세릴-10, 스테아르산, 스테아르산 PEG-150, 식물유, 지방산의 소르비탄에스테르, 폴리에틸렌글리콜, 지방산의 소르비탄에스테르와 산화에틸렌의 축합 생성물 (예를 들면, 모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄) 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.

소수성 연고 기제로는 파라핀, 식물유, 동물 지방, 합성 글리세라이드, 왁스, 라놀린, 액체 폴리알킬실록산 및 이들의 혼합물 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

친수성 연고 기제로는 고체 매크로골(폴리에틸렌글리콜) 등을 들 수 있으나, 이것에 한정되는 것은 아니다. 또한, 관용의 담체, 부형제, 또는 첨가제 등에는 스쿠알렌, 레시틴, 수첨 레시틴, 테트라헥실데칸산아스코르빌, 아란토인, 글리틸리틴산 2K, 글리코실트레할로스, 가수 분해 수첨 전분, 가수 분해 콜라겐, 장미 엑기스, 디메티콘, 카프리릴글리콜, 베타인, 스테아로일글루타민산Na, 노바라유, 바틸알코올, 하이드로프록시프롤린 등을 들 수 있다.

본 발명에 있어서의 추출물은 지선 세포를 활성화하므로, 본 발명은 이 추출물을 포함하는 지선 세포를 활성화하기 위한 조성물도 포함한다.

이하, 실시예 등에 의하여 본 발명을 설명하지만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니다.

〔실시예 1〕잎새버섯 추출물의 제조

잎새버섯의 멸균 건조 분말 (수분 함량: 6 중량%, 호크트(주) 제품인 잎새버섯) 1000 g에 순에탄올 (수분량: 99.5 용량% 이상) 4000 g을 가하고 20℃의 온도에서 18 시간에 걸쳐서 교반하면서 추출하였다. 잔사를 원심 분리에 의하여 제거하고, 얻은 상청을 여과지로 여과하였다. 얻은 여과액으로부터 에탄올을 증발·제거하고, 잎새버섯의 순에탄올 추출물 (수량 43.2 g, 내고형분 37.2 g 및 에탄올 6.0 g)을 얻었다.

〔시험예〕잎새버섯의 순에탄올 추출물의 피지 산생 촉진 작용

1. 시험관내 (in vitro) 실험법

1-1 햄스터 지선 세포의 배양 방법

1-1-1 햄스터 피지선의 단리

수컷 골든 햄스터 (5 주령: 일본 에스엘씨사로부터 구입)의 좌우의 귓바퀴부를 절제하여, 페니실린 G (100 units/㎖)와 황산스트렙토마이신 (100 ㎍/ml)을 첨가한 둘베코 개변(改變) 이글 배지 (Dulbecco's modified Eag1e's medium, DMEM) (인비트로젠사 제품)에 침지하여, 1 시간 이상 4℃로 방치한 후에 인산 완충액 (PBS (-))으로 세정하였다. 귓바퀴부 주위의 털을 잘라내어, 5x5 mm 정도로 잘게 자르고, 2.4 units/ml 디스파제 (dispase) 용액 중 (고도슈세이사 제품)에서 4℃, 13.5 시간 정치하였다. 디스파제 처리 후, 핀셋으로 귓바퀴부로부터 표피를 박리하여, 피지선을 포함하는 진피를 피지 세포 성장 배지 (Sebocyte growth (SG) medium) [6% (v/v) 소의 태아 혈청 ((주)니치렌바이오사이언스사 제품)/2% (v/v) 사람 혈청 (ICN 바이오메디칼사 제품)/0.68 mM L-글루타민/100 units/ml 페니실린 G/100 ㎍/ml 황산스트렙토마이신/DMEM/F-12]에 침지하여, 실체 현미경하에서 피지선을 단리하였다.

