JP5711801B2 - 赤血球中に含まれるヘモグロビンの固有色素を利用して血液試料の赤血球指数を決定するための方法及び装置 - Google Patents
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Description
OD=εcL
式中、ε=ヘモグロビンのモル吸収係数、c=ヘモグロビン濃度、及びL=RBC22(すなわち、細胞内にあるヘモグロビン)を通じて進んだ距離である。モル吸収係数はヘモグロビンに固有の特性であり、実験によるか、又は現在利用可能な実験データから求めることができる。許容誤差を有する光源(例えば、設計定格波長±ある大きさを有するLED)を利用する分析機器の実施形態では、正確を期すため、最初に機器を較正してヘモグロビンのモル吸収係数を決定することが有用であり、次に光源が交換され、その時点で機器が再較正され得るまで、当該の特定の機器ではこの係数を用いることができる。
OD=εcL,c=OD/εL
RBC22の平均赤血球ヘモグロビン濃度(「MCHC」)の決定は、個々のRBCのCHCを決定するための上記と同じ方法を用いて、チャンバの双方の内表面と接触しているある数のRBCについて繰り返し、その結果を用いて平均値及び許容可能な標準偏差を決定することにより行われる。
Claims (19)
- 血液試料中の網赤血球を識別するための方法であって、
被分析血液試料を静止状態に保つように構成された分析チャンバに前記血液試料を入れるステップであって、前記分析チャンバが第1のパネルの内表面と第2のパネルの内表面とにより画定されており、及び前記分析チャンバが、前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面との間に延在する既知の高さ又は特定可能な高さであって、前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している少なくとも1個の赤血球又は少なくとも1つの赤血球集団が存在するような高さを有する、ステップと、
超生体染色色素を前記血液試料と混和するステップであって、前記超生体染色色素が1つ又は複数の第1の所定波長の光で励起されることにより前記血液試料中の網赤血球内に含まれるレチクリンに蛍光を発生させるように機能する、ステップと、
前記超生体染色色素と混和された前記血液試料中の網赤血球内に含まれるレチクリンに蛍光を発生させる前記1つ又は複数の第1の所定波長の光を用いて前記血液試料を撮像して蛍光発生画像信号を生成するステップと、
ヘモグロビンによって吸収される1つ又は複数の第2の所定波長の光を用いて前記血液試料を撮像して吸光画像信号を生成し、前記吸光画像信号を用いて画像ユニット毎ベースで光学濃度値を決定するステップであって、前記1つ又は複数の第2の所定波長の光が前記1つ又は複数の第1の所定波長の光と同一又は異なる、ステップと、
前記蛍光発生画像信号と前記光学濃度値とを用いて前記血液試料中の網赤血球を識別するステップと、
を含む、方法。 - 照明器と解像装置とプログラム可能分析器とを含む分析装置を提供するステップであって、前記照明器が前記撮像に用いられる前記1つ又は複数の第1の所定波長の光と前記1つ又は複数の第2の所定波長の光とを発生させるように機能し、前記解像装置が前記血液試料からの光を捕捉するように機能し、前記プログラム可能分析器が前記蛍光発生画像信号と前記光学濃度値とを用いて前記血液試料中の網赤血球を識別するように構成される、ステップをさらに含む請求項1に記載の方法。
- 前記光学濃度値を決定するステップは、前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分を通って前記分析チャンバのパネル平面と垂直方向における光学濃度を決定するステップを含み、
前記光学濃度を用いて前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している網赤血球のヘモグロビン濃度を決定するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している複数の網赤血球のヘモグロビン濃度を決定するステップと、
前記ヘモグロビン濃度を用いて平均ヘモグロビン濃度を決定するステップと、
をさらに含む、請求項3に記載の方法。 - 蛍光の領域又は蛍光の強度として1つ又は複数の蛍光を発する前記血液試料中の網赤血球内に含まれるレチクリンの相対量を決定するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分を通って前記分析チャンバのパネル平面と垂直方向における光学濃度と、その網赤血球の全体についての前記分析チャンバのパネル平面と垂直方向における光学濃度と、を画像ユニット毎ベースで決定するステップと、
前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分を通って前記分析チャンバのパネル平面と垂直方向における前記光学濃度と、その網赤血球の全体についての前記分析チャンバのパネル平面と垂直方向における光学濃度と、前記分析チャンバの高さと、を用いて前記血液試料中の網赤血球の容積を決定するステップと、
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記画像ユニットが画素である、請求項6に記載の方法。
- 前記光学濃度値を決定するステップは、前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分を通って前記分析チャンバのパネル平面と垂直方向における光学濃度と、その網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触していない部分を通って前記分析チャンバのパネル平面と垂直方向における光学濃度と、を決定するステップを含み、
前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分の容積を、当該の部分について決定された画像ユニット毎の前記光学濃度を用いて決定するステップと、
