JP5584337B2 - ポリマー - Google Patents

Description

本発明は、ペンダント側基、例えば糖類、アルキル基、ポリアルキレングリコール基又はリン脂質基を有するポリマーを製造する方法を提供する。また、このような側基を含むポリマーは、ペンダント側基の結合に好適な中間体ポリマーと共に提供される。

「クリックケミストリ」とは、非常に穏やかな反応条件及び簡単な刺激によって、変換及び選択性の両方の観点において、非常に高い効率等の多くの重要な特性を共有する数種類の化学変換を説明するのに用いられる用語である^1,2。高い効率及び立体選択性は優れ
た官能基適合性に関連するため、Ｃｕ（Ｉ）触媒型のフイスゲン(Huisgen)１，３−環化
付加反応^3,4は近年最も注目を集めている。この化学プロセス（しばしば単に「クリック
」と称される）のこれらの重要な特徴は、複合材料、例えば、デンドリマー⁵〜⁸、バイオコンジュゲート⁹〜¹²、医療品（therapeutics）¹³〜¹⁵、機能化ポリマー¹⁶〜²⁰、アフィ
ニティクロマトグラフィ担体²¹及び糖誘導体²²〜²⁸のテーラーメイド合成を可能にした。さらに、「クリック」手法は、合成シクロデキストリン²⁹及びグリコシル化による環状ペプチドのデコレーション²⁸に対するアプローチとして用いられている。合成糖化学物質は、炭水化物が多くの重要な生物学的プロセスにかかわることからますます関心を集めており、これらの重要な生物学的プロセスは、細胞間認識、細胞−タンパク質相互作用、並びにホルモン、抗体及びトキシンのターゲッティングにおける極めて特異的な事象を伴う^22,30〜³³。糖は、情報に富んだ分子であり、ますます多くの既知のレクチンが、オリゴ糖
構造のわずかな変更点を認識し且つこの炭水化物コード化（encoded）情報のためのデコ
ーダとして機能することができる³⁴。これらの現象を制御する要因の実態を得ることによって、新たな抗感染、抗炎症及び抗癌に関する療法及び作用物質の開発への道が開き得る^{22,28,30,35,36}。

単糖がタンパク質受容体との弱い相互作用を有し、これにより炭水化物−タンパク質結合によって媒介されるｉｎ ｖｉｖｏ事象に対する弱い応答がわずかに誘導されるに過ぎないことから、合成糖ポリマーはますます注目を集めている³⁷〜⁴⁰。実際に多くの場合、タンパク質結合炭水化物及びレクチンの両方が、「多座」供与体として機能する多重結合部位を提示する高次オリゴマー構造中に存在し、この「多座」供与体は、一価リガンドの使用に関するこの内因性の弱い結合制限を回避するのを助ける^40,41。対応する一価リガ
ンドと比較して適切な合成多価ポリマーによって達成され得る活性の増強は、「グリコシドクラスタ効果」として既知である^34,42〜⁴⁴。明確な巨大分子アーキテクチャ（architectures）（鎖長、ブロック、星）を特徴付ける糖ポリマーの合成は、当該技術分野における興味深い対象であり、多くの合成技法はこれを成し遂げるために用いられている。炭水化物含有モノマーの制御ラジカル重合は、新たな糖ポリマーを得るための１つの見込みのある合成経路を示す。しかしながら、これまで文献では比較的少数の例しか報告されていない⁴⁵〜⁵²。一因とされる１つの理由は、不可欠な炭水化物モノマーの合成における特有の問題、例えば、リビングラジカル重合の条件とのこれらの高機能化モノマーの適合性、場合によっては炭水化物エピトープを現すような続く脱保護である。

銅（Ｉ）触媒によるフイスゲン１，３−双極子環化付加反応は、好適な「クリック可能」ポリマーが利用可能である限り反応条件が非保護糖アジドに適合するため、新たな合成糖ポリマーの合成に関する特に興味深い経路である⁵³。本発明で開発した合成手法を図１に略述する。同一のアルキン含有「クリック可能」ポリマーから始めて、多種多様な炭水化物系材料を得ることができるため、この方法は、同じサイズ及び構造アーキテクチャのポリマー骨格を有するが、ペンダント糖部分の性質において異なることにより、ポリマー
骨格よりも複数の炭水化物に起因して特性が制御される材料を特徴付ける糖ポリマーのライブラリを作成するのに特に有用であると考えられる。アジド糖とアルキンモノマーの併用は興味深いと考えられ、逆に（over the reverse）、同一分子中のアジド基の数を低減させ且つ十分に裏付けされたアジド官能性糖を利用するという安全性の観点から、アルキン機能性糖とアジドポリマーの併用も興味深いと考えられる。本発明は他のペンダント側基、例えば、アルキル基、ポリアルキレングリコール基、及びリン脂質基にも適用可能である。

遷移金属媒介リビングラジカル重合（ＴＭＭ−ＬＲＰ、ＡＴＲＰと称される場合が多い）^54,55は十分に確立されており、多用途であり、ほとんどの官能基に対して良好な耐性
を有し、且つポリマーアーキテクチャに対して優れた制御を可能にする。多くの特許出願はＴＭ−ＬＲＰに関する。これらとしては、ラジカルにより移動可能な原子又は基を有する開始剤、遷移金属化合物及びビピリジン等のリガンドを用いたＡＴＲＰを開示する国際公開第ＷＯ９６／３０４２１号及び国際公開第ＷＯ９７／１８２４７号が挙げられる。代替的なオルガノジイミン系触媒は国際公開第ＷＯ９７／４７６６１号に開示されている。

ＴＭ−ＬＲＰを用いてポリペプチドと反応することができる官能基を含む、ポリエチレングリコール等の櫛形ポリマーの生成は、国際公開第ＷＯ２００６／００３３５２号に開示されている。

このため、ＴＭＭ−ＬＲＰは、必要とされるアルキン官能性材料の合成用の重合技法として選択された。トリメチルシリルで保護されたアルキン開始剤から開始されるＡＴＲＰによって得られるα−官能性アルキンポリマーの合成を最近報告したVan Hest及び共同研究者の研究¹⁷に従い、保護されたアルキンモノマーを使用した。これは、保護されていないプロパルギルメタクリレートのホモ重合が、比較的広範な分子量分布を有するポリマーをもたらすためである^20,56。

開発された合成手法は、レクチン結合研究のための多価リガンドとして使用されている糖ポリマーの小さい代表的なライブラリを作成するのに利用されていた。様々なレクチンと多くの合成糖ポリマーとの相互作用がこれまでに報告されている⁵⁷〜⁶⁰。これらの材料は、レクチンクラスタリング研究を網羅する広範な応用可能性のために^57,61〜⁶⁸、また
細胞表面相互作用の評価のために⁶⁹〜⁷⁵使用されている。多価リガンド特性による優れた制御は「クリック」方法及びＴＭＭ−ＬＲＰ方法の両方の頑健性に関する利点（多くの官能基及び溶媒に対する耐性、水及び比較的安価な出発材料を含む工業グレードの溶媒の使用）に関係しているため、２つの多用途手法である「クリック」及びＴＭＭ−ＬＲＰの組合せを用いる可能性は興味深いものであった。

本発明者らの認識によれば、ペンダント糖基を有するポリマーの生成し易さとは、その生成がアルキル基、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）基及びリン脂質基等の他の側基を含有するポリマーの速い生成にも適用することができることを意味している。

本発明は、
（ｉ）（ａ）保護基で保護されてもよいアジド基、又は（ｂ）保護基で保護されてもよいアルキン基で官能化されるオレフィン性不飽和モノマーを、リビングラジカル重合、最も好ましくはＲＡＦＴ（可逆的付加型開裂連鎖移動重合（Reverse Addition-Fragmentaion Chain Transfer Polymerisation））、遷移金属媒介リビングラジカル重合（ＴＭＭ−
ＬＲＰ）及び／又は原子移動ラジカル重合によって重合することにより、ポリマー中間体
を生成すること、
（ｉｉ）存在する場合には、ポリマー中間体から保護基の総数の少なくとも一部を除去すること、及び
（ｉｉｉ）ポリマー中間体を、（ａ）アルキン基又は（ｂ）アジド基で各々官能化された少なくとも１つのペンダント側基部分と反応させて、アルキン基及びアジド基が反応しペンダント側基をポリマー中間体に結合させること、
を含む、ペンダント側基を有するポリマーを製造する方法を提供する。

遷移金属媒介リビングラジカル重合の使用は、場合によっては原子移動ラジカル重合としても知られており、これにより、厳密に制御された多分散度を有し、アジド基又はアルキン基を含有するポリマーが容易に生成される。ＲＡＦＴもモノマーを重合するのに使用され得る。ＲＡＦＴの使用は、アルキン基を重合反応の過程中に保護する必要がないことを意味する。

このためこの中間体は側基部分と容易に反応して、ペンダント側基をポリマー上に結合させることができる。重合プロセス時におけるモノマーからの側基の分離は、ポリマー中間体が大量に生成され、且つペンダント側基を有する最終ポリマーが生成される必要があるときまで保存され得ることを意味する。さらに、ポリマー中間体は、別の状況ではペンダント側基を損傷しかねない条件で生成され得る。様々な異なる側基を容易にポリマー中間体に結合させることができる。これにより、例えば、様々な側基を含有するポリマーのライブラリが比較的簡単に形成される。

アジドは、例えばナトリウムアジドによるハロゲン化物等の適切な基の求核置換を含む、当該技術分野で既知の技法によって容易に調製することができる。アルキン含有分子を製造する技法も当該技術分野で既知である。

好ましくは、オレフィン性不飽和モノマーは、保護基で保護されてもよいアルキン基で官能化される。このような状況では、ペンダント基部分がアジド基を含む。この配置の使用は、同一分子中のアジド基の数を減少させ且つアジド官能性糖等の既知のアジド官能化された側基を利用するため、安全性の観点から特に興味深い。このような官能化された化合物は大抵の場合市販されている。

ペンダント側基は生物学的実体（entity）を含み得る。好ましくは、ペンダント側基は生物学的活性を有する。即ち、ペンダント側基は、細胞内で起こるか若しくは細胞によって生成される部分、及び／又は受容体等の分子若しくは生物体内、例えば細胞又は細胞表面上の他の分子と相互作用する部分を含む。生物体又は細胞は、原核生物、真核生物、真菌、細菌、植物、又は哺乳類若しくは好ましくはヒト等の動物であり得る。細胞は、単離され得るか、又は組織の一部若しくは生物体全体であってもよい。好ましい側基としては、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、炭水化物、核酸、ヌクレオチド、ヌクレオシド（nuclosides）、ビタミン、ホルモン、脂肪酸、リポ多糖類、グリセロール等から選択される部分が挙げられる。生物学的実体が受容体と結合していてもよい。このような化合物は当該技術分野で既知である。本発明の方法は、例えば、実体の様々な数又は組合せを含むコンビナトリアルライブラリを作成するために、このような化合物をポリマーに容易に組み入れることを可能にする。

好ましくは、ペンダント側基は、１つ又は複数の糖、置換若しくは非置換アルキル基、置換若しくは非置換ポリアルキレングリコール基、又はリン脂質基から選択される部分を含む。

糖は、通常、多価アルコールのアルデヒド又はケトン誘導体である炭水化物である。そ
れらは、モノマー（単糖類）（例えばフルクトース若しくはグルコース）又は二糖類、五糖類若しくは多糖類を形成するように互いに結合する２つ以上の糖から成るより複雑な糖であってもよい。種々の糖は、このような二糖類及び多糖類を形成するように共に形成され得る。二糖類としては、グルコース及びフルクトースから成るスクロース等の糖が挙げられる。多糖類としてはデンプン及びセルロースが挙げられる。糖という用語は、置換糖及び非置換糖の両方、並びに糖の誘導体を含む。好ましくは、糖は、グルコース、グルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、マンノース、ラクトース、フコース、及びそれらの誘導体、例えばシアル酸、グルコサミンの誘導体から選択される。糖は好ましくはα又はβである。糖は特に、マンノースピラノシド又はガラクトースピラノシドであってもよい。また糖は、１つ若しくは複数のヌクレオシド、例えば３−アジド−３−デオキシチミジン（Aldrich Ltd（United Kingdom）から市販されている）、又は１つ若しくは複数
のヌクレオチドであってもよい。糖上のヒドロキシル基は、例えば１つ又は複数のアセチル基で保護されていてもよい。糖は好ましくはＮ−アセチル化されている。このような糖の好ましい例としては、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸、ノイラミン酸、Ｎ−アセチルガラクトース、及びＮ−アセチルグルコサミンが挙げられる。このようなＮ−アセチル化された糖は大抵の場合、細胞表面上に存在し、生物体における表面認識に関与している。例えば、それらは、タンパク質、ホルモン、ウイルス、微生物、寄生虫、又は生物体内の他の細胞に関する受容体によって認識される。

また糖はリポ多糖類（ＬＰＳ）に存在する。ＬＰＳは、多糖と結合した脂質を含む。ＬＰＳとは、例えばグラム陰性細菌の細胞膜の成分である。これは、哺乳類等の動物における免疫応答を度々刺激するエンドトキシンである。

好ましくは、アルキル基は６〜３０個、特に１０〜２５個、又は１０〜２０個の炭素原子を含む。これは、１つ又は複数のヒドロキシル基、カルボキシ基、ハロゲン、酸素、窒素、アミド基又はアリール基で置換されていてもよい。アルキル基は分枝、線状又は環状アルキルであってもよい。

好ましくは、ポリアルキレングリコールは、２〜１０個、特に少なくとも３個の炭素原子を含有するアルキレングリコールのポリマー、最も好ましくはポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）又はポリ（ブチレングリコール）である。最も好ましくは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を使用する。ポリアルキレングリコールを含むモノマーから櫛形ポリマーを製造する方法は当該技術分野で既知である（国際公開第ＷＯ２００６／００３３５２号（参照により本明細書中に援用される）に記載されている）。しかしながら、本明細書中に開示されるメカニズムによるペンダントアルキレングリコール基の結合は新規であり、例えば、比較的使用するのが容易なメカニズムによって、ポリアルキレン基に加えて使用される種々のペンダント基の混合物をもたらす。ポリアルキレングリコール基は、アルキル基について上記したものを含む１つ又は複数の基で置換されていてもよい。

ポリアルキレングリコール誘導体は、例えば、ＰＥＧが結合する分子の抗原性及び免疫原性を低減するような使用可能性を有する。ＰＥＧはまた、ポリマーが糸球体濾過範囲を超えるまで分子の見かけサイズを大きくした結果としての腎クリアランスの回避に起因して、且つ／又は細胞クリアランス機構の回避によって、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて循環半減期を顕著に改善させる。その上、ＰＥＧは、ＰＥＧが結合するタンパク質及びポリペプチドの溶解性を顕著に改善させることができる。それゆえ、ポリマーを含むポリアルキレングリコールの使用によって、有益な特性を有するポリマーが生成される。ＰＥＧ側基はまた、（上記のように）アジド基又はアルキン基で官能化されるオレフィン性不飽和モノマーを共重合することによって組み入れられてもよく、オレフィン性不飽和モノマーはＰＥＧ等のポリアルキレングリコールで官能化される。後のモノマーは国際公開第ＷＯ２００
６／００３３５２号に記載されている。

リン脂質は、少なくとも１つの脂肪酸がリン酸基で置換され且つ通常エタノールアミン又はコリン等のいくつかの窒素含有分子のうちの１つを有する脂肪誘導体である。リン脂質としては、ホスファチジルコリン（レシチンとしても知られている）、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン及びホスファチジルエタノールアミンが挙げられる。リン脂質の極性は、細胞膜内のそれらの生物学的機能にとって必須である。脂溶性部分は他のリン脂質の脂溶性部分と結合するのに対し、水溶性領域は周囲の溶媒に曝されたままである。リン脂質はまた、乳化剤として作用するという重要な特性を有する。このため、ポリマーへの付加的なリン脂質は、ポリマーの溶解性及び／又は生物学的活性を変えるのに用いることができる。

最も好ましくは、ペンダント側基が糖を含む。

好ましくは、オレフィン性不飽和モノマーが１つ又は複数の異なるオレフィン性不飽和モノマーと共重合する。これはコポリマーを生成するのに用いられ得る。２つの異なるモノマーは、例えば、アルキン基又はアジド基で官能化されるメチルメタクリレートであってもよく、さらなるモノマーは、例えば、官能化されていないメチルメタクリレートであってもよい。これらは、反応に別々に添加されてブロックコポリマーを生成し得るか、又は代替的には所定比率で添加されて統計学的なコポリマーを生成し得る。官能化されていないモノマーを使用することによって、ポリマー中間体に組み入れられる官能化されたモノマーの数を制御することができる。このため、使用されるモノマーの少なくとも１つが、官能化されたアルキン基又はアジド基を有しないことが最も好ましい。このような共重合は、ブロック共重合、グラジエント共重合又は統計学的共重合であってもよい。

さらなるモノマーの少なくとも１つは、それ自体、官能化された基を含むものであってもよい。例えば、モノマーは、蛍光基又は他の標識基、例えばＮＭＲによって検出可能なベンジル側基、又はクマリン若しくはホスタゾル等の蛍光基に結合している。しかしながら、他の官能化されたモノマーを使用し、最終的なポリマーに異なる特性を組み入むこともできる。例えば、官能化された基は、トキシン及び／又は抗生物質等の薬剤であってもよい。この抗生物質は、抗ウイルス剤、抗菌剤又は駆虫剤、例えば抗マラリア剤であってもよい。トキシン及び抗生物質は一般的に既知である。官能化された基はポリアルキレングリコール、例えばポリエチレングリコールであってもよい。

