JP5142311B2 - ゲニポシド酸誘導体 - Google Patents

Description

本発明は、新規なゲニポシド酸誘導体、および当該化合物を含む医薬組成物および食品に関する。

杜仲（Eucommia ulmoides oliver）は、中国中央部起源のトチュウ科トチュウ属の一科一属一種に分類される落葉性木本類で、樹高が２０ｍに達する喬木である。杜仲は、一般にお茶と称するツバキ科の植物と比較し、カフェインを全く含んでいないほか、含有物も異なる。杜仲葉は、１９８０年代から飲料としての用途が普及している。

天然物由来の食品や漢方薬は、一般に副作用が少ないなどの利点を有することから、近年において発生が増加している生活習慣病に対してのその有用性が注目されている。上述の杜仲に関しても、杜仲葉の成分のリパーゼ阻害活性について検討した例もいくつかの報告がされている（特許文献１〜５を参照）。杜仲葉に含まれる天然成分としては、アスペルロサイド、アウクビン、クロロゲン酸およびゲニポシド酸などが知られており、このうち杜仲葉に特徴的な成分であるゲニポシド酸は、体内に吸収されると、副交感神経に作用し、動脈の筋肉（平滑筋）を弛緩させることにより、血圧降下作用を示すことが知られている（非特許文献１）。
特開２００５−２８９９５０号公報 特開２００５−２８９９５１号公報 特開２００３−３４２１８５号公報 特開２００２−１７９５８６号公報 特開２００２−２７５０７７号公報 Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ５９（３），１１７〜１２０

杜仲葉は漢方薬として種々の効能が知られており、医薬品探索の観点から杜仲葉に含まれる成分には興味関心が寄せられていた。特に、杜仲葉には微量成分として未知の化合物が含まれると考えられており、成分の化学構造の特定および有機合成による製造により、薬効を有する新規化合物を見いだす可能性がある。

したがって、本発明は、杜仲葉に含まれる化合物、特に新規な化合物を提供すること目的とする。さらに、本発明は、当該化合物を含む医薬組成物、食品および飲料を提供することを目的とする。さらに、本発明は、当該化合物を含む肥満またはそれと関連する疾患の治療または予防のための医薬組成物、肥満またはそれと関連する疾患の症状を改善するための食品および飲料を提供することを目的とする。

本発明者は、上記の課題解決のために鋭意研究を進めたところ、杜仲葉に含まれる化合物およびその類縁体が抗肥満作用を有することを見いだし、本発明を完成させた。
すなわち、本発明の１つの側面によれば、式（Ｉ）：

［式中、Ｒ^１は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
Ｒ^２は、水素原子またはＣ_１−６アルキルであり、前記アルキルはアリールまたはヘテロシクリルにより置換されていてもよく、前記アリールおよびヘテロシクリルは、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ_１−６アルコキシまたはＣ_７−１４アラルキルオキシから選択される置換基により置換されていてもよく；
Ｒ^３は、水素原子またはＣ_１−６アルキルであり；
Ｒ^４は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルから選択される］
の化合物、またはその塩が提供される。

Ｒ^２の例としては、水素原子、メチル、ヒドロキシメチル、イソプロピル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ベンジル（フェニルメチル）および（４−ヒドロキシフェニル）メチルなどが挙げられ、特に、ベンジルまたはインドール−３−イルメチルが好ましい。

本発明の別の側面において、上記式（Ｉ）の化合物またはその塩を含む医薬組成物が提供される。１つの態様において、前記医薬組成物は、肥満、メタボリックシンドローム、２型糖尿病、高血圧および高脂質血症から選択される疾患の治療または予防に使用される。

本発明のさらに別の側面において、上記式（Ｉ）の化合物またはその塩を含む食品または飲料が提供される。１つの態様において、前記食品および飲料は、機能性食品、健康食品、健康補助食品、栄養補助食品、保健機能食品、特定保健用食品または栄養機能食品として使用される。

