JP5232152B2

JP5232152B2 - ２型糖尿病及び２型糖尿病慢性合併症の治療作用を持つ薬物組成物

Info

Publication number: JP5232152B2
Application number: JP2009527679A
Authority: JP
Inventors: アイシュ、グァン
Original assignee: ハイナンディーズドラッグリサーチコーポレーションリミテッド
Priority date: 2006-09-12
Filing date: 2007-09-11
Publication date: 2013-07-10
Anticipated expiration: 2027-09-11
Also published as: EP2070540B1; CN101229181A; CN101505764B; US7867979B2; WO2008043246A1; US20090176816A1; EP2070540A4; JP2010502755A; CN101505764A; EP2070540A1

Description

発明の技術分野
本発明は2型糖尿病及び2型糖尿病慢性合併症の治療作用を持つ薬物組成物に関し、その活性成分はマンゴー配糖体とベルベリンからなる。

背景技術
近年、2型糖尿病及びその多くの慢性合併症はすでに人類の健康を脅す“3番目の殺し屋”となった。統計によると、中国では2型糖尿病の標準化罹患率が80年代初期の0.9%から現在の5.21%に急激に増えた。糖耐能障害の標準化罹患率は4.76%となった。2型糖尿病の長期高血糖は生体の多くの組織と器官に危害を及ぼし、多種類の2型糖尿病慢性合併症を誘発する。例えば冠状動脈心疾患、粥状動脈硬化、脳血管疾患等の大血管障害；糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症等の細小血管障害；神経障害；糖尿病性壊疽；黄斑症、白内障、緑内障、屈折変化、虹彩毛様体病変等の眼病変である。

時下発売の血糖降下内服剤の殆どは価格が高過ぎ或は一定の有害反応を持っていて患者の信頼性が劣っている。2型糖尿病慢性合併症の発病メカニズムはまだまだはっきり知られておらず、臨床上でも比較的理想の治療用薬物は存在しない。そのため安くて効率的、低毒、血糖降下作用がある2型糖尿病慢性合併症の予防と治療に用いる薬物開発は極めて重要な臨床意義と市場価値を持っている。

マンゴー配糖体(mangiferin)はユリ科植物の知母（Anemarrhena）等の植物から抽出した天然のポリフェノール類の化合物である。分子式：C₁₉H₁₈O₁₁，分子量：422。その化学構造は下記の通りである:

マンゴー配糖体は天然のフリーラジカル除去の抗酸化剤で、薬理研究によるとマンゴー配糖体は多種の生物活性を持っている。例えば抗酸化、抗腫瘍、抗菌、抗ウィルス、血糖降下、抗炎症、利胆、免疫調節、脂質低下等の作用である。マンゴー配糖体の内服或は腹腔注射は糖尿病ラットの血糖、血中脂質を低下させる。その血糖降下のメカニズムはインシュリン感受性の増加による抗糖尿病活性の発揮にあると思われる（非特許文献１）。

最近、高血糖、酸化ストレスと糖尿病慢性合併症の間に綿密な関係があることを示す証拠がだんだん増えている。Muruganandan等の研究によると、腹腔へのマンゴー配糖体の注射は、ストレプトゾトシン（STREPTOZOTOCIN）が誘発した糖尿病ラットの脂質過酸化反応を制御し、糖尿病及び糖尿病慢性合併症ラットの酸化性損傷が引き起したHbA1cと血清クレアチンキナーゼ(CPK)量を低下させ、また動物の心臓と腎臓の損傷も有意に保護する事が分った（非特許文献２）。ラット腹腔へのマンゴー配糖体の一回の半致死注射量（LD₅₀）は365mg/kgであり（非特許文献３），マンゴー配糖体の安全性は極めていいと思われる。

マンゴー配糖体は水に溶けないため、薬形の選択、生体の生物利用、吸収等の方面で極めて大きく制限されている。

ベルベリン(berberine、Ber)の別名は黄連素で、黄連の主要な成分は毛莨科の黄連属植物の黄連Coptis chinesis Feranchの根と皮から抽出したイソキノリン・アルカロイドである。分子式：[ C₂₀H₁₈NO₄]⁺，分子量：336.37。その化学構造は下記の通りである:

ベルベリンの薬理研究によると、多種の生物活性を持っていると証明され、例えば抗菌、抗ウィルス、血糖降下、抗心拍異常、血圧降下、抗腫瘍、脂質低下等の作用がある。

動物の実験研究によると、ベルベリン（Ber）は正常なラット、アロキサン四水和物（Alloxan tetrahydrate (4H₂O)）糖尿病及び慢性合併症のラットと自然発症糖尿病及び慢性合併症のKKラットの血糖を降下できると示された。作用は強くて、持続時間も長い。同時に、ベルベリン（Ber）はKKラットの糖耐能を改善できる。近年の臨床研究も、ベルベリン（Ber）には糖尿病と慢性合併症に対抗する作用があると証明した。特に2型糖尿病と慢性合併症の治療に応用されている。このメカニズムは肝臓糖新生（Gluconeogenesis）の抑制および／あるいは末梢組織ブドウ糖解糖の促進による血糖降下の作用を生む可能性があり、即ちインシュリン依存性ではない。しかし、ベルベリンはただ中度高糖(11.1mmol/ L)の条件下だけで著しく血糖降下の効果があり、重度の高糖(22.2mmol/L)時に作用が無くなった。そこで主に糖耐能障害、空腹時血糖異常、或は糖尿病の血糖がまだ不安定な時に適用されている（非特許文献４）。

近年研究により、高血糖の持続は細胞内のアルドース還元酵素の活性を増加させ、最終的に糖尿病性の神経、網膜および各種血管病変の発生を誘導しうると示された。アルドース還元酵素活性の抑制は糖尿病の慢性合併症の治療に重要な意義をもっている。多くの学者の研究によると、ベルベリンはアルドース還元酵素の抑制に一定の作用を持っていると示された（非特許文献５）。

ベルベリンの治療用量はかなり安全で、副作用も少ない。長期に服用してもいかなる障害も見られない。一回2.0gを内服してもいかなる副作用も見られない（非特許文献６）。

ベルベリンの生物利用率は低くて、血糖降下の効率を発揮するには一定の血糖範囲が必要なので、ベルベリンの糖尿病患者での臨床使用範囲は大きく制限されている。

Miura T，Ichiki H，Hashimoto I，et al. Antidiabetic activity of a xanthone compound， mangiferin. Phytomedicine，2001，8(2):85-87 Muruganandan S, Gupta S, Kataria M, et al. mangiferin protects the streptozptocin-induced oxidative damage to cardiac and renal tissues in rats. Toxicology,2002,176(3):165-173 余勝民、鐘鳴.マンゴーグリコシド薬理研究の進展.中国漢方医薬科学技術、1999，6(3):199-200 殷峻、胡仁明、陳名道。Dimethylbiguanide、TroglitazoneとベルベリンのHep G2細胞の糖消耗作用比較.中華内分泌交替雑誌、2002，18(6):488-489 劉長山、董硯虎。漢方薬コガネヤナギ配糖体（Baicalin）とベルベリンの糖尿病ラットのアルドース還元酵素の活性作用に関わる観察.中国の2型糖尿病雑誌、1996，4(3):163 季宇彬。漢方薬有効成分の薬理と応用、ハルビン:黒龍江省科学技術出版社、2004，77

発明の内容
安く効率的、低毒、血糖降下作用があり、また2型糖尿病の慢性合併症の予防・治療に用いる薬物を開発するために、本発明者は大量の研究によって、ベルベリンとマンゴー配糖体を一定比率で組み合わせて、以下の意外な効果が生じたことを発見した：

まず、ベルベリンとマンゴー配糖体を組み合わせると、2型糖尿病の治療効果が著しく強くなり、2者は相乗作用を持っている。具体的な表現は：

1、ベルベリンのインシュリン非依存性の血糖降下作用とマンゴー配糖体のインシュリン感受性改善作用を有機的に結合して、より著しく血糖降下の作用を生んだ。
2、マンゴー配糖体の抗酸化作用および脂質低下作用とベルベリンの脂質低下、アルドース還元酵素の抑制作用を有機的に結合して、有効に2型糖尿病慢性合併症の予防・治療に使える。

