JP5323693B2 - 光活性剤としてのクロリンｅ６誘導体の組成物およびクロリンｅ６誘導体を製造する方法 - Google Patents

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関連出願への相互参照
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００６年６月３０日に出願された米国仮特許出願第６０／８１７，７６９号（この出願は、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。

本開示は、一般的には生体作用組成物および身体治療組成物の分野に関し、より具体的には、例えば、癌組織の検出、予防および／または治療において有用な光活性化合物、組成物および方法に関する。

関連技術の説明
モノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６四ナトリウム塩は、タラポルフィンナトリウムとして一般的に知られており、光活性化学薬品または薬物であることが知られている。例えば、米国特許第ＲＥ３７，１８０号は、患者に対する薬物の静脈内投与と、薬物を含有する組織に適当な波長の光をあてて薬物を光活性化することを広い意味で含むモノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６の使用方法に関する。薬物は活性化されると、新しい血管を閉塞する。したがって、この薬物は、血管閉塞がプラスの効果をもつことが期待される疾病の治療において有用である。

タラポルフィンナトリウムは、典型的には、植物原料から製造される。抽出手順と反応手順の両方を含むプロセス中に、副生成物が生成される。これらの副生成物の一つは、ジ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６である。ジアスパルチルクロリンｅ_６は、十分制御されたプロセスにおいて、比較的低量（典型的には約５％）で反応副生成物として生じる一方で、タラポルフィンナトリウム生成物を許容基準に精製するには徹底的な除去処理を必要とする。例えば、粗タラポルフィンナトリウム反応生成物の精製および／または種々の不純物（例えば、ジアスパルチルクロリンｅ_６）の除去は、通常、反応生成物を複数のＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）手順にかけて許容されるタラポルフィンナトリウム純度レベルを達成することを必要とする。この精製手順はコストと時間がかかり、また除去した不純物とともに約５０％以下のタラポルフィンナトリウムの実質的損失をもたらすおそれがある。

したがって、コストのかかる繰り返しの精製手順を使用しないで、あるいは少ない処理手順でタラポルフィンナトリウム生成物を生成するプロセスを開発することが望ましい。さらに、大部分のタラポルフィンナトリウムを損失せずに反応生成物を精製することおよび／または原料投入量の質量当たりのタラポルフィンナトリウム生成物の収率を維持するまたは増加させることが望ましい。

タラポルフィンナトリウムの市場的受容性は、製造コスト、貯蔵寿命、貯蔵中の安定性、製造の容易性、効力、生物学的利用能、薬物動態特性などの種々の要因に左右される。そのため、製造コストを有意に低減するタラポルフィンナトリウムを製造する新規の手法を得ることが望ましい。また、より純粋な形態のタラポルフィンナトリウムをもたらす新規の組成物を得ることも望ましい。

本開示は、上に記載した欠点の１つ以上を克服し、さらに関連した利点を提供することに関する。

要旨
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
クロリンｅ _６ とカルボジイミドの化学反応生成物であって、該化学反応生成物が、以下の形態のクロリンｅ _６ 無水物：

とジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質を含み、該ジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質が、該化学反応生成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約５ｍｏｌ％未満を構成する、化学反応生成物。
（項目２）
前記ジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質が、前記化学反応生成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約３ｍｏｌ％未満を構成する、項目１に記載の化学反応生成物。
（項目３）
前記クロリンｅ _６ 無水物が、前記化学反応生成物の少なくとも約８５ｍｏｌ％を構成する、項目１に記載の化学反応生成物。
（項目４）
前記カルボジイミドが、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩またはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドである、項目１に記載の化学反応生成物。
（項目５）
以下の式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩を実質的に純粋な形態で含む組成物。
（項目６）
前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量が、前記組成物の約８５重量％を超える、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量が、前記組成物の約９０重量％を超える、項目５に記載の組成物。
（項目８）
前記式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量が、前記組成物の約９５重量％を超える、項目５に記載の組成物。
（項目９）
クロリンｅ _６ 無水物またはその薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスであって、クロリンｅ _６ をカルボキシル活性化剤と合わせて、以下の式を有するクロリンｅ _６ 無水物：

またはその薬学的に許容される塩を含む混合物を得る工程、該クロリンｅ _６ 無水物またはその薬学的に許容される塩を精製する工程を含む、プロセス。
（項目１０）
前記カルボキシル活性化剤が、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドまたはＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩である、項目９に記載のプロセス。
（項目１１）
前記クロリンｅ _６ 無水物またはその塩を精製する工程が、１つ以上の抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術を使用して前記混合物から前記クロリンｅ _６ 無水物またはその塩を単離することを含む、項目９に記載のプロセス。
（項目１２）
中間体を調製するための方法であって、クロリンｅ _６ をカルボキシル活性化剤で活性化して、中間体を含む混合物を得る工程、および該中間体を単離する工程を含み、該中間体は、ｄ _６ −アセトン／ｄ _６ −ジメチルスルホキシドを溶媒として使用し、５００ＭＨｚでプロトン核磁気共鳴（ ^１ Ｈ−ＮＭＲ）分光法により分析すると、

の付近のｐｐｍの化学シフトを含むスペクトルを示す、方法。
（項目１３）
前記中間体を単離する工程が、１つ以上の抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術を使用して前記混合物から該中間体を分離することを含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記１つ以上の抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術が、前記混合物を活性シリカと接触させることを含む、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記単離した中間体を真空下で乾燥させる工程をさらに含む、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
タラポルフィンを調製するための方法であって、項目９にしたがって調製した中間体をアミン含有試薬と合わせて、モノアミノ酸クロリンｅ _６ またはその薬学的に許容される塩を形成する工程を含む、方法。
（項目１７）
前記アミン含有試薬が、Ｌ−アスパラギン酸またはそのエステルである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
タラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を調製するための方法であって、
有機溶媒の存在下で、約１０〜約１２の範囲のｐＨを有するアスパラギン酸塩組成物を項目１に記載の化学反応生成物と合わせて反応混合物を形成する工程、
該反応混合物を塩基性にする工程、
該塩基性反応混合物から該タラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を沈殿させる工程、
を含む、方法。
（項目１９）
前記有機溶媒が、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、塩化メチレンまたはそれらの混合物である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記反応混合物を塩基性にする工程が、水酸化物を添加して該反応混合物のｐＨを約８〜約１２の範囲内に維持することを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
前記タラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を沈殿させる工程が、適した沈殿溶媒を前記塩基性反応混合物に添加することを含む、項目１８に記載の方法。
（項目２２）
ろ過および／またはクロマトグラフィーによって前記塩基性反応混合物から沈殿した前記タラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を分離する工程をさらに含む、項目１８に記載の方法。
（項目２３）
タラポルフィンナトリウムを調製する方法であって、精製した中間体反応混合物を反応において利用して、タラポルフィンナトリウムを調製する工程を含み、該精製した中間体反応混合物が、有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質が除去されたクロリンｅ _６ 、クロリンｅ _６ 無水物、およびジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質を含む粗反応混合物から得られたものである、方法。
（項目２４）
前記精製した中間体反応混合物が、該精製した中間体反応混合物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約５ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質を含む、項目２３の方法。
（項目２５）
前記精製した中間体反応混合物が、該精製した中間体反応混合物中に存在する全クロリン種に基づいて約３ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質を含む、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記クロリンｅ _６ 環状無水物が、以下の式Ｉのクロリンｅ _６ 環状無水物：

