CN114288296B - 药物组合物及其在制备抗骨质疏松药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种药物组合物及其在制备抗骨质疏松药物中的应用。按物质的量份计,该药物组合物包括:7.64‑40.90份芒果苷,4.26‑7.39份四氢表小檗碱,24.33‑35.31份黄柏碱,10.11‑14.64份木兰花碱,2.30‑4.26份13‑羟基氧化小檗碱,0.12‑0.29份巴马汀和17.96‑30.71份小檗碱。该药物组合物不仅能显著降低血糖,而且能显著提高糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨面积、颅骨光密度;提高碱性磷酸酶活性、促进骨形成相关基因表达;降低抗酒石酸酸性磷酸酶活性、降低骨吸收相关基因表达;对机体无任何毒害和副作用,使用安全可靠,具有良好的抗骨质疏松药物的研究开发前景。
Description
技术领域
本发明属于糖尿病治疗技术领域,具体涉及一种药物组合物及其在制备抗骨质疏松药物中的应用。
背景技术
糖尿病骨质疏松症是糖尿病并发骨量减少、骨微结构改变、骨脆性增加等易发生骨折的一种全身性、代谢性骨骼疾病,在糖尿病患者中发病率高达60%,已成为长期严重疼痛和功能障碍的主要原因。
在目前的糖尿病骨质疏松症临床治疗中,一般采用骨吸收抑制剂(如双磷酸盐、激素、降钙素等)和骨形成促进剂(如甲状旁腺激素类似肽等);然而上述治疗药物仍存在较多不足,主要表现在:(1)骨吸收抑制剂长期服用后,易出现下颌部坏死、非典型股骨骨折、心脏病与乳腺癌高发等副作用;(2)骨形成促进剂有导致骨肉瘤或其他骨肿瘤的风险。
由于糖尿病骨质疏松症的发病机理较为复杂,仅仅依靠治疗骨质疏松药物或者糖尿病药物进行治疗无法阻断糖尿病骨质疏松症的关键病理环节,导致治疗效果不理想。因此,需要同时具备降血糖功能和改善骨代谢功能的药物才能达到有效治疗糖尿病骨质疏松症的目的。
发明内容
本发明的发明目的是提供一种药物组合物及其在制备抗骨质疏松药物中的应用,该药物组合物能够起到降血糖和防治糖尿病骨质疏松症的作用。
为实现上述发明目的,本发明的技术方案为:
一种药物组合物,按物质的量份计,包括:7.64-40.90份芒果苷,4.26-7.39份四氢表小檗碱,24.33-35.31份黄柏碱,10.11-14.64份木兰花碱,2.30-4.26份13-羟基氧化小檗碱,0.12-0.29份巴马汀和17.96-30.71份小檗碱。
本发明的药物组合物不仅能够显著降低血糖,而且能够显著提高糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨面积(P<0.01)、颅骨光密度(P<0.01);提高碱性磷酸酶活性(P<0.01)、促进骨形成相关基因(alp、opg、runx2)表达(P<0.01);降低抗酒石酸酸性磷酸酶活性(P<0.01)、降低骨吸收相关基因(acp5α、sost、rankl)表达(P<0.01);该药物组合物对机体无任何毒害和副作用,使用安全可靠,显示该药物组合物具有良好的降血糖药物、抗糖尿病骨质疏松症药物和抗骨质疏松药物的研究开发前景。
基于此,本发明还提供了上述的药物组合物在制备降血糖药物、抗糖尿病并发症药物及抗骨质疏松药物中的应用。
作为优选,所述的抗糖尿病并发症药物包括抗糖尿病骨质疏松症药物、抗糖尿病肾病药物、抗糖尿病神经病变药物和抗糖尿病血管并发症药物中的至少一种。
作为进一步优选,所述的抗糖尿病并发症药物包括抗糖尿病骨质疏松症药物。
本发明还提供了一种降血糖药物、抗糖尿病并发症药物和抗骨质疏松药物,上述药物中均含有本发明的药物组合物。
作为优选,按物质的量份计,上述的药物组合物包括:7.64-40.90份芒果苷,4.26-7.39份四氢表小檗碱,24.33-35.31份黄柏碱,10.11-14.64份木兰花碱,2.30-4.26份13-羟基氧化小檗碱,0.12-0.29份巴马汀和17.96-30.71份小檗碱。
作为优选,按物质的量份计,上述的药物组合物包括:19.69份芒果苷,6.01份四氢表小檗碱,33.26份黄柏碱,12.94份木兰花碱,2.92份13-羟基氧化小檗碱,0.22份巴马汀和24.96份小檗碱。
与现有技术相比,本发明技术方案的有益效果体现在:
本发明的药物组合物不仅能够显著降低血糖,而且能够显著提高糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨面积(P<0.01)、颅骨光密度(P<0.01);提高碱性磷酸酶活性(P<0.01)、促进骨形成相关基因(alp、opg、runx2)表达(P<0.01);降低抗酒石酸酸性磷酸酶活性(P<0.01)、降低骨吸收相关基因(acp5α、sost、rankl)表达(P<0.01);该药物组合物对机体无任何毒害和副作用,使用安全可靠,显示该药物组合物具有良好的降血糖药物、抗糖尿病骨质疏松症药物和抗骨质疏松药物的研究开发前景。
附图说明
图1为药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨面积的影响;
