JP5053519B2 - Vegetable trypsin inhibitor - Google Patents

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本発明は、セリンプロテアーゼ活性阻害剤に関する。 The present invention relates to a serine protease activity inhibitors. 特にトリプシン(Trypsin)に関わるセリンプロテアーゼの活性に対して、優れた拮抗作用を有するセリンプロテアーゼ活性阻害剤に関する。 In particular the activity of serine proteases related to trypsin (Trypsin), relates to serine protease activity inhibitors with excellent antagonism.

セリンプロテアーゼによりケラチノサイトの細胞膜上のプロテアーゼアクチベートレセプター-2(PAR-2)が活性化されることにより、ケラチノサイトへのメラノソームの取り込みが活性化される。 By protease the activator receptors on keratinocytes cell membrane -2 (PAR-2) is activated by serine proteases, incorporation of melanosomes into keratinocytes are activated. 本発明のセリンプロテアーゼ活性阻害剤は、ケラチノサイト細胞膜上のPAR-2の活性化を阻害することにより、ケラチノサイトへのメラノソームの取り込みを抑制し、角質層へのメラニンの拡散が防止される。 Serine protease activity inhibitors of the present invention, by inhibiting the activation of PAR-2 ​​on keratinocyte cell membranes, suppresses the melanosome uptake into keratinocytes, diffusion of melanin into the stratum corneum is prevented. このメラニンの拡散防止により、皮膚色に黒ずみが無くなる。 The diffusion preventing the melanin, darkening disappears skin color. さらに、直接メラノサイトでのメラニン産生を阻害する素材であるアスコルビン酸誘導体とを併用して、メラニン自体の産生量を減少させることにより強い美白効果を有する美白用化粧料が提供される。 Furthermore, a combination of ascorbic acid derivative which is a material that inhibits melanin production in direct melanocytes, whitening cosmetics having a strong whitening effect by reducing the production of melanin itself is provided. そして、セリンプロテアーゼは、活性部位にセリン残基のあるプロテアーゼであり、代表的なものにトリプシン、キモトリプシン、トロンビン、プラスミン、エラスターゼなどがある。 The serine protease is a protease active site of the serine residue is trypsin, chymotrypsin, thrombin, plasmin, and elastase representative.

従来より、紫外線による皮膚の黒化や、シミ,ソバカスといった皮膚の色素沈着を防止又は改善するため、メラニン産生を阻害したり、生成したメラニン色素を還元する作用を有する成分がスクリーニングされ美白化粧料に配合されてきた。 Conventionally, and darkening of the skin by ultraviolet light, stains, to prevent or improve skin pigmentation such as freckles, or inhibit melanogenesis, component having an effect of reducing the generated melanin is screened whitening cosmetics It has been incorporated into the. 例えば、アスコルビン酸、システイン、及びこれらの誘導体、胎盤抽出物、植物,藻類よりの抽出物などが利用されている。 For example, ascorbic acid, cysteine, and derivatives thereof, placenta extract, plant, etc. extracts from algae is utilized.

しかしながら、アスコルビン酸、システイン、およびこれらの誘導体は、酸化還元反応を受けやすく不安定であった。 However, ascorbic acid, cysteine, and derivatives thereof were unstable susceptible to oxidation-reduction reaction. また、胎盤抽出物や植物,藻類よりの抽出物は有効量を配合すると美白化粧料に好ましくない臭いや色を付与したり、また、美白効果も充分ではなく、多くの問題点があった。 Placental extracts and plant, extract from algae or impart undesirable odor or color to the blending whitening cosmetics effective amount, also whitening effect is not sufficient, there have been many problems.

また最近では、特表2001-502360に記載されているような、ケラチノサイトによるメラノソームの貪食を抑制することにより、皮膚の色素沈着を抑制しようとする試みがなされている。 Recently, as described in JP-T 2001-502360, by inhibiting phagocytosis of melanosomes by the keratinocytes, it attempts to suppress the pigmentation of the skin have been made. メラニンはメラノサイトのなかのメラノソーム中で産生され、これがケラチノサイトに貪食される。 Melanin is produced in melanosomes within the melanocytes, which is phagocytosis in keratinocytes. これによりメラニンが表皮全体に分布されることになる。 This makes that the melanin is distributed throughout the epidermis. これをトリプシンインヒビターを用いることにより、ケラチノサイトによるメラノソームの貪食を抑制し、メラニンの拡散を防止しようとするものである。 The use of a trypsin inhibitor which suppresses the phagocytosis of melanosomes by the keratinocytes, it is intended to prevent the diffusion of melanin.

しかしながら、この方法によってもトリプシンインヒビターが直接メラニン産生に作用するもので無いため、美白化粧料として充分な効果を発揮するものではなかった。 However, trypsin inhibitor for not one that acts directly on melanin production, did not exhibit sufficient effects as a whitening cosmetic by this method.
特表2001−502360号公報 JP-T 2001-502360 JP

本発明の課題は、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題がなく、強い皮膚のメラニン産生阻害作用を有し、かつ産生されたメラニンのケラチノサイトへの分散を阻害する高い美白効果を有する化粧料の提供である。 An object of the present invention does not on safety such skin irritation and skin sensitization problems, strong having melanin production inhibitory effect of the skin, and a high whitening effect to inhibit the dispersion of the keratinocytes of the produced melanin it is a cosmetic composition of the offer with.

