JP4583501B2 - マイタケ抽出物及びこれを含むヒアルロン酸(ヒアルロナン)産生を促進するための組成物 - Google Patents
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Description
(1)乾燥マイタケを純エタノールにより抽出して得られるマイタケ抽出物;
(2)乾燥マイタケの水分含量が8重量%以下である、(1)記載のマイタケ抽出物;
(3)純エタノールが99.0容量%以上のエタノールを含有する、(1)又は(2)記載のマイタケ抽出物;
(4)(1)〜(3)のいずれか1項記載のマイタケ抽出物を含有する、ヒアルロン酸産生を促進するための組成物;
(5)化粧料の形態にある、(4)記載の組成物;
(6)医薬の形態にある、(4)記載の組成物;
(7)
(a)上記(1)記載のマイタケ抽出物をクロロホルム-メタノール(19:1)に溶解すること、
(b)上記マイタケ抽出物の溶解液を、クロロホルム-メタノール(19:1)で平衡化した順相シリカゲルカラムに添加すること、
(c)クロロホルム-メタノール(19:1)、クロロホルム-メタノール(9:1)、クロロホルム-メタノール(4:1)、メタノールの順番で溶出すること、
(d)溶出物の一部を薄層シリカゲルでクロロホルム-メタノール(9:1)で展開すること、および
(e)Rf値が、1.0≧Rf値>0.45および/または0.07>Rf値≧0の溶出物を得ること、
を含む、Rf値が1.0≧Rf値>0.45および/または0.07>Rf値≧0のヒアルロン酸産生促進溶出物の製造方法;
(8)上記(7)記載の製造方法で得られた、Rf値が1.0≧Rf値>0.45および/または0.07>Rf値≧0のヒアルロン酸産生促進溶出物。
ヒアルロン酸は、グリコサミノグリカン(ムコ多糖)の一種で、N-アセチル-D-グルコサミンとD-グルクロン酸が結合した二糖が繰り返す構造をしており、次式:
で表すことができる。また、ヒアルロン酸は、ヒアルロナンとも呼ばれる。
本発明の組成物はヒアルロン酸産生を促進するため、皮膚の保湿性を保ち、皮膚に潤いや柔軟性及び弾力性を与えることができ、また、紫外線による表皮の損傷防御や修復、さらに皮膚再生をも惹起することができる。したがって、本発明は、化粧料の形態にある、上記抽出物を含むヒアルロン酸産生を促進するための組成物を包含する。
また、ヒアルロン酸産生の減少を伴う関節障害又は関節疾患には、変形性関節症や関節リウマチなどが挙げられる。好ましくは、変形性関節症や関節リウマチである。
また、ヒアルロン酸産生の減少を伴う眼障害又は眼疾患には、角膜上皮障害、眼精疲労やドライアイなどが挙げられる。好ましくは、ドライアイである。ドライアイとは、涙が不足したり、涙の成分が変化することで目の表面に障害が生じる状態を意味し、涙液分泌減少症や乾性角膜結膜炎が含まれる。
溶媒には、水、アルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、液体ポリアルキルシロキサンおよびそれらの混合物などが挙げられるが、これらに限定されることはない。
湿潤剤には、グリセリン、プロピレングリコール、ペンチレングリコール、ソルビトール、乳酸、尿素、BG(1,3-ブチレングリコール)、ダイズステロールおよびそれらの混合物などが挙げられるが、これらに限定されることはない。
抗酸化剤には、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、アスコルビン酸およびその誘導体、トコフェロールおよびその誘導体、システイン、ならびにそれらの混合物などが挙げられるが、これらに限定されることはない。
疎水性軟膏基剤には、パラフィン、植物油、動物脂、合成グリセリド、ろう、ラノリン、液体ポリアルキルシロキサンおよびそれらの混合物などが挙げられるが、これらに限定されることはない。
マイタケの滅菌乾燥粉末(水分含量:6重量%、ホクト(株)製のマイタケ)1000gに純エタノール(水分量:99.5容量%以上)4000gを加え、20℃の温度にて18時間にわたり攪拌しながら抽出した。残渣を遠心分離により除去し、得られた上澄を濾紙により濾過した。得られた濾液からエタノールを蒸発・除去して、マイタケの純エタノール抽出物(収量43.2g、内固形分37.2g及びエタノール6.0g)を得た。
