CN101543504A - 一种抗骨质疏松的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域,是一种抗骨质疏松的药物组合物,该组合物分别由淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱中的任意两种、三种或四种组分组成,其特征在于该组合物由以下组分的重量份组成:淫羊藿苷:0~135份、知母皂苷BII:0~450份、仙茅苷乙:0~63份、小檗碱:0~1350份。该组合物能够协同促进成骨细胞的骨形成,抑制破骨细胞的骨吸收,通过对骨代谢多个相关指标的协同调节,增强抗骨质疏松作用,达到预防和治疗骨质疏松症的目的,可以用于制备防治骨质疏松的药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,是一种抗骨质疏松的药物组合物。该组合物由淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱中的任意两个、三个或四个成分组合而成,通过对骨代谢多个相关指标的协同调节,减少骨质丢失,增加骨密度,增强抗骨质疏松作用。
背景技术
骨质疏松症是以骨量减少,骨组织微细结构破坏,从而导致骨脆性增加,骨折危险性增加为特征的一种系统性、全身性骨骼疾病,多发生于绝经后妇女,属于老年病的范畴。骨质疏松症的发生与老年阶段内分泌系统的代谢失调、机体超氧化物的过度产生、免疫功能失调等有关,并因此引起骨质代谢紊乱,如成骨细胞的形成减少、活性降低,破骨细胞的形成增加,骨吸收作用增强等。目前治疗骨质疏松的药物如雌激素、双磷酸盐和钙制剂等,只是从其中一个方面改善骨代谢,不能对机体的功能进行全面调节。
中药及其方剂含有多种化学成分,通过多个环节和多个靶点对机体进行全面调节,具有副作用较小、适合长期服用的特点,成为防治骨质疏松药物的研究热点。很多中药及其复方制剂在临床上也表现出了确切、显著的疗效,但是由于中药化学成分复杂、作用的物质基础不清楚、质量不稳定而限制了其在临床上的应用。已有从中药中提取到抗骨质疏松活性化合物的报道,其中以淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱的作用最为显著。研究结果发现这四个化合物具有各自不同的药理活性特点和作用途径。淫羊藿苷为异黄酮类成分,具有植物雌激素样活性,能够显著促进成骨细胞的形成、分化,抑制破骨细胞的成熟和破骨性骨吸收,可减少去卵巢骨质疏松大鼠的骨丢失。(Huang J,YuanL,Wang X,Zhang TL,Wang K.Life Sci.2007;81(10):832-840.)。知母皂苷BII为甾体皂苷类成分,专利(中药知母中甾体总皂苷的医药新用途及其制备方法,01106195.2)公开了知母总皂苷具有抗炎、抗氧化和抗骨质疏松作用,知母皂苷BII为其中活性成分之一,知母皂苷BII的抗骨质疏松作用主要是增加成骨细胞的骨形成而不是抑制骨吸收。仙茅苷乙为酚苷类化学成分,通过调节机体的氧化应激状态和免疫功能,减缓机体的衰老过程,减少骨质的丢失。研究发现仙茅苷乙的抗骨质疏松作用主要是通过抑制骨吸收实现的(Jiao L,Cao DP,Han T,et al.Phytomedicine,2009,doi:10.1016/j.phytomed.2009.01.005)。小檗碱,又名黄连素,为异喹啉类生物碱,研究发现小檗碱可以显著降低去卵巢大鼠的骨丢失,抑制甲状旁腺素、白细胞介素1等诱导的体外培养的破骨细胞的形成,减少破骨细胞的数目。小檗碱的这种抑制骨吸收作用与其抗炎活性相关,通过调节激活蛋白AP-1转录因子抑制环氧合酶(COX-2)转录活性,抑制角叉菜胶诱导的大鼠分泌物和PGE2产生,进而增加骨保护素的分泌,降低骨吸收,减少骨质丢失(Li H,Miyahara T,Tezuka Y,Namba T,Suzuki T,Dowaki R,Watanabe M,Nemoto N,Tonami S,Seto H,Kadota S.Biol Pharm Bull.1999;22(4):391-396.)。尽管这些化合物通过不同的途径减少骨丢失,但至今未见将上述活性物质组成药物组合物用于防治骨质疏松的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种成分明确、质量稳定,能有效防治骨质疏松症的药物组合物。
