JP6518016B2 - 細胞懸濁液の決定のための方法及びシステム - Google Patents
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Description
本発明は、一般に、細胞懸濁液中の物質の濃度の決定に関するものであり、特に全血サンプル中のヘモグロビン濃度(cHb)の測定のためである。本発明はまた、細胞懸濁液中の細胞濃度を決定するための、特に全血サンプル中のヘモグロビン濃度(cHb)を決定するためのシステムを含む。
血液分析方法などの細胞分析方法は、診断領域内の標準的なツールであり、ユーザに利用可能な多くの異なる方法及びシステムが存在する。
(a)全血サンプルを提供すること;
(b)前記全血サンプルをスライド上に沈着させること;
(c)血液スミア標本を作製するため、スプレッダを利用すること;
(d)前記スライド上で前記血液スミア標本を乾燥させること;
(e)前記スライド上の前記血液スミア標本における赤血球中のヘモグロビンに起因する光の吸収又は反射を測定すること;
(f)ステップ(e)の測定によって、分析のための好適な厚さであるとして特定された分析領域の拡大された2次元デジタル画像を記録すること;
(g)前記拡大された2次元デジタル画像からデータを収集し、分析し、格納すること;
を含む。
2つの波長における血液サンプルの分光光度分析、及び、第1の波長における検出された放射線と、第2の波長における検出された放射線との比率を決定すること;及び、
前記比率に基づいて血液サンプル中の全ヘモグロビンの濃度を決定すること;
を含む方法を記載している。前記サンプルは、複数の波長において光に露光される。吸収率(absorbance)、透過率又は反射率の測定が行われ、2つの波長における前記測定(measurements)の比率は、全ヘモグロビンの量を示す。
本発明の目的は、細胞懸濁液中の物質の濃度を決定するための方法及びシステムを提供することであり、当該方法及びシステムは比較的単純であり、物質の濃度が比較的高い場合でも、細胞懸濁液の希釈を必要とすることなく、使用することができる。
−前記物質の前記濃度を、
−前記細胞懸濁液を含むチャンバ装置(arrangement)の異なる平均チャンバ高さで含まれるn個の局所サンプル容積(local sample volumes)で行われる吸収測定の結果を使用するステップであって、前記それぞれの局所サンプル容積中の局所物質濃度が前記それぞれの吸収測定に基づいて決定される、ステップと、
−チャンバ高さの関数としての局所物質濃度を含む物質濃度モデルを使用するステップと、
−前記物質濃度モデルと前記決定された局所物質濃度とを用いて、無限(infinite)チャンバ高さ物質濃度として前記物質濃度を決定するステップであって、nは少なくとも2、例えば少なくとも3、例えば少なくとも4である、ステップと、
により決定するステップを含む。
−前記細胞懸濁液をチャンバ装置(arrangement)に流すステップと、
−前記チャンバ装置の異なる平均チャンバ高さで含まれるn個の局所サンプル容積の吸収測定を行うステップと、
−前記それぞれの吸収測定に基づいて前記それぞれの局所サンプル容積中の局所物質濃度を決定するステップと、
−チャンバ高さの関数としての局所物質濃度を含む物質濃度モデルを生成するステップと、
−前記物質濃度モデルを用いて、無限チャンバ高さ物質濃度として前記物質濃度を決定するステップと、
を含む。
−それぞれが一定の高さのサンプル容積を含むが、異なるチャンバデバイスに対して高さが異なる、複数のチャンバデバイス、
−異なる高さを有する複数の局所サンプル容積を含む単一チャンバデバイスであって、前記高さは連続的に、連続的に(例えばくさび形のサンプル容積)、及び/又は段階的連続的に(すなわち、断面(section)ごとに運ばれる傾斜の角度を有する複数の傾斜した断面)変化する、単一チャンバデバイス、
−上述の装置(arrangements)のいずれか、但し、一定の高さの局所サンプル容積、好ましくは、前記局所サンプル容積が、調査中の粒子タイプの単一層のみが存在する少なくとも1つの領域を含むような高さをも包含するいずれか、
を含むことができるが、但しこれらに限定されるものではない。例えば、赤血球を研究する場合、そのような好ましい高さは約2μm〜約3.5μm、例えば約2.5〜約3μmである。
−局所容積を保持するためのn個の異なるチャンバ高さを含むチャンバ装置(arrangement)を提供するステップであって、その場合、前記チャンバ装置は、前記チャンバ高さで少なくとも1つの予め選択された波長の光に対して少なくとも部分的に光学的に透明である、ステップと、
−前記異なるチャンバ高さで局所サンプル容積を提供するために前記血液サンプルを前記チャンバ装置に流すステップと、
−少なくとも前記予め選択された波長を含む光を放射する光源を使用して、異なるチャンバ高さで含まれる前記局所サンプル容積の吸収測定を行うステップと、