1-1-2 햄스터 피지선의 조직편 배양

마우스 3T3 세포 (리겐(理硏) 연구소 세포 개발 은행에서 구입)를 마이토마이신 C로 4 시간 처리하고, 1x10³ cells/㎠의 세포 수로 6O mm 배양 접시에 파종하고, 햄스터 지선 세포를 배양하기 위한 상피 세포층으로 하였다. 단리한 피지선은 핀셋을 사용하여 지지 세포층 위에 접착시키고, 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 거의 밀집 (confluent)이 될 때까지 배양하였다. 세포 배양에는 SG 배지 (medium)에 EGF (10 ng/㎖)를 첨가한 배지를 사용하여, 2 일마다 배지를 교환하였다.

1-1-3 햄스터 지선 세포의 계대

지지 세포층의 마우스 3T3 세포를 0.02%(w/v)EDTA/PBS(-) 용액을 사용하여 제거한 후, 조직편으로부터 증식·신전된 햄스터 지선 세포를 0.25% (w/v) 트립신/0.02% (w/v) EDTA/PBS(-) 용액을 사용하여 배양 접시로부터 박리하고, 계대 배양 하였다. 또한, 모든 실험에 있어서 세포는 계대수 3까지의 것을 사용하였다.

1-2 처리 방법

햄스터 지선 세포를 35 mm의 배양 접시에 파종한 다음날부터, 인슐린 (10 nM) (시그마알드리치사 제품)의 존재하 또는 비존재하에서 실시예 1에서 얻은 잎새버섯 추출물 (100, 200 및 400 ㎍/㎖) 또는 아가리쿠스 엑기스 (쿄와 발효 그룹, 쿄와의 아가리쿠스) 100, 200 및 400 ㎍/㎖)를 포함하는 배양액 (6% 소의 태아 혈 청/ 2% 사람 혈청/ 0.68 mML-글루타민/100 units/ml 페니실린 G/100 ㎍/ml 황산 스트렙토마이신 /DMEM/F-12)으로 세포를 처리하였다. 3일 후에 동일한 처리를 하고, 3일간 더 배양하였다. 또한, 모든 실험에 있어서 세포는 계대수 3까지의 것을 사용하였다.

1-3 오일 레드 (Oil red) O 염색법

0.3% 오일 레드 O (시그마 알드리치사 제품)를 함유하는 이소프로판올 용액과 정제수를 3:2 (v:v)로 혼합한 후, 다시 밀폐식 초음파 세포 파쇄 장치에 의하여 15분간 초음파 처리를 실시하였다. 10 분간 실온에 방치한 후, 여과한 상청을 오일 레드 O 염색액으로서 사용하였다. 세포를 PBS (-)로 세정한 후, 고정액 [4% 파라포름알데히드/PBS (-)]를 가하여 실온에서 1 시간 고정하였다. 고정 후, 세포를 증류수로 세정하고, 오일 레드 O 염색액을 가하여 37℃에서 15 분간 염색하였다. 염색 후, 세포를 유수로 세정하고, 광학 현미경에 의하여 지방 방울 형성을 관찰하였다. 또한, 광학 현미경 하에서 오일 레드 O 염색한 세포를 디지털 화상화하고, 화상 해석·정량화 소프트인 루미나 비전 (Lumina Vision) Ver 2. 2. 2 (미타니 상사 제품)를 사용하여 각 처리에 대하여 다른 3 부분에 있어서 세포 내에 축적된 피지량을 정량하고, 그 양을 나타내는 화상 이미지 단위 (유닛)로서 나타내었다.

1-4 세포내 피지량의 정량

1) 시료 조제법

약물 처리한 세포를 PBS(-)로 2회 세정하고, 0.25% 트립신/0.02% EDTA/PBS(-) 용액을 사용하여 회수하였다. 얻은 세포 현탁액을 빙랭하에 초음파 처 리를 함으로써, 세포를 파쇄하였다.