またはその塩である、項目２３に記載の方法。
（項目２７）
前記精製した中間体反応混合物が、ジメチルスルホキシドをさらに含む、項目２３に記載の方法。
（項目２８）
前記精製した中間体反応混合物が、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドまたはジメチルホルムアミド、またはそれらの組み合わせをさらに含む、項目２３に記載の方法。
（項目２９）
前記有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質が、活性シリカを使用して除去されている、項目２３に記載の方法。
（項目３０）
第１の反応体積と第２の反応体積との間のカップリング反応の生成物を含む反応生成物であって、
該第１の反応体積が、以下の式のクロリンｅ _６ 無水物：

と、該第１反応体積中に存在する全クロリン種に基づいて約５ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質を含み、該第２の反応体積が、Ｌ−アスパラギン酸またはそのエステルを含み、
該反応生成物が、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ またはその薬学的に許容される塩およびジアスパルチルクロリンｅ _６ を含む、
反応生成物。
（項目３１）
前記反応生成物が、該反応生成物中に存在する全クロリン種に基づいて約２ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ _６ を含む、項目３０に記載の反応生成物。
（項目３２）
反応生成物が、該反応生成物中に存在する全クロリン種に基づいて約１ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ _６ を含む、項目３０に記載の反応生成物。
（項目３３）
前記第１の反応体積がさらに、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドを含む、項目３０に記載の反応生成物。
（項目３４）
前記第１の反応体積が精製されて、分離プロセスによってジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質を除去する、項目３０に記載の反応生成物。
（項目３５）
前記分離プロセスが、活性シリカクロマトグラフィーである、項目３４に記載の反応生成物。
（項目３６）
モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ またはその薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスであって、
クロリンｅ _６ をカルボキシル活性化剤と合わせて、以下の式Ｉの中間体：

またはその塩を含む混合物を得る工程、
該式Ｉの中間体またはその塩を単離する工程、
該単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせて、タラポルフィンナトリウムまたはその薬学的に許容される塩を形成する工程
を含む、プロセス。
（項目３７）
前記クロリンｅ _６ を前記カルボキシル活性化剤と合わせる工程が、該クロリンｅ _６ をカルボジイミドと反応させることを含む、項目３６に記載のプロセス。
（項目３８）
前記カルボジイミドが、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミド、またはそれらの混合物である、項目３７に記載のプロセス。
（項目３９）
前記クロリンｅ _６ を前記カルボキシル活性化剤と合わせる工程が、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドの存在下で、該クロリンｅ _６ をカルボジイミドと反応させることを含む、項目３６に記載のプロセス。
（項目４０）
前記クロリンｅ _６ を前記カルボキシル活性化剤と反応させる工程が、該クロリンｅ _６ をＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩またはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドと反応させることを含む、項目３６に記載のプロセス。
（項目４１）
前記式Ｉの中間体またはその塩を単離する工程が、活性シリカを使用して該式Ｉの中間体またはその塩を前記混合物から分離して、実質的に純粋な式Ｉの中間体またはその塩を得ることを含む、項目３６に記載のプロセス。
（項目４２）
前記単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせる工程が、該単離した式Ｉの中間体またはその塩をアスパラギン酸ナトリウムと反応させて、タラポルフィンナトリウムを形成することを含む、項目３６に記載のプロセス。
（項目４３）
前記単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせる工程が、ジメチルスルホキシドの存在下で、該単離した式Ｉの中間体またはその塩をＬ−アスパラギン酸またはそのエステルと合わせて、タラポルフィンナトリウムを形成することを含む、項目３６に記載のプロセス。
（項目４４）
前記単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせる工程が、アルカリ水溶液中で、前記クロリンｅ _６ 無水物とＬ−アスパラギン酸またはそのエステルとをカップリングさせて、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ の四ナトリウム塩を形成する工程を含む、項目３６に記載のプロセス。
（項目４５）
光活性剤またはその薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスであって、
以下の式の化合物：

またはその薬学的に許容される塩、有機溶媒および１つ以上のジアスパルチルクロリンｅ _６ 前駆物質を含む組成物を塩基性水性アスパラギン酸ナトリウム組成物と合わせて、粗モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ 反応混合物を形成する工程であって、該粗反応混合物は、該組成物内の全クロリン種に基づいて約２ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ _６ を含む、工程、
該反応混合物を塩基性にする工程、
実質的な量の該モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ を該反応混合物から沈殿させる工程
を含む、プロセス。
（項目４６）
前記少なくとも１つのジアスパルチルクロリンｅ _６ 前駆物質が、前記組成物中の全クロリン種に基づいて約５ｍｏｌ％未満を構成する、項目４５に記載のプロセス。
（項目４７）
前記少なくとも１つのジアスパルチルクロリンｅ _６ 前駆物質が、前記組成物中の全クロリン種に基づいて約３ｍｏｌ％未満を構成する、項目４５に記載のプロセス。
（項目４８）
前記反応混合物を塩基性にする工程が、十分な量のアルカリ性物質を該反応混合物に提供して約８〜約１２の範囲のｐＨを維持することを含む、項目４５に記載のプロセス。
（項目４９）
実質的な量の前記モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ を前記反応混合物から沈殿させる工程が、十分な量の有機溶媒を提供して、該反応混合物から存在する該モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ の５０ｍｏｌ％を超える沈殿物を生じることを含む、項目４５に記載のプロセス。
（項目５０）
クロリンｅ _６ と脱水剤との化学反応生成物であって、該化学反応生成物が、以下の形態のクロリンｅ _６ 無水物：

とジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質を含み、該ジアスパルチルクロリンｅ _６ の前駆物質が、該化学反応生成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約５ｍｏｌ％未満を構成する、化学反応生成物。
（項目５１）
前記脱水剤がカルボジイミドである、項目５０に記載の化学反応生成物。
（項目５２）
前記カルボジイミドが、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩またはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドである、項目５１に記載の化学反応生成物。
（項目５３）
以下の式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩を実質的に純粋な形態で含む組成物。
（項目５４）
前記式Ｉの化合物の全含有量が、前記組成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約８５ｍｏｌ％を超える、項目５３に記載の組成物。
（項目５５）
前記式Ｉの化合物の全含有量が、前記組成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約９０ｍｏｌ％を超える、項目５３に記載の組成物。
（項目５６）
前記式Ｉの化合物の全含有量が、前記組成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約９５ｍｏｌ％を超える、項目５３に記載の組成物。
一態様において、本開示は、クロリンｅ_６とカルボジイミドの化学反応生成物に関する。いくつかの実施形態において、化学反応生成物は、以下の形態のクロリンｅ_６無水物：

とジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む。いくつかの実施形態において、ジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質は、前記化学反応生成物中に存在する全クロリン種に基づいて約５ｍｏｌ％未満を含む。

別の態様において、本開示は、以下の式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩を実質的に純粋な形態で含む組成物に関する。

別の態様において、本開示は、クロリンｅ_６無水物またはその薬学的に許容される塩を調製するプロセスに関する。前記プロセスは、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤と合わせて以下の式：

を有するクロリンｅ_６無水物またはその塩を含む混合物を得ることを含む。前記プロセスはさらに、クロリンｅ_６無水物またはその塩を精製することを含んでもよい。

別の態様において、本開示は、中間体を調製する方法に関する。前記方法は、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤で活性化して中間体を含む混合物を得ることを含み、前記中間体は、ｄ_６‐アセトンとｄ_６‐ジメチルスルホキシドを含む溶媒を使用し、５００ＭＨｚでプロトン核磁気共鳴（^１Ｈ‐ＮＭＲ）分光法により分析すると、

の付近のｐｐｍの化学シフトを含むスペクトルを示す。前記方法はさらに、中間体を単離することを含む。

別の態様において、本開示は、タラポルフィンナトリウムまたはその薬学的に許容される塩を調製する方法に関する。前記方法は、有機溶媒の存在下で、約１０〜約１２の範囲のｐＨを有するアスパラギン酸塩組成物を請求項１に記載の化学反応生成物と合わせて反応混合物を形成することを含む。前記方法はさらに、反応混合物を塩基性にすることを含んでもよい。前記方法はさらに、塩基性反応混合物からタラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を沈殿させることを含む。

別の態様において、本開示は、タラポルフィンナトリウムを調製する方法に関する。前記方法は、精製した中間体反応混合物を反応において利用してタラポルフィンナトリウムを調製することを含み、前記精製した中間体反応混合物は、有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質が除去されたクロリンｅ_６、クロリンｅ_６無水物、およびジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む粗反応混合物から得られたものである。

別の態様において、本開示は、第１の反応体積と第２の反応体積との間のカップリング反応の生成物を含む反応生成物であって、前記第１の反応体積が、以下の式のクロリンｅ_６無水物：

と、反応生成物中の全クロリン種に基づいて約５ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含み、前記第２の反応体積が、Ｌ‐アスパラギン酸またはそのエステルを含む、反応生成物に関する。いくつかの実施形態において、前記反応生成物は、モノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩およびジアスパルチルクロリンｅ_６を含む。クロリン種の例には、クロリンｅ_６、クロリンｅ_６無水物、およびジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質、ならびにクロリン発色団を含む化合物が含まれる。

別の態様において、本開示は、モノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩を調製するプロセスに関する。前記プロセスは、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤と合わせて、以下の式Ｉの中間体：

またはその塩を含む混合物を得ることを含む。前記プロセスはさらに、式Ｉの中間体またはその塩を単離することを含む。いくつかの実施形態において、前記プロセスはさらに、単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせて、タラポルフィンナトリウムまたはその薬学的に許容される塩を形成する工程を含む。

別の態様において、本開示は、光活性剤（ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）またはその薬学的に許容される塩を調製するプロセスに関する。前記プロセスは、以下の式の化合物：

またはその薬学的に許容される塩、有機溶媒および１つ以上のジアスパルチルクロリンｅ_６前駆物質を含む組成物を塩基性水性アスパラギン酸ナトリウム組成物と合わせて、粗モノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６反応混合物を形成することを含む。いくつかの実施形態において、前記粗反応混合物は、粗反応混合物中に存在する全クロリン種に基づいて約２ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６を含む。前記プロセスはさらに、反応混合物を塩基性にすることを含む。いくつかの実施形態において、前記プロセスはさらに、実質的な量のモノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６を反応混合物から沈殿させることを含む。

別の態様において、本開示は、クロリンｅ_６と脱水剤との化学反応生成物であって、以下の形態のクロリンｅ_６無水物：

とジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む、化学反応生成物に関する。いくつかの実施形態において、前記ジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質は、前記化学反応生成物中に存在する全クロリン種に基づいて約５ｍｏｌ％未満を含む。

別の態様において、本開示は、クロリンｅ_６の反応生成物を含む混合物に関する。前記混合物は、これまで未知のクロリンｅ_６無水物および／またはその誘導体を含む。前記クロリンｅ_６無水物は、以下の式からなる：

前記混合物は、有意に低減した濃度のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質および存在する全クロリン種に対して典型的に５％未満の他の好ましくない化学種を含む。

前記混合物は、クロリンｅ_６とカルボジイミドとの活性化反応の精製した反応生成物であってもよい。前記カルボジイミドは、Ｎ‐エチル‐Ｎ’‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）またはＮ‐Ｎ’‐ジシクロヘキシル‐カルボジイミド（ＤＣＣ）であってもよい。

いくつかの実施形態において、上記式のクロリンｅ_６無水物は、反応混合物中の全クロリン種に基づいて約５％以下のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む混合物中に存在してもよい。別の態様において、前記クロリンｅ_６無水物は、混合物中の全クロリン種に対して３％以下のジアスパルチルクロリンｅ_６前駆物質を含有する混合物中に存在してもよい。

別の態様において、本開示は、タラポルフィンナトリウムを調製する方法であって、クロリンｅ_６、その無水物およびジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む中間体反応混合物を調製し、有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を混合物から除去して混合物を精製し、反応における精製混合物を利用してタラポルフィンナトリウムを調製する手順を含む。

いくつかの実施形態において、前記中間体反応混合物は、ジメチルスルホキシドを含んでもよい。いくつかの実施形態において、前記中間体反応混合物は、（ＥＤＣ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を含んでもよい。精製手順は、活性シリカの層を介してろ過することを含んでもよい。

前記精製手順はまた、前駆物質の形成の抑制を目的とする薬剤をジ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６および他の好ましくない化学種に加えることを含んでもよい。前記精製手順は、ジアスパルチルクロリンｅ_６前駆物質を中間体反応混合物中に存在する全クロリン種に基づいて約５％未満または約３％未満の濃度に除去することを含んでもよい。

前記利用手順は、ジメチルスルホキシド中、高ｐＨでのＬ‐アスパラギン酸またはその誘導体またはエステルとのカップリングを含んでもよい。前記利用手順はまた、アルカリ水溶液中でのＬ‐アスパラギン酸またはその誘導体またはエステルとのカップリングを含んでもよい。

別の態様において、本開示は、（存在する全クロリン種に対して）約５％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む第１の反応体積であって、以下の式のクロリンｅ_６無水物：

