JP5435375B2

JP5435375B2 - セスキテルペン誘導体の用途

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Publication number: JP5435375B2
Application number: JP2011526796A
Authority: JP
Inventors: パク，テ−スン; キム，ハウン
Original assignee: クァンドンファームカンパニーリミテッド
Priority date: 2008-09-11
Filing date: 2008-10-20
Publication date: 2014-03-05
Anticipated expiration: 2028-10-20
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Description

本発明は、イトスギ属抽出物またはセスキテルペン誘導体を含む高脂血症、脂肪肝、糖尿または肥満の予防および治療用組成物に関するものである。

生活スタイルおよび生活環境の変化により現代人の内臓脂肪型肥満が増加し、糖尿病、高血圧、脂質代謝異常、インスリン抵抗性などを伴うメタボリックシンドロームの発病が急増している。これらの疾患は相互間の発生危険を増加させ、老化、ストレス、および免疫機能低下などの多元的な生体代謝変化に関わる共通疾患である。

２００５年国民健康・栄養調査によれば、２０歳以上の韓国成人の３２パーセントが肥満であるという結果が出た（成人男性の３５．２％、女性の２８．３％）。韓国人の小児肥満発病率も最近は急増しており、２００５年には小学生の１１．３％、中学生の１０．７％、高校生の１６％は肥満と分類され（ＢＭＩ≧２５ｋｇ／ｍ^２）、過体重（ＢＭＩ≧２３ｋｇ／ｍ^２）または肥満青少年の１７％がメタボリックシンドロームであった。

このような過体重および肥満人口の増加は慢性疾患有病率の増加に繋がるが、その例として、２００５年、３０歳以上の韓国人の高血圧（男性３０．２％、女性２５．６％）、糖尿病（男性９．０％、女性７．２％）、また高コレステロール血症有病率（男性７．５％、女性８．８％）ともに他の国に比べ、とても高く現れている。

肥満による社会経済的な損失は、２００１年現在年間１兆１７億ウォンと推定される。従って、政府は成人肥満率を２０％未満、青少年肥満率を１５％未満に減らすことを２０１０年国民健康増進の主要目標として設定し、目標達成のための試行戦略として、肥満に対する正確な定義や測定方法を図ることにしたという事実がある。

肥満は食事療法、運動療法と行動修正療法を並行して行うことにより最高の治療効果を得ることができるが、このような方法は時間と努力がかなり要求されるため実行が難しく、肥満治療剤、またはダイエット製品が多く利用されている。しかしながら、現在肥満治療剤として利用されているオルリスタットは、脂肪便、腸内ガス発生、腹部膨満感などの副作用があり、シブトラミンは頭痛、口渇、食欲不振、不眠、便秘などの副作用が知られている。また、オルリスタットは、ビタミンＥとビタミンＤの吸収を抑え、フェンテルミンとシブトラミンは心拍数の増加、心悸亢進或いは目眩を招来するという副作用がある。

このように合成医薬品の副作用と慢性疾患の克服に西洋医学には限界があり、生薬剤に対する価値が注目されている。よって、本発明者らは自生植物から肥満を抑える活性物質を探索する過程で、シダレイトスギ（柏木Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｆｕｎｅｂｒｉｓ）に注目するようになった。

シダレイトスギは、イトスギ属に属する常緑針葉高木として、中国の中部および南西部からベトナムまで主に暖かい地域と海抜２０００ｍ以下の地域に分布する。シダレイトスギの学名はＣｕｐｒｅｓｓｕｓｆｕｎｅｂｒｉｓであるが、Ｃｈａｍａｅｃｙｐｒｉｓｆｕｎｅｂｒｉｓとも同じ植物であり、一般名はＣｈｉｎｅｓｅｗｅｅｐｉｎｇｃｙｐｒｅｓｓである。中国では柏木と呼ばれていて韓国ではクプレッサスフネブリスと呼ばれる。シダレイトスギは、砂や粘土のような強い酸性の土壌でよく育ち、水はけのよい降水量の少ない乾燥した地域でよく育ち、陰地ではよく育たない。シダレイトスギは直径２ｍ、高さ２０〜３５ｍまで成長できる巨木に属する。葉は最長５ｍｍで、鱗状で枝の下に吊り下がって育つ。

中国では、シダレイトスギの医学的用途としては、痔または月経過多の治療に使われてきた（Ｊ．Ａ．ＤｕｋｅａｎｄＥ．Ｓ．Ａｙｅｎｓｕ，ＭｅｄｃｉｎａｌＰｌａｎｔｓｏｆＣｈｉｎａ，ｐｐ．７０５，ＲｅｆｅｒｅｎｃｅＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９８５）。ベトナムではシダレイトスギを香りの製造、エッセンシャルオイル原料、または、石鹸とシャンプーの香料として使ってきた（ＬｕｕａｎｄＴｈｏｍａｓ，２００４．ｐ．２０−２２，ＣｏｎｉｆｅｒｓｏｆＶｉｅｔｎａｍ，ＤａｒｗｉｎＩｎｉｔｉａｔｉｖｅ）。水蒸気の蒸留から抽出したシダレイトスギの精油成分は、香りの原料として多く使われてきているが、葉にはモノテルペン（ｍｏｎｏｔｅｒｐｅｎｅｓ）系列の成分が多い反面、木質部にはセスキテルペンが主流である。セスキテルペンはイソプレン（Ｃ_５Ｈ_８）３個が生合成となる化合物であり、Ｃ_１５Ｈ_２４が基本構造である。セスキテルペンはリング（ｒｉｎｇ）の個数が０、１、２、または３個からなるが、シダレイトスギには主に３個のリングを有するセスキテルペンが主流をなしている。シダレイトスギの木質部に含まれたセスキテルペンの種類ではツヨプセン（ｔｈｕｊｏｐｓｅｎｅ，２９．９％）、α−セドレン（ａｌｐｈａ−ｃｅｄｒｅｎｅ，２６．４％）、β−セドレン（ｂｅｔａ−ｃｅｄｒｅｎｅ，９．２％）、セドロール（ｃｅｄｒｏｌ，９．６％）、ウィッドロール（ｗｉｄｄｒｏｌ，９．５％）、α−フネブレン（ａｌｐｈａ−ｆｕｎｅｂｒｅｎｅ，０．７％）、β−フネブレン（ｂｅｔａ−ｆｕｎｅｂｒｅｎｅ，０．２％）、酢酸セドリル（ｃｅｄｒｙｌａｃｅｔａｔｅ，０．１％）などが報告されている（Ｄｕｑｕｅｓｎｏｙなど、２００６，ＦｌａｖｏｕｒａｎｄＦｒａｇｒａｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ，２１：４５３−４５７；Ａｄａｍｓ，１９９１，ＭｏｄｅｒｎＭｅｔｈｏｄｓｏｆＰｌａｎｔＡｎａｌｙｓｉｓＮｅｗＳｅｒｉｅｓ，ｖｏｌ．１２，ｐｐ．１５９−１７３）。

また、前記シダレイトスギの他にもマクナブイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｍａｃｎａｂｉａｎａ；ＬａｕｒｅｎｃｅＧ．Ｃｏｏｌ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５８（６）：９６９−９７２（２００１））、クプレッサスノートカテンシス（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｎｏｏｔｋａｔｅｎｓｉｓ；Ｅｒｄｔｍａｎ，Ｈ．ｅｔａｌ．、ＡｃｔａＣｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．、１１：１１５７−１１６１（１９５７））、クプレッサスセンペルヴィレンス（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ；ＳｅｙｙｅｄＡｈｍａｄＥｍａｍｉｅｔａｌ．、ＩｒａｎｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２（２）：１０３−１０８（２００６））、クプレッサスマクロカルパ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｍａｃｒｏｃａｒｐａ；Ｓｒｉｋｒｉｓｈｎａｅｔａｌ．、ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，３７（１７）：２８５５−２８６０（２００７））、クプレッサスバーケリー（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｂａｋｅｒｉ；Ｋｏｏｎ−ＳｉｎＮｇｏｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ．１，１８９−１９４（２０００））等、イトスギ属に属する多くの種の植物がセスキテルペン類を含んでいることが明らかにされた。