本発明においては、上記のような問題点を解決し、強い皮膚のメラニン産生阻害作用を有し、かつ産生されたメラニンのケラチノサイトへの分散を阻害することにより、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題のない効果の高い美白化粧料を開発するに至った。 In the present invention, to solve the above problems, strong having melanin production inhibitory effect of the skin, and by inhibiting the dispersion of the keratinocytes of melanin produced, skin irritation and skin sensitization such as it led to the development of high whitening cosmetic problem with no effect on safety.

即ち、本発明はユリ科アマドコロ属、ネギ属、マメ科クララ属、クズ属、ダイズ属、フジ属、フォエヌム・グラエクム属、ウリ科カボチャ属、ニガウリ属、ヘチマ属、タデ科ソバ属、セリ科ウイキョウ属、アブラナ科アルバ属植物の中から選ばれる1種または2種以上の化合物を含有するセリンプロテアーゼ阻害剤とメラニン産生抑制剤を含有する美白用化粧料を提供するものである。 That is, the present invention is Liliaceae Polygonatum genus Allium, leguminous Clara genus Pueraria, soybean species, wisteria, Foenumu-Guraekumu genus Cucurbitaceae pumpkin genus, bitter gourd genus luffa genus, polygonaceae Fagopyrum, Umbelliferae fennel genus, there is provided a cruciferous Alba genus one or whitening cosmetic containing a serine protease inhibitor and melanin production inhibitor containing two or more compounds selected from among plants.

本発明の化粧料は、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題がなく、メラニン産生抑制物質とセリンプロテアーゼ阻害剤を配合することにより、高い美白効果を有するものである。 The cosmetic of the present invention has no on safety such skin irritation and skin sensitization problems by incorporating melanin production inhibitor and serine protease inhibitor, and has a high whitening effect.

以下、本発明について詳述する。 Below, the present invention will be described in detail. 本発明に用いるセリンプロテアーゼ阻害作用を示すユリ科アマドコロ属植物としてはアマドコロ(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce var. The Liliaceae Polygonatum genus plants exhibiting serine protease inhibitory activity for use in the present invention Polygonatum (Polygonatum odoratum (Mill.) Druce var.
pluriflorum(Miq.)Ohwi)、ヒメイズイ(P. humile Fisch.)、ナルコユリ(P. pluriflorum (Miq.) Ohwi), Himeizui (P. humile Fisch.), Narukoyuri (P.
falcatum A. Gray)が、ネギ属植物としてはニラ(Allium falcatum A. Gray) is, as the Allium plant leek (Allium
tuberosum R OTLER )が、マメ科クララ属植物としてはクララ(Sophora flavescens Aiton)、エンジュ(S. japonica L.)イソフジ(S. tuberosum R OTLER) is, as the legume genus Sophora plants Clara (Sophora flavescens Aiton), Sophora (S. japonica L.) Isofuji (S.
tomentosa L.が)、クズ属植物としてはクズ(Pueraria tomentosa L. is), as the Pueraria plant kudzu (Pueraria
lobata (Willd.)ohwi)が、ダイズ属植物としてはダイズ(Glycine max Merr.)、ツルマメ(G.soja Siebold et Zucc.)が、フジ属植物としてはノダフジ(Wistaria Floribunda(Willd.)DC.)、ヤマフジ(W.brachybotrys Siebold et Zucc.)が、フォエヌム・グラエクム属としてはコロハ(Trigonella foenum−graecum L.)が、ウリ科カボチャ属植物としてはカボチャ(Cucurbita moschata(Duchesne)Poir. var. meloniformis(Carriere)Makino)、セイヨウカボチャ(C. pepo L.)が、ニガウリ属植物としてはツルレイシ(Momordica charantia L.)(別名ニガウリ)が、ヘチマ属植物としてはヘチマ(Luffa aegyptiaca Mill.)が、タデ科ソバ属植物としてはソバ(Fagopyrum esculentum Moench)、(F.dibotrys(D.Don)H.Hara)が、セリ科ウイキョウ属植物としてはウイキョウ(Foeniculum vulgare Mill.)、アブラナ科アルバ属植物としてはシロ lobata (Willd.) ohwi) is, as the soybean plants of the genus soybean (Glycine max Merr.), Glycine soja (G.soja Siebold et Zucc.) is, as the wisteria plant Nodafuji (Wistaria Floribunda (Willd.) DC.) , Yamafuji (W.brachybotrys Siebold et Zucc.) is, as the Foenumu-Guraekumu genus fenugreek (Trigonella foenum-graecum L.), pumpkin as the Cucurbitaceae pumpkin plant belonging to the genus (Cucurbita moschata (Duchesne) Poir. var. meloniformis ( Carriere) Makino), squash (C. pepo L.) is, bitter gourd genus as the plant Momordica (Momordica charantia L.) (also known as bitter gourd) is, as the loofah plant of the genus gourd (luffa aegyptiaca Mill.), polygonaceae the buckwheat plants of the genus buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench), (F.dibotrys (D.Don) H.Hara) is, as the Umbelliferae fennel plant of the genus fennel (Foeniculum vulgare Mill.), as the cruciferous Alba plant belonging to the genus white ラシ(Sinapis alba L.)が利用できる。 Brush (Sinapis alba L.) is available.