其中,Area表示颅骨面积,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏斑马鱼模型组,C表示治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/L),##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图2为药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨光密度的影响;
其中,IOD表示颅骨光密度,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏斑马鱼模型组,C表示治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/L),##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图3为药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼碱性磷酸酶活性的影响;
其中,TRAP activity表示碱性磷酸酶活性,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏斑马鱼模型组,C表示治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg);##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图4为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼alp基因表达的影响;
其中,mRNA levels表示基因水平,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏松斑马鱼模型组,C表示低剂量治疗组(给予实施例1药物组合物0.1mg/kg),D表示中剂量治疗组(给予实施例1药物组合物1mg/kg),E表示高剂量治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg),F表示阳性药物治疗组(给予二甲双胍3mg/kg)。##表示和空白组相比P<0.01,*表示和模型组相比P<0.05,**表示和模型组相比P<0.01;
图5为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼opg基因表达的影响;
其中,mRNA levels表示基因水平,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏松斑马鱼模型组,C表示低剂量治疗组(给予实施例1药物组合物0.1mg/kg),D表示中剂量治疗组(给予实施例1药物组合物1mg/kg),E表示高剂量治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg),F表示阳性药物治疗组(给予二甲双胍3mg/kg)。#表示和空白组相比P<0.05,##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图6为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼runx2基因表达的影响;
其中,mRNA levels表示基因水平,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏松斑马鱼模型组,C表示低剂量治疗组(给予实施例1药物组合物0.1mg/kg),D表示中剂量治疗组(给予实施例1药物组合物1mg/kg),E表示高剂量治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg),F表示阳性药物治疗组(给予二甲双胍3mg/kg)。##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图7为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼抗酒石酸酸性磷酸酶的影响;
其中,TRAP activity表示抗酒石酸酸性磷酸酶活性,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示斑马鱼模型组,C表示治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg),##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图8为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼acp5α基因表达的影响;