を含む、第１の反応体積と、Ｌ‐アスパラギン酸またはその誘導体またはエステルを含む第２の反応物との間のカップリング反応の生成物を含む反応生成物に関する。

前記反応生成物は、存在する全クロリン種に基づいて約１％以下のジアスパルチルクロリンｅ_６を含んでもよい。前記第１の反応体積は、ジメチルスルホキシドを含んでもよい。第１の反応体積を精製して活性シリカの層を介するろ過などの適した分離工程等によってジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質および他の好ましくない反応生成物を除去してもよい。

さらに別の態様において、本開示は、ペプチド結合を介して他の化学部分に結合したクロリンｅ_６を含む化合物の調製における中間体としての精製したクロリンｅ_６無水物の使用に関する。

以下の図と合わせて考えると、詳細な説明および特許請求の範囲を参照することにより、本開示のより完全な理解が得られる。以下の図において、同様の参照番号は、図全体を通して類似の要素を示す。

一例示的実施形態に基づきクロリンｅ_６からタラポルフィンナトリウムを合成する２段階プロセス（活性化の後にカップリング）の概略図である。 一例示的実施形態に基づき精製したクロリンｅ_６無水物の組成物の相対強度対質量電荷比（ｍ／ｚ）の質量分光分析グラフである。 一例示的実施形態に基づきクロリンｅ_６無水物の組成物の４１０ｎｍの吸光度（ＡＵ）対時間（分）のＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）グラフである。５９６．８および５７８．８と標示したピークは、それぞれクロリンｅ_６およびクロリンｅ_６無水物である。 一例示的実施形態に基づくジ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６の１つの異性体の構造式の概略図である。 一例示的実施形態に基づく単離したクロリンｅ_６無水物のタラポルフィンナトリウムへの転化の概略図である。 活性シリカで処理した後に活性化反応から得られる反応混合物の相対強度対質量電荷比（ｍ／ｚ）の質量分光分析グラフであり、一例示的実施形態に基づき混合物中の主要な化学種がクロリンｅ_６無水物であることを例示するグラフである。 一例示的実施形態に基づき精製した反応生成物中に存在するクロリン種の相対百分率を示す、ＵＶ検出を使用した４１０ｎｍの吸光度（ＡＵ）対時間（分）のＨＰＬＣグラフである。 一例示的実施形態に基づき５００ＭＨｚで収集した、ｄ_６‐アセトン／ｄ_６‐ジメチルスルホキシド中のクロリンｅ_６無水物のプロトン核磁気共鳴（^１Ｈ‐ＮＭＲ）スペクトルである。 一例示的実施形態に基づき５００ＭＨｚで収集した、ｄ_６‐アセトン／ｄ_６‐ジメチルスルホキシド中のクロリンｅ_６無水物の^１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルの選択領域と、ｄ_６‐アセトン／ｄ_６‐ジメチルスルホキシド中のクロリンｅ_６の^１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルの選択領域との比較である。

詳細な説明
以下の説明においては、種々の開示した実施形態の完全な理解を提供するために、ある特定の詳細な説明が含まれる。しかしながら、実施形態が１つ以上のこれらの特定の詳細な説明なしに、あるいは他の方法、成分、材料等を使用して実施されてもよいことを、当業者は理解するであろう。他の場合には、分離カラム、ろ過床等を含むがこれらに限定されない抽出、分離、クロマトグラフィーおよび／または精製装置と関連した公知の構造は、実施形態の説明を不必要に分かりにくくするのを避けるために詳細に表示あるいは記載されていない。

特に文脈において必要とされない限り、以下に続く明細書および特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、およびその「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、「含まれるが、これらに限定されない」のようなオープンな包括的意味で解釈されるものとする。

本明細書全体における「一実施形態」または「実施形態」または「別の実施形態において」または「いくつかの実施形態において」の言及は、実施形態と関連して記載される特定の対象特性、構造または特徴が少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書全体を通して種々の箇所に出現する「一実施形態において」または「実施形態において」または「別の実施形態において」または「いくつかの実施形態において」という語句は、必ずしもすべてが同じ実施形態を示すとは限らない。さらに、特定の特性、構造または特徴を、１つ以上の実施形態において適した方法で組み合わせてもよい。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、特に内容において明確に規定されない限り、複数の対象物を含むことに留意しなければならない。したがって、例えば、クロリンｅ_６無水物の中間体とアミン含有試薬との化学反応の言及は、単一のアミン含有試薬または２つ以上のアミン含有試薬を含む。また、「または」という用語は、特に内容において明確に規定されない限り、一般的に「および／または」を含む意味で使用されることに留意しなければならない。

以下の詳細な説明は、基本的に単に例示するものであって、本開示または本開示の適用および使用を限定するものではない。さらに、前述の技術分野、背景技術、発明の開示または以下の詳細な説明において提示される、いかなる明示的または暗示的な理論によっても拘束されるものではない。

本明細書および特許請求の範囲で使用される「脱水剤」または「カルボキシル活性化剤」という用語は一般的に、求核攻撃に対して、カルボン酸を活性化できる化合物、分子または物質を指す。いくつかの実施形態において、脱水剤またはカルボキシル活性化剤は、攻撃する求核試薬がアミンまたはアルコールであるカルボン酸を活性化し、その結果アミドまたはエステル形成を生じることができる。

このような脱水剤の非限定的な例には、カルボジイミド（例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、１‐エチル‐３‐（３‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩など）及びシアンアミドが含まれる。

さらなる脱水試薬の例には、トリエチルアミンのような第３級アミンとともに一般的に使用されるアルキルクロロホルメート（例えば、Ｋｉｍ，Ｌｅｅ，Ｋｉｍ Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８５，５０，５６０を参照）、トリフェニルホスフィンを使用したジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）（例えば、Ｃａｍｐ；Ｊｅｎｋｉｎｓ Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９，５４，３０４５，３０４９（光延反応）を参照）、種々のクロロシラン（例えば、Ｎａｋａｏ；Ｏｋａ；Ｆｕｋｕｍｏｔｏ Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．１９８１，５４，１２６７を参照。また、例えば、Ｂｒｏｏｋ；Ｃｈａｎ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９８３，２０１を参照）、クロロスルホニルイソシアネート（例えば、Ｄｈａｒ，Ｍｕｒｔｈｙ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９８８，４３７‐４５０を参照）、およびＮ，Ｎ’‐カルボニルジイミダゾール（例えば、Ｍｏｒｔｏｎ，Ｍａｎｇｒｏｏ，Ｇｅｒｂｅｒ Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．１９８８，６６，１７０１を参照）が含まれる。いくつかの実施形態において、前記脱水剤はカルボジイミドである。いくつかの実施形態において、前記カルボジイミドは、Ｎ‐エチル‐Ｎ’‐（３‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩またはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル‐カルボジイミドである。