３個のリングを有するセスキテルペン類は、有機合成法で多様な誘導体が合成されるが、その大部分が半合成で誘導体を合成する。代表的な合成、または半合成セスキテルペン類にはセドレンエポキシド（ｃｅｄｒｅｎｅｅｐｏｘｉｄｅ，Ｃ_１５Ｈ_２４Ｏ）、ギ酸セドリル（ｃｅｄｒｙｌｆｏｒｍａｔｅ，Ｃ_１６Ｈ_２６Ｏ_２）、メチルセドリルエーテル（ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｅｔｈｅｒ，Ｃ_１６Ｈ_２８Ｏ）、クロベン（ｃｌｏｖｅｎｅ，Ｃ_１５Ｈ_２４）、ネオクロベン（ｎｅｏｃｌｏｖｅｎｅ，Ｃ_１５Ｈ_２４）、８（１５）−セドレン−９−オール（８（１５）−ｃｅｄｒｅｎ−９−ｏｌ，Ｃ_１５Ｈ_２４Ｏ）、サチベン（ｓａｔｉｖｅｎｅ，Ｃ_１５Ｈ_２４）、エピセドロール（ｅｐｉｃｅｄｒｏｌ，Ｃ_１５Ｈ_２６Ｏ）、メチルセドリルケトン（ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｋｅｔｏｎｅ，Ｃ_１７Ｈ_２６Ｏ）およびセドレノール（ｃｅｄｒｅｎｏｌ，Ｃ_１５Ｈ_２４Ｏ）等がある。

米国特許第７０７１１９５号は、ノイロペプチドＹＹ５のリガンド作用をするアミンおよびアミド誘導体を利用し、肥満を治療する方法が開示されている。米国特許第７０２２７２２号は糖尿、高脂血症、または肥満を治療するためのチアゾリジンジオン類似体を開示している。

米国特許第６９８７１３１号は、フェニルアセチルグルタミン、フェニルアセチルイソグルタミンまたはフェニル酢酸を含む高脂血症治療用組成物を開示している。米国特許第６９４２９６７号は動脈硬化症、高脂血症、肥満および糖尿病治療向けのａｐｏｂｅｃ−１蛋白質を開示している。

本明細書の全体を通して多数の論文および特許文献が参照され、その引用が表示されている。引用された論文および特許文献の開示内容は、その全体として本明細書に参考として挿入され、本発明が属する技術分野の水準および本発明の内容がより詳しく説明される。

米国特許第７，０７１，１９５号米国特許第７，０２２，７２２号米国特許第６，９８７，１３１号米国特許第６，９４２，９６７号

本発明者らは、抗肥満、抗脂血、および／または抗糖尿などの活性を有する天然物質を開発しようと努力した。その結果、イトスギ属（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ）植物のシダレイトスギ（ＣｕｐｒｅｓｓｕｓｆｕｎｅｂｒｉｓまたはＣｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓｆｕｎｅｂｒｉｓ）抽出物およびシダレイトスギの抽出物から分離したセスキテルペン誘導体、またこれら誘導体と構造が類似した合成セスキテルペンが、前記の活性を有するという事実を確認することによって本発明を完成した。

したがって本発明の目的は、セスキテルペン誘導体を有効性分として含む高脂血症、脂肪肝、糖尿、肥満の予防または治療用組成物を提供することにある。

本発明の他の目的は、前記活性を有するセスキテルペン誘導体をイトスギ属植物から分離する方法を提供することにある。

本発明のさらに他の目的は、高脂血症、脂肪肝、糖尿、肥満の予防または治療方法を提供することにある。

本発明のさらに他の目的および利点は、下記の発明の詳細な説明、請求範囲、および図面によってより明確になる。

本発明の一様態によれば、セスキテルペン誘導体を有効成分として含む高脂血症、脂肪肝、糖尿または肥満の予防、或いは治療用組成物を提供する。セスキテルペン誘導体は下記の化１、２または３の構造を有する。

前記化学式でＲ_１は、水素、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキルまたは−ＣＯ−Ｒ_６で、Ｒ_６は水素またはＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、Ｒ_２は水素、ヒドロキシまたはＣ_１−Ｃ_３アルキルで、Ｒ_１およびＲ_２は結合しあってエポキシドを形成することができるものであり、Ｒ_３は水素、ヒドロキシ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、−Ｏ−ＣＯ−Ｒ_７またはＣ_１−Ｃ_３アルコキシで、Ｒ_７は水素またはＣ_１−Ｃ_３アルキルで、Ｒ_４は水素、ヒドロキシまたはＣ_１−Ｃ_３アルコキシであり、Ｒ_５は水素、ヒドロキシまたはＣ_１−Ｃ_３アルコキシで、実線および点線からなる二重線は単一結合または二重結合を示し、リング構造内の実線および点線からなる二重線が二重結合の場合、Ｒ_２は水素、ヒドロキシまたはＣ_１−Ｃ_３アルキルで、Ｒ_２の隣の実線および点線からなる二重線が二重結合の場合Ｒ_２はＣＨ_２で、Ｒ_２がメチル基でＲ_３がヒドロキシで、Ｒ_５が水素の場合Ｒ_４は水素ではない。

本発明の他の様態によれば、本発明は前記セスキテルペン誘導体を含む組成物を投与対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与する段階を含む高脂血症、脂肪肝、糖尿、肥満の予防または治療方法を提供する。

本発明者らは、抗肥満、抗高脂血、および／または抗糖尿などの活性を有する天然物質を開発しようと努力した。その結果、イトスギ属植物のシダレイトスギ抽出物、およびシダレイトスギの抽出物から分離したセスキテルペン誘導体、またこれらの誘導体と構造が類似した合成セスキテルペンが、前記の活性を有するという事実を発見した。

本発明の好ましい実施例によれば、前記Ｒ_１は水素、ヒドロキシまたは−ＣＯ−Ｒ_６で、Ｒ_６はＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、Ｒ_２はヒドロキシまたはＣ_１−Ｃ_３アルキルで、Ｒ_１およびＲ_２は結合しあってエポキシドを形成することができ、Ｒ_３はヒドロキシ、Ｃ_１−Ｃ_３アルキル、−Ｏ−ＣＯ−Ｒ_７またはＣ_１−Ｃ_３アルコキシで、Ｒ_７は水素またはＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、Ｒ_４は水素またはヒドロキシで、Ｒ_５は水素またはヒドロキシで、実線および点線からなる二重線は単一結合または二重結合を示し、リング構造内の実線および点線からなる二重線が二重結合の場合、Ｒ_２はＣ_１−Ｃ_３アルキルであり、Ｒ_２の隣の実線および点線からなる二重線が二重結合の場合、Ｒ_２はＣＨ_２で、Ｒ_２がメチル基で、Ｒ_３がヒドロキシで、Ｒ_５が水素の場合、Ｒ_４は水素ではない。

本発明の好ましい実施例によれば、前記Ｒ_１は水素、ヒドロキシまたは−ＣＯ−ＣＨ_３で、Ｒ_２はヒドロキシまたは−ＣＨ_３であり、Ｒ_１およびＲ_２は結合しあってエポキシドを形成できるものであり、Ｒ_３はヒドロキシ、−ＣＨ_３，−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ_３または−Ｏ−ＣＨ_３であり、Ｒ_４は水素またはヒドロキシで、Ｒ_５は水素またはヒドロキシで、実線および点線からなる二重線は単一結合または二重結合を示しリング構造内の実線および点線からなる二重線が二重結合の場合、Ｒ_２はＣＨ_３であり、Ｒ_２の隣の実線および点線からなる二重線が二重結合の場合、Ｒ_２はＣＨ_２で、Ｒ_２がメチル基でＲ_３がヒドロキシで、Ｒ_５が水素の場合、Ｒ_４は水素ではない。

