CN111484549B - 一种美洲大蠊组织修复因子pa1及其应用 - Google Patents
一种美洲大蠊组织修复因子pa1及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及药物及日化领域,具体涉及一种促进组织修复的美洲大蠊新多肽及其应用,其结构如式I所示,命名为组织修复因子PA1。该新多肽在较低浓度下即可促进小鼠胚胎成纤维细胞的增殖和人永生化表皮细胞的迁移,毒副作用低,具有良好的应用前景,可用于制备治疗创伤、烫伤、溃疡的药物或改善皮肤美感的化妆品和日化用品。
Description
技术领域
本发明涉及药物及日化领域,具体涉及一种促进组织修复的多肽“组织修复因子PA1”及其应用。
背景技术
组织创伤后的愈合过程是各种修复细胞增殖、分化、迁移和凋亡的过程。炎症、溃疡、烫伤、创伤、手术以及先天性畸形等多种急慢性损伤可引起大面积皮肤缺损、难愈性溃疡和疤痕,并引发许多局部与全身系统的反应,其危害十分严重。多肽药物在促进创面愈合、预防疤痕及治疗慢性溃疡方面具有独特优势。其中表皮生长因子(hEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等多肽具有明显的修复创伤、护肤、抗皱和防衰老作用,但它们的制备成本高、稳定性较差,限制了其应用。
美洲大蠊(Periplaneta americana L.)为节肢动物门昆虫纲蜚蠊目蜚蠊科(Blattidae)大蠊属(Peripalneta)昆虫,俗称蟑螂,在我国广泛分布。作为一种传统中药,美洲大蠊具有悠久的入药历史,最早记录于《神农本草经》,称为蜚廉,用于治疗疮痈肿毒、小儿疳积等症。现代药理学研究表明,美洲大蠊具有明显的促进组织修复再生、抗肿瘤及抗肝炎作用(中国中药杂志,2007,32:2326-2331)。以美洲大蠊为主要原料制成的药物康复新液在治疗创伤、烫伤和消化道溃疡等方面具有良好疗效,但其有效成分有待深入研究。
发明内容
为了克服现有技术的不足和缺点,本发明的首要目的在于提供一种促进组织修复的新多肽“组织修复因子PA1”。
本发明的另一目的在于提供上述新多肽的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现:
一种促进组织修复的美洲大蠊新多肽,命名为“组织修复因子PA1(Tissue repairfactor PA1)”,其结构如式I所示:
pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg-Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu
式I;
所述的组织修复因子PA1的制备方法,包含以下步骤:
用含水乙醇提取粉碎或未粉碎的美洲大蠊虫体,提取物浓缩,加入10倍体积热水,保温静置分层,弃去上层油液。水溶液浓缩后经反相C-18柱色谱,采用液相色谱-质谱(HPLC-MS)方法分析跟踪检测,收集含多肽化合物的流份。总多肽再通过凝胶柱色谱和反相制备型HPLC分离纯化,真空冷冻干燥得到组织修复因子PA1冻干粉。
所述的热水的温度优选为70℃;
所述的组织修复因子PA1的制备,还可采用现有技术中的公知方法进行,既可以用多肽合成仪进行化学合成,也可以通过将多肽序列推导出核苷酸序列,然后克隆到表达载体中进行生物合成;
所述的组织修复因子PA1在制备促进组织修复或改善皮肤美感的产品中的应用;
优选的,所述的组织修复因子PA1在制备治疗创伤、烫伤、溃疡或改善皮肤美感的产品中的应用;
所述的产品优选为药物、化妆品或日化用品;
所述的药物、化妆品或日化用品中含有有效剂量的组织修复因子PA1,余量为辅料或其它可配伍的药物;
所述的辅料是指常规的赋形剂,如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂等;
所述的其它可配伍的药物,是指其它天然药物、化学药品或生物药物;