その次に、マンゴー配糖体は水に溶けないため、2者を組み合わせたところ、マンゴー配糖体の可溶性が著しく増加した。

最後に、マンゴー配糖体とベルベリンの生物利用率はすべて低いから、2者を組み合わせたところ生物利用率が著しく上がった。

この組成物の有益効果に鑑みて、マンゴー配糖体とベルベリン2単体の内服投薬の高い安全性と低いコストを結合して、この組成物の薬物目的は安く効率的、低毒、血糖降下作用を獲得できるし、また2型糖尿病の慢性合併症の予防・治療に使えると分かる。

課題を解決する為の手段は下記の通りである：
本発明は2型糖尿病治療薬物の調製用組成物を提供し、この組成物が薬効成分とする原料はマンゴー配糖体とベルベリンから構成され、マンゴー配糖体とベルベリンの重量比は1:0.1-1:20であることを特徴とする。

本発明のマンゴー配糖体とベルベリンの好ましい比率範囲の重量比は1:1-1:10である。

本発明のマンゴー配糖体とベルベリンの更に好ましい比率範囲の重量比は1:3-1:6である。

本発明の前記薬物組成物は、ベルベリンが塩酸ベルベリン、硫酸ベルベリン、タンニン酸ベルベリン、或はベルベリンは医学上で受け入れるほかのベルベリン塩でもいいことを特徴とする。

本発明のもう一つの目的は2型糖尿病の治療用薬物の調製に応用する前記薬物組成物を提供することである。

本発明の前記薬物組成物は2型糖尿病の治療用薬物の調製に応用され、2型糖尿病治療用薬物は血糖降下の薬物であることを特徴とする。

本発明の前記薬物組成物は2型糖尿病の治療用薬物の調製に応用され、2型糖尿病治療用薬物は2型糖尿病慢性合併症の予防・治療に用いる薬物であることを特徴とする。

本発明の前記薬物組成物は2型糖尿病の治療用薬物の調製に応用され、2型糖尿病慢性合併症は具体的に2型糖尿病併発の大血管障害、細小血管障害、神経障害、糖尿病性壊疽、黄斑症、白内障、緑内障、屈折変化、虹彩毛様体病変の1種類か何種類であることを特徴とする。

本発明は2型糖尿病治療作用を持っている薬物を提供する。この薬物は前記薬物組成物と薬用補助剤から構成されることを特徴とする。

本発明の前記薬物は内服剤型で、具体的には錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸薬、滴丸剤、シロップ、内服液、内服懸濁液である。

本発明組成物のラット有効用量の範囲は20−350mg/日で、異種動物の用量換算公式で換算した人体用量は200−3500mg/日/人である。投薬方式は内服で、毎日3−4回である。動物と人体間の差異により、実際の臨床応用の用量はある程度の調整が許容される。

次の具体的な実施方式で、本発明を更に説明したが、これらに限らない。

具体的な実施方式
本発明のベルベリン、塩酸ベルベリン、硫酸ベルベリン、タンニン酸ベルベリン、マンゴー配糖体はすべて市場で購入でき（価格が一キログラムで1000人民元ぐらい）、自ら常規通りに抽出し分離などの方法によって、獲得してもいい。

調製例1 ベルベリンの調製
塩酸ベルベリン（純度が98%以上）を取り、お湯で溶解させ、溶液中にアンモニア水でpH10-12に調製し、静かに一晩置いて、沈殿物を抽出して、濾過、乾燥して、ベルベリンを獲得でき、高速液体法(HPLC)で測定した含有量は98.5%である。

調製例2 マンゴー配糖体の調製
Anemarrhena内服剤に75%アルコールを入れ、還流で2度抽出し、毎回は1時間で、減圧してアルコールを回収する。マクロ多孔樹脂に吸着させ、水で洗ってから20%アルコールで溶離させ、溶離液を減圧、濃縮してから粗製の新マンゴー配糖体を獲得する。また40%アルコールで溶離して、溶離液を減圧、濃縮してから粗マンゴー配糖体を獲得する。粗製の新マンゴー配糖体と粗製のマンゴー配糖体の再結晶化精製によって新マンゴー配糖体とマンゴー配糖体の純品を獲得して、その純度はHPLC測定によって、95%以上である。

