JP5574490B2 - 歯槽骨の骨吸収及び骨密度低下の抑制剤 - Google Patents
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6週齢のddy系マウスより下顎を採取し、実体顕微鏡下において、臼歯および切歯を抜歯したものを歯槽骨とした。48ウェルプレートを用い、1mg/mlBSA/BGJb medium/Penicillin(P)(63.2mg/l), Streptomycin(S)(100mg/l)培養液500μlにて37℃で24時間培養した。その後、同培養液、すなわち、1mg/mlBSA/BGJb medium/PSの200μlにLPS(1μg/ml;Sigma社製)を添加した培地に変え、さらに6日間培養した。培養後、カルシウムCテストワコー(和光社製)により培養上清中のカルシウム濃度を測定した(n=4)。培養液のみの場合のカルシウム濃度を差引き、カルシウム濃度の上昇分を歯槽骨から遊出したカルシウムであると判断し、骨吸収活性とした。結果を図1(左)に示す。図1(左)中、*はp<0.001を表す。図1(左)に示されるように、LPS添加により骨吸収活性の上昇が認められた。
実体顕微鏡下において、6週齢ddy系マウスの左下顎臼歯外側の歯肉にLPS(0.5mg/ml)を2ヶ所に分けて25μlずつ(total 50μl)を1日置きに3回投与する(LPS(25μg/body/day))。右下顎臼歯外側の歯肉には対象としてPBSを同様に投与した。3回目投与の3日後に左右下顎より歯槽骨を取り出し、抜歯の後、DEXA(dual energy X-ray absorptiometry:Aloka社製)法により歯槽骨の骨密度(BMD)を測定した(n=4)。結果を図1(右)に示す。図1(右)中、*はp<0.001を表す。図1(右)に示されるように、LPS投与により骨密度の減少が認められた。
実施例1と同様に、6週齢のddy系マウスより下顎を採取し、実体顕微鏡下において、臼歯および切歯を抜歯したものを歯槽骨とした。48ウェルプレートを用い、1mg/mlBSA/BGJb medium/PS培養液500μlにて37℃で24時間培養した。その後、同培養液の200μlに、それぞれLPS(1μg/ml;Sigma社製)を添加した培地、LPS(1μg/ml;Sigma社製)とインドメタシン(10−6M;Sigma社製)を添加した培地、TLR2リガンドであるリポペプチド(300μg/ml;BACHEM社製)を添加した培地、リポペプチド(300μg/ml;BACHEM社製)とインドメタシン(10−6M;Sigma社製)を添加した培地に変え、さらに6日間培養した。培養後、カルシウムCテストワコー(和光社製)により培養上清中のカルシウム濃度を測定した(n=各4)。培養液のみの場合のカルシウム濃度を差引き、カルシウム濃度の上昇分を歯槽骨から遊出したカルシウムであると判断し、骨吸収活性とした。結果を図2に示す。図2中、*はp<0.01を、**はp<0.001を表す。図2に示されるように、LPS、TLR2リガンドの添加により骨吸収活性の上昇が認められたが、インドメタシンの併用により、骨吸収活性の上昇が抑制された。
実施例2と同様に、実体顕微鏡下において、6週齢ddy系マウスの左下顎臼歯外側の歯肉に、それぞれLPS(0.5mg/ml)のみを2ヶ所に分けて25μlずつ(total 50μl)、LPS(0.5mg/ml)を2ヶ所に分けて25μlずつ(total 50μl)とインドメタシン(Sigma社製)1μg、LPS(0.5mg/ml)を2ヶ所に分けて25μlずつ(total 50μl)とインドメタシン(Sigma社製)10μgを投与した。右下顎臼歯外側の歯肉には対象としてPBSを同様に投与した。投与の7日後に左右下顎より歯槽骨を取り出し、抜歯の後、DEXA(dual energy X-ray absorptiometry:Aloka社製)法により歯槽骨の骨密度(BMD)を測定した(n=各4)。結果を図3に示す。図3中、*は対照と比較してp<0.05を、**はp<0.001を表し、##はLPS単独投与と比較してp<0.001を表す。図3に示されるように、LPS投与により骨密度の減少が認められたが、インドメタシンの併用により、濃度依存的に骨密度の減少が抑制された。
マウスより下顎を採取し、実体顕微鏡下において、臼歯、および切歯を抜歯したものを歯槽骨とした。1mg/mlBSA/BGJb medium/PSにて24時間培養後、LPS(10μg/ml) および、式(1)に示すノビレチン(30μM)または式(2)に示すタンゲレチン(30μM)を併用処理し、さらに3日間培養後、培養上清中のCa濃度を測定し、骨吸収活性を求めた。その結果を図4に示す。処理後3日目において、骨吸収活性はLPS処理により有意に増加したが(*P<0.001 vs control)、ノビレチンまたはタンゲレチン併用処理により、有意に低下した(###P<0.001 vs LPS)。
6週齢マウスの下顎臼歯外側の歯肉に溶媒 (DMSO/PEG300 1:4) を1日置きに3回投与したマウスを control群、LPS(30μg/body/day)を同様のスケジュールで投与したマウスをLPS群として、歯周病モデルマウスを作製した。さらに、LPSにノビレチン(0.3mg/body/day)またはタンゲレチン(0.5mg/body/day)を混合した液を1日置きに3回併用投与した。4群について、3回目投与の3日後に歯槽骨を摘出し、抜歯の後、Dual Energy X-ray Absorptiometry (DEXA) 法にて歯槽骨の骨密度を測定した。その結果を図5に示す。LPS投与により低下した歯槽骨の骨密度はノビレチン(0.3mg/body/day)併用投与によりコントロールレベルに維持された(LPS投与群:*P<0.001 vs control, ノビレチン群:##P<0.01 vs LPS)。また、LPS投与により低下した歯槽骨の骨密度はタンゲレチン(0.5mg/body/day)併用投与により有意に回復した(タンゲレチン群:#P<0.05 vs LPS)。
Claims (1)
- ノビレチン又はタンゲレチンを有効成分とする、歯槽骨の骨吸収及び骨密度低下の抑制剤。
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