所述的药品、化妆品或日化用品可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、脂质体纳米粒、控释剂、凝胶膏剂、软膏剂、外用搽剂、贴剂(例如面膜)、霜剂(例如面霜)、洗涤剂(例如香波、香皂、泡沫浴或浴盐)、乳液、凝胶、爽肤水等;
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
(1)本发明从美洲大蠊中分离和鉴定了一种新多肽化合物,即组织修复因子PA1,其结构如式I所示。
(2)本发明的组织修复因子PA1可促进小鼠胚胎成纤维细胞的增殖和人永生化表皮细胞的迁移,具有促进组织修复作用。
(3)本发明的组织修复因子PA1可用于治疗消化道溃疡、口腔溃疡,并具有美白,去除皱纹、疤痕和色斑作用。
(4)本发明的组织修复因子PA1的毒性较低,在口服200mg/kg剂量下未观察到明显的毒副作用。
(5)本发明的组织修复因子PA1可以合成,易于大量制备。
附图说明
图1组织修复因子PA1的高分辨质谱图;
图2组织修复因子PA1经DTT还原、IAM烷基化后的HPLC-MS图;
图3组织修复因子PA1经胰蛋白酶酶解后的HPLC-MS图;
图4组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1a氨基酸测序谱图;
图5组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1b氨基酸测序谱图;
图6组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1a的MS,MS2质谱图;
图7组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1b的MS,MS2质谱图;
图8分离与合成所得组织修复因子PA1的HPLC-MS对比图;
图9组织修复因子PA1对Balb/c 3T3细胞增殖影响的结果分析图;
图10组织修复因子PA1对Hacat细胞迁移影响的结果分析图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步的描述,但本发明的实施方式不限于此。
以下实施方式涉及的液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析的条件如下:
仪器:Agilent 6210LC/MSD TOF液质联用仪,质量范围(m/z):100-1700,采集模式:正离子模式,Gas Temp:300℃,Dring Gas:11L/min,Nebulizer:35psig,Vcap:2000V,Fragmentor:175V,Skimmer:65V。分析柱为YMC C-8色谱柱(4.6×250mm,5μm),色谱条件:流动相A(体积分数0.1%的甲酸水),流动相B(乙腈),0min(A:B=95:5)至90min(A:B=10:50)梯度洗脱。
以下实施方式涉及的二级质谱分析的条件如下:
仪器:AB SCIEX Triple TOF5600+,质量范围:100-3000,采集模式:正离子模式,Curtain gas:40psi,Ion source gas1:55psi,Ion source gas2:55psi,Temperature:550℃,Ion voltage floating:5500V,Declustering potential:80V,Collision energy:40V。
实施例1组织修复因子PA1的分离和结构鉴定
(1)美洲大蠊药材1kg,粉碎成粗粉,用3倍质量的80%(v/v)乙醇溶液渗漉提取3次,每次24小时;合并提取液,减压浓缩至稠膏200~300mL,加入10~15倍体积热水(70℃),保温静置12小时,分层,弃去上层油液。水溶液浓缩后上样于反相C-18色谱柱,先用体积百分比为30%甲醇洗脱6个柱体积,再分别用体积百分比为50%和75%甲醇水溶液洗脱6个柱体积,用HPLC-MS分析跟踪检测,收集主要含多肽化合物的流份,合并流份,减压浓缩或真空干燥,得总多肽冻干粉(12g)。