前記化合物らを定義する化学式で、用語「Ｃ_１−Ｃ_３アルキル基」は炭素数１−３の直鎖または分岐鎖飽和炭化水素基を意味しており、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルを含む低級アルキルである。用語「ハロ基」はハロゲン族元素を示し、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを含み、好ましくは、プルオロ、クロロまたはブロモである。用語「アルコキシ」は−Ｏアルキル基を意味する。Ｃ_１−Ｃ_３置換アルキル基によって置換される場合にはハロ、好ましくはクロロまたはフルオロ、より好ましくはフルオロ置換アルキル基に置換される。用語、「エポキシド」は一つの分子の中で酸素原子が二つの炭素原子と結合しリングになるというリング型エーテルを意味する。

前記化１、２、または３の化合物は高脂血症、脂肪肝、または肥満の予防または治療活性を示す。下記実施例で立証された通り、セスキテルペン誘導体は体脂肪量の減少、内蔵脂肪量の減少、総コレステロール濃度の減少、血漿中性脂肪、および肝組織中性脂肪の減少を招く、高脂肪食餌に誘導された肥満現象を顕著に緩和する効能を発揮する。また、セスキテルペン誘導体は空腹時に血糖値、および血中インスリン濃度の有意な減少を招来し、第２型糖尿またはインスリン抵抗性を改善する効果およびこれと密接に関連した代謝性炎症反応を改善する効能も発揮する。

本発明の好ましい実施例によれば、前記セスキテルペン誘導体はイトスギ属植物の抽出物または分画物に含まれているものである。

イトスギ属植物とは、ヒノキ科（Ｃｕｐｒｅｓｓａｃｅａｅ）に属する約２０種余りの常緑針葉高木をいい、観賞用・木材用に使われ、アジア・ヨーロッパ・北アメリカの温和な気候帯と亜熱帯地方に広く広まっている。同科の他の属に属する植物の中で、特に扁柏類とサイプレスパインのように、樹脂が分泌され香りのする多くの常緑高木をサイプレスともする。背が２５ｍまで成長し、特に幼い時の木の模様はピラミッド状である。本発明で利用されるイトスギ属植物は、セスキテルペン誘導体を含む限り、特別に制限されず、好ましくはクプレッサマクナブイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｍａｃｎａｂｉａｎａ；ＬａｕｒｅｎｃｅＧ．Ｃｏｏｌ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５８（６）：９６９−９７２（２００１））、クプレッサスノートカテンシス（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｎｏｏｔｋａｔｅｎｓｉｓ；Ｅｒｄｔｍａｎ，Ｈ．ｅｔａｌ．、ＡｃｔａＣｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．、１１：１１５７−１１６１（１９５７））、クプレッサスセンペルヴィレンス（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ；ＳｅｙｙｅｄＡｈｍａｄＥｍａｍｉｅｔａｌ．、ＩｒａｎｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２（２）：１０３−１０８（２００６））、クプレッサスマクロカルパ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｍａｃｒｏｃａｒｐａ；Ｓｒｉｋｒｉｓｈｎａｅｔａｌ．、ＳｙｎｔｈｅｔｉｃＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，３７（１７）：２８５５−２８６０（２００７））、クプレッサスバーケリー（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｂａｋｅｒｉ；Ｋｏｏｎ−ＳｉｎＮｇｏｅｔａｌ．、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、ＰｅｒｋｉｎＴｒａｎｓ．１，１８９−１９４（２０００））または、柏木（クプレッサスフネブリス、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｆｕｎｅｂｒｉｓ）であり、最も好ましくはシダレイトスギである。

セスキテルペン誘導体を含むイトスギ属抽出物はイトスギ属植物（好ましくは、イトスギ属植物の木質部）に通常の抽出溶媒を利用して得ることができ、好ましくは（ａ）炭素数１−４の無水または含水低級アルコール（例：メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびｎ−ブタノールなど），（ｂ）前記低級アルコールと水との混合溶媒、（ｃ）アセトン、（ｄ）酢酸エチル、（ｅ）クロロホルム、（ｆ）１，３−ブチレングリコール、（ｇ）ヘキサン、（ｈ）ジエチルエーテル、（ｉ）酢酸ブチルまたは（ｊ）水を抽出溶媒として得ることができる。

セスキテルペン誘導体を含むイトスギ属分画物は、イトスギ属抽出物を追加的に分離／精製して得たより単利／精製された形態（ｆｏｒｍ）を意味する。例えば、イトスギ属抽出物を一定の分子量カットオフ値を有する限外ろ過膜を通過させて得た分画、多様なクロマトグラフィー（大きさ、電荷、疏水性または、親和性にともなう分離のために製作されたこと）による分離など、追加的に実施された多様な精製方法を通して得られた分画もイトスギ属分画物に含まれるものである。本発明で利用されるイトスギ属植物を分画して収得されるセスキテルペン誘導体は特別に制限されず、好ましくは下記化４で表される酢酸セドリル（ｃｅｄｒｙｌａｃｅｔａｔｅ）、化５で表されるα−セドレン（α−ｃｅｄｒｅｎｅ）、化６で表されるβ−セドレン（β−ｃｅｄｒｅｎｅ）、化７で表されるα−フネブレン（α−ｆｕｎｅｂｒｅｎｅ）、または化８で表されるβ−フネブレン（β−ｆｕｎｅｂｒｅｎｅ）であり、より好ましくは酢酸セドリル、α−セドレン、またはβ−セドレンである。

また、前記のセスキテルペン誘導体は化学的に合成することができる。本発明の好ましい実施例によれば、セスキテルペン誘導体は前記イトスギ属植物から分離する以外に合成して製造された多様なセスキテルペン誘導体を含む。より好ましくは、下記の化９に表示されるセドレンエポキシド（ｃｅｄｒｅｎｅｅｐｏｘｉｄｅ）、化１０に表示されるギ酸セドリル（ｃｅｄｒｙｌｆｏｒｍａｔｅ）、化１１に表示されるメチルセドリルエーテル（ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｅｔｈｅｒ）、化１２に表示される８（１５）−セドレン−９−オール（８（１５）−ｃｅｄｒｅｎ−９−ｏｌ）、化１３に表示されるエピセドロール（ｅｐｉｃｅｄｒｏｌ）、化１４に表示されるメチルセドリルケトン（ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｋｅｔｏｎｅ）または化１５に表示されるセドレノール（ｃｅｄｒｅｎｏｌ）を含み、最も好ましくは、セドレンエポキシド、メチルセドリルエーテル、メチルセドリルケトンまたはセドレノールを含む。

本発明のまた他の様態によれば、本発明は活性物質としてセスキテルペン誘導体を含む高脂血症、脂肪肝、糖尿または肥満の予防または治療用医薬的組成物、または食品組成物を提供する。

本発明の組成物が医薬的組成物として製造される場合、本発明の医薬的組成物は医薬的に許される担体を含む。本発明の医薬的組成物に含まれる医薬的に許される担体は、製剤時に通常利用されるものとして、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カリウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微細決定性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロフィールヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウムおよびミネラルオイルなどを含むが、これに限定されるものではない。本発明の医薬的組成物は、前記成分以外に潤滑剤、湿潤制、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などを追加で含むことができる。

適合した医薬的に許容される担体および製剤はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（１９ｔｈｅｄ．，１９９５）に詳細に記載されている。

