JP5808054B2 - Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 - Google Patents
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Description
本発明者らは、高度免疫不全動物NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、NOGマウスに移植した後に、その組織構築を形態学的に観察すれば、その階層構造の形成過程とそこへの癌幹細胞の関与、又はその生物学的特性について解明できるものと考え、以下の研究を行った。
また近年、幹細胞が多分化能を獲得する、reprogrammingという現象には、P53などの蛋白質発現の減少が関与することが明らかになっている。そこでP53蛋白に対する免疫染色を行ったところ、同モデルで見出される癌幹細胞においてもこの、P53蛋白発現が減少していることが示された(図10)。以上から、本モデルでは、reprogrammingという癌幹細胞の生物学的特性が、忠実に再現されていることが明らかになった。
〔1〕高度免疫不全NOD/SCID/gamma(c)(null) (NOG)マウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、同一又は異なる種に属する非ヒト動物に移植することによって得られる非ヒト動物モデル。
〔2〕ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスが再現されていることを特徴とする、〔1〕に記載の非ヒト動物モデル。
〔3〕ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスを再現する性質を具備する固有の癌幹細胞が見出せ、その生物学的特性を検討できることを特徴とする、〔1〕に記載の非ヒト動物モデル。
〔4〕ヒト癌組織の階層構造の再現過程で、完全上皮間葉転換(Complete-EMT)により癌細胞が腫瘍間質を形成する線維芽細胞へと転換する過程を見出せることを特徴とする、〔1〕に記載の非ヒト動物モデル。
〔5〕〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載の非ヒト動物モデルに抗癌剤が投与され、癌細胞の階層構造、その癌進展プロセス、その生物学的特性、又はそれが示す完全上皮間葉転換(Complete-EMT)の変動を指標として評価することで、抗癌剤抵抗性の成因を検討することができる非ヒト動物モデル。
〔6〕前記ヒト腫瘍組織が、大腸癌、胃癌、乳癌、肺癌、又は膵臓癌由来の腫瘍組織であることを特徴とする、〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載の非ヒト動物モデル。
〔7〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤ターゲット探索方法。
〔8〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔7〕に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(3)(2)において採取した組織片についてDNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(4)組織片中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
〔9〕下記(1)〜(3)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔7〕に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)特徴構造を再現した培養細胞の、DNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
〔10〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤のスクリーニング方法。
〔11〕下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス及びその生物学的特性を同定する工程
〔12〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
〔13〕下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
〔14〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤スクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
〔15〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、ヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
〔16〕下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔15〕に記載の医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
〔17〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔15〕に記載のヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
〔18〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物又はNOG樹立癌細胞株を、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性が再現された癌モデル動物又は細胞株として使用する方法。
本発明の動物モデルは、ドナー動物である高度免疫不全NOD/SCID/gamma(c)(null) (NOG)マウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、レシピエント動物に皮下、諸体腔あるいは諸臓器への移植によって作製することができる。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(3)(2)において採取した組織片についてDNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(4)組織片中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)特徴構造を再現した培養細胞の、DNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