(2)对步骤(1)所得冻干粉,纯水溶解后上样于Sephadex G-50色谱柱,以纯水为流动相,流速为0.5mL/min进行洗脱,经HPLC-MS分析检测,合并,得到3个亚流份Fr.G1~Fr.G3。
(3)将步骤(2)得到亚流份Fr.G2冷冻干燥后用水溶解,上样于HPLC色谱柱,以体积比为60:40的乙腈-水为洗脱剂,流速为3mL/min进行洗脱,收集保留时间29.5min的色谱峰,得到组织修复因子PA1(125mg)。
(4)组织修复因子PA1的结构鉴定
a.由高分辨质谱得到该多肽的分子量为5619.10Da(图1)。
b.还原及烷基化:取100μg的样品,溶解于200mM Tris-HCl(pH 8.6,1mg/mL EDTA,6M的胍盐)溶液中,加入2mg的DTT,立刻注入氮气5分钟,于55℃反应45分钟,再加入2.5mgIAM,于黑暗条件反应30分钟,反应完成后,HPLC分离纯化。取少量样品进行质谱分析,结果显示其分子量不变(图2),说明该多肽不含有半胱氨酸形成的二硫键。
c.酶解:步骤b反应后的样品50μg,溶解于100mM Tris-HCl pH 8.0的溶液中,加入一定量的胰蛋白酶稀释液,于37℃反应12h,经HPLC分析,表明该多肽可被胰蛋白酶酶解为两条肽段:PA1a和PA1b,其HPLC-MS分析图见图3。
d.制备PA1a和PA1b:色谱柱为YMC C-18(4.6×250mm,5μm);色谱条件,流动相A(水),流动相B(甲醇),0min→40min,10%B→50%B,40min→50min,50%B→90%B,梯度洗脱;柱温,28℃,收集目标峰,冷冻干燥得粉末样品PA1a和PA1b。
e.氨基酸测序和质谱测试:对步骤d中所得到的多肽片段PA1a和PA1b分别进行氨基酸降解测序,结果见图4和图5;进一步对样品PA1a和PA1b分别进行二级质谱测试,所得的结果分别见图6和图7。综合分析可得PA1a和PA1b的一级序列分别为PA1a:Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu;PA1b:pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg。根据胰蛋白酶酶解位点的专一性,确定组织修复因子PA1的序列如式I所示:pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg-Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu。
实施例2组织修复因子PA1的固相合成
采用多肽合成仪常规固相合成方法,经过树脂溶胀、脱保护、洗涤、氨基酸溶解、氨基酸活化、缩合、切割等过程,完成组织修复因子PA1的合成。采用液相-质谱联用的方法,对合成与分离的组织修复因子PA1样品进行对比,结果显示其保留时间和分子量均一致(图8)。
实施例3组织修复因子PA1对Balb/c 3T3细胞增殖的促进作用
将处于对数生长期的细胞(Balb/c 3T3细胞株,购自美国模式培养物集存库American Type Culture Collection,ATCC)用胰酶消化、离心、重悬后进行细胞计数,按10000个细胞/孔接种于96孔板中,轻拍至细胞分散均匀,PBS封闭。37℃、5%CO2培养过夜。细胞贴壁后弃去原培养基,再加入含有不同浓度“组织修复因子PA1”的DMEM培养基(含10%胎牛血清),37℃、5%CO2培养箱孵育24h。每孔加入MTT溶液30μL,继续培养4h,弃去上层MTT,每孔加入100μL DMSO,震荡10min使结晶物充分溶解,用酶联免疫检测仪在570nm处测定每孔OD值。计算细胞存活率,重复实验至少3次以上;
试验结果如图9所示,组织修复因子PA1在较低浓度(2.2~17.6μg/mL)下对Balb/c3T3细胞具有显著的促增殖作用(118%-122%)。