正常ヒト線維芽細胞NB1RGB(RCB0222)は、(独)理化学研究所バイオリソースセンターより購入し、10%(v/v)ウシ胎仔血清(FBS)含有Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM、インビトロジェンより購入)を用いて培養した。また、マイタケ抽出物処理は血清非存在下で実施した。すなわち、60 mm dishに培養したconfluentのヒト線維芽細胞をマイタケ抽出物または細胞外マトリックス合成促進因子であるtransforming growth factor β(TGF-β)(20 ng/ml、R&Dシステムズより購入)を含む0.2%(v/v)lactalbumin hydrolysate(LAH、シグマ・アルドリッチより購入)/DMEMにて24時間培養した。
(1)全RNAの抽出
細胞からの全RNAの抽出は、Isogen(ニッポンジーンより購入)を用いて添付の操作法に従い行った。すなわち、マイタケ抽出物またはTGF-βにて培養した細胞にIsogen(0.8 ml)を添加して細胞を溶解し、その溶解液にクロロホルム(0.16 ml)を添加して混和した。遠心分離(10000回転/分、10分間)後、上層の水層画分を回収し、さらに回収した水層と同容量のイソプロパノールを添加して混和した。遠心分離(10000回転/分、10分間)後、上清を除去して沈殿したRNAを回収した。回収したRNAをさらに75容量%のエタノール(0.8 ml)を添加して混和した。遠心分離(10000回転/分、10分間)後、上清を完全に除去してRNAを風乾させた。抽出した全RNAは核酸分解酵素不含滅菌蒸留水に溶解し、260 nmにおけるその吸光度を分光光度計(UV-1600、島津製作所社製)を用いて測定することにより定量した。なお、本全RNAの抽出は、Isogenを用いなくとも、Chomczynski P and Sacchi Nの報告(Chomczynski, P. and Sacchi, N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Anal. Biochem. 162:156-159(1987))に記載の方法に基づいて実施することもできる。
QuantiTectR Reverse Transcription Kit(QIAGENより購入)を用い, 添付の操作法に従った。すなわち、全RNA(1 μg)に7 x gDNA Wipeout Bufferを加えて総量を14 μlとし、42℃で2分間ゲノムDNA除去反応を行った。続いて、このゲノムDNA除去反応液全量に5 x Quantiscript RT Buffer、RT Primer MixおよびQuantiscript Reverse Transcriptase(RT)を加えて総量を20 μlとし、42℃で15分間逆転写反応を行った。次に、95℃、3分間の熱処理にて反応を停止させ、一本鎖cDNAを合成した。
RT反応により合成した一本鎖cDNAを鋳型とし、ヒトヒアルロン酸合成酵素(HAS)プライマーキット(QuantiTect(登録商標)Primer Assays、QIAGENより購入)、またヒトI型コラーゲンα1に特異的なプライマー、ヒトエラスチンに特異的なプライマーおよびヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素(GAPDH)に特異的なプライマーを用いてリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を行った。すなわち、RT反応溶液を滅菌蒸留水にて40倍希釈し、その希釈液2 μlに滅菌蒸留水を3 μl、SYBR(登録商標)Premix Ex TaqTM II(タカラバイオより購入)を6.25 μl、HASプライマーキットを1.25 μlを添加し全量を12.5 μlとして、Thermal Cycler Dice(登録商標)Real Time System(タカラバイオ製)を用いて45サイクル(1サイクル:94℃で5秒間; 60℃で30秒間)のPCR反応を行った。