本发明的一种抗骨质疏松的药物组合物,分别由淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱中的任意两种、三种或四种组分组成,其特征在于该组合物由以下组分的重量份组成:
淫羊藿苷 0—135份
知母皂苷BII 0—450份
仙茅苷乙 0—63份
小檗碱 0—1350份。
即由淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱中的任意两种、三种或者四种成分组成。根据骨质疏松症发生的病理生理学原理,将具有不同活性和作用特点的化合物进行组合。该组合物通过对机体的内分泌代谢、免疫功能、氧化应激状态和炎症发生等环节调控,调节成骨细胞和破骨细胞形成、分化和功能,协同性调控骨代谢,减少骨质的丢失,达到预防和治疗骨质疏松的目的。
本发明组合物的组分和重量配比(下面所提及的“份”为重量份)分别为:
1 淫羊藿苷与知母皂苷BII组合物
淫羊藿苷 15~135份
知母皂苷 BII 50~450份。
优选为:淫羊藿苷 45份
知母皂苷BII 150份。
2 淫羊藿苷与仙茅苷乙组合物
淫羊藿苷 15~135份
仙茅苷乙 7~63份。
优选为:淫羊藿苷 135份
仙茅苷乙 63份。
3 淫羊藿苷与小檗碱组合物
淫羊藿苷 15~135份
小檗碱 150~1350份。
优选为:淫羊藿苷 15份
小檗碱 150份。
4 知母皂苷BII与仙茅苷乙组合物
知母皂苷BII 50~450份
仙茅苷乙 7~63份。
优选为:知母皂苷BII 450份
仙茅苷乙 63份。
5 知母皂苷BII与小檗碱组合物
知母皂苷BII 50~450份
小檗碱 150~1350份。
优选为:知母皂苷BII 150份
小檗碱 450份。
6 仙茅苷乙与小檗碱组合物
仙茅苷乙 7~63份
小檗碱 150~1350份。
优选为:仙茅苷乙21份
小檗碱450份。
7 淫羊藿苷、知母皂苷BII与仙茅苷乙组合物
淫羊藿苷 15~135份
知母皂苷BII 50~450份
仙茅苷乙 7~63份
优选为:淫羊藿苷15份
知母皂苷BII 50份
仙茅苷乙7份
8 淫羊藿苷、知母皂苷BII与小檗碱组合物
淫羊藿苷 15~135份
知母皂苷BII 50~450份
小檗碱 150~1350份
优选为:淫羊藿苷135份
知母皂苷BII 450份
小檗碱1350份
9 淫羊藿苷、仙茅苷乙与小檗碱组合物
淫羊藿苷 15~135份
仙茅苷乙 7~63份
小檗碱 150~1350份
优选为:淫羊藿苷15份
仙茅苷乙7份
小檗碱150份
10 知母皂苷BII、仙茅苷乙与小檗碱组合物
知母皂苷BII 50~450份
仙茅苷乙 7~63份
小檗碱 150~1350份
优选为:知母皂苷BII 50份
仙茅苷乙7份
小檗碱150份
11 淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙与小檗碱组合物
淫羊藿苷 15~135份
知母皂苷BII 50~450份
仙茅苷乙7~63份
小檗碱150~1350份
优选为:淫羊藿苷135份
知母皂苷BII450份
仙茅苷乙63份
小檗碱1350份
经体外细胞和动物实验表明,本发明组合物均对骨质疏松的防治作用明显优于单味用药,说明各组分间有协同作用,因此,可用于制备防治骨质疏松的药物。本发明的一种抗骨质疏松的药物组合物可以采用中药制剂的常规方法制备成任何常规内服制剂用于防治骨质疏松。
具体实施方式
现结合实施例对本发明作详细描述。
一、淫羊藿苷和知母皂苷BII组合物对成骨细胞的作用实验
1 材料和方法
试剂和材料:淫羊藿苷和小檗碱为陕西慧科植物开发有限公司产品,纯度均为99%,知母皂苷BII和仙茅苷乙为本课题组自制,并经核磁共振氢谱、质谱等波谱分析,与文献数据一致,HPLC分析表明纯度达到99%以上。染料木黄酮、考马斯亮蓝G-250为美国Sigma公司产品,MTT、二甲亚砜、对硝基苯酚磷酸二钠、二乙醇胺、NaOH、对硝基苯酚等均为国产分析纯试剂。
新生2-4天SD大鼠由第二军医大学实验动物中心提供。
溶液配制:用无水乙醇分别配制10-4mol/L的淫羊藿苷和知母皂苷BII溶液,作为储备液。实验时,用培养基稀释至所需浓度。
实验分组:实验设阴性对照组,淫羊藿苷和知母皂苷BII的三个剂量分别为10-8mol/L、10-9mol/L和10-10mol/L,对成骨细胞合并用药效果研究分组见表1。