好ましくは、ポリマー中間体は２つ以上の異なるペンダント基と反応し、アルキン基又はアジド基で各々官能化される。これにより、例えば、最終的なポリマーと結合する種々の糖の混合物がもたらされる。このことは、種々の糖の様々な比率の効果を例えばレクチン又は細胞膜との結合に関して求めることができるという利点を有する。また種々のペンダント基の１つは、官能基、例えば標識基であってもよい。例えば、クマリン（蛍光基）を用いてポリマー蛍光をもたらすことができる。クマリン基は、必要に応じてアジド基又はアルキン基を介して結合し得る。

アルキン基を保護する保護基は好ましくは、トリアルキル、トリアリール又はＲ₃Ｓｉ
（ここで、Ｒ＝置換又は非置換のアルキル又はアリールである）から選択され、各アルキル又はアリールが好ましくは１〜６個の炭素又は別のケイ素含有保護基を含有する。好ましくは保護基がトリメチルシリル基である。

アジド基の保護基は、好ましくは使用されず、また通常必要としない。

本発明者らは、アルキン基がトリメチルシリル基で保護され、且つ保護基が、酢酸等の
酸で緩衝処理を施したＴＢＡＦ（テトラブチルアンモニウムフルオライド）を用いてアルキン基を処理することによってポリマー中間体から除去される場合、ポリマー中間体から除去される保護基の数が改良されることを予想外に見出した。

好ましくはこのオレフィン性不飽和モノマー（複数可）は、付加重合を受け得るオレフィン性不飽和部分を有し、且つ１つ又は複数の官能基を含んでもよい線状、分枝状又は星形の置換又は非置換モノマーである。

好ましくはモノマーは、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、プロピルメタクリレート（全て異性体）、ブチルメタクリレート（全て異性体）、及び他のアルキルメタクリレート；対応するアクリレート；さらに官能化されたメタクリレート及びアクリレート、例えばグリシジルメタクリレート、トリメトキシシリルプロピルメタクリレート、アリルメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート、ジアルキルアミノアルキルメタクリレート；フルオロアルキル（メタ）アクリレート；メタクリル酸、アクリル酸；フマル酸（及びエステル）、イタコン酸（及びエステル）、無水マレイン酸；スチレン、α−メチルスチレン；ビニルハロゲン化物、例えば塩化ビニル及びフッ化ビニル；アクリロニトリル、メタクリロニトリル；式ＣＨ₂＝Ｃ（Ｈ
ａｌ）₂（ここで、各ハロゲンは独立してＣｌ又はＦである）のビニリデンハロゲン化物
；式ＣＨ₂＝Ｃ（Ｒ¹⁵）Ｃ（Ｒ¹⁵）＝ＣＨ₂（ここで、Ｒ¹⁵は、独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃｌ又はＦである）の置換されてもよいブタジエン；式ＣＨ₂＝ＣＨＳＯ₂ＯＭ（ここで、ＭはＮａ、Ｋ、Ｌｉ、Ｎ（Ｒ¹⁶）₄（ここで、Ｒ¹⁶は、各々独立して、Ｈ又は
Ｃｌ又はアルキルであり、ＤはＣＯＺ、ＯＮ、Ｎ（Ｒ¹⁶）₂又はＳＯ₂ＯＺであり、ＺはＨ、Ｌｉ、Ｎａ、Ｋ又はＮ（Ｒ¹⁶）₄である）である）のスルホン酸若しくはその誘導体；
式ＣＨ₂＝ＣＨＣＯＮ（Ｒ¹⁶）₂のアクリルアミド若しくはその誘導体、及び式ＣＨ₂＝Ｃ
（ＣＨ₃）ＣＯＮ（Ｒ¹⁶）₂のメタクリルアミド若しくはその誘導体から選択され、このようなモノマーの混合物、又はポリオキシポリエーテルを使用してもよい。ポリオキシポリエーテルは好ましくは、ポリ（アルキレングリコール）又はポリテトラヒドロフランである。好ましくは、ポリアルキレングリコールが、２〜１０個、特に少なくとも３個の炭素原子を含有するアルキレングリコールのポリマー、最も好ましくはポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）又はポリ（ブチレングリコール）である。例えば、ポリエチレングリコールを使用してもよい。

必要であれば、モノマーを保護されてもよいアジド基又はアルキン基で官能化して、ペンダント側基部分を結合させてもよい。

最も好ましくは、上記方法は、遷移金属媒介リビングフリーラジカル重合及び／又はＡＴＲＰ（原子移動ラジカル重合）を利用する。強い原子（atoms：アニオン）（求核試薬
）及びカチオン（求電子試薬）と反応し得る一連の官能基を含有する糖（単数又は複数）が特に好ましい。しかしながら、当該技術分野で既知の他のタイプのリビング重合を使用してもよい。これらとしては、リビングアニオン重合及びリビングカチオン重合、ＲＡＦＴ、及び窒素酸化物媒介重合が挙げられる。ＲＡＦＴは、例えば、米国特許第６，１５３，７０５号、国際公開第ＷＯ９８／０１４７８号、国際公開第ＷＯ９９／３５１７７号、国際公開第ＷＯ９９／３１１４４号、国際公開第ＷＯ９８／５８９７４号に開示されている。

窒素酸化物媒介重合は、Harnker C. J他による論文（Chem Rev 2001）に概説されてい
る。

いずれかのリビングラジカル重合は、
（ｉ）各開始剤は、α末端が開始剤に直接由来する１つのポリマー鎖かつ唯一のポリマ
ー鎖をもたらし、
（ｉｉ）停止反応がないことにより、停止反応の結果である二官能性生成物の存在がなくなり、
（ｉｉｉ）分子量分布が他の反応によるよりも厳密に制御され、
（ｉｖ）複雑な化学変換を実行する必要なく、重合プロセスにより、官能基の導入、例えば開始剤によってタンパク質を結合させることが可能となる
として、請求項に記載の発明と連動すると考えられる。

好ましくは、遷移金属媒介リビングフリーラジカル重合及び／又はＡＴＲＰが、
（ｉ）移動可能な原子又は基を含む開始剤、及び
（ｉｉ）重合反応を触媒することができる触媒、
の使用を含む。

開始剤は好ましくはホモリシス開裂可能な結合を含む。国際公開第ＷＯ９６／３０４２１号、国際公開第ＷＯ９７／１８２４７号、及び国際公開第ＷＯ９７／４７６６１号を含むこのような系について言及する多くの特許出願が存在する。櫛形ポリマー、例えばポリエチレングリコールの製造は国際公開第ＷＯ２００６／００３３５２号に開示されている。

窒素酸化物媒介リビングラジカル重合、原子移動ラジカル重合及び可逆的付加型開裂連鎖移動重合（ＲＡＦＴ）メカニズムを含む、ラジカル重合の種々の形態、並びに、リビングラジカル重合の他の形態は、テキストブック「ラジカル重合の手引き（Hand-book of Radical Polymerisation）」、EDT. Matyjaszewski K. and Davies T.P. (John Wiley and
Sons) (2002)（参照により本明細書中に援用される）に記載されている。

好ましくは、移動可能な原子又は基が、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ²⁰、ＳＲ²¹、ＳｅＲ²¹、ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ²¹、ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ²¹、ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ²¹）₂、ＯＰ（＝Ｏ）Ｏ²¹、
Ｏ−Ｎ（Ｒ²¹）₂及びＳ−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ²¹）₂（ここで、Ｒ²⁰＝Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキルで
あり、水素原子の１つ又は複数がハロゲン化物によって独立して置換されてもよく、Ｒ²¹がアリール又は線状若しくは分枝状Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル基であり、且つ（ＮＲ²¹）₂基が存在するときは、２つのＲ²¹基が結合して５員複素環又は６員複素環を形成し得る）から選択される。

好ましくは、開始剤は、検出可能な基、又は生体物質と結合し得る基を有する。この基は好ましくは、タンパク質若しくはポリペプチド、又は脂肪、即ち脂質、炭水化物若しくは核酸と結合することができる。ＡＴＲＰ又は遷移金属媒介リビングラジカル重合では、開始剤の少なくとも一部が最終的なポリマーに組み入れられる。これにより、いくらかの基が開始剤からポリマーに組み入れられる。

好ましくは、開始剤が、
Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、Ａ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ｒ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−Ａ、Ｒ−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−Ｏ−Ａ（ここで、Ｒは、Ｃ₁〜Ｃ₂₀置換又は非置換の直鎖、分枝鎖、環状、複素
環式又は芳香族のアルキル；

（式中、
Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ²⁰、ＳＲ²¹、ＳｅＲ²¹、ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ²¹、ＯＰ（＝Ｏ）Ｒ²¹、ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ²¹）₂、ＯＰ（＝Ｏ）Ｏ²¹、Ｏ−Ｎ（Ｒ²¹）₂及びＳ−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ²¹）₂（ここで、Ｒ²⁰＝Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり、水素原子の１つ又は複数がハロゲン化物によって独立して置換されてもよく、Ｒ²¹がアリール又は線状若しくは分枝状Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル基であり、且つ（ＮＲ²¹）₂基が存在するときは、２つのＲ²¹基が結合して５員複素環又は６員複素環を形成し得る）であり、
Ａは、ポリマーに結合された場合、タンパク質又はポリペプチド等の生体分子と結合し
得る部分であり、
Ｂはリンカーであり、存在しても存在し得なくてもよい）
から選択される。

最も好ましくは、Ａが、スクシンイミジルスクシネート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、スクシンイミジルプロピオネート、スクシンイミジルブタノエート、トリアジン、ビニルスルホン、プロピオンアルデヒド、アセトアルデヒド、トレシレート、ベンゾトリアゾールカーボネート、マレイミド、ピリジルスルフィド、ヨードアセトアミド及びスクシンイミジルカーボネートから選択される。

好ましくは、リンカーが、存在する場合、Ｃ₁〜Ｃ₂₀の置換又は非置換の直鎖、分枝鎖
、環状、複素環式又は芳香族のアルキル基；−（ＣＨ₂Ｚ）_aＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＺＣＨ₂−
、−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｚ）_n−Ｒ、−（ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）Ｚ）_n−Ｒ、−（ＣＨ₂）_b−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ₂）_c−、−（ＣＨ₂）_a−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ₂）_y−、−Ｎ（Ｒ）₂
−；−Ｓ−；−Ｎ−Ｒ；又は−Ｏ−Ｒ（ここで、Ｒ＝Ｃ₁〜Ｃ₂₀の置換又は非置換の直鎖
、分枝鎖、環状、複素環式又は芳香族のアルキルであり、ＺはＯ又はＳであり、ｎ、ａ、ｂ及びｃは独立して１〜１０の選択可能な整数である）から選択される。

好ましくは、タンパク質又はポリペプチドと反応し得る部分が式：

（式中、Ｒ’はＨ、メチル、エチル、プロピル又はブチルであり、Ｘ＝ハロゲン化物、特にＣｌ又はＢｒである）
を有する。

最も好ましくは、開始剤（ｉｉ）が、式：

（式中、ｎは０〜１０の整数であり、Ｘはハロゲン化物、特にＣｌ又はＢｒである）
を有する。

開始剤が、式：

から選択される化合物を有する。

このような開始剤及び結合基は国際公開第２００６／００３３５２号に詳細に記載されている。

開始剤が、ベンジル側基又はクマリン蛍光基等の検出可能な基を含み得る。ベンジル側基はＮＭＲによって検出可能である。

最も好ましくは、開始剤がＯ−ベンジルα−ブロモエステルである。

好ましくは、触媒が、遷移金属と成長中のポリマーラジカルとの間の直接結合が形成されないよう、δ−結合で遷移金属と配位し得る任意のＮ−、Ｏ−、Ｐ−又はＳ−含有化合物、又はπ−結合で遷移金属と配位し得る任意の炭素含有化合物であるリガンドから選択
される。

好ましくは、触媒が、
第一化合物ＭＹ（ここで、Ｍは、一形式酸化状態により酸化され得る遷移金属、特にＣｕ⁺、Ｃｕ²⁺、Ｆｅ²⁺、Ｆｅ³⁺、Ｒｕ²⁺、Ｒｕ³⁺、Ｃｒ²⁺、Ｃｒ³⁺、Ｍｏ²⁺、Ｍｏ³⁺、Ｗ²⁺、Ｗ³⁺、Ｍｎ³⁺、Ｍｎ⁴⁺、Ｒｈ³⁺、Ｒｈ⁴⁺、Ｒｅ²⁺、Ｒｅ³⁺、Ｃｏ⁺、Ｃｏ²⁺、Ｖ²⁺、Ｖ³⁺、Ｚｎ⁺、Ｚｎ²⁺、Ａｕ⁺、Ａｕ²⁺、Ａｇ⁺及びＡｇ²⁺であり、Ｙは一価又は二価の対イ
オンである）；及び
窒素の少なくとも１つが芳香族環の一部でないオルガノジイミン、
を含む。

最も好ましくは、上記方法が、重合反応を触媒し得る触媒の使用を含み、触媒が式：
［ＭＬ_m］ⁿ⁺Ａ^n-
（式中、
Ｍ＝一形式酸化状態により酸化され得る遷移金属、特にＣｕ⁺、Ｃｕ²⁺、Ｆｅ²⁺、Ｆｅ³⁺、Ｒｕ²⁺、Ｒｕ³⁺、Ｃｒ²⁺、Ｃｒ³⁺、Ｍｏ²⁺、Ｍｏ³⁺、Ｗ²⁺、Ｗ³⁺、Ｍｎ³⁺、Ｍｎ⁴⁺、
Ｒｈ³⁺、Ｒｈ⁴⁺、Ｒｅ²⁺、Ｒｅ³⁺、Ｃｏ⁺、Ｃｏ²⁺、Ｖ²⁺、Ｖ³⁺、Ｚｎ⁺、Ｚｎ²⁺、Ａｕ⁺
、Ａｕ²⁺、Ａｇ⁺及びＡｇ²⁺であり、
Ａ＝陰イオンであり、
ｎ＝１〜３の整数であり、
ｍ＝１〜２の整数であり、
Ｌ＝窒素の少なくとも１つが芳香族環の一部でないオルガノジイミンである）
の化合物を含む。

好ましくは、オルガノジイミンが、

（式中、
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂及びＲ₁₃は独立して変更可能であり、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂及びＲ₁₃は、Ｈ、直鎖、分枝鎖もしくは環状の飽和アルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル、アリール（例えば、フェニル又は置換フェニル（置換はＲ₄〜
Ｒ₉について記載される通りである））、ＣＨ₂Ａｒ（ここで、Ａｒはアリール又は置換ア
リールである）又はハロゲンであってもよい）から選択される式を有する。好ましくはＲ₁、Ｒ₂、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂及びＲ₁₃は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀のアルキル、ヒドロキシアルキル又は
カルボキシアルキル、特にＣ₁〜Ｃ₄アルキル、特にメチル又はエチル、ｎ−プロピルイソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、シクロヘキシル、２−エチルヘキシル、オクチル、デシル又はラウリルであり得る。

Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂及びＲ₁₃は特にメチルであり得る。

Ｒ₃〜Ｒ₉は独立して、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、Ｒ₁₂及びＲ₁₃について記載される基、又はさらにＯＣＨ_2n+1（ここで、ｎは１〜２０の整数である）、ＮＯ₂、ＣＮ、又はＯ＝Ｃ
Ｒ（ここで、Ｒ＝アルキル、ベンジルＰｈＣＨ₂又は置換ベンジル、好ましくはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキル、特にＣ₁〜Ｃ₄アルキルである）から選択されてもよく、ｍは０〜４の整数である。

好ましくはキノリンカルバルデヒドにおいて、Ｒ₉はＨであり且つｍ＝０である。

さらに、化合物は、窒素基の１つに対するキラル中心αを示し得る。これにより、異なる立体化学構造を有するポリマーが生成される可能性がもたらされる。

一般式２５の化合物は、ピリジン基上に１つ又は複数の縮合環を含み得る。

１つ又は複数の隣接するＲ₁及びＲ₃、Ｒ₃及びＲ₄、Ｒ₄及びＲ₂、Ｒ₁₀及びＲ₉、Ｒ₈及びＲ₉、Ｒ₈及びＲ₇、Ｒ₇及びＲ₆、Ｒ₆及びＲ₅基は、Ｃ₅〜Ｃ₈シクロアルキル、シクロアル
ケニル、ポリシクロアルキル、ポリシクロアルケニル、又は環状アリール、例えばシクロヘキシル、シクロヘキセニル若しくはノルボルニルであってもよい。

好ましいリガンドとしては、以下のものが挙げられる：

（式中、^*はキラル中心を示し、
Ｒ₁₄＝水素、Ｃ₁〜Ｃ₁₀分枝鎖アルキル、カルボキシ−又はヒドロキシＣ₁〜Ｃ₁₀アルキルである）。

好ましくは、触媒は以下のものである：
ＣｕＢｒと組み合わせた

最も好ましくは、オルガノジイミンが、Ｎ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミン（ＮＭＰＩ）、Ｎ（ｎ−エチル）−２−ピリジルメタンイミン又はＮ−エチル−２−ピリジルメタンイミンから選択される。

触媒はビピリジン基も含む。最も好ましくは、触媒が４，４−ジ（５−ノニル）−２，２’−ビピリジル（ｄＮｂｐｙ）である。

好ましくはペンダント基は、上記で定義される通りであり、好ましくは、糖から選択される部分を含み、且つグルコース、グルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、ラクトース、マンノース、フコース、及びそれらの誘導体、例えばシアル酸から選択される。糖は好ましくはＮ−アセチル化されている。このような糖の好ましい例としては、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸、ノイラミン酸、Ｎ−アセチルガラクトース、及びＮ−アセチルグルコサミンが挙げられる。このようなＮ−アセチル化された糖は大抵の場合、細胞表面上に存在し、生物体における表面認識に関与している。例えば、それらは、タンパク質、ホルモン、ウイルス、微生物、寄生虫、又は生物体内の他の細胞上の受容体によって認識される。