再現とは、該モデルの使用の目的に応じて、所定の目的を達成できる程度に実現されていればよいことを意味し、必ずしも生体内で起きていることがそのままそっくり実現されていることを要しない。
なお本明細書において引用されたすべての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
〔実施例1〕NOG樹立癌細胞株はヒト癌組織の階層構造を再現する。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
NOGマウスに、ヒト大腸癌、胃癌、肺癌、乳癌および膵臓癌を3代以上移植・継代可能な事を樹立の条件とて作製したNOG樹立癌細胞株を用いた(Fujii E. et al., Pathol Int. 2008; 58: 559-567)。本実施例では、NOG樹立癌細胞株を、NOGマウスへ皮下移植後28日後に剖検し、移植片を摘出して4% paraformaldehydeにて、4℃ 、16から24 時間の条件で固定後、AMeX法にて包埋して薄切組織標本を作製した(Fujii E. et al., Pathol Int. 2008; 58: 559-567)。組織はHE染色及び免疫組織化学染色(IHC)を実施し、一次抗体には抗E-cadherin抗体(DakoCytomation社製)ならびに抗Fibronectin抗体(DakoCytomation社製)を使用し、LSAB法を用いDABにより発色した(DAB Mapキット;ロシュ・ダイアグノスティック社製)。
ヒト大腸癌組織の上皮様腺腔領域では、細胞全周にE-カドヘリンが発現することが特徴といわれているが(Kirchner T. et al., Am J Pathol. 2000; 157: 1113-1121)、この特徴がNOG樹立癌細胞株において認められた(図1)。また上記in vitro条件下では、スフェロイド形成細胞が腺腔構造を再現することが示された(図2)。
以上の結果より、NOG樹立癌細胞株はヒト癌組織の階層構造を再現することが明らかとなった。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
移植元ヒト大腸癌組織の組織形が、(1)高分化型腺癌、(2)中分化型腺癌、(3)低分化型腺癌であったNOG樹立癌細胞株を、NOGマウスへ皮下移植後3、7、14、17あるいは21日後に剖検し、上記同様にHE染色及びIHCを施して、上皮様領域と浸潤部領域の比率を形態学的に求めた。
また、胃癌、大腸癌、肺癌において、その組織構築の繰り返し再現性を確認する目的で、移植元癌組織及びNOG樹立癌細胞株のHE染色標本の観察を行った。
移植元ヒト大腸癌組織の階層構造を呈するにいたる、固有の癌進展プロセスを、高分化腺癌の場合、上皮様増殖プロセス(Epithelial duct forming pattern)を主体に、中分化腺癌の場合、上皮様増殖を含みながら浸潤増殖プロセス(Invasive EMT pattern)を主体に、低分化腺癌の場合、もっぱら浸潤増殖プロセスを、それぞれ経ることが明らかになった。
またこの各株に固有の階層分化は、複数回の移植継代によっても、繰り返し再現可能であった(図5)。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
癌幹細胞は一般に、細胞回転が非常に遅い低増殖細胞である事が知られている(Li L, Neaves WB. Cancer res. 2006; 66: 4553-4557)。この性質に注目し、NOG樹立癌細胞株をNOGマウスへの皮下移植時に同時に細胞分裂期に取り込まれるBrdUの持続ラベルを開始し、14日間ラベル後、剖検し組織処理した。同組織を上記同様にHE染色による形態観察に加え、BrdU取り込み細胞のIHC染色による検出(抗体:Beckton Dickinson社製)、ならびに細胞分裂期マーカーとしてKi67抗体(DakoCytomation社製)を用いたIHC染色を行い、増殖細胞と低増殖細胞を同定した。さらにこれと隣接する標本に、癌幹細胞マーカーとして知られるLgr5に対する抗体(MBL社製)を使用したIHC染色を施した(McDonald SAC, et al., Virchows Arch. 2009;455:1-13)。
BrdU持続ラベルを実施した組織において、一部ラベルされない細胞が上皮様増殖および浸潤増殖の両領域に認められ、同細胞はKi67陰性であった。これより両領域に癌幹細胞の特徴として知られる、細胞回転の非常に遅い低増殖細胞が存在するものと考えられ、この標本と隣接する標本を、癌幹細胞マーカーであるLgr5にて染色すると、低増殖細胞の存在部と一致する染色像を得た(図6)。これらの低増殖細胞は、上皮様増殖部と浸潤増殖部のそれぞれに見出された(図7)。以上と実施例2の階層構造を取る過程を考え合わせると、癌幹細胞の存在部の推移とその階層構造形成は、図8のようになる事が示された。
(1)NOG樹立癌幹細胞株及び染色法
NOG樹立癌細胞株をNOGマウスへの皮下移植時に同時にIdU持続ラベルを開始し、28日間ラベル後に剖検し、次世代へのIdU標識済み移植細胞株を調整した。この細胞株の、次世代への移植と同時に、BrdU持続ラベルを開始し、これを移植後3日に解剖して、組織処理を行った。以上から得た連続組織標本を、IdUならびにBrdUを検出する抗体(Beckton Dickinson社製)と、BrdUのみを検出する抗体(Serotec社製)により、IHC染色により検出し、増殖細胞と低増殖細胞の、世代をまたいだ変動を検出した。
図9に示すごとく、2世代目、移植後3日の標本を、IdUならびにBrdUを検出する抗体にてIHC染色をした場合、陽性染色が得られるが、BrdUのみを検出する抗体で染色した場合、陰性となる細胞が見出された。以上の染色結果から、これらの細胞は1世代目でIdUを取り込んだが、2世代目ではBrdUを取り込んでいないことが示され、これは1世代目では細胞分裂を行った分化細胞が、2世代目では増殖を止め、低・非増殖細胞化(幹細胞化)したものと考えられた。
(1)NOG樹立癌幹細胞株及び染色法
近年、いわゆるinduced pluripotent stem (iPS)細胞を作製する際、P53蛋白の発現を減弱させると、その作製効率が飛躍的に向上することから、体細胞のreprogrammingによる幹細胞化には、同蛋白が関与する事が示され、またこの機構の癌幹細胞における重要性が指摘されている(Krizhanovsky V and Lowe SW, Nature 2009; 460: 1085-6)。
多くの癌でP53の過剰発現が報告されているが(Toledo F and Wahl GM., Nature rev cancer 2006; 6: 909-923)、今回NOG樹立癌細胞の多くにおいても、同蛋白の過剰発現が観察された。一方で、BrdU弱陽性及び陰性細胞に一致して、P53の発現が減弱あるいは消失していた(図10)。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