結果は、GAPDHを内標準遺伝子として比較Ct法(ΔΔCt法)を用いて相対的に定量した。ΔΔCt法とは、増幅DNA産物がある量に達するのに必要なサイクル数が分かれば初期量を算出できる、という理論に基づいた方法であり、PCRの鋳型となる相補的DNA(cDNA)の初期量をサイクル数として表すことができる。この方法では、1サイクルの検出の違いが、2倍の遺伝子量の差であるという理論(2-ΔΔCt)を使用する。したがって、ΔΔCt法では基準となる遺伝子(内標準遺伝子)と比較して、未知検体のサイクル数の増減から未知検体の遺伝子量を相対定量することができる。
ヒトI型コラーゲンα1(Accession No. NM_000088.3):センスプライマー(配列番号1)、5'-CAGCAGATCGAGAACATCCG-3'およびアンチセンスプライマー(配列番号2)、5'-TCTTGAGGTCACGGCAGGTG-3';
ヒトエラスチン(Accession No. M36860.1):センスプライマー(配列番号3)、5'-TGGACTTGGAGTTGGTGTCG-3'およびアンチセンスプライマー(配列番号4)、5'-CAGGCACTGCTGCTCCATATTT-3';
ヒトGAPDH(Accession No. M33197.1):センスプライマー(配列番号5)、5'-GGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3'およびアンチセンスプライマー(配列番号6)、5'-GGCAACAATATCCACTTTACCAGA-3'。
これらのプライマーは、オペロンバイオテクノロジー(株)に合成依頼して作製した。
HASセンスプライマー(配列番号7):5'-GTGTTATACATGTCGAGTTTACTTCC-3'
HASアンチセンスプライマー(配列番号8):5'-GTCATATTGTTGTCCCTTCTTCCGC-3'
(Yamada, Y., Itano, N., Hata, K., Ueda, M., and Kimata, K. Differential regulation by IL-1beta and EGF of expression of three different hyaluronan synthases in oral mucosal epithelial cells and fibroblasts and dermal fibroblasts: quantitative analysis using real-time RT-PCR. J. Invest. Dermatol. 122:631-639, 2004.)を用いて実施することができる。
Fisherの多変量分散分析法により各処理間の有意差検定を実施した。
(1)正常ヒト線維芽細胞において、マイタケ抽出物は濃度依存的にHAS mRNA発現を促進することが明らかとなった(図1)。すなわち、HAS mRNA量は100 μg/mlのマイタケ抽出物において5.4倍、200 μg/mlにおいて22.4倍、400 μg/mlにおいて23.0倍それぞれ有意に増加した。また、TGF-β(20 ng/ml)もHAS mRNA発現を9.3倍促進した。
(2)図2に示したように、マイタケ抽出物はI型コラーゲンα1鎖の遺伝子発現には影響しないことが判明した。一方、TGF-β(20 ng/ml)はそのmRNA発現を有意に促進した(2.4倍)。
(3)図3に示したように、マイタケ抽出物はエラスチンmRNA発現には影響しないことが明らかとなった。一方、TGF-β(20 ng/ml)はそのmRNA発現を有意に促進した(4.9倍)。
正常ヒト皮膚線維芽細胞において、マイタケ抽出物は皮膚構造タンパク質のコラーゲンおよびエラスチンの遺伝子発現には影響しないものの、肌に潤いを与えるヒアルロン酸の合成酵素であるHAS遺伝子発現を促進することを初めて明らかにした。したがって、マイタケ抽出物は内因性保湿因子であるヒアルロン酸(Carruthers J, Carruthers A. Hyaluronic acid gel in skin rejuvenation. J. Drugs Dermatol. 5:959-964, 2006.)の生合成を促進することで肌の潤いを増強するヒアルロン酸産生促進物質(ヒアルロン酸産生促進剤)であると強く示唆される。また、マイタケ抽出物は、線維芽細胞に働きかけ、それを活性化することで、加齢と伴に減少するヒアルロン酸を内面から補充するアンチエイジング効果を発揮するものと期待される。さらに、マイタケ抽出物によるヒアルロン酸産生促進作用は、ヒアルロン酸の低下を伴う変形性関節症、関節リウマチ及びドライアイの予防、治療にも有効性を示すものと期待される。
