JP5535571B2 - 表皮ターンオーバーの評価方法及びその用途 - Google Patents
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Description
[1]角質中のミトコンドリアDNAの含有量を測定することを特徴とする表皮ターンオーバーの評価方法。
[2]角質中のミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率を測定することを特徴とする表皮ターンオーバーの評価方法。
[3]表皮ターンオーバーの評価方法であって、
a)被検体の皮膚から角質を獲得する工程と、
b)角質からDNAを抽出する工程と、
c)工程bで得られたDNA中のミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率を測定する工程と、
d)工程cで測定したミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率をデータベースと比較する工程とを備え、
データベースが、表皮ターンオーバーが正常な皮膚と異常な皮膚におけるミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率に関連したデータを含んでいる、
ことを特徴とする方法。
[4]前記データベースが、紫外線暴露又は皮膚刺激性物質の接触により表皮ターンオーバーが亢進した皮膚におけるミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率に関連したデータを含んでいる[3]に記載の方法。
[5]前記データベースが、老化により表皮ターンオーバーが遅延した皮膚におけるミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率に関連したデータを含んでいる[3]に記載の方法。
[6]前記ミトコンドリアDNA及び/又はゲノムDNAの含有量を測定する工程が、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を用いてミトコンドリアDNA及び/又はゲノムDNAを増幅して行われる、[1]〜[5]いずれかに記載の方法。
[7]前記被検体の皮膚から角質を獲得する工程が、テープストリップ法により皮膚から角質を剥離することによって行われる、[1]〜[6]いずれかに記載の方法。
[8]被験体の色素沈着部位に[1]〜[7]いずれかに記載の方法を実施して、色素沈着の治癒速度を評価する方法。
[9]被験体に対して、トリートメント手段を施す前及び後にそれぞれ、[1]〜[8]いずれかに記載の方法を実施し、得られた評価結果を比較することによって該トリートメント手段の有効性を評価することを特徴とする、皮膚に対するトリートメント手段を評価する方法。
(例1)
表皮ターンオーバーの速度(遅い):比率<a、(中度):a≦比率<b、(速い):b≦比率
被験者の頬部皮膚に半径1cmの円状のテープ(3M、Blenderm)を一枚貼付し、十分に接着していることを確認した後、テープを剥がし取り、角質を含むテープを得た。得られた角質に含まれるDNAをDNA抽出キット(Quiagen社製、QIAamp DNA Micro Kit)を用いて抽出した。すなわち、角質の付着したテープをテープごと300μLのLysis/Binding Solutionに入れ、proteinase K(Invitrogen社製)及びdithiothreitol(和光純薬社製)を添加し、56℃で2時間インキュベートした。その後、テープを取り除き、角質抽出液を得た。付属のfilter cartridgeにDNAを吸着させた後に、100μLの溶出液でDNAを溶出した。得られた溶出液にRNaseを加え、残存しているRNAを完全に除去し、角質に含まれるDNAを得た。
顔面部に炎症を伴う肌荒れが生じている被験者5名と正常な皮膚である被験者5名の、顔面頬部の角質より上記1.の方法でDNAを得た。各DNAをリアルタイムPCRキット(Invitrogen社製、Platinum SYBR Green qPCR Super−Mix−UDG kit)を用いた定量PCR反応に供し、mtDNAを定量した。同時に、gDNAを定量し、規格化(ノーマライズ)した。尚、mtDNA及びgDNA量の測定に使用したプライマーは次の通りである。
GATTTGGGTACCACCCAAGTATTG(配列番号1)
AATATTCATGGTGGCTGGCAGTA(配列番号2)
gDNA用のプライマーセット
CACTCTTCCAGCCTTCCTTCC(配列番号3)
GTGTTGGCGTACAGGTCTTG(配列番号4)
mtDNA/gDNA=mtDNAの定量値(ng/μl)/gDNAの定量値(ng/μl)
皮膚に色素沈着が生じている被験者5名の、色素沈着部位及び近傍の非色素沈着部位の角質より上記1.の方法でDNAを得た。各DNAをリアルタイムPCRキット(Invitrogen社製、Platinum SYBR Green qPCR Super−Mix−UDG kit)を用いた定量PCR反応に供し、mtDNAを定量した。同時に、gDNAを定量し、規格化(ノーマライズ)した。尚、mtDNA及びgDNA量の測定に使用したプライマーは、上記2.の方法で用いたものを使用した。
ΔΔCt=(色素沈着部位のmtDNAのCt値―色素沈着部位のgDNAのCt値)―(近傍の非色素沈着部位のmtDNAのCt値―近傍の非色素沈着部位のgDNAのCt値)
(色素沈着部位のmtDNA/gDNA)/(近傍の非色素沈着部位のmtDNA/gDNA)=2−ΔΔCt
本発明の表皮ターンオーバーの評価結果から、被験者の皮膚の性状にあったスキンケアないしトリートメント方法を選択することが可能である。すなわち、スキンケアないしトリートメントを行う前後にmtDNA/gDNAを測定し、mtDNA/gDNAが増加すれば、表皮のターンオーバーが促進され、皮膚の新陳代謝が活性化されていることがわかる。また、データベースに含まれる炎症が生じた場合のmtDNA/gDNAに近い値であれば、そのスキンケアないしトリートメント方法はその被験者には炎症を誘導する刺激となりうる可能性があることがわかる。逆に、mtDNA/gDNAが低下すれば、表皮のターンオーバーは遅延しており、そのスキンケアないしトリートメント方法はその被験者には合っていないことがわかる。
Claims (9)
- 角質中のミトコンドリアDNAの含有量を測定することを特徴とする表皮ターンオーバーの評価を補助する方法。
- 角質中のミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率を測定することを特徴とする表皮ターンオーバーの評価を補助する方法。
- 表皮ターンオーバーの評価を補助する方法であって、
a)被検体の皮膚から獲得した角質を準備する工程と、
b)角質からDNAを抽出する工程と、
c)工程bで得られたDNA中のミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率を測定する工程と、
d)工程cで測定したミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率をデータベースと比較する工程とを備え、
データベースが、表皮ターンオーバーが正常な皮膚と異常な皮膚におけるミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率に関連したデータを含んでいる、
ことを特徴とする方法。 - 前記データベースが、紫外線暴露又は皮膚刺激性物質の接触により表皮ターンオーバーが亢進した皮膚におけるミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率に関連したデータを含んでいる請求項3に記載の方法。
- 前記データベースが、老化により表皮ターンオーバーが遅延した皮膚におけるミトコンドリアDNAとゲノムDNAの含有量の比率に関連したデータを含んでいる請求項3に記載の方法。
- 前記ミトコンドリアDNA及び/又はゲノムDNAの含有量を測定する工程が、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を用いてミトコンドリアDNA及び/又はゲノムDNAを増幅して行われる、請求項1〜5いずれかに記載の方法。
- 前記被検体の皮膚から獲得した角質を準備する工程が、テープストリップ法により皮膚から角質を剥離することによって行われる、請求項1〜6いずれかに記載の方法。
- 被験体の色素沈着部位に請求項1〜7のいずれかに記載の方法を実施して、色素沈着の治癒速度の評価を補助する方法。
- 被験体に対して、トリートメント手段を施す前及び後にそれぞれ、請求項1〜8のいずれかに記載の方法を実施し、得られた評価結果を比較することによって該トリートメント手段の有効性を評価することを特徴とする、皮膚に対するトリートメント手段の評価を補助する方法。
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