表1.淫羊藿苷与知母皂苷BII合并用药效果研究分组表
制备成骨细胞:新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞按常规采用胶原酶消化法获得,悬浮于含10%胎牛血清的α-MEM培养基中,置37℃,5%CO2培养箱中培养。常规传代至第四代细胞备用。
成骨细胞增殖测定:按常规将培养的第四代大鼠颅盖骨成骨细胞悬浮于含10%胎牛血清的α-MEM培养基中,调整浓度为2×104个细胞/ml,接种于96孔培养板中,每孔100μl。于37℃ 5% CO2培养箱中培养24小时后,换含终浓度为10-8、10-9、10-10mol/L的淫羊藿苷、知母皂苷BII及淫羊藿苷和知母皂苷BII的组合物,阴性对照组只加含10%血清的α-MEM培养基,继续培养48小时,在培养结束前4小时,每孔加入20μl用PBS缓冲液配制的5mg/ml的MTT溶液,培养结束后,弃去上清,每孔加入150μl二甲亚砜,放置,使形成的甲臜颗粒完全溶解,于550nm处检测吸光度值。
碱性磷酸酶的活性测定 按常规将培养的第四代大鼠颅盖骨成骨细胞悬浮于含10%胎牛血清的α-MEM培养基中,调整浓度为2×104个细胞/ml,接种于96孔培养板中,每孔100μl。于37℃ 5% CO2培养箱中培养24小时后,换含终浓度为10-8、10-9、10-10mol/L的淫羊藿苷、知母皂苷BII及淫羊藿苷和知母皂苷BII的组合物,阴性对照组只加含10%血清的α-MEM培养基,以后每3天换药一次。培养至6天时测定ALP的活性:弃去培养液,PBS冲洗3次,加100μ150mmol/L的二乙醇胺,50μl 2.5mmol/L的对硝基苯酚磷酸二钠,37℃反应30分钟,最后用0.3mol/L的NaOH终止反应,于波长405nm处测得吸光度值,以不同浓度的对硝基苯酚溶液在405nm处的OD值作标准曲线。Bradford法测定总蛋白含量,以每ng蛋白产生的对硝基苯酚的μmol数表示ALP的活性。
骨结节数测定 将第四代成骨细胞传代后按每孔5×104个细胞接种于24孔板内,用含10%胎牛血清的α-MEM培养基培养24小时,换含0.1%牛血清白蛋白的新鲜α-MEM培养基,使细胞适应,12小时后换含有10-8、10-9、10-10mol/L的淫羊藿苷,知母皂苷BII,淫羊藿苷+知母皂苷BII的骨结节诱导培养基(0.1% BSA,10nM地塞米松,10mM β-甘油磷酸钠和50μg/ml抗坏血酸以及10%胎牛血清的α-MEM培养基)。每3天换液一次,连续培养观察14天后,进行von Kossa染色。倒置相差显微镜下观察并计数每孔内20个随机不同视野内骨结节的数量,以棕黑色结节和边界清晰为准,结果以骨结节数/孔表示。
药物相互作用分析:以各组药物与对照组相比的变化率为指标,按照金氏公式q=EA+B/(EA+EB-EA×EB),判断各药物间的相互作用关系。
q:0.85~1.15 两药作用为单纯相加
1.15~20 两药作用为协同增强
>20 两药作用为显著协同增强
0.85~0.05 两药作用为拮抗
<0.55 两药作用为明显拮抗
2 实验结果
由表2可见,在10-8~10-10mol/L的浓度范围内,淫羊藿苷、知母皂苷BII及其组合物均可显著促进成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和骨结节的形成。根据金氏概率相加法计算淫羊藿苷和知母皂苷BII的相互作用关系(见表3),在10-9mol/L浓度的淫羊藿苷与知母皂苷BII配伍后,成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和骨结节形成指标的q值分别为1.33、1.18、1.30,均大于1.15,表明淫羊藿苷和知母皂苷BII可以协同增强成骨细胞的增殖和骨形成作用。
表2 淫羊藿苷、知母皂苷BII及其组合对成骨细胞的影响(n=10,x±s)
*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001 vs Control
表3 淫羊藿苷与知母皂苷BII合并用药对成骨细胞的作用效果分析
二、淫羊藿苷、小檗碱、仙茅苷乙组合物对破骨细胞的作用实验
1 材料和方法