調製例3 マンゴー配糖体錠剤の調製
マンゴー配糖体100gを量り取り、80目篩を通し、微晶セルロース100gを入れて、澱粉100gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤制軟材を入れて、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成し、適量の滑沢剤を入れて、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる；薬含有量は100mg/錠である。

調製例4 マンゴー配糖体ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体90.9g、ベルベリン9.1gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、カルボキシメチル・セルロース（Carboxymethyl Cellulose）80gを入れて、アルファ化澱粉120gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れて、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、適量の滑沢剤を入れ、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる。

調製例5 マンゴー配糖体ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体50g、ベルベリン50gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、微晶セルロース60gを入れ、アルファ化澱粉140gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れて、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成し、適量の滑沢剤を入れ、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる。

調製例6 マンゴー配糖体ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体25g、ベルベリン75gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、微晶セルロース40gを入れ、アルファ化澱粉160gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れ、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、適量の滑沢剤を入れ、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる。

調製例7 マンゴー配糖体ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体14g、ベルベリン86gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、微晶セルロース60gを入れて、アルファ化澱粉140gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れ、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、適量の滑沢剤を入れ、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる。

調製例8 マンゴー配糖体ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体9g、ベルベリン91gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、微晶セルロース30gを入れ、澱粉170gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れ、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、適量の滑沢剤を入れ、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる。

調製例9 マンゴー配糖体ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体4.8g、ベルベリン95.2gを量り取り、80目篩を通し、微晶セルロース40gを入れて、アルファ化澱粉160gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れて、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、適量の滑沢剤を入れて、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる。

調製例10 ベルベリン錠剤の調製
ベルベリン100gを量り取り、80目篩を通して、適量の澱粉を希釈剤として入れて製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れて、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、適量の滑沢剤を入れて、錠を押し出し、フィルムで包んでから終わる；含薬量は100 mg/錠である。

調製例11 マンゴー配糖体塩酸ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体25g、塩酸ベルベリン75gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、メチル・セルロース（Methyl Cellulose）20gを入れて、アルファ化澱粉180gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れて、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、適量の滑沢剤を入れて、錠を押し出し、1000錠に作り、フィルムで包んでから終わる。

調製例12 マンゴー配糖体タンニン酸ベルベリン錠剤の調製
マンゴー配糖体28g、タンニン酸ベルベリン172gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、矯味剤の蔗糖600gとカルボキシメチル・セルロース（Carboxymethyl Cellulose）200gを入れて、製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟材を入れて、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、1000ｇにし、包装してから終わる。

調製例13 マンゴー配糖体塩酸ベルベリンカプセルの調製
マンゴー配糖体14.3g、塩酸ベルベリン85.7gを量り取り、均一に混合して、80目篩を通して、微晶セルロース20gを入れ、アルファ化澱粉80gを希釈剤として製剤処方を組み立て、均一に混合して、粘着剤柔軟剤を入れ、24目篩で粒を作り、乾燥後に粒を生成して、カプセルに入れ、1000錠に作ってから終わる。

調製例14 マンゴー配糖体ベルベリン錠剤の調製
適量のマンゴー配糖体とベルベリンを量り取り、1：4の比率で混合して、400gのポリエチレングリコール4000を水浴で加熱溶解させてから、マンゴー配糖体とベルベリンの組成物100gを入れて、75℃の温度で攪拌して、均一に分散して、薬液を滴丸機の75℃恒温蓄料缶に移して、滴液口径は30./4.0mm、滴下速度は60滴/分、冷却剤はジメチコーン（dimethicone）で、冷却液の温度は20℃±2℃の条件で薬丸の重さを40mgに調節して、滴下して丸を作り、滴丸表面の冷却液を除き、分けて入れてから終わる。

実施例1：マンゴー配糖体とベルベリンの組成物の溶出率の実験
調製例3、6、10のサンプルから各6錠を取り、それぞれMAG、MB、BERと標記して、回転バスケットに置いて、pH6.8の燐酸緩衝溶液900ml中に、中国薬局方第2部付録の溶出率項目によって、回転バスケット法を採用し、回転速度は100r/minである。5、10、20、30、60、120、240、360、480minにサンプリングして、毎回2ml、同時に、直ちに同じ温度の媒質2mlを補充して、取り出した液体を0.45μm濾過膜で濾過して、マンゴー配糖体とベルベリンの濃さを測り、平均溶出率を計算する。その結果は表1を参照する。