また、上記植物類は種々の適当な有機溶媒を用いて、低温下及び/又は加温下で抽出されたエキスとして使用できる。 Moreover, the plant compound is using a variety of suitable organic solvents can be used as low temperature and / or extract extracted under heating.

抽出溶媒としては、特に限定はされないが、例えば、水;メチルアルコール、エチルアルコール等の低級1価アルコール;グリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等の液状多価アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等のケトン;酢酸エチルなどのアルキルエステル;ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素;ジエチルエーテル等のエーテル類;ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の1種または2種以上を用いることが出来る。 As the extraction solvent is not particularly limited, for example, water; methyl alcohol, lower monovalent alcohols such as ethyl alcohol; glycerol, propylene glycol, liquid polyhydric alcohols such as 1,3-butylene glycol; acetone, methyl ethyl ketone ketone; halogenated hydrocarbon such as hexane; alkyl esters such as ethyl acetate ethers such as diethyl ether; dichloromethane, can be used one or more halogenated alkanes such as chloroform and the like. とりわけ、水、エチルアルコール、1,3-ブチレングリコールの1種または2種以上の混合溶媒が特に好適である。 Especially, water, ethyl alcohol, alone or in combination of two or more solvents of 1,3-butylene glycol is particularly preferred.

本発明に用いるメラニン産生抑制剤はエラグ酸及びその誘導体並びにそれらの塩、エンドセリン拮抗薬、アスコルビン酸及びその誘導体並びにそれらの塩、グルタチオン及びその誘導体並びにそれらの塩、システイン及びその誘導体並びにそれらの塩、レゾルシン及びその誘導体並びにそれらの塩、ハイドロキノン及びその誘導体並びにそれらの塩は市販の試薬類を利用することが出来る。 Melanin production inhibitor used in the present invention is ellagic acid and its derivatives and salts thereof, endothelin antagonists, ascorbic acid and its derivatives and salts thereof, glutathione and its derivatives and salts thereof, cysteine ​​and derivatives thereof and salts thereof , resorcinol and its derivatives and salts thereof, hydroquinone and derivatives thereof and salts thereof can be utilized commercially available reagents. また、これらの化合物を多く含有する植物から各種の溶媒、例えば、水;メチルアルコール、エチルアルコール等の低級1価アルコール;グリセリン、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール等の液状多価アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等のケトン;酢酸エチルなどのアルキルエステル;ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素;ジエチルエーテル等のエーテル類;ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の1種または2種以上を用いて抽出し、精製して使用することが出来る。 Further, various solvents from a plant containing a large amount of these compounds, for example, water; methyl alcohol, lower monovalent alcohols such as ethyl alcohol; glycerol, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol liquid polyhydric alcohol; acetone , ketones such as methyl ethyl ketone; and extracted with dichloromethane, the one or more halogenated alkanes such as chloroform and the like; halogenated hydrocarbon such as hexane; alkyl esters such as ethyl acetate ethers such as diethyl ether purified and can be used. さらには、化学的な合成によっても上記化合物を作成することが可能である。 Furthermore, by chemical synthesis it is possible to create the compound.

また、グラブリジン、グラブレン、リクイリチン、イソリクイリチン及びこれらを含有するカンゾウ抽出物、胎盤抽出物、カロチノイド類及びこれらを含有する動植物抽出物、イレイセン抽出物、ひまわり種子抽出物、イブキトラノオ抽出物、エイジツ抽出物、オウゴン抽出物、オノニス抽出物、海藻抽出物、ゴカヒ抽出物、リノール酸を含有する植物抽出物、リノレン酸を含有する植物抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、シャクヤク抽出物、センプクカ抽出物、ソウハクヒ抽出物、茶抽出物、トウキ抽出物、ビャクレン抽出物、ブナノキ抽出物、ブドウ種子抽出物、ホップ抽出物、マイカイカ抽出物、ユキノシタ抽出物、ヨクイニン抽出物の調製は特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温 Further, glabridin, glabrene, liquiritin, isoliquiritin and licorice extracts containing them, placental extracts, carotenoids and plant and animal extracts containing them, Ireisen extract, sunflower seed extract, bistorta officinalis extract, rose fruit extract , scutellaria root extract, Ononisu extract, seaweed extract, Gokahi extract, plant extract containing linoleic acid, a plant extract containing linolenic acid, the latest extract, hawthorn extract, white lily extract, peony extract , Senpukuka extract, mulberry bark extract, tea extract, angelica extract, Byakuren extract, beech extract, grape seed extract, hops extract, Maikaika extract, saxifrage extract, the preparation of Coix seed extract particularly limited but not, for example, a low temperature by using a variety of suitable organic solvents から加温下で抽出される。 It is extracted under heating from. 抽出溶媒としては、例えば、水;メチルアルコール、エチルアルコール等の低級1価アルコール;グリセリン、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール等の液状多価アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等のケトン;酢酸エチルなどのアルキルエステル;ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素;ジエチルエーテル等のエーテル類;ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の1種または2種以上を用いることが出来る。 As the extraction solvent, for example, water; methyl alcohol, lower monovalent alcohols such as ethyl alcohol; glycerol, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol liquid polyhydric alcohols; such as ethyl acetate; acetone, ketones such as methyl ethyl ketone alkyl esters; ethers such as diethyl ether; halogenated hydrocarbon such as hexane dichloromethane, can be used one or more halogenated alkanes such as chloroform and the like. とりわけ、水、エチルアルコール、1,3−ブチレングリコールの1種または2種以上の混合溶媒が特に好適である。 Especially, water, ethyl alcohol, alone or in combination of two or more solvents of 1,3-butylene glycol is particularly preferred.