试剂和材料:淫羊藿苷和小檗碱为陕西慧科植物开发有限公司产品,纯度为99%以上,知母皂苷BII和仙茅苷乙为本课题组自制,并经核磁共振氢谱、质谱等波谱分析,与文献数据一致,HPLC分析表明纯度达到99%以上。胰蛋白酶、II型胶原酶、特级胎牛血清、α-MEM培养基为美国Gibco公司产品;1,25-双羟基维生素D3(1,25-(OH)2Vitamin D3)、地塞米松、萘酚AS-BI磷酸钠、六偶氮副品红购自美国Sigma公司;甲苯胺蓝为生工生物工程(上海)有限公司产品;乙二醇单甲醚、酒石酸钾钠等均为国产分析纯试剂。
新生2-4天SD大鼠由第二军医大学实验动物中心提供。
溶液配制:用无水乙醇分别配制10-4mol/L的淫羊藿苷、仙茅苷乙和小檗碱溶液,作为储备液。实验时,用培养基稀释至所需浓度。
实验分组:实验设阴性对照组,淫羊藿苷、仙茅苷乙和小檗碱的三个剂量分别为10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L,对破骨细胞合并用药效果研究分组见表4。
表4.淫羊藿苷、仙茅苷乙和小檗碱对破骨细胞合并用药效果研究分组表
制备破骨细胞 将第四代成骨细胞和新鲜收集的骨髓细胞共同悬浮于含10-8mol/L的1,25-(OH)2-VD3、10-7mol/L地塞米松和10%胎牛血清的α-MEM培养基中,使成骨细胞的浓度为1×105细胞/ml,骨髓单核细胞为1×106细胞/ml,以诱导骨髓单核细胞分化形成多核破骨细胞,备用。
抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性测定 将成骨细胞和骨髓单核细胞悬浮接种于96孔板内,每孔100μl,于37℃,5% CO2培养箱中培养,24小时后换新鲜的破骨细胞诱导培养基,以后每3天换液一次,培养8天后破骨细胞分化成熟,换含10-5、10-6和10-7mol/L的淫羊藿苷、仙茅苷乙和小檗碱及其组合物的培养基,阴性对照组加不含药物的破骨细胞诱导培养基。培养48小时后测定TRAP的活性:弃上清,PBS冲洗2次,20μl 0.1% Triton X-100室温破碎细胞15分钟,加入100μl反应液(0.4g对硝基苯基磷酸二钠,去离子水溶解后加入2.0g酒石酸钾钠,加水溶解至150ml,HCl调节pH至3.5,再加水定容至200ml),于37℃反应30分钟,迅速加入100μl 1mol/L的NaOH终止反应,于波长405nm处测定其OD值。同时计数TRAP阳性细胞。以对硝基苯酚溶液作标准曲线,TRAP活性用每孔破骨细胞生成的对硝基苯酚的nmol数表示。
TRAP阳性成熟破骨细胞计数 将第4代成骨细胞和新鲜收集的骨髓细胞共同悬浮于含10-8mol/L的1,25-(OH)2-VD3、10-7mol/L地塞米松和10%胎牛血清的α-MEM培养基中,使成骨细胞的浓度为1×105个细胞/ml,骨髓单核细胞为1×106个细胞/ml,接种于放有无菌玻片的96孔板内,每孔100μl,于37℃,5% CO2培养箱中培养,24小时后,换含10-5、10-6和10-7mol/L的淫羊藿苷、仙茅苷乙和小檗碱及其组合物的培养基,阴性对照组加不含药物的破骨细胞诱导培养基。每3天换液一次,培养10天后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜下观察,并以细胞核≥3个作为破骨细胞标志,对阳性多核破骨细胞进行计数。
骨吸收陷窝数的测定 如前所述,将成骨细胞和骨髓单核细胞悬液接种到放有骨片的96孔培养板上,24小时后,换含10-5、10-6和10-7mol/L的淫羊藿苷、仙茅苷乙和小檗碱及其组合物的培养基,阴性对照组加不含药物的破骨细胞诱导培养基。每3天换液一次,培养12天后对骨片进行甲苯胺蓝染色,光镜100倍下观察并计数每张骨片上20个随机视野内骨吸收陷窝的数目,结果以陷窝数/骨片表示。
药物相互作用分析:以各组药物与对照组相比的变化率为指标,按照金氏公式q=EA+B/(EA+EB-EA×EB),判断各药物间的相互作用关系。
q:0.85~1.15 两药作用为单纯相加
1.15~20 两药作用为协同增强
>20 两药作用为显著协同增强
0.85~0.05 两药作用为拮抗
<0.55 两药作用为明显拮抗
2实验结果
由表5可见,在10-5~10-7mol/L的浓度范围内,淫羊藿苷、小檗碱和仙茅苷乙及其组合物显著抑制破骨细胞的形成分化、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,减少破骨细胞在骨片上形成的吸收陷窝的数目。
淫羊藿苷、小檗碱和仙茅苷乙对破骨细胞的相互作用关系见表6。
