JPH01268682A

JPH01268682A - 腎機能改善剤及びリソスペルミン酸塩の製造方法

Info

Publication number: JPH01268682A
Application number: JP9690688A
Authority: JP
Inventors: Hikokichi Oura; 大浦　彦吉; Itsuo Nishioka; 西岡　五夫; Takako Yokozawa; 横沢　隆子; Genichiro Nonaka; 源一郎野中; Takashi Tanaka; 隆田中; Koreo Takeuchi; 竹内　惟雄
Original assignee: Minophagen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Minophagen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1988-04-21
Filing date: 1988-04-21
Publication date: 1989-10-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明はリソスペルミン酸、及びその医薬上許容される
塩、即ちマグネシウム（以下、Ｍｇ）、カリウム（以下
、Ｋ）、アンモニウム（以下、Ｎｕ、）、及びカルシウ
ム（以下、Ｃａ）塩等の塩類を有効成分として含有する
腎機能改善剤に関するものである。

（従来技術）リソスペルミン酸は、和漢薬の丹参（Ｓａｌｖｉａｍｉ
ｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　Ｂｕｎｇｅの根）より単離され
るジハイドロカフェイン酸（Ｄｉｈｙｄｒｏｃａｆｆｅ
ｉｃ　Ａｃ１ｄ）の４量体と考えられているが、従来、
丹参には血管拡張、血圧降下作用等の薬理作用があるこ
とが知られていた。

（発明が解決しようとする問題点）本発明者らは丹参エキス、及び各画分について種々研究
し、初めてその活性成分のリソスペルミン酸の塩類を単
離して、従来解明されていなかったその立体化学構造の
が析を成し遂げた。また併せて、これらについて腎機能
改善作用の有無を検討した結果、本願化合物が顕著な上
記作用を示すことを発見し、本発明を完成するに至った
ものである。即ち、腎不全患者の治療法としては、従来
、保存療法（食事療法、薬物療法）、透析療法、腎移植
等が知られていたが、本発明者等は丹参エキスによる薬
物療法について研究を重ね、後述する腎機能改善剤に関
する薬理作用を指標として、丹参の水抽出物の精製を行
なった。その結果これらの活性成分はリソスペルミン酸
のＭｇ、　Ｋ、　ＮＨａ等の塩であることを解明したも
のである。

（発明の構成）本発明に係る化合物は、式：で示されるリソスペルミン酸の医薬上許容される塩であ
る。これらのうちリソスペルミン酸のＭｇ塩、Ｋ＋ＮＨ
４塩、Ｃａ塩は一般式：［但し、式中、Ｍ　ｌ　４ｐは、Ｍｇ”Ｋ＋Ｎ）Ｉｔ＋
またはＣａ”を、夫々表わす、コにより示される。

上記式（１）で示される化合物は、丹参（Ｓａｌｖｉａ
ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　Ｂｕｎｇｅの根）の抽出液
について、カラムクロマトグラフィーによって所定の両
分を分取することにより得られる。即ち、例えば、丹参
の抽出液をｐＨ２〜４に調節した後、これをカラムクロ
マトグラフィーにかけ水で洗浄し、次に酢酸マグネシウ
ム、または酢酸カルシウム等の酢酸塩水溶液を流した後
水洗し、含水メタノールを翔いて溶出した画分を分取し
、さらにこれを精製することによりリソスペルミン酸塩
が得られる。ま′た、同様に丹参の抽出液をカラムクロ
マトグラフィーにかけ薄層クロマトグラフ法でモニター
してメインスポットを含むプラクジョンを分取し、さら
に薄層クロマトグラフ法でモニターしてメインスポット
を含むフラクションをカラムクロマトグラフィーで分画
することによってもリンスペルミン酸Ｍｆｉ塩、及びリ
ソスペルミン酸Ｋ＋ＮＨ４塩が得られる。

これらの化合物についての腎機能改善作用を調べる方法
として、アデニン認発腎不全ラット（？ｊｅｐｈｒｏｎ
、　Ｖｏｌ、４４．　ｐ、２３０〜２３４１９８６．工
、　Ｙｏｋｏｚａｗａｅｔａｌ、）の血清中尿素窒素、
クレアチニン、メチルグアニジン、グアニジノコハク酸
等のズ毒症物質の含量を測定する方法と、腎機能の糸球
体濾過率、腎血漿流量、腎血流量等を測定する方法とが
あるが、本願化合物はこれらによりズ毒症物質の低下作
用と腎機能亢進作用が顕著に示唆されており、腎機能改
善剤として有用である。