2) 트리아실글리세롤량의 측정법

피지의 주성분인 트리아실글리세롤 (TG)량을 리키테크 TGII (로슈·다이아그노스틱스사 제품)를 사용하여 측정하였다. 즉, 상기 1)의 세포 분쇄 시료에 처리액 1 [1.65 IU/㎖ 글리세롤키나제/6 IU/㎖ 글리세롤-3-포스페이트옥다제/카타라제/ 2.95 ㎛ol/㎖ 디나트륨아데노신-5'-트리포스페이트, 삼수화물 (ATP)/ 0.65 ㎛ol/㎖ 나트륨N-(3,5-디메톡시페닐)-N'-숙시닐에틸렌디아민(DOSE)]을 첨가하고, 37℃에서 10 분간 반응시켜 유리형 글리세롤을 제거하였다. 즉시 처리액 2 [0.55 IU/㎖ 리보프로테인 리파아제/펠옥시다제/ 0.65 ㎛ol/㎖ 4-아미노안티피린 (4-AA)]를 첨가하고, 또한 37℃에서 10 분간 반응시켰다. 반응 종료 후, 590 nm에 있어서의 흡수도를 측정하였다. TG량은 동일하게 실시한 트리올레인 표준액 (0.6 ㎎/㎖)의 흡수도로부터 산출하였다. 또한, 세포 분쇄 시료 중의 DNA량을 3,5-디아미노안식향산 이염산 (DABA)법을 사용하여 측정하고, 1 ㎍ DNA당의 TG량으로서 산출하였다.

2. 생체내 (in vivo) 실험법

3 주령의 수컷 골든 햄스터 (일본에스엘씨사로부터 구입) 각 처리당 n=1)의 귓바퀴부 (왼쪽 귀)에 잎새버섯 추출물 또는 아가리쿠스 엑기스를 1, 2 및 4 중량%를 함유하는 95% 에탄올/5% 글리세롤를 50 ㎕씩 1일 1회 도포하였다. 또한, 대조군에는 용매만을 동일하게 하여 도포하였다 (오른쪽 귀). 2 주일 후, 햄스터 귓바퀴부의 동결 절편을 작성하고, 오일 레드 O 염색을 실시하였다. 광학 현미경하에 있어서 오일 레드 O 염색한 귓바퀴부의 조직 절편을 디지털 화상화하고, 화상 분석· 정량화 소프트 루미나 비전 (Lumina Vision)을 사용하여 햄스터 피지선의 피지량을 정량하고, 그 양을 나타내는 화상 이미지 단위 (유닛)로서 나타내었다.

3. 통계 처리

피셔 (Fisher)의 다변량 분산 분석법에 의하여 각 처리간의 유의차 검정을 실시하였다.

(결과)

1. 시험관내 (in vitro) 실험

(1) 인슐린 미처리군의 햄스터 지선 세포 (저분화형)에 있어서, 잎새버섯 추출물은 세포내 지방 방울의 형성을 촉진하였다 (도 1B, 400 ㎍/ml; 도 A와 대비). 또한, 이 잎새버섯 추출물에 의한 지방 방울의 형성 촉진 작용은 농도 의존적인 것으로 판명되었다 (도 2). 한편, 아가리쿠스 엑기스는 약하면서 세포내 지방 방울의 형성을 촉진하였지만 (도 1C, 400 ㎍/㎖; 도 1A와의 대비 및 도 2), 그 촉진 작용은 잎새버섯 추출물에 비하여 유의하게 약한 것으로 판명되었다 (p<0.001).

(2) 인슐린 처리한 햄스터 지선 세포 (분화형)에 있어서도 마찬가지로, 잎새버섯 추출물은 세포내 지방 방울의 형성을 농도 의존적으로 촉진하였다 (도 1E; 도 1D와의 대비 및 도 2). 한편, 동일한 조건하에서 아가리쿠스 엑기스도 세포내 지방 방울의 형성을 촉진하였지만 (도 1F; 도 1D와의 대비 및 도 2), 그 촉진 작용은 잎새버섯 추출물에 비하여 유의하게 약한 것으로 판명되었다 (p<0.001).