NOG樹立癌細胞株のNOGマウスへの皮下移植後14日に各動物を剖検して得た腫瘍塊に、ヒト特異的なβ2 microglobulinに対するIHC染色を施して種の由来を検討した。
また、in vitro培養前に、播種する細胞の種の由来をヒト特異的なAnti-Human HLA-ABC Antigen/RPE(DAKO, Cat. No. R7000)抗体と、マウス特異Anti-mMuse MHC classI(Abcam, Cat. No. ab15680-50)抗体を使用したフローサイトメトリーにて確認した後、これを培地1で培養して線維芽細胞様細胞の出現を追跡した。
腫瘍間質に、ヒト由来の線維芽細胞が観察された(図11)。
また、培養前に90割程度がヒト細胞であることを確認した細胞を実施例1で用いた培地1で培養し、線維芽細胞の出現が確認された(図12)。
(1)NOG樹立癌細胞株由来の抗がん剤抵抗性細胞の検出
高分化型腺癌ならびに中分化型腺癌を、各3例のNOGマウスに移植後7日、10日、14日の計3回、5-fluorouracil (5-FU;Mayne Pharma)の100 mg/kgを腹腔内投与し、最終投与の翌日(移植後15日)に腫瘍塊を採集した。これを上記と同様の方法でHE染色標本を作製し、溶媒を投与した対象群(3例)より作製した標本と病理組織学的に比較した。
表2および図13に示す通り、対象群と比較して、高分化型腺癌では高度に分化した管腔構造部が減少し、管腔構造の不明瞭な低分化腺管が顕著に観察された。中分化腺癌では簇出像が減少し低分化腺管を主体とした組織像を呈した。以上の結果から、高分化型腺癌で増殖が活発な上皮様増殖プロセスにより形成される管腔構造部、ならびに中分化型腺癌の浸潤増殖プロセスでみられる簇出部が、抗がん剤に感受性であり、低分化な腺管が抗がん剤に抵抗性であることを示された。
以上のように、抗がん剤抵抗性を示す特徴的な細胞群・組織構造が認められたことから、これらが選択されるプロセス、長期間の薬剤処置に抵抗性を獲得するプロセス、ならびに抗がん剤治療後の再発プロセスなどを、本モデルにより検討できることを示しているものと考えられる。従って、本モデルを使用すると、これらのプロセスに関与する因子の探索や、それをターゲットとした薬剤探索ならびにスクリーニングが、可能であることが示された。
Claims (16)
- 高度免疫不全NOD/SCID/gamma(c)(null) (NOG)マウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、同一又は異なる種に属する非ヒト動物に移植することによって得られる非ヒト動物モデルであって、ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスが再現されている非ヒト動物モデル。
- ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスを再現する性質を具備する固有の癌幹細胞が見出せ、その生物学的特性を検討できることを特徴とする、請求項1に記載の非ヒト動物モデル。
- ヒト癌組織の階層構造の再現過程で、完全上皮間葉転換(Complete-EMT)により癌細胞が腫瘍間質を形成する線維芽細胞へと転換する過程を見出せることを特徴とする、請求項1に記載の非ヒト動物モデル。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の非ヒト動物モデルに抗癌剤が投与され、癌細胞の階層構造、その癌進展プロセス、その生物学的特性、又はそれが示す完全上皮間葉転換(Complete-EMT)の変動を指標として評価することで、抗癌剤抵抗性の成因を検討することができる非ヒト動物モデル。
- 前記ヒト腫瘍組織が、大腸癌、胃癌、乳癌、肺癌、又は膵臓癌由来の腫瘍組織であることを特徴とする、請求項1〜3のいずれかに記載の非ヒト動物モデル。
- NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、再現されたヒト癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤ターゲット探索方法。
- 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項6に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(3)(2)において採取した組織片についてDNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(4)組織片中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程 - 下記(1)〜(3)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項6に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)特徴構造を再現した培養細胞の、DNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程 - NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、再現されたヒト癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤のスクリーニング方法。
- 下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス又はその生物学的特性を同定する工程 - 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程 - 下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程 - 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤スクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程 - NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、再現されたヒト癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、ヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
- 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項14に記載の医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程 - 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項14に記載のヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