本発明の医薬的組成物は経口、または非経口投与をすることができ、好ましくは経口投与方式で適用される。

本発明の医薬的組成物の適合した投与量は製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性別、病的状態、食べ物、投与時間、投与経路、排泄速度、および反応感応性のような要因によって多様に処方することができる。本発明の医薬的組成物の好ましい投与量は成人を基準として０．００１−１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。

本発明の医薬的組成物は、当該発明が属する技術分野における通常の知識を有する者が容易に実施できる方法により、医薬的に許される担体および／または賦形剤を利用して製剤化することによって単位容量形態で製造されたり、または多用量容器内に内入させ製造されることができる。この時、剤形はオイル、または水性媒質中の溶液、懸濁液、シロップ剤、または乳化液形態かエクストラクト、酸剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、またはカプセル剤形態であることもあって、分散剤、または安定化剤を追加的に含むことができる。

本発明の組成物が食品組成物として製造される場合、有効性分としてイトスギ属抽出物だけでなく、食品製造時に通常添加される成分を含み、例えば、蛋白質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味剤、および香味剤を含む。前述した炭水化物の例はモノサッカライド、例えば、ブドウ糖、果糖など、ジサッカライド、例えばマルトース、スクロース、オリゴ糖等およびポリサッカライド、例えばデキストリン、サイクロデキストリンなどのような通常の糖およびキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。香味剤として天然香味剤［タウマチン、ステビア抽出物（例えばレバウディオサイドＡ，グリチルリチンなど）］および合成香味剤（サッカリン、アスパルテームなど）を使うことができる。

例えば、本発明の食品組成物がドリンク剤で製造される場合には、本発明のイトスギ属抽出物以外にクエン酸、液状果糖、ショ糖、ブドウ糖、硝酸、リンゴ酸、果汁、杜仲抽出液、ナツメ抽出液、および／または甘草抽出液などを追加で含ませることができる。

イトスギ属抽出物を有効性分として含む本発明の組成物は、体脂肪量の減少、内蔵脂肪量の減少、総コレステロール濃度の減少、血漿中性脂肪および肝組織中性脂肪の減少、空腹時血糖減少および血中インスリン濃度の減少を招来し、最終的に高脂血症、脂肪肝、糖尿、または肥満の予防または治療活性を示す。

本明細書で使われる用語「高脂血症」とは、中性脂肪とコレステロール等の脂肪代謝がうまく成り立たなくなることにより血液中に脂肪量が多く誘発された疾患をいう。より具体的に高脂血症とは、血液内の中性脂肪、ＬＤＬコレステロール、リン脂質および遊離脂肪酸などの脂質成分が増加した状態の、発生頻度の高い高コレステロール高脂血症をいう。

本明細書で使われる用語「脂肪肝」は、肝臓の脂肪代謝障害で脂肪が肝細胞に過度な量で蓄積された状態をいい、これは狭心症、心筋梗塞、脳卒中、動脈硬化、脂肪肝およびすい臓炎などのような多様な病気の原因となる。

本明細書で使われる用語「糖尿病」は、耐糖能障害を招くインスリンの相対的または絶対的不足として特徴される慢性疾患を意味する。用語糖尿病はすべての種類の糖尿病を含み、例えば、第一型糖尿、第二型糖尿および遺伝性糖尿を含む。第一型糖尿は、インスリン依存性糖尿病として、β−細胞の破壊によって主にもたらされる。第二型糖尿は、インスリン非依存性糖尿病として、食事後不充分なインスリン分泌によってもたらされたり、またはインスリン耐性によってもたらされる。

本発明の好ましい実施例によれば、本発明の組成物は第二型糖尿、より好ましくはインスリン耐性による第二型糖尿の予防または治療に適用される。

本発明のまた他の様態によれば、本発明は下記段階を含むセスキテルペン誘導体の製造方法を提供する。
（ａ）クプレッサス属植物に抽出溶媒を添加し抗肥満効能を有する抽出物を収得する段階および、
（ｂ）前記抽出物を分画し抗肥満効能を有する分画物を選別しセスキテルペン誘導体を収得する段階。
本発明の製造方法をそれぞれの段階別で詳細に説明すると次の通りである。

（ａ）イトスギ属抽出物の分離
抽出物を得るためのイトスギは多様なイトスギ属植物が利用され、好ましくはクプレッサスマクイトスギ、クプレッサスノートカテンシス、クプレッサスセンペルヴィレンス、クプレッサスマクロカルパ、クプレッサスバーケリーまたは、シダレイトスギを利用して得、より好ましくはシダレイトスギ、最も好ましくはシダレイトスギの木質部を利用して得る。

抽出物を得るための溶媒は当業界で通常利用されるいかなる溶媒も含む。好ましくは、前記抽出溶媒は非極性溶媒で、より好ましくはジクロロメタン、ヘキサン、クロロホルムおよびエチルエーテルで構成された群から選択される非極性溶媒で、最も好ましくはジクロロメタンである。

本発明の好ましい実施例によれば、抽出過程後、抽出物をろ過および濃縮する。前記イトスギの総抽出物に対しシー・エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）を利用し実験を実施すると抗肥満効能を有することが確認できる。

（ｂ）抽出物の分画化によるセスキテルペン誘導体の収得
イトスギ属抽出物の分画化は、当業界で通常利用される分画化方法、または精製方法により実施することができる。最も好ましくは、分画化はシリカゲルコラムにイトスギ属抽出物を適用して実施する。

本発明の好ましい実施例によれば、段階（ｂ）は段階（ａ）の抗肥満効能を有する抽出物を大型シリカゲルコラムに適用してイトスギ属抽出物をローディングしてセスキテルペン誘導体を分離する。展開溶媒では当業界に公示された多様な溶媒を利用することができ、好ましくは非極性溶媒で、より好ましくはジクロロメタン、ヘキサン、クロロホルム、またはエチルエーテル、最も好ましくはジクロロメタン、および／またはノーマル−ヘキサンを利用して抗肥満効能を有するセスキテルペン誘導体を収得することができる。展開溶媒としてジクロロメタン、およびノーマルヘキサンを利用する場合、ノーマルヘキサンから始めてジクロロメタンの濃度を高めながら化合物を分離する。

本発明の特徴および利点を要約すると次の通りである。
（ｉ）本発明は化１、２または３に表示されるセスキテルペン誘導体を有効性分として含む高脂血症、脂肪肝、糖尿、肥満の予防または治療用組成物を提供する。
（ｉｉ）本発明の組成物はイトスギ属植物を利用して分離することができ、化学的方法を用いても合成可能である。
（ｉｉｉ）イトスギ属抽出物、またはセスキテルペン誘導体を有効性分として含む本発明の組成物は、体脂肪量の減少、内蔵脂肪量の減少、総コレステロール濃度の減少、血漿中性脂肪および肝組織中性脂肪の減少、空腹時血糖減少および血中インスリン濃度の減少を招来し、最終的に高脂血症、脂肪肝、糖尿または肥満の予防または治療活性を示す。

シダレイトスギから分離した成分のシー・エレガンスで抗肥満効能を見せる。図面で写真内の数字はナイルレッド試薬で染色された脂肪含量であり、数字が小さいほど脂肪含量が少ないことを示す。合成誘導体成分のシー・エレガンスで抗肥満効能を見せる。図面で写真内の数字はナイルレッド試薬で染色された脂肪含量であり、数字が小さいほど脂肪含有量が少ないことを示す。

以下、実施例に依拠して本発明をより詳しく説明する。これら実施例はひたすら本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の要旨により本発明の範囲がこれら実施例によって制限されないということは当業界で通常の知識を有する者において自明である。

