TWI541506B

TWI541506B - 皮膚壓力蓄積的評價方法

Info

Publication number: TWI541506B
Application number: TW102106660A
Authority: TW
Inventors: 榎本有希子; 高橋美奈子
Original assignee: 芳珂股份有限公司
Priority date: 2012-02-27
Filing date: 2013-02-26
Publication date: 2016-07-11
Also published as: TW201631319A; TW201337267A; JP2013210363A; JP2015052622A; JP5700705B2; JP6017524B2

Description

皮膚壓力蓄積的評價方法

本發明涉及人類皮膚的壓力蓄積量的測定方法。

人類皮膚時常與外界接觸，並受到各種刺激。其刺激的代表性例子為紫外線。紫外線即使於未在外觀上對肌膚造成太大變化的情況下，仍會誘發皮膚細胞的DNA斷裂或膠原蛋白的改質等，而成為皮膚老化的原因。紫外線係經常持續地對肌膚造成壓力(stress)。此外，對女性而言，洗臉、化妝等日常行為也會對皮膚造成刺激，這些刺激會作為潛在的壓力而蓄積於肌膚。而且，對於這些刺激(壓力)的抵抗力若會因某種原因而減少，即認為是敏感性肌膚。此種皮膚的外界刺激的蓄積量在本發明中稱為皮膚的壓力蓄積量。另一方面，敏感性肌膚是指雖無明顯的皮膚病變，但容易引起不利、有害的反應的肌膚。而且，此種敏感性肌膚的原因，據稱為當壓力的蓄積達到一定程度，肌膚的敏感性就會提高。此外，敏感性肌膚對外界刺激的抵抗力較健康肌膚低，可謂容易產生皮膚問題的肌膚。近年來，意識到敏感性肌膚的女性有增加的趨勢，在化妝品等方面也越來越期望有刺激更小的產品。

在化妝品的銷售現場，係由美容專家進行問診，評價肌膚壓力的蓄積狀況和是否為敏感性肌膚，從而推薦對肌膚造成的壓力(刺激)較小的化妝品。然而，近年來由於郵購銷售等化妝品專家不在場的銷售方法逐漸普及，因此，期望判定肌膚的壓力狀態，並且期望即使不是專家也能對敏感性肌膚的程度進行簡便地評價。此者若為可行，則即使不依靠專家的問診，也可藉由評價使用者肌膚的壓力狀態和是否為敏感性肌膚，來自行選擇適合的化妝品。此外，可簡單地選擇較適合使用者肌膚的化妝品、化學煥膚(chemical peeling)劑，藉此，可避免皮膚的炎症等肌膚問題、副作用，而可更加提高化妝品的護膚作用、化學煥膚的施行等的有益性。因此，人們正在尋求一種即使不依靠問診也能評價皮膚的外界刺激暴露過程(肌膚壓力的蓄積量)，並且客觀地判別是否為敏感性肌膚之方法。

在專利文獻1中係揭示在皮膚上塗佈化妝品原料，然後將剝離出的皮膚角質層回收並進行觀察，以評價皮膚的敏感性之方法。然而，該方法需對每種化妝品全都進行檢查，此外，無法評價使用者肌膚的壓力蓄積量。

在專利文獻2中係揭示在皮膚上塗佈如辣椒素(capsaicin)等刺激性物質，以評價是否為敏感性肌膚之方法。然而，使用如類辣椒素物質(Capsinoid)等刺激性強的物質的試驗方法，對受試者來說亦非佳者。

在專利文獻3中係揭示測定臉部角質層的鈣衛蛋白(calprotectin)的存在量，來評價是否為敏感性肌膚之方法。

巨噬細胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor；以下記為MIF)為炎症/免疫的介質(mediator)之一，其為控制巨噬細胞的移動，使巨噬細胞在炎症部位聚集，並提高吞噬功能的液態因子。已知MIF係參與以下炎症性疾病的病理過程而增加：慢性類風濕性關節炎、腎炎(非專利文獻1：Expert Opin Ther Targets,7,2,153-164,2003)、異位性皮炎(非專利文獻2：Biochem Biophys Res Commun,240,11,173-8,1997)、牛皮癬(非專利文獻3：B J Dermatol,141,1061-66,1999)、潰瘍性大腸炎、敗血症、接觸性皮炎(非專利文獻4：Eur J Immunol,33,1478-87,2003)、紫外線引起的炎症(非專利文獻5：J Invest Dermatol,112,2,210-15,1999)、遲發性過敏反應(Delayed type hypersensitivity)(非專利文獻6：Pro Natl Acad Sci USA,93,7849-54,1996)、急性/慢性炎症疾病(非專利文獻7：J End,179,15-23,2003)、關節炎、移植排斥反應、腫瘤生長、血管生成(Angiogenesis)、貧血、腦脊髓炎等。