いくつかの実施形態において、反応物の脱水は、カルボン酸とアミンとの反応を、それらがアミノ酸の一部であろうとなかろうと含んでもよい。いくつかの実施形態において、所望のカップリング反応を得るために反応物を脱水するさらに一般的な方法を使用してもよい（例えば、Ｂｅｃｋｗｉｔｈ’ｓ ｍｏｎｏｇｒａｐｈ，ｐｐ．７３‐１８５，ｉｎ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｄｅｓを参照）。例えば、一つの一般的な方法は、アミンと酸塩化物との反応である。いくつかの実施形態においては、第１の級アミンを使用したクロロホルメートで反応物を処理する。なぜなら、これは、ある目的でアミンを必要とする場合に、後で転化することができるためである（例えば、Ｚａｂｉｃｋｙ，Ａ．Ａ．，Ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７０；Ｒａｕｃｈｅｒ；Ｊｏｎｅｓ Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８５，１５，１０２５を参照）。本明細書および特許請求の範囲で使用される「アミン含有薬剤」という用語は一般的に、第１の級または第２の級アミン基を含有する化合物、分子または物質、またはアンモニアを指す。このようなアミン含有薬剤の非限定的な例には、アミノ酸（例えば、Ｌ‐アスパラギン酸）、アスパラギン酸等、またはそのエステルまたは誘導体が含まれる。

タラポルフィンナトリウムは、モノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６、ＮＰｅ_６、ＭＡＣＥ、タポルフィン、ＭＥ２９０６、Ａｃｅ_６、ＡＣ_６およびＬＳ１１として一般的に知られている。この化学抄録サービス登録番号は、２２０２０１‐３４‐３であり、化学名は、（＋）‐テトラナトリウム（２Ｓ，３Ｓ）‐１８‐カルボキシラト‐２０‐［Ｎ‐（Ｓ）‐１，２‐ジカルボキシラトエチル］‐カルバモイルメチル‐１３‐エチル‐３，７，１２，１７‐テトラメチル‐８‐ビニルクロリン‐２‐プロパノエートである。

タラポルフィンナトリウムは、光活性化薬物療法で典型的に使用される感光剤である。光活性化後、タラポルフィンナトリウムは、一重項酸素の形成を促進する長期間の高エネルギー電子状態を形成し、一重項酸素媒介の細胞死を生じる。いくつかの実施形態において、前記タラポルフィンナトリウムは、癌細胞と相互作用し、光にあてられると、癌細胞を死滅させるか破壊することができる。

図１に示すように、クロリンｅ_６からタラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を調製するには、一般的に２段階プロセスが必要となる。いくつかの実施形態においては、第１の段階で、クロリンｅ_６が脱水剤によって活性化され、第２の段階で、活性化混合物がアミン含有薬剤と反応して、タラポルフィンナトリウムを形成する。

これまで活性化手順の反応生成物は、高エネルギーで短寿命の不安定な化学種であると考えられていたため、単離または精製することはできない。しかしながら、本出願人等は、この反応の有意な成分をクロリンｅ_６無水物と同定し、この中間体が安定な化学種であることを思いがけなく発見した。いくつかの実施形態において、中間体は、単離または精製されると、Ｌ‐アスパラギン酸塩と反応して、クロリンｅ_６無水物の単離または精製を行わなかった場合よりも純粋なタラポルフィンナトリウムを形成する。

いくつかの実施形態において、タラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を調製するプロセスは、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤で化合して、以下の式Ｉの中間体：

またはその塩を含む活性化反応混合物を得ることを含んでもよい。

前記プロセスはさらに、１つ以上の分離を使用して反応混合物から式Ｉの中間体またはその塩を単離することを含んでもよい。式Ｉの中間体またはその塩を混合物から抽出、単離、分離および／または精製するのに適した技法および／または方法には、液体クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ）、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、平面クロマトグラフィー等などの抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術が含まれる。いくつかの実施形態においては、活性シリカ層に混合物を通過させて、得られたシリカ処理した反応生成物を質量分光法で分析してもよい。図５は、クロリンｅ_６の脱水剤による活性化反応前のシリカ処理した反応生成物の質量スペクトルを示す。電子スプレーイオン化を使用し、極性をプラスに設定したＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズＬＣ／ＭＳＤ機器上でスペクトルを記録した。

図５に示すように、クロリンｅ_６無水物のピークは、現時点で、反応副生成物のピークよりも比例してはるかに高い。最も強いピークは、クロリンｅ_６無水物のピークである。

アルカリ水溶液（水酸化ナトリウムを使用してアルカリ状態を作り出す）中で、現時点で、高いクロリンｅ_６無水物濃度を有する、シリカ処理した、またはその他の方法で精製した活性化反応生成物をＬ‐アスパラギン酸と反応させると、従来のものと比べてはるかに純粋なタラポルフィンナトリウム含有反応生成物が生成した。カップリング反応生成物のＨＰＬＣ分析を図６に示す。（存在する全クロリン種に対して）約９５％のカップリング反応生成物がタラポルフィンナトリウムで、わずかに約５％が他の反応生成物である。このカップリング反応生成物を９６％のタラポルフィンナトリウムにさらに精製することは、非常に低い割合のタラポルフィンナトリウムを含む従来の反応生成物の場合と比べて、はるかに簡単で、コストもかからない。いくつかの実施形態において、得られたタラポルフィンナトリウムは、約９０％〜約９９％以上の純度を有する。

カップリング反応生成物の精製は、不純物を除去するＨＰＬＣによる一連の処理を必要とする。そのため、いくつかの実施形態においては、増加したタラポルフィンナトリウム濃度（およびジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質などの低減した濃度の他の（好ましくない）活性化反応生成物）を有する反応生成物を使用して精製プロセスを開始することで、ＨＰＬＣ精製プロセスの必要性がなくなる可能性ももたらされる。したがって、いくつかの実施形態は、高いタラポルフィンナトリウム純度のみならず、高いタラポルフィンナトリウム収率の可能性も提供する。

いくつかの実施形態において、活性化反応から生成した活性化反応混合物は、最初に精製されて、増加した濃度のクロリンｅ_６無水物と、ジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質などの低減した濃度の他の（望ましくない）活性化反応生成物を含む精製した活性化反応混合物を生成する（ジアスパルチルクロリンｅ_６の１つの異性体の図を図３に示す）。ジ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６は、典型的には全生成物混合物の３〜４％を含む。一般的に、ジアスパルチルクロリンｅ_６は、一連の逆相ＨＰＬＣ手順の多段階によって除去される。しかしながら、使用したＨＰＬＣプロセスは、コストと時間の両方がかかる。さらに、多段階のＨＰＬＣ分離は、タラポルフィンナトリウム生成物の損失をもたらし、それによって生成物の収率を５０％程度低下させる。