1、実施例1で調製したマイタケ抽出物からの分画成分の調製
順相シリカゲル(BW-300、(株)富士シリシア化学製;内径35 mm x 280 mmのガラス製オープンカラム使用)を用いたカラムクロマトグラフィー法により、実施例1で調製したマイタケ抽出物(8.88g)を、15 mlのクロロホルム-メタノール(19:1)に溶解し、順相シリカゲルに添加後、順次移動相を変えながら(クロロホルム-メタノール(19:1、1000 ml使用)→クロロホルム-メタノール(9:1、800 ml使用)→クロロホルム-メタノール(4:1、800 ml使用)→メタノールのみ(1000 ml使用))分離して、約60 mlずつ分取した。分取した1番目のフラクションをFr1とし、全60フラクションを分離した。次に、分離した全フラクション(Fr1-60)から一部を取って、薄層シリカゲル(TLC)プレート(10 cm x 10 cm 、Silica gel 60F254 #1.05715.0009、メルク製)において展開溶媒(クロロホルム-メタノール(9:1))を用いて展開(展開距離:8 cm)した。分離成分はTLCプレートをUV (254 nm)照射後、10%硫酸試薬を噴霧し、さらに加熱することで検出した。その結果、同一成分群からなる以下の5分画(M1〜M5)を得た(表1)。すなわち、相対移動度(Rf値)が0.98≧Rf値≧0.50のフラクションをM1、Rf値が0.45≧Rf値≧0.29のフラクションをM2、Rf値が0.28≧Rf値≧0.16のフラクションをM3、Rf値が0.13≧Rf値≧0.07のフラクションをM4、Rf値が0.07>Rf値≧0のフラクションをM5として纏めた。また、各分画成分は減圧乾固後の収量として風袋消去法により算出した。なお、各成分を100% EtOHにて400 mg/mlに調整して細胞培養系に添加した。
1、実施例2で調製したマイタケ抽出物分画5(M5)の分画成分の調製
順相シリカゲル(BW-300、(株)富士シリシア化学製;内径40 mm x 300 mmのガラス製オープンカラム使用)を用いたカラムクロマトグラフィー法により、実施例2で調製したマイタケ抽出物分画5(M5)(1.2 g)を、20 mlのクロロホルム-メタノール-水(4:1:0.1)に溶解し、順相シリカゲルに添加後、順次移動相を変えながら(クロロホルム-メタノール-水(4:1:0.1、1700 ml使用)→メタノールのみ(300 ml使用))分離して、約50 mlずつ分取した。分取した1番目のフラクションをFr1とし、全38フラクションを分離した。次に、分離した全フラクション(Fr1-38) から一部を取って、薄層シリカゲル(TLC)プレート(10 cm x 10 cm、 Silica gel 60F254 #1.05715.0009、メルク製)において展開溶媒(クロロホルム-メタノール-水(4:1:0.1))を用いて展開(展開距離:8 cm)した。分離成分はTLCプレートをUV (254 nm)照射後、10%硫酸試薬を噴霧し、さらに加熱することで検出した。その結果、同一成分群からなる以下の8分画(M5-1〜M5-8)を得た(表2)。すなわち、相対移動度(Rf値)が0.32≧Rf値≧0.12のフラクションをM5-1、Rf値が0.24≧Rf値≧0.11のフラクションをM5-2、Rf値が0.39≧Rf値≧0.11のフラクションをM5-3、Rf値が0.39≧Rf値≧0.15のフラクションをM5-4、Rf値が0.20≧Rf値≧0.15のフラクションをM5-5、Rf値が0.19≧Rf値≧0.05のフラクションをM5-6、Rf値が0.11≧Rf値≧0.05のフラクションをM5-7、Rf値0のフラクションをM5-8として纏めた。また、各分画成分は減圧乾固後の収量として風袋消去法により算出した。なお、各成分を100% EtOHにて200 mg/mlに調整して細胞培養系に添加した。