[專利文獻]

專利文獻1：日本特開平10-295648號公報

專利文獻2：日本特開2004-067681號公報

專利文獻3：日本專利第4469762號公報

[非專利文獻]

非專利文獻1：Expert Opin Ther Targets, 7, 2, 153-164, 2003

非專利文獻2：Biochem Biophys Res Commun, 240, 11, 173-8, 1997

非專利文獻3：B J Dermatol, 141, 1061-66, 1999

非專利文獻4：Eur J Immunol, 33, 1478-87, 2003

非專利文獻5：J Invest Dermatol, 112, 2, 210-15, 1999

非專利文獻6：Pro Natl Acad Sci USA, 93, 7849-54, 1996

非專利文獻7：J End, 179, 15-23, 2003

如上所述，正期望有評價肌膚的壓力蓄積量，並客觀地評價是否為敏感性肌膚的方法。該檢測方法期望為並非以外科方式取出皮膚而對皮膚造成刺激等對使用者造成負擔的方法。本發明係期望不會對使用者造成負擔，評價肌膚的壓力蓄積量，並使樣本組中壓力蓄積量的相對位置明確。

本發明的課題在於提供一種測定皮膚的壓力蓄積量的方法。

本發明為以下構成。

(1)一種人類皮膚的壓力蓄積量的測定方法，其係藉由測定皮膚角質層的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)來進行。

(2)如(1)所述的方法，其中，壓力蓄積量的測定係藉由計算測定部位的皮膚的MIF量與預先測定的正常人類皮膚的MIF表達量的相對值來進行。

(3)如(1)或(2)所述的方法，其中係具備下述步驟：採集步驟，採集皮膚角質層；測定步驟，測定前述採集步驟所採集的角質層細胞之MIF表達量；和對比步驟，將前述測定步驟所測定的MIF表達量與健康肌膚的皮膚角質層之MIF表達量進行對比。

(4)如(1)或(2)所述的方法，其中係具備下述步驟：採集步驟，採集受試者的評價對象部位的角質層；測定步驟，測定前述採集步驟所採集的角質層之MIF表達量；和對比步驟，將前述測定步驟所測定的MIF表達量與具有健康肌膚的人的前述評價對象部位之角質層的MIF表達量進行對比。

(5)一種人類皮膚的壓力蓄積量的計算方法，其係將皮膚角質層的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的表達量與預先或同時測定的樣本組的皮膚之MIF表達量分布進行相對對比，來計算受試體在群組中的相對位置。

(6)一種敏感性肌膚的檢測方法，其係將皮膚角質層的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的表達量之多寡作為指標。

(7)如(6)所述的方法，其中，巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的表達量係藉由西方轉印法(western blotting method)來測定。

根據本發明的檢測方法，可藉由測定角質層之MIF表達量來瞭解肌膚的壓力蓄積量。此外，以該MIF表達量作為指標，可簡便地檢測肌膚是否為敏感性肌膚。另外，由於本發明的檢測方法以膠帶剝離法等簡便的操作方法來採集評價試料，所以受試者的負擔較少，任何人均可簡單地進行評價。此外，因為其為生化試驗方法，由任何人進行測定皆會得到相同的結果，因此不需如以往般藉由與專家面談的方式進行諮詢。