実施例１：シダレイトスギの抗肥満成分抽出および分離
イトスギ属に属するシダレイトスギ（クプレッサスフネブリス、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓｆｕｎｅｂｒｉｓ）の木質部を陰で完全に乾燥させて粉砕機で粉末に作った。シダレイトスギ粉末１０ｋｇにジクロロメタン５５リットルを加え、２５℃の室温で２週間抽出した。抽出は２回繰り返し、一次抽出物と二次抽出物を合わせてろ過した後に減圧状態で５０℃のウォーターバス（ｗａｔｅｒｂａｔｈ）で回転減圧濃縮して１４０ｇの総抽出液を得た。シダレイトスギの総抽出物に対しシー・エレガンス（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓｅｌｅｇａｎｓ）を利用し、抗肥満効能があることを確認した後、大型シリカゲルコラムを利用し分離した。コラム用シリカゲル（２３０−４００ｍｅｓｈ，Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用し、直径６５ｍｍ、高さ８０ｃｍの大型コラムを使い、シダレイトスギ総抽出物１４０ｇをローディングし分離した。展開溶媒ではノーマルヘキサンで始めてジクロロメタンを０．１％から１％まで増加させることにより、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５、および化合物６の６種の化合物を分離した。これら６種の化合物に対し抗肥満実験を実施した。

実施例２：シダレイトスギから分離した化合物の構造分析
シダレイトスギから分離した６種の化合物に対し質量分析、^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲなどの機器分析を実施して酢酸セドリル（Ｃｅｄｒｙｌａｃｅｔａｔｅ：化合物１）、（−）−α−セドレン（（−）−α−Ｃｅｄｒｅｎｅ：化合物２）、（＋）−β−セドレン（（＋）−β−Ｃｅｄｒｅｎｅ：化合物３）、（＋）−セドロール（（＋）−Ｃｅｄｒｏｌ：化合物４）、（＋）−α−フネブレン（（＋）−α−Ｆｕｎｅｂｒｅｎｅ：化合物５）および（＋）−β−フネブレン（（＋）−β−フネブレン：化合物６）であることを確認し、各化合物の機器分析結果と化学構造は次の通りである。

化合物１の構造分析
化合物１の性状は結晶粉末で融点は４４−４６℃であり、分子式はＣ_１７Ｈ_２８Ｏ_２で、質量分析を実施した結果、分子量は２６４であった。
^１Ｈ−ＮＭＲ分析を実施した結果は次の通りである。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚｉｎＣＤＣｌ_３）δ０．８３（ｄ、Ｊ＝７．２，３Ｈ）、０．９７（ｓ、３Ｈ）、１．１７（ｓ、３Ｈ）、１．２５−１．２９（１Ｈ）、１．３０−１．４５（４Ｈ）、１．５２（ｓ、３Ｈ）、１．６１−１．６８（１Ｈ）、１．７８−１．８２（１Ｈ）、１．８５−１．９１（１Ｈ）、１．９５（ｓ、３Ｈ）、２．００−２．０３（１Ｈ）、２．３８−２．４２（１Ｈ）。

また、化合物１に対する^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を実施した。^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ｉｎＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）
２５．８（Ｃ１）、３７．０（Ｃ２）、４１．０（Ｃ３）、５４．０（Ｃ３ａ）、３１．２（Ｃ４）、３３．２（Ｃ５）、８６．２（Ｃ６）、５６．９（Ｃ７）、４３．４（Ｃ８）、５６．７（Ｃ８ａ）、４１．３（Ｃ９）、１５．５（Ｃ１０）、２５．３（Ｃ１１）、１７０．３（Ｃ１２）、２２．８（Ｃ１３）、２６．９（Ｃ１４）、２８．４（Ｃ１５）。
以上の機器分析から化合物１は酢酸セドリル（Ｃ_１７Ｈ_２８Ｏ_２）であり、その化学構造は下記の化学式の通りである。

化合物２の構造分析
化合物２の性状は液体であり、分子式はＣ_１５Ｈ_２４で、質量分析を実施した結果分子量は２０４であった。
化合物２に対する^１Ｈ−ＮＭＲ分析を実施した結果は次の通りである。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚｉｎＣＤＣｌ_３）δ０．８４（ｄ、Ｊ＝７．２，３Ｈ）、０．９５（ｓ、３Ｈ）、１．０２（ｓ、３Ｈ）、１．３３−１．４２（３Ｈ）、１．５５−１．６２（１Ｈ）、１．６３−１．６４（１Ｈ）、１．６６−１．６７（３Ｈ）、１．６９−１．７１（１Ｈ）、１．７３−１．７６（１Ｈ）、１．７８−１．８７（２Ｈ）、２．１４−２．１９（１Ｈ）、５．２２（１Ｈ）。

また、化合物２に対する^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を実施した。^１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚｉｎＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）２４．８（Ｃ１）、３６．１（Ｃ２）、４１．５（Ｃ３）、５３．９（Ｃ３ａ）、３８．１（Ｃ４）、１１９．２（Ｃ５）、１４０．３（Ｃ６）、５４．９（Ｃ７）、４８．１（Ｃ８）、５９．０（Ｃ８ａ）、４０．７（Ｃ９）、１５．４（Ｃ１０）、２４．７（Ｃ１１）、２５．６（Ｃ１２）、２７．７（Ｃ１３）。
以上の機器分析から化合物２は（−）−α−セドレン（Ｃ_１５Ｈ_２４）であり、その化学構造は下記の化学式の通りである。

化合物３の構造分析
化合物３の性状は液体であり、分子式はＣ_１５Ｈ_２４であり質量分析を実施した結果分子量は２０４であった。
化合物３の^１Ｈ−ＮＭＲ分析を実施した結果は次の通りである。^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚｉｎＣＤＣｌ_３）δ０．８４（ｄ、Ｊ＝７．２，３Ｈ）、０．９４（ｓ、３Ｈ）、０．９７（ｓ、３Ｈ）、１．１８−１．２１（１Ｈ）、１．２８−１．３４（１Ｈ）、１．３６−１．４５（１Ｈ）、１．４７−１．４９（１Ｈ）、１．５１−１．５８（２Ｈ）、１．６６−１．７２（１Ｈ）、１．７５−１．８３（２Ｈ）、１．８５−１．９０（１Ｈ）、２．１９（１Ｈ）、２．３１−２．３４（２Ｈ）、４．５８（１Ｈ）、４．５９（１Ｈ）。

また、化合物３に対する^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を実施した。^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ｉｎＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）２５．７（Ｃ１）、３７．０（Ｃ２），４２．１（Ｃ３）、５４．４（Ｃ３ａ）、３３．７（Ｃ４），２９．７（Ｃ５）、１５１．９（Ｃ６）、６０．７（Ｃ７），４２．３（Ｃ８）、５６．４（Ｃ８ａ）、４５．１（Ｃ９）、１５．４（Ｃ１０）、１０７．６（Ｃ１１）、２５．９（Ｃ１２）、２６．６（Ｃ１３）。
以上の機器分析から化合物３は（＋）−β−セドレン（Ｃ_１５Ｈ_２４）であり、その化学構造は下記の化学式の通りである。

化合物４の構造分析
化合物４の性状は結晶粉末で、融点は５５−５９℃で、分子式はＣ_１５Ｈ_２６であり、質量分析を実施した結果分子量は２２２であった。
^１Ｈ−ＮＭＲ分析を実施した結果は次の通りである。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ０．８５（３Ｈ）、１．００（３Ｈ）、１．２６（３Ｈ）、１．２７−１．２９（１Ｈ）、１．３２（３Ｈ）、１．３５−１．４３（４Ｈ）、１．５１−１．５８（３Ｈ）、１．６１−１．７１（３Ｈ）、１．７８−１．８９（３Ｈ）。