また糖はリポ多糖類（ＬＰＳ）に存在する。ＬＰＳは、多糖と結合した脂質を含む。ＬＰＳとは、例えばグラム陰性細菌の細胞膜の成分である。これは、哺乳類等の動物における免疫応答を度々刺激するエンドトキシンである。

反応は、反応物に応じて任意の好適な溶媒中で実行され得る。このような溶媒としては、プロトン性及び非プロトン性溶媒、並びに非プロトン性（aprotic）溶媒が挙げられる
。例えば、水、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、アルコール、及びアルコールと水との混合物である。

温度及び濃度等の最適な反応条件は、当業者によって容易に確定され得る。

本発明はまた、本発明の方法によって得られる、ペンダント側基を有するポリマーを提供する。

好ましくは、ポリマーは、１．５、１．４又は１．３未満、最も好ましくは１．２５未満、１．２未満、特に１．１５未満の多分散度指数（Ｍ_w／Ｍ_n）を有する。

好ましくは、ポリマーは５０００Ｄａ〜１０００００Ｄａの分子量を有する。

本発明のさらなる態様は、１．５、１．４、１．３未満、最も好ましくは１．２５未満、１．２未満、特に１．１５未満の多分散度を有する、複数のペンダント基を含むペンダ
ント側基を有するポリマーを提供する。好ましくはポリマーの分子量は５０００Ｄａ〜１０００００Ｄａである。

本発明の方法によって生成されるポリマーはさらなる反応に用いることができる。例えば、ペンダント基が糖である場合、糖は、例えばイソシアネート等のキラル化合物と反応させることによって誘導体化し得る。これにより、キラルクロマトグラフィに有用な化合物が生成される。

本発明のポリマーは好ましくは上記のペンダント側基を有し、この部分は、上記の１つ又は複数の糖、アルキル基、ポリアルキレングリコール基、又はリン脂質基から選択され得る。

最も好ましくは、ペンダント側基が糖側基である。

２つ以上の異なるペンダント側基をポリマー上に設けてもよい。これらは糖側基であることが好ましい。しかしながら、本発明の第１の態様について上記したもののような他の官能性側基を使用してもよい。

好ましくは、検出可能な側基又は末端基がもたらされる。最も好ましくは、検出可能な基がベンジル基又はクマリン基である。

本発明のポリマーは、上記のタンパク質又はポリペプチド、核酸、炭水化物又は脂肪から選択される生体分子と結合し得る基をさらに含んでいてもよい。

好ましくは、ポリマーが、

（式中、Ｒ’はＨ、メチル、エチル、プロピル又はブチルであり、Ｘはハロゲン化物、特にＣｌ又はＢｒである）
から選択される基を含む。

好ましくは、糖ポリマーが、ポリマーに結合した状態の、開始剤から得られる原子又は基と、ポリマー上の別の位置に存在する、開始剤の化合物の残渣とを含む。

生体分子と結合し得る基及び／又は開始剤は、本発明の第１の態様について上記で定められ通りであり得る。

遷移金属媒介リビングラジカル重合／ＡＴＲＰに関して、開始剤は分離する。最終的に開始剤の一部がポリマー鎖の一端と結合する場合、他端の、開始剤の移動可能な部分（原子又基）がポリペプチド鎖の別の部分と結合する。例えば、結果及び考察のセクションに示すように、Ｏ−ベンジルα−ブロモエステル（２）を使用して、最終的にポリマー鎖の一端が臭素原子で終わり、開始剤部分の残渣の部分がポリマー鎖の他端に現れる。開始剤は好ましくは、本発明の第１の態様に記載される通りである。

糖又はＬＰＳ等の側基を有する化合物を生成する能力によって、研究されるタンパク質、ウイルス、寄生虫、細胞等の相互作用が可能になる。またこのような能力により、細胞受容体又は他の成分を標的とする分子がもたらされる。

それゆえ、例えば糖又はＬＰＳを含む本発明の分子は、さらなる官能基とさらに結合し得る。官能基は、（例えば上記のような）トキシン及び／又は抗生物質等の薬剤であってもよい。さらなる官能基は、例えばクリックケミストリによって結合されてもよい。代替的には、官能基は、重合反応を開始するのに用いられる開始剤の一部として提供され得る。国際公開第ＷＯ２００６／００３３５２号は、官能化された開始剤の使用による、ペンダントポリエチレングリコール基が結合され、且つ生物学的な結合部分、例えばマレイミド、スクシンイミド又はＮ−ヒドロキシスクシンイミドが結合されたポリマーの製造を開示している。

さらなる官能基は、オレフィン性不飽和モノマーと結合し、例えば、グラジエントコポリマー、ブロックコポリマー又は統計学的なコポリマー等のコモノマーとして組み入れられ得る。例えば、本発明の方法で生成される、糖が結合したポリマーのブロックは、さら
なる官能基が結合した第２のブロックに結合して生成されてもよい。

本発明の分子は好ましくは、ポリマーと結合する場合、生体物質に結合し得る部分を含む。好ましくは、この部分はマレイミド、スクシンイミド又はＮ−ヒドロキシスクシンイミドである。好ましくは、本発明の方法はこのような部分を含む開始剤を使用する。このような開始剤は包括的に国際公開第ＷＯ２００６／００３３５２号に示されている。

本発明の方法によって生成される、糖又はＰＥＧ側基を含む分子は、例えば、このような部分によって薬学的に活性な化合物、例えば薬剤に結合され得る。国際公開第ＷＯ２００６／００３３５２号に記載されているように、ＰＥＧは、このような化合物の循環半減期を改善し且つ抗原性及び免疫原性を低減させることが知られている。ＰＥＧの代わりにポリマーに結合した糖を使用する場合にも、この効果を有すると考えられる。

薬剤を受容体に向けるように、例えば糖又はＬＰＳによって、例えば細胞上の受容体にこの分子を向けることができる。

それゆえ、本発明はまた、タンパク質又はポリペプチド等の薬学的に活性な薬剤と結合する本発明の分子を提供する。好ましくはこの分子は、ペンダント側基として１つ又は複数の糖及び／又はＰＥＧ基を含む。好ましくはこの分子は、上記の部分のような、生物学的な部分と結合し得る部分を介して結合する。

本発明のさらなる態様は、本発明による複数のポリマーを含む、種々のポリマーのライブラリを提供し、これらのポリマーはそれぞれ様々なペンダント基、ペンダント側基の様々な量及び／又は異なるペンダント側基の様々な比率によって異なる。種々の化合物のライブラリを提供することにより、例えば、レクチン結合上の様々な比率の糖の効果を確認することが可能になる。

本発明によるポリマー又は本発明によるライブラリを含む、糖−レクチン結合用の、又は細胞表面結合検査のための検査キットも提供される。好ましくは、検査キットは１つ又は複数のペンダント糖側基を有するポリマーを含む。

本発明のさらなる態様は、本発明によるポリマー又はポリマーのライブラリに対するレクチン又は細胞表面の結合を検出することを含む、ポリマーに対するレクチン又は細胞表面の結合について、レクチン又は細胞表面を検査する方法を提供する。好ましくは、ポリマーが１つ又は複数のペンダント糖基を含む。

化合物へのレクチン結合又は細胞表面結合を検査する方法は、当該技術分野で既知である。例えば、コンカナバリンＡ（ｃｏｎＡ）等のレクチンへの本発明のポリマーの結合は、ポリマーがレクチンを沈降させることから測定することができる。これは、材料及び方法のセクションでより詳細に記載されている。その上、比濁法等の他の技法も使用することができる。

本発明による方法における使用のためのポリマー中間体も提供される。かかるポリマーは好ましくは、複数の保護されてもよいアジド側基又は保護されてもよいアルキン側基を含み、且つ好ましくは、１．５、１．４又は１．３未満、より好ましくは１．２５未満、１．２未満、特に１．５未満の多分散度指数を有する。

好ましくは、中間体ポリマーは検出可能な側基又は末端基を含む。中間体ポリマーは、生体分子と結合し得る基、並びに／又は開始剤から得られる原子若しくは基、及びポリマー中間体上の別の位置に存在する、開始剤の化合物の残渣をさらに含み得る。検出可能な
側基又は末端基、生体分子と結合し得る部分、及び開始剤化合物は好ましくは、本発明の先行するいくつかの態様について上記で定められた通りである。

好ましくは、本発明のポリマー又は本発明のポリマー中間体は、統計学的なコポリマー、ブロックコポリマー、グラジエントなポリマー、テレケリック（telechelic：両端二官能性）ポリマー、櫛形ポリマー、又はグラフトコポリマーである。

ポリマー又はポリマー中間体は、分枝、線状、櫛形、デンドリマー、分枝ポリマー又はグラフトポリマーであってもよい。

ポリマーは、それ自体が固体担体を形成してもよく、又は当該技術分野で一般的に既知の技法によって固体担体に結合されていてもよい。開始剤は、それ自体が重合前に担体と結合するものであってもよい。しかしながら、本発明者らは、クリックケミストリによってペンダント基を付加する原理がいずれの固体担体にも適応され得ることを理解している。

したがって、本発明のさらなる態様は、
（ｉ）（ａ）保護基で保護されてもよいアジド基、又は（ｂ）保護基で保護されてもよいアルキン基で官能化される有機担体又は無機担体を準備すること、
（ｉｉ）存在する場合には、官能化された担体から保護基の総数の少なくとも一部を除去すること、及び
（ｉｉｉ）官能化された担体を、（ａ）アルキン基又は（ｂ）アジド基で各々官能化された少なくとも１つのペンダント側基部分と反応させて、アルキン基及びアジド基が反応しペンダント側基を担体に結合させること、を含む、ペンダント側基を含む担体を製造する方法を提供する。

固体担体は、ビーズの形態で、又は材料のシート等のより大きな表面積を有して提供され得る。担体は、シリカ等の無機物、又は架橋有機材料（例えばポリ（スチレン−ｗ−ジビニルベンゼン））若しくはセルロース材料（例えば濾紙）等の有機物であってもよい。Ｗａｎｇ樹脂が特に好ましい。固体担体は国際公開第ＷＯ２００１／０９４４２４号（参照により本明細書中に援用される）でより詳細に記載されている。

好ましくは、固体担体はアルキン基で官能化される。

固体担体は本来、例えばヒドロキシル基又はアミン基を含む。その場合、この基はクリックケミストリにおける使用のためにアルキン基に変換されてもよい。例えば、ヒドロキシル基含有担体、例えばＷａｎｇ樹脂は、無水ピリジン及びジメチルアミノピリジンと反応し、その後アルキンエステルと反応して、アルキン官能化された担体を生成し得る。アルキンエステルは好ましくは、Ｃ３〜Ｃ１０アルキンエステルである。

使用されるペンダント側基、アルキン基、アジド基、及び保護基は、上記で定められる通りであり得る。上記のような任意選択的な官能基又は検出可能な基も提供される。

また本発明者らは、ペンダント基が鏡像異性体である場合に、本発明のポリマー、ライブラリ及び固体担体がキラルクロマトグラフィにおいて使用され得ることを理解している。キラルクロマトグラフィは、固定相がアキラルの代わりにキラルである場合に当該技術分野で一般的に既知のカラムクロマトグラフィの変形である。その場合、同一化合物の鏡像異性体は固定相に対する親和性が異なるため、様々な時間でカラムから出る。鏡像異性による分離は、キラル相の慎重な使用によってキラルクロマトグラフィにおいて達成される。移動相は、キラルガスクロマトグラフィ及びキラル液体クロマトグラフィを利用して
気体又は液体であってもよい。キラル選択性は通常、キラル固定相を使用することによって得られる。

鏡像異性化合物は、互いに重ね合わせることができない鏡像として存在する。鏡像異性体の混合物はラセミ混合物として知られる。多くの薬剤、糖（例えばＤ−マンノース、又はＤ−グルコース若しくはＬ−グルコース）及びアミノ酸を含む多種多様な鏡像異性化合物が存在する。それらは通常、偏光下で異なる活性を有する。光に対面して観た場合、時計方向に光面を回転させる鏡像異性体は右旋性（「＋」又は「Ｄ」）であると称される。反時計方向に光を回転させるものは左旋性（「−」又は「Ｌ」）であると称される。種々の鏡像異性体はたいていの場合、異なる活性、又は様々な化合物若しくは受容体との異なる相互作用能を有する。

このため好ましくは、本発明の方法に用いられるか、又は本発明のポリマー、ライブラリ又は固体担体と結合するペンダント側基は、化合物の鏡像異性体、又は化合物のラセミ混合物である。ラセミ混合物は、所定比率の種々の鏡像異性体（enanatiomers）の事前に選択されるラセミ混合物であってもよい。例えば、＋：−鏡像異性体の比率は、９０：１０、８０：２０、７０：３０、６０：４０、５０：５０、４０：６０、３０：７０、２０：８０、又は１０：９０であり得る。

したがって、本発明の方法はまた、ポリマーを含むクロマトグラフィカラムを準備する工程を提供する。

本発明の技法は特に、このようなポリマー、ライブラリ又は担体の製造に役立つ。

好ましくは鏡像異性化合物は糖である。この鏡像異性糖は、モノマー（単糖）（例えばフルクトース若しくはグルコース）又は二糖類若しくは多糖類を形成するように互いに結合する２つ以上の糖から成るより複雑な糖であってもよい。種々の糖は、このような二糖類及び多糖類を形成するように共に形成され得る。二糖類としては、グルコース及びフルクトースから成るスクロース等の糖が挙げられる。多糖類としてはデンプン及びセルロースが挙げられる。糖という用語は、置換糖及び非置換糖の両方、並びに糖の誘導体を含む。好ましくは、糖は、グルコース、グルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、マンノース、フコース、及びそれらの誘導体、例えばシアル酸、グルコサミンの誘導体から選択される。糖は好ましくはα又はβである。糖は特に、マンノピラノシド又はガラクトースピラノシドであってもよい。また糖は、１つ若しくは複数のヌクレオシド、例えば３−アジド−３−デオキシチミジン（Aldrich Ltd（United Kingdom）から市販されている）
、又は１つ若しくは複数のヌクレオチドであってもよい。

ペンダント側基はさらに反応して他の有用な化合物を形成し得る。例えば、ペンダント基が糖である場合、糖を含むポリマーは、イソシアネート等のキラル化合物と反応し得る。これが糖上のヒドロキシル基と反応する。このため生成物は、上述のようにキラルクロマトグラフィにおいて用いられ得る。

本発明によるポリマー、ライブラリ又は固体担体を含むクロマトグラフィカラムが提供される。クロマトグラフィカラムは一般的に当該技術分野で既知である。このようなカラムは、例えばＨＰＬＣカラムであり得る。それらは好ましくはアフィニティクロマトグラフィ又はキラルクロマトグラフィにおける使用のためのものである。

本発明のポリマー、ライブラリ又は固体担体又はクロマトグラフィカラムの使用を含む、アフィニティクロマトグラフィ又はキラルクロマトグラフィを実施する方法も提供される。

ここで、添付の図面を参照し例証により本発明を説明する。
櫛形炭水化物官能性ポリマーへの逆合成アプローチを示す図である。 多価リガンド−ｃｏｎＡクラスタリング反応の模式図である。 ポリマー濃度によって異なる多くのポリマーの吸光度を示す図である。 エピトープ密度と比した本発明によるポリマーに関するクラスタリング速度定数（３つの独立した実験値の平均）を示す図である。 可逆的な凝集検査結果を示す図である。クラスタリング比濁法実験中に形成されるクラスタを１Ｍ α−メチルマンノピラノシドで処理し、吸光度をｔ＝０分及びｔ＝１０分で記録した。次に吸光度の変化（％）をエピトープ密度（％）に対してプロットし、α−メチルマンノピラノシド等の競合一価リガンドによって生じる破壊に対する複合体の安定性が、クラスタリングに用いられるポリマーのエピトープ密度に強く依存することを確認した。示したデータは、３つの独立した実験値から算出される平均値である。 ７０℃のトルエン溶液中で（２）を開始剤として用い、ＭＭＡ又はｍＰＥＧ₃₀₀ＭＡをコモノマーとして用いた（１）のホモ重合及び共重合を示す図である。反応条件：（３ａ）：［（１）］₀：［（２）］₀：［ＣｕＢｒ］：［リガンド］＝４０：１：１：２。（６）：［（１）］₀：［ＭＭＡ］₀：［（２）］₀：［ＣｕＢｒ］：［リガンド］＝２０：５０：１：１：２。（９）：［（１）］：［ｍＰＥＧ₃₀₀ＭＡ］：［（２）］：［ＣｕＢｒ］：［リガンド］＝５：２５：１：１：２。ａ）一次動態プロット。ｂ）モノマー換算におけるＭ_n及びＭ_w／Ｍ_nの依存性。 トリメチルシリル基（４ａ）の除去後、及びグルコースアジド誘導体（１２）との反応後の保護されたポリマー（３ａ）のＳＥＣ分析を示す図である。 比濁法検査結果を示す図である。 ガラクトース含有多価ディスプレイを示す図である：非蛍光性ポリマー（２７）及び蛍光性ポリマー（３０）（ＤＭＳＯ中０．５ｍｇ／ｍＬ溶液）。 固定化ＲＣＡ Ｉレクチンで充填されたカラムを用いたリガンド（３０）のアフィニティＨＰＬＣ分析を示す図である。条件：６６．７Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、環境温度。移動相中のＤ−ガラクトースの種々の濃度を各実行時に用いた。比較するために、クロマトグラムの総面積を濃度に対して正規化した。 ＴＭＭ−ＬＲＰ メチルメタクリレート及びホスタゾルモノマーのａ）片対数動態曲線及びｂ）Ｍ_n、Ｍ_w／Ｍ_n 対 変換曲線を示す図である。反応条件：［ＭＭＡ］₀／［ホスタゾル］₀／［Ｉ］₀／［ＣｕＢｒ］₀／［Ｌ］₀＝４０：０．２：１：１：２、９０℃。 Ｗａｎｇ樹脂をマンノースで修飾した前後のＦＩＴＣ−ＣｏｎＡ溶液のａ）ＨＰＬＣ−ＵＶ及びｂ）ＨＰＬＣ−ＦＬスペクトルである。 修飾Ｗａｎｇ樹脂の共焦点画像である。ａ）ポリ（ＭＭＡ−ｃｏ−ホスタゾル）Ｗａｎｇ樹脂及びｂ）Ｄ−マンノース修飾樹脂結合ＦＩＴＣ−ＣｏｎＡ。(図面代用写真) 担持された開始剤を用いた修飾Ｗａｎｇ樹脂を製造する代替方法である。試薬及び条件：ａ）２−ブロモ−２−メチル−プロピオニルブロミド、トリメチルアミン、ＤＭＡＰ、ＣＨ₂Ｃｌ₂、ｂ）メタクリル酸３−トリメチルシラニル−プロプ−２−イニルエステル、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ、Ｎ−（ｎ−プロピル）−２ピリジルメタンイミン、トルエン、６０℃、ｃ）ＴＢＡＦ・３Ｈ₂Ｏ、酢酸、ＴＨＦ、−２０℃〜２５℃、ｄ）（ＰＰｈ₃）₃Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ、α−（３−アジド−１−プロピル）−Ｄ−マンノース、ＤＩＰＥＡ、６０℃。 修飾Ｗａｎｇ樹脂のＩＲスペクトルである。 修飾Ｗａｎｇ樹脂への競合単座配位リガンドの付加。試薬及び条件：洗浄混合物：４ｍｇ／ｍｌ α−メチル−Ｄ−マンノピラノシド、１回当たり０．３ｍｌ。