第1圖表示照射日光所造成的壓力負荷蓄積殘留於角質層的圖。

第2圖表示根據日曬(壓力)的程度，MIF的表達量增加並蓄積於肌膚的圖。

第3圖表示日曬所引起的發紅與MIF蓄積具有相關性的圖。

第4圖為用十二烷基硫酸鈉(SDS)洗淨健康肌膚來施予壓力時，確認到MIF蓄積於角質層的圖。

第5圖為測定以丙酮/醚洗淨健康肌膚時的經皮失水量(TEWL；transepidermal water loss)之經時變化的圖表。

第6圖為測定以丙酮/醚洗淨健康肌膚時的MIF蓄積量之經時變化的圖表。

第7圖為表示臉頰、前臂部、臀部的皮膚角質層的MIF蓄積量的圖。

第8圖為樣本組的MIF表達量的直方圖。

第9圖為表示自查(self-enumeration)所得之肌膚的敏感性與臉頰角質層的MIF蓄積量具有相關性的圖。

以下，詳細說明本發明。

本發明提到的皮膚的壓力蓄積量，是指由對人類皮膚的外因性/內因性的刺激引起的障礙之蓄積量。例如，作為由人類皮膚因外因性的刺激而引起的皮膚障礙，可列舉例如：由照射紫外線引起的皮膚障礙、由表面活性劑引起的皮膚障礙、由乾燥引起的皮膚障礙、由物理性刺激(拍打、擠壓、抓撓、拉扯等)引起的皮膚障礙、由致敏性物質(花粉、化學物質等)引起的炎症、由外源性(病原性)微生物的毒素、組成成分等引起的炎症。作為由人類皮膚的內因性的刺激而引起的皮膚障礙，可列舉由全身性的異常(營養失調、脫水症狀、發熱、激素分泌異常等)引起的內因性氧化壓力而引起的皮膚障礙。人類皮膚的壓力蓄積量是指這些中的一種或者多種所複合的皮膚障礙的蓄積量。

此外，壓力蓄積的肌膚表現出較強的敏感性肌膚的性質，其對外界刺激的抵抗力顯著降低，容易發生皮膚問題的可能性較高。作為敏感性肌膚的症狀存在以下情況：使用化妝品會泛紅或感到瘙癢；高清涼感的化妝品會與肌膚不合；含有乙醇的化妝品會與肌膚不合；含有香水、香料的化妝品會與肌膚不合；會因按摩等物理性刺激而使肌膚的狀態變差；即使是在平常生活中照到紫外線，肌膚就容易泛紅、刺痛；出汗後會有瘙癢感；與化妝品或清潔劑不合而造成泛紅或瘙癢。由於這些皮膚問題反復發作，發生皮膚老化現象(皺紋、色斑、彈性降低等)的可能性增高。

本發明的檢測方法的特徵在於以皮膚角質層的MIF表達量之多寡作為指標。

MIF是如上所述的免疫介質中的一種，係作為因異位性皮炎、或因由紫外線日曬引起的刺激而促進表皮細胞增殖的信號因子來發揮作用。本發明發現該信號因子會蓄積於角質層，可成為皮膚壓力蓄積的指標。

本發明中的敏感性肌膚是指雖無明顯的皮膚病變，但卻容易引起不利、有害的反應的肌膚。此外，也可以稱之為對於外界刺激的抵抗力較健康肌膚低且容易發生皮膚問題的肌膚。另一方面，健康肌膚是指不會表現出如上所述之敏感性肌膚的性質而為健康的正常肌膚。在敏感性肌膚中，已知會有經皮失水量 (TEWL)增高且高頻電導率(角質層水分量)降低等的趨勢。此外，敏感性肌膚會有發生斑疹或肌膚粗糙的情況。

角質層是位於皮膚最上層的組織，具有抵禦來自體外的異物或刺激而保護皮膚的功能。

本發明中的評價對象部位，只要是可取得的角質層部分，即可包含任意部位，主要部位可列舉如面部、頸部、上臂部。可依照以往的方法，得到取自這些部位的皮膚的角質層。然而，如前所述，由於以外科方式取出皮膚等方法會對使用者造成負擔，故以膠帶剝離、刮擦等可簡便地得到角質層的方法較佳。

如此準備的各試樣之MIF的表達量，可藉由以往已知的方法進行測定。例如，可依據與抗MIF的抗體的反應，使用酶素免疫分析法(enzyme immunoassay)、放射免疫分析法(radioimmunoassay)、西方轉印法等方法。

從各試樣中，將MIF經由各種本身即為已知的生化方法，例如凍融法(freezing and thawing method)、超聲波震碎法、均質法等來製備可溶性區分(soluble fraction)。萃取後，迅速地進行測定。

