CN108042526B - 欧前胡素在制备抑制食管癌肿瘤的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明是欧前胡素在制备抑制食管癌肿瘤的药物中的应用。本发明发掘传统中草药欧前胡素的作用，发现欧前胡素可以明显的抑制食管癌细胞蛋白TGF‑β2的分泌和表达，并设计方案，验证欧前胡素能够抑制食管癌细胞的转移，说明欧前胡素具有治疗食管癌的作用。

Description

欧前胡素在制备抑制食管癌肿瘤的药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体为欧前胡素在制备抑制食管癌肿瘤的药物中的应用。

背景技术

癌症是世界上最难治疗的疾病之一。癌症的恶化常常伴随着癌细胞的增殖、转移等，癌症一旦经诊断，将难以治疗。现在主流的治疗方法是手术加放化疗结合的方法，在靶向治疗领域，应用比较多的有血管生成因子(VEGF)抑制剂贝伐单抗和表皮生长因子受体阻滞剂帕尼单抗、西妥昔单抗和艾洛替尼。尽管如此，临床疗效仍不理想，化疗耐药和毒副作用的发生影响了癌症病人的预后。自然产物类的抗癌制剂，一般具有毒副作用小、价格低廉的优点。

欧前胡素是一种具有活性的呋喃香豆素，从中草药白芷中提取。

结构式如下：

早先有相关报道欧前胡素可以抑制微生物的增殖，还有抗惊厥、解痉和平喘等作用。欧前胡素可以抑制NF-κB、MAPKs的相关通路激活，减轻RAW264.7巨噬细胞所引起的炎症效应，另外也有报道欧前胡素可以诱导分泌IL-10的淋巴T细胞调节树突状细胞活性，从而抑制过敏反应。另外也有欧前胡素在心血管应用研究报道。欧前胡素可以促进血管舒张，其主要的分子作用机理是欧前胡素可以抑制钙离子通道和钙离子的运输。有人报道欧前胡素可以降血压，也可以抑制心肌肥大症。欧前胡素的传统效果有抗惊厥、解痉和平喘等多种作用。

食管癌最佳的治疗期是食管癌生成的前期，但前期一般不易被发现，等到晚期治疗已经相当困难。现在主流的治疗方法是手术加放化疗结合的方法。晚期食管癌的化疗采用多药联合化疗的方案，如DCF(顺铂+多西他赛+5-FU)和其他衍生方案等，有效率在21％～67％之间，中位生存期在5.5～16.8个月之间。顺铂的作用机理是与DNA相互作用，阻止DNA的复制，从而达到抑制癌症细胞增殖的目的，但是这种与DNA作用的机制副作用比较大，对肾脏、胰脏和神经系统有一定毒性。而且，近年来化疗的效果并没有明显的提升。在靶向治疗领域，应用比较多的药剂有血管生成因子(VEGF)抑制剂贝伐单抗以及表皮生长因子受体阻滞剂帕尼单抗、西妥昔单抗和艾洛替尼。最近有报道microRNA-377能通过阻滞CD133和VEGF抑制食管癌的发生发展。程序性死亡因子配体1(PD-L1)受ZEB1调控，与EMT相关。这些不断被发现潜在的靶点可能对以后食管癌治疗有帮助。尽管如此，目前为止食管癌没有比较好的生物标志蛋白用于预防和治疗。

发明内容

本发明目的是提供欧前胡素在抗食管癌肿瘤生长中的应用，为晚期转移癌症辅助治疗提供一种新的药物来源。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

欧前胡素在制备抑制食管癌肿瘤的药物中的应用。

所述食管癌为晚期食管癌，所述抑制食管癌肿瘤是抑制食管癌肿瘤转移。

所述的欧前胡素的结构式是

优选的，所述的药物含有所述欧前胡素或其药用盐中的至少一种。

优选的，所述的药物含有药学上载体或赋形剂。

优选的，所述药物是片剂、胶囊、滴丸、冲剂或口服液。

优选的，所述载体是玉米油，所述的欧前胡素与玉米油的比例是1mg:100μL，所述的欧前胡素与服用所述欧前胡素的个体体重的比例是50μL/kg～100μL/kg。

所述个体是人或小鼠。

本发明的原理

本发明发掘传统中草药欧前胡素的作用，发现欧前胡素可以明显的抑制食管癌细胞蛋白TGF-β2的分泌和表达，并设计方案，验证欧前胡素能够抑制食管癌细胞的迁移，说明欧前胡素具有治疗食管癌的作用。