本発明に用いるセリンプロテアーゼ阻害作用を示すユリ科アマドコロ属植物のアマドコロ、ヒメイズイ、ナルコユリ、ネギ属植物のニラ、マメ科クララ属植物のクララ、エンジュ、イソフジ、クズ属植物のクズ、ダイズ属のダイズ、ツルマメ、フジ属のノダフジ、ヤマフジ、フォエヌム・グラエクム属のコロハ、ウリ科カボチャ属のカボチャ、セイヨウカボチャ、ニガウリ属のツルレイシ(別名ニガウリ)、ヘチマ属のヘチマ、タデ科ソバ属のソバ、セリ科ウイキョウ属のウイキョウ、アブラナ科アルバ属のシロガラシの植物抽出エキスの配合量は、0.0001〜10.0重量%が好ましく、特に0.01〜1.0重量%の範囲が最適である。 Polygonatum Liliaceae Polygonatum genus plants exhibiting serine protease inhibitory activity for use in the present invention, Himeizui, Narukoyuri, Allium plants of the leek, legume genus Sophora plants Clara, Sophora, Isofuji, debris Pueraria plant, soybean soybean genus , G. soja, wisteria of Nodafuji, Yamafuji, Foenumu-Guraekumu genus of fenugreek, Cucurbitaceae pumpkin genus pumpkin, squash, bitter gourd genus Momordica (also known as bitter gourd), gourd genus loofah, polygonaceae buckwheat species of buckwheat, Umbelliferae fennel genus fennel, the amount of the plant extract of white mustard cruciferous Alba genus, 0.0001 to 10.0% by weight is preferred, the optimal range, especially from 0.01 to 1.0 wt%.

メラニン産生抑制剤として用いるエラグ酸及びその誘導体並びにそれらの塩、エンドセリン拮抗薬、アスコルビン酸及びその誘導体並びにそれらの塩、グルタチオン及びその誘導体並びにそれらの塩、システイン及びその誘導体並びにそれらの塩、レゾルシン及びその誘導体並びにそれらの塩、ハイドロキノン及びその誘導体並びにそれらの塩、グラブリジン、グラブレン、リクイリチン、イソリクイリチン及びこれらを含有するカンゾウ抽出物、胎盤抽出物、カロチノイド類及びこれらを含有する動植物抽出物、イレイセン抽出物、ひまわり種子抽出物、イブキトラノオ抽出物、エイジツ抽出物、オウゴン抽出物、オノニス抽出物、海藻抽出物、ゴカヒ抽出物、リノール酸を含有する植物抽出物、リノレン酸を含有する植物抽出物、サイシ Ellagic acid and its derivatives and salts thereof used as melanin production inhibitor, endothelin antagonist, ascorbic acid and its derivatives and salts thereof, glutathione and its derivatives and salts thereof, cysteine ​​and derivatives thereof and salts thereof, resorcinol and derivatives and salts thereof, hydroquinone and derivatives thereof and salts thereof, glabridin, glabrene, liquiritin, licorice extract containing isoliquiritin and these, placental extracts, carotenoids and plant and animal extracts containing them, Ireisen extract , sunflower seed extract, bistorta officinalis extract, rose fruit extract, scutellaria root extract, Ononisu extract, seaweed extract, Gokahi extract, plant extract containing linoleic acid, a plant extract containing linolenic acid, priest 抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、シャクヤク抽出物、センプクカ抽出物、ソウハクヒ抽出物、茶抽出物、トウキ抽出物、ビャクレン抽出物、ブナノキ抽出物、ブドウ種子抽出物、ホップ抽出物、マイカイカ抽出物、ユキノシタ抽出物、ヨクイニン抽出物については、それぞれの素材を乾燥した後、細かく粉砕したものを重量比で1〜1000倍量、特に10〜100倍量の溶媒を用い、常温抽出の場合には、0℃以上、特に20℃〜40℃で1時間以上、特に3〜7日間行うのが好ましい。 Extract, hawthorn extract, white lily extract, peony extract, Senpukuka extract, mulberry bark extract, tea extract, Angelica extract, Byakuren extract, beech extract, grape seed extract, hops extract, Maikaika extracted things, saxifrage extract, for Coix extract, after drying the respective materials, 1-1000 times those finely ground in a weight ratio, in particular with 10 to 100 volumes of solvent, in the case of normal temperature extraction It is, 0 ° C. or higher, particularly 20 ° C. to 40 ° C. for 1 hour or more, preferably carried out in particular 3 to 7 days. また、60〜100℃で1時間、加熱抽出しても良い。 Further, 1 hour, may be heated extraction with 60 to 100 [° C..