由於蓄積了壓力的肌膚或敏感性肌膚的角質層的MIF表達量係顯著較健康肌膚高，因此以角質層的MIF表達量之多寡作為指標，即可簡便地評價壓力蓄積量或肌膚是否為敏感性肌膚。本發明所使用的角質層，可使用所謂膠帶剝離法之藉由角質膠帶而僅採集角質層的表層部分的簡單的方法來進行採集。此外，本發明可在不對皮膚造成紫外線或化學物質等刺激下測定MIF的表達量。因此，可不對使用者造成負擔來評價使用者的肌膚是否為敏感性肌膚。特別是可簡單地選擇更適合使用者的肌膚的化妝品或化學煥膚劑，藉此，可避免皮膚的炎症等肌膚問題或副作用，而更加發揮化妝品帶來的護膚作用或有益性。

本發明的檢測方法由下述步驟組成：採集步驟，採集角質層；測定步驟，測定前述採集步驟所採集的角質層之MIF表達量；和對比步驟，將前述測定步驟所測定的MIF表達量與健康肌膚的角質層之MIF表達量進行對比。此外，本發明的檢測方法係由下述步驟組成：採集步驟，採集角質層；測定步驟，測定前述採集步驟所採集的角質層之MIF表達量；和對比步驟，將前述測定步驟所測定的MIF表達量與樣本組的角質層之MIF表達量分布進行對比。以下，說明此種檢測方法。

首先，將如上述所測定的MIF表達量與健康肌膚的角質層之MIF表達量進行對比。此外，也可測定受試者的某一評價對象部位的角質層之MIF表達量，將所測定的MIF表達量與具有健康肌膚的人的同一評價對象部位的角質層之MIF表達量進行對比。具有健康肌膚的人的角質層的MIF表達量，係藉由使用來自多名具有健康肌膚的人的數據的平均值，而可進行更為客觀的評價。

或者，也可測定受試者的某一評價對象部位的角質層之MIF表達量，將所測定的MIF表達量與樣本組的同一評價對象部位的角質層之MIF表達量分布進行對比。藉由使用樣本組的MIF表達量的分布，可進行更為客觀的評價。

如此對比後的結果，當所測定的MIF表達量顯著地大於健康肌膚的MIF表達量時，或是相較於樣本組的MIF表達量分布而判斷MIF表達量大時，即評價為壓力的蓄積大，並且可評價為屬於敏感性肌膚的可能性高。該健康肌膚的試樣可從測定MIF者採集，也可從與測定MIF者為不同者採集。此外，該樣本組以統計上有效的規模來進行隨機抽取為佳，但根據不同目的而例如按照性別、年齡來抽取樣本組亦為佳。

此外，當受試者的某一評價對象部位的角質層之MIF表達量顯著地大於具有健康肌膚的人的同一評價對象部位的角質層之MIF表達量時，或是相較於樣本組的同一評價對象部位的角質層之MIF表達量分布而判斷MIF表達量大時，也評價為壓力的蓄積大。此外，當此數值顯著高時，係評價為具有敏感性的肌膚。

亦即，當評價為壓力蓄積高時，可依據所測定的MIF表達量的程度，而評價壓力蓄積量的程度。當所測定的MIF表達量相較於健康肌膚的MIF表達量、或者樣本組的表達量的分布，而被判斷為顯著多時，該肌膚表現出較強的敏感性肌膚的性質，並且其對外界刺激的抵抗力相較於健康肌膚或樣本組的平均值係顯著為低，極易發生皮膚問題的可能性高。此外，當所測定的MIF表達量相較於健康肌膚的MIF表達量而僅為少量增加時，或是所測定的MIF表達量相較於樣本組的MIF表達量分布係被判斷為略大於平均值時，該肌膚可被評價為：雖然壓力的蓄積量大於樣本組的平均值，但仍未達到所謂對外界刺激的抵抗力低而會發生皮膚問題的敏感性肌膚的程度。

以下，說明具體的實施例，但是本發明並不限定於下述實施例。

(實施例) (實驗1)由照射紫外線引起的皮膚壓力蓄積量的試驗 (1)照射日光(紫外線)引起的壓力負荷

以12名健康的男女作為受試者而實施試驗。

從照射日光前的臉頰部皮膚採用膠帶剝離法(角質層膠帶：Asahi Techno Lab Co.,LTD製)來剝離採集角質層。採集後，讓受試者在體育觀賽或在海邊等非連續地照射1至5天比平時強的日光(關於日曬的程度，係不控制日光的照射強度、時間)。在照射日光後第1至2天、第3至4天、第7至8天，以同樣操作從臉頰部皮膚採用膠帶剝離法來剝離採集角質層。此外，採用皮膚顏色測定裝置CM-508D(MINOLTA公司)測定日光照射後第1至2天的日曬程度。