また、化合物４に対する^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を実施した。^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ｉｎＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）２５．４（Ｃ１）、３７．０（Ｃ２）、４１．５（Ｃ３）、５４．１（Ｃ３ａ）、３１．６（Ｃ４）、３５．４（Ｃ５）、７５．１（Ｃ６）、６１．１（Ｃ７）、４３．４（Ｃ８）、５６．５（Ｃ８ａ）、４２．０（Ｃ９）、１５．６（Ｃ１０）、３０．２（Ｃ１１）、２７．７（Ｃ１２）、２８．９（Ｃ１３）。
以上の機器分析から化合物４は（＋）−セドロール（Ｃ_１５Ｈ２６Ｏ）であり、その化学構造は下記の化学式の通りである。

化合物５の構造分析
化合物５の性状は液体であり、分子式はＣ_１５Ｈ_２４で質量分析を実施した結果分子量は２０４であった。
化合物５の^１Ｈ−ＮＭＲ分析を実施した結果は次の通りである。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ０．８１−０．９５（６Ｈ）、１．０６（ｓ、３Ｈ）、１．２５−１．３１（１Ｈ）、１．３２−１．４６（３Ｈ）、１．５４−１．６１（２Ｈ）、１．６１−１．６４（３Ｈ）、１．７４−１．８２（１Ｈ）、１．９２−１．９９（１Ｈ）、２．０７−２．１０（１Ｈ）、２．１５−２．３２（２Ｈ）、５．１１（１Ｈ）。

また、化合物５に対する^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を実施した。^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ｉｎＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）２１．８（Ｃ１）、３４．１（Ｃ２）、３７．２（Ｃ３）、５５．５（Ｃ３ａ）、３６．４（Ｃ４）、１１９．０（Ｃ５）、１４１．８（Ｃ６）、５８．１（Ｃ７、７．３（Ｃ８）、６１．２（Ｃ８ａ）、３６．６（Ｃ９）、１８．１（Ｃ１０）、１８．４（Ｃ１１）、２４．３（Ｃ１２）、２４．３（Ｃ１３）。
以上の機器分析から化合物５は（＋）−α−フネブレン（Ｃ_１５Ｈ_２４）であり、その化学構造は下記の化学式の通りである。

化合物６の構造分析
化合物６の性状は液体であり、分子式はＣ_１５Ｈ_２４で質量分析を実施した結果、分子量は２０４であった。
化合物６の^１Ｈ−ＮＭＲ分析を実施した結果は次の通りである。^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ０．８２−０．９０（６Ｈ）、１．０６（ｓ、３Ｈ）、１．１８−１．２４（１Ｈ）、１．２４−１．３５（２Ｈ）、１．３５−１．４１（１Ｈ）、１．４１−１．５０（１Ｈ）、１．１２（１Ｈ）、１．６２−１．６８（１Ｈ）、１．７１−１．８０（１Ｈ）、１．９１−１．９５（１Ｈ）、２．２２−２．３８（２Ｈ）、２．５５−２．５８（１Ｈ）、４．５７（１Ｈ）、４．５８（１Ｈ）。

また、化合物６に対する^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を実施した。^１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ｉｎＣＤＣｌ_３）：δ（ｐｐｍ）１９．４（Ｃ１）、３４．１（Ｃ２）、３５．１（Ｃ３）、５５．６（Ｃ３ａ）、３２．５（Ｃ４）、２７．６（Ｃ５）、１５２．５（Ｃ６）、６２．９（Ｃ７）、３７．３（Ｃ８）、５９．７（Ｃ８ａ）、３６．６（Ｃ９）、１８．３（Ｃ１０）、１０６．６（Ｃ１１）、２１．６（Ｃ１２）、２１．６（Ｃ１３）。
以上の機器分析から化合物６は（＋）−β−フネブレン（Ｃ_１５Ｈ_２４）であり、その化学構造は下記の化学式の通りである。

実施例３：シダレイトスギに存在するセスキテルペン（ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅ）系統化合物と構造が類似した合成化合物の構造
シダレイトスギから分離した６種のセスキテルペン系化合物は、全３個のリングを有する構造であることがわかったので、これと類似した構造を有する合成セスキテルペンに対しても抗肥満実験を実施した。本発明で抗肥満実験に使われた合成セスキテルペン系化合物の種類と化学構造は次の通りである。合成セスキテルペン系化合物は、購入可能なものとして下記の会社から購入した。

化合物７の化学構造
セドレンエポキシド（Ｃｅｄｒｅｎｅｅｐｏｘｉｄｅ，Ｃ_１５Ｈ_２４）、浙江黄岩香料有限公司（中国）

化学物−８の化学構造
ギ酸セドリル（Ｃｅｄｒｙｌｆｏｒｍａｔｅ，Ｃ_１６Ｈ_２６Ｏ_２）、シグマ（米国）

化学物−９の化学構造
メチルセドリルエーテル（Ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｅｔｈｅｒ，Ｃ_１６Ｈ_２８Ｏ）、浙江黄岩香料有限公司（中国）

化学物−１０の化学構造
（−）−クロベン（（−）−Ｃｌｏｖｅｎｅ，Ｃ_１５Ｈ_２４）、シグマ（米国）

化学物−１１の化学構造
（＋）−８（１５）−セドレン−９−オール（（＋）−８（１５）−Ｃｅｄｒｅｎ−９−ｏｌ，Ｃ_１５Ｈ_２４Ｏ）、シグマ（米国）

化学物−１２の化学構造
（＋）−サチベン（（＋）−Ｓａｔｉｖｅｎｅ，Ｃ_１５Ｈ_２４）、シグマ（米国）

化学物−１３の化学構造
（−）−エピセドロール（（−）−Ｅｐｉｃｅｄｒｏｌ，Ｃ_１５Ｈ_２６Ｏ）、シグマ（米国）

化学物−１４の化学構造
メチルセドリルケトン（Ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｋｅｔｏｎｅ）、浙江黄岩香料有限公司（中国）

化学物−１５の化学構造
セドレノール（Ｃｅｄｒｅｎｏｌ，Ｃ_１５Ｈ_２４Ｏ）、江西樟樹冠京香料有限公司（中国）

実施例４：シー・エレガンスを利用した１５種のセスキテルペン系化合物の抗肥満効能測定
解剖顕微鏡（倍率５０倍）を使って第４段階（Ｌ４，成虫段階）のシー・エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）７匹をコレステロールを追加したＳ培地（ＮａＣｌ、Ｋ_２ＨＰＯ_４、ＫＨ_２ＰＯ_４、コレステロール、クエン酸塩、微量金属、ＣａＣｌ_２およびＭｇＳＯ_４を含む）３ｍｌに移した後、前日Ｏ／Ｎして液内培養したＥ．ｃｏｌｉＯＰ５０（ＯＤ_６００＝０．２）１００ｕｌを追加した。シー・エレガンスが入っている液体培地に紫檀香分画試料を加え１６℃の暗室で１００ｒｐｍで回転培養した。試料はＤＭＳＯに溶かして培養培地に加え、ＤＭＳＯの最終濃度は１％以下にした。１％ＤＭＳＯはシー・エレガンスの脂肪合成と成長に全く影響を及ぼさなかった。シー・エレガンスに試料を処理して２４時間後に１０μｇ／ｍｌのナイルレッド試薬３０ｕｌを加え（ナイルレッドの最終濃度は１００ｎｇ／ｍｌでオーダーメード、２日間回転培養を継続した。

スライドグラスに０．３％ＮａＮ_３２０ｕｌを点滴して、ここにナイルレッドを加えた後２日間液内培養させたシー・エレガンス（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）溶液１００ｕｌを加えて運動を停止させた。蛍光顕微鏡を利用して暗室で赤色蛍光で発光するシー・エレガンスの脂肪細胞を撮影し、対照群と比較して脂肪量を判定した。脂肪含有量が少ない場合＋１で表示し、脂肪含有量が多ければ＋４で表示した。本実験では卵（ｅｇｇ）を産む直前状態の成体（Ｌ４ｓｔａｇｅ）シー・エレガンスを使った。したがって試料処理後で卵が孵化することになり、試料処理後３日目には成体がほとんど死滅し、新しく孵化して成長するシー・エレガンスの脂肪含有量を観察するようになる。