其中,mRNA levels表示基因水平,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏松斑马鱼模型组,C表示低剂量治疗组(给予实施例1药物组合物0.1mg/kg),D表示中剂量治疗组(给予实施例1药物组合物1mg/kg),E表示高剂量治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg),F表示阳性药物治疗组(给予二甲双胍3mg/kg);##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图9为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼sost基因表达的影响;
其中,mRNA levels表示基因水平,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏松斑马鱼模型组,C表示低剂量治疗组(给予实施例1药物组合物0.1mg/kg),D表示中剂量治疗组(给予实施例1药物组合物1mg/kg),E表示高剂量治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg),F表示阳性药物治疗组(给予二甲双胍3mg/kg);##表示和空白组相比P<0.01,*表示和模型组相比P<0.05,**表示和模型组相比P<0.01;
图10为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼runkl基因表达的影响。
其中,mRNA levels表示基因水平,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏松斑马鱼模型组,C表示低剂量治疗组(给予实施例1药物组合物0.1mg/kg),D表示中剂量治疗组(给予实施例1药物组合物1mg/kg),E表示高剂量治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg),F表示阳性药物治疗组(给予二甲双胍3mg/kg);##表示和空白组相比P<0.01,*表示和模型组相比P<0.05,**表示和模型组相比P<0.01;
图11为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马葡萄糖水平的影响;
其中,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏斑马鱼模型组,C表示治疗组(给予实施例1药物组合物10mg/kg);##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;
图12为不同药物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨面积的影响;
其中,Area表示颅骨面积,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏斑马鱼模型组,C-M表示治疗组(依次为实施例1药物组合物治疗组、芒果苷治疗组、四氢表小檗碱治疗组、黄柏碱治疗组、木兰花碱治疗组、13-羟基氧化小檗碱治疗组、巴马汀治疗组、小檗碱治疗组,给药剂量均为10mg/L),##表示和空白组相比P<0.01,*表示和模型组相比P<0.05,**表示和模型组相比P<0.01;$$表示和实施例1相比P<0.01;
图13为不同药物组合物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨面积的影响;
其中,Area表示颅骨面积,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏斑马鱼模型组,C-G依次表示实施例1-5药物组合物治疗组(给药剂量均为10mg/L),##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;$$表示和实施例1相比P<0.01。
图14为不同药物组合物处理对糖尿病骨质疏松斑马鱼颅骨面积的影响;
其中,Area表示颅骨面积,%Control表示和空白对照组相比,A表示空白对照组,B表示糖尿病骨质疏斑马鱼模型组,C-J依次表示实施例1、对比例1-7药物组合物治疗组(给药剂量均为10mg/L),##表示和空白组相比P<0.01,**表示和模型组相比P<0.01;$$表示和实施例1相比P<0.01。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细说明。
实施例1
一种药物组合物,按物质的量计,包括:19.69份芒果苷,6.01份四氢表小檗碱,33.26份黄柏碱,12.94份木兰花碱,2.92份13-羟基氧化小檗碱,0.22份巴马汀和24.96份小檗碱。
按上述物质的量,将各原料混合,即获得本实施例的药物组合物。