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JP2015057974A (ja) * | 2013-09-18 | 2015-03-30 | 学校法人順天堂 | 患者原発性大腸癌の個別化転移モデルマウスの作製方法 |
EP3310159A4 (en) * | 2015-06-16 | 2019-02-20 | The Jackson Laboratory | GENETICALLY MODIFIED NON-MENTAL ANIMALS AND METHOD FOR COMPLEMENTARY CYTOTOXICITY |
CN107921173B (zh) * | 2015-08-03 | 2021-07-06 | 富士胶片株式会社 | 细胞结构体、非人模型动物、非人模型动物的制造方法及被检验物质的评价方法 |
CN105296430B (zh) * | 2015-09-29 | 2018-08-17 | 浙江大学 | 一种人类结肠癌细胞系dxh-1及其应用 |
JP6915692B2 (ja) * | 2017-08-21 | 2021-08-04 | 凸版印刷株式会社 | 抗がん効果の評価方法、及びがん免疫療法の奏効性予測方法 |
CN111670247B (zh) * | 2017-12-08 | 2024-01-05 | 京诊断株式会社 | 制备癌球状体的方法和选择结直肠癌患者的方法 |
CN108977410B (zh) * | 2018-08-02 | 2023-04-25 | 郭世伟 | 中国人胰腺癌原位癌细胞系 |
CN112544567B (zh) * | 2019-09-10 | 2022-11-01 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 髓母细胞瘤动物模型及其建立与应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006051984A1 (ja) * | 2004-11-15 | 2006-05-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 癌細胞の転移抑制方法およびそのために使用する医薬組成物 |
WO2007064945A2 (en) * | 2005-12-01 | 2007-06-07 | Pronai Therapeutics, Inc. | Cancer therapies and pharmaceutical compositions used therein |
WO2007132883A1 (ja) * | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Yokohama City University | 肝臓癌の鑑別、疾患ステージの判定又は予後の予測方法及びキット |
JP2008500838A (ja) * | 2004-06-01 | 2008-01-17 | プロネイ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 遺伝子発現の阻害に関する方法および組成物 |
JP2008102012A (ja) * | 2006-10-19 | 2008-05-01 | Kanazawa Univ | 癌幹細胞の同定および単離方法 |
JP2008514205A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | 財団法人実験動物中央研究所 | Nogマウスを用いた高転移性細胞株の樹立 |
Family Cites Families (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5573924A (en) | 1992-09-08 | 1996-11-12 | Immunex Corporation | CD27 ligand |
US6984522B2 (en) * | 2000-08-03 | 2006-01-10 | Regents Of The University Of Michigan | Isolation and use of solid tumor stem cells |
US8044259B2 (en) | 2000-08-03 | 2011-10-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Determining the capability of a test compound to affect solid tumor stem cells |
WO2002043477A1 (en) | 2000-12-01 | 2002-06-06 | Central Institute For Experimental Animals | Method of constructing mouse suitable for the take, differentiation and proliferation of heterogenous cells, mouse constructed by this method and use of the mouse |
WO2003104401A2 (en) | 2002-06-05 | 2003-12-18 | Avalon Pharmaceuticals, Inc. | Cancer-linked gene as target for chemotherapy |
WO2004101775A1 (ja) | 2003-05-16 | 2004-11-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 新規な成体組織由来の幹細胞およびその用途 |
CA2447400A1 (en) | 2003-09-12 | 2005-03-12 | The Hospital For Sick Children | Brain tumor stem cells |
WO2005035740A1 (ja) | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 無血清馴化したゲノム改変細胞 |
JP2005206508A (ja) | 2004-01-22 | 2005-08-04 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 悪性腫瘍細胞増殖抑制抗体 |
CN1980957A (zh) | 2004-03-23 | 2007-06-13 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 受体偶联剂及其治疗用途 |
WO2005111076A1 (en) | 2004-05-12 | 2005-11-24 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Nectin 4 (n4) as a marker for cancer prognosis |