正常ヒト線維芽細胞NB1RGB(RCB0222)は、(独)理化学研究所バイオリソースセンターより購入し、10% (v/v)ウシ胎仔血清(FBS)含有Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)を用いて培養した。マイタケ抽出物およびその分画成分(M1〜M5、M5-1〜M5-8)の処理は血清非存在下で実施した。すなわち、24 well multiplateまたは60 mm dishに培養したconfluentのヒト線維芽細胞を、マイタケ抽出物(25-400 μg/ml)、その分画成分(100-400 μg/ml)、またはインターロイキン1α(10 ng/ml、DSファーマバイオメディカル製)を含む0.2% (v/v) lactalbumin hydrolysate (LAH))/DMEMにて24または48時間処理した。
(1)全RNAの抽出
細胞からの全RNAの抽出および全RNAの定量は、実施例1の3の(1)に記載のように行った。
得られた全RNAを用いて、実施例1の3の(2)に記載のように1本鎖cDNAを合成した。
RT反応により合成した一本鎖cDNAを鋳型とし、ヒト前駆体コラゲナーゼ1 (procollagenase 1/proMMP-1プライマーキット(QuantiTect(登録商標)Primer Assays、カタログ番号 QT00014581、QIAGENより購入)、ヒト組織性マトリックスメタロプロテアーゼインヒビター2 (TIMP-2) プライマーキット (QuantiTect(登録商標)Primer Assays、カタログ番号 QT00017759、QIAGENより購入)およびヒトグリセルアルデヒド-3-リン酸脱水素酵素(GAPDH) (配列番号5、6)に特異的なプライマーを用いて、実施例1の3の(3)に記載のようにSYBR(登録商標) Premix Ex TaqTM II (タカラバイオより購入)により添付の操作法に従い、45サイクル(1サイクル:94℃で5秒間; 60℃で30秒間)のPCRを行うことで各cDNAを増幅した。結果はGAPDHを内標準遺伝子としてΔΔCt法を用いて相対的に定量した。
proMMP-1センスプライマー(配列番号9):5'-GGTGATGAAGCAGCCCAG-3'
proMMP-1アンチセンスプライマー(配列番号10):5'-CAGTAGAATGGGAGAGTC-3'
(Lin, N., Sato, T., Takayama, Y., Mimaki, Y., Sashida, Y., Yano, M., and Ito, A. Novel anti-inflammatory actions of nobiletin, a citrus polymethoxy flavonoid, on human synovial fibroblasts and mouse macrophages. Biochem. Pharmacol. 65:2065-2071, 2003.)を用いて実施することができる。
TIMP-2センスプライマー(配列番号11):5'-GGTACCAGATGGGCTGCGAG-3'
TIMP-2アンチセンスプライマー(配列番号12):5'-TTGGAGGCCTGCTTA-3'
(Hirata, M., Sato, T., Tsumagari, M., Shimada, A., Nakano, H., Hashizume, K., and Ito A. Differential regulation of the expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases by cytokines and growth factors in bovine endometrial stromal cells and trophoblast cell line BT-1 in vitro. Biol. Reprod. 68:1276-1281, 2003.)を用いて実施することができる。