材料
Keller及びWycoffの方法に従って臭化銅（Ｉ）（Aldrich、９８％）を精製した（Keller R N, Wycoff H D (1946) 1-4）。２−ブロモ−２−メチル−プロピオン酸ベンジルエステル開始剤（２）（Hovestad N J, et al., Macromolecules (2000), 33 (11): 4048-4052）、メチル−［６−アジド−６−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド（８）（Wu X, et al., Bioorg. Med. Chem. (2002), 10 (7): 2303-2307）、［（ＰＰｈ₃）₃ＣｕＢｒ］
（Gujadhur R, et al., Tetrahedron Lett. (2001), 42 (29): 4791- 4793）、３−アジ
ド−１−プロパノール（Mantovani G, et al., Chem. Commun. (2005), (16): 2089-2091）、過アセチル化したマンノース（Mukhopadhyay B, et al., J. Org. Chem. (2004), 69
(22): 7758-7760）、及びＮ−（エチル）−２−ピリジルメタンイミン（Haddleton D M,
et al., Macromolecules (1997), 30 (7): 2190-2193）を以前に記載されているように
調製し、０℃で保存した。トリメチルアミン（Fischer、９９％）を水酸化ナトリウムペ
レット上に保存した。無水ＴＨＦ（Romil 製の「Ｈｉ−Ｄｒｙ」、９９．９９％）を乾燥窒素下で、活性化させた４Å分子篩上に保存した。Aldrichからのメタノール（０．２０
Ｍ）中のテトラｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）をそのままの状態で（as
received）使用した。２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノ
シルアジド（１２）を含む全ての他の試薬及び溶媒は、Aldrich Chemical Companyから入手可能な高純度で得られるため、記述がない限りさらなる精製せずに使用した。

分析
特に指定のない限り標準的なシュレンク技法を用いて、酸素を含有しない窒素の不活性雰囲気下で全ての反応を実行した。Ｒ_f値は、事前に被覆されたシリカゲル６０ Ｆ２５
４を用いて実施され且つ示される溶媒系中で展開される分析ＴＬＣを示す。初めに、ＴＬＣプレートをサンプルの適用前にチャンバ溶媒中で濯いだ。化合物をＵＶ光（２５４ｎｍ）又はＫＭｎＯ₄の塩基性溶液（水中１０％ｗ／ｗ Ｋ₂ＣＯ₃）を使用して視覚化した。
Ｍｅｒｃｋ ６０（２３０〜４００メッシュ）シリカゲルをカラムクロマトグラフィに用いた。２つのＰＬゲル５μｍを混合させたＤ−カラム（３００×７．５ｍｍ）及び１つのＰＬゲル５ｍｍガードカラム（５０×７．５ｍｍ）（Polymer Laboratories、分子量２００ｇ／ｍｏｌ〜４０００００ｇ／ｍｏｌに好適）を備えたシステムにおいて、１．０ｍＬ／分で９５：５（ｖｏｌ／ｖｏｌ）のＴＨＦ／トリエチルアミンを溶離液として用いて示差屈折率検出により、モル質量分布をサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）を用いて測定した。ポリ（ＭＭＡ）標準（１・１０⁶ｇ／ｍｏｌ〜２００ｇ／ｍｏｌ）をＳＥＣを較
正するのに用いた。検体サンプルは、（０．２％ｖｏｌ）トルエンをフローマーカーとして含有していた。Ｍ_n 対 変換率（％）プロット中で記録されたＭ_nは、ＰＭＭＡ標準で較正されたＳＥＣデータから得られ、補正はされていない。それらのプロットは、変換率に伴うＭ_nの結果を示すために記録される。ガードカラム及び２つの混合Ｃカラム（２０
０ｇ／ｍｏｌ〜２００００００ｇ／ｍｏｌ）と直列に連結させた、低角レーザー光散乱検出器（ＬＡＬＬＳ；５°、２−ｍＷ ＨｅＮｅレーザー、Polymer Laboratories）及び濃度検出器（ＤＲＩ）を備えたゲル浸透クロマトグラフィ（ＰＬ−ＬＡＬＳ）によって、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）／０．１Ｍ ＬｉＢｒ ０．８ｍＬ／分を溶離液として用いて絶対重量平均分子量（Ｍ_w）を測定した。屈折率の増大（ｄｎ／ｄｃ）は濃
度検出値（detector）の積分によって導き出され、且つＭ_wの計算に用いた。ＳＥＣ−Ｌ
ＡＬＬＳシステムの光散乱セルを狭い分子量ＰＭＭＡ標準（ＰＬ）で較正した。サンプルを１２ｍｇ／ｍＬ濃度、１００μＬ容積で注入した。Ｓｈｏｄｅｘ ＡＦｐａｋ ＡＲＣ−８９４カラム及びＨｉｔａｃｈｉ Ｌ−７４８０蛍光検出器を備えたＨＰＬＣシステムを用いて、ＲＣＡ Ｉ認識実験を実施した。Ｂｒｕｋｅｒ ＤＰＸ３００スペクトロメータ及びＢｒｕｋｅｒ ＤＰＸ４００スペクトロメータを用いてＮＭＲスペクトルを得た。残留溶媒共鳴の化学シフト（¹Ｈ及び¹³Ｃ）を参照して、全ての化学シフトをテトラメチ
ルシランに対してｐｐｍ（δ）で記録する。以下の省略は、多重度：ｓ＝一重項、ｄ＝二
重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｂｓ＝幅の広い一重項、ｍ＝多重項を説明するのに用いた。ポリマーの分子量Ｍ_n（ＮＭＲ）は、鎖末端シグナル及びポリマー骨格に関する適切な
ピークの積分を比較することによって算出した。Ｖａｒｉａｎ Ｃａｒｙ ５０ Ｂｉｏ
ＵＶ−Ｖｉｓスペクトロメータを用い、２ｍＬ容ポリカーボネートキュベット（１ｃｍ経路長）を用いて比濁法検査を実施した。Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｌａｍｂｄａ ２５ ＵＶ−Ｖｉｓスペクトロメータ及び２ｍＬ容石英キュベット（１ｃｍ経路長）を定量沈降（ＱＰ）実験に用いた。Ｂｒｕｋｅｒ ＶＥＣＴＯＲ−２２ ＦＴＩＲスペクトロメータにおいて、Ｇｏｌｄｅｎ Ｇａｔｅダイアモンド減衰全反射セルを用いて赤外吸収スペクトルを記録した。Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ａｕｔｏｓｐｅｃ装置を用いてマススペクトルを記録した。Kiessling及び共同研究者らによって記載されているように比濁法及び定
量沈降検査を実施した（Cairo C W, et al., J. Am. Chem. Soc. (2002), 124 (8): 1615-1619）。融点はＢｕｃｈｉ ５１０装置においてオープンガラスキャピラリーを用いて
測定し、データは補正していない。収率は最適化していない。

モノマー及びアジド糖誘導体の合成
２−メチル−アクリル酸３−トリメチルシラニル−プロプ−２−イニルエステル（１）:
トリメチルシリルプロピン−１−オール（１０．０ｇ、７８．０ｍｍｏｌ）及びＥｔ₃
Ｎ（１４．２ｍＬ、１０１．３ｍｍｏｌ）のＥｔ₂Ｏ（１００ｍＬ）溶液を−２０℃に冷
却し、メタクリロイルクロリド（８．８ｍＬ、９３ｍｍｏｌ）のＥｔ₂Ｏ（５０ｍＬ）溶
液を約１時間かけて滴下した。この混合物をこの温度で３０分間攪拌した後、環境温度で一晩攪拌し、アンモニウム塩を濾過によって除去し、揮発分を減圧下で除去した。黄色油性残渣の¹Ｈ ＮＭＲ分析によって、相当量の不純物の存在はいずれも明らかにならなか
ったが、２つのさらなる不鮮明な斑点がＴＬＣ（石油エーテル／Ｅｔ₂Ｏ ２０：１）分
析により観測されたため、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（ＣＣ、ＳｉＯ₂、石
油エーテル／Ｅｔ₂Ｏ ５０：１；石油エーテル／Ｅｔ₂Ｏ ２０：１中Ｒ_f＝０．６７）
により精製した。得られた１２．４ｇ（６３．２ｍｍｏｌ、８１％）（注記：大量調製（１０ｇ以上）について、最良の分離は、カラムを１００％石油エーテルで溶離させ、その後、モノマー（１）の大部分がカラムから既に除去されている場合、石油エーテル／Ｅｔ₂Ｏ ５０：１で溶離させることによって得られた。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝２９６０，
１７２３，１６３８，１４５２，１３６６，１３１４，１２９２，１２５１，１１４７，１０３５，９７１，９４２，８４２，８１３，７６１ｃｍ^-1。¹Ｈ ＮＭＲ（４００．０
３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃、２９８Ｋ）δ＝０．１６（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ₃）₃）；１．９
３〜１．９４（ｍ，３Ｈ，ＣＨ₃Ｃ＝ＣＨ₂）；４．７３（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ₂）；５．５
８〜５．５９（ｍ，１Ｈ，Ｃ＝ＣＨＨ）；６．１４（ｍ，１Ｈ，Ｃ＝ＣＨＨ）。¹³Ｃ｛¹
Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ₃、２９８Ｋ）δ＝−０．２（３Ｃ，Ｓｉ（
ＣＨ₃）₃）；１８．４（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ＝ＣＨ₂）；５３．０（１Ｃ，ＯＣＨ₂）；９２．
０（１Ｃ，Ｃ≡ＣＳｉ（ＣＨ₃）₃）；９９．２（１Ｃ，Ｃ≡ＣＳｉ（ＣＨ₃）₃）；１２６．５（１Ｃ，ＣＨ ₃ Ｃ＝ＣＨ₂）；１３５．８（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ＝ＣＨ₂）；１６６．６（１Ｃ，ＣＯエステル）。Ｃ₁₀Ｈ₁₆Ｏ₂Ｓｉに関する分析計算値（Anal. Calcd.）：Ｃ，６１
．１８；Ｈ，８．２１；Ｎ，０．００；実測値（Found）：Ｃ，６０．８９；Ｈ，８．２
２；Ｎ，０．００；マススペクトロメトリ（＋ＥＳＩ−ＭＳ）ｍ／ｚ（％）：２１９［Ｍ＋Ｎａ］（１００），１９７［ＭＨ⁺］（４０）。

１−β−アジド−２，３，４，６−テトラアセチル−Ｄ−ガラクトース（１２）
市販のペンタアセチルガラクトースから出発し、１−α−ブロモ−２，３，４，６−テトラアセチル−Ｄ−ガラクトースを介して先に記載されているように生成物を調製し、その報告されている不安定性から、対応するアジドの合成に直ちに用いた（Maier M A, et al., Bioconjugate Chem. (2003), 14 (1): 18-29）。１−α−ブロモ−２，３，４，６
−テトラアセチル−Ｄ−ガラクトース ¹Ｈ ＮＭＲ（４００．０３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２．０２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．１２
（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．１６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；４．１０〜４．２２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ₂）；４．４８〜４．５０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）；５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，３
．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）；５．４１（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，２．９Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）；５．５３（ｂｓ，１Ｈ，ＣＨ）；６．７２（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２０．５８（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．６１（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．６５（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．７４（１Ｃ，Ｃ
Ｈ₃）；６０．８（１Ｃ，ＣＨ）；６６．９（１Ｃ，ＣＨ）；６７．７（１Ｃ，ＣＨ）；
６７．９（１Ｃ，ＣＨ）；７１．０（１Ｃ，ＣＨ）；８８．１（１Ｃ，ＣＨＢｒ）；１６９．７（１Ｃ，ＣＯ）；１６９．９（１Ｃ，ＣＯ）；．１７０．０（１Ｃ，ＣＯ）；１７０．３（１Ｃ，ＣＯ）。１−β−アジド−２，３，４，６−テトラアセチル−Ｄ−ガラクトース（１２）：（ペンタアセチルガラクトースからの全収率８９％）ｍ．ｐ．９３〜９５℃（詳細には（lit.）９４〜９６℃⁹）。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝２９８４，２１２４
，１７３６，１４３５，１３７３，１２７３，１２１０，１１６７，１１６７，１１１７，１０８２，１０４７，９５２，９０２，８４２，７５９，７１８ｃｍ^-1。¹Ｈ ＮＭＲ
（４００．０３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝１．９８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．１６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃
）；４．００（ｍ，１Ｈ，ＣＨＨＯ）；４．１４〜４．１７（ｍ，２Ｈ，ＣＨＨＯ＋ＣＨ）；４．５９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）；５．０２（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，３．３Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）；５．１５（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，８．７Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）；５．４１（ｄｄ，Ｊ＝３．３，３．８Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００
．５９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２０．６５（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．７４（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．７８（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．８０（１Ｃ，ＣＨ₃）；６１．３（１
Ｃ，ＣＨ₂）；６６．９（１Ｃ，ＣＨ）；６８．１（１Ｃ，ＣＨ）；７０．８（１Ｃ，Ｃ
Ｈ）；７２．９（１Ｃ，ＣＨ）；８８．４（１Ｃ，ＣＨＮ₃）；１６９．５（１Ｃ，ＣＯ
）；１７０．１（１Ｃ，ＣＯ）；．１７０．３（１Ｃ，ＣＯ）；１７０．５（１Ｃ，ＣＯ）。Ｃ₁₄Ｈ₁₉Ｎ₃Ｏ₉に関する分析計算値：Ｃ，４５．０４；Ｈ，５．１３；Ｎ，１１．２６；実測値：Ｃ，４５．０５；Ｈ，５．０７；Ｎ，１０．６３。

（１４）（Wang P, et al., J. Org. Chem. (1993), 58 (15): 3985-3990）収率８８％。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝３３５６（幅広），２９２０，２０９５，１４４３，１２７９，１１９８，１１３０，１０４４，９６１，８７５，８０６ｃｍ^-1。¹Ｈ ＮＭＲ（４０
０．０３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）３．４１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ₃）；３．５５〜３．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ₂Ｎ₃，Ｈ’−及びＨ’’−６）；３．６９〜３．７１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３ ＋ Ｈ−４），３．９５（ｄｄ，Ｊ＝３．３，１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）；４．７４（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１）¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨ
ｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）５１．５３（１Ｃ，ＣＨ₂Ｎ₃）；５５．３５（１Ｃ，ＯＣＨ₃）；６８．３７（１Ｃ，ＣＨ）；７０．８５（１Ｃ，ＣＨ）；７１．４３（１Ｃ，ＣＨ）；７１．８０（１Ｃ，ＣＨ）；１０１．１４（１Ｃ，Ｃ_anomeric）。Ｃ₇Ｈ₁₄Ｎ₃Ｏ₅に関
するＨＲＭＳ−ＥＳ計算値（HRMS-ES Calcd.）（Ｍ＋）：２２０．０９３３：実測値：２２０．０９２６。