その網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触していない部分の容積を、当該の部分について決定された画像ユニット毎の前記光学濃度と、その網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分について決定された画像ユニット毎の前記光学濃度と、を用いて決定するステップと、
前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分について決定された前記容積と、その網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触していない部分について決定された前記容積と、を用いて前記血液試料中の網赤血球の細胞容積を決定するステップと、
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している複数の網赤血球の細胞容積を決定するステップと、
前記複数の網赤血球の各々について決定された前記細胞容積を用いて平均網赤血球容積を決定するステップと、
をさらに含む、請求項8に記載の方法。 - 等積球形化剤を前記血液試料の少なくとも一部分と混和するステップをさらに含む、請求項8に記載の方法。
- 前記血液試料中の網赤血球のうち前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分について決定された前記光学濃度を用いて前記網赤血球のヘモグロビン濃度を決定するステップと、
前記ヘモグロビン濃度と前記細胞容積とを用いて前記網赤血球中のヘモグロビン含有量を決定するステップと、
をさらに含む、請求項8に記載の方法。 - 前記血液試料中の複数の網赤血球であって、前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している部分を有する網赤血球中のヘモグロビン含有量を決定するステップと、
前記複数の網赤血球の各々について決定された前記ヘモグロビン含有量を用いて平均ヘモグロビン含有量を決定するステップと、
をさらに含む、請求項11に記載の方法。 - 前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面とが平行であり、前記分析チャンバの高さがヘモグロビン濃度の決定前に既知である、請求項8に記載の方法。
- 前記分析チャンバの高さが2μm〜6μmの範囲内である、請求項12に記載の方法。
- 前記血液試料が無希釈である、請求項1に記載の方法。
- 前記血液試料中の赤血球の総数に占める前記血液試料中の網赤血球の数を決定するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 血液試料中の網赤血球を識別するための装置であって、
被分析血液試料を静止状態に保つように構成された分析チャンバであって、前記分析チャンバが第1のパネルの内表面と第2のパネルの内表面とにより画定されており、及び前記分析チャンバが、前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面との間に延在する既知の高さ又は特定可能な高さを有する、分析チャンバと、
照明器と解像装置とを含む撮像ユニットであって、超生体染色色素と混和された前記血液試料中の網赤血球内に含まれるレチクリンに蛍光を発生させる1つ又は複数の第1の所定波長と、ヘモグロビンによって吸収されると共に前記1つ又は複数の第1の所定波長の光と同一又は異なる1つ又は複数の第2の所定波長と、を用いて、前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している少なくとも1個の赤血球又は少なくとも1つの赤血球集団を撮像して画像信号を生成するように機能する、撮像ユニットと、
前記撮像ユニットに接続されるプログラム可能分析器であって、前記1つ又は複数の第1の所定波長を用いて生成された蛍光発生画像信号と、前記1つ又は複数の第2の所定波長の光を用いて生成された吸光画像信号に基づいて決定される光学濃度値と、を用いて網赤血球を識別するプログラムを有する、プログラム可能分析器と、
を含む、装置。 - 血液試料中の網赤血球を識別するための方法であって、
被分析血液試料を静止状態に保つように構成された分析チャンバに前記血液試料を入れるステップと、
超生体染色色素を前記血液試料と混和するステップであって、前記超生体染色色素が1つ又は複数の第1の所定波長の光で励起されることにより前記血液試料中の網赤血球内に含まれるレチクリンに蛍光を発生させるように機能する、ステップと、
前記超生体染色色素と混和された前記血液試料中の網赤血球内に含まれるレチクリンに蛍光を発生させる前記1つ又は複数の第1の所定波長の光を用いて前記血液試料を撮像して蛍光発生画像信号を生成するステップと、
ヘモグロビンによって吸収される1つ又は複数の第2の所定波長の光を用いて前記血液試料を撮像して吸光画像信号を生成し、前記吸光画像信号を用いて画像ユニット毎ベースで光学濃度値を決定するステップであって、前記1つ又は複数の第2の所定波長の光が前記1つ又は複数の第1の所定波長の光と同一又は異なる、ステップと、
前記蛍光発生画像信号と前記光学濃度値とを用いて前記血液試料中の網赤血球を識別するステップと、
を含む、方法。 - 血液試料中の網赤血球を識別するための装置であって、
被分析血液試料を静止状態に保つように構成された分析チャンバと、
照明器と解像装置とを含む撮像ユニットであって、超生体染色色素と混和された前記血液試料中の網赤血球内に含まれるレチクリンに蛍光を発生させる1つ又は複数の第1の所定波長と、ヘモグロビンによって吸収されると共に前記1つ又は複数の第1の所定波長の光と同一又は異なる1つ又は複数の第2の所定波長と、を用いて、前記第1のパネルの内表面と前記第2のパネルの内表面の双方に接触している少なくとも1個の赤血球又は少なくとも1つの赤血球集団を撮像して画像信号を生成するように機能する、撮像ユニットと、
前記撮像ユニットに接続されるプログラム可能分析器であって、前記1つ又は複数の第1の所定波長を用いて生成された蛍光発生画像信号と、前記1つ又は複数の第2の所定波長の光を用いて生成された吸光画像信号に基づいて決定される光学濃度値と、を用いて網赤血球を識別するプログラムを有する、プログラム可能分析器と、
を含む、装置。
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