WO2006014999A2 (en) | 2004-07-27 | 2006-02-09 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of use for modulators of nectin 4, semaphorin 4b, igsf9, and kiaa0152 in treating disease |
CA3218940A1 (en) | 2004-11-12 | 2006-05-18 | Cambridge University Technical Services Ltd. | Methods and means related to cancer stem cells |
EP2511299A1 (en) | 2005-04-19 | 2012-10-17 | Seattle Genetics, Inc. | Humanized anti-CD70 binding agents and uses thereof |
WO2006138275A2 (en) | 2005-06-13 | 2006-12-28 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
JP2009502156A (ja) | 2005-07-26 | 2009-01-29 | プロキュア・セラピューティクス・リミテッド | 幹細胞マーカー |
EA016186B1 (ru) | 2005-09-26 | 2012-03-30 | Медарекс, Инк. | Человеческие моноклональные антитела к cd70 и их применение |
US20070220621A1 (en) | 2005-10-31 | 2007-09-20 | Clarke Michael F | Genetic characterization and prognostic significance of cancer stem cells in cancer |
AU2006308847C1 (en) | 2005-10-31 | 2012-05-10 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
EP1792979A1 (en) | 2005-12-01 | 2007-06-06 | Stiftung Caesar Center of Advanced European Studies and Research | Cell culture system for the enrichment and expansion of stem cells |
MX2008015492A (es) | 2006-06-06 | 2009-02-12 | Univ Tennessee Res Foundation | Composiciones enriquecidas en celulas madre neoplasicas y metodos que las contienen. |
CN101506352B (zh) | 2006-08-11 | 2013-05-29 | 达沃斯Ao研究所 | 鉴别和选择定向分化为特异类型的干细胞以获得均质干细胞群 |
US20110182904A1 (en) | 2006-09-05 | 2011-07-28 | Deborah Zimmerman | Antibodies to bone morphogenic proteins and receptors therefor and methods for their use |
WO2008033393A2 (en) | 2006-09-11 | 2008-03-20 | University Of Florida | Isolation, expansion and uses of tumor stem cells |
GB2442059A (en) | 2006-09-19 | 2008-03-26 | Ist Superiore Sanita | Test for cancer of the gastrointestinal tract |
KR101493779B1 (ko) | 2006-10-12 | 2015-02-16 | 츄가이 세이야꾸 가부시키가이샤 | 항 ereg 항체를 이용하는 암의 진단 및 치료 방법 |
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JP2008182912A (ja) | 2007-01-29 | 2008-08-14 | Nippon Kayaku Co Ltd | 癌幹細胞の培養方法、および癌幹細胞 |
BRPI0811857A2 (pt) | 2007-05-14 | 2014-10-21 | Biogen Idec Inc | Regiões fc (scfc) de cadeia simples, polipeptídeos de aglutinação que as compreendem e métodos relacionados. |
WO2008149803A1 (ja) | 2007-06-06 | 2008-12-11 | The University Of Tokyo | 表面抗原マーカーを用いた急性リンパ性白血病における癌幹細胞の分離同定方法 |
EP2173379B2 (en) | 2007-07-02 | 2023-07-05 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
EP2022848A1 (en) | 2007-08-10 | 2009-02-11 | Hubrecht Institut | A method for identifying, expanding, and removing adult stem cells and cancer stem cells |
EP2188367A4 (en) | 2007-08-10 | 2010-10-27 | Whitehead Biomedical Inst | HORMONE REACTIVE TISSUE CULTURE SYSTEM, AND USES THEREOF |
GB2465940A (en) | 2007-10-01 | 2010-06-09 | Hospital For Sick Children | Neural tumor stem cells and methods of use thereof |
WO2009064301A1 (en) | 2007-11-15 | 2009-05-22 | The Johns Hopkins University | Methods for detecting and monitoring circulating cancer stem cells |