（１６）（Hayes W, et al., Tetrahedron (2003), 59 (40):7983-7996）４９％収率。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝２９５８，１７４３，１４３５，１３６８，１２１８，１１３６，１０８４，１０４６，９７９，９１０ｃｍ^-1。¹Ｈ ＮＭＲ（４００．０３ＭＨｚ，Ｃ
ＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝１．８８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；１．９４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）
；１．９９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；１．９６〜２．１２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒ）；３．４１〜３．５１（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂＋ＣＨ₂Ｂｒ）；３．７７〜３．８２（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；３．８９〜３．９２（ｍ，１
Ｈ，Ｈ−５）；４．０２（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ’’−６）；４．１６（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ’−６）；４．７３（ｄ，Ｊ＝１．５
Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１）；５．１２−５．１３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２）；５．１６−５．１９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２０．５２（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．５５（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．６０（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．７１（１Ｃ，ＣＨ₃）；３０．００（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒ）；３１．９１（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒ）；６２．３０（１Ｃ，ＣＨ₂ＯＡｃ）；６５．４１（
１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；６５．９１（１Ｃ，ＣＨ）；６８．５６（１Ｃ，ＣＨ）；６８．９５６（１Ｃ，ＣＨ）；６９．３２（１Ｃ，ＣＨ）；９７．５１（１Ｃ，Ｃ_anomeric）；１６９．５３（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１６９．７１（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１６９．８２（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．４０（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）。Ｃ₁₇Ｈ₂₅Ｎ₃Ｏ₁₀に関する分析計算値：Ｃ，４７．３３；Ｈ，５．８４；Ｎ，９．７４；実測
値：Ｃ，４７．３８；Ｈ，５．９０；Ｎ，９．４７；Ｃ₁₇Ｈ₂₄ＢｒＯ₁₀に関するＨＲＭＳ−ＥＳ計算値（Ｍ−Ｈ）：４６７．０５５３：実測値４６７．０５６２。

（１７）（Hayes W, et al., Tetrahedron (2003), 59 (40): 7983-7996）７７％収率
。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝２９３８，２０９７，１７４２，１６７９，１４３４，１３６８，１２１８，１１３６，１０８３，１０４６，９７９，９３８，９１１ｃｍ^-1。¹Ｈ
ＮＭＲ（４００．０３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝１．８３〜１．９０（ｍ，２
Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；１．９６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０１（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；
２．０７（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．１２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；３．４０（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ₂Ｎ₃）；３．４７〜３．５２（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；３．７
５〜３．８１（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；３．９０〜３．９５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５）
；４．０８（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ’’−６）；４．２４（ｄｄ，Ｊ＝１２．３，５．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ’−６）；４．７８（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−１）；５．２０（ｄｄ，Ｊ＝３．０，１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）；５．２３〜５．３０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−４）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２０．７５，２０．７７，２０．９４（４Ｃ，ＣＨ₃）；２８．７１（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；４８．１７（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；６２．５８（１Ｃ，ＣＨ₂ＯＡｃ）；６４．９４（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；６７．２２（１Ｃ，ＣＨ）；６８．７４（１Ｃ，ＣＨ）；６９．１１（１Ｃ，ＣＨ）；６９．５７（１Ｃ，ＣＨ）；９７．７１（１Ｃ，Ｃ_anomeric）；１６９．８０（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１６９．９８（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．１２（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．６９（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）。Ｃ₁₇Ｈ₂₄Ｎ₃Ｏ₁₀に関するＨＲＭＳ−ＥＳ計算値（Ｍ−Ｈ）：４３０．１４６２：実
測値４３０．１４５８。

（１８）（類似アジド（２２）に関する調製）８７％収率。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝３３５８（ｂｓ），２９２７，２０９７，１６４４，１３０１，１２６２，１１３２，１０５６，９７６，９１３，８８１，８１２ｃｍ^-1。¹Ｈ ＮＭＲ（４００．０３ＭＨｚ，Ｃ
Ｄ₃ＯＤ，２９８Ｋ）δ＝１．８３〜１．８９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；３．４１（ｔｄ，Ｊ＝６．８，２．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ₂Ｎ₃）；３．４８〜３．５３（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂＋Ｈ−５）；３．６２（ａｐｐａｒｅｎｔ ｔ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ
−４）；３．６９（ｄｄ，Ｊ＝９．３，３．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３）；３．７２（ｄｄ，Ｊ＝１１．９，５．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ’−６）；３．７９〜３．８５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−６’’，Ｈ−７’’）；４．７６（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ，Ｈ−１）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ，２９８Ｋ）δ＝２９．８３（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；４９．８５（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；６２．７５（１Ｃ，ＣＨ₂ＯＨ）；
６５．３４（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；６８．４４（１Ｃ，ＣＨ）；７２．０５（１Ｃ，ＣＨ）；７２．５６（１Ｃ，ＣＨ）；７４．５８（１Ｃ，ＣＨ）；１０１．５３（１Ｃ，Ｃ_anomeric）；Ｃ₉Ｈ₁₈Ｎ₃Ｏ₆に関するＨＲＭＳ−ＥＳ計算値（Ｍ＋Ｈ）：２６４．１１９
６：実測値２６４．１１９９。

（２０）（Joosten J A F, et al., J. Med. chem. (2004), 47 (26): 6499-6508）７
１％収率。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝２９６２，１７４２，１４３３，１３６８，１２１３，１１７４，１０４４，９５５，９００，７３６ｃｍ^-1。¹Ｈ ＮＭＲ（４００．０３Ｍ
Ｈｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝１．９６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０１〜２．１４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒ）；２．０３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０６（ｓ，３Ｈ，Ｃ
Ｈ₃）；２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；３．４４〜３．４７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ₂Ｂｒ）；
３．６４〜３．７０（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；３．８８〜３．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ
−５）；３．９２〜４．００（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；４．０８〜４．１９（ｍ，
２Ｈ，Ｈ’−６ ＋ Ｈ’’−６）；４．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−１）；５．００（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，３．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３）；５．１７（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）；５．３７（ｄｄ，Ｊ＝３．５，０．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２０．６７（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．７４（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．７７（１Ｃ，ＣＨ₃）；２０．９
０（１Ｃ，ＣＨ₃）；３０．２６（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒ）；３２．３２（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｂｒ）；６２．３７（１Ｃ，ＣＨ₂ＯＡｃ）；６７．１１（１Ｃ，ＣＨ）；６７．４０（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；６８．９３（１Ｃ，ＣＨ）；７０．７６（１Ｃ，ＣＨ）；７０．９２（１Ｃ，ＣＨ）；１０１．６４（１Ｃ，Ｃ_anomeric）；１６９．６９（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．２１（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．３３（１Ｃ，ＣＨ₃
Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．４８（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）。Ｃ₁₇Ｈ₂₅ＢｒＯ₁₀に関する分
析計算値：Ｃ，４３．５１；Ｈ，５．３７；Ｎ，０．００；実測値：Ｃ，４３．９５；Ｈ，５．３７；Ｎ，０．００；Ｃ₁₇Ｈ₂₄ＢｒＯ₁₀に関するＨＲＭＳ−ＥＳ計算値（Ｍ−Ｈ）：４６７．０５５３：実測値４６７８．０５６１。

（２１）（Joosten J A F, et al., J. Med. chem. (2004), 47 (26): 6499-6508）８
４％収率。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝２９４０，２０９７，１７４３，１４３１，１３６８，１２４４，１１７２，１１３３，１０４４，９５５，９０２，７３６ｃｍ^-1。¹Ｈ Ｎ
ＭＲ（４００．０３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝１．７２〜１．９３（ｍ，２Ｈ
，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；１．９６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．０２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２
．０４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；２．１３（ｓ，３Ｈ，ＣＨ₃）；３．３２〜３．３７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ₂Ｂｒ）；３．５４〜３．６２（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；３．８７〜３．９７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５ ＋ ＯＣＨＨＣＨ₂）；４．０７〜４．１９（ｍ，２Ｈ，Ｈ’
−６ ＋ Ｈ’’−６）；４．４４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，Ｈ−１）；４．９９（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，３．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３）；５．１７（ｄｄ，Ｊ＝１０．４，７．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−２）；５．３７（ｄｄ，Ｊ＝３．４，０．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２０．６６，２０．７４，２０．８４（４Ｃ，ＣＨ₃）；２９．０２（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；４７．９７（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；６１．３４（１Ｃ，ＣＨ₂ＯＡｃ）；６６．５３（１Ｃ，ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₂Ｏ）；６７．０８（１Ｃ，ＣＨ）；６８．８８（１Ｃ，ＣＨ）；７０．７５（１Ｃ，
ＣＨ）；７０．９４（１Ｃ，ＣＨ）；１０１．３９（１Ｃ，Ｃ_anomeric）；１６９．５３（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．２２（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．３３（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）；１７０．４７（１Ｃ，ＣＨ₃Ｃ（Ｏ）Ｏ）。Ｃ₁₇Ｈ₂₅Ｎ₃Ｏ₁₀
に関する分析計算値：Ｃ，４７．３３；Ｈ，５．８４；Ｎ，９．７４；実測値：Ｃ，４７．３８；Ｈ，５．９０；Ｎ，９．４７；Ｃ₁₇Ｈ₂₄Ｎ₃Ｏ₁₀に関するＨＲＭＳ−ＥＳ計算値
（Ｍ−Ｈ）：４３０．１４６２：実測値４３０．１４５８。

（２２）（Vicente et al.に記載されている一般的な脱保護法による調製（Vicente V,
et al., Chem. -Eur. J. (2004), 10 (17): 4240-4251）９１％収率。ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝３３６０（ｂｓ），２９３０，２８８６，２０９４，１６４３，１３７４，１２９９，１２６０，１１４３，１１１５，１０４１，９４９，９１５，８９３，７８３，７５７ｃｍ^-1．¹Ｈ ＮＭＲ（４００．０３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝１．８６（見
かけの五重線、Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；３．４５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ，２Ｈ，ＣＨ₂Ｎ₃）；３．５０−３．５５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２ ＋ Ｈ−５）；３．６４（ｄｔ，Ｊ＝１０．０，６．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；３．７３（ｄ，Ｊ＝６
．０Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ’−６ ＋ Ｈ’’−６）；３．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．９，１．０Ｈｚ，Ｈ−４）；３．９５（ｄｔ，Ｊ＝１０．０，６．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＣＨＨＣＨ₂）；
４．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−１）。¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．５９ＭＨｚ，ＣＤ₃ＯＤ，２９８Ｋ）δ＝３０．１９（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；４９．３２（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃）；６２．３２（１Ｃ，ＣＨ₂ＯＨ）；６７．４６（１Ｃ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；７０．１３
（１Ｃ，ＣＨ）；７２．４４（１Ｃ，ＣＨ）；７４．８６（１Ｃ，ＣＨ）；７６．４６８（１Ｃ，ＣＨ）；１０４．９３（１Ｃ，Ｃ_anomeric）；Ｃ₉Ｈ₁₈Ｎ₃Ｏ₆に関するＨＲＭＳ
−ＥＳ計算値（Ｍ＋Ｈ）：２６４．１１９６：実測値２６４．１１９４。

クマリンプロピルアジド（２８）
クマリン３４３（０．２８５ｇ，１．００ｍｍｏｌ）及び３−アジド−１−プロパノール（０．５０５ｇ，５．００ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（０．５７５ｇ，３．００ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．００６ｇ，０．０５ｍｍｏｌ）を続けて添加した。この橙色の溶液を０℃で２時間攪拌した後、環境温度で一晩攪拌した。反応混合物を水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄上で乾燥させた
。揮発分を減圧下で除去し、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィ（ＣＣ、ＳｉＯ₂、
１）１００％ＣＨ₂Ｃｌ₂；２）ＣＨ₂Ｃｌ₂／Ｅｔ₂Ｏ１０：１）によって精製した。単離
生成物は依然としていくらかの３−アジド−１−プロパノール出発材料を含有しており、次に減圧下でのトルエンによる同時蒸着によってこれを除去した。数日にわたって環境温度で静置することによって部分的に凝固する橙色の油として（２８）が０．１１０ｇ（０．２９９ｍｍｏｌ、３０％）で得られた。

ＩＲ（ｎｅａｔ）：ν＝２９２０，２８５０，２０９５，１７４９，１６９３，１６１９，１５９０，１５６０，１５１８，１４４４，１３６７，１３１０，１２４２，１２０５，１１７３，１１０７，１０３４，７９３，７５０ｃｍ^-1；¹Ｈ ＮＭＲ（４００．０
３ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝１．９１〜１．９７（ｍ，４Ｈ，２ＣＨ₂），２．０１（見かけの五重項、Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ₃），２．７４（ｔ，Ｊ＝
６．３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ₂），２．８４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ₂），３．３０〜３．３４（ｍ，４Ｈ，ＣＨ₂Ｎ）；３．５０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂
Ｎ₃），４．３６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ），６．９１（ｓ，１Ｈ，
ＣＨヒ゛ニル），８．２９（ｓ，１Ｈ，ＣＨアリール）；¹³Ｃ｛¹Ｈ｝ＮＭＲ（１００．
５９ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃，２９８Ｋ）δ＝２０．１３（１Ｃ，ＣＨ₂），２０．２４（１Ｃ，ＣＨ₂），２１．２２（１Ｃ，ＣＨ₂），２７．４９（１Ｃ，ＣＨ₂），２８．３８（１
Ｃ，ＣＨ₂），２９．７８（１Ｃ，ＣＨ₂），４８．４０（１Ｃ，ＣＨ₂），４９．９８（
１Ｃ，ＣＨ₂），５０．３７（１Ｃ，ＣＨ₂），６１．７７（１Ｃ，ＣＨ₂Ｏ），１０５．
８０（１Ｃ，Ｃ），１０７．０２（１Ｃ，Ｃ），１０７．６０（１Ｃ，Ｃ），１１９．３５（１Ｃ，Ｃ），１２７．１７（１Ｃ，ＣＨ），１４８．７７（１Ｃ，Ｃ），１４９．４２（１Ｃ，ＣＨ），１５３．６４（１Ｃ，Ｃ），１５８．６５（１Ｃ，Ｃ），１６４．６９（１Ｃ，Ｃ）。Ｃ₂₀Ｈ₂₁Ｎ₃Ｏ₄に関するＨＲＭＳ−ＥＳ計算値（Ｍ＋）：３６８．１４８：実測値３６８．１４７。

一般的な重合手順。（３ａ）の合成：
Ｎ−（エチル）−２−ピリジルメタンイミンリガンド（０．０７２ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）、（１）（２．０ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、開始剤（２）（０．０６５ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びメシチレン（内部ＮＭＲ標準、０．５ｍＬ）を溶媒としてトルエン（４．０ｍＬ）と一緒に乾燥シュレンク管内に充填した。管をゴム隔膜で封止し、５回の凍結−吸引−解凍（freeze-pump-thaw）サイクルを行った。その後この溶液を、窒素下でカニ
ューレを介して第２のシュレンク管内へ移した。この第２のシュレンク管は、予め排気させ窒素で充填されており、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．０３６ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び磁気フォロアー（magnetic follower）を含有したものであった。温度を一定攪拌により７０
℃に調節した（ｔ＝０）。脱気したシリンジを用いてサンプルを周期的に取り出し、分子量及び変換率を分析した。重合終了時に、混合物を１０ｍＬのトルエンで希釈し、空気で４時間かけて泡立たせた。反応混合物を短い中性アルミナカラムに通過させ、続いてトルエンで洗浄した。揮発分を減圧下で除去し、残留物をＴＨＦ（約１０ｍＬ）中に溶解させた後、１０：２ｖｏｌ／ｖｏｌメタノール／水混合物（約２００ｍＬ）中へ沈降させた。白色固体を濾過によって単離し、さらなるメタノール／水混合物で洗浄し、揮発分を減圧下で除去した。５．１ｐｐｍにおける開始剤ベンジルシグナルの積分を、４．４ｐｐｍにおけるアルキン分枝鎖と結合するＣ（Ｏ）ＯＣＨ₂基の積分と比較することによって、ポ
リマーの分子量を¹Ｈ ＮＭＲにより算出した。４．４ｐｐｍの代わりに０．２ｐｐｍに
おけるＳｉ（ＣＨ₃）₃の一重項を用いた場合、実質的に同じ分子量が得られた。メシチレン（６．９ｐｐｍ）のピークを内標準として用い、モノマービニルシグナル（５．６ｐｐｍ及び６．２ｐｐｍ）の積分を下げることによって、変換率を¹Ｈ ＮＭＲによって算出
した。代替的には、モノマーのＣ（Ｏ）ＯＣＨ₂プロトン（ｂｓ，４．６ｐｐｍ、経時的
に低減）に対する積分と、ポリマーの類似Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₂プロトン（幅の広いシグナル
、４．４ｐｐｍ、経時的に増大）に対する積分との比較によって変換率を算出した。ＤＰ（ＮＭＲ）＝７５；Ｍ_n（ＮＭＲ）１４．７ｋＤａ；Ｍ_w／Ｍ_n（ＧＰＣ）＝１．１６；開
始効率＝４１％；変換率８２％。

ポリマー（６）：［（１）］₀：［ＭＭＡ］₀：［（２）］₀：［ＣｕＢｒ］：［リガン
ド］＝２０：５０：１：１：２；メシチレン０．５ｍＬ、トルエン１２ｍＬ、（１）：１．２ｇ、ＭＭＡ：３．０ｇ、７０℃。Ｍ_n（ＮＭＲ）８．７ｋＤａ（ＤＰ（１）＝１３；
ＤＰ（ＭＭＡ）＝６１）；Ｍ_w／Ｍ_n（ＧＰＣ）＝１．０９；変換率８６％；開始効率＝６５％。石油エーテル中へ沈降させることによってポリマーを単離した。

ポリマー（９）：［（１）］：［ｍＰＥＧ₃₀₀ＭＡ］：［（２）］：［ＣｕＢｒ］：［
リガンド］＝５：２５：１：１：２；メシチレン０．２ｍＬ；トルエン９ｍＬ、（１）：０．５０ｇ、ｍＰＥＧ₃₀₀ＭＡ：４．０ｇ、７０℃。Ｍ_n（ＮＭＲ）１０．８ｋＤａ（ＤＰ（１）＝６；ＤＰ（ｍＰＥＧ₃₀₀ＭＡ）＝３２）；Ｍ_w／Ｍ_n（ＧＰＣ）＝１．１６；変換
率８５％；開始効率＝７２％。石油エーテル中へ沈降させることによってポリマーを単離した。