(3) 인슐린 미처리군의 햄스터 지선 세포에 있어서, 잎새버섯 추출물은 농도 의존적으로 세포내 TG량을 증가시켰다 (도 3). 그러나, 동일한 조건하에 있어서 아가리쿠스 엑기스는 세포내 TG량에 영향을 미치지 않았다 (도 3). 한편, 인슐린 처리한 햄스터 지선 세포에 있어서, 잎새버섯 추출물은 마찬가지로 농도 의존적으로 세포내 TG량을 증가시켰다 (도 3). 또한, 아가리쿠스 엑기스도 세포내 TG량을 증가시켰지만, 400 ㎍/㎖의 농도에서는 잎새버섯 추출물과 비교하여도 그 양은 유의하게 낮은 값이었다 (도 3).

2. 생체내 (in vivo) 실험

(1) 잎새버섯 추출물 및 아가리쿠스 엑기스 처리 전후에 있어서의 햄스터의 체중 변화는 이하와 같다.

(2) 잎새버섯 추출물은 피지선 조직에 있어서의 피지 축적량을 1%, 2% 및 4%의 농도에 있어서 각각 1.6배, 3배 및 1.3배 유의하게 촉진하였다 (도 4 및 6A).

(3) 1%의 아가리쿠스 엑기스는 피지선 조직에 있어서의 피지 축적량을 억제하였지만, 다른 농도 (2% 및 4%)에 있어서 피지 축적량에 현저한 변화는 관찰되지 않았다 (도 5 및 6A).

(고찰)

잎새버섯 추출물은 생체내 및 시험관내에 있어서 피지 산생 촉진 작용을 한다. 또한, 이 촉진 효과는 아가리쿠스에 비하여 강력하다는 것이 판명되었다. 즉, 잎새버섯 추출물은 강력한 피지 산생 촉진 물질이며, 건조 피부의 손질에 그치지 않고, 건피증 등 피지선 기능 저하에 기인한 피부 질환의 병태 경감에도 유효할 것으로 기대된다.

〔시험예 2〕

잎새버섯의 순에탄올 추출물의 트리아실글리세롤 (TG) 특이적 산생 촉진 작용 (방법)

1. 햄스터 지선 세포의 배양

햄스터 지선 세포를 2.35 x10⁴ cells/㎠의 세포 수로 35 mm 배양 접시에 파종하고, 다음날부터 실시예 1에서 얻은 잎새버섯 추출물 (100, 200, 400 ㎍/ ㎖) 단독 또는 잎새버섯 추출물과 인슐린 (10 nM)의 양쪽을 모두 함유하는 지선 세포용 배양액 (SBCM)[DMEM/F-12/6% (v/v) 소의 태아 혈청/2% (v/v) 사람 혈청/0.68 mM L-글루타민/페니실린 G (100 units/㎖)/황산 스트랩토마이신 (100 ㎍/㎖)로 3일간 배양을 실시하였다. 3 일 후에 새로 조제한 동일한 잎새버섯 추출물 단독 또는 잎새버섯 추출물과 인슐린의 두 가지를 모두 함유하는 SBCM으로 3 일간 더 배양한 후에 세포를 회수하였다. 또한, 잎새버섯 추출물 및 인슐린을 포함하지 않는 배양액으로 배양한 세포를 대조군으로 하였다.