以上のような条件で得られる上記各抽出物は、抽出された溶液のまま用いても良いが、さらに必要により、濾過等の処理をして濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。 Each extract obtained in the above-described conditions may be used while the extracted solution, but due necessary, concentrated by a process such as filtration, be used by selectively using those powdered appropriately can.

本発明の化粧料におけるメラニン産生抑制剤の配合量は、蒸発乾燥分に換算して0.0001〜20.0重量%が好ましく、特に0.01〜10.0重量%の範囲が最適である。 The amount of melanin production inhibitors in the cosmetic of the present invention, from 0.0001 to 20.0% by weight in terms of evaporative dry matter are preferred, optimal particularly from 0.01 to 10.0 wt% .

本発明の化粧料は、上記必須成分のほか、水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、賦形剤、界面活性剤、油剤、アルコール、pH調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、甘味剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより調製される。 The cosmetic of the present invention, in addition to the above essential components, an aqueous component, an oily component, plant extracts, animal extracts, powders, excipients, surfactants, oils, alcohols, pH modifiers, preservatives, antioxidants agents, thickeners, sweeteners, dyes, is prepared by appropriately blended and mixed as necessary a perfume or the like. 本発明の化粧料の剤型は特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料等種々の剤型とすることができる。 Cosmetic dosage forms of the present invention is not particularly limited, lotion, milky lotion, cream, pack, powder, sprays, ointments, dispersions, and cleanser such various dosage forms.

以下、本発明によるセリンプロテアーゼ阻害剤、なかでもトリプシン阻害剤、およびメラニン産生抑制剤による美白効果に関する実施例を示すと共にその素材を用いた化粧料への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されないのは言うまでもない。 Hereinafter, a serine protease inhibitor according to the invention, inter alia trypsin inhibitor, and described applications Formulation Examples, etc. of the cosmetics using the material with showing an embodiment relating whitening effect by melanin production inhibitor, described herein It is of course not limited to the embodiment examples.

トリプシン阻害効果を測定する植物抽出物としては、ユリ科アマドコロ属植物としてナルコユリの根茎、ネギ属植物としてニラの種子、マメ科クララ属植物としてクララの種子、クズ属植物としてクズの花、ダイズ属植物としてダイズ種子、フジ属植物としてノダフジの花穂、フォエヌム・グラエクム属植物としてコロハの種子、ウリ科カボチャ属植物としてカボチャの種子、ニガウリ属植物としてニガウリの果実、ヘチマ属植物としてヘチマの種子、タデ科ソバ属植物としてソバ種子、セリ科ウイキョウ属植物としてウイキョウの種子、アブラナ科アルバ属植物としてシロガラシの種子を乾燥したのち粉砕し、50%エタノール水溶液で室温で1週間放置し、エキスを抽出した。 Examples of the plant extracts to measure trypsin inhibitory effect, Liliaceae Polygonatum rhizome Narukoyuri as Genus, leek seeds as Allium plants, leguminous genus Sophora plants as Clara seeds, kudzu as Pueraria plant flowers, soybean genus soybean seeds as a plant, of Nodafuji as wisteria plant spike, fenugreek seeds as Foenumu-Guraekumu plant of the genus, pumpkin seeds as Cucurbitaceae pumpkin plant of the genus, bitter melon fruit of as bitter gourd plant belonging to the genus, gourd seeds as loofah plants of the genus, knotweed buckwheat seeds as family Fagopyrum plant, fennel seeds as Umbelliferae fennel genus plants, pulverized After drying the white mustard seed as Brassicaceae Alba genus plants, allowed to stand for one week at room temperature with 50% ethanol solution and extracted extract . 抽出したエキスは蒸発残分を測定し、2%濃度になるように調製した。 Extracted extract measured evaporation residue was adjusted to 2% strength. さらに、2%濃度に調製した植物エキスに、 0023に記載した沈澱試薬を等量加え、タンパク類を除去し、1%濃度の植物抽出エキスとした。 Further, the plant extract prepared in a concentration of 2%, was added an equal volume of precipitation reagents described 0023 to remove proteins such was 1% strength plant extracts.