−後記それぞれの局所サンプル容積における後記局所Hb濃度を決定するステップと、
−チャンバ高さの関数としての局所Hb濃度を含むHb濃度モデルを生成するステップと、
−前記Hb濃度モデルを用いて前記Hb濃度を前記無限高さHb濃度として決定するステップと、
を含む。
Iijは画素ijの測定光強度であり、
Iij refは画素ijの基準(背景照明)強度であり、
γは較正によって算出又は決定される定数であり、
zは問題の局所サンプル容積を含むチャンバ高さであり、
LV(z)は高さzは領域θで定義される高さzを有するチャンバ高さで局所容積である。
平均赤血球容積(MCV)、
赤血球ヘモグロビン質量(Corpuscular Hemoglobin mass)(mHb)分布、
赤血球容積分布(RDW−SD)又は
前記RBC細胞容積の変動係数(RDW−SD)。
RDW−SD = 前記RBC細胞Hb質量の変動係数
−前記細胞懸濁液が流れることにより負荷されるように構成されたn個の異なるチャンバ高さを含むチャンバ装置であって、及び、前記チャンバ高さで前記チャンバ装置を通過する前記予め選択された波長の光ビームを少なくとも部分的に許容するため、少なくとも1つの予め選択された波長に対して、少なくとも部分的に光学的に透明である、チャンバ装置と、
−少なくとも前記予め選択された波長を含む光を放射するように構成された光源であって、及び、前記n個のサンプル高さのうちの1つにおいて局所サンプル容積の少なくとも1つを照射するように構成された光源と、
−前記局所サンプル容積を通過する光の画像を取得するように構成された画像取得デバイスと、
を含む。
−局所サンプル容積に対してn個の異なるチャンバ高さを含むチャンバ装置(arrangement)であって、及び、前記チャンバ装置は、異なるチャンバ高さで前記局所サンプル容積において前記チャンバ装置を通過する前記予め選択された波長の光ビームを少なくとも部分的に許容するため、少なくとも1つの予め選択された波長に対して少なくとも部分的に透明である、チャンバ装置と、
−少なくとも前記予め選択された波長を含む光を放射するように構成された光源であって、及び、サンプル領域を照射するように構成された、光源と、
−前記サンプル領域を通過する光を取得するように位置決めされ、且つ、構成された画像取得デバイスと、
−前記サンプル領域内前記にチャンバ装置を保持するように適合されたサンプルホルダと、
−コンピュータシステムと、
を含む。
−前記チャンバ装置、前記光源及び前記画像取得デバイスの相対位置を制御する、
−前記サンプル領域を照明するための前記光源及び前記画像取得デバイスを制御し、及び、異なるチャンバ高さで前記それぞれの局所サンプル容積を透過した光の画像を取得する、
−前記画像取得デバイスによって取得された画像を取得する、
−前記血液サンプルの前記Hb濃度を決定するため、前記画像を処理する、
ようにプログラムされる。
−前記チャンバ装置、前記光源及び前記画像取得デバイスの相対位置を制御させる、
−前記それぞれの局所サンプル容積を介して伝送された光の画像の取得を制御することによって、異なるチャンバ高さで局所血液容積の吸収測定を実行させる、及び
−前記血液サンプルの前記Hb濃度を決定するため、前記画像をさせる、
命令を含む前記コンピュータプログラムを含む記憶媒体を含む。
−前記それぞれの局所サンプル容積における前記局所Hb濃度を決定すること、
−チャンバ高さの関数としての局所Hb濃度を含むHb濃度モデルを生成すること、
−前記Hb濃度モデルを用いて前記Hb濃度を前記無限高さHb濃度として決定すること、
を含む。
平均赤血球容積(Mean Corpuscular volume)(MCV)、
赤血球ヘモグロビン質量(Corpuscular Hemoglobin mass)(mHb)分布、
赤血球容積分布(RDW−SD)又は
RBC細胞容積の変動係数(RDW−SD)、
のうちの少なくとも1つを決定することを含む。
本発明の好ましい実施形態を、図面を参照してさらに説明する。
1.細胞懸濁液中の物質の濃度を決定する方法であって、
前記細胞懸濁液をチャンバ装置(arrangement)に流すステップと、
前記チャンバ装置の異なる平均チャンバ高さで含まれるn個の局所サンプル容積の吸収測定を行うステップと、
前記それぞれの局所サンプル容積中の局所物質濃度を前記それぞれの吸収測定に基づいて決定するステップと、
チャンバ高さの関数としての局所物質濃度を含む物質濃度モデルを生成するステップと、
−前記物質濃度モデルを用いて、無限チャンバ高さ物質濃度として前記物質濃度を決定するステップと、
を含み、nは少なくとも2、例えば少なくとも3、例えば少なくとも4である、方法。