以下の式Ｉの構造：

を有し、活性化混合物中にこれまで存在すら知られていない「活性化中間体」が存在することがすでに明らかにされている。

この式Ｉのクロリンｅ_６無水物は、「クロリンｅ_６環状無水物」または「無水物」と呼んでもよい。図４に示すように、活性化混合物から精製されたこのクロリンｅ_６無水物をＬ‐アスパルチルクロリンｅ_６とのカップリング反応で反応させると、ジアスパルチルクロリンｅ_６の生成が急激に低下する。

いくつかの実施形態において、前記プロセスはさらに、単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせて、タラポルフィンナトリウムまたはその薬学的に許容される塩を形成する工程を含む。いくつかの実施形態において、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤と合わせることは、クロリンｅ_６をカルボジイミドと反応させることを含む。いくつかの実施形態において、前記カルボジイミドは、ＤＣＣまたはＥＤＣである。

いくつかの実施形態において、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤と合わせることは、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドの存在下で、クロリンｅ_６をカルボジイミドと合わせることを含む。いくつかの実施形態において、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤と合わせることは、クロリンｅ_６をＥＤＣまたはＤＣＣと合わせることを含む。

いくつかの実施形態において、式Ｉの中間体またはその塩を単離することは、活性シリカを使用して式Ｉの中間体またはその塩を混合物から分離して、実質的に純粋な式Ｉの中間体またはその塩を得ることを含む。

いくつかの実施形態において、単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせることは、単離した式Ｉの中間体またはその塩をアスパラギン酸ナトリウムと合わせて、タラポルフィンナトリウムを形成することを含む。

いくつかの実施形態において、単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせることは、ジメチルスルホキシドの存在下で、単離した式Ｉの中間体またはその塩をＬ‐アスパラギン酸またはそのエステルと合わせて、タラポルフィンナトリウムを形成することを含む。

いくつかの実施形態において、単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせることは、アルカリ水溶液中で、クロリンｅ_６無水物とＬ‐アスパラギン酸またはそのエステルとをカップリングさせてモノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６の四ナトリウム塩を形成する工程を含む。

本開示の特定の実施形態は、クロリンｅ_６無水物またはその薬学的に許容される塩を調製するプロセスに関する。前記プロセスは、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤と合わせて以下の式：

を有するクロリンｅ_６無水物またはその塩を含む混合物を得ることを含む。いくつかの実施形態において、前記カルボキシル活性化剤は、ＤＣＣまたはＥＤＣである。

前記プロセスはさらに、クロリンｅ_６無水物またはその塩を精製することを含んでもよい。いくつかの実施形態において、クロリンｅ_６無水物またはその塩を精製することは、１つ以上の抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術を使用して混合物からクロリンｅ_６無水物またはその塩を単離することを含む。

図７は、一例示的実施形態によるアセトンｄ_６中のクロリンｅ_６無水物の^１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルを示す。表１を参照すると、位置の割当ては、以下の式Ｉのクロリンｅ_６無水物：

で示される対応する原子に従って番号が付けられる。

図８は、図７のＮＭＲスペクトルの４〜６ｐｐｍの拡大部分、ならびに同様の条件下で採取したクロリンｅ_６のＮＭＲスペクトルの４〜６ｐｐｍの拡大部分を示す。これらのグラフは、クロリンｅ_６とその無水物間のいくつかの構造の違いを明らかにする。

本開示の特定の実施形態は、中間体を調製する方法に関する。前記方法は、クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤で活性化して中間体を含む混合物を得ることを含み、前記中間体は、溶媒としてｄ_６‐アセトン／ｄ_６‐ジメチルスルホキシドを使用し、５００ＭＨｚでプロトン核磁気共鳴（^１Ｈ‐ＮＭＲ）分光法により分析すると、

の付近のｐｐｍの化学シフトを含むスペクトルを示す。

前記方法はさらに、中間体を単離することを含む。いくつかの実施形態において、中間体を単離することは、１つ以上の抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術を使用して混合物から中間体を分離することを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術は、混合物を活性シリカと接触させることを含む。

前記方法はさらに、単離した中間体を真空下で乾燥させる工程を含む。

本開示の特定の実施形態は、タラポルフィンとその塩を調製する方法に関する。前記方法は、中間体（クロリンｅ_６をカルボキシル活性化剤と合わせて、以下の式：

を有するクロリンｅ_６無水物またはその塩を含む混合物を得て、クロリンｅ_６無水物またはその塩を精製することにより調製）をアミン含有試薬と合わせて、モノアミノ酸クロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩を形成する工程を含む。いくつかの実施形態において、前記アミン含有試薬は、Ｌ‐アスパラギン酸またはそのエステルである。

本開示の特定の実施形態は、反応生成物に関する。前記反応生成物は、第１の反応体積と第２の反応体積との間のカップリング反応の生成物であって、前記第１の反応体積が、以下の式のクロリンｅ_６無水物：

と、第１の反応体積中に存在する全クロリン種に基づいて約５ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含み、前記第２の反応体積が、Ｌ‐アスパラギン酸またはそのエステルを含む、生成物に関する。いくつかの実施形態において、ｍｏｌ％と％ＡＵＣ（曲線の下の面積）の単位は、交換可能に使用される。％ＡＵＣは、曲線の下の面積の割合として定義され、約４００ｎｍまたは約４１０ｎｍの波長を有する検出信号を使用したＨＰＬＣ‐ＵＶ吸光度分析によって判定される。クロマトグラムにおいて、対象のピークの曲線の下の面積をすべてのピークの曲線の下の面積で除算することにより、％ＡＵＣを計算する。いくつかの実施形態において、％ＡＵＣは、混合物中のクロリン種が同じ発色団を共有することから、混合物中のクロリン種の濃度に比例することが予想される。したがって、ＨＰＬＣクロマトグラム中の分離した化学種の％ＡＵＣを測定することによって、反応混合物中に存在する化学種の相対濃度および／またはｍｏｌ％を判定することができる。いくつかの実施形態においては、各ＨＰＬＣグラフのピークに対する相対ＡＵＣを使用して反応混合物中に存在する化学種の相対濃度および／またはｍｏｌ％を判定してもよい。

いくつかの実施形態において、前記反応生成物は、モノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩、およびジアスパルチルクロリンｅ_６を含む。いくつかの実施形態において、前記反応生成物は、前記反応生成物中に存在する全クロリン種に基づいて約２ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６を含む。いくつかの実施形態において、前記反応生成物は、前記反応生成物中に存在する全クロリン種に基づいて約１ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６を含む。いくつかの実施形態において、前記第１の反応体積はさらに、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドを含む。

前記第１の反応体積は、精製して、分離プロセスによってジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を除去することができる。いくつかの実施形態において、前記分離プロセスは、活性シリカクロマトグラフィーである。いくつかの実施形態において、得られた活性化混合物は、アルカリ水溶液中でＬ‐アスパラギン酸（図４に示す）と合わせて、他の副生成物中にタラポルフィンナトリウムを生じる。