由表6可见,淫羊藿苷与小檗碱合用,在10-6~10-7mol/L浓度下,对破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性、破骨细胞的形成分化和破骨细胞在骨片上形成的吸收陷窝的数目的q值均大于1.15,表现为协同抑制作用。
由表6可见,淫羊藿苷与仙茅苷乙合用,在10-6~10-7mol/L浓度下,对破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性的q值分别为1.25和1.21,表现为协同抑制作用;对破骨细胞的形成分化和骨吸收陷窝的形成表现为相加抑制作用。
由表6可见,小檗碱与仙茅苷乙合用,对破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性表现为相加的抑制作用,对破骨细胞的形成分化和在骨片上形成的吸收陷窝数目的q值均大于1.15,表现为协同抑制作用。
由表6可见,淫羊藿苷、小檗碱和仙茅苷乙合用,对破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性和骨吸收陷窝的q值均大于1.15,表现为协同抑制作用。与单独使用小檗碱和淫羊藿苷与仙茅苷乙组合物相比较,对破骨细胞的形成分化的q值分别为1.21,1.25和1.51,表现为协同抑制作用,其它配对分析的q值均小于1.15,表现为相加抑制作用。
表5 淫羊藿苷、小檗碱、仙茅苷乙及其组合物对破骨细胞的作用(n=10,x±s)
与对照组相比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表6 淫羊藿苷、小檗碱、仙茅苷乙合用对破骨细胞作用效果分析
三、淫羊藿苷、知母皂苷BII、小檗碱和仙茅苷乙组合物对去卵巢骨质疏松小鼠的作用实验
1 材料和方法
材料和试剂:淫羊藿苷和小檗碱为陕西慧科植物开发有限公司产品,纯度为99%以上,知母皂苷BII和仙茅苷乙为本课题组自制,并经核磁共振氢谱、质谱等波谱分析,与文献数据一致,HPLC分析表明纯度达到99%以上。阳性对照药尼尔雌醇片,购自上海医药(集团)有限公司新华联制药厂,批号:080801)。血清碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶测定试剂盒,购自南京建成生物工程公司。血清骨保护素ELISA试剂盒购自美国RapidBioTM。外周骨定量计算机断层扫描仪(pQCT,peripheral Quantitative Computed Tomography,XCT ReasearchSA),德国Stratec公司产品;全自动定量绘图酶标仪,美国BIOTECK产品;紫外分光光度计,上海天美公司产品
动物:3月龄雌性昆明种小鼠,体重25~30g,由第二军医大学实验动物中心提供。
实验分组:将3月龄雌性昆明种小鼠随机分组,每组10只,包括假手术组(Sham)、去卵巢组(OVX),尼尔雌醇阳性对照组(nilestriol)及不同剂量的各药物及其配伍组。假手术、模型组小鼠灌胃0.1ml/10g生理盐水;阳性对照组每周灌胃一次,0.2mg/ml的尼尔雌醇,2mg/kg;淫羊藿苷的剂量分别为15mg/kg、45mg/kg、135mg/kg;知母皂苷BII组的剂量分别为50mg/kg、150mg/kg、450mg/kg;小檗碱的剂量分别为小檗碱150mg/kg、450mg/kg、1350mg/kg;仙茅苷乙的剂量为7mg/kg、21mg/kg、63mg/kg;各给药组每周灌胃6次,所有药液均用0.5%的羧甲基纤维素钠配制。合并用药效果研究分组见表7。实验当天,各组小鼠在2%戊巴比妥钠麻醉下,无菌操作,腹部肋下切开皮肤、肌肉,暴露腹腔,找出双侧卵巢,Sham组保留之,其余各组切除之。所有动物在24~28℃,通风良好动物房内饲养,每周称量体重一次,以调整给药剂量。12周后,眼眶取血,分离血清,测定血清生化指标;处死小鼠,取出子宫,称量子宫重量;分离右侧胫骨,用75%酒精固定,以备pQCT测定骨密度。
表7.淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱合并用药效果研究分组表
血清生化指标的测定:血清碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶酶活性的测定采用南京建成公司生产的试剂盒,按照说明书进行。血清骨保护素的含量采用ELISA试剂盒,按照说明书进行测定。