本发明的显著优点和有益效果：

(1)本发明结合体外与体内实验，结果表明欧前胡素可以抑制食管癌的侵袭和转移。

(2)欧前胡素存在于传统中草药中，提取制备方便，安全性高，开发利用的前景好。

(3)欧前胡素通过靶向抑制TGFB2蛋白表达，从而抑制食管癌的转移扩散，能够更加精准治疗癌症。

(4)欧前胡素无明显毒副作用，具有抗肿瘤转移应用价值。

附图说明

图1是欧前胡素对食管癌细胞KYSE150-luc肺转移的影响，(a)是注射欧前胡素浓度梯度为0mg/kg的小鼠，(b)是注射欧前胡素浓度梯度为25mg/kg的小鼠，(c)是注射欧前胡素浓度梯度为50mg/kg的小鼠。

图2是肺转移生物荧光统计图。

图3是裸鼠体重时间表。

图4是欧前胡素处理后KYSE150和KYSE30食管癌细胞侵袭能力图。

图5是图4的KYSE150和KYSE30侵袭细胞统计图，纵坐标表示侵袭的细胞数，横坐标表示欧前胡素浓度。

图6是ELISA检测KYSE150和KYSE30的TGF-β2的胞外分泌量结果图。

图7是Western Blot检测KYSE150和KYSE30癌细胞的TGF-β2蛋白表达量结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

构建小鼠肿瘤转移模型

选取18只6周龄、雌性裸小鼠(balb/c-nu/nu)，对照组6只和实验组12只，构建肿瘤转移模型：

(1)每只裸小鼠需打入10⁶个食管癌细胞KYSE150-luc，细胞重悬于PBS中；

(2)在实验之前对裸鼠进行麻醉，通过无痛及有痛刺激来评估麻醉程度，确定裸鼠处于麻醉状态；

(3)用25G针头的微注射器取重悬细胞对裸鼠进行尾静脉注射，一共18只。

欧前胡素处理小鼠模型

打入KYSE150-luc一周后，开始用灌胃的方式给药。欧前胡素溶解于玉米油中，每只小鼠一次喂100μL玉米油。本实验共设置3个欧前胡素浓度梯度，分别为0mg/kg，25mg/kg和50mg/kg，各6只，一周两次。5至6周后，腹腔注射D-Luciferin，进行活体荧光拍照，观察癌细胞转移情况。

结果分析

图1和2显示实施例动物实验结果，裸鼠肺部的生物荧光随着欧前胡素浓度的增加而减少。生物荧光由食管癌KYSE150-luc细胞中的luciferase与体液中的D-luciferin发生酶促反应产生，所以荧光的强度反映了KYSE150-luc细胞的密度。因此，口喂剂量为25mg/kg和50mg/kg的欧前胡素处理组中，食管癌转移的数量显著比对照组少。口喂剂量为25mg/kg比没有服用欧前胡素的对照组的转移癌细胞减少约1倍，口喂剂量为50mg/kg比没有服用欧前胡素的对照组的转移癌细胞减少约20倍，几乎没有转移的癌细胞。另外，裸鼠的体重时间表(图3)显示，欧前胡素对裸鼠体重没有显著的影响，维持在20g左右，说明欧前胡素无明显毒副作用，具有抗肿瘤转移应用价值。

体外实验

图4是transwell小室基质胶穿透实验，穿透过基质胶的细胞越多，说明细胞的侵袭能力越强。由图中可以看出，随着欧前胡素浓度的增加(40μM，80μM)，侵袭的细胞数越少，细胞的侵袭转移能力逐渐被抑制。KYSE150和KYSE30细胞是具有较强侵袭能力的食管癌细胞，欧前胡素可以使这两株食管癌细胞侵袭能力减弱，说明欧前胡素可以抑制食管癌的侵袭和转移，展现欧前胡素辅助治疗晚期食管癌的潜力。

图6的ELISA检测结果显示随着欧前胡素浓度的增加(40μM，80μM)，TGF-β2的胞外分泌量显著减少(40％，50％)。

图7Western blot实验检测癌细胞TGF-β2蛋白表达量随着欧前胡素浓度的增加而减少，印证ELISA结果。

本发明的实施方式不限于此，按照本发明的上述内容，利用本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，本发明还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更，均落在本发明权利保护范围之内。

Claims (8)

1.欧前胡素在制备抑制食管癌肿瘤的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述食管癌为晚期食管癌，所述抑制食管癌肿瘤是抑制食管癌肿瘤转移。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的欧前胡素的结构式是

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物含有所述欧前胡素或其药用盐中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物含有药学上载体或赋形剂。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物是片剂、胶囊、滴丸、冲剂或口服液。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述载体是玉米油，所述的欧前胡素与玉米油的比例是1mg:100μL，所述的欧前胡素与服用所述欧前胡素的个体体重的比例是50μL/kg～100μL/kg。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述个体是人或小鼠。

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