实施例4组织修复因子PA1对Hacat细胞迁移的促进作用
将对数生长期的HaCAT细胞(购自美国模式培养物集存库American Type CultureCollection,ATCC),胰酶消化,重悬,按3×106个/孔接种到12孔板,置37℃,5%CO2培养箱内培养至细胞长满培养孔。吸弃培养液,PBS洗涤,用无菌枪头在每个试验孔中央垂直于培养孔自上而下划线。用PBS洗去划痕产生的细胞团,使划痕边缘整齐。加入新鲜培养基以及组织修复因子PA1(4.4μg/mL),显微镜下拍照,继续置于细胞培养箱中培养。每隔12小时观察记录,所得图像数据用Image Pro Plus 6.0处理。在划痕每侧边缘均匀选取30个点,取其中线代表划痕边缘,测量划痕间距,并用以下公式计算划痕修复率:划痕修复率=(0h划痕宽度-不同时间点划痕宽度)/0h划痕宽度。
试验结果显示,组织修复因子PA1组HaCAT细胞的划痕修复率达54%(48小时),明显高于对照组38%(48小时)(图10),说明组织修复因子PA1能够明显促进HaCAT细胞的水平迁移。
实施例5组织修复因子PA1对小鼠皮肤创伤的修复作用
选取40只8~10周雄性昆明小鼠(购自广东省动物中心)分笼饲养。随机分为对照组,阳性药组(康复新液),PA1低剂量组(0.1mg/mL)和PA1高剂量组(0.2mg/mL)。将小鼠麻醉,背部脱毛、消毒后,利用直径为6mm的打孔器于小鼠背部裸露皮肤处行打孔,切除一圆形皮肤,包括表皮和真皮层,将伤口部位贴上透明透氧敷料,起到屏蔽和保护作用。给药组给予不同浓度PA1,对照组给予生理盐水。给药时轻轻揭起透明透氧敷料,滴加0.1mL药液滴于伤口,再贴上新的敷料。连续给药10d,每天给药两次,每天测量伤口面积大小变化,给药10天后处死小鼠。按公式创伤愈合率%=(S1-Sn)/S1(S1为第一天创伤面积,Sn为第n天创伤面积)计算创面愈合率。结果见表1。
表1小鼠创伤愈合率统计结果
注:与模型组相比,*P<0.05有显著性差异
试验结果表明,组织修复因子PA1能够明显促进小鼠皮肤创伤的愈合,与对照组比较具有显著性差异,且优于康复新液。
实施例6组织修复因子PA1对小鼠皮肤烫伤的修复作用
选取40只8~10周雄性昆明小鼠(购自广东省动物中心)分笼饲养,自由取食,实验前一天停止进食。用质量分数13%Na2S溶液涂抹脱毛,将20g的砝码置于水浴锅内一同加热至沸,维持10min,然后用钳子夹住砝码上端,迅速放在小鼠皮肤上5s,稍加压力,形成烫伤面积为2cm×2cm的浅Ⅱ度烫伤模型。次日,伤口滴加不同溶度的组织修复因子PA1(0.1mg/mL或0.2mg/mL)、生理盐水和康复新液各0.1mL,每日换药一次。于3、5、10天观察创面愈合情况。按实施例5的方法计算创面愈合率。结果见表2。
表2小鼠烫伤愈合率统计结果
注:与模型组相比,*P<0.05有显著性差异
试验结果表明,组织修复因子PA1能够明显促进小鼠皮肤烫伤的愈合,与对照组比较具有显著性差异,且优于康复新液。
实施例7组织修复因子PA1对大鼠应激性胃溃疡的保护作用
试验方法:取体重180~210g雄性SD大鼠50只(购自广东省动物中心),随机分为空白组、模型组、硫糖铝组(1g/kg,阳性药组)、低剂量组(组织修复因子PA1 1mg/kg)和高剂量组(组织修复因子PA1 2mg/kg)。给药组灌胃给药,连续7天。造模前24h禁食不禁水,除对照组外,采用束缚水浸法造模,将各组大鼠固定于鼠板,头向上垂直浸泡在恒温(20℃)水槽中8h,水面与大鼠剑突齐平。应激造模结束后,将大鼠颈椎脱臼处死,剖腹,结扎幽门。向胃内灌注体积分数10%甲醛溶液2mL,结扎贲门,取出胃体置于甲醛溶液中固定15min。沿胃大弯剪开,生理盐水冲洗后展开,观察胃黏膜损伤并计算胃溃疡指数。按Guth标准计算溃疡指数(UI):点状出血计为1分,线状出血长度<1mm为2分,1~2mm为3分,2~4mm为4分,>4mm为5分,宽度>1mm时分值×2。结果见表3。
表3大鼠溃疡指数统计结果