(トリプシン阻害活性の測定) (Measurement of trypsin inhibitory activity)
〔試 薬〕 [Reagent]
リン酸緩衝液 :0.1M−NaH 2 PO 4と0.1M−Na 2 HPO 4を5:25で混ぜPH7.4に調製する。 Phosphate buffer: prepared 0.1M-NaH 2 PO 4 and 0.1M-Na 2 HPO 4 to PH7.4 mixed at 5:25.
基質溶液 :カゼイン(Hammerstein Cazein)0.6gを0.05M−Na 2 HPO 4 80mlに Casein (Hammerstein Cazein) 0.6g of 0.05M-Na 2 HPO 4 80ml: substrate solution
加え、沸騰水浴中で加熱溶解させる。 In addition, it is heated and dissolved in a boiling water bath. 冷却後、PHを7.4に調製する。 After cooling, to prepare a PH to 7.4.
トリプシン溶液:1:250トリプシン(DIFCO)を10μg/mlになるようにリン酸緩衝液に溶解 Trypsin solution: 1: 250 dissolved trypsin (DIFCO) in a phosphate buffer solution such that 10 [mu] g / ml
する。 To.
沈澱試薬 :トリクロル酢酸、酢酸Na、酢酸溶液を、それぞれ0.11M、0.22M、0.33M Precipitation Reagent: trichloroacetic acid, acetic acid Na, the acetic acid solution, respectively 0.11 M, 0.22 M, 0.33 M
濃度になるように溶液を調製する。 Preparing a solution to a concentration.
試料溶液 :所定の濃度になるように水またはエタノールを加え調製する。 Sample solution: prepared by adding water or ethanol to a predetermined concentration.
〔測 定〕 [Measurement]
カゼイン基質溶液0.9mlに試料溶液0.1mlを加え混合する。 Mixing was added a sample solution 0.1ml casein substrate solution 0.9 ml. さらに、トリプシン溶液2ml In addition, trypsin solution 2ml
を加え撹拌し、37℃で10分間放置する。 It was added and stirred, allowed to stand at 37 ° C. 10 min. 沈澱試薬3ml加えよく撹拌し、室温で15分間放置する。 Precipitating reagent 3ml added well stirred and left for 15 minutes at room temperature. その後3.000rpm、15分間遠心し、上澄み液をとり280nmの吸光度を測定する。 Then 3.000Rpm, and centrifuged for 15 minutes, measuring the absorbance at 280nm taking the supernatant.
〔阻害率の測定〕 [Measurement of the inhibition rate]
阻害率の算定は式1により求める。 Calculation of inhibition rate calculated by Equation 1.
コントロール(C):トリプシン溶液を沈澱試薬の後に添加する。 Control (C): the addition of trypsin solution after the precipitation reagent.
対照(T):試料の代わりに蒸留水を用いたもの。 Control (T): those using distilled water instead of the sample.
試験区(S):各試料を用いて上記の操作を行ったもの。 Test group (S): having been subjected to the above procedure using each sample.

〔式1〕 [Formula 1]

表-1に各種植物抽出エキスのトリプシン阻害率を示した。 It showed trypsin inhibition rate of various plant extracts in Table -1. なお、陽性対照物質としては、トリプシン阻害薬として生化学分野で汎用されているロイペプチンを使用し、各種植物抽出エキスと比較した。 As the positive control substance, using leupeptin widely used in the field of biochemistry as trypsin inhibitor, they were compared with various plant extracts.

表-1より、陽性対照物質として試験したロイペプチンは0.1%濃度で65.0%のトリプシン阻害率を示した。 From Table 1, leupeptin tested as a positive control substance showed trypsin inhibition rate 65.0% in the 0.1% concentration. なお、本試験に用いた植物抽出エキスは、トリクロル酢酸を含む沈澱試薬でタンパクを沈澱させたエキスを調製し、試験に用いた。 Incidentally, plant extracts used in the present study, the extract was precipitated protein in precipitating reagent containing trichloroacetic acid were prepared and used in the test. これは、従来の植物由来のトリプシン阻害剤は、タンパク類が多く知られていた。 This is, trypsin inhibitor derived from a conventional plant has been known for many proteins such. しかし、植物抽出エキスを皮膚に塗布する場合は、タンパク類は分子量が大きくほとんど経皮吸収されない。 However, when applying the plant extract to the skin, proteins such is scarcely percutaneous absorption a large molecular weight. 本実験ではこの点を考慮し、タンパク類でない、トリプシン阻害剤の検索を行った。 In this experiment with this in mind, not a protein such were searched trypsin inhibitor. その結果、表-1より各種植物抽出エキスは、いずれも高い阻害活性を示した。 As a result, various plant extracts from Table 1 all showed high inhibitory activity. なかでも、ダイズ、コロハ、ヘチマ、ソバ抽出エキスは、0.5%濃度でいずれも50%以上の阻害を示し、ダイズ、ヘチマ抽出液は0.1%濃度で陽性対照物質のロイペプチンとほぼ同等の阻害活性を示すことがわかった。 Among them, soybean, fenugreek, loofah, buckwheat extract showed any inhibition of 50% at 0.5% strength, soy, almost the same inhibitory activity as leupeptin positive control substance luffa extract 0.1% concentration it was found that the exhibit.

次に、本発明の各種成分を配合した化粧料の処方例の例を示すが、本発明はこれに限定されるものでない。 Next, an example of a formulation examples of cosmetics containing various components of the present invention, not intended the invention be limited thereto.