上記本願化合物は、そのままの形で薬剤として使用され
、この場合の投与量、投与方法および製剤の形態は次の
通りである。

投与方法は、経口投与あるいは注射のいずれも選択でき
る。経口投与による投与量は患者の年齢、症状等により
異なるが、通常軽〜中等度の腎不全の成人患者−人に対
し一日当り１５０〜１８００ｍｇの範囲で用いることに
より所定の効果が期待できる。

投与形態としては、経口剤として製剤上許容きれる無害
の賦形剤、例えば乳糖、馬鈴薯澱粉、アルギン酸ナトリ
ウム、沈降炭酸カルシウム、アミノ酢酸、合成珪酸アル
ミニウム、結晶セルロース等を一種あるいは数種を配合
し、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠及びカプセル剤とする
ことができる。

また、リソスペルミン酸塩は、水に易溶性であることか
ら、注射剤として通常、成人患者−人に対し、−日当り
９０〜１０８０　ｍｇの範囲の投与量で用いることによ
り本願の効果が期待できる。この場合は注射用蒸留水の
他、製剤上許容きれる等張化剤、ｐＨ調整剤、例えば生
理食塩液、水酸化ナトリウム液等を加えて注射剤とする
ことができる。

以下、リソスペルミン酸の塩についての実施例、及び薬
理実験例を掲げるが、これらの薬理試験から本願化合物
は２４日間の連続投与により血清尿素窒素、クレアチニ
ン、メチルグアニジン、グアニジノコハク酸等の尿毒症
物質を低下させ、また−同腹腔内投与により糸球体濾過
値、腎血漿流量、腎血流量を増加きせて腎機能を充進す
ることを顕著に認めることができた。これらの作用機序
として、尿中プロスタグランジンＰＧＥＩならびにＰＣ
ｌ、の代謝産物である６−ケドーＰＧＦ、αの増加がリ
ソスペルミン酸塩によって認められたことは、原則動脈
の拡張により腎の血流を増加許せ、次いで腎機能を充進
し、尿毒症物質の排泄を促進させるものと思われる。尚
、本願化合物は長期間投与しても動物の動態、解剖所見
、代謝に異常は認められない。

［実施例１コリソスペルミン酸融塩およびに＋ＮＨ４塩の製造丹参（
Ｓａｌｖｉａ　ｍ１ｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　Ｂｕｎｇｅ
の根）を水抽出し、その水抽出エキスをＭ（Ｊ−ｇｅｌ
　ＣＵＰ−２０Ｐカラムクロマトグラフイーで分画し、
フラクション１〜４を得る。フラクション３を再びＭＣ
Ｉ−ｇｅｌ　ＣＨＰ−２０Ｐカラムクロマトグラフイー
でグラジェント溶離し、フラクション３−１と３−２を
得る。薄着クロマトグラフ法でモニターしてメインスポ
ットを含むフラクション３−１画分をセファデックスＬ
Ｈ−２０を充填剤としたカラムクロマトグラフィーで分
画し、リソスペルミン酸Ｍｇ塩およびリソスペルミン酸
Ｘ＋ＮＨ，塩を得た。フラクション３−２画分からも同
様の操作により活性成分を得た。工程を表１に示す、収
率は次の通りである。

リソスペルミン酸Ｍｇ塩　　　　　　約１．７％リソス
ペルミン酸Ｋ＋ＮＨ４塩　　　　約０．４％リソスペル
ミン酸Ｍｇ塩比旋光度［αコＡ’＋１４７．７°（ｃ＝１．７．Ｍｅ
ＯＨ）分析　Ｃ５ａＨｚａｏ　ｓ＊Ｍ　ｇ・４　Ｈｔ　
Ｏ理論値　Ｃ，５３，１９：　Ｈ，４，４６゜測定値　
Ｃ，５３，２３；　Ｈ，４，３２゜リソスペルミン酸に
＋ＮＨ、塩比旋光度［αコＰ＋１１６．６°（ｃ＝２．２．　Ｍｅ
ＯＨ）分析　（ｃ　３＝Ｈｔｏｏ　ｔ＊）ｔＫ　（Ｎ　
Ｈ４）＊　・３　Ｈｚ　。

