JP5661864B2 - Ｂ型肝炎ウイルスに対する活性を有する殺菌剤 - Google Patents

Description

本発明は、殺菌剤及びＢ型肝炎ウイルスを不活化するためのその使用に関する。

３つの群の物質が、Ｂ型肝炎ウイルス等の特にウイルスの不活化のためにこれまで用いられており、表面（皮膚、床）及び器具の殺菌剤として用いられている：
ギ酸、酢酸、クエン酸等の短鎖有機酸
このような一塩基酸または多塩基酸の効果は、特にＥＰ−Ａ−０ ５０５ ７６３及びＡＴ−Ａ ３８２３１９０に開示されており、またＨｙｇｉｅｎｅ＋Ｍｅｄｉｚｉｎ １９８９，１４，６９ページ以下、ＧＢ−Ａ−２ １０３ ０８９及びＴｉｅｒａｅｒｚｔｌｉｃｈｅ Ｕｍｓｃｈａｕ １９８８，４３，６４６ページ以下を参照されたい。しかしながら、明らかになっている不利な点は、このような殺菌剤は不可避的に低いｐＨを有し、従って特に器具を殺菌するために高温で使用される際に強い腐食作用を有することである。

四級アンモニウム化合物
これらは、特に、非常に高いアルコール含有量を有する殺菌剤において、例えば無水イソプロパノール／ｎ−プロパノールまたは８０％エタノールにおいて、手のための効果的な殺菌剤であることが判明している（特にＷａｌｌｈａｅｕｓｅｒ， Ｐｒａｘｉｓ ｄｅｒ Ｓｔｅｒｉｌｉｓａｔｉｏｎ， Ｈｅｎｋｅｌ Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅ Ｂｉｂｌｉｏｔｈｅｋ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， １９８８， ７５ページ以下参照）。しかしながら、本願出願人による試験は、四級アンモニウム化合物は非常に低いアルコール含有量を有する溶液中ではＨＢＶについて確かな効果が在しないということを明らかにしている。一方、高いアルコール濃度を有する殺菌剤は、プラスチック材料を侵すために特に器具を殺菌するためには不適当である。加えて、四級アンモニウム化合物を含有する殺菌剤は、高起泡性であり、これはその使用、特に器具を殺菌するための使用を制限するものである。

ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド及びグルタルアルデヒド等のアルデヒド
アルデヒド含有製品は、ＨＢＶに対する優れた活性を示す。しかしながら、アルデヒド含有殺菌剤は、特にホルマリンのヒトの健康に対する有害な効果のためにこの数年間好ましくないとされている。

従って、本発明が基づくところの目的は、殺菌剤であって、
１．コスト上の理由のため及び使用者の殺菌剤との考えられる接触に対する良好な許容性のために、活性成分の含有量が低く及びヒトに対して十分に許容され（非刺激性）、
２．不可避的に強い酸性及び腐食性でなく、
３．起泡作用がなく、
４．低いアルコール含有量で配合され得、
５．アルデヒドの存在を不可避的に必要とすることなく、
６．他の任意の成分と適合性があり、及び
７．低濃度で使用されてもＢ型肝炎ウイルスを顕著に不活化する
殺菌剤を提供することであった。

ＨＢＶの不活化のための本発明による提案は、
ａ）少なくとも１種のアルキルアミン及び／または少なくとも１種の四級アンモニウム化合物、並びに
ｂ）少なくとも１種の脂肪酸ＲＣＯＯＨ及び／またはその塩（式中Ｒは少なくとも７個の炭素原子を有する基である）
を含む水系殺菌剤である。

本発明により使用され得る四級アンモニウム化合物（ｑｕａｔ）とアルキルアミンの例は、塩化ベンザルコニウム、ジデシルジメチルアンモニウムクロライド、及びジオクチルジメチルアンモニウムクロライド、並びにビス（３−アミノプロピル）オクチルアミン、アミノプロピルドデシルアミン、ドデシルプロピレンジアミン、ココナツ脂肪アミン２ＥＯ、及びジメチルココナツ脂肪アミンである。ｑｕａｔ混合物、アミン混合物、及びｑｕａｔとアミンの混合物をも使用することが可能である。ジオクチルジメチルアンモニウムクロライドとビス（３−アミノプロピル）オクチルアミンの混合物が特に好ましい。

特に効果があると判明している殺菌剤は、殺菌剤に基づいて１〜４０重量％、好ましくは３〜２５重量％、特に５〜２０重量％のアルキルアミン及び／または四級アンモニウム化合物を含有する。

本発明による殺菌剤において、脂肪酸のＲ基は、好ましくは飽和または不飽和の、枝なしまたは有枝の、非置換または置換Ｃ_９〜Ｃ_２５−アルキル、好ましくはＣ_１２〜Ｃ_２３−アルキルである。Ｒは、特に好ましくは一不飽和のＣ_１３〜Ｃ_２１−アルキルであり、例えばＲＣＯＯＨはオレイン酸である。