(1)化粧用クリーム (1) Cosmetic cream
(重量%) (weight%)
a)ミツロウ a) beeswax
2.0 2.0
b)ステアリルアルコール b) stearyl alcohol
5.0 5.0
c)ステアリン酸 c) stearate
8.0 8.0
d)スクワラン d) squalane
10.0 10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート e) self-emulsifying glyceryl monostearate
3.0 3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) f) Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.)
1.0 1.0
g)ホホバ油 10.0 g) jojoba oil 10.0
h)ヘチマ抽出物 h) loofah extract
0.5 0.5
i)アスコルビン酸グルコシド 2.0 i) ascorbic acid glucoside 2.0
j)1,3-ブチレングリコール j) 1,3- butylene glycol
5.0 5.0
k)水酸化カリウム k) potassium hydroxide
0.3 0.3
l)防腐剤・酸化防止剤 l) preservatives, antioxidants
適量 Proper quantity
m)精製水 m) of purified water
残部製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。 Dissolved by heating to balance process a) ~f), kept at 80 ° C.. H)〜m)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。 H) ~m) until heated dissolved, maintained at 80 ° C., and emulsified in addition to a) ~f), cooled with stirring to 40 ° C.. その後、g)を加え、攪拌し均一に溶解する。 Thereafter, g) and stir uniformly dissolved.

(2)乳液 (2) emulsions
(重量%) (weight%)
a)ミツロウ a) beeswax
0.5 0.5
b)ワセリン b) Vaseline
2.0 2.0
c)スクワラン c) squalane
8.0 8.0
d)ソルビタンセスキオレエート d) sorbitan sesquioleate
0.8 0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.) 1.2 e) polyoxyethylene oleyl ether (20E.O.) 1.2
f)クズ抽出物 f) kudzu extract
1.0 1.0
g)アルブチン g) arbutin
2.0 2.0
h)1,3-ブチレングリコール h) 1,3- butylene glycol
7.0 7.0
i)カルボキシビニルポリマー i) carboxyvinyl polymer
0.2 0.2
j)水酸化カリウム j) potassium hydroxide
0.1 0.1
k)精製水 k) purified water
残部 The balance
l)防腐剤・酸化防止剤 l) preservatives, antioxidants
適量 Proper quantity
m)エタノール m) ethanol
7.0 7.0
製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。 Process a) to e) until the heating dissolved, kept at 80 ° C.. h)〜l)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。 h) to l) until the heating dissolved, maintained at 80 ° C., and emulsified in addition to a) to e), cooled with stirring to 50 ° C.. 50℃でf)、g)、m)を添加し、40℃まで攪拌、冷却する。 f at 50 ℃), g), m) is added and stirred until 40 ° C., cooled.

(3)化粧水 (3) lotion
(重量%) (weight%)
a)ソバ抽出物 a) buckwheat extract
0.1 0.1
b)アスコルビン酸リン酸マグネシウム b) magnesium ascorbic acid phosphate
1.0 1.0
c)グリセリン c) glycerin
5.0 5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.) 1.0 d) polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.) 1.0
e)エタノール e) ethanol
6.0 6.0
f)香料 適量 f) fragrance appropriate amount
g)防腐剤・酸化防止剤 g) preservatives, antioxidants
適量 Proper quantity
h)精製水 h) purified water
残部製法 a)とb)を均一に混合する。 Balance process a) and b) are mixed uniformly. c)〜h)までを混合し、均一に溶解する。 c) to h) until mixed and uniformly dissolved. 使用時に2剤を混合して使用する。 Using a mixture of two agents at the time of use.

(4)化粧水 (4) lotion
(重量%) (weight%)
a)コロハ抽出物 0.05 a) Fenugreek extract 0.05
b)グルタチオン 0.1 b) glutathione 0.1
c)グリセリン c) glycerin

5.0 5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.) d) polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.)
1.0 1.0
e)エタノール e) ethanol
6.0 6.0
f)香料 適量 f) fragrance appropriate amount
g)防腐剤・酸化防止剤 g) preservatives, antioxidants
適量 Proper quantity
h)精製水 h) purified water
残部製法 a)〜b)までを混合する。 Mixing until the balance process a) ~b). c)〜h)までを混合し、均一に溶解する。 c) to h) until mixed and uniformly dissolved. 使用時に2剤を混合して使用する。 Using a mixture of two agents at the time of use.

(5)洗顔剤 (5) cleanser
(重量%) (weight%)
a)ダイズ抽出物 a) soybean extract
0.5 0.5
b)アスコルビン酸グルコシド b) ascorbic acid glucoside
2.0 2.0
c)シャクヤク抽出液 0.5 c) peony extract 0.5
d)タルク d) talc
残部 The balance
e)セルロース e) cellulose
20.0 20.0
f)ミリスチン酸カリウム 30.0 f) potassium myristate 30.0
g)ラウリルリン酸ナトリウム g) sodium lauryl phosphate
10.0 10.0
h)香料 h) perfume
適量 Proper quantity
i)防腐剤 i) preservatives
適量製法 a)〜i)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。 Mixing until a suitable amount process a) through i), well stirred and uniformly dispersed.