本開示の特定の実施形態は、クロリンｅ_６とカルボジイミドの化学反応生成物であって、前記化学反応生成物が、以下の形態のクロリンｅ_６無水物：

とジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む、化学反応生成物に関する。いくつかの実施形態において、ジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質は、前記化学反応生成物中に存在する全クロリン種の約５ｍｏｌ％未満を含む。いくつかのさらなる実施形態において、ジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質は、前記化学反応生成物中に存在する全クロリン種の約３ｍｏｌ％未満を含む。いくつかの実施形態において、前記クロリンｅ_６無水物は、前記化学反応生成物中に存在する全クロリン種の少なくとも約８５ｍｏｌ％を含む。

いくつかの実施形態において、前記カルボジイミドは、ＥＤＣまたはＤＣＣである。

本開示の特定の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩を実質的に純粋な形態で含む組成物に関する。

いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量は、組成物中の全クロリン種の約８５ｍｏｌ％を超える。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量は、組成物中の全クロリン種の約９０ｍｏｌ％を超える。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量は、組成物中の全クロリン種の約９５ｍｏｌ％を超える。

いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量は、組成物の約８５重量％を超える。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量は、組成物の約９０重量％を超える。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の全含有量は、組成物の約９５重量％を超える。

本開示の特定の実施形態は、以下の式Ｉの化合物：

またはその薬学的に許容される塩を実質的に純粋な形態で含む化学反応生成物に関する。

いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の全含有量は、前記化学反応生成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約８５ｍｏｌ％を超える。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の全含有量は、前記化学反応生成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約９０ｍｏｌ％を超える。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物の全含有量は、前記化学反応生成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約９５ｍｏｌ％を超える。

本開示の特定の実施形態は、タラポルフィンナトリウムまたはその薬学的に許容される塩の製造方法に関する。前記方法は、有機溶媒の存在下で、約８〜約１２の範囲のｐＨを有するアスパラギン酸塩組成物をクロリンｅ_６とカルボジイミドの化学反応生成物と合わせて、反応混合物を形成することを含む。いくつかの実施形態において、前記有機溶媒は、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、塩化メチレンまたはそれらの混合物から選択される。

いくつかの実施形態において、前記化学反応生成物は、以下の形態のクロリンｅ_６無水物：

とジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む。いくつかの実施形態において、ジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質は、前記化学反応生成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて約５ｍｏｌ％未満を含む。

前記方法はさらに、反応混合物を塩基性にすることを含む。いくつかの実施形態において、反応混合物を塩基性にすることは、水酸化物を加えて反応混合物のｐＨを約８〜約１２に維持することを含む。

いくつかの実施形態において、前記方法はさらに、塩基性反応混合物からタラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を沈殿させることを含んでもよい。いくつかの実施形態において、タラポルフィンまたはその薬学的に許容される塩を沈殿させることは、適した沈殿溶媒を塩基性反応混合物に加えることを含む。

前記方法はさらに、タラポルフィン（またはその薬学的に許容される塩）の沈殿物を塩基性反応混合物からろ過、遠心分離および／またはクロマトグラフィーによって分離することを含む。

本開示の特定の実施形態は、タラポルフィンナトリウムを調製する方法に関する。前記方法は、精製した中間体反応混合物を反応において利用してタラポルフィンナトリウムを調製することを含み、前記精製した中間体反応混合物は、有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質が除去されたクロリンｅ_６、クロリンｅ_６無水物、およびジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む粗反応混合物から得られたものである。

いくつかの実施形態において、前記精製した中間体反応混合物は、全クロリン種に基づいて約５％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む。いくつかの実施形態において、前記精製した中間体反応混合物は、全クロリン種に基づいて約３％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む。

いくつかの実施形態において、クロリンｅ_６環状無水物は、以下の式Ｉのクロリンｅ_６環状無水物：

またはその塩である。

いくつかの実施形態において、前記精製した中間体反応混合物はさらに、ジメチルスルホキシドを含む。いくつかの実施形態において、前記精製した中間体反応混合物はさらに、ＥＤＣまたはＤＣＣおよびジメチルホルムアミドを含む。いくつかの実施形態において、有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質は、活性シリカを使用して除去されている。

本開示の特定の実施形態は、光活性剤またはその薬学的に許容される塩を調製するプロセスに関する。前記プロセスは、以下の式の化合物：

またはその薬学的に許容される塩、有機溶媒および１つ以上のジアスパルチルクロリンｅ_６前駆物質を含む組成物を塩基性水性アスパラギン酸ナトリウム組成物と合わせて、粗モノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６反応混合物を形成することを含み、前記粗反応混合物は、粗反応混合物中に存在する全クロリン種に基づいて約２ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６を含む。

前記プロセスはさらに、反応混合物を塩基性にすることを含む。前記プロセスはさらに、実質的な量のモノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６を反応混合物から沈殿させることを含む。いくつかの実施形態において、実質的な量のモノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６を反応混合物から沈殿させることは、十分な量の有機溶媒を提供して反応混合物から存在するモノ‐Ｌ‐アスパルチルクロリンｅ_６の約５０ｍｏｌ％を超える沈殿物を生じることを含む。

いくつかの実施形態において、反応混合物を塩基性にすることは、十分な量のアルカリ性物質を反応混合物に提供して約８〜約１２の範囲のｐＨを維持することを含む。いくつかの実施形態において、反応混合物を塩基性にすることは、十分な量のアルカリ性物質を反応混合物に提供して約１０〜約１２の範囲のｐＨを維持することを含む。

いくつかの実施形態において、少なくとも１つのジアスパルチルクロリンｅ_６前駆物質は、前記反応混合物中に存在する全クロリン種の約１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％未満を含む。

本開示の特定の実施形態は、以下の形態のクロリンｅ_６無水物：

とジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む反応生成物であって、ジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質が、存在する全クロリン種の約１〜２ｍｏｌ％未満を構成する、反応生成物に関する。

（実施例１） クロリンｅ_６無水物の合成
クロリンｅ_６（２．０ｇ、３．３ｍｍｏｌ）（Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を１０ｍＬのＤＭＦに溶解した。ＥＤＣ（０．６１ｇ、３．２ｍｍｏｌ）を混合物に添加して、１．５時間反応させた。この反応混合物をシリカゲル（Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ）の層に充填し、アセトンで溶離した。着色部分を収集し、真空下で濃縮した。無水物をさらに真空下で乾燥させた。

（実施例２） タラポルフィンナトリウムの合成
ｐＨ１１に達するまで１０Ｍ ＮａＯＨを１０ｍＬの水中のアスパラギン酸（約１．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）に添加することにより、アスパラギン酸ナトリウム溶液を調製した。実施例１で得たクロリンｅ_６無水物をＤＭＦに溶解し、アスパラギン酸ナトリウム溶液に緩徐に添加した。混合物を１０Ｍ ＮａＯＨで塩基性にした。過剰のＤＭＦを暗黒色の懸濁液に添加して、生成物を沈殿させた。この生成物を濾取し、アセトンで洗浄した。この材料をアセトン中に再懸濁させて濾取した。得られた粗タラポルフィンナトリウムを真空下で乾燥させた。

