JP5053519B2 - Plant trypsin inhibitor - Google Patents

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本発明は、セリンプロテアーゼ活性阻害剤に関する。特にトリプシン(Trypsin)に関わるセリンプロテアーゼの活性に対して、優れた拮抗作用を有するセリンプロテアーゼ活性阻害剤に関する。 The present invention relates to a serine protease activity inhibitor. In particular, the present invention relates to a serine protease activity inhibitor having an excellent antagonistic action against the activity of serine protease related to trypsin.

セリンプロテアーゼによりケラチノサイトの細胞膜上のプロテアーゼアクチベートレセプター-2(PAR-2)が活性化されることにより、ケラチノサイトへのメラノソームの取り込みが活性化される。本発明のセリンプロテアーゼ活性阻害剤は、ケラチノサイト細胞膜上のPAR-2の活性化を阻害することにより、ケラチノサイトへのメラノソームの取り込みを抑制し、角質層へのメラニンの拡散が防止される。このメラニンの拡散防止により、皮膚色に黒ずみが無くなる。さらに、直接メラノサイトでのメラニン産生を阻害する素材であるアスコルビン酸誘導体とを併用して、メラニン自体の産生量を減少させることにより強い美白効果を有する美白用化粧料が提供される。そして、セリンプロテアーゼは、活性部位にセリン残基のあるプロテアーゼであり、代表的なものにトリプシン、キモトリプシン、トロンビン、プラスミン、エラスターゼなどがある。 By activating protease activator receptor-2 (PAR-2) on the cell membrane of keratinocytes by serine protease, incorporation of melanosomes into keratinocytes is activated. The serine protease activity inhibitor of the present invention inhibits the activation of PAR-2 on the keratinocyte cell membrane, thereby suppressing the incorporation of melanosomes into keratinocytes and preventing the diffusion of melanin into the stratum corneum. By preventing the diffusion of melanin, the skin color is not darkened. Furthermore, a cosmetic for whitening having a strong whitening effect is provided by reducing the production amount of melanin itself in combination with an ascorbic acid derivative that is a material that directly inhibits melanin production in melanocytes. Serine protease is a protease having a serine residue in the active site, and representative ones include trypsin, chymotrypsin, thrombin, plasmin, and elastase.

従来より、紫外線による皮膚の黒化や、シミ,ソバカスといった皮膚の色素沈着を防止又は改善するため、メラニン産生を阻害したり、生成したメラニン色素を還元する作用を有する成分がスクリーニングされ美白化粧料に配合されてきた。例えば、アスコルビン酸、システイン、及びこれらの誘導体、胎盤抽出物、植物,藻類よりの抽出物などが利用されている。 Conventionally, whitening cosmetics have been screened for ingredients that have the action of inhibiting melanin production or reducing the produced melanin pigment in order to prevent or improve skin darkening due to ultraviolet rays and skin pigmentation such as spots and freckles. Has been formulated. For example, ascorbic acid, cysteine, and derivatives thereof, placental extracts, extracts from plants and algae are used.

しかしながら、アスコルビン酸、システイン、およびこれらの誘導体は、酸化還元反応を受けやすく不安定であった。また、胎盤抽出物や植物,藻類よりの抽出物は有効量を配合すると美白化粧料に好ましくない臭いや色を付