注:与模型组相比,*P<0.01有显著性差异
试验结果表明,组织修复因子PA1对大鼠应激性胃溃疡具有明显保护作用,与模型组比较具有显著性差异,其保护效果优于阳性药硫糖铝。
实施例8组织修复因子PA1对大鼠口腔溃疡的保护作用
试验方法:取体重180~210g健康SD大鼠40只(购自广东省动物中心),随机分为模型组、阳性药组(康复新液)、低剂量组和高剂量组,采用化学灼烧法造模。取一直径为5mm的塑料管,将浸透95%苯酚溶液的小棉球置于塑料管一端,将棉花端固定于麻醉大鼠左侧颊黏膜上,保留60秒,用生理盐水清洗灼烧面。24h后观察,左侧实验区形成圆形溃疡,表面有黄白色脓肿,与周边分界明显,周围黏膜红肿充血,溃疡面直径>3mm者即造模成功。实验组、模型组和阳性药组的溃疡面分别滴加不同溶度的组织修复因子PA1、生理盐水和康复新液各0.1mL,每日给药两次。于1、3、5天后观察溃疡面愈合情况。溃疡积分标准如下:无充血、水肿溃疡面直径<1mm记1分;轻度充血、水肿,溃疡面直径1~2mm记2分;中度充血、水肿,溃疡面直径2~3mm记3分;重度充血、水肿溃疡面直径>3mm记4分。结果见表4。
表4大鼠口腔溃疡愈合积分
注:与模型组相比,*P<0.05
试验结果表明,组织修复因子PA1能够明显促进大鼠口腔溃疡的愈合,与模型组比较具有显著性差异,且优于康复新液。
实施例9组织修复因子PA1的急性毒性实验
试验方法:取体重18~22g的昆明种小鼠(购自广东省动物中心),随机分组,每组10只,灌胃不同剂量的组织修复因子PA1,根据小鼠存活情况,计算半数致死剂量LD50。半数致死量按如下公式计算:半数致死剂量(mg/kg)=(小鼠一半死亡时的剂量/对应小鼠的体重)。
试验结果:组织修复因子PA1在200mg/kg的给药剂量下,未观察到小鼠死亡,说明它的毒性较低,LD50大于200mg/kg(表5)。
表5 PA对小鼠的急性毒性作用
实施例10组织修复因子PA1的皮肤安全性评价
受试人群:年龄18~55岁之间,女性15人,男性15人,总计30人。受试者皮肤健康,无皮肤病过敏史,符合受试者志愿入选标准。
试验方法:选用合格的斑贴器,以封闭式斑贴试验方法,将组织修复因子PA1约0.020~0.025mL(2mg/mL)滴于斑贴器内,外用专用胶带贴覆于受试者背部,24小时后去除试验品,分别于去除后0.5、6、12、24、48小时观察皮肤反应,按照《化妆品卫生规范》中皮肤反应分级标准记录其结果。
试验结果:本试验30名受试者通过斑贴试验,在0.5、6、12、24、48小时观察皮肤反应,均未观察到皮肤不良反应,说明本发明的组织修复因子PA1对皮肤使用安全。
实施例11片剂的制备
组织修复因子PA1 0.1g,乳糖40g,淀粉浆60g,硬脂酸镁0.2g,混合,过筛,干燥后压片。每片含PA1 0.001g。
实施例12注射剂的制备
组织修复因子PA1 0.1g,丙二醇50g,研磨,再加100mL注射用水稀释,混匀,然后加入氯化钠9g,溶解后再加入注射用水至1000mL,调pH值5.5~6.5,滤过,灌封,灭菌,即得1000支注射用针剂。
实施例13固体脂质纳米颗粒的制备
组织修复因子PA1 0.1g,大豆卵磷脂500mg,溶于25mL乙醇中,另取硬脂酸200mg和大豆卵磷脂500mg溶于25mL环己烷中,混合搅拌均匀;于37℃恒温水浴中减压旋转蒸发除去有机溶剂,使药物及辅料在烧瓶壁形成均匀脂质薄膜,于真空干燥器中放置过夜,除尽有机溶剂;另取聚乙二醇单硬脂酸酯3750mg,搅拌溶解在175mL水中,加入上述薄膜中,超声10min,定容至250mL,得淡黄色透明溶液;将此溶液冷冻干燥可得冻干粉。用球磨机研磨24小时,制得粒径均匀的纳米粒,混匀并分装。每袋含组织修复因子PA1 0.001g。
实施例14控释胶囊的制备
组织修复因子PA1 0.1g,乳糖40g和淀粉浆10g,直接装到旋转制粒机/包衣器制备颗粒,将稀释到质量分数为15%固体的塑化乙基纤维素包衣剂悬浮液喷雾到多肽颗粒的旋转床上。在喷雾期间,用泊洛沙姆188制成的分散体载体膜包衣颗粒,形成平均颗粒度大约为450μm的持续释放的颗粒。混匀装入胶囊,每个胶囊含组织修复因子PA1 0.001g。