理論値　Ｃ，５４，７２薯Ｈ，４，７２；　Ｎ、２．６
７゜測定値　Ｃ，５３，７２；　Ｈ，４，４６：　Ｎ、
２．３２゜（１，８５ｇ）　　　　（１，９ｇｇ）　　
　　　（ｚ、　８ｇ）［実施例２］リソスペルミン酸Ｍｇ塩の製造丹参（Ｓａｌｖｉａ　ｍ１ｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　Ｂｕ
ｎｇｅの根）を水抽出する。得られた抽出液を塩酸でｐ
）１３程度に調整した後、ＭＣＩ−ｇｅｌ　ＣＨＰ−２
０Ｐカラムク０７トグラフイーに付し、リソスペルミン
酸をカラム担体に吸着きせる。水でカラムを洗浄後、０
．１Ｍ酢酸マグネシウム溶液を流し再び水で洗浄する。

次に、水−メタノールのグラジェント溶離を行い、２０
〜４０％メタノールで溶出きれる塩化第二鉄試薬に陽性
の両分を集め濃縮する。得られた画分をセブアデンクス
ＬＨ−２０を充填剤としたカラムクロマトグラフィーで
精製し、リソスペルミン酸Ｍｇ塩を得た。収率は２．３
％である。工程を表２に示す。

この方法は、実施例１の方法に比べ抽出エキスを濃縮す
る必要がなく、またリソスペルミン酸Ｍｇ塩だけをより
簡便に、収率よく得ることができる点で有利である。

［実施例３コリソスペルミン酸Ｃａ＋塩の製造実施例２と同様の方法により、酢酸マグネシウムの代わ
りに酢酸カルシウムを用いリソスペルミン酸Ｃａ＋塩を
得る。

表２このようにして得られたリソスペルミン酸Ｍｇ塩および
Ｋ＋ＮＨ４塩は、以下のような性質及び化学構造を有す
る。

（ａ）いずれも水に易溶、アセトン、酢酸エチルに難溶
である。

（ｂ）　”　Ｃ−ＮＭＲスヘクトル（５３）Ｌｔ　Ｃｓ
−Ｃａ　７　エ／　　）Ｌ−カルボン酸４量体であるこ
とを示す。

（ｃ）灰分の量、及びアセトンに難溶性であることから
フェノールカルボン酸の塩であることが示唆きれ、塩酸
により処理したもののＩＲスペクトルによりリソスペル
ミン酸が確認される。

（ｄ）　Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ＦＡＢ−ＭＳにおいてそれ
ぞれｍ／ｚ７３９及び７５５に最大イオン・ピークを示
し、またＸ線分析によりＭｇＩ２、Ｋ＋イオンが検出さ
れる。リソスペルミン酸の分子量が７１８であるから、
ｍ／ｚ７３９はＭｇ塩、ｍ／ｚ７５５はに塩であること
を示す。

（ｅ）丹参より抽出したリソスペルミン酸Ｍｇ塩は、リ
ソスペルミン酸から合成したＭｇ塩とＩＲスペクトルが
一致しく第１図）、またに−ＮＨ４塩はＩＲスペクトル
（第２図）において、３２００ｃｍ−’と１４００ｃｍ
−”にアンモニウム塩由来の吸収を示す０元素分析によ
り、Ｋ−Ｎ）１．塩は、Ｋ”ＮＨ＜＝約１：３の比であ
る。

（ｆ）立体構造については、リソスペルミン酸のメチル
化体をメタツリシスして得られる式：で示される化合物
はその比旋光度よりＲ配置。またメチル化体を還元して
得られた式：で示される化合物についてのＮ０ＥＳＹスペクトルによ
り、α位のジメトキシフェニル基と、β位のヒドロキシ
メチル基はトランス配置であると決定した。

（ｇ）メチル化体より誘導した式：で示きれる化合物と、メチル化体をメタツリシスで示き
れる化合物とのＣＤ差スペクトルにおけるコツトン効果
により、β位の絶対配置はＲと推定される。即ち、リソ
スペルミン酸Ｍｇ塩とに−Ｎ）１．塩は、前記一般式（
２）で示される立体構造を持つと結論された。