本発明のさらに別の側面において、式（ＩＩ）：

［式中、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、請求項１に定義したとおりである］
の化合物を、式（ＩＩＩ）：

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、請求項１に定義したとおりである］
と反応させる工程を含む、請求項１に記載の化合物の製造方法が提供される。

本発明の具体的な態様

以下、本発明をさらに具体的に説明する。
本明細書において「Ｃ_１−６アルキル」とは、炭素数１〜６の直鎖状、分岐鎖状、環状または部分的に環状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３−エチルブチル、および２−エチルブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロプロピルメチルなどが含まれ、例えば、Ｃ_１−４アルキルおよびＣ_１−３アルキルなども含まれる。

本明細書において「アリール」とは、６〜１０員芳香族炭素環基を意味し、例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルなどが含まれる。
本明細書において「ヘテロシクリル」とは、５〜１０員の飽和、部分飽和または芳香族のヘテロ環基を意味し、例えば、インドリル、イミダゾリル、ピロリルなどが含まれる。

本明細書において「Ｃ_７−１４アラルキル」とはアリール基を含む炭素数が７〜１４のアリールアルキル基を意味し、例えば、ベンジル、１−フェネチル、２−フェネチル、１−ナフチルメチル、２−ナフチルメチルなどが含まれる。

本明細書において「Ｃ_７−１４アラルキルオキシ」とは、基−Ｏ（Ｃ_７−１４アラルキル）を表し、ここで当該Ｃ_１−６アラルキルは既に定義したとおりである。
本明細書において「Ｃ_１−６アルキルカルボニル」とは、基−ＣＯ（Ｃ_１−６アルキル）を表し、ここで当該Ｃ_１−６アルキルは既に定義したとおりである。

本明細書において「Ｃ_１−６アルキルカルボニルオキシ」とは、基−ＯＣＯ（Ｃ_１−６アルキル）を表し、ここで当該Ｃ_１−６アルキルは既に定義したとおりである。
本発明の化合物の塩とは、有機化学において通常使用されうる塩であれば特に限定されない。本発明化合物が塩基と形成する塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基との塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン等の有機塩基との塩などが挙げられる。

本発明の化合物は、例えば、以下の方法により調製することができる。

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、およびＲ^１４は、本明細書において既に定義したとおりである］
式（ＩＩ）のゲニポシド酸誘導体を、適当な縮合剤の存在下、適当な溶媒中で、式（ＩＩＩ）のアミノ酸エステルによりアミド化することにより、式（Ｉ）の化合物を調製することができる。本反応で使用される適当な溶媒としては、非プロトン性溶媒、例えば、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＨＭＰＡ、アセトニトリル、プロピオニトリル、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル、ジブチルエーテル、ジメトキシエタンなどが挙げられる。本反応で使用される適当な縮合剤としては、例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（以下、ＷＳＣとも称する）、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミドなどのカルボジイミド化合物や、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスフォニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル−）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリンなどが挙げられる。本反応においては、必要に応じて反応促進性の添加剤を使用してもよい。反応促進性の添加剤としては、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−カルボキシミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下、ＨＯＢｔとも称する）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアゾール、などの活性エステル剤や、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリス［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］アミンなどのｐＨ調整剤、またはブタノールなどが挙げられる。この工程は、特に限定はされないが、例えば０℃〜５０℃、好ましくは室温の反応温度、および例えば０．１〜４８時間の反応時間で行うことができる。