好ましくは、当該方法は、前記複数の個々の赤血球の数をカウントすること、血球の平均吸収率を決定すること、及び血球の前記平均吸収率を前記MCHと相関させることを含み、好ましくは、前記複数の個々の赤血球は、重複しない赤血球として識別される、方法。
−前記細胞懸濁液が流れることにより負荷されるように構成された、n個の異なるチャンバ高さを含み、及び、少なくとも1つの予め選択された波長に対して、少なくとも部分的に光学的に透明であるチャンバ装置であって、前記チャンバ高さで前記チャンバ装置を通過する前記予め選択された波長の光ビームを少なくとも部分的に許容する、チャンバ装置と、
−少なくとも前記予め選択された波長を含む光を放射するように構成され、及び、前記n個のサンプル高さのうちの1つにおいて、少なくとも1つの局所サンプル容積を照射するように構成された光源と、
−前記局所サンプル容積を通過する光の画像を取得するように構成された画像取得デバイスと、
を含み、
前記コンピュータシステムはさらに、前記それぞれの局所サンプル容積のそれぞれにおける前記局所物質濃度を決定するため、n個の異なる高さでの局所サンプル容積の前記画像取得デバイスによって得られた画像を処理するようにプログラムされ、
nは少なくとも2、例えば少なくとも3、例えば少なくとも4、例えば2〜10である、システム。
前記最大チャンバ高さが前記画像取得デバイスの焦点深度未満であり、且つ、前記コンピュータシステムが、
前記焦点深度が、前記それぞれの画像を取得するための前記それぞれのチャンバ高さで局所サンプル容積を含むことを制御するため、前記チャンバ装置と、前記光源と、前記画像取得デバイスとの相対位置を制御すること、
前記局所サンプル容積を照射し、及び、前記それぞれのチャンバ高さで前記局所サンプル容積を透過した光の画像を取得するため、前記光源及び前記画像取得デバイスを制御すること、
前記画像取得デバイスにより得られた画像を受信すること、
前記細胞懸濁液の物質濃度を決定するため、前記画像を処理すること、
をプログラムされた、システム。
Claims (15)
- コンピュータで実施される、細胞懸濁液中の物質の濃度を決定する方法であって、当該方法は、以下のステップ:
−前記細胞懸濁液を含むチャンバ装置(22)の異なる平均チャンバ高さ(13a、b、c)で含まれるn個の局所サンプル容積で行われる吸収測定の結果を使用するステップであって、前記それぞれの局所サンプル容積中の局所物質濃度が前記それぞれの吸収測定に基づいて決定される、ステップ、
を含み、且つ、以下のステップ:
−チャンバ高さの関数としての局所物質濃度を含む物質濃度モデルを使用するステップと、
−前記物質濃度モデルと前記決定された局所物質濃度とを用いて、無限チャンバ高さ物質濃度として前記物質濃度を決定するステップであって、nは少なくとも2、例えば少なくとも3、例えば少なくとも4である、ステップと、
を含むことを特徴とする、方法。 - 請求項1に記載の方法であって、前記チャンバ装置が単一のチャンバデバイスであり、前記局所サンプル容積を前記チャンバ高さにキャピラリロードするため、前記細胞懸濁液が前記チャンバ装置に供給され、好ましくは、前記チャンバ高さは、高さを徐々に低くして、前記チャンバ装置の共通流路に沿って配置され、好ましくは、前記流路は少なくとも3つの異なるチャンバ高さを含み、少なくとも約2.5μm互いに異なる、方法。
- 前記チャンバ高さの前記最大高さが約40μm以下、例えば約30μm以下、例えば約25μm以下、例えば約20μm以下である、請求項1〜2のいずれか一項に記載の方法。
- 前記吸収測定の各々は、光源を使用して前記チャンバ装置の第1の側から前記チャンバ高さで前記細胞懸濁液の前記局所サンプル容積を照射すること、及び前記チャンバ装置の第2の反対側において少なくとも1つの画像を取得することにより透過光を記録することを含み、前記吸収測定は、前記チャンバ高さの2つ以上における局所サンプル容積について同時に任意に実施される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項4に記載の方法であって、前記光源は少なくとも1つの予め選択された波長を含む光を放射し、前記予め選択された波長は、前記物質の等吸収点における波長を含み、好ましくは前記物質はHbであり、前記等吸収点は、波長約420nm、約530nm及び約570nmのうちの少なくとも1つを含む、方法。
- 請求項5に記載の方法であって、前記各局所サンプル容積体積の各々における前記局所物質濃度の決定が、前記局所サンプル容積の取得画像を画像処理することを含み、前記物質がHbである場合、前記画像処理は、自由プラズマHbによって生成された干渉を除去すること、及び前記チャンバ高さ断面の前記取得された画像の全正規化された光強度を、問題の高さ(z)における局所Hb濃度に相関させることを含む、方法。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法であって、前記物質濃度モデルの決定は、高さLc−物質(z)の関数として前記局所サンプル容積の前記局所物質濃度(Lc−物質)をマッピングすること、前記マッピングに対する最良フィッティング曲線を計算すること、前記最良フィッティング曲線を高さz→∞に外挿すること、前記物質濃度を前記高さZ=∞における前記物質濃度として決定すること、を含む方法。