シダレイトスギをジクロメタンで抽出した総抽出物に対し、シー・エレガンスを利用して抗肥満実験を実施した。総抽出物の濃度を０，１，１０，１００μｇ／ｍｌで線虫に加えて抗肥満実験を実施した結果、表１に示した通り１０μｇ／ｍｌ以上の濃度で有意性のある抗肥満効能を示した。
表１

（表で、脂肪含有量は＋１から＋４まで表示しており、＋１は脂肪含有量が最も少ないことを意味する）
シダレイトスギの木質部から分離した酢酸セドリル、（−）−α−セドレン、（＋）−β−セドレン、（＋）−セドロール、（＋）−α−フネブレン、および（＋）−β−フネブレンなどの６種と、これと構造が類似した化合物のセドレンエポキシド、ギ酸セドリル、メチルセドリルエーテル、（−）−クロベン、（＋）−８（１５）−セドレン−９−オール、（＋）−サチベン、（−）−エピセドロール、メチルセドリルケトン、およびセドレノールなどの９種をそれぞれシー・エレガンスに濃度別（０，１，１０，１００μｇ／ｍｌ）に加えて脂肪合成を抑制する程度を暗室で蛍光顕微鏡で判定した。その結果、植物から分離した総６種のセスキテルペン系化合物が表２および図１に示す通り全てが１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、または１００μｇ／ｍｌという優秀な脂肪合成抑制作用を示した。特に、シダレイトスギ植物から分離した化合物中で（−）−α−セドレン、（＋）−β−セドレン、（＋）−α−フネブレンおよび（＋）−β−フネブレンなどが１μｇ／ｍｌの低濃度でも脂肪合成を強く抑制した。

シダレイトスギから分離した成分のシー・エレガンスでの抗肥満効能

（表で脂肪含量は＋１から＋４まで表示しており、＋１は脂肪含量が最も少ないということを意味する）
またシー・エレガンスを対象に合成セスキテルペン系化合物の抗肥満効能を評価した結果、表３および図２に示す通り、全部１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌまたは、１００μｇ／ｍｌという優秀な脂肪抑制効能を示した。これら合成化合物の中で、特にギ酸セドリル、メチルセドリルエーテル、（−）−クロベン、（＋）−８（１５）−セドレン−９−オール、（＋）−サチベン、（−）−エピセドロール、メチルセドリルケトンおよびセドレノールなどは１μｇ／ｍｌの低濃度でも優秀な抑制効能を示した。

したがって、本発明に使われた総１５種のセスキテルペン系列の化合物は、全て優秀な体脂肪減少効能を表し、抗肥満治療剤として使用できることを確認した。

合成誘導体成分のシー・エレガンスでの抗肥満効能

（表で、脂肪含量は＋１から＋４まで表示しており、＋１は脂肪含量が最も少ないことを意味する）
本発明で使った総１５種のセスキテルペン系化合物は、天然から分離したものでもなく、合成して得たものでもなく、全て水には溶けず、エタノールより極性の小さい有機溶媒にはよく溶ける性質を有しているので全て脂溶性である。したがって、これら化合物は全て経口服用した場合に小腸での吸収が容易であるという長所を持っている。したがって、製品開発時に粉末形態の成分および液状の化合物は錠剤または軟質カプセル剤として手軽に服用できる最終製品として生産することができる。各化合物の中で沸騰点が１００℃以下の化合物は、セドレンエポキシド（沸騰点：９４−９５℃）で、沸騰点が２００℃以下の化合物は（＋）−８（１５）−セドレン−９−オール（沸騰点：１６６−１６８℃）およびセドレノール（沸騰点：１６６−１６９℃）であり、その他の化合物は全て２００℃以上であり、室温で非常に安定した化合物である。各化合物の物理的特性は表４の通りである。

化合物の物理的特性

実施例５：マウスを利用した８種のセスキテルペン系化合物の体重および内蔵脂肪減少効能実験食餌製造および実験動物の飼育
本実験で使った肥満誘導食餌は、本研究責任者によって開発された高脂肪食餌（ｈｇｈｆａｔｄｉｅｔ，ＨＦＤ：４０％脂肪カロリー、１７ｇラード＋３％トウモロコシオイル／１００ｇダイエット）であり、セスキテルペン系化合物が含まれた食餌はＨＦＤと組成が同様だが、種類別に８種のセスキテルペン系化合物が０．２％水準で含まれた（酢酸セドリル含有食餌、（−）−α−セドレン含有食餌、（＋）−β−セドレン含有食餌、セドレンエポキシド含有食餌、メチルセドリルエーテル含有食餌、メチルセドリルケトン含有食餌、セドレノール含有食餌、および（＋）−セドロール含有食餌）。実験食餌の組成は下記表５の通りである。

実験食餌組成

６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを固形飼料で一週間実験室環境に適応させた後、卵塊法により高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）と８種類の実験群に任意配置し、総６週間飼育した。食餌は毎日午前１０〜１１時間に水と共に供給し、食餌摂取量は毎日、そして体重は３日に一回ずつ測定した。飼料摂取にともなう突然の体重変化を防ぐために飼料筒を除去して２時間後体重を測定し、食餌効率は実験食餌供給日から犠牲日までを総実験期間とし、実験期間の累積体重増加量を総食餌摂取量で分けて算出した。実験動物を１２時間以上禁食させた後、ジエチルエーテルで麻酔をかけた状態で血液、肝および内蔵脂肪組織（副睾丸脂肪、腎臓周辺脂肪、腸間膜脂肪および後腹腔脂肪）を採取し、０．１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．４）で洗浄した後、重さを測定した。腹部大動脈から採血された血液は、１０００×ｇで１５分間遠心分離して血漿を分離した。

体重および内蔵脂肪量の変化確認
実験食餌を８週間摂取させた後、８週間の体重増加量を調べると、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）に比べ８種類のセスキテルペン系化合物を摂取させた群で、２５−６０％範囲で全て有意に減少した。その中でもメチルセドリルケトン摂取群の体重減少効果が最も大きく現れ、対照群に比べ８週間の体重増加量が８０％減少していて、その次が（−）−α−セドレン、（＋）−β−セドレン、酢酸セドリル、メチルセドリルエーテル、セドレノール、（＋）−セドロール、そしてセドレンエポキシドの順で対照群に比べ体重増加量がさらに低く現れた（Ｐ＜０．０５）。

実験食餌を８週間摂取させた後、副睾丸脂肪、腎臓周辺脂肪、腸間膜脂肪および後腹腔脂肪を合わせた総内蔵脂肪の重さを測定した結果、８種のセスキテルペン系化合物摂取群で対照群に比べ、すべて総内蔵脂肪量が２５−５５％有意に減少した（Ｐ＜０．０５）。その中でもメチルセドリルケトン摂取群の内蔵脂肪量減少効果が最も明確であり、その次が（−）−α−セドレン、酢酸セドリル、（＋）−β−セドレン、メチルセドリルエーテル、セドレノール、そしてセドレンエポキシドの順で内蔵脂肪量減少効果がさらに強く現れ（Ｐ＜０．０５）、（＋）−セドロール群の場合、対照群に比べ内蔵脂肪量がさらに高い傾向を示した。したがって、前記８種のセスキテルペン系化合物は、０．２％（ｗｔ／ｗｔ，実験食餌添加量）水準で全て非常に卓越した体重減少効果があり、（＋）−セドロールを除く前記７種の化合物は全て優秀な内蔵脂肪量減少効果があるということが確認された（表６）。
表６化合物を摂取させたマウスの体重増加量および総内蔵脂肪の重さ