式（ＩＩＩ）のアミノ酸エステルとして光学活性体（Ｓ体またはＲ体）を使用することにより、光学活性な式（Ｉ）の化合物を調製することができる。当該アミノ酸エステルの具体例としては、例えば、フェニルアラニンのエステル（例えば、メチルエステル）、水酸基が保護基により保護されたチロシンエステル（例えば、メチルエステル）、ヘテロ環内の窒素原子が保護基により保護されたヒスチジンのエステル（例えば、メチルエステル）、ヘテロ環内の窒素原子が保護基により保護されたトリプトファンのエステル（例えば、メチルエステル）等が挙げられる。ここで、適切な保護基の選択、保護基の導入および脱離は、有機化学の技術分野に属する当業者によって容易になされる事項である。

上記反応により得られた式（Ｉ）の化合物をさらに変換することにより、別の式（Ｉ）の化合物に誘導することもできる。前記変換の例としては、エステルの加水分解、水酸基の脱保護、または保護基の導入などが挙げられ、これらの変換は有機化学の技術常識に基づいて容易に行うことができる。

本発明の化合物は、杜仲葉に含まれる成分を精製することにより入手することもできる。当該精製により、例えば以下の化合物を得ることができる。

本発明の医薬組成物は、種々の剤形、例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁液、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤などとすることができ、例えば、経口投与のための錠剤、顆粒、散剤またはカプセル剤などとすることができるが、これらには限定されない。当該医薬組成物は、一般に用いられる各種成分を含みうるものであり、例えば、１種もしくはそれ以上の薬学的に許容され得る賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、コーティング剤等を含みうる。また本発明の医薬組成物は、持続性または徐放性剤形であってもよい。

本発明の分画物は、例えば錠剤の成分として使用することができる。当該錠剤は、医薬製剤の分野において通常使用される製造方法により製造され、例えば、結晶セルロース、二酸化ケイ素、ショ糖脂肪酸エステル、酵母細胞壁、グリセリンなどの添加剤を使用することができる。また、賦形剤（例えば、麦芽糖、デキストリン、サイクロデキストリン、寒天、トウモロコシたん白、リン酸三カルシウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、植物油脂、グリセリン脂肪酸エステル、アラビアガム）を使用してもよい。

例えば上記錠剤の成分として使用することができる。当該錠剤は、医薬製剤の分野において通常使用される製造方法により製造され、例えば、結晶セルロース、二酸化ケイ素、ショ糖脂肪酸エステル、酵母細胞壁、グリセリンなどの添加剤を使用することができる。

本発明の抗肥満剤の投与量は、患者の体型、年齢、体調、疾患の度合い、発症後の経過時間等により、適宜選択することができ、本発明の医薬組成物は、治療有効量および／または予防有効量の抗肥満剤を含むことができる。例えば本発明の杜仲葉粉砕物またはその水抽出物として、一般に１０〜５００００ｍｇ／日／成人、好ましくは１００〜５０００ｍｇ／日／成人の用量で使用される。当該医薬組成物の投与は、単回投与または複数回投与であってもよく、例えば他の抗肥満剤などの他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。

本発明に係る食品および飲料の例としては、抗肥満効果を有する機能性食品、健康食品、健康補助食品、栄養補助食品（栄養ドリンク等）、保険機能食品、特定保険用食品、栄養機能食品、一般食品（ジュース、菓子、加工食品等）などが含まれる。本発明の食品または飲料は、任意の添加物として、鉄およびカルシウムなどの無機成分、種々のビタミン類、オリゴ糖およびキトサンなどの食物繊維、大豆抽出物などのタンパク質、レシチンなどの脂質、ショ糖および乳糖などの糖類を含むことができる。本発明の食品または飲料を使用することにより、本発明の肥満改善効果を有する当該食品または飲料の日常的および継続的な摂取が可能となり、肥満の効果的な改善、および肥満に関連する疾患（例えば、高血圧症、高脂質血症、糖尿病、メタボリックシンドロームなど）の効果的な予防が可能となる。

以下、本発明の好適な実施例についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、特に言及がなければ、使用した溶離液は容積％で表すものとする。