表３リソスペルミン酸　　　　　　　　　　　　５．８８　
　（４，６）　　　　　４．４７［薬理試験例］試験例［１コアデニン誘発腎不全ラットの尿毒症物質低下試験り１）
病態動物の調整並びに尿毒症物質の測定法ウィスター系
雄性ラット（体重１５０ｇ前後）を用い、０．７５％ア
デニン含有飼料（蛋白質１８％、炭水化物７２．９％、
脂肪２％、ビタミン混合１％、食塩混合４％、セルロー
ス粉末２％、塩化コリン０．１％）と水は自由摂取とし
、飼育室内は恒温恒温（２３°Ｃ１ＲＨ６０％）、１２
時間毎の明暗サイクルとした。２４日目に断頭層殺し、
得られた血清の尿素窒素はウレアーゼ・インドフェノー
ル法で、クレアチニン、メチルグアニジン、グアニジノ
コハク酸はトリクロロ酢酸で除蛋白後高遮液体クロマト
グラフィー（日本分光社製グアニジノ化合物分析システ
ム）で測定した。

（２）腎機能改善作用リソスペルミン酸Ｍｇ塩を水に溶解し、飲水として１日
１匹当り１５ｍｇ、　３０ｍｇ、６０ｍｇ／ｋｇを投与
した。飼育条件および尿毒症物質の測定は、上記と同じ
方法で行なった。

（３）結果リソスペルミン酸塩の血清中尿素窒素およびクレアチニ
ン量への影響リソスペルミン酸塩の血清中グアニジノ化合物への影響試験例［２コアデニン誘発腎不全ラットへの腎機能亢進試験（１）病
態動物の調整並びに腎機能の測定法実験例［１コと同様
０．７５％アデニン食で飼育し６日目のラット（体重２
００　ｇ前後）を用いた。リソスペルミン酸Ｍｇ塩を２
．５ｍｇ、　　５　ｍｇ、　１０ｍｇ、　２０ｍｇ／ｋ
ｇを腹腔内投与し、５．５〜６時間後に採血と採尿を行
ない、糸球体濾過値（ＧＦＲ）、腎血漿流量（ＲＰＦ）
、腎血流量（ＲＢＦ”）、尿中尿素、クレアチニンの測
定を行なった。

クリアランス試験は、投与５時間後にチオ硫酸ナトリウ
ム（７５〜９０ｍｇ　）あるいはパラアミノ馬尿酸（１
５〜２０ｍｇ）を静脈投与し、血漿中の濃度を夫々ヨー
ド滴定法、比色法で測定した。

ヘマトクリット値は測定装置により測定し、次式により
ＧＦＲ，ＲＰＦ、　ＲＢＦを算出した。

クリアランステスト（式）０丁、：尿中のチオ硫酸ナトリウム濃度（ｍｇ／ｍ１）
ｖ：３０分間に排泄した尿量（ｍｌ）Ｐ７．：血漿中のチオ硫酸ナトリウム濃度（ｍｇ／ｍ１
）（採尿の中間点で）ＵＰＡＩＩ　：尿中のパラアミノ馬泳酸濃度（ｍｇ／ｍ
１）ＰＰＡＨ：血漿中のパラアミノ馬床酸濃度（ｍｇ／
ｍｌ）ＲＦｏＲＢＦ　−（ｍｌ／ｍｉｎ／ｋｇ）　−ＨｔＨｔ：へマドクリット（１の逆数）（２）腎機能光道作用リソスペルミン酸Ｍｇ塩の２．５〜２０ｍｇ／ｋｇを生
理食塩液に溶がし、ラットに腹腔内投与した。飼育条件
、腎機能試験および尿毒症物質の試験は上記と同じ方法
で行なった。

採血は投与から５．７５時間後、採尿は５．５〜６時間
で行なった。

（３）結果リソスペルミン酸Ｍ［塩の腎機能への影響リソスペルミ
ン酸Ｍｇ塩の尿中尿素、床中クレアチニンへの影響数値は、ラット六匹の平均値上標準誤差、（）は対照値
を１００とした場合の％、ａ）は対照値との有意差、Ｐ
＜０．０５試験例［３］アデニン誘発腎不全ラットの尿中プロスタグランジンに
対するリソスペルミン酸Ｍｇ塩の効果試験（１）病態動
物の調整ならびにプロスタグランジンの測定法実験例［１コと同様０．７５％アデニン食で飼育し、６
日目のラット（体重２００〜２１０　ｇ）を用いた。リ
ソスペルミン酸Ｍｇ塩を１０ｍｇ、２０　ｍｇ／ｋｇを
腹腔内投与し、３〜６時間の尿を採取し、プロスタグラ
ンジンＥ２、及び６−ケドーＰＧＦ　Ｉαをラジオイム
ノアッセイ法で測定した。