实施例15外用凝胶膏剂的制备
称取甘油2g,依次加入聚丙烯酸0.75g和氢氧化铝0.1g,充分混合,加入组织修复因子PA1 0.2g,在真空条件下充分搅拌混合得①;另外称取纯化水5g,将乳酸0.06g、羧甲基纤维素钠0.1g溶解在水得②;将②加入到①中,在真空条件下充分搅拌,经交联反应得到含药膏体,将含药膏体涂布(控制含药膏体层厚度在1.0mm左右),裁剪成常规贴膏剂的规格,每贴含药物的量为0.02g,晾干,包装。
实施例16软膏剂的制备
硬脂醇40g与白凡士林45g在水浴中熔化,加热至75℃,备用。十二烷基硫酸钠1.46g,羟苯甲酯0.025g,羟苯丙酯0.015g,丙二醇13g,组织修复因子PA1 0.2g依次溶于水中,加热至75℃,将75℃硬脂醇与白凡士林加入,搅拌至冷,制成含组织修复因子PA10.2%的软膏剂。
实施例17外用搽剂的制备
取组织修复因子PA1 0.1g,溶解于45mL蒸馏水中,过滤,滤液加入甘油5mL,氮酮1mL,蒸馏水补足体积至50mL,制成含组织修复因子PA1 0.2%的外用搽剂。
实施例18面霜的制备
将26号白油1g,十八醇1g,硬脂酸1g,单甘脂0.5g,350硅油0.05g,GTCC 0.5g,尼泊金甲酯0.03g混合,加热到90℃,制成第一半成品;在第一半成品中加入去离子水4g、组织修复因子PA10.1g、平平加-20 0.3g、甘油0.5g,并加热到80℃,形成第二半成品;将第二半成品在80℃下进行2次均质(转速3000转/分钟,时间10分钟)后继续搅拌30分钟,冷却到45℃形成膏霜状后加入0.005g卡松,混匀,得到含1%组织修复因子PA1的面霜。
实施例19面膜的制备
将组织修复因子PA1 0.1g溶解于10mL去离子水中,过滤,滤液与甘油润湿的卡波姆0.3g混合,加入三乙醇胺,调节pH值为6~7,均匀涂布于面膜纸,制成每张含有组织修复因子PA1 0.01g的面膜。
实施例20爽肤水的制备
将0.1g组织修复因子PA1配置为0.2mg/mL的水溶液;将甘油5g加入透明质酸1g中分散,加水溶解,搅拌均匀,得透明质酸溶液;将海藻糖1g和尿囊素1g用水溶解后与上述透明质酸溶液混合,搅拌均匀,得混合溶液;将多肽溶液、D-泛醇1g、燕麦β-葡聚糖10g、1,2-戊二醇10g和防腐剂0.05g依次加入上述混合溶液,加水搅拌均匀,即得爽肤水。
实施例21乳液的制备
(1)将0.1g组织修复因子PA1配置为0.2mg/mL的水溶液;
(2)将0.05g透明质酸钠加水溶解分散,搅拌均匀,得透明质酸溶液;
(3)将甘油5g、丁二醇3g、海藻糖2g、尿囊素0.2g、增稠剂0.1g,用水溶解,加热至75℃;
(4)将霍霍巴籽油2g、氢化聚癸烯3g、聚二甲基硅氧烷2g、辛酸/癸酸三甘油酯3g、乳化剂3g加热至75℃,搅拌均匀;
(5)将步骤(3)制得的产物快速倒入步骤(4)制得的产物中,恒温均质3~5min,冷却;
(6)冷却至60℃以下,加入(1)、(2),均质;冷却至40℃以下,加入防腐剂和香精,即得乳液。
实施例22洁面啫喱的制备
将0.1g组织修复因子PA1配置为0.2mg/mL的水溶液;将上述多肽溶液、甘油2.5g、癸基葡糖苷3g、椰油酰苹果氨基酸钠3g、月桂醇聚醚硫酸酯钠1.5g、增溶剂0.1g、香精0.05g依次加入水中搅拌,再加入增稠剂0.5g,搅拌至完全溶胀即可得洁面啫喱。
实施例23组织修复因子PA1乳液的美容效果评价
1.1试验品:本发明实施例21制备的多肽乳液
1.2受试人群:年龄18~55岁之间,女性18人,男性12人,总计30人。受试者皮肤有皱纹,色斑,色泽暗哑,以及皮肤上留有微创、手术后疤痕等不美观因素。
1.3测试方法:受试者皮肤清洁后,将实施例21制备的乳液涂覆到皮肤上,观察和感受使用效果。
1.4测试评估结果如下:
表6组织修复因子PA1乳液的试用(8周)反馈总结表