［実施例１］ 乾燥杜仲葉水抽出物からの本発明の化合物の単離
乾燥杜仲葉水抽出物から式（ＩＶ）の化合物（式（Ｉ）において、Ｒ^２がベンジルであり、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、およびＲ^１４が、水素原子である。以下、化合物１と称する）を単離した。

プラスチック樹脂製容器（１０Ｌ）に特開２００５−２８７４６９号公報の実施例４の記載に基づいて製造される乾燥杜仲葉（５７７．６ｇ）を入れ，蒸留水（４．６Ｌ）を加え、６５℃で１０時間加熱した。その後、綿栓およびろ紙にて、ろ過し、葉を取り除き、ろ液をＤｉａｉｏｎ ＨＰ２０（三菱化学社製）を充填したカラム（直径５７０ｘ長さ３１００ｍｍ）に付した。カラムから溶出する水溶液を回収し、さらに水（３．０Ｌ）および３０％ＭｅＯＨ水溶液（２．５Ｌ）にて溶出後、３０％ＭｅＯＨ水溶液（０．５Ｌ）にて目的の化合物を含むフラクションを溶出させ、減圧濃縮して３．７８ｇの画分を得た。得られた画分を、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ（富士シリシア化学）を充填したカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝１５：８５→３０：７０→５０：５０→１００：０）で精製し、目的の化合物を含むフラクション（７０１．４ｍｇ）を得た。この画分をさらにＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳを充填したカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝０：１００→５：９５→１０：９０→１５：８５→１００：０）で精製し、化合物１（１３．０ｍｇ）を白色粉末として得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．８８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ａ）、２．５０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．３Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．２、９．２Ｈｚ、Ｈ−９）、３．０９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、１４．０Ｈｚ、Ｈ−７’ａ）、３．２０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．２２−３．３１（４Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．３９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．２，９．２Ｈｚ、グルコースＨ−３）、３．６５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ａ）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８’）、４．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．６９（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、Ｈ−３）、７．１７−７．２５（５Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、 ３’、４’、 ５’、 ６’）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．２（Ｃ−５），３８．７（Ｃ−７’）、３９．２（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５６．７（Ｃ−８’） 、６１．４（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．８（グルコースＣ−３）、７８．３（グルコースＣ−５）、９７．８（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１５．８（Ｃ−４）１２７．４（Ｃ−４’）、１２７．９（Ｃ−７）、１２９．２（Ｃ−３’、−５’）、１３０．７（Ｃ−２’、−６’）、１３９．８（Ｃ−１’） 、１４４．８（Ｃ−８）、１４８．６（Ｃ−３）、１６８．９（Ｃ−１１）、１７７．０（Ｃ−９’）。

ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ：５２２［Ｍ＋Ｈ］^＋。
［実施例２］ 乾燥杜仲葉水抽出物からの本発明の化合物の単離
乾燥杜仲葉水抽出物から式（ＩＶ）の化合物（化合物１）および式（Ｖ）の化合物（式（Ｉ）において、Ｒ^２がインドール−３−イルメチルであり、Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、およびＲ^１４が、水素原子である。以下、化合物２と称する）を単離した。

実施例１と同様の手法により、乾燥杜仲葉（５７８ｇ）から、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０を３０％ＭｅＯＨ水溶液で溶出させて得られる画分（４ｇ）を得た。当該画分をＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳで精製して得られる画分（実施例１と同じ条件）のうち、化合物１を含む画分（７０１ｍｇ）をさらにＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳで精製し（実施例１と同じ条件）、化合物１（１２ｍｇ）および化合物２（４ｍｇ）を得た。

さらに、最初のＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳで精製して得られる画分のうち、アスペルロサイドとして得られた画分（２ｇ）以外の画分（１３４ｍｇ）をシリカゲルカラムで精製し（関東化学製のシリカゲル６０（球状）；ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝１５：１：０→１０：２：０．１）、式（ＶＩ）の化合物（３ｍｇ）を得た。