細胞内DNA量はJohnson-WintとHollisの方法(Johnson-Wint, B., and Hollis, S. A rapid in situ deoxyribonucleic acid assay for determining cell number in culture and tissue. Anal. Biochem. 122: 338-344, 1982.)に従い測定した。すなわち、上記1で処理した細胞を0.25% (w/v) trypsin/0.02% (w/v) EDTA溶液(1.5 ml)を用いて各処理ごとに回収した。得られた細胞懸濁液を氷冷下、密閉式超音波細胞破砕装置 (コスモ・バイオ製) により 200 W、6 秒の超音波処理を 5 分間行ない試料溶液とした。試料溶液(100 μl)を160μlの3,5-diaminobenzoic acid dihydrochloride溶液(400 mg/ml)(シグマ・アルドリッチ製)と混合後、60℃、45 分間反応させた。反応終了後、1 N塩酸を1.5 ml添加し、試料溶液中の蛍光強度(励起波長:430 nm、蛍光波長:535 nm)をマイクロプレートリーダー(インフィニットF200、テカンジャパン製)にて測定した。なお、DNA量は鮭精巣由来DNA(和光純薬工業製)を用いて同様に作成した検量線より算出した。
上記1の24または48時間培養後から回収した培養液中のHA量は、HA ELISAキット(生化学工業より購入)により添付の操作法に従って定量した。すなわち、回収した各処理ごとの培養液中のHAを購入キットに添付のマイクロプレート上に固相化されたヒアルロン酸結合タンパク質(HABP)に結合させた後、ペルオキシダーゼ結合HABPを添加して反応させた。次に、tetramethylbenzidineおよび過酸化水素を加え、450 nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダー(インフィニットF200、テカンジャパン製)測定した。HA量は、標準HA溶液(50-800 ng/ml)を用いて同時に作成した検量線より算出した。または、各処理における単位細胞当りに産生されるHA量は、測定した各処理ごとのHA量を上記3で定量した各処理ごとのDNA量で割った値(ng/μg DNA)として表記した。
上記1の24または48時間培養後から回収した細胞培養液に最終濃度3.3% (w/v)のtrichloroacetic acidを添加して一晩4℃にて静置し、タンパク質を不溶化させた。不溶性タンパク質を遠心分離(10,000回転/分、10分)により沈殿させた後、1% (v/v) 2-mercaptoethanolを含むSDS-PAGE sample bufferに沈殿物を溶解させ、12.5% (w/v)ポリアクリルアミドゲルを用いてSDS-PAGEを行った。泳動終了後、ゲル中のタンパク質をニトロセルロース膜に転写し、定法に従いニトロセルロース膜をブロッキング溶液 [5% (w/v) fatty-free dry milk/80 mM Na2HPO4/100 mM NaCl/0.1% (v/v) Tween-20 (pH 7.5)]に浸し,1時間のブロッキングを行った。蒸留水およびPBS-T buffer [80 mM Na2HPO4/100 mM NaCl/0.1% (v/v) Tween-20 (pH 7.5)]にてそれぞれ2〜3回洗浄後、1% (w/v) BSA/PBS(-)で希釈した一次抗体[sheep anti-(human proMMP-1)またはanti-(human TIMP-2)IgG、それぞれ王立ロンドン大学ケネディーリウマチ研究所、永瀬秀明教授より分与]溶液に浸し室温で8時間以上緩やかに振とうした。一次抗体結合後、蒸留水およびPBS-T bufferにてそれぞれ2〜3回洗浄し、1% (w/v) BSA/PBS(-)で希釈した二次抗体[peroxidase-conjugated goat anti-(sheep IgG)IgG、シグマ・アルドリッチ製]溶液に室温で1時間浸した。二次抗体結合後、ECL-Western Blotting Detection kitのECL-Western Blotting Detection Reagents (Amersham Biosciences社より購入)に浸して正確に1分間反応させた。反応終了後、proMMP-1およびTIMP-2量をルミノ・イメージアナライザーLAS-1000 plus (富士フィルム社製)により定量した。
一次抗体
1) 抗ヒトMMP-1モノクローナル抗体(品番:F-67、第一ファインケミカル製)
2) 抗ヒトTIMP-1モノクローナル抗体(品番:F-26、第一ファインケミカル製)