受试者表示,使用组织修复因子PA1乳液产品,可提高肌肤含水量,增强肌肤保湿力和皮肤弹性,提高肌肤水嫩润泽感。该产品具有美白,去皱纹、疤痕和色斑的效果。受试者未出现过敏现象。
实施例24组织修复因子PA1面膜的美容效果评价
1.1试验品:本发明实施例19制备的组织修复因子PA1面膜
1.2受试人群:年龄18~58岁之间,女性21人,男性9人,总计30人。受试者脸部皮肤有皱纹,色斑,色泽暗哑,以及皮肤上留有微创、手术后疤痕等不美观因素。
1.3测试方法:受试者脸部清洁后,将实施例19制备的组织修复因子PA1面膜涂覆于面部,每日一次,观察和感受使用效果。
1.4测试评估结果如下:
表7组织修复因子PA1面膜的试用(8周)反馈总结表
受试者表示,使用组织修复因子PA1面膜产品,可提高肌肤含水量,增强肌肤保湿力和皮肤弹性,提高肌肤水嫩润泽感。产品具有美白,去皱纹、疤痕和色斑的效果。受试者未出现过敏现象。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 暨南大学
<120> 一种美洲大蠊组织修复因子PA1及其应用
<130> 1
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 56
<212> PRT
<213> Natural Sequence
<220>
Claims (12)
1.一种促进组织修复的美洲大蠊多肽,所述多肽为组织修复因子PA1(Tissue repairfactor PA1),其结构如式I所示:
pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg-Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu
式I。
2.权利要求1所述的美洲大蠊多肽在制备促进组织修复或改善皮肤美感的产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的美洲大蠊多肽在制备促进组织修复或改善皮肤美感的产品中的应用,其特征在于:
所述的产品为药物或日化用品。
4.根据权利要求3所述的美洲大蠊多肽在制备促进组织修复或改善皮肤美感的产品中的应用,其特征在于:
所述的产品为化妆品。
5.一种含有促进组织修复的美洲大蠊多肽的组合物,其特征在于,所述多肽为组织修复因子PA1(Tissue repair factor PA1),其结构如式I所示:
pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg-Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu
式I。
6.根据权利要求5所述的组合物,其特征在于:
所述组合物为药物或日化用品,其剂型选自片剂、胶囊剂、注射剂、脂质体纳米粒、控释剂、凝胶膏剂、软膏剂、外用搽剂、贴剂、霜剂、洗涤剂、乳液、凝胶或爽肤水。
7.根据权利要求5所述的组合物,其特征在于:
所述组合物为化妆品,其剂型选自片剂、胶囊剂、注射剂、脂质体纳米粒、控释剂、凝胶膏剂、软膏剂、外用搽剂、贴剂、霜剂、洗涤剂、乳液、凝胶或爽肤水。
8.根据权利要求6所述的组合物,其特征在于:
所述的药物或日化用品中含有有效剂量的组织修复因子PA1,余量为辅料或其它可配伍的药物。
9.根据权利要求7所述的组合物,其特征在于:
所述的化妆品中含有有效剂量的组织修复因子PA1,余量为辅料或其它可配伍的药物。
10.根据权利要求5所述的组合物,其特征在于:
所述组合物还含有辅料,所述辅料还含有为溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂或粘合剂。
11.权利要求5所述的组合物在制备治疗创伤、烫伤、溃疡的药物中的应用。
12.权利要求5所述的组合物在制备护肤、预防疤痕、抗皱和防衰老制剂的应用。
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