为研究本实施例的药物组合物抗糖尿病骨质疏松症的功能,取AB系斑马鱼作为试验对象,分别进行幼鱼实验和成鱼实验;其中,幼鱼实验用于观察药物组合物对颅骨骨量和光密度的影响,而成鱼实验用于观察药物组合物在促进骨形成和抑制骨吸收方面的发挥作用。
(1)颅骨骨量和光密度观察
在幼鱼饲养水体中加入链脲佐菌素(0.30mmol/L),以制作糖尿骨质疏松斑马鱼模型;将健康幼鱼作为空白组,将糖尿病骨质疏松症斑马鱼分为模型组和治疗组(给予药物组合物10mg/L),连续治疗1周后,测量各组斑马鱼(n=6)的体征;结果如图1和图2所示。
由图1和图2可见,与空白组相比,模型组斑马鱼的颅骨骨量和颅骨光密度均显著降低(P<0.01);而与模型组相比,治疗组斑马鱼在经过1周的给药治疗后,颅骨面积显著提高(P<0.01),颅骨光密度提高(P<0.01)。
(2)成鱼试验
取成年斑马鱼,腹腔注射链脲佐菌素350mg/kg以制作糖尿骨质疏松斑马鱼模型;将健康斑马鱼作为空白组,将糖尿骨质疏松斑马鱼分为模型组、低剂量治疗组(给予药物组合物0.1mg/kg)、中剂量治疗组(给予药物组合物1mg/kg)、高剂量治疗组(给予药物组合物10mg/kg)和阳性对照组(给予二甲双胍3mg/kg),连续治疗2周后测量各组斑马鱼(n=6)的体征。
1)促进骨形成作用研究
用ELISA法检测各组斑马鱼体内碱性磷酸酶的活性,重复测量3次,取平均值,测量结果见图3;同时,采用RT-PCR技术检测骨形成相关基因(alp、opg、runx2)的表达水平,重复测量3次,取平均值,测量结果如图4、图5和图6所示。
由图3可见,与空白组相比,模型组斑马鱼的碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.01);而与模型组相比,高剂量治疗组斑马鱼的碱性磷酸酶活性显著上升(P<0.01)。
由图4、图5和图6可见,与空白组相比,模型组斑马鱼中骨形成相关基因alp(P<0.01)、opg(P<0.01)、runx2(P<0.01)的表达水平均显著降低;而与模型组相比,低剂量治疗组、中剂量治疗组和高剂量治疗组的骨形成相关基因alp的表达水平均显著上升(P<0.01);中剂量治疗组和高剂量治疗组的骨形成相关基因opg的表达水平均显著上升(P<0.01);低剂量治疗组、中剂量治疗组和高剂量治疗组的骨形成相关基因runx2的表达水平均显著上升(P<0.01)。中剂量组和高剂量组的alp、opg、runx2的表达与阳性对照组相当甚至高于阳性对照组。
以上研究结果表明,本发明的药物组合物能够起到促进骨形成的作用,对扭转糖尿病骨质疏松症有显著效果。
2)抑制骨吸收作用研究
用ELISA法检测各组斑马鱼体内抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,重复测量3次,取平均值,测量结果见图7;同时,采用RT-PCR技术检测骨吸收相关基因(acp5α、sost、rankl)的表达水平,重复测量3次,取平均值,测量结果如图8、图9和图10所示。
由图7可见,与空白组相比,模型组斑马鱼的抗酒石酸酸性磷酸酶活性显著提高(P<0.01);而与模型组相比,高剂量治疗组斑马鱼的抗酒石酸酸性磷酸酶活性显著降低(P<0.01),与空白组相当。
由图8、图9和图10可见,与空白组相比,模型组斑马鱼的骨吸收相关基因(acp5α、sost、rankl)的表达水平均显著上调(P<0.01);而与模型组相比,低剂量治疗组、中剂量治疗组和高剂量治疗组的骨吸收相关基因acp5α的表达水平均显著下调(P<0.01);中剂量治疗组和高剂量治疗组的骨吸收相关基因sost的表达水平均显著下调(P<0.01)且与阳性对照组相当甚至低于阳性对照组;低剂量治疗组、中剂量治疗组和高剂量治疗组的骨吸收相关基因rankl的表达水平均显著下调(P<0.01)。
以上研究结果表明,本发明的药物组合物能够起到抑制骨吸收的作用,对抑制和减少糖尿病骨质疏松症引起的骨量流失具有显著效果。
综上所述,本药物组合物不仅具有逆转糖尿病导致的骨形成抑制,而且还能抑制糖尿病导致的骨吸收上调,可用于制备抗糖尿病骨质疏松症药物。
3)降血糖作用研究
用ELISA法检测各组斑马鱼体内葡萄糖的水平,重复测量3次,取平均值,测量结果见图11所示。
由图11可见,与空白组相比,模型组斑马鱼的葡萄糖水平显著提高(P<0.01);而与模型组相比,高剂量治疗组斑马鱼的葡萄糖水平显著降低(P<0.01)。
4)药物单用和合用的区别
幼鱼饲养水体中加入链脲佐菌素,以制作糖尿骨质疏松斑马鱼模型;将健康幼鱼作为空白组,将糖尿病骨质疏松症斑马鱼分为模型组和治疗组(分别给予药物组合物和单用药物均为10mg/L),连续治疗1周后,测量各组斑马鱼(n=6)的体征;结果如图12所示。
由图12可见,与模型组相比,芒果苷治疗组、四氢表小檗碱治疗组(P<0.05)、木兰花碱治疗组(P<0.01)、13-羟基氧化小檗碱治疗组(P<0.05)、小檗碱治疗组(P<0.01)以及药物组合物治疗组斑马鱼在经过1周的给药治疗后,颅骨面积均显著增加(P<0.01),且药物组合物治疗组的治疗效果更好;而巴马汀治疗组和黄柏碱治疗组不能增加糖尿病骨质疏松斑马鱼的颅骨面积。