結論：マンゴー配糖体ベルベリン組成物のマンゴー配糖体の溶出率は単体製剤より著しく上がった。

実施例2 マンゴー配糖体ベルベリンの組成物と、マンゴー配糖体、ベルベリン内服との生物利用率の比較。

1、液体薬調製
適量のマンゴー配糖体を量り取り、1%カルメロースナトリウム（Carmellose Sodium）溶液を入れ懸濁し、25mg/mLの懸濁液を調製し（これはサンプルA）；適量の塩酸ベルベリンを量り取り、1%カルメロースナトリウム（Carmellose Sodium）溶液を入れ、濃度が25mg/mLの懸濁液を調製し（これはサンプルB）；適量のマンゴー配糖体と塩酸ベルベリンを量り取り、1：4の比率で混合し、1%カルメロースナトリウム（Carmellose Sodium）溶液を入れ、濃度は50mg/mLの懸濁液に調製する（これはサンプルC）。

2、胃 Lavaging投薬方案
ラットを16 h禁食させ、自由に飲水させ、別々に胃 Lavaging投薬し、サンプルAの用量は40 mg/kg、サンプルBの用量は160 mg/kg、サンプルCの用量は200mg/kgである。投薬の5min前と投薬後0、1、2、3、4、5、6、8、10、12、15、24hに血0.4mlを取って、直ちにヘパリンの遠心管に入れ、3000r.min-1の速さで10min遠心し、血清を獲得できる。

3、サンプル処理
血漿サンプルの処理：血清サンプル100μLを精密に取り、アセトニトリル（Acetonitrile）--酢酸（9：1）400μLを入れ、ボルテックス（vortex）1.5min、3000r/min速さで10min遠心し、上清をきれいな試験管に取り、窒素で乾燥し、残留物に100μL移動相を入れ、ボルテックス1.5min、3000r/min速さで10min遠心し、上清を取り、鋭底瓶に入れ、HPLCで20μLサンプリングする。

4、サンプル測定
4.1 器具
1100シリーズの高速液体クロマトグラフィー(米国Agilent会社)：G1312A 2元ポンプ、G1313A自動サンプラーを含む。
4.2 血漿サンプル測定のクロマトグラフィー条件とクロマトグラフィーカラム：discover ODSカラム(250mm×6mm、5μm)；移動相、メチル・アルコール -0.1%H₃PO₄水溶液勾配溶離（Gradient elution）；流速1.0ml/min、検査・測定波長：264nm，カラム温度:40℃である。
4.3 結果

上記の結果：内服マンゴー配糖体塩酸ベルベリンの組成物は、それぞれの単独服用よりも生物利用率が著しく上がり、組成物群中のマンゴー配糖体とベルベリンの血中薬濃度（Cmax）とAUC値は2者単独服用のCmaxとAUC値に比べより高く、マンゴー配糖体ベルベリンの組成物はお互いに吸収を促進する作用があることが示された。

下記の実施例では腎臓と眼水晶体を2型糖尿病慢性合併症の代表器官とした。

GK（Goto-Kakizaki）ラットは自然発症糖尿病モデルで、この発病メカニズムはまた臨床II型糖尿病の発病メカニズムと極めて似ていて、糖尿病を発作してから、急速に高血糖、インシュリン分泌の減少等が現れて、後期に網膜症、細小血管障害、神経障害、腎症を併発する。それゆえ2型糖尿病の研究に広く応用され、下記実験はGKラットが糖尿病モデルである。

実施例3 異なる用量のマンゴー配糖体、ベルベリン、組成物の2型糖尿病のラットへの影響

1、薬物と動物
1.1 薬物：
調製例1、2に基づきマンゴー配糖体とベルベリンを調製し、それから投薬用量と配合比率に応じて混合或いは希釈して完成する。
1.2 試薬：
還元型補酵素II（NADPH）、還元型補酵素I（NADH）：分析試薬（Analytical reagent）、Sigma化司の製品；DL−グリセルアルデヒド：分析試薬（Analytical reagent）、イタリアRoth社の製品。
1.3 動物：
正常なSPF級Wistarラット及び4月齢のGKラットは、雄と雌は各半分で、皆上海の斯莱克実験動物有限会社から買ってきた。
正常対照以外、残りのラットは高脂飼料で飼育する（飼料中の蛋白の含有量が20%で、コレステロールの含有量が3.5%である）。