ポリマー脱保護。一般手順：
トリメチルシリルで保護されたポリマー（３００ｍｇ）及び酢酸（アルキン−トリメチルシリル基に対する１．５当量ｍｏｌ／ｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解させた。窒素を泡立て（約１０分）、無色の溶液を−２０℃に冷却した。ＴＢＡＦ−３Ｈ₂Ｏ（ア
ルキン−トリメチルシリル基に対する１．５当量ｍｏｌ／ｍｏｌ）の０．２０Ｍ溶液をシリンジによって徐々に添加した（約２〜３分）。得られた混濁混合物をこの温度で３０分間攪拌した後、環境温度に温めた。３時間未満で脱保護を完了させて、ホモポリマー（３ａ）及びＭＭＡコポリマー（６）を得た。ｍＰＥＧ ＭＡを含むコポリマー（９）では、おそらく、ポリマー骨格上のｍＰＥＧ側の分枝によってもたらされるより大きい立体障害のために、より長い反応時間（１６時間）が必要であった。過剰なＴＢＡＦを除去するために反応溶液を短いシリカパッドに通過させ、続いてパッドをさらなるＴＨＦで洗浄した。その後得られた溶液を減圧下で濃縮し、ポリマーを石油エーテル中に沈降させた。

手順１：（５ａ−１２）の合成
ポリマー（４ａ）（５０ｍｇ、「クリック可能」アルキン単位０．４０ｍｍｏｌ）、アジド糖（１２）（２２５ｍｇ、０．６０４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、２６ｍｇ、３５μＬ、０．２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、窒素を１０分間泡立たせることによって脱気した。その後、［（ＰＰｈ₃）₃ＣｕＢｒ］（３７．５ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液中にさらに５分間窒素を泡立たせた。この非常に淡い黄色の澄んだ溶液を環境温度で３日間攪拌した後、短い中性アルミナパッドに通過させてＴＨＦで溶離した。得られた溶液を減圧下で濃縮し、石油エーテル（２００ｍＬ）中に沈降させた。懸濁液を遠心分離し、得られた固形分をＴＨＦ中に再溶解させた。イオン交換樹脂の存在下で溶液を１時間攪拌し、濾過し、１：１のＥｔ₂Ｏ／
石油エーテル混合物（１５０ｍＬ）中で再度沈降させた。遠心分離により固形分を分離し、ポリマー（５ａ−１２）をオフホワイトの固形分として得た。

手順２：（２４）の合成
ポリマー（４ｂ）（１００ｍｇ、「クリック可能」アルキン単位０．８０６ｍｍｏｌ）、アジド糖（１８）（２２３ｍｇ、０．８４７ｍｍｏｌ）及び（２２）（７４．２５ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ）、並びにトリエチルアミン（４１ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（７ｍＬ）溶液を、窒素を１０分間泡立たせることによって脱気した。その後、［（ＰＰｈ₃）₃ＣｕＢｒ］（１５０ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液中にさらに５分間窒素を泡立たせた。この非常に淡い黄色の澄んだ溶液を環境温度で３日間攪拌した後、イオン交換樹脂（１５０ｍｇ）を添加し、懸濁液を４時間穏やかに攪拌した。濾過し、さらにイオン交換樹脂（１５０ｍｇ）を添加した後、懸濁液を環境温度で一晩攪拌した。濾過後、溶液を２：１ ＣＨ₂Ｃｌ₂／メタノール混合物に滴下し、遠心分離によりポリマーを分離した。依然として存在する微量のＤＭＳＯを除去するために、沈降したポリマーを水中に溶解し、ＴＨＦ中で再沈殿させた。粘着性生成物を遠心分離によって単離し、最少量の水中に溶解させ、凍結乾燥させて、ポリマー（２３）を明るい白色粉末として得た。

（１１−１４）の合成
手順２を用い（反応時間＝９６時間）、以下の試案に従った：トリメチルアミンを減圧下で反応混合物から除去し、その得られた溶液をイオン交換樹脂の存在下で一晩攪拌させた。濾水（２５０ｍＬ）によって単離した樹脂を添加し、得られた溶液を遠心分離した。上澄み液を透析によって精製し、ポリマーを凍結乾燥によって単離した。

蛍光性リガンド（２９）及び（３０）の合成
（用いられるアジド試薬の合計量に対して）２．５％のクマリンアジド（２８）を用いて、手順２を使用した。

ＧＰＣ−ＬＡＬＳ分析
各サンプルを３通りに分析した。

定量沈降検査
検査は、０．１０Ｍ Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ（ｐＨ７．２）、０．９Ｍ ＮａＣｌ、１ｍＭ
ＣａＣｌ₂及び１ｍＭ ＭｎＣｌ₂を沈降バッファとして用い（Khan M I, et al., Carbohydr. Res. (1991), 213: 69-77）且つポリマー−ＣｏｎＡ凝集体を１ｍＬの１Ｍ α−Ｄ−メチルマンノピラノシド中に再溶解させた以外、Kiessling及び共同研究者ら（Cairo
C W, et al., J. Am. Chem. Soc. (2002), 124 (8): 1615-1619）によって記載されているように実施した（図２参照）。

ＣｏｎＡレクチンを定量沈降させるのに必要な近似最高ポリマー濃度を評価するために、種々のリガンド濃度における予備スクリーニングを実施した。その後の測定では、定量レクチン沈降の最高ポリマー濃度が主な論文に報告されている値となるまで、さらなるポイント（適したポリマー濃度を有するサンプル）を追加した。適合する実験結果に用いられるＳ字曲線の最も傾斜の大きいポイントを、ＣｏｎＡを完全に沈降させるのに必要な最高ポリマー濃度の半分の濃度とみなす。

比濁法検査
Kiessling及び共同研究者ら（Cairo C W, et al., J. Am. Chem. Soc. (2002), 124 (8): 1615-1619）によって記載されているように、０．１２秒毎にスペクトルをとって検査を実施した。示したデータは３つの独立した実験結果の平均である。結果を図３、図４及び図５に示す。

結果及び考察
「クリック可能」アルキンポリマーの合成
トリメチルシリルメタクリレートモノマー（１）は、市販の３−トリメチルシリルプロ
ピン−１−オール及びメタクリロイルクロリドから一工程で調製した。芳香族プロトン及びベンジルプロトンが両方とも、対応するポリマーの数平均分子量（Ｍ_n（ＮＭＲ））を
確定するのに¹Ｈ ＮＭＲ内標準として用いられ得ることから、Ｏ−ベンジルα−ブロモ
エステル（２）⁷⁶を開始剤として選択した（スキーム１）。Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ／Ｎ−（ｎ−エチル）−２−ピリジルメタンイミン触媒⁷⁷の存在下におけるＭＭＡ及びｍＰＥＧ₃₀₀Ｍ
Ａによる（１）のホモ重合及び共重合は両方とも優れた一次動態プロットを与え、ポリマー分子量及び分子量分布に関する良好な制御を示す（図２及び表１）。（１）のホモ重合では、精製したポリマーの多分散度指数（Ｍ_w／Ｍ_n）が、比較的高いモノマー変換率（８０％より大きい）であっても１．１５と同程度に低いことに留意されたい。提案された合成手法の多用性を確認するために、有機溶媒及び水性溶媒中で全く異なる溶解性を有する何種類かのポリマーを調製した。疎水性及び親水性コポリマーをそれぞれ与えることから、メチルメタクリレート（ＭＭＡ）及びメトキシ（ポリエチレングリコール）₃₀₀メタク
リレート（ｍＰＥＧ₃₀₀ＭＡ）をモデルコモノマーとして選択した。その上、ポリエチレ
ングリコールは、非特異的タンパク質結合を誘導しないことが示されており、この非特異的タンパク質結合は、後で報告するレクチン結合の解釈において重要である⁷⁸。

スキーム１．試薬及び条件：ａ）Ｎ−（ｎ−エチル）−２−ピリジルメタンイミン／ＣｕＢｒ、トルエン、７０℃；ｂ）Ｎ−（エチル）−２−ピリジルメタンイミン／ＣｕＢｒ、ＭＭＡ又は（ｍＰＥＧ₃₀₀）ＭＡ、トルエン、７０℃；ｃ）ＴＢＡＦ、酢酸、ＴＨＦ、−
２０〜２５℃；ｄ）Ｒ¹Ｎ₃、（ＰＰｈ₃）₃ＣｕＢｒ、ＤＩＰＥＡ

興味深いことに、ＴＢＡＦを媒介させたトリメチルシリル保護基の除去を用いた予備の試行では、予想よりも少ない末端アルキン含量を有するポリマーを得た。この挙動の背景にある理由はＴＢＡＦの塩基性に関連するのではないかと考えられ、緩衝剤としての酢酸
の添加は予想された末端アルキンポリマーを実質的に１００％の収率でもたらすのに十分であることが見出された⁷⁹。トリメチルシリル基の完全な除去は、２．５ｐｐｍにおけるＣ≡ＣＨシグナルの出現に加えて０．２ｐｐｍにおけるＳｉ（ＣＨ₃）₃シグナルの消滅を伴う¹Ｈ ＮＭＲ分析、及び３２９１ｃｍ^-1におけるアルキンＣ−Ｈ伸縮振動数を伴うＦ
Ｔ ＩＲ分析の両方で確認された。またＳＥＣ分析により、予想通りに、ポリマーの水力学的体積が脱保護後に減少するのに対し、多分散度指数は変化しないままであることが明らかとなった。ＳＥＣ分析用の低角レーザー光散乱（ＬＡＬＬＳ）検出器（５°）により、トリメチルシリル基の除去前後にポリマーの絶対Ｍ_w値を測定した。得られた結果であ
るＭ_w（３ｂ）＝１９．８ｋＤａ及びＭ_w（４ｂ）＝１３．０ｋＤａは、これらのポリマーの相対多分散度指数と組み合わせて、数平均分子量であるＭ_n（３ｂ）＝１７．３ｋＤａ
及びＭ_n（４ｂ）＝１１．３ｋＤａを示し、これは¹Ｈ ＮＭＲ分析によって得られたデータと十分一致していた（Ｍ_n（ＮＭＲ）（３ｂ）＝１７．７ｋＤａ及びＭ_n（ＮＭＲ）（４ｂ）＝１１．２ｋＤａ）。

２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルアジド（１２）、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルアジド（１３）及びメチル−α−Ｄ−６−アジド−６−デオキシ−マンノピラノシド（１４）を、クリック反応用ののモデル糖アジド試薬として用いて、確立された合成プロトコルに従って、保護された炭水化物及び保護されていない炭水化物に、Ｃ−６又はα若しくはβアノマーアジドのいずれかを介して結合するこのアプローチの多用性を調査した（チャート１）。

チャート１．炭水化物櫛形ポリマーの合成に使用されるアジド糖誘導体

アルキン含有ポリマーへの糖アジドのクリック反応について選択される条件を、ＤＩＰＥＡの存在下における［（ＰＰｈ₃）₃ＣｕＢｒ］を触媒として用いた何種類かの樹状ライブラリの合成に関するHawker及び共同研究者らによって報告された条件から変えた⁶。ト
リメチルシリル保護基の除去には、ポリマー分子質量の減少が伴ったのに対して、アジド糖誘導体を結合させた後で、ポリマー水力学的体積の実質的な増大が観測された（図７）。¹Ｈ ＮＭＲ分析及びＦＴ−ＩＲ分析により、脱保護及びクリック反応のいずれものポ
リマーの分子量分布を事実上変化させないまま、トリアゾールへのアルキン基の変換率が１００％収率付近に達したことが確認された。

多価リガンドの合成、及びレクチン結合反応における予備実験
続いて、本発明者らは種々の種類の糖ポリマーの調製についてこの合成手法を履行し、特に、適切なレクチンと結合することができる材料に着目した。コンカバリンＡ（ＣｏｎＡ）は、その化学的挙動及び生物学的挙動の両方に焦点を当てた大量の文献を踏まえ、多くの生物学的プロセスとの関係に起因してモデルα−マンノース−結合レクチンとして選択された⁸⁰〜⁸⁴。ＣｏｎＡは、高次オリゴマー構造中の２６ｋＤａモノマー単位の凝集体である。ｐＨ範囲５．０〜５．６では、ＣｏｎＡが排他的に二量体として存在するのに対し、これより高いｐＨでは二量体が結合して四量体となり、四量体はｐＨ７．０で最も優勢な形態である⁴⁴。各モノマー単位は、α−グルコピラノシド誘導及びα−マンノピラノシド誘導体を選択的に結合する能力があり、好ましくはＣ２にマンノ（manno-）構造を含む、１つの配位部位を有する⁵⁷、8⁵。

アルキン官能性ホモポリマー（４ｂ）を、ＣｏｎＡ結合マンノースリガンドの量のみが異なるポリマーライブラリの並行合成用の出発材料として使用し、このアルキン官能性ホモポリマー（４ｂ）はマンノース及びガラクトース系アジドの適切な混合物の「同時クリック」反応によって得られた（スキーム３）。この目的は、ＣｏｎＡレクチンとのこれらの新規な材料の結合能を研究することであった。特に、本発明者らは、ＲＯＭＰ重合によって製造される多価ディスプレイについてのKiessling及び共同研究者らによって記載さ
れているものと類似の研究において、マンノピラノシド部分の量がポリマー−タンパク質相互作用の性質に関わる影響をもたらすという点に関心を持った⁶¹。

結合エピトープ密度のみが異なる同一巨大分子の特性（ポリマーアーキテクチャ、Ｍ_n
、Ｍ_w／Ｍ_n）を特徴付ける一連の材料の調製を可能にするため、「同時クリック」の手法は興味深い⁸⁶。このアプローチの使用に関する付加的な利点は、ポリアルキン材料のこの官能化が、マルチグラムスケールで容易に入手可能な高価でない出発材料を使用した非常に穏やかな条件下で実行され得る点である。β−ガラクトピラノシド単位は、多価ポリマーリガンド上に存在するマンノピラノシドエピトープを希釈するために使用した。糖アジドは、アミノ糖誘導体の合成に通常用いられる有用な前駆体であり、スキーム２に示した合成プロトコルに従って調製された。簡潔に述べると、過アセチル化した六炭糖、例えばマンノピラノース又はガラクトピラノースのいずれかを、ＢＦ₃・ＯＥｔ₂の存在下で３−ブロモ−１−プロパノールによって処理し、ブロミド（１６）及び（２０）をそれぞれ得
た。所望のアジド官能性モノマー（１８）及び（２２）を、ブロミド中間体を対応するアジド（（１７）及び（２１））に変換し、その後酢酸保護基を除去することによって得た。

スキーム２．試薬及び条件：ａ）３−ブロモ−１−プロパノール、ＢＦ₃・ＯＥｔ₂、−２０℃〜環境温度、ｂ）ＮａＮ₃、ＤＭＦ、１００℃、ｃ）ＣＨ₃ＯＮａ（触媒）、ＣＨ₃Ｏ
Ｈ、環境温度

スキーム３．ＣｏｎＡ結合の研究に使用されるポリマーの合成、ＤＰ（ｘ＋ｙ）＝９０

同時クリック反応に用いられる実験条件は、ＤＭＳＯを溶媒として用い、且つトリエチルアミンを基剤として用いた以外、ポリマー（５）、（８）及び（１１）の合成に用いられるものと同様であった⁸⁷。ＤＭＦ溶離液中の生成物ポリマーのＳＥＣ分析⁸⁸により、これらのポリマーの全てが、実質的に同一の分子量及び分子量分布を特徴付けることが示された。また、ＳＥＣ分析のためのＬＡＬＬＳ検出によって、多座リガンドの絶対重量平均分子量（Ｍ_w）を確定した（表３）⁸⁹。また、得られた結果は、糖ポリマー生成物を除い
て理論値と十分一致していた。¹Ｈ ＮＭＲ分析によって、ポリマー中の２つの異なる糖
部分のモル比が、「同時クリック」反応で用いられる（１８）：（２２）の初期比に実質的に類似していたことが確認された。

生物学的なプロセスにおいて、細胞表面で起こるクラスタリング現象の速度は、数秒から数時間の範囲のタイムスケールに対する重大なパラメータである⁶¹。リガンド−レクチン凝集体の速度に対するエピトープ密度の影響は、比濁法（turbidrimetric）検査によって評価し⁶¹、9⁰〜⁹²、その結果を図８に示す。過剰な種々の多価リガンドの存在下におけるＣｏｎＡのクラスタリング速度を、レクチン及び官能性ポリマーの適切なＨＥＰＥＳバッファ溶液（ｐＨ７．４）のλ＝４２０ｎｍにおける吸光度変化を測定することによってモニタリングした。完全にマンノースで官能化したポリマー（２３）の場合、吸光度はプラトーに達し、測定の終了まで略一定のままであった。これは、この多価リガンドが溶液中に存在する実質的に全てのＣｏｎＡを迅速に沈降することができたことを示す。

低エピトープ密度を特徴とするポリマーを使用した場合、観測される吸光度は時間に伴って連続的に増大した。これは、ＲＯＭＰによって得られる巨大分子リガンドについてKiesslingによって先に記載されているものと一致しており、測定の早い段階に形成される
部分的に可溶な複合体の高次凝集に起因するものであった⁶¹。１分当たりの任意単位（ＡＵ／分）として表される凝集速度定数を決定するのに初期クラスタリング速度を使用した。得られた値は、これらの実験条件下において、クラスタリングプロセスの速度が、エピトープ密度の低減に伴い遅くなることを示す。多価リガンド（２７）を使用した対照実験は、完全にガラクトピラノースを官能化したリガンドがＣｏｎＡレクチンを沈降させることができなかったことを明らかにした。次にこれらの実験で形成された凝集体を、極めて過剰量のα−メチルマンノピラノシド、即ち競合単座配位リガンドで処理し、経時的な吸光度の低減をモニタリングした。ポリマー−レクチン複合体は、ポリマーエピトープ密度に正比例した（補足情報を参照）。