实施例2
一种药物组合物,按物质的量份计,包括:7.64份芒果苷,7.39份四氢表小檗碱,35.06份黄柏碱,14.64份木兰花碱,4.26份13-羟基氧化小檗碱,0.29份巴马汀和30.71份小檗碱。
按上述物质的量,将各原料混合,即获得本实施例的药物组合物。
实施例3
一种药物组合物,按物质的量份计,包括:10.40份芒果苷,7.06份四氢表小檗碱,35.31份黄柏碱,13.86份木兰花碱,3.63份13-羟基氧化小檗碱,4.26份巴马汀和29.47份小檗碱。
按上述物质的量份,将各原料混合,即获得本实施例的药物组合物。
实施例4
一种药物组合物,按物质的量份计,包括:34.39份芒果苷,4.32份四氢表小檗碱,28.06份黄柏碱,10.22份木兰花碱,2.42份13-羟基氧化小檗碱,0.15份巴马汀和20.44份小檗碱。
按上述物质的量份,将各原料混合,即获得本实施例的药物组合物。
实施例5
一种药物组合物,按物质的量份计,包括:40.90份芒果苷,4.26份四氢表小檗碱,24.33份黄柏碱,10.11份木兰花碱,2.30份13-羟基氧化小檗碱,0.12份巴马汀和17.96份小檗碱。
按上述物质的量份,将各原料混合,即获得本实施例的药物组合物。
分别取实施例2-5制备的药物组合物,对糖尿病骨质疏松症斑马鱼进行治疗(给药量10mg/L),连续治疗1周后,测量各组斑马鱼(n=6)的体征;结果如图13所示。
由图13可见,与空白组相比,模型组斑马鱼的颅骨骨量显著降低(P<0.01);而与模型组相比,各药物组合物治疗组斑马鱼在经过1周的给药治疗后,颅骨面积均显著提高(P<0.01),其中实施例1的合用药物组更显著,与空白组相当。
对比例1
按物质的量份计,本对比例的药物组合物包括:7.48份四氢表小檗碱,41.42份黄柏碱,16.12份木兰花碱,3.63份13-羟基氧化小檗碱,0.28份巴马汀和31.08份小檗碱。
对比例2
按物质的量份计,本对比例的药物组合物包括:20.95份芒果苷,35.39份黄柏碱,13.77份木兰花碱,3.10份13-羟基氧化小檗碱,0.24份巴马汀和26.55份小檗碱。
对比例3
按物质的量份计,本对比例的药物组合物包括:29.50份芒果苷,9.00份四氢表小檗碱,19.39份木兰花碱,4.37份13-羟基氧化小檗碱,0.33份巴马汀和37.40份小檗碱。
对比例4
按物质的量份计,本对比例的药物组合物包括:22.62份芒果苷,6.90份四氢表小檗碱,38.21份黄柏碱,3.35份13-羟基氧化小檗碱,0.26份巴马汀和28.67份小檗碱。
对比例5
按物质的量份计,本对比例的药物组合物包括:20.28份芒果苷,6.19份四氢表小檗碱,34.26份黄柏碱,13.33份木兰花碱,0.23份巴马汀和25.71份小檗碱。
对比例6
按物质的量份计,本对比例的药物组合物包括:19.73份芒果苷,6.02份四氢表小檗碱,33.34份黄柏碱,12.97份木兰花碱,2.92份13-羟基氧化小檗碱和25.01份小檗碱。
对比例7
按物质的量份计,本对比例的药物组合物包括:26.24份芒果苷,8.01份四氢表小檗碱,44.32份黄柏碱,17.25份木兰花碱,3.89份13-羟基氧化小檗碱和0.30份巴马汀。
分别取对比例1-7制备的药物组合物,对糖尿病骨质疏松症斑马鱼进行治疗(给药量10mg/L),连续治疗1周后,测量各组斑马鱼(n=6)的体征;结果如图13所示。
由图14可见,与空白组相比,模型组斑马鱼的颅骨骨量显著降低(P<0.01);而与模型组相比,对比例1-7的药物组合物治疗组斑马鱼在经过1周的给药治疗后,颅骨面积均显著提高(P<0.01);但治疗效果均不如实施例1显著。
Claims (8)
1.一种药物组合物,其特征在于,按物质的量份计,包括:7.64-40.90份芒果苷,4.26-7.39份四氢表小檗碱,24.33-35.31份黄柏碱,10.11-14.64份木兰花碱,2.30-4.26份13-羟基氧化小檗碱,0.12-0.29份巴马汀和17.96-30.71份小檗碱。
2.如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于,按物质的量份计,包括:19.69份芒果苷,6.01份四氢表小檗碱,33.26份黄柏碱,12.94份木兰花碱,2.92份13-羟基氧化小檗碱,0.22份巴马汀和24.96份小檗碱。
3.如权利要求1-2中任意一项所述的药物组合物在制备降血糖药物中的应用。
4.如权利要求1-2中任意一项所述的药物组合物在制备抗糖尿病骨质疏松症药物中的应用。
5.如权利要求1-2中任意一项所述的药物组合物在抗骨质疏松药物中的应用。
6.一种降血糖药物,其特征在于,含有如权利要求1-2中任意一项所述的药物组合物。
7.一种抗糖尿病骨质疏松症药物,其特征在于,含有如权利要求1-2中任意一项所述的药物组合物。
8.一种抗骨质疏松药物,其特征在于,含有如权利要求1-2中任意一项所述的药物组合物。
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