〔効果確認試験〕 [Effect confirmation test]
(1)塗布によるヒトでの効果確認試験被験者として、25〜55歳の女性20名に1日2回(朝、夜)連続2.5ヵ月間、本発明品と比較品のそれぞれを使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。 (1) as the effect confirming test subjects in humans by the application, twice a day for women 20 people of 25 to 55-year-old (morning, evening) to use each of the comparative product continuous 2.5 months, and the product of the present invention , compared before and after the test the state of the application site was examined improvement. 本試験には、試験品として0029で示した化粧料を用い、対照品 1 には0029に示した化粧料からヘチマ抽出物を除いた化粧料、対照品 2 には0029に示した化粧料からアスコルビン酸グルコシドを除いた化粧料を作成し、その使用による効果について調べた。 In this study, cosmetics using shown in 0029 as a test, cosmetics excluding loofah extract from cosmetics shown in 0029 in the control product 1, the cosmetics shown in 0029 in the control product 2 create a cosmetic excluding ascorbic acid glucoside was investigated effects of its use. そして、本発明の有効成分を配合した化粧料を毎日使用しながら肌のクスミおよび美白効果を塗布開始前及び2ヶ月塗布後におけるアンケートで集計し、効果の確認を行った。 Then, aggregated at the questionnaire after the effective while ingredient cosmetics blended with the daily use of the dullness and whitening effect of skin application before and two months the application of the present invention, were carried out to confirm the effect. その結果を表-2に示す。 The results are shown in Table 2.

表-2からも明らかなように、従来のメラニン産生抑制剤のみからなる対照品 1 、セリンプロテアーゼ阻害剤のみからなる対照品 2 と比較して、メラニン産生抑制物質およびセリンプロテアーゼ阻害物質からなる試験品は、評点合計が80点となった。 As is apparent from Table 2, control product 1 comprising only conventional melanin production inhibitors, as compared to the control product 2 consisting of only serine protease inhibitor, consisting of melanin production inhibitor and serine protease inhibitors tested Sina, scoring total was 80 points. これに対して対照品1は53点、対照品2の評点合計は52点であり、本発明品の高い美白効果が認められた。 Control product 1 53 point contrast, scores total control product 2 is 52 points, a high whitening effect of the present invention product was observed.

本発明は、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題がなく、メラニン産生抑制物質とセリンプロテアーゼ阻害剤を提供することにより、高い美白効果を有する医薬品及び化粧品への応用が広く期待できる。 The present invention does not on safety such skin irritation and skin sensitization problems, by providing a melanin production inhibitor and serine protease inhibitor, its application to pharmaceutical and cosmetic having high whitening effect is widely expected it can.

Claims (1)

  1. ユリ科アマドコロ属植物がアマドコロ(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce var. pluriflorum(Miq.)Ohwi)、ヒメイズイ(P. humile Fisch.)、ネギ属植物がニラ(Allium tuberosum ROTLER)、マメ科クララ属植物がクララ(Sophora flavescens Aiton)、エンジュ(S. japonica L.)、イソフジ(S. tomentosa Liliaceae Polygonatum plant of the genus is Solomon's seal (Polygonatum odoratum (Mill.) Druce var. Pluriflorum (Miq.) Ohwi), Himeizui (P. humile Fisch.), Allium plant leek (Allium tuberosum ROTLER), leguminous Clara plant belonging to the genus There Clara (Sophora flavescens Aiton), Sophora (S. japonica L.), Isofuji (S. tomentosa
    L.)、クズ属植物がクズ(Pueraria lobata (Willd.)ohwi)、フジ属がノダフジ(Wistaria Floribunda(Willd.)DC.)、ヤマフジ(W.brachybotrys Siebold et Zucc.)、フォエヌム・グラエクム属がコロハ(Trigonella foenum−graecum L.)、ウリ科カボチャ属がカボチャ(Cucurbita moschata(Duchesne)Poir. var. meloniformis(Carriere)Makino)、セイヨウカボチャ(C.pepo L.)、ニガウリ属がツルレイシ(Momordicacharantia L.)(別名ニガウリ)、タデ科ソバ属がソバ(Fagopyrum esculentum Moench)、(F.dibotrys(D.Don)H.Hara)から選ばれる1種又は2種以上の除タンパクをした抽出物からなるセリンプロテアーゼ阻害剤。 L.), Pueraria plant kudzu (Pueraria lobata (Willd.) Ohwi), wisteria is Nodafuji (Wistaria Floribunda (Willd.) DC.), Yamafuji (W.brachybotrys Siebold et Zucc.), Foenumu-Guraekumu genus fenugreek (Trigonella foenum-graecum L.), Cucurbitaceae pumpkin genus pumpkin (Cucurbita moschata (Duchesne) Poir. var. meloniformis (Carriere) Makino), squash (C.pepo L.), balsam pear genus Momordica (Momordicacharantia L .) (also known as Momordica charantia), polygonaceae Fagopyrum buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench), (F.dibotrys (D.Don) consisting extracts one or more deproteinized selected from H.Hara) serine protease inhibitors.
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