WO2009111067A2 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-11 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal -like tumor cells or their formation |
CN102076865B (zh) | 2008-05-02 | 2016-03-16 | 西雅图基因公司 | 用于制造核心岩藻糖基化降低的抗体和抗体衍生物的方法和组合物 |
US20110111434A1 (en) | 2008-07-15 | 2011-05-12 | Huang Emina H | Colon stem cells associated with colitisand colorectal cancer and methods of use |
WO2010016766A2 (en) | 2008-08-08 | 2010-02-11 | Koninklijke Nederlandse Akademie Van Wetenschappen | Antibodies recognizing endogenous human lgr5 and/or lgr6 |
JP2012511305A (ja) | 2008-12-12 | 2012-05-24 | オンコセラピー・サイエンス株式会社 | 癌の治療および診断の標的遺伝子としてのネクチン−4 |
CN102405237A (zh) | 2009-03-06 | 2012-04-04 | 卡罗拜奥斯制药公司 | 利用EphA3抗体治疗白血病和慢性骨髓增生性疾病 |
AU2010231575B2 (en) | 2009-03-30 | 2013-09-12 | Edimer Biotech S.A. | Preparation of isolated agonist anti-EDAR monoclonal antibodies |
CA2759030A1 (en) | 2009-04-20 | 2010-10-28 | Genentech, Inc. | Adjuvant cancer therapy |
TW201105347A (en) | 2009-04-28 | 2011-02-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Pharmaceutical compositions for maintenance therapy containing HLA class I-recognizing antibody as the active ingredient |
WO2010137654A1 (ja) | 2009-05-29 | 2010-12-02 | 株式会社未来創薬研究所 | Egfファミリーリガンドのアンタゴニストを成分とする医薬組成物 |
WO2011027308A1 (en) | 2009-09-03 | 2011-03-10 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Novel tumor markers |
US11536713B2 (en) | 2009-12-25 | 2022-12-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for searching and screening for target of anti-cancer agent using non-human animal model having NOG established cancer cell line transplanted therein |
US9217032B2 (en) | 2010-01-08 | 2015-12-22 | Les Laboratoires Servier | Methods for treating colorectal cancer |
WO2012046797A1 (ja) | 2010-10-06 | 2012-04-12 | ファーマロジカルズ・リサーチ プライベート リミテッド | 癌幹細胞集団及びその作製方法 |
US10018630B2 (en) | 2011-09-07 | 2018-07-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer stem cell isolation |
EP3603671A3 (en) | 2011-10-28 | 2020-07-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer stem cell-specific molecule |
-
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2013
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-
2022
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Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008500838A (ja) * | 2004-06-01 | 2008-01-17 | プロネイ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 遺伝子発現の阻害に関する方法および組成物 |
JP2008514205A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | 財団法人実験動物中央研究所 | Nogマウスを用いた高転移性細胞株の樹立 |
WO2006051984A1 (ja) * | 2004-11-15 | 2006-05-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 癌細胞の転移抑制方法およびそのために使用する医薬組成物 |
WO2007064945A2 (en) * | 2005-12-01 | 2007-06-07 | Pronai Therapeutics, Inc. | Cancer therapies and pharmaceutical compositions used therein |
WO2007132883A1 (ja) * | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Yokohama City University | 肝臓癌の鑑別、疾患ステージの判定又は予後の予測方法及びキット |
JP2008102012A (ja) * | 2006-10-19 | 2008-05-01 | Kanazawa Univ | 癌幹細胞の同定および単離方法 |
Also Published As
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