化合物２
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．６３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ａ）、２．２４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１５．３Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．６７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝９．２、９．２Ｈｚ、Ｈ−９）、３．１３（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．１８−３．２１（２Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、Ｈ−１０’ａ）、３．２６−３．２７（２Ｈ、ｍ、グルコースＨ−４、５）、３．３７（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．４３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．３、１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０’ｂ）、３．６３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ａ）、３．８４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６１（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、Ｈ−１１’）、４．６５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．０６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．５８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、６．９８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、７．９Ｈｚ、Ｈ−５’）、 ７．０６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、７．９Ｈｚ、Ｈ−６’）、 ７．０９（１Ｈ、ｓ、Ｈ−２’）、 ７．１１（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、７．３０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、Ｈ−７’）、 ７．５７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、Ｈ−４’）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）２８．３（Ｃ−１０’）、３６．０（Ｃ−５），３８．８（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５７．５（Ｃ−１１’） 、６１．３（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．７（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１１．８（Ｃ−３’）、１１２．２（Ｃ−７’）、１１５．５（Ｃ−４）、１１９．６（Ｃ−４’）、１１９．８（Ｃ−５’）、１２２．４（Ｃ−６’）、１２４．４（Ｃ−２’）、１２７．９（Ｃ−７）、１２９．０（Ｃ−８’） 、１３８．１（Ｃ−９’）、１４４．７（Ｃ−８）、１５０．２（Ｃ−３）、１６９．９（Ｃ−１１）、１８０．０（Ｃ−１２’）。

ネガティブ ＥＳＩ ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ：５５９［Ｍ−Ｈ］^＋。
式（ＶＩ）の化合物
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）２．０７（３Ｈ、ｓ、Ａｃ）、３．１８（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、３．２０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−４）、３．３７（２Ｈ、ｍ、グルコースＨ−４、５）、３．４２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、０．６Ｈｚ、グルコースＨ−２）、３．５７（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．６４（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−５）、３．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．３、１２．０Ｈｚ、グルコースＨ−６ａ）、３．８８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１２．０Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）４．６６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．７９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．９３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．３２（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、Ｈ−３）、５．５５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−１）、５．６０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．２、７．９Ｈｚ、Ｈ−６）、５．９０（１Ｈ、ｂｒ ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ−７）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）２０．０（ＯＣＯＣＨ_３）、３６．１（Ｃ−５），３８．９（Ｃ−４）、４６．２（Ｃ−９）、６１．８（Ｃ−１０）、６２．６（グルコースＣ−６）、７１．２（グルコースＣ−４）、７５．９（グルコースＣ−３）、７９．３（グルコースＣ−５）、８０．０（グルコースＣ−２）、８８．３（Ｃ−６）、９２．９（Ｃ−１）、９６．５（Ｃ−３）、９９．３（グルコースＣ−１）、１３０．０（Ｃ−７） 、１４４．７（Ｃ−８）、１７２．１（ＯＣＯＣＨ_３）、１８０．２（Ｃ−１１）。

ネガティブ ＥＳＩ ＬＣ−ＭＳ ｍ／ｚ：４１３［Ｍ−Ｈ］^＋。
［実施例３］ Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミド（化合物１）の合成
（工程１）Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド
ゲニポシド酸（３０．０ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（２７．７ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）を加え、その後、トリエチルアミン（０．０３０ｍＬ，０．２１５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣ（４０．０ｍｇ、０．２０９ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２３．５ｍｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）を加え、室温で１７時間攪拌した。その後、減圧濃縮後、ＣＨＣｌ_３（１．５ｍＬ）に溶解し、ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ（富士シリシア化学）を充填したカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ＝１４：２：０．１）で精製することにより、表題の化合物を白色粉末として得た（４２．０ｍｇ、収率９８％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．９１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．５６（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．５、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、３．０１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−７’ａ）、３．１９−３．３９（６Ｈ、ｍ、Ｈ−５、グルコースＨ−２、３、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．６４（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．７１（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ_３）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．９、Ｈｚ、グルコースＨ−１）、４．７１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、９．２Ｈｚ、Ｈ−８’）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．７２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１０（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、７．２１-７．３０（５Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．１（Ｃ−５），３８．０（Ｃ−７’）、３９．０（Ｃ−６）、４７．３（Ｃ−９）、５２．７（ＯＣＨ_３）、５５．３（Ｃ−８’） 、６１．４（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．３（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１５．８（Ｃ−４）、１２７．９（Ｃ−４’、Ｃ−７）、１２９．５（Ｃ−３’、−５’）、１３０．２（Ｃ−２’、−６’）、１３８．４（Ｃ−１’）、１４４．８（Ｃ−８）、１４８．７（Ｃ−３）、１７０．２（Ｃ−１１）、１７３．９（Ｃ−９’）。

ポジティブＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５５８［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
（工程２）Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミド
Ｎ−［（１Ｓ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド（４２．０ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）を０．５Ｎ水酸化ナトリウムのメタノール溶液（１．０ｍＬ）に溶解し、室温で５時間攪拌した。その後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ２０（ファルマシア社製）を充填したカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ）で精製することにより、表題の化合物を白色粉末として得た（１８．８ｍｇ、４６％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．８６（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．４８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、１６．５Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７０（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、７．３Ｈｚ、Ｈ−９）、３．０８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．３、１３．４Ｈｚ、Ｈ−７’ａ）、３．２１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．２８−３．３２（４Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．３８（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．６４（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１２．２Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．０Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６０（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８’）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４、７．９Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４、７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．６８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、Ｈ−３）、７．１５-７．２５（５Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．２（Ｃ−５），３８．７（Ｃ−７’）、３９．２（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５６．８（Ｃ−８’） 、６１．４（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７５．０（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．９（Ｃ−１）、１００．４（グルコースＣ−１）、１１５．８（Ｃ−４）、１２７．５（Ｃ−４’）、１２７．９（Ｃ−７）、１２９．３（Ｃ−３’、−５’）、１３０．７（Ｃ−２’、−６’）、１３９．３（Ｃ−１’） 、１４４．９（Ｃ−８）、１４８．８（Ｃ−３）、１６９．２（Ｃ−１１）、１７５．０（Ｃ−９’）。

ポジティブＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４４［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
［実施例４］ Ｎ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミドの合成
（工程１）Ｎ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド
出発物質としてゲニポシド酸（２８．９ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）およびＤ−フェニルアラニンメチルエステル（２８．０ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１、工程１と同様の手法により、表題の化合物を白色の粉末として得た（３５．０ｍｇ、８５％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．８９（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．５９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝８．５、１５．９Ｈｚ、Ｈ−６ｂ）、２．７３（１Ｈ、ｍ、Ｈ−９）、３．０４（１Ｈ、ｍ、Ｈ−７’ａ）、３．１８−３．３８（６Ｈ、ｍ、Ｈ−５、グルコースＨ−２、３、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．６４（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．７０（３Ｈ、ｓ、ＯＣＨ_３）、３．８５（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５．３Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４、７．９、ＨｚグルコースＨ−１）、４．７３（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．５、９．２Ｈｚ、Ｈ−８’）、５．１２（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４、７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．７２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１７-７．２７（６Ｈ、ｍ、Ｈ−３，Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．１（Ｃ−５），３８．２（Ｃ−７’）、３９．１（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５２．７（ＯＣＨ_３）、５６．１（Ｃ−８’） 、６１．３（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７４．９（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９７．７（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１５．９（Ｃ−４）、１２７．８（Ｃ−４’）、１２８．２（Ｃ−７）、１２９．５（Ｃ−３’、−５’）、１３０．２（Ｃ−２’、−６’）、１３８．４（Ｃ−１’）、１４４．８（Ｃ−８）、１４８．３（Ｃ−３）、１６９．８（Ｃ−１１）、１７３．７（Ｃ−９’）。

ポジティブＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：５５８［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
（工程２）Ｎ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−カルボキシエチル］−ゲニポシド酸アミド
出発物質としてＮ−［（１Ｒ）−２−フェニル−１−メトキシカルボニルエチル］−ゲニポシド酸アミド（３５．０ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を使用して、実施例１、工程２と同様の手法により、表題の化合物を白色の粉末として得た（２５．０ｍｇ、収率７３％）。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、５００ＭＨｚ）１．９４（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ａ）、２．６８（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．９、７．９Ｈｚ、Ｈ−９）、３．０８（１Ｈ、ｍ、Ｈ−７’ａ）、３．１１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−６ｂ）、３．２１（１Ｈ、ｍ、Ｈ−５）、３．２６−３．３１（４Ｈ、ｍ、グルコースＨ−２、４、５、Ｈ−７’ｂ）、３．３８（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−３）、３．６３（１Ｈ、ｍ、グルコースＨ−６ａ）、３．８４（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．２、１１．６Ｈｚ、グルコースＨ−６ｂ）、４．１６（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ａ）、４．２８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１４．７Ｈｚ、Ｈ−１０ｂ）、４．５５（１Ｈ、ｍ、Ｈ−８’）、４．６８（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．１、７．９、Ｈｚ、グルコースＨ−１）、５．１０（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝２．４、７．３Ｈｚ、Ｈ−１）、５．７２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−７）、７．１２-７．２５（６Ｈ、ｍ、Ｈ−３、Ｈ−２’、３’、４’、５’、６’）。

^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ、１２５ＭＨｚ）３６．５（Ｃ−５），３９．０（Ｃ−７’）、３９．３（Ｃ−６）、４７．４（Ｃ−９）、５７．２（Ｃ−８’） 、６１．５（Ｃ−１０）、６２．７（グルコースＣ−６）、７１．６（グルコースＣ−４）、７５．０（グルコースＣ−２）、７７．９（グルコースＣ−３）、７８．４（グルコースＣ−５）、９８．０（Ｃ−１）、１００．３（グルコースＣ−１）、１１６．２（Ｃ−４）１２７．４（Ｃ−４’）、１２８．０（Ｃ−７）、１２９．２（Ｃ−３’、−５’）、１３０．７（Ｃ−２’、−６’）、１３９．５（Ｃ−１’）、１４５．０（Ｃ−８）、１４８．１（Ｃ−３）、１６９．２（Ｃ−１１）、１７８．５（Ｃ−９’）。

ポジティブＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ：５４４［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
ＨＰＬＣによる化合物１の構造確認
実施例１、３および４で得られた化合物について、以下の条件によるＨＰＬＣ分析を行った。

カラム：Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５Ｃ１８−ＭＳ−ＩＩ
移動相 Ａ：メタノール
Ｂ：２０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ２．５）
グラジエント設定 Ａ：Ｂ＝１５：８５→５０：５０（０〜３０分）
→５０：５０（３０から３５分）
温度：３０℃
検出：ＳＰＤ−ＭＸＡ（２４０ｎｍ）
その結果、実施例１の化合物１の保持時間は２９．３分、実施例３のＳ体は２９．３分、実施例４のＲ体は２９．６分であった。実施例１の化合物１の保持時間は実施例３のＳ体のものとよく一致し、化合物１が実施例３のＳ体であることが確認された。

［実施例５］ ラット褐色脂肪細胞を用いた抗肥満作用試験
（１）褐色脂肪前駆細胞の培養
ラット褐色脂肪細胞培養キット（タカラバイオ、ＭＫ４２２）を使用して、褐色脂肪前駆細胞の培養を行った。前記脂肪細胞は、増殖・凍結保存後、３代目で分化誘導して試験に用いた。