脂肪酸及びその塩が、水溶液中に存在する際に部分的に解離することは当業者の知るところである。アルカリ金属またはアンモニウム塩、特にナトリウム塩、例えばオレイン酸ナトリウムのような脂肪酸の塩が、本発明により用いられる殺菌剤を配合するために好ましくは使用される。

成分ｂ）の含有量は、殺菌剤に基づいて、好ましくは０．０５〜５重量％、特に０．１〜３重量％、例えば０．５〜２重量％である（遊離酸ＲＣＯＯＨとして計算）。特に好ましい態様において、殺菌剤は、５〜２０重量％の四級アンモニウム化合物及び／またはアルキルアミン、並びに０．５〜２重量％のオレイン酸ナトリウムを含有する。

本発明により必須であると規定された成分に加えて、本発明によって用いられる殺菌剤は、適切な場合には、非イオン性界面活性剤、乳酸、グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸のような短鎖有機酸またはその塩、腐食防止剤、香料、染料及びアルコールのような１以上の他の物質をさらに含有する。短鎖有機酸は、特にアミン配合物を好ましい９．０〜９．５のｐＨに調節するために用いられる。ｑｕａｔ配合物の場合は、適切な場合には、塩基性化物質を用いて所望される９．０〜９．５のｐＨへの調節が必要である。これには、例えば水酸化ナトリウムを用いることが可能であるが、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ヒドロキシプロピル）エチレンジアミンが特に適切である。これら他の物質の各単一での含有量は、好ましくは最大５重量％までである。

好ましいアルコールは、イソプロパノールである。イソプロパノールに加えて、またはその代わりに、濃縮物を安定化するための可溶化剤として作用する、エタノール若しくはｎ−プロパノール若しくはグリコールのような他のアルコール又はフェノキシプロパノールのような芳香族アルコールを用いることも可能である。アルコールは結晶化を防ぎ、低温安定性を改善し、及びさらなる活性成分として働く。その濃度は、５重量％よりも明確に高く、例えば１０〜５０重量％、２０〜４０重量％ほどであり得る。

特に好ましい態様において、殺菌剤は、２重量％の水溶液として４５ｍｌ未満、好ましくは４２ｍｌ未満、特に３９ｍｌ未満またはさらに３７ｍｌ未満の起泡力を示し、これは以下の方法により測定される：
１．２０〜２５℃で、１００ｍｌ計量シリンダ中への３０ｍｌの溶液の泡を含まない導入、
２．計量シリンダ上への栓の設置、
３．１０回激しく振ること、及び
４．振り終えた後の即時の泡の高さの測定であって、これは泡を含めた溶液の体積として表現される。

本発明はさらに、表面及び器具を殺菌するための殺菌剤の使用に関する。表面は、一般に、すり磨くまたはぬぐう方法により殺菌される。器具は、器具の手動挿入または自動プロセッサにおける機械的方法により殺菌される。上記方法において典型的に用いられるものは、すぐに使用できる溶液であり、これは殺菌剤の水溶液であり、０．３〜１０重量％、好ましくは０．５〜５重量％、特に１〜３重量％、例えば２重量％の殺菌剤を含有する。

器具、特に柔軟な内視鏡のような温度感受性の器具の熱化学殺菌は、特殊な自動洗浄及び殺菌システム中で行われる。本発明による殺菌剤が器具の殺菌剤という形態で有利に使用され得るプログラムフローの例は、以下の通りである：
１．適切な場合には、冷水を用いた前洗浄、
２．５５〜６０℃での中性洗浄剤（例えば０．５％濃度溶液等）を用いた洗浄、
３．５５〜６０℃で、及び本発明による殺菌剤（例えば１〜３％濃度）に対して１〜２０分、例えば約５分の曝露時間での熱化学殺菌、
４．冷水を用いたすすぎ、及び
５．乾燥。

熱化学殺菌のために濃度、曝露時間及び温度の３つのパラメータが、当業者により適切に選択される。特に好ましい殺菌剤は、以下の含量で次に挙げる成分を含有する：

本発明の利点は、特に以下の例から明らかである。別段の指摘がない限り、例中の全てのパーセントデータは、重量に基づいている。

例
以下の物質を用いた：
Ｂａｒｄａｃ ＬＦ：ジオクチルジメチルアンモニウムクロライド（５０％濃度）
Ｌｏｎｚａｂａｃ ＬＦ：ビス（３−アミノプロピル）オクチルアミン、及び
非イオン性界面活性剤：アルキルポリオキシアルキレングリコールエーテル（低発泡性界面活性剤）。