前述の詳細な説明において少なくとも１つの実施例の実施形態を示したが、莫大な数の変形が存在することを理解しなければならない。また、本明細書に記載の１つ以上の例示的実施形態は、本開示の適用範囲、適用可能性または構成を何ら限定するものではないことも理解しなければならない。むしろ、前述の詳細な説明は、記載した１つ以上の実施形態を実施するのに簡便なロードマップを当業者に提供するものとなる。添付の特許請求の範囲に記載の開示およびその法的同等物の範囲から逸脱することなく、要素の機能および配置に種々の変更を行えることを理解しなければならない。

Claims (12)

1. 以下の式Ｉの化合物：
   

   

   式Ｉ
   またはその塩を含み、該式Ｉの化合物またはその塩の全含有量が、該組成物の８５重量％を超えるか、あるいは該組成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて８５ｍｏｌ％を超える、組成物。
2. 前記式Ｉの化合物またはその塩の全含有量が、前記組成物の９０重量％を超えるか、あるいは該組成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて９０ｍｏｌ％を超える、請求項１に記載の組成物。
3. 前記式Ｉの化合物またはその塩の全含有量が、前記組成物の９５重量％を超えるか、あるいは該組成物中に存在するクロリン種の全量に基づいて９５ｍｏｌ％を超える、請求項１に記載の組成物。
4. クロリンｅ_６無水物またはその塩を調製するためのプロセスであって、クロリンｅ_６を脱水剤と合わせて、以下の式を有するクロリンｅ_６無水物：
   

   

   式Ｉ
   またはその塩を含む混合物を得る工程、該クロリンｅ_６無水物またはその塩を精製する工程を含む、プロセス。
5. 請求項４に記載のプロセスであって、
   （１）前記脱水剤が、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドまたはＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩である；あるいは
   （２）前記クロリンｅ_６無水物またはその塩を精製する工程が、１つ以上の抽出技術、分離技術、クロマトグラフィー技術および／または精製技術を使用して前記混合物から該クロリンｅ_６無水物またはその塩を単離することを含む、
   プロセス。
6. モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩を調製するための方法であって、
   有機溶媒の存在下で、１０〜１２の範囲のｐＨを有するアスパラギン酸塩組成物を精製したクロリンｅ_６無水物と合わせて反応混合物を形成する工程であって、該クロリンｅ_６無水物が、以下の式Ｉ：
   

   

   式Ｉ
   またはその塩を有し、該クロリンｅ_６無水物が、該クロリンｅ_６無水物中に存在するクロリン種の全量に基づいて５ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む工程、
   該反応混合物を塩基性にする工程、
   該塩基性反応混合物から該モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩を沈殿させる工程、
   を含む、方法。
7. 請求項６に記載の方法であって、
   （１）前記有機溶媒が、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、塩化メチレンまたはそれらの混合物である；
   （２）前記反応混合物を塩基性にする工程が、水酸化物を添加して該反応混合物のｐＨを８〜１２の範囲内に維持することを含む；
   （３）前記モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩を沈殿させる工程が、適した沈殿溶媒を前記塩基性反応混合物に添加することを含む；あるいは
   （４）ろ過および／またはクロマトグラフィーによって前記塩基性反応混合物から沈殿した前記モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩を分離する工程をさらに含む
   方法。
8. モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６を調製する方法であって、精製した中間体反応混合物を利用する工程を含み、該精製した中間体反応混合物が、クロリンｅ_６、式Ｉのクロリンｅ_６無水物
   

   

   式Ｉ
   、およびジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む粗反応混合物から得られたものであり、ここで、有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質が該精製した中間体反応混合物から除去されている、方法。
9. 請求項８に記載の方法であって、
   （１）前記精製した中間体反応混合物が、該精製した中間体反応混合物中に存在するクロリン種の全量に基づいて５ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む；
   （２）前記精製した中間体反応混合物が、該精製した中間体反応混合物中に存在する全クロリン種に基づいて３ｍｏｌ％未満のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質を含む；
   （３）前記クロリンｅ_６環状無水物が、以下の式Ｉ：
   

   

   式Ｉ
   またはその塩である；
   （４）前記精製した中間体反応混合物が、ジメチルスルホキシドをさらに含む；
   （５）前記精製した中間体反応混合物が、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドまたはジメチルホルムアミド、またはそれらの組み合わせをさらに含む；あるいは
   （６）前記有意な割合のジアスパルチルクロリンｅ_６の前駆物質が、活性シリカを使用して除去されている、
   方法。
10. モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６またはその薬学的に許容される塩を調製するためのプロセスであって、
    クロリンｅ_６を脱水剤と合わせて、以下の式Ｉを有する中間体：
    

    

    式Ｉ
    またはその塩を含む混合物を得る工程、
    該式Ｉの中間体またはその塩を単離する工程、
    該単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせて、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ _６ またはその薬学的に許容される塩を形成する工程
    を含む、プロセス。
11. 請求項１０に記載のプロセスであって、
    （１）前記クロリンｅ_６を前記脱水剤と合わせる工程が、該クロリンｅ_６をカルボジイミドと反応させることを含む；
    （２）前記クロリンｅ_６を前記脱水剤と合わせる工程が、前記クロリンｅ_６とＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、またはそれらの混合物とを反応させることを含む；
    （３）前記クロリンｅ_６を前記脱水剤と合わせる工程が、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミドの存在下で、該クロリンｅ_６をカルボジイミドと反応させることを含む；
    （４）前記クロリンｅ_６を前記脱水剤と反応させる工程が、該クロリンｅ_６をＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩またはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル−カルボジイミドと反応させることを含む；
    （５）前記式Ｉの中間体またはその塩を単離する工程が、活性シリカを使用して該式Ｉの中間体またはその塩を前記混合物から分離して、実質的に純粋な式Ｉの中間体またはその塩を得ることを含む；
    （６）前記単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせる工程が、該単離した式Ｉの中間体またはその塩をアスパラギン酸ナトリウムと反応させて、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６を形成することを含む；
    （７）前記単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせる工程が、ジメチルスルホキシドの存在下で、該単離した式Ｉの中間体またはその塩をＬ−アスパラギン酸と合わせて、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６を形成することを含む；あるいは
    （８）前記単離した式Ｉの中間体またはその塩をアミン含有試薬と合わせる工程が、アルカリ水溶液中で、前記クロリンｅ_６無水物とＬ−アスパラギン酸とをカップリングさせて、モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ_６のナトリウム塩を形成する工程を含む、
    プロセス。
12. 実質的に純粋な形態の、以下の式Ｉの化合物：
    

    

    式Ｉ
    またはその塩。

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