2. 피지 조성 분석

잎새버섯 추출물 존재하 또는 비존재하에서 배양한 지선 세포를 PBS (-)로 2회 세정하고, 0.25% (w/v) 트립신/0.02% (w/v) EDTA/PBS (-) 용액 1.5 ㎖를 사용하여 회수하였다. 얻은 세포 현탁액을 빙랭하에, 밀폐식 초음파 세포 파쇄 장치 (Bioruptor, 코스모 바이오사 제품)를 사용하여 초음파 처리 (200 W, 6초)를 5 분간 실시하고, 피지 조성 분석용 시료로 하였다. 얻은 시료를 탈지제 스피츠관으로 옮기고, 클로로포름:메탄올(2:1; v:v)에 용액을 가하여 지질을 추출하였다. 추출한 지질의 정량 및 조성 분석은 박층 크로마토그래피 자동 검출 장치 (이어트로스캔, 다이아트론사 제품)를 사용하여 실시하였다. 즉, 추출한 지질을 봉상 박층 (크로마토 로드)에 스포트하고, 클로로포름·메탄올 (35:35) 용액으로 1차 전개 (1.5 cm), 벤젠:클로로포름:초산 (50:20:0.7) 용액으로 2차 전개 (8 cm)하고, 또한 헥산:벤젠 (35:35) 용액으로 3차 전개 (11 cm)를 하였다. 다음으로, 로드상에서 분리된 지질 성분을 수소 불꽃 이온화 검출기에 의하여 실온 조건하에서, 30초/로드의 속도로 직접 검출하였다.

또한, 각 지질의 조성은 이미 알려진 양의 표준 지질로서 사용한 트리팔미틴 (도 7의 TG에 대응한다), 팔미트산 (도 7의 FFA에 대응한다), 콜레스테롤 (도 7의 Cho에 대응한다), 팔미트산콜레스테롤 (도 7의 ChoE에 대응한다) (도산 셀더리 리서치사 제품) 및 팔미틸팔미트산 (도 7의 WaxE에 대응한다) (누 체크 플렙사 제품)에 대응하는 크로마토그래프로부터 해석하였다. 또한, 각 지질량은 내부 표준품으로서 사용한 초산콜레스테롤에 (2 ㎍) (도산 셀더리 리서치사 제품)의 피크 면적으로부터 각각 산출하였다.

(결과)

피지 조성 분석의 결과로부터 잎새버섯 추출물 (100, 200, 400 ㎍/㎖)은 피지 성분 중의 트리아실글리세롤 (TG)를 우선적이고 농도 의존적으로 증가시키는 것으로 판명되었다 (도 7). 또한, 400 ㎍/㎖의 잎새버섯 추출물 처리에 있어서 콜레스테롤 에스테르 (ChoE) 및 유리 지방산 (FFA)의 양도 증가하였지만, 이들 양은 전체 피지량 중의 2.2 및 5.3%이고, 81.5%를 차지하는 TG에 비하여 극히 낮은 값인 것이 밝혀졌다.

〔실시예 2〕

이하의 배합으로 잎새버섯 추출물을 함유하는 화장용 크림을 제작하였다.

성분명 배합량 (중량%)

잎새버섯 추출물 2.0

올리브유 10.0

트리(카프릴/카프린산) 그리세릴 10.0

토코페롤 1.0

정제수 77.0

합계 100.0

〔실시예 3]

이하의 배합으로 잎새버섯 추출물을 함유하는 의약용 크림을 제작하였다.

성분명 배합량 (중량%)

잎새버섯 추출물 10.0

올리브유 10.0

트리(카프릴/카프린산) 글리세릴 10.0

토코페롤 1.0

정제수 69.0

합계 100.0

〔실시예 4〕

잎새버섯 추출물의 건피증에 대한 사람에서의 효과

실시예 2에 나타내는 잎새버섯 추출물을 2 중량% 함유하는 크림을 사용하여 건피증에 대한 효과를 검토하였다.

시험 방법

피험 대상: 노인 보건 시설 「굿웰」 내의 건피증, 낙설(落屑)이 있는 환자 (76 내지 97세) 12명 (남성 6명, 여성 6명)

실시 기간: 2006년 12월∼2007년 1월

방법: 잎새버섯 추출물 함유 크림을 피험자의 피부에 도포하고, 각질//낙설 (피부가 각질 형태로 떨어지는 증상을 의미한다)을 기준으로 하여 3 단계 (3: 중증, 2: 중간 정도, 1: 경증)로 피부 상태를 평가하였다. 도포 부위는 오른쪽 팔뚝, 왼쪽 팔뚝, 오른쪽 종아리, 왼쪽 종아리로, 평가 판정은 부위마다 실시하였다.

