JP5169818B2 - 育毛剤 - Google Patents
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Description
(1)下記一般式(I)で表されるリソスペルミン酸誘導体又はその塩を有効成分として含有する育毛剤。
(3)上記(1)又は(2)の育毛剤を含有する経口剤。
(4)上記(1)又は(2)の育毛剤を含有する外用剤。
(5)上記(1)又は(2)の育毛剤を含有する食品。
900kgのネコノヒゲの乾燥葉に5400Lの熱水を加え、抽出を行い、その得られた粗抽出液を濃縮、殺菌、乾燥して、粗抽出エキスを得た。その粗抽出エキスを、室温条件下で、DIAION(登録商標)HP−20(三菱化学社製)を用いたカラムクロマトグラフィーにより粗分画した。次いで、室温条件下で、TOYOPEARL(登録商標)HW−40C(東ソー社製)を用いたアフィニティクロマトグラフィーにより分離精製し、240mgのリソスペルミン酸Bのマグネシウム塩を単離した。
リソスペルミン酸Bの同定は、1H−NMRスペクトル、13C−NMRスペクトル、IRスペクトル、massスペクトルにより得られた情報を、文献(Chemical&Pharmaceutical Bulletin、1989年、37巻、2号、p.340−344)に開示されているリソスペルミン酸Bの物性に関する情報と比較することにより行った。
(1)毛根上皮系細胞の採取
雄性マウス(C3H/He Slc、4日齢)より背部皮膚片を採取し、幅2〜3mm程度の短冊状にした。その皮膚片を、500単位/mLのディスパーゼ(合同酒精社製)と5%のウシ胎児血清(MPバイオメディカルズ社製。以下同じ。)とを含む、30mLのダルベッコ変法イーグル培地(ニッスイ社製。以下同じ。)に移し、4℃で18時間放置した。
ディスパーゼを処理した皮膚片の表皮を剥離し、真皮を、0.25%のコラゲナーゼ(和光純薬社製)と5%のウシ胎児血清とを含む、30mLのダルベッコ変法イーグル培地に移し、37℃で1時間培養した。培養後、固まりがなくなるまで混和し、1000rpmで5分間遠心した。遠心後、リン酸緩衝生理食塩水で4回洗浄した。更に、70μmのフィルター(日本ベクトン・ディッキンソン社製)に通した後、フィルターをリン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。その洗浄液を1000rpmで10分間遠心した後、上清を除去した。その後、0.25%のトリプシン(ナカライテスク社製)と0.1%のエチレンジアミン四酢酸水溶液とを各3mL加え、5分間混和した。3mLのウシ胎児血清を加えた後、20mLのリン酸緩衝生理食塩水を加え、シリコンメッシュに通した。シリコンメッシュを通過してきたものを1000rpmで5分間遠心し、上清を除去した。その後、10%のウシ胎児血清を含む10mLのダルベッコ変法イーグル培地に懸濁し、毛根上皮系細胞を得た。
(2)実験方法
上記(1)の方法で採取した細胞を、96well plateに3×104cells/wellの濃度で播種し、5%CO2存在下、37℃で18時間培養した。その後、リン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、ケラチノサイトSFM(ギブコ社製)に培地を交換した。そこに、実施例1で得られたリソスペルミン酸Bを0.1μg/mLの濃度になるように加え、5%CO2存在下、37℃で6日間培養した後、MTT法により細胞数を測定した。
(3)評価方法
評価は、最終濃度が0.5%となるようにエタノールを添加した細胞(陰性対照)の細胞数を100%として、リソスペルミン酸Bを添加した細胞の細胞数と陰性対照の細胞数とを比較することにより行った。
(4)試験結果
図1に示すように、リソスペルミン酸Bは毛根上皮系細胞の増殖を有意に促進する作用を有することが確認された(P<0.01、unpaired t−test)。なお、図1において、細胞数は平均+標準誤差で表した(n=5)。
(1)実験方法
雄性マウス(C3H/HeCrlCrlj、8週齢)の後背部の被毛を、動物用バリカンを用いて刈り取った。刈毛より5日経過した後、平日のみ1日1回の間隔で、0.5mg/mLの実施例1で得られたリソスペルミン酸Bの50%エタノール溶液0.1mLを、64日間塗布した。陰性対照として、0.1mLの50%エタノールを塗布した。なお、1処理群あたり6匹のマウスを用いた。また、発毛の観察は、平日のみ1日1回行った。
(2)試験結果
図2に示すように、リソスペルミン酸Bは、陰性対照と比較して、早期に発毛が認められ、発毛促進作用を有することが確認された。
表1に記載の配合割合に従い、常法により、錠剤を製造する。
表2に記載の配合割合に従い、常法により、顆粒剤を製造する。
表3に記載の配合割合に従い、常法により、ソフトカプセル剤を製造する。
表4に記載の配合割合に従い、常法により、ヘアトニックを製造する。
表5に記載の配合割合に従い、常法により、ヘアクリームを製造する。
表6に記載の配合割合に従い、常法により、飲料を製造する。
表7に記載の配合割合に従い、常法により、キャンディーを製造する。
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