ポリマー−ＣｏｎＡ複合体の化学量論比を測定するために、定量沈降（ＱＰ）実験を行った。既知の濃度のＣｏｎＡを用いた溶液からレクチンを定量沈降させるのに必要なポリマー濃度の測定は、各ポリマー鎖のＣｏｎＡ四量体結合の平均数の測定を可能にした⁹³。これは、０％から７５％へとリガンドマンノース含量が増大するにつれて大きくなることが見出された（表４）⁹⁴。この値を超えると、結合レクチン四量体の数は一定のままであるようであり、このことはおそらく、高エピトープ密度の立体効果がさらなるレクチンの配位を邪魔することを示す⁶¹。

蛍光性多価ディスプレイの合成
開発した手法の多用性は、原理上、所望の機能を実行する誘導体が必要なアジド基を含有する限り、多くのさらなる異なる官能基をポリマー骨格へ付加することを可能にする。高分子骨格における視認可能な蛍光性のタグを「同時クリック」する可能性は興味深いものであると考えられるが、その理由は、結合要素及びリポーター単位（reporter unit）
の両方を示す得られる多価リガンドが、タンパク質−炭水化物結合相互作用の研究において極めて有用であるとして知られているからである⁹⁵、9⁶。蛍光性糖ポリマーは、細胞表面相互作用⁹⁷、9⁸、抗癌療法⁹⁹、レクチン認識分析¹⁰0、¹⁰¹、ＰＥＧ化化学作用¹⁰²、Ｌ
−セレクチン結合⁹⁵及び精子安定性研究¹⁰³を含む一連の用途で使用されていた。リビン
グラジカル重合は、蛍光性開始剤又はモノマーのいずれかを用いることによって視認可能な蛍光性のポリマーを調製するのに使用することができる¹⁰⁴。

スキーム４：蛍光性多価リガンド（２９）及び（３０）の合成

本発明者らは、対応するポリマーの分子質量Ｍ_n（ＮＭＲ）を測定することを可能にし
、且つ保護されていないアジド糖（１８）及び（２２）と伴に、（クマリン３４３及び３−アジド−１−プロパノールから一工程で得られる）アジド（２８）を介して視認可能な蛍光性タグが反応供給量で導入されることから、ベンジルブロモエステル（２）を開始剤として使用し続けることを選択した。染料（２８）を使用する際の重大な利点は、高い蛍光性を多価リガンドに与えるのに比較的小さいパーセンテージしか必要とされなかったことである。

ポリマー（２９）及び（３０）（スキーム４）は、λ＝４３６ｎｍにおける最大吸光度を示し、λ＝４８５ｎｍにおける最大発光は４９ｎｍのストークスシフトを示す。ポリマー骨格上へのアジド（２８）のグラフト化は、実質的に糖ポリマー巨大分子特徴が変化しないことによって生じ、（２９）及び（３０）は、それぞれポリマー（２３）及び（２７
）と蛍光挙動で異なる類似体である（表５及び図５）。

その後、多価リガンドとしてのこれらの蛍光性糖ポリマーの性能を定性的に評価した。蛍光性ディスプレイの溶液は、固定したヒマ凝集素（Ricinus Communis Agglutinin I（
ＲＣＡ Ｉ））、トウゴマ（Ricinus communis）から単離される１２０ｋＤａの二量体レクチンを固定相として¹⁰⁵充填したカラムを用いたＨＰＬＣによって蛍光ＨＰＬＣ検出器
を用いて分析した。ＲＣＡ Ｉはβ−Ｄ−ガラクトース単位と選択的に相互作用するため、α−Ｄ−マンノース−結合ＣｏｎＡを用いることによって事前に得られた結果を補足し得る結合基質として選択した。

０．０６７Ｍ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）及び０．１５Ｍ ＮａＣｌを移動相として用いた事前の試みは、マンノシド系ポリマー（２９）がカラムによって保持されなかったのに対し、リガンド（３０）がＲＣＡ Ｉ固定相とかなり強力に相互作用したこと、即ち、全く溶離しなかったことを示した。このため、Ｄ−ガラクトースを種々の濃度で含有するさらに何種類かの移動相を利用した。その正所性（monotopic）に起因して、Ｄ−ガラクトー
スはＲＣＡ Ｉ受容体と弱くしか相互作用することができない。しかしながら、極めて過剰な量で存在する場合、それはＲＣＡ Ｉ配位について多価ディスプレイ（３０）に対抗し、移動相中のガラクトース濃度を減少させるような使用によって、テイリングを有する典型的な幅の広い形状を特徴とするピークを伴って（図６）、保持時間が増大する。これらの結果は、ガラクトース含有ディスプレイ（３０）がＲＣＡ Ｉと強力に相互作用し、多座リガンドとしての類似の合成グリコールポリマー（glycolopolymers）の使用はさら
なる研究の対象となるであろう。

結論
要約すれば、新規な一連の櫛形糖ポリマーは、適切な糖アジドのフイスゲン１，３双極子環化付加反応によって調製されている。これらの「クリック可能」材料は、ポリマー特性に対して優れた制御を伴うトリメチルシリル−プロパルギルメタクリレートのＴＭＭ−ＬＲＰによって調製されており、この精製された生成物のＭ_w／Ｍ_nは１．０９〜１．１６である。ＴＭＳ保護基の除去は、末端アルキン基の十分な保持によって穏やかな条件下で行った。ポリマー骨格上のＣ−６又はα若しくはβアノマーアジドのいずれかを介した、保護された炭水化物及び保護されていない炭水化物のグラフト化は、Ｃｕ（Ｉ）触媒されたクリック反応によって首尾良く実施された。レクチン結合研究用ディスプレイのための、多くのマンノース含有多座リガンド及びガラクトース含有多座リガンドを、ポリアルキンメタクリレート骨格上に種々の糖アジドを同時に反応させることによって調製した。この「同時クリック」手法は、高効率官能化後プロセスによる制御されたラジカル共重合の利点と上手く結びついており、これにより、それらのエピトープ密度のみが異なる多価ディスプレイのライブラリがもたらされる。また、蛍光性リガンドは、視認可能な蛍光性アジドタグ、即ちクマリン３４３誘導体を反応混合物に単に添加するだけで調製された。このためそれらの挙動は、マンノース（ＣｏｎＡ）単位及びガラクトース（ＲＣＡ Ｉ）単位と選択的に結合し得るモデルレクチンの存在下で試験した。ＣｏｎＡの場合にはこの研
究によって、ポリマー−タンパク質複合体のクラスタリング速度及び化学量論比は両方とも、使用されるディスプレイのエピトープ密度に応じて決まることが示された。

糖ポリマーの合成に上手く使用されているプロトコルは原理上、広範な官能性分子に適用し得るため、提示される合成手法は極めて包括的なものであり、条件に適合しない官能基を含有するものであってもＴＭＭ−ＬＲＰに使用し、広範な厳密な材料を合成する方法を開示する。さらに、本研究に記載のものに対する炭水化物ポリマー類似体の生物学的応用の観点から、この手法は、十分に規定されたポリマー骨格上に存在する糖部分の性質のみが異なる材料のライブラリの合成について極めて強力なツールであると考えられる。

［２＋３］フイスゲン環化付加反応プロセスによるＷＡＮＧ樹脂表面官能化
実験
概括
窒素の不活性雰囲気下における標準シュレンク技法を用いて重合を行った。ＦｉｒｓｔＭａｔｅベンチトップ合成機（benchtop synthesizer）（Argonaut Technologies Limited, New Road, Hengoed, Mid Glamorgan, UK）を用いて、同様に窒素下で行う樹脂修飾を
行った。

特性決定
分子量及び多分散度を、Polymer Laboratoriesからのサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）を用いて測定した。ＮＭＲスペクトルをＢｒｕｋｅｒ ＤＰＸ３００及びＢｒｕｋｅｒ ＤＰＸ４００スペクトロメータで得た。赤外吸収スペクトルをＢｒｕｋｅｒ ＶＥＣＴＯＲ−２２ ＦＴＩＲスペクトロメータでＧｏｌｄｅｎ Ｇａｔｅダイアモンド減衰全反射セルを用いて記録した。電界放出走査電子顕微鏡法（ＦＥ−ＳＥＭ）及び共焦点顕微鏡法を用いて、樹脂の表面を画像化した。ＦＥ−ＳＥＭは、Ｏｘｆｏｒｄ ＪＳＩＳ分析システムを備える、１０ｋＶの加速電圧を有するＪｏｅｌ ＪＳＭ６１００によるものである。ＨＰＬＣ−ＳＥＣスペクトル及びＨＰＬＣ−ＦＬスペクトルは、ＨＰ １０５０
ＵＶ検出器、及びＨｉｔａｃｈｉ Ｌ７４８０ ＦＬ検出器によって求めた。共焦点顕微鏡法実験はＺｅｉｓｓ ＬＳＭ ５１０システムによって行った。４８８ｎｍバンドのアルゴンイオンレーザーを用いて、蛍光材料を励起させた。実験機構のフィルタは、５０５ｎｍを超えて発光する蛍光を測定することができるように選択した。

ＭＭＡ及びホスタゾルモノマーのＴＭＭ−ＬＲＰ
開始剤２−ブロモ−２−メチル−プロピオン酸３−アジド−プロピルエステル（Mantovani et al 2005, Chem Commun, 2089）、メチルメタクリレート（ＭＭＡ）、ホスタゾル
メタクリレート、Ｎ−（ｎ−プロピル）−２−ピリジルメタンイミン、及び内部¹Ｈ Ｎ
ＭＲ標準としてトルエン中に溶解されるメシチレンを含有する密閉乾燥シュレンクフラスコを、４回の凍結−吸引−解凍サイクルによって脱気した。その後この溶液を、ＣｕＢｒを含有し、事前に排気した後Ｎ₂で充填させたカニューレを介して別のシュレンク管内へ
移した。重合は９０℃で行った。

Ｗａｎｇ樹脂−アルキン合成
ＦｉｒｓｔＭａｔｅベンチトップ合成機を用いて、Ｗａｎｇ樹脂を無水ピリジン及び４−ジメチルアミノピリジンで１時間湿潤させた後、アルキン−エステルを添加した。その後反応混合物を６０℃に加熱し、この温度で２０時間維持した。

Ｗａｎｇ樹脂に対するクリック反応
トルエン溶液中のＷａｎｇ樹脂、（ＰＰｈ₃）ＣｕＢｒ及びアジド末端材料を含有する
反応管を窒素下で７０℃に加熱し、一晩反応させた。ビーズを取り出し、濾過した後、十分に水洗した。

結果及び考察

スキーム：試薬及び条件：ａ）無水ピリジン、ＤＭＡＰ、ｂ）ＰＰｈ₃／Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ
、Ｒ−Ｎ₃、６０℃、（Ｒ＝ポリ（ＭＭＡ−ｃｏ−ホスタゾル）、Ｄ−マンノース）

アジドポリマー／糖とアルキン修飾樹脂との「クリック」反応の模式図をこのスキームに示す。アルキン−エステルは、還流ジクロメタン溶液中のＤＭＡＰによるグルタル酸無水物及びプロパルギルアルコールの処理、続く二塩化オキサリルによる生成物のハロゲン化よって得られた。その後、天然Ｗａｎｇ樹脂をアルキン−エステルで処理し、アルキンで官能化したＷａｎｇ樹脂を得た。その後これをアジド末端ポリ（ＭＭＡ−ｃｏ−ホスタゾル）及びＤ−マンノースで「クリック」するのに用いる。

ポリ（ＭＭＡ−ｃｏ−ホスタゾル）は、２−ブロモ−２−メチル−プロピオン酸３−アジド−プロピルエステルを開始剤として用いたＭＭＡ及びホスタゾルメタクリレートのＴＭＭ−ＬＲＰによって合成されて、優れた一次動態プロットをもたらす。これは、伝播ラジカルの一定濃度を示し、ポリマー重量及び分子量分布に対する良好な制御も観察される（図１１）。ホスタゾルメタクリレート（Tronc et al, J. Polym. Sci, Part A, Polym Chem. 2003, 41, 766）を視認可能な蛍光性コモノマーとして使用して、蛍光標識された
ＰＭＭＡを得る。この蛍光標識されたＰＭＭＡは、蛍光分析法を用いた対応するＷａｎｇ樹脂−ポリマーハイブリッド材料の特性決定を容易にした。Ｄ−マンノースアジドは、過アセチル化したマンノースをＢＦ₃・ＯＥｔ₂の存在下において３−ブロモ−１−プロパノールで処理して臭化物中間対を得た後、アジドに変換し、続いて酢酸保護基を除去して所望のアジド官能性マンノースを得るという２つの工程によって得られている（Ladmiral et al J. Am. Chem. Soc 1006, 128, 4823）。次にこれらのアジド官能性材料を、事前に
形成したＷａｎｇ樹脂表面に対して（ＰＰｈ₃）ＣｕＢｒの存在下で「クリック」した。
トリアゾールへの樹脂アルキン単位及び糖アジドの完全な変換はＩＲによって確認され、これにより、天然樹脂と、樹脂−アルキン及び樹脂−ポリマー／糖との相違が示される。ＳＥＭ分析によっても、天然Ｗａｎｇ樹脂と修飾樹脂との相違が示された。ポリ（ＭＭＡ−ｃｏ−ホスタゾル）修飾樹脂についても共焦点顕微鏡法を使用して、反応が首尾良く行われたことを確認した（図１３ａ）。

マンノース修飾Ｗａｎｇ樹脂を使用して、或る特定のレクチンの結合能を試験した。多くの生物学的プロセスと関与することに起因して、コンカバリンＡ（ＣｏｎＡ）をモデル
Ｄ−マンノース結合レクチンとして選択した。モニタリングを容易にするために、フルオレセインイソチオシアネート結合ＣｏｎＡ（ＦＩＴＣ−ＣｏｎＡ）を使用した。マンノース修飾Ｗａｎｇ樹脂をスモールピペット内への充填剤として用いてフラッシュ・フロー（flush and flow）カラムシステムを使用し、１Ｍ ＦＩＴＣ−ＣｏｎＡ溶液を溶離液とて使用し、カラム後の溶液を分析のために回収した。図１２に示した結果は、ＦＩＴＣ−ＣｏｎＡに対するその結合能が、強度な減少として、カラム前後の同量のサンプルを用いたＨＰＬＣ及び蛍光検出器の両方により観測されたことを示す。これは共焦点顕微鏡法によっても確認され（図１３ｂ）、マンノース修飾Ｗａｎｇ樹脂によってＦＩＴＣ−ＣｏｎＡが首尾良く吸収されることが示される。

表面上でより接近可能なマンノースは、ＣｏｎＡのような或る特定のレクチンについてマンノース修飾Ｗａｎｇ樹脂の結合能を増大させることが予想される。これを考慮すると、櫛形アルキンモノマーは樹脂表面から重合され、Ｄ−マンノースとクリックし、その結合能はさらに研究が行われている。またラットの血清を用いた試験を行って、これらのマンノース修飾Ｗａｎｇ樹脂の考えられるタンパク質認識／分離用途を確認する。

ガラクトース官能化及びラクトース官能化されたポリマーの生成を示すさらなるデータ
（Ａ）ガラクトース官能性ポリマーの合成のための手順
１．ガラクトースアジドの合成

（１）¹ ２５ｍＬ無水酢酸を９．０１ｇ（０．０４９ｍｏｌ）Ｄ−ガラクトースと混
合し、５分間攪拌した。固体ヨウ素（０．０８７１２ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を混合物中に添加した。溶液を環境温度に冷却した後、１００ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂を添加し、得られた溶液を１０分間攪拌した。次に、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３×１００ｃｍ³）を添加
することによって反応混合物を中和し、得られた溶液を脱イオン水（２×２００ｃｍ³）
で洗浄した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、揮発分を減圧下で除去した。得られた収量＝１８．０１ｇ（９２％）。

（２）² 三フッ化ホウ素エーテレート（２５．９９ｃｍ³、２０５．１０ｍｍｏｌ）及び（１）（１７．２５ｇ、４４．１１ｍｍｏｌ）及び２−ブロモエタノール（７．４２ｃｍ³、１０２．４０ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ₂Ｃｌ₂（２５０ｃｍ³）溶液を、窒素雰囲気下の暗所で一晩攪拌した。酢酸エチル／石油エーテル（１：２、ｖ／ｖ）を用いたＴＬＣ分析により、反応が完全に行われたことが示された（出発材料Ｒ_f０．５３、生成物Ｒ_f０．６３）。２００ｃｍ³のＣＨ₂Ｃｌ₂を添加した後、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３×１００
ｃｍ³）を添加することによって反応混合物を中和し、得られた溶液を脱イオン水（２×
２００ｃｍ³）で洗浄した。合わせた有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過して
、揮発分を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィ（ＣＣ、ＳｉＯ₂、酢酸エチ
ル／石油エーテル（１：４、ｖ／ｖ））によって粗生成物を精製した。関係のある分画を回収し、併せてから、揮発分を減圧下で除去した。得られた収量＝１０．０５ｇ（５０．１３％）無色粉末。

（３）：（２）（１０．０２８ｇ、２０．０３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１００ｃｍ³
）溶液をアジ化ナトリウム（８．５９ｇ、１３０．２２ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を５０℃で一晩攪拌した。酢酸エチル／石油エーテル（１：１、ｖ／ｖ）を用いたＴＬＣ分析により、反応が完全に行われたことが示された（出発材料Ｒ_f０．６９、生成物Ｒ_f０．６０）。反応混合物を減圧下で乾燥濃縮し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０ｃｍ³）中に溶解した後
、脱イオン水（４×５０ｃｍ³）で洗浄した。合わせた有機層を硫酸マグネシウム上で乾
燥させ、濾過して、揮発分を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィ（ＣＣ、ＳｉＯ₂、酢酸エチル／石油エーテル（１：１、ｖ／ｖ））によって粗生成物を精製した。
関係のある分画を回収し、併せてから、減圧下で乾燥濃縮した。得られた収量＝８．０８ｇ（９６．７３％）無色結晶。