（２）プロスタグランジン生成促進作用リソスペルミン
酸Ｍｇ塩の１０　ｍｇ、　２０　ｍｇ／ｋｇを生理食塩
水に溶解し、ラット（体重２００ｇ前後）に腹腔内投与
し、上記と同じ方法で測定した。

（３）結果試験例［４コ急性毒性試験リソスペルミン酸Ｍｇ塩についてＬＤｍ。を測定した結
果は次の通りである。

（１）腹腔内投与リソスペルミン酸Ｍｇ塩のＬＤｓｏ　　　＞２１９５　
ｍｇ／ｋｇ（ｄｄｙｍ性７ウス、６週令、体重３１〜３
４ｇ、Ｕｐａｎｄ　Ｄｏｗｎ法により測定）（２）経口投与リソスペルミン酸Ｍｇ塩のＬＤｓｏ　　　＞３０００　
ｍｇ／ｋｇ（ｄａｙ雄性マウス、６週令、体重３１〜３
５　ｇ、　Ｕｐａｎｄ　Ｄｏｗｎ法により測定）

【図面の簡単な説明】

第１図は、本願発明に係るリソスペルミン酸のＭ３塩の
赤外線吸収スペクトル図、第２図は、そのに＋Ｎ１（、
塩の赤外線吸収スペクトル図である。１・・・・・Ｍｇ塩２・・・・・合成Ｍｇ塩３・・・・・Ｋ塩４・・・・・Ｋ”ＮＨ４塩５・・・・・合成に＋ＮＨ４塩特許出願人　合資会社ミノファーゲン製薬本舗手続補正
書昭和６３年６月６（ψ

Claims

【特許請求の範囲】

（１）式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるリソスペルミン酸、及びその医薬上許容され
る塩を有効成分として含有する腎機能改善剤。
（２）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中、Ｍ＾２＾＋はＭｇ＾２＾＋、Ｋ＾＋、Ｎ
Ｈ＿４＾＋またはＣａ＾２＾＋を、夫々表わす）で示されるリソスペルミン酸の塩を有効成分として含有
する腎機能改善剤。
（３）丹参の抽出液をｐＨ２〜４に調整した後、これを
カラムクロマトグラフィーにかけリソスペルミン酸を吸
着させ、これに酢酸マグネシウム、または酢酸カルシウ
ム等の酢酸塩水溶液を流した後、メタノール溶液を用い
て溶出した画分を分取し、さらにこれを精製することを
特徴とするリソスペルミン酸塩の製造方法。
（４）充填剤として多孔性ゲル担体、例えば、ＭＣＩｇ
ｅｌＣＨＰ２０Ｐ（商標名：三菱化成社製、以下同じ）
、セフアデックスＬＨ−２０（商標名：フアルマシア社
製、以下同じ）、またはトヨパールＨＷ−４０（商標名
：東洋曹達工業製、以下同じ）等を使用するカラムクロ
マトグラフィーによる特許請求の範囲第３項記載のリソ
スペルミン酸塩の製造方法。
（５）丹参の抽出液をカラムクロマトグラフィーにかけ
薄層クロマトグラフ法でモニターしてメインスポットを
含むフラクションを分取し、さらに該フラクションを薄
層クロマトグラフ法でモニターしてメインスポットを含
むフラクションをカラムクロマトグラフィーで分画する
ことによりリソスペルミン酸Ｍｇ塩及びリソスペルミン
酸Ｋ＋ＮＨ＿４塩を含むフラクションを分取することを
特徴とするリソスペルミン酸Ｈｇ塩及びリソスペルミン
酸Ｋ＋ＮＨ＿４塩の製造方法。
（６）丹参の抽出液を多孔性ゲル担体を充填剤としたカ
ラムクロマトグラフィーにかけ、分取したフラクション
を多孔性ゲル担体を充填剤としたカラムクロマトグラフ
ィーで分画することによりリソスペルミン酸Ｍｇ塩及び
リソスペルミン酸Ｋ＋ＮＨ＿４塩を含むフラクションを
分取する特許請求の範囲第４項記載のリソスペルミン酸
Ｍｇ塩及びリソスペルミン酸Ｋ＋ＮＨ＿４塩の製造方法
。
（７）充填剤として多孔性ゲル担体、例えば、ＭＣＩｇ
ｅｌＣＨＰ２０ＰまたはトヨパールＨＷ４０等を使用す
るカラムクロマトグラフィーによる特許請求の範囲第６
項記載のリソスペルミン酸塩の製造方法。