配合物のＨＢＶ活性の調査
配合物についての調査のために、表面抗原（Ｂ型肝炎表面抗原＝ＨＢｓＡＧ）の抗原性の破壊を、Ｂ型肝炎活性の間接的な標識として用いた。配合物は、いずれの場合も、不活化試験の直前に、無菌の二重蒸留水を用いて、所望の濃度（１重量％、２重量％及び３重量％）に、希釈した。

殺菌性の試験は、懸濁試験で、室温で行い、体積比とタンパク質負荷はドイツ保険局（ＢＧＡ）とドイツウイルス疾病防除協会（ＤＶＶ）のウイルスに対する化学殺菌剤の活性の試験に関するガイドラインに従って行った。Ｂｕｎｄｅｓｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔｓｂｌａｔｔ ２５，１９８２，３９７〜８ページを参照されたい。試験混合物は、１部のＨＢｓＡｇ含有血清（ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇ陽性、ＤＮＡポリメラーゼ検出可能、ＰＣＲ陽性のＨＢＶ、≧１０8／ｍｌのウイルスゲノム）、１部の二重蒸留水若しくは１部の２％濃度の血清アルブミン溶液若しくは１部のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、及び８体積部の所望される濃度の１．２５倍の試験される配合物（殺菌剤）から成っていた。曝露時間が経過した後すぐに、試験混合物を希釈により殺菌剤の効果を消失させるために、１０％のＦＣＳを含有するＰＢＳを用いて１：１００に希釈した。続いて各混合物を、ＨＢｓＡｇの重複測定としてラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）（Ａｕｓｒｉａ ＩＩ，Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂ．，Ｎｏｒｔｈ Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌ．，ＵＳＡ）において調べ、平均放射能を計算した。

以下の対照も含めた。殺菌剤の代わりに二重蒸留水を含有する試験混合物を、最も長い試験曝露時間の後に、ＨＢｓＡｇについて調べた。本混合物は、これは血清アルブミン及びＦＣＳを伴う混合物ついても行ったが、ＨＢｓＡｇの増加を計算するための初期値を表した。ウイルスを加えていない試験混合物（殺菌剤対照）及び希釈剤のみの試験混合物についても、値を比較することにより存在する殺菌剤のための非特異性を確認するためにこの方法で行われた（添えた説明欄を参照）。

メーカーの試験キットによる陽性及び陰性対照も含めた。

その後、Ｇ．Ｆｒｏｅｓｎｅｒ， Ｇ．Ｊｅｎｔｓｃｈ， Ｈ．Ｕｔｈｅｒｍａｎｎ ｉｎ ｚｂｌ． Ｂａｋｔ． Ｈｙｇ． Ｉ． Ａｂｔ． Ｏｒｉｇ． Ｂ １７６， １， （１９８２） “Ｚｅｒｓｔｏｅｒｕｎｇ ｄｅｒ Ａｎｔｉｇｅｎｉｔａｅｔ ｕｎｄ Ｂｅｅｉｎｆｌｕｓｓｕｎｇ ｄｅｒ ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｃｈｅｎ Ｒｅａｋｔｉｖｉｔａｅｔ ｖｏｎ Ａｎｔｉｇｅｎｅｎ ｄｅｓ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ−Ｂ−Ｖｉｒｕｓ（Ｈｂ_sＡｇ，Ｈｂ_cＡｇ ａｎｄ Ｈｂ_eＡｇ） ｄｕｒｃｈ Ｄｅｓｉｎｆｅｋｔｉｏｎｓｍｉｔｔｅｌ ｉｍ Ｐｒｕｅｆｍｏｄｅｌｌ”により記述されている方法に従い、殺菌剤に曝露した後の放射能（ｃｐｍ）が、ウイルスを加えていない試験混合物の放射能（ｃｐｍ）の２．１倍未満であれば、ＨＢｓＡｇの完全な不活化であるとした。これらの試験混合物中の殺菌剤を、二重蒸留水、血清アルブミンまたはＦＣＳと混合し、その後上述に従って、１０％ＦＣＳを含むＰＢＳ中で１：１００に希釈した。

混合物の説明
ＨＢｓＡＧ対照
Ｉ 血清＋二重蒸留水＋二重蒸留水
ＩＩ 血清＋２％アルブミン＋二重蒸留水
ＩＩＩ 血清＋ＦＣＳ＋二重蒸留水
殺菌剤対照
Ｉ 二重蒸留水＋二重蒸留水＋殺菌剤
ＩＩ 二重蒸留水＋２％アルブミン＋殺菌剤
ＩＩＩ 二重蒸留水＋ＦＣＳ＋殺菌剤
希釈剤対照
Ｉ １０％ＦＣＳのＰＢＳ
不活化混合物
Ｉ 血清＋二重蒸留水＋殺菌剤
ＩＩ 血清＋２％アルブミン＋殺菌剤
ＩＩＩ 血清＋ＦＣＳ＋殺菌剤。