二次抗体
peroxidase-conjugated rabbit anti-(mouse IgG)IgG(シグマ・アルドリッチ製)
Fisherの多変量分散分析法により各処理間の有意差検定を実施した。
(1)正常ヒト線維芽細胞NB1RGB(RCB0222)は恒常的にHAを産生しており、マイタケ抽出物 (25-100 μg/ml)はHA産生を増強した(図4)。すなわち、HA量は、未処理群において、15.37 ± 1.56 μg/μg DNAであるのに対し、25 μg/mlのマイタケ抽出物において24.79 ± 2.75 μg/μg DNAであり、50 μg/mlにおいて26.08 ± 2.19 μg/μg DNAであり、100 μg/mlにおいて20.57 ± 1.46 μg/μg DNAであった。マイタケ抽出物(100 μg/ml)により増加したHA産生は、HAS阻害剤の4MU (0.1-1 mM)により濃度依存的に阻害された。マイタケ抽出物はHAS遺伝子発現促進に起因してHA産生を促進する。
正常ヒト皮膚線維芽細胞において、マイタケ抽出物は肌に潤いを与えるHAの合成を促進する。よって、マイタケ抽出物は、重要な潤い成分であるHAの合成に起因した肌の活性化および改善(たとえば皮膚の水分保持機能の改善)を促すものと示唆される。さらに、マイタケ抽出物によるHA産生促進はそれぞれ異なる成分により調節される可能性が示唆される。
以下の配合でマイタケ抽出物を含有する化粧用クリームを作製した。
成分名 配合量(重量%)
マイタケ抽出物 2.0
オリーブ油 10.0
トリ(カプリル/カプリン酸)グリセリル 10.0
トコフェロール 1.0
精製水 77.0
合計 100.0
以下の配合でマイタケ抽出物を含有する医薬用クリームを作製した。
成分名 配合量(重量%)
マイタケ抽出物 10.0
オリーブ油 10.0
トリ(カプリル/カプリン酸)グリセリル 10.0
トコフェロール 1.0
精製水 69.0
合計 100.0
マイタケ抽出物の乾皮症に対するヒトでの効果
実施例5に示す、マイタケ抽出物を2重量%含有するクリームを用いて、乾皮症に対する効果の検討を行った。
被験対象: 老人保健施設「グッドウェル」内の乾皮症で落屑(皮膚が角質状となって脱落する症状を意味する)を有する患者(76〜97歳)12名(男性6名女性6名)
実施期間: 2006年12月〜2007年1月
方法: 落屑(皮膚が角質状となって脱落する症状を意味する)を基準として3段階(3:重症、2:中症、1:軽症)で被験者の皮膚状態を評価すると供に、マイタケ抽出物含有クリームを被験者の皮膚に適量塗布した。塗布部位は右下腕、左下腕、右下腿、左下腿で評価判定は部位ごとに行った。
以下に、塗布開始から1週間の被験者の皮膚状態の診断評価度(3:重症 2:中症 1:軽症)を示す。なお、診断評価度:0は、完治を示す。
Claims (3)
- 水分含量が6重量%以下である乾燥マイタケの子実体100重量部を、98.0容量%以上のエタノール400〜1000重量部により抽出した抽出液から、薄相シリカゲル上でクロロホルム:メタノール=9:1で展開して得られる、Rf値が0.98≧Rf≧0.50および/または0.07>Rf≧0である、ヒアルロン酸産生促進物質。
- 水分含量が6重量%以下である乾燥マイタケの子実体100重量部を、98.0容量%以上のエタノール400〜1000重量部により抽出すること、そして
該抽出液から、薄相シリカゲル上でクロロホルム:メタノール=9:1で展開して得られる、Rf値が0.98≧Rf≧0.50および/または0.07>Rf≧0であるヒアルロン酸産生促進物質を精製すること
を含む、ヒアルロン酸産生促進のための化粧料の製造方法。 - 水分含量が6重量%以下である乾燥マイタケの子実体100重量部を、98.0容量%以上のエタノール400〜1000重量部により抽出すること、そして
該抽出液から、薄相シリカゲル上でクロロホルム:メタノール=9:1で展開して得られる、Rf値が0.98≧Rf≧0.50および/または0.07>Rf≧0であるヒアルロン酸産生促進物質を精製すること
を含む、ヒアルロン酸産生促進のための医薬の製造方法。
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