2、実験群
ラットを1週間順応飼育してから、ランダムに血糖値が11.1mmol/L以上のGKラットを選び、モデル群とマンゴー配糖体の小用量群（10mg/kg）、マンゴー配糖体の中用量群（30mg/kg）、マンゴー配糖体の大用量群（200mg/kg）；ベルベリンの小用量群（10mg/kg）、ベルベリンの中用量群（20mg/kg）、ベルベリンの大用量群（150mg/kg）；組成物の小用量群［マンゴー配糖体（10mg/kg）＋ベルベリン（10mg/kg）］、組成物の大用量群［マンゴー配糖体（200mg/kg）＋ベルベリン（150mg/kg）］に分ける。Wistarラットを正常な対照群とする。1群のラットは10匹である。毎日固定時に胃 Lavaging方式で投薬する。対照群に同量の生理食塩水を与える。共に12週間投薬する。

3、観察指標
3.1 血糖と血中脂質：実験が終わった時に血の標本、血糖、血中脂質（トリグリセリド、コレステロール）を収集し、HITACHI7080自動生物化学分析計で検査・測定する。
3.2 アルドース還元酵素（AR）活性：試験が終わった時に左側の水晶体にグリセリンを入れ、-80℃の冷蔵庫に保存し、AR活性の測定に使う。水晶体AR活性測定はMaragoudakisなどの方法を参照し、少し変更する：即ち、NADPHは340nmでの吸光値の低下を記録し、10Uで酵素活性を表す。本研究は2種の反応体系を使い、第1種反応体系は67mmol/L、pH6.2のNa⁺-K⁺燐酸緩衝液体、10mmol/LのDL−グリセルアルデヒド、5mmol/Lの2-メルカプトエタノール、0.1mmol/LのNADPHと適量の酵素を含む；実験杯は全部の試薬を含み、対照杯は２回蒸留水を基質DL−グリセルアルデヒドの代わりに用いる。第2種反応体系は0.1mmol/LのNADHをNADPHの代わりに用い、ほかの試薬は第1種反応体系と同じである。組織ホモジネート酵素の活性を測定し、同時に蛋白の含有量を測定し、1単位の酵素活性は1minに産生した1μmol NADP^＋（あるいはNDA^＋）酵素量であると規定し、各組織酵素活性を比活性を用いて比較し、比活性＝酵素単位/mg蛋白。

3.3 酸化指標
3.3.1 組織ホモジネート調製：ラットに投薬12週後、大腿動脈瀉血で殺して、腎臓組織を取り、4℃の予め冷却した生理食塩水で血液を洗い、濾紙で水分を乾くまで吸い込んでから重さを量り、1gの腎臓組織に生理食塩水10mlを入れて、ホモジナイザーを10000回／分の速さで10秒回転し、3回繰り返し、10％のホモジネートを調製し、4000回/分の速さで10分遠心し、上清を取り、-20℃温度で保存して測定を待つ。
3.3.2 生物化学指標の測定：
3.3.2.1 スーパーオキシド・ジスムターゼ（SOD）：キサンチン酸化酵素（Xanthine oxidase）法によって測定し、試薬箱は南京バイオロジカルエンジニアリングの研究所で買って来た；
3.3.2.2 マロンジアルデヒド（MDA）：チオバルビツール酸（Thiobarbituric acid）法によって測定し、試薬箱は南京バイオロジカルエンジニアリング研究所で買って来た。
3.4 統計学的分析：測定データ値は平均標準偏差