増殖培地（ＤＭＥＭ ５００ｍＬ、アスコルビン酸 １ｍＬ、ビオチン １ｍＬ、パントテン酸 １ｍＬ、トリヨードチロニン ０．５ｍＬ、オクタン酸 １ｍＬ、牛胎児血清 ５０ｍＬ、抗生物質 １ｍＬ）、維持培地（増殖培地 １００ｍＬ、インシュリン １ｍＬ）、分化培地（増殖培地 １００ｍＬ、インシュリン １ｍＬ、デキサメタゾン ０．５ｍＬ、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）０．１ｍＬ）を調製した。

ラット褐色脂肪前駆細胞（凍結細胞、＞１．８×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｖｉａｌ）を融解した。細胞接種密度は２．５−５×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｃｍ^２となるように、融解サンプルを４５ｍＬの増殖培地に接種し、接種した増殖培地を７５ｃｍ^２デッシュに１０ｍＬずつ分注した。３７℃、５％インキュベーターで２４時間培養した後に、ＤＭＳＯおよび未接着の細胞を除くために増殖培地を交換し、４８時間培養した（７０％コンフルエンス状態となった）。培養細胞を、上記培養キットに付属の説明書に従い、凍結保存した。

（２）脂肪細胞における脂肪燃焼量の測定
凍結した培養細胞の融解サンプル（１０μＬ）を５００μＬの増殖培地（２４穴プレート）に播種し、２４時間培養した。その後、培地交換を行い、さらに４８時間培養した（９０％コンフルエンス）。さらに培地を分化培地に交換し４８時間培養し、その後維持培地に交換して２日間培養した。得られた培養液に化合物１（実施例３の方法により調製）を１００μｇ／ｍＬになるように添加し、３日間培養した。

各ウェルに培地の１／５量の１０％グルタルアルデヒドを添加し、３０分間静置した。その後、培地およびグルタルアルデヒド溶液を除去し、２００μＬの１０％グルタルアルデヒドを添加し、６０分間静置した。グルタルアルデヒドを除去後、水で２回洗浄し、２００μＬのＯｉｌ Ｏ Ｒｅｄ調整液を加え、６０分間静置し、各ウェルを水で３回洗浄した。各ウェルに２００μＬの２−プロパノールを添加し、Ｏｉｌ Ｏ Ｒｅｄ色素を抽出し、抽出液をＯＤ５７０で測定した。

なお、Ｏｉｌ Ｏ Ｒｅｄ調整液は、Ｏｉｌ Ｏ Ｒｅｄ（０．０８ｇ）／２−プロパノール（１０ｍＬ）溶液：水が３：２となるように混合し、１０分後に０．４５μｍフィルターにて濾過することにより調製した。

試験結果のグラフを以下に示す。

上記の結果は、化合物１が、脂肪細胞における脂肪の燃焼を促進する効果を有することを示すものであり、化合物１が抗肥満効果を有することが確認された。

Claims (5)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^１は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
   Ｒ^２は、ベンジルまたはインドール−３−イルメチルであり；
   Ｒ^３は、水素原子またはＣ_１−６アルキルであり；
   Ｒ^４は、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルであり；
   Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキルカルボニルまたはＣ_７−１４アラルキルから選択される］
   の化合物、またはその塩。
2. Ｒ^２が結合する炭素原子の立体化学がＳである、請求項１に記載の化合物、またはその塩。
3. 請求項１または２に記載の化合物またはその塩を含む医薬組成物。
4. 肥満、メタボリックシンドローム、２型糖尿病、高血圧および高脂質血症から選択される疾患の治療または予防に使用される、請求項３に記載の医薬組成物。
5. 式（ＩＩ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^４、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３およびＲ^１４は、請求項１に定義したとおりである］
   の化合物を、式（ＩＩＩ）：
   

   

   ［式中、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３は、請求項１に定義したとおりである］
   を反応させる工程を含む、請求項１に記載の化合物の製造方法。