(2)皮膚角質層中的蛋白質萃取方法

在每一張角質層膠帶分別加入500μl的T-PER組織蛋白萃取試劑(T-PER Tissue Protein Extraction Reagent)(Thermo Scientific製)，再加入約0.8g的玻璃珠進行渦旋25分鐘，將角質層破碎後，從角質層萃取蛋白質。

(3)皮膚角質層蛋白質的定量

將回收的蛋白質溶解液的蛋白質的量採用Pierce BCA蛋白質定量檢測試劑(Pierce BCA Protein Assay Kit)(Thermo Scientific製)進行定量。

(4)MIF的定量

使用human MIF Duo set(R&D systems)，根據常規方法從上述破碎液測定MIF的量。

(5)結果

a.由日光引起的日曬與角質層中的MIF量的變化

角質層中之照射日光後每單位角質層蛋白質的MIF的量(以下稱為MIF量)的變化係如第1圖所示。可確認到照射日光的影響係在7至8天後仍殘留於角質層中。

b.日曬的程度與角質層中的MIF量的關係

根據皮膚顏色測定的結果，將日曬的程度分為以下2組，確認其與MIF量的關係。

日曬反應強的組(皮膚變黑)：△L*(試驗後-試驗前)<-1

日曬反應弱的組(皮膚無變化)：△L*(試驗後-試驗前)≧-1

角質層中之照射日光後MIF量的變化如第2圖所示。由第2圖可確認到L*值降低(皮膚變黑)的日曬反應強的組與日曬反應弱的組相比，MIF的表達量較高。此外，MIF的表達量在日光照射後第7天仍顯著為高。

c.由日曬引起的發紅的程度與角質層中MIF量的關係

將受試者分為日光照射後出現炎症(發紅)者與未發紅者2組時，角質層中MIF量的變化如第3圖所示。可知MIF量至照射日光後第7天為止顯示出較高值，照射日光所造成的影響係殘留至第7天。

此外，發紅提高了MIF值。

由以上結果，可確認到日光照射的影響在經過7至8天後仍殘留於皮膚，並作為壓力而蓄積。

(實驗2)由以表面活性劑洗淨而引起的皮膚壓力蓄積量的試驗 (1)藉由十二烷基硫酸鈉進行的嚴苛洗淨試驗

將具有健康肌膚的9名男性的皮膚用10%十二烷基硫酸鈉(SDS)水溶液(對照組：用精製水洗淨)洗淨，以對皮膚造成壓力。

在前臂內側部分塗佈0.2g的10%SDS水溶液，用手指來回塗佈100次後，用37℃的精製水500ml沖洗。該操作係以5次/天實施2天。

(2)樣品採集方法

與實驗1同樣地藉由角質層膠帶(Asahi Techno Lab Co.,LTD製)從前臂內側部分的皮膚採集角質層。在嚴苛洗淨試驗結束後第4天，讓受試者每人使用30張角質層膠帶在同一洗淨位置進行角質層採集，來採集角質層的深層試樣。

(3)皮膚角質層中的蛋白質萃取方法

與實驗1以同樣方式，在每1張角質層膠帶分別加入500μl的T-PER組織蛋白萃取試劑(Thermo Scientific製)，再加入約0.8g的玻璃珠並進行渦旋25分鐘後，使角質層破碎，從角質層萃取蛋白質。