- 請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法であって、前記細胞懸濁液が全血であり、前記物質がHbであり、当該方法が平均赤血球ヘモグロビン(MCH)を決定することをさらに含み、当該方法が、約5μm以下の低いチャンバ高さで少なくとも1つの吸収測定を行うこと、及び前記低いチャンバ高さで前記吸収測定から前記MCHを決定することを含み、前記低いチャンバ高さが約2μm〜約3.5μm、例えば約2.5〜約3μmである、方法。
- 請求項8に記載の方法であって、当該方法は前記決定されたHb濃度及び前記決定されたMCHに基づいてcRBCを決定することをさらに含む、方法。
- 請求項8に記載の方法であって、前記低いチャンバ高さでの前記吸収測定が、少なくとも1つの画像を取得すること、及び複数の個々の赤血球の画像領域を識別すること、及び前記識別された領域の吸収率を決定すること、及び前記決定された吸収率を前記MCHに相関させることを含み、
好ましくは、当該方法は、前記複数の個々の赤血球の数をカウントすること、血球の平均吸収率を決定すること、及び血球の前記平均吸収率を前記MCHと相関させることを含み、好ましくは、前記複数の個々の赤血球は、重複しない赤血球として識別される、方法。 - 請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法であって、当該方法が、以下のステップ:
−前記細胞懸濁液を前記チャンバ装置に流すステップと、
−前記チャンバ装置の異なる平均チャンバ高さで含まれるn個の局所サンプル容積の吸収測定を行うステップと、
のうちの少なくとも1つをさらに含む、方法。 - 細胞懸濁液中の物質の濃度を決定するためのシステムであって、当該システムに請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法を実行させるようにプログラムされたコンピュータシステムを含むシステム。
- 請求項12に記載のシステムであって、当該システムは、
−前記細胞懸濁液が流れることにより負荷されるように構成された、n個の異なるチャンバ高さ(13a、b、c)を含み、及び、少なくとも1つの予め選択された波長に対して、少なくとも部分的に光学的に透明であるチャンバ装置(22)であって、前記チャンバ高さで前記チャンバ装置を通過する前記予め選択された波長の光ビームを少なくとも部分的に許容する、チャンバ装置と、
−少なくとも前記予め選択された波長を含む光を放射するように構成され、及び、前記n個のサンプル高さのうちの1つにおいて、少なくとも1つの局所サンプル容積を照射するように構成された光源と、
−前記局所サンプル容積を通過する光の画像を取得するように構成された画像取得デバイスと、
をさらに含み、
前記コンピュータシステムはさらに、前記それぞれの局所サンプル容積のそれぞれにおける前記局所物質濃度を決定するため、n個の異なる高さでの局所サンプル容積の前記画像取得デバイスによって得られた画像を処理するようにプログラムされ、
nは少なくとも2、例えば少なくとも3、例えば少なくとも4、例えば2〜10である、システム。 - 請求項13に記載のシステムであって、
最大チャンバ高さが前記画像取得デバイスの焦点深度未満であり、且つ、前記コンピュータシステムが、
−前記焦点深度が、前記それぞれの画像を取得するための前記それぞれのチャンバ高さで局所サンプル容積を含むことを制御するため、前記チャンバ装置と、前記光源と、前記画像取得デバイスとの相対位置を制御すること、
−前記局所サンプル容積を照射し、及び、前記それぞれのチャンバ高さで前記局所サンプル容積を透過した光の画像を取得するため、前記光源及び前記画像取得デバイスを制御すること、
−前記画像取得デバイスにより得られた画像を受信すること、
−前記細胞懸濁液の物質濃度を決定するため、前記画像を処理すること、
をプログラムされた、システム。 - 請求項13又は請求項14に記載のシステムであって、前記システムは、全血中のHb濃度を決定するように構成されており、前記チャンバ装置の前記チャンバ高さのうちの少なくとも1つは、約5μm以下の低チャンバ高さであり、前記コンピュータシステムは、前記低チャンバ高さで局所血液容積の少なくとも1つの画像を取得することにより吸収測定を行うように、及び、前記低チャンバ高さで前記局所血液容積の前記吸収測定からMCHを決定するようにプログラムされている、システム。
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