骨密度的测定:胫骨以外周骨定量计算机断层扫描仪(pQCT)于近骨骺线3mm处测定其骨密度(BMD)。
统计学分析:所有数据实验均采用SPSS 13.0软件,进行均值和方差处理,参数值用均值±标准差(x±s)表示,组间比较采用Dunnett’s MultipleComparison test检验,P<0.05为有显著性差异。
药物相互作用分析:以各组药物与对照组相比的变化率为指标,按照金氏公式q=EA+B/(EA+EB-EA×EB),判断各药物间的相互作用关系。
q:0.85~1.15 两药作用为单纯相加
1.15~20 两药作用为协同增强
>20 两药作用为显著协同增强
0.85~0.05 两药作用为拮抗
<0.55 两药作用为明显拮抗
2 实验结果
由表8可见,小鼠去卵巢后,子宫发育受到抑制,去卵巢组与正常组比较,小鼠子宫重量减轻77%。阳性对照药物尼尔雌醇显著增加去卵巢小鼠的子宫重量。但淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱及其组合物对去卵巢小鼠的体重和子宫重量均无显著的影响,说明本发明的抗骨质疏松药物组合物对小鼠子宫没有刺激作用。
表8 淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱及其组合物对去卵巢小鼠体重和子宫重量的影响(n=10,x±s)
与模型对照组相比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
由表9可见,淫羊藿苷在15~135mg/kg的浓度范围内,显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨钙素水平,降低而清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。
由表9可见,知母皂苷BII在50~450mg/kg的浓度范围内,显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨钙素水平,但对血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性没有显著的影响。
由表9可见,仙茅苷乙在7~63mg/kg的浓度范围内,显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性,但对血清碱性磷酸酶活性和骨钙素水平没有显著的影响。
由表9可见,小檗碱在150~1350mg/kg的浓度范围内,显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性,但对血清碱性磷酸酶活性和骨钙素水平没有显著的影响。
由表9可见,淫羊藿苷与知母皂苷BII合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。由表10可见,与单独使用淫羊藿苷或知母皂苷相比,二者组合物对去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和抗酒石酸酸性磷酸酶活性表现为相加作用,对血清骨钙素水平不同剂量组合物q值分别为1.20、1.19和1.15,表现为协同作用。
由表9可见,淫羊藿苷与仙茅苷乙合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶水平。由表10可见,与单独使用淫羊藿苷或仙茅苷乙相比,二者组合物对小鼠骨密度的q值分别为1.02,1.01和1.17,对血清碱性磷酸酶活性的q值分别为1.42,1.03和1.25,对骨保护素水平的q值分别为1.25,0.96和1.07表现为协同增加作用,对血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性表现为相加抑制作用。
由表9可见,淫羊藿苷与小檗碱合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶水平。由表10可见,与单独使用淫羊藿苷或小檗碱相比,对小鼠骨密度和血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性表现为相加作用;对血清碱性磷酸酶的q值分别为1.03,1.12,1.23,对血清骨保护素的q值分别为1.22,0.99,1.06,表现为协同促进作用。