(4)皮膚角質層蛋白質的定量

採用Pierce BCA蛋白質定量檢測試劑(Thermo Scientific製)對蛋白質溶解液的蛋白質的量進行定量。

(5)MIF的定量

使用human MIF Duo set(R&D systems)，根據規定方法從上述破碎液測定MIF量。

(6)結果

MIF量的分析結果如第4圖所示。

如SDS的表面活性劑若浸透皮膚，則被認為是刺激，而可知MIF係蓄積在角質層中。因此，可確認到藉由測定角質層的MIF量，可測定皮膚深層的壓力過程。

(實驗3)由有機溶劑引起的皮脂去除和皮膚壓力蓄積量的試驗 (1)由丙酮/二乙基醚溶液引起的皮脂溶出和壓力蓄積試驗

將具有健康肌膚的3名女性的皮膚用丙酮/二乙基醚等量混合液洗淨，除去皮脂，造成皮膚壓力。

將上下開口的玻璃製漏斗(直徑3cm)用橡膠帶固定在前臂內側，用移液器(pipetman)將丙酮(和光純藥工業股份有限公司，特級)/二乙基醚(和光純藥工業股份有限公司，特級)等量混合液向漏斗內注入2ml，將雙臂放在振動器上面處理20分鐘。接著，用滴管(dropper)除去漏斗內的丙酮/二乙基醚等量混合液後，注入自來水，將雙臂放在振動器上面處理5分鐘(脫脂處理)。第二天，對同一部分再次進行脫脂處理，作成乾燥皮膚。此外，作為對照，用自來水進行同樣處理的操作。藉由脫脂處理使皮膚的保濕性降低，皮膚在皮脂恢復之前係因外部空氣而被連續地曝於壓力中。

(2)持續性壓力存在的確認

在上述處理的前1天、第1天、第5天、第8天、第12天、第16天測定經皮失水量(TEWL)，來確認皮膚的壓力狀態。TEWL係採用Keystone公司的Delfin，並將每2次測定的平均值用於解析。藉由與對照組的對比，TEWL高時評價為壓力蓄積的肌膚。

(3)MIF測定樣品採集方法

與實驗1同樣地藉由角質層膠帶(Asahi Techno Lab Co.,LTD製)從前臂內側部分的皮膚採集角質層。在洗淨試驗結束後第4天，受試者每人使用4張角質層膠帶，向深層方向在同一洗淨位置進行角質層採集，採集角質層的深層試樣。

(4)皮膚角質層中蛋白質的萃取方法

與實驗1同樣地，在每1張角質層膠帶分別加入500μl的T-PER組織蛋白萃取試劑(Thermo Scientific製)，再加入約0.8g的玻璃珠並進行渦旋25分鐘後，使角質層破碎，從角質層萃取蛋白質。

(5)皮膚角質層蛋白質的定量

採用Pierce BCA蛋白質定量檢測試劑(Thermo Scientific製)將蛋白質溶解液的蛋白質的量進行定量。

(6)MIF的定量

使用human MIF Duo set(R&D systems)，根據規定方法從上述的破碎液測定MIF量。

(7)結果

a.壓力的持續狀態

TEWL的經時變化如第4圖所示。TEWL值在丙酮/二乙基醚洗淨後急劇上升，在經過16天後與對照組相比仍顯示出較高的值。這意味著皮膚的皮脂去除後的影響係作為壓力而殘留了16天。

b. MIF量的分析結果

MIF量的分析結果如第5圖所示。

在剛剛進行了皮脂去除操作後的MIF值雖與對照組沒有太大差異，但從第5天開始上升，經過16天後仍顯示出高的值。可知這是由於皮脂去除而導致外界刺激被更強地感知，從而使角質層蓄積MIF。因此，可確認到藉由測定角質層的MIF量，可測定皮膚深層的壓力過程。

(實驗4)測定常受到來自外界壓力的面部與較未受到壓力的前臂部、臀部皮膚的MIF，評價蓄積於皮膚的壓力的程度。試驗方法 (1)試樣的採集

藉由膠帶剝離法，從30名具有健康肌膚的男女的臉頰、前臂、臀部採集角質層樣品。

(2)MIF的測定

與實驗1同樣地處理、萃取蛋白質，並測定蛋白質的量與MIF量，每單位蛋白質的量之MIF的量如第7圖所示。又，標註時係用平均值±S.E.表示。

由第7圖的結果，可知MIF的測定結果為，在日常壓力高的面部(臉頰)特別高，較少露出的臀部則顯著低。由以上結果可明瞭，MIF可作為評價皮膚的日常壓力的指標。

(實驗5)測定樣本組的角質層的MIF量，並作成直方圖。試驗方法 (1)試驗試樣的採集

以隨機抽選的458名女性作為對象，藉由膠帶剝離法從臉頰採集角質層樣品。樣品係從1個部位採集1張。

(2)MIF的測定

與實驗1同樣地處理、萃取蛋白質，測定蛋白質的量與MIF量，並以每單位蛋白質的量的MIF量來進行解析。樣本組之角質層MIF量的直方圖如第8圖所示。

如第8圖所示，MIF的表達量係分布於從0.1pg/μg總蛋白質至超過2pg/μg總蛋白質的值為止的廣範圍。平均值為0.46pg/μg總蛋白質。可將平均值0.46pg/μg總蛋白質以上的值判斷為MIF表達量大，而由於0.3pg/μg總蛋白質的累積頻率為約50%，所以也可將超過0.3pg/μg總蛋白質的值判斷為MIF表達量大。總之，可判斷為MIF的表達量越大，則人類皮膚的壓力蓄積量越大。