で表す。2群の比較にはt検定を用いる。

4、結果
10mg/kgマンゴー配糖体と10mg/kgベルベリン群は2型糖尿病のラットの血糖、血中脂質、AR、MDA、SODを改善しなかった；30mg/kg マンゴー配糖体と20mg/kgベルベリン群はすべて一定の程度に2型糖尿病ラットの血糖、血中脂質、AR、MDA、SODを改善した。
組成物の小用量群［マンゴー配糖体（10mg/kg）＋ベルベリン（10mg/kg）］は著しく2型糖尿病ラットの血糖、血中脂質、AR、MDA、SODを改善し（モデル群に比べp＜0.01）、さらには30mg/kgマンゴー配糖体と20mg/kgベルベリン群と比較して更に著しい相違もある（P＜0.05）。組成物のマンゴー配糖体とベルベリンは相乗作用を持っていることが示された。
組成物の大用量群［マンゴー配糖体（200mg/kg）＋ベルベリン（150mg/kg）］は2型糖尿病ラットの血糖、血中脂質、AR、MDA、SODを著しく改善した（モデル群に比べP＜0.001）。詳しくは表4を参照する。

5、結論
上記述べたところを総合すれば、マンゴー配糖体とベルベリンの組成物は、マンゴー配糖体、ベルベリンの各単体より更に強く血糖降下の活性を持ち、且つ脂質低下活性を持ち、腎臓酸化指標と水晶体のAR活性を改善したので、糖尿病慢性合併症の予防と治療の作用を持っていると判明した。

実施例4 異なる配合割合の組成物の2型糖尿病のラットへの影響

1、薬物と動物
1.1 薬物：調製例1、2に基づきマンゴー配糖体とベルベリンを調製し、それから表3の投薬用量と配合比率で混合して完成する。
1.2 動物：正常なSPF級WistarラットとGKラットは、皆上海の斯莱克実験動物有限会社で買って来た。
正常な対照以外、残りのラットは高脂の飼料で飼育する（飼料中の蛋白の含有量が20%で、コレステロールの含有量が3.5%である）。

2、実験群
ラットを1週間順応飼育した後、ランダムに血糖値が11.1mmol/L以上のGKラットを選び、モデル群と組成物群に分ける（表3のように）。Wistarラットを正常な対照群とする。1群はラット10匹である。毎日固定時に胃 Lavaging方式で投薬する。対照群に同量の生理食塩水を与える。共に12週間投薬する。

3、観察指標
実施例1と同じ。

4、結果
結果は表5のように、異なる配合比率の薬物組成物には2型糖尿病ラットの血糖、血中脂質、AR、SOD、MDAを著しく改善する作用があることが示された。

Claims

薬効成分とする原料はマンゴー配糖体とベルベリンからなり、マンゴー配糖体とベルベリンの重量比は1:0.1-1:20であることを特徴とする2型糖尿病治療薬物の調製に使う薬物組成物。
マンゴー配糖体とベルベリンの重量比は1:1-1:10であることを特徴とする請求項１に記載の薬物組成物。
マンゴー配糖体とベルベリンの重量比は1:3-1:6であることを特徴とする請求項２に記載の薬物組成物。
ベルベリンは塩酸ベルベリン、硫酸ベルベリン、タンニン酸ベルベリン、或はベルベリンは医学上で受け入れるほかのベルベリン塩でもいいことを特徴とする請求項１に記載の薬物組成物。
2型糖尿病治療用薬物の調製に応用する請求項１に記載の薬物組成物。
2型糖尿病治療用薬物の調製に応用し、前記2型糖尿病治療用薬物は血糖降下の薬物であることを特徴とする請求項５に記載の薬物組成物。
2型糖尿病治療用薬物の調製に応用し、前記2型糖尿病治療用薬物は慢性糖尿病合併症の予防・治療用薬物であることを特徴とする請求項５に記載の薬物組成物。
2型糖尿病治療用薬物の調製に応用し、前記2型糖尿病慢性合併症は具体的に2型糖尿病併発の大血管障害、細小血管障害、神経障害、糖尿病性壊疽、黄斑症、白内障、緑内障、屈折変化、虹彩毛様体病変中の1種類か何種類であることを特徴とする請求項７に記載の薬物組成物。
請求項１に記載の薬物組成物と薬用補助剤からなることを特徴とする2型糖尿病治療作用を持つ薬物。
内服剤型で、具体的には錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸薬、滴丸剤、シロップ、内服液、内服懸濁液である請求項９に記載の薬物。