결과

이하에, 도포 개시로부터 1 주간의 피험자의 피부 상태의 진단 평가도 (3: 중증 2: 중간 정도 1: 경증)를 나타낸다.

또한, 진단 평가도: 0은 완치를 나타낸다.

피험자 1

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/4 2 1 2 2

2006/12/6 1 1 1 1

2006/12/8 1 1 1 1

2006/12/11 1 0 1 1

피험자 2

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2007/1/17 1 1 2 1

2007/1/19 1 1 1 1

2007/1/22 0 0 1 1

2007/1/24 0 0 1 1

피험자 3

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/6 2 2 2 3

2006/12/11 2 2 1 2

2006/12/13 1 0 0 0

피험자 4

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/15 1 1 1 1

2006/12/18 0 1 0 0

2006/12/20 0 1 0 0

2006/12/22 0 0 0 0

피험자 5

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2007/1/5 2 2 3 3

2007/1/8 1 1 2 2

2007/1/10 0 0 2 2

2007/1/12 0 0 2 2

피험자 6

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/18 0 1 3 2

2006/12/20 0 0 2 1

2006/12/25 0 0 1 1

피험자 7

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/18 1 1 1 1

2006/12/20 0 0 1 1

2006/12/22 0 0 1 1

2006/12/25 0 0 0 1

피험자 8

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/19 2 3 3 3

2006/12/30 1 2 2 2

2007/1/4 1 0 2 1

피험자 9

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2007/1/5 0 0 2 3

2007/1/8 0 0 2 1

2007/1/10 0 0 2 1

2007/1/12 0 0 1 1

피험자 10

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/20 1 1 2 2

2006/12/22 1 0 2 2

2006/12/25 1 0 1 1

2006/12/26 1 0 1 1

2006/12/27 1 0 1 1

피험자 11

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/4 1 1 2 1

2006/12/6 0 1 1 1

2006/12/8 0 1 1 1

2006/12/112 0 1 0 0

피험자 12

진찰일 오른쪽 팔뚝 왼쪽 팔뚝 오른쪽 종아리 왼쪽 종아리

2006/12/18 0 1 2 1

2006/12/20 0 0 1 1

2006/12/22 0 0 1 1

2006/12/25 0 0 1 0

이와 같이 도포 개시 후의 피험자 1 내지 12의 피부 상태의 진단 평가도는 피부 상태가 개선된 것을 나타내었다. 또한, 잎새버섯 추출물 함유 크림의 도포에 의하여 유의한 증상 개선 효과는 도포 후 1 내지 3일에 인정되었다.

도 8은 잎새버섯 추출물 함유 크림에 의한 피험자 5의 치료 전과 후의 피부의 사진이다. 잎새버섯 추출물 함유 크림의 도포에 의한 치료에 의하여, 건피 증상의 개선이 인정되었다.

또한, 이들 결과는 잎새버섯 추출물의 함유량이 2 중량%인 화장용 크림에 있어서도, 건피증에 대하여 치료 효과가 있는 것을 나타내고 있다.

본 발명의 추출물에 의하여 피지 산생이 촉진되므로, 본 발명의 조성물은 피지 산생의 감소에 의한 피부의 이상·장해나 질환을 처치하기 위한 화장료나 의약으로서 유용하다.

Claims (6)

1. 건조 잎새버섯을 순에탄올에 의하여 추출하여 얻는 잎새버섯 추출물.
2. 제1항에 있어서, 건조 잎새버섯 수분 함량은 8 중량% 이상인 잎새버섯 추출물.
3. 제1항 또는 제2항 중 어느 하나의 항에 있어서, 순에탄올은 99.0 용량% 이상인 에탄올을 함유하는 잎새버섯 추출물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 하나의 항에 기재된 잎새버섯 추출물을 함유하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물.
5. 제4항에 있어서, 화장료의 형태인 조성물.
6. 제4항에 있어서, 의약의 형태인 조성물.

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