(實驗6)關於人類皮膚的壓力蓄積量的問卷調查結果與MIF量的對比

從實驗5的樣本組中隨機抽取195名，實施關於人類皮膚的壓力蓄積量的問卷調查，將其結果與MIF的表達量進行對比。

(1)肌膚敏感性的問卷調查

讓受試者選擇該名受試者的肌膚是「非敏感」、「略為敏感」、「敏感」這3種類中的任一種。

對受試者提示下述敏感性的10個要素，讓受試者自行判斷屬於非敏感(不敏感)、略為敏感、敏感中的任一種。

1 使用化妝品曾泛紅或感到瘙癢

2 高清涼感(涼爽性)的化妝品曾與肌膚不合

3 含有乙醇的化妝品曾與肌膚不合

4 含有香水、香料的化妝品曾與肌膚不合

5 由於肌膚脆弱而慎選化妝品

6 曾因按摩等物理性刺激而使肌膚的狀態變差

7 即使是在平常生活中，照到紫外線肌膚就容易泛紅、刺痛

8 出汗後曾出現瘙癢感

9 曾與化妝品或清潔劑不合而造成泛紅或瘙癢

10 有因化妝品造成的肌膚問題而就醫的經驗

預測選擇“敏感”者的人類皮膚的壓力蓄積量為高，選擇“非敏感”者的人類皮膚的壓力蓄積量為低。

(2)肌膚敏感性的問卷調查結果與MIF量的關係

上述(1)的肌膚敏感性的問卷調查結果(非敏感74名、略為敏感101名、敏感20名)與MIF量的關係如第9圖所示。

回答自己的肌膚為非敏感者的MIF表達量的平均值為0.5pg/μg總蛋白質(SD 0.6、SE 0.1)，回答略為敏感者的MIF表達量的平均值為0.4pg/μg總蛋白質(SD 0.4、SE 0.0)。另一方面，回答自己的肌膚為敏感者的MIF表達量為0.8pg/μg總蛋白質(SD 0.8、SE 0.2)。自查肌膚為敏感的人的MIF表達量與其他人相比明顯為高。

由此表明，藉由測定MIF表達量可容易地檢測是否為敏感性肌膚。

Claims

一種人類皮膚的壓力蓄積的評價方法，其係測定以非侵入式方式採集之皮膚角質層的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的表達量，將該表達量與預先測定的健康肌膚的MIF表達量進行對比，當判斷所採集之皮膚的MIF表達量較大時，評價為有壓力蓄積於皮膚中。
如申請專利範圍第1項所述的壓力蓄積的評價方法，其係藉由計算測定部位的皮膚之MIF量與預先測定的健康肌膚之MIF表達量的相對值來進行壓力蓄積的評價。
如申請專利範圍第1項或第2項所述的壓力蓄積的評價方法，其係具備下述步驟：採集步驟，以非侵入式方式採集皮膚角質層；測定步驟，測定前述採集步驟所採集的角質層細胞之MIF表達量；和對比步驟，將前述測定步驟所測定的MIF表達量與健康肌膚的皮膚角質層之MIF表達量進行對比。
如申請專利範圍第1項或第2項所述的壓力蓄積的評價方法，其係具備下述步驟：採集步驟，以非侵入式方式採集受試者的評價對象部位的角質層；測定步驟，測定前述採集步驟所採集的角質層之MIF表達量；和對比步驟，將前述測定步驟所測定的MIF表達量與具有健康肌膚的人的前述評價對象部位之角質層的MIF表達量進行對比。
一種人類皮膚的壓力蓄積的評價方法，其係測定以非侵入式方式採集之皮膚角質層的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的表達量，將該表達量與預先或同時測定的樣本組之皮膚的MIF表達量分布進行相對對比，當判斷所採集之皮膚角質層的MIF表達量較大時，評價為有壓力蓄積於皮膚中。