由表9可见,知母皂苷BII与仙茅苷乙合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶水平。由表10可见,与单独使用知母皂苷BII或仙茅苷乙相比,对小鼠骨密度的q值分别为1.05,1.02,1.16,对血清碱性磷酸酶的q值分别为1.16,1.12,1.33,对血清骨保护素的q值分别为1.18,1.08,1.10,均表现为协同增加作用;对血清抗酒石酸酸性磷酸酶的活性表现为相加抑制作用。
由表9可见,知母皂苷BII与小檗碱合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶水平。由表10可见,与单独使用知母皂苷BII或小檗碱相比,对小鼠骨密度、血清骨保护素水平和抗酒石酸酸性磷酸酶活性表现为相加作用;对血清碱性磷酸酶活性的q值分别为1.16,1.20,1.13,表现为协同增强作用。
由表9可见,仙茅苷乙与小檗碱合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性,但对血清碱性磷酸酶活性和骨钙素水平没有显著影响。由表10可见,与单独使用仙茅苷乙或小檗碱相比,对小鼠骨密度和抗酒石酸酸性磷酸酶的q值均为1.17,表现为协同作用;对小鼠血清碱性磷酸酶的活性和骨保护素的水平的q值分别为1.33和1.17,表现为协同作用。
由表9可见,淫羊藿苷、知母皂苷BII与仙茅苷乙合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。由表10可见,与单独使用淫羊藿苷、或知母皂苷BII或仙茅苷乙及其组合物相比,对小鼠骨密度和抗酒石酸酸性磷酸酶表现为相加作用,对血清碱性磷酸酶和骨保护素水平表现为协同增加作用。
由表9可见,淫羊藿苷、知母皂苷BII与小檗碱合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。由表10可见,与单独使用淫羊藿苷、或知母皂苷BII或小檗碱及其组合物相比,对血清骨保护素水平表现为协同增加作用,对骨密度、血清碱性磷酸酶水平和血清抗酒石酸酸性磷酸酶水平表现为相加作用。
由表9可见,淫羊藿苷、仙茅苷乙与小檗碱合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。由表10可见,与单独使用淫羊藿苷、或仙茅苷乙或小檗碱及其组合物相比,对去卵巢小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平表现为协同增强作用,对血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性表现为相加抑制作用。
由表9可见,知母皂苷BII、仙茅苷乙与小檗碱合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。由表10可见,与单独使用知母皂苷BII、或仙茅苷乙或小檗碱及其组合物相比,对去卵巢小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶、骨保护素水平和抗酒石酸酸性磷酸酶水平均表现为协同作用。
由表9可见,淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙与小檗碱合用显著增加去卵巢骨质疏松小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶活性和骨保护素水平,降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶活性。由表10可见,与单独使用淫羊藿苷、知母皂苷BII、或仙茅苷乙或小檗碱及其组合物相比,对去卵巢小鼠的骨密度、血清碱性磷酸酶、骨保护素水平和抗酒石酸酸性磷酸酶水平均表现为协同作用。
表9 淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱组合物对去卵巢小鼠骨密度和血清生化指标的影响(n=10,x±s)
与模型对照组相比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