（４）：（３）（８．０１ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を１００ｃｍ³メタノール中に溶解
させた。ナトリウムメトキシド（メタノール中２５重量％）（２１．９ｃｍ³、９６．０
１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を環境温度で３時間攪拌した。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０（ＰＬＵＳ）イオン交換樹脂を添加し、反応混合物と一緒に３０分間攪拌した。この樹脂を濾過により除去し、得られた溶液を減圧下で乾燥濃縮した。得られた収量＝４．６２ｇ（８１．５６％）無色結晶。

２．糖コポリマーの合成

試薬及び条件：ａ）Ｎ−（ｎ−エチル）−２−ピリジルメタンイミン／ＣｕＢｒ、トルエン、７０℃；ｂ）ＴＢＡＦ、酢酸、ＴＨＦ、−２０〜２５℃；ｃ）２’−アジドエチル−Ｏ−ａ−Ｄ−ガラクトピラノシド（４）、（ＰＰｈ₃）₃ＣｕＢｒ、Ｅｔ₃Ｎ

２−メチル−アクリル酸３−トリメチルシラニル−プロプ−２−イニルエステル（６）³
：
トリメチルシリルプロピン−１−オール（１０．０ｇ、７８．０ｍｍｏｌ）及びＥｔ₃
Ｎ（１４．２ｍＬ、１０１．３ｍｍｏｌ）のＥｔ₂Ｏ（１００ｍＬ）溶液を−２０℃に冷
却し、メタクリロイルクロリド（８．８ｍＬ、９３ｍｍｏｌ）のＥｔ₂Ｏ（５０ｍＬ）溶
液を約１時間かけて滴下した。この混合物をこの温度で３０分間攪拌した後、環境温度で一晩攪拌した。濾過によりアンモニウム塩を除去し、揮発分を減圧下で除去した。フラッシュクロマトグラフィ（ＣＣ、ＳｉＯ₂、石油エーテル／Ｅｔ₂Ｏ ５０：１；石油エーテル／Ｅｔ₂Ｏ ５０：１中Ｒ_f＝０．６７）によって粗生成物精製した。得られた収量＝１２．４ｇ（６３．２ｍｍｏｌ、８１％）。

（ａ）一般的な重合手順。（７）の合成：
Ｎ−（エチル）−２−ピリジルメタンイミンリガンド（０．０７２ｍＬ、０．５１ｍｍｏｌ）、（６）（２．０ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、開始剤（５）（０．０６５ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びメシチレン（内部ＮＭＲ標準、０．５ｍＬ）を溶媒としてトルエン（４．０ｍＬ）と一緒に乾燥シュレンク管内に充填した。管をゴム隔膜で封止し、５回の凍結−吸引−解凍サイクルを行った。その後この溶液を、窒素下でカニューレを介して第２のシュレンク管内へ移した。この第２のシュレンク管は、予め排気させ窒素で充填されており、Ｃｕ（Ｉ）Ｂｒ（０．０３６ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及び磁気フォロアーを含有したものであった。温度を一定攪拌により７０℃に調節した（ｔ＝０）。脱気したシリンジを用いてサンプルを周期的に取り出し、分子量及び変換率を分析した。重合終了時に、混合物を１０ｍＬのトルエンで希釈し、空気で４時間かけて泡立たせた。反応混合物を短い中性アルミナカラムに通過させ、続いてトルエンで洗浄した。揮発分を減圧下で除去し、残留物をＴＨＦ（約１０ｍＬ）中に溶解させた後、１０：２ｖｏｌ／ｖｏｌメタノール／水混合物（約２００ｍＬ）中へ沈降させた。白色固体を濾過によって単離し、さらなるメタノール／水混合物で洗浄し、揮発分を減圧下で除去した。５．１ｐｐｍにおける開始剤ベンジルシグナルの積分を、４．４ｐｐｍにおけるアルキン分枝鎖と結合するＣ（Ｏ）ＯＣＨ₂基の積分と比較することによって、ポリマーの分子量を¹Ｈ ＮＭＲにより算出した。４．４ｐｐｍの代わりに０．２ｐｐｍにおけるＳｉ（ＣＨ₃）₃の一重項を用いた場合、実質的に同じ分子量が得られた。メシチレン（６．９ｐｐｍ）のピークを内標準として用い、モノマービニルシグナル（５．６ｐｐｍ及び６．２ｐｐｍ）の積分を下げることによって、変換率を¹Ｈ ＮＭＲによって算出した。代替的には、モノマーのＣ（Ｏ）ＯＣＨ₂プロトン（ｂｓ，４．６ｐｐｍ、経時的に低減）に対する積分と、ポリマーの類似Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ₂プロトン（幅の広いシグナル、４．４ｐｐｍ、経時的に増大）に対する積分との
比較によって変換率を算出した。ＤＰ（ＮＭＲ）＝７５；Ｍ_n（ＮＭＲ）１４．７ｋＤａ
；Ｍ_w／Ｍ_n（ＧＰＣ）＝１．１５；開始効率＝４１％；変換率８２％。

（ｂ）ポリマー脱保護。一般的な手順：
トリメチルシリルで保護されたポリマー（１．５ｇ、７．６５３ｍｍｏｌアルキン−トリメチルシリル基）及び酢酸（２．１９ｍＬ、０．０３８２ｍｏｌ、アルキン−トリメチルシリル基に対して５当量）をＴＨＦ（１００ｍＬ）中に溶解させた。窒素を泡立て（約１０分）、溶液を−２０℃に冷却した。ＴＢＡＦ・３Ｈ₂Ｏ（０．０１１４ｍｏｌ、アル
キン−トリメチルシリル基に対して１．５当量）の０．２０Ｍ溶液を約２０分かけて滴下した。得られた混濁混合物をこの温度で３０分間攪拌した後、環境温度に温めた。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０（ＰＬＵＳ）イオン交換樹脂を添加し、反応混合物と一緒に３０分間攪拌した。その後この樹脂を動下で濾過により除去し、得られた溶液を減圧下で乾燥濃縮し、ポリマーを石油エーテル中に沈降させた。得られた収量＝０．４６ｇ（４８％）無色粉末。

（ｃ）（９）の合成：
ポリマー（８）（５０ｍｇ、「クリック可能」アルキン単位０．４０ｍｍｏｌ）、アジド糖（４）（２２５ｍｇ、０．６０４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２６ｍｇ、３５μＬ、０．２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、窒素を１０分間泡立たせることによって脱気した。その後、［（ＰＰｈ₃）₃ＣｕＢｒ］（３７．５ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた溶液中にさらに窒素を５分間泡立たせた。この非常に淡い黄色の
澄んだ溶液を環境温度で３日間攪拌した後、短い中性アルミナパッドに通過させてＴＨＦで溶離した。得られた溶液を減圧下で濃縮し、石油エーテル（２００ｍＬ）中に沈降させた。懸濁液を遠心分離し、得られた固形分をＴＨＦ中に再溶解させた。イオン交換樹脂の存在下で溶液を１時間攪拌し、濾過し、１：１のＥｔ₂Ｏ／石油エーテル混合物（１５０
ｍＬ）中で再度沈降させた。遠心分離により固形分を分離し、ポリマーを得た。

（Ｂ）ラクトース官能性ポリマーに関する手順
１．ラクトースアジドの合成

スキーム1．試薬及び条件：ａ）Ｈ₂ＳＯ₄、無水酢酸；ｂ）トリメチルシリルアジド、塩
化スズ（ＩＶ）、ＤＣＭ；ｃ）ＣＨ₃ＯＮａ（触媒）、ＣＨ₃ＯＨ、環境温度

（ａ）．無水酢酸（２８．５０ｍＬ、０．５１３ｍｏｌ）を（１８ｇ、０．０５２ｍｏｌ）Ｄ−ラクトースと混合し、５分間攪拌した。濃硫酸を３滴この混合物中に添加した。溶液を環境温度にまで冷却した後、１００ｍＬのＣＨ₂Ｃｌ₂を添加し、得られた溶液を１０分間攪拌した。次に、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３×１００ｃｍ³）を添加すること
によって反応混合物を中和し、得られた溶液をブライン（２×２００ｃｍ³）で洗浄した
。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、揮発分を減圧下で除去した。得られた収量＝３２．０１ｇ（８９％）。

（ｂ）．（１）（４．１４ｇ、６．１０６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液中に、初めにトリメチルシリルアジド（１．６０６ｍＬ、１２．２１１ｍｍｏｌ）を導入し、塩化スズ（ＩＶ）（０．４２８ｍｌ、３．６５７ｍｍｏｌ）を窒素下で添加した。この混合物を環境温度で１２時間攪拌した。混合物を減圧下で濃縮させた後、フラッシュクロマトグラフィ（ＣＣ、ＳｉＯ₂、酢酸エチル／石油エーテル（１：１、ｖ／ｖ））によっ
て粗生成物を精製した。関係のある分画を回収し、併せてから、減圧下で乾燥濃縮した。得られた収量＝３．６７ｇ（９１％）無色粉末。

（ｃ）．（２）（３．６６ｇ、５．５３２ｍｍｏｌ）の１５０ｃｍ³メタノール溶液中
に、ナトリウムメトキシド（メタノール中２５重量％）（２１．９ｃｍ³、９６．０１ｍ
ｍｏｌ）を添加した。この混合物を環境温度で３時間攪拌した。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０（ＰＬＵＳ）イオン交換樹脂を添加し、反応混合物と一緒に３０分間攪拌した。その後この樹脂を濾過により除去し、得られた溶液を減圧下で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ＣＣ、ＳｉＯ₂、エチルメタノール／ＤＣＭ（１：２、ｖ／ｖ））によ
って粗生成物を精製した。関係のある分画を回収し、併せてから、減圧下で乾燥濃縮した。得られた収量＝１．５２ｇ（７５％）白色粉末。

２．糖ポリマーの合成

スキーム２．ラクトース糖ポリマーの合成

ポリマー（４）（０．０１２ｇ、「クリック可能」アルキン単位０．０９２ｍｍｏｌ）及びアジド−ラクトース（３）（０．０３０ｇ、０．０９７ｍｍｏｌ、アルキン単位に対する１．０５当量）を１０ｍＬのＤＭＳＯ中に溶解させ、トリス−（１−ブチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾル−４−イルメチル）−アミン（０．０３５ｇ、０．０８１６ｍｍｏｌ）を、窒素を２０分間泡立たせることによって脱気した。次にＣｕ（Ｉ）（０．０３０ｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）を窒素下で添加した。得られた溶液を環境温度で３日間攪拌した後、イオン交換樹脂を添加し、懸濁液を環境温度で穏やかに攪拌した。濾過後、溶液をＨ₂Ｏに滴下し、ポリマーを遠心分離により分離した。その後、上澄み液を回収し、
溶液を透析管（ＮＭＷＣＯカットオフ＝８０００Ｄａ）内に入れ、水を３回交換しながら水に対して２０時間超透析した。その後、水溶液を凍結乾燥させて、糖ポリマー（５）を白色固体として得た。

Claims (24)

1. １つ又は複数の糖であるペンダント側基を有するポリマーであって、
   （ｉ）（ａ）保護基で保護されてもよいアジド基、又は（ｂ）保護基で保護されてもよいアルキン基で官能化されたオレフィン性不飽和モノマーを、ＲＡＦＴ、遷移金属媒介リビングラジカル重合（ＴＭＭ−ＬＲＰ）及び／又は原子移動ラジカル重合によって重合して、ポリマー中間体を生成すること、
   （ｉｉ）存在する場合には、前記ポリマー中間体から保護基の総数の少なくとも一部を除去すること、及び
   （ｉｉｉ）前記ポリマー中間体を、（ａ）アルキン基又は（ｂ）アジド基で各々官能化された少なくとも１つの糖側基部分と反応させて、該アルキン基及び該アジド基が反応し該糖側基をペンダント側基として該ポリマー中間体に結合させること、
   を含み、
   前記モノマーが、メチルメタクリレート、エチルメタクリレート、プロピルメタクリレート（全ての異性体）、ブチルメタクリレート（全ての異性体）、及び他のアルキルメタクリレート；対応するアクリレート；グリシジルメタクリレート、トリメトキシシリルプロピルメタクリレート、アリルメタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート、ジアルキルアミノアルキルメタクリレートを含む官能化されたメタクリレート及びアクリレート；フルオロアルキル（メタ）アクリレート；メタクリル酸、アクリル酸；フマル酸（及びエステル）、イタコン酸（及びエステル）、無水マレイン酸；塩化ビニル及びフッ化ビニルを含むビニルハロゲン化物；アクリロニトリル、メタクリロニトリル；式ＣＨ_２＝Ｃ（Ｈａｌ）_２（ここで、各ハロゲンは独立してＣｌ又はＦである）のビニリデンハロゲン化物；式ＣＨ_２＝Ｃ（Ｒ^１５）Ｃ（Ｒ^１５）＝ＣＨ_２（ここで、Ｒ^１５は、独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃｌ又はＦである）の置換されてもよいブタジエン；式ＣＨ_２＝ＣＨＳＯ_２ＯＭ（ここで、ＭはＮａ、Ｋ、Ｌｉ、Ｎ（Ｒ^１６）_４（ここで、Ｒ^１６は、各々独立して、Ｈ又はＣｌ又はアルキルである）である）のスルホン酸；式ＣＨ_２＝ＣＨＣＯＮ（Ｒ^１６）_２のアクリルアミド、及び式ＣＨ_２＝Ｃ（ＣＨ_３）ＣＯＮ（Ｒ^１６）_２のメタクリルアミド、又はオレフィン性不飽和アルコキシポリエーテル、又はそれらの混合物から選択されるモノマーが前記アジド基又は前記アルキン基で官能化されたものであり、
   前記糖が、グルコース、グルコサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、マンノース、ラクトース、フコース及びシアル酸から選択される、方法により得られるポリマー。
2. 前記モノマーが、保護基で保護されてもよいアルキン基を含み、且つ前記糖側基がアジド基を含む、請求項１に記載のポリマー。
3. 少なくとも１つの糖がＮ−アセチル化されている、請求項１又は２に記載のポリマー。
4. 前記オレフィン性不飽和モノマーが、１つ又は複数の官能基で官能化されてもよい１つ又は複数の異なるオレフィン性不飽和モノマーと共重合される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリマー。
5. 前記官能基が、標識基、ポリアルキレングリコール及び薬剤から選択される、請求項４に記載のポリマー。
6. 工程（ｉｉｉ）中の前記ポリマー中間体が、（ａ）アルキン基又は（ｂ）アジド基で各々官能化された２つ以上の異なるペンダント側基部分と反応する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリマー。
7. 工程（ｉｉｉ）中の前記ポリマー中間体が、前記糖側基、及び（ａ）アルキン基又は（ｂ）アジド基を各々含む１つ又は複数のさらなる化合物と反応する、請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリマー。
8. 前記ペンダント側基又は前記化合物が、標識基、ポリアルキレングリコール基又は薬剤を含む、請求項６又は７に記載のポリマー。
9. 生体分子と結合し得る基を有する開始剤の使用を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリマー。
10. （ｉｖ）前記ポリマーと結合する前記ペンダント側基が、さらに反応して誘導体化された前記ペンダント側基となる、請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリマー。
11. 前記ペンダント側基が糖であり、該糖が、キラル化合物と反応することによって誘導体化される、請求項１０に記載のポリマー。
12. １．５未満の多分散度指数（Ｍｗ／Ｍｎ）を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリマー。
13. １．５未満の多分散度指数（Ｍｗ／Ｍｎ）を有する、一つ又は複数の糖である基を含む複数のペンダント側基を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のポリマー。
14. ２つ以上の異なるペンダント側基を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のポリマー。
15. タンパク質、ポリペプチド、核酸、炭水化物又は脂肪から選択される生体分子と結合し得る基をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のポリマー。
16. ポリアルキレングリコール及び薬剤から選択される官能基を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のポリマー。
17. 前記ポリマーの第１の位置に結合した、開始剤から得られる原子又は基と、
    該ポリマーの別の第２の位置に結合する、該開始剤の化合物の残渣と、
    を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のポリマー。
18. キラル基で誘導体化されるペンダント糖部分を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のポリマー。
19. 前記ポリマーが有機担体又は無機担体と結合している、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のポリマー。
20. 前記ペンダント側基部分が、糖の鏡像異性体、又は糖の鏡像異性体のラセミ混合物である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のポリマー。
21. 複数のペンダント側基を含み、該複数のペンダント側基が糖の鏡像異性体又は糖の鏡像異性体のラセミ混合物である、請求項１〜２０のいずれか１項に記載のポリマー。
22. 請求項１〜２１のいずれか一項に記載の複数のポリマーを含む種々のポリマーのライブラリであって、各種ポリマーが、ペンダント側基、ペンダント側基の様々な量及び／又は種々のペンダント側基の様々な比率によって異なる、種々のポリマーのライブラリ。
23. 請求項１〜２１のいずれか一項に記載のポリマー、又は請求項２２に記載のライブラリを含み、前記ポリマーが１又は複数のペンダント糖側基を有する、糖−レクチン結合又は細胞表面結合用の検査キット。
24. アフィニティクロマトグラフィ又はキラルクロマトグラフィ用である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載のポリマー、又は請求項２２に記載のライブラリを含むクロマトグラフィカラム。

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