配合物の起泡力の調査
配合物溶液（殺菌剤溶液）の起泡力を評価するために、以下の試験が利用できる。

はめ込み栓を有する１００ｍｌの計量シリンダ（目盛りと標記を有する背の高い形状）とストップウオッチが必要とされる。調査のために、試験される３０ｍｌの配合物溶液を、可能な限り発泡を避けながら（配合物溶液の導入の際に泡が形成された時は、本試験は泡が消滅するまで行われない）計量シリンダ内に導入する。その後、栓をはめる。計量シリンダを１０回激しく振り、その後静置すると同時にストップウオッチをスタートさせる。その後、計量シリンダ中の泡の高さ（泡を含んだサンプルの体積）を、予め決められた時間の後に読み取る。調査の結果を記録し、サンプルの温度も記す。

例１
配合物１Ｂを、不活化試験において１．０％濃度、２．０％濃度及び３．０％濃度として調べた。曝露時間は、５、１５及び３０分であった。結果を下記の表５〜７に示す。

例１の評価
殺菌剤対照の結果が、希釈剤の値（ｃｐｍ＝１８６．０）の範囲にあることから、殺菌剤の存在による検出方法への干渉が何ら無いことが明らかであった。

配合物１Ｂは、ＨＢｓＡｇの免疫学的反応性に関して強い影響力を示した。しかしながら、１％濃度溶液の調査において、検出の下限を超えるカウントは、３０分の曝露時間後に至るまで見受けられなかった（表５参照）。殺菌剤の２％濃度希釈物は、とりわけＨＢＶ活性を示した（表６参照）。配合物１Ｂの２％濃度溶液を、表面殺菌剤として１５分使用することによりＨＢＶ不活化のために用いることができるという結果を明らかに示すことができる。

１９８７年４月３０日のＤｅｕｔｓｃｈｅｓ Ａｅｒｚｔｅｂｌａｔｔ ８４，Ｎｏ．１８，Ｂ８７４ページによると、ドイツウイルス疾病防除協会（ＤＶＶ）とドイツ保険局（ＢＧＡ）のヒト医療におけるウイルス殺菌の質疑に関する委員会は、Ｂ型肝炎の伝染に対する全ての予防手段には、ＨＩＶ−予防性もあるということを総括している。

典型的な配合物１Ｂは、ＨＢＶに対する四級アンモニウム化合物の活性が、１重量％の脂肪酸塩（オレイン酸ナトリウム）の使用によって増大するということを示す。活性成分の総量を減らすことも可能であった。

例２
配合物２Ａ及び２Ｂを、そのＨＢＶ活性についてそれぞれ試験した。結果を下記の表８に示す。

例３
手法は例１及び２におけるものと同様である一方、懸濁液を５５℃に加熱した。

オレイン酸ナトリウムを使用することによって、発泡の減少とＨＢＶに対する作用の改善の双方が可能である。

例４（発泡の減少）

配合物溶液は、２２℃での水道水での２％濃度溶液であった。

結果：
配合物４Ａは、発泡抑制を示した。
配合物４Ｂは、発泡抑制を示した。
配合物４Ｃは、発泡抑制を示さなかった。

Claims (5)

1. ａ）５〜２０重量％のビス（３−アミノプロピル）オクチルアミン、
   ｂ）０．５〜２重量％のオレイン酸ナトリウム、
   ｃ）乳酸、グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸から選択される短鎖有機酸またはそれらの塩、並びに
   ｄ）エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、グリコール及びフェノキシプロパノールから選択されるアルコール
   を含有することを特徴とするＢ型肝炎ウイルス用水系殺菌剤。
2. Ｂ型肝炎ウイルスを不活化するための請求項１に記載のＢ型肝炎ウイルス用水系殺菌剤の使用。
3. 前記殺菌剤が、表面または器具の殺菌のための方法において使用されることを特徴とする請求項２に記載の使用。
4. 前記殺菌剤は、０．３〜１０重量％の殺菌剤を含有するすぐ使用できる溶液に水を用いて配合されることを特徴とする請求項２または３に記載の使用。
5. 前記使用は、以下の工程
   ａ）適切な場合には、冷水を用いた前洗浄、
   ｂ）５５〜６０℃での中性洗剤を用いた洗浄、
   ｃ）５５〜６０℃で、及び請求項１に記載のＢ型肝炎ウイルス用水系殺菌剤への１〜２０分の曝露時間での熱化学殺菌、
   ｄ）冷水を用いたすすぎ、及び
   ｅ）乾燥
   を包含する器具を殺菌するための方法において行われることを特徴とする請求項２〜４のいずれかに記載の使用。