表10 淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱合用对去卵巢小鼠的相互作用效果分析
注:三个成分或四个成分相互作用的q值为与各种不同组合相比较时的取值范围。
该组合物能够协同促进成骨细胞的骨形成,抑制破骨细胞的骨吸收,通过对骨代谢多个相关指标的协同调节,增强抗骨质疏松作用,达到预防和治疗骨质疏松症的目的,可以用于制备防治骨质疏松的药物。
Claims (8)
1.一种抗骨质疏松的药物组合物,分别由淫羊藿苷、知母皂苷BII、仙茅苷乙和小檗碱中的任意两种、三种或四种组分组成,其特征在于该组合物由以下组分的重量份组成:
淫羊藿苷 0~135份
知母皂苷BII 0~450份
仙茅苷乙 0~63份
小檗碱 0~1350份。
2.按照权利要求1所述的一种抗骨质疏松的药物组合物,其特征在于该组合物分别由以下任意两种组分的重量份组成:
(1)淫羊藿苷 15~135份 知母皂苷BII 50~450份;
(2)淫羊藿苷 15~135份 仙茅苷乙 7~63份;
(3)淫羊藿苷 15~135份 小檗碱 150~1350份;
(4)知母皂苷BII 50~450份 仙茅苷乙 7~63份;
(5)知母皂苷BII 50~450份 小檗碱 150~1350份;
(6)仙茅苷乙 7~63份 小檗碱 150~1350份。
3.按照权利要求1或2所述的一种抗骨质疏松的药物组合物,其特征在于该组合物分别由以下任意两种组分的重量份组成:
(1)淫羊藿苷 45份 知母皂苷BII 150份;
(2)淫羊藿苷 135份 仙茅苷乙 63份;
(3)淫羊藿苷 15份 小檗碱 150份;
(4)知母皂苷BII 450份 仙茅苷乙 63份;
(5)知母皂苷BII 150份 小檗碱 450份;
(6)仙茅苷乙 21份 小檗碱 450份。
4.按照权利要求1所述的一种抗骨质疏松的药物组合物,其特征在于该组合物分别由以下任意三种组分的重量份组成:
(1)淫羊藿苷 15~135份 知母皂苷BII 50~450份 仙茅苷乙 7~63份;
(2)淫羊藿苷 15~135份 知母皂苷BII 50~450份 小檗碱 150~1350份;
(3)淫羊藿苷 15~135份 仙茅苷乙 7~63份 小檗碱 150~1350份;
(4)知母皂苷BII 50~450份 仙茅苷乙 7~63份 小檗碱 150~1350份。
5.按照权利要求1或4所述的一种抗骨质疏松的药物组合物,其特征在于该组合物分别由以下任意三种组分的重量份组成:
(1)淫羊藿苷 15份 知母皂苷BII 50份 仙茅苷乙 7份;
(2)淫羊藿苷 135份 知母皂苷BII 450份 小檗碱 1350份;
(3)淫羊藿苷 15份 仙茅苷乙 7份 小檗碱 150份;
(4)知母皂苷BII 50份 仙茅苷乙 7份 小檗碱 150份。
6.按照权利要求1所述的一种抗骨质疏松的药物组合物,其特征在于该组合物由四种组分的重量份组成:
淫羊藿苷 15~135份 知母皂苷BII 50~450份
仙茅苷乙 7~63份 小檗碱 150~1350份。
7.按照权利要求1或6所述的一种抗骨质疏松的药物组合物,其特征在于该组合物由四种组分的重量份组成:
淫羊藿苷 135份 知母皂苷BII 450份
仙茅苷乙 63份 小檗碱 1350份。
8.权利要求1所述的一种抗骨质疏松的药物组合物在制备防治骨质疏松的药物中的应用。
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CN114288296A (zh) * | 2022-01-27 | 2022-04-08 | 浙江省中医药研究院 | 药物组合物及其在制备抗骨质疏松药物中的应用 |
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2009
- 2009-05-05 CN CN200910050571A patent/CN101543504A/zh active Pending
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CN114288296B (zh) * | 2022-01-27 | 2022-11-29 | 浙江省中医药研究院 | 药物组合物及其在制备抗骨质疏松药物中的应用 |
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