^＊Ｐ＜０．０５におけるｔ−試験によれば高脂肪食餌群の評価とは有意に異なる。

実施例６：セスキテルペン系化合物（総８種）の肥満性高脂血症、脂肪肝と２型糖尿の予防および治療効能
血漿総コレステロール、中性脂肪およびブドウ糖濃度は商業用測定キット（ＢｉｏＣｌｉｎｉｃａｌｓｙｓｔｅｍ）を利用し各々２回反復測定しており、インスリン濃度はマウスインスリンキット（株式会社シバヤギ，日本）を利用してＥＬＩＳＡで測定した。肝組織の脂質成分をＦｏｌｃｈなどの方法に準じて抽出した。０．２５ｇの肝組織に１ｍＬの蒸溜水を加えた後、ｐｏｌｙｔｒｏｎ均質機（ＩＫＡ−ＷＥＲＫＥＧｍｂＨ＆Ｃｏ．、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ，シュタウフェン，ドイツ）を使って均質化させた。均質液にクロロホルム：メタノール溶液（２：１，ｖ／ｖ）５ｍＬを加えてよく混合した後、１０００×ｇで１０分間遠心分離して下層液を分離し、上層液にまたクロロホルム：メタノール溶液（２：１，ｖ／ｖ）２ｍＬを添加した後、同一過程を繰り返して肝臓の脂質成分を完全に分離した。このように得た下層液にクロロホルム：メタノール：０．０５％ＣａＣｌ２（３：４８：４７，ｖ／ｖ／ｖ）溶液３ｍＬを加え、１分間混合した後１０００×ｇで１０分間遠心分離し、最終下層液を採取して質素ガスで完全に乾燥させた後、乾燥した脂質を１ｍＬのメタノールに溶解して脂質成分分析に使った。肝組織脂質抽出液の中性脂肪濃度は、血漿の分析のために使われたものと同じ商業用脂質分析キット（ＢｉｏＣｌｉｎｉｃａｌｓｙｓｔｅｍ）を使って測定した。

表７から分かるように、表５に提示された実験食餌を８週間摂取させたマウスの血漿脂質濃度を調べたところ、総コレステロール濃度がメチルセドリルエーテル摂取群で高脂肪食餌対照群に比べ４６％有意に減少し、その他（−）−α−セドレン、セドレノール、酢酸セドリル、（＋）−β−セドレン、メチルセドリルケトン、セドレンエポキシド、そして（＋）−セドロール摂取群でも対照群に比べて２９−４３％範囲で血漿総コレステロール濃度が全て有意に減少した。

血漿中性脂肪濃度は（−）−α−セドレン群で対照群に比べ５０％有意に減少し、酢酸セドリル群およびメチルセドリルケトン摂取群では対照群に比べ３０％有意に減少した。その他、（＋）−セドロール、（＋）−β−セドレン、そしてセドレンエポキシド摂取群でも血漿中性脂肪濃度が対照群に比べ１８−２５％範囲で全て有意に減少した。したがって、前記８種のセスキテルペン系化合物は、高脂肪食餌で誘導された肥満に現れる高脂血症現象を顕著に緩和する効果があるということが分かる。

肝組織の中性脂肪濃度もやはり（−）−α−セドレンおよび（＋）−β−セドレン摂取群で対照群に比べ６４％および６３％で最も顕著に減少し、メチルセドリルケトン、酢酸セドリル、メチルセドリルエーテル、セドレノール、およびセドレンエポキシド摂取群で対照群に比べ３７−５６％の範囲で全て有意に減少した。したがって、（＋）−セドロールを除く前記７種のセスキテルペン系化合物は、高脂肪食餌で誘導された肥満に表れる脂肪肝現象を顕著に緩和する効果があるということが分かる。

食餌性肥満動物モデル、または人体肥満では血中インスリン濃度が増加しながら同時に空腹時血糖が増加する２型糖尿現象が伴うということは良く知られている事実である。ちなみに、栄養素、または代謝物質供給過剰によって発生する炎症反応に対し、最近「ｍｅｔａｆｌａｍｍａｔｉｏｎ」という用語が登場し、肥満を「慢性的に進行させる低水準の炎症反応（ｃｈｒｏｎｉｃａｎｄｌｏｗ−ｌｅｖｅｌｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）」と解釈するなど、肥満と免疫体系との相関関係に対する研究が活発に進行中である。すなわち、多様な肥満合併症（２型糖尿、インスリン抵抗性、動脈硬化、癌および喘息など）は肥満が進行する過程で免疫体系との相互作用によって発生するという新しい見解が提起されている。その例として、先天性免疫反応に関与するＴＬＲ４（ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４）の場合、食餌性脂肪（特に、飽和脂肪酸）をリガンドで使って炎症反応およびインスリン抵抗性経路で重要な要素として作用する一方、中枢神経系では食欲調節にも関与すると提示される。

本実験では、高脂肪食餌を摂取したマウスを対象に８週間酢酸セドリルを摂取させた結果、高脂肪食餌対照群に比べ空腹時血糖が５４％顕著に低下しただけでなく、血中インスリン濃度も４９％有意に減少し、インスリン抵抗性指標（ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ，ＩＲＩ）もまた７３％顕著に減少した。その他にもメチルセドリルエーテル、（−）−α−セドレン、（＋）−β−セドレン、メチルセドレンケトン、セドレノール、そしてセドレンエポキシドを８週間摂取させた群でも対照群に比べ空腹時血糖（２９−４６％水準で）、インスリン濃度（２６−４０％水準で）およびインスリン抵抗性指標（４２−６３％水準で）が全て有意に低下した。（＋）−セドロール摂取群の場合、空腹時血糖、インスリン濃度、およびインスリン抵抗性指標が全て対照群に比べ減少する傾向を見せたが、統計的有意性は現れなかった。したがって、これらセスキテルペン系化合物は全て２型糖尿、またはインスリン抵抗性を改善する効果があり、これと密接に関連した代謝性炎症反応を改善するという効果もまた期待される。

セスキテルペン系化合物を摂取させたマウスの血液および肝組織の肥満関連生化学指標

^＊Ｐ＜０．０５におけるｔ−試験によれば高脂肪食餌群の評価とは有意に異なる。
^ａＩＲＩ（ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｄｅｘ）＝１０^−３ｐｍｏｌインスリンｘｍｍｏｌブドウ糖ｘＬ^−２

以上のように本発明の特定部分を詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を持つ者においてこのような具体的な技術は、単に好ましい実施例であるだけであり、これに本発明の範囲が制限されないという点は明白である。したがって、本発明の実質的な範囲は添付された請求項とその等価物によって定義される。

Claims

有効成分としてセスキテルペン誘導体を含む、脂肪肝、糖尿、又は肥満の予防又は治療用の医薬組成物であって、前記セスキテルペン誘導体は、下記化４で表される酢酸セドリル（ｃｅｄｒｙｌａｃｅｔａｔｅ）、化５で表されるα−セドレン（α−ｃｅｄｒｅｎｅ）、又は化６で表されるβ−セドレン（β−ｃｅｄｒｅｎｅ）から選ばれる医薬組成物。
有効成分としてセスキテルペン誘導体を含む、脂肪肝、糖尿、又は肥満の予防又は治療用の医薬組成物であって、前記セスキテルペン誘導体は下記化９で表されるセドレンエポキシド（ｃｅｄｒｅｎｅｅｐｏｘｉｄｅ）、化１１で表されるメチルセドリルエーテル（ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｅｔｈｅｒ）、化１４で表されるメチルセドリルケトン（ｍｅｔｈｙｌｃｅｄｒｙｌｋｅｔｏｎｅ）、又は化１５で表されるセドレノール（ｃｅｄｒｅｎｏｌ）から選ばれる医薬組成物。
前記セスキテルペン誘導体と医薬的に許される担体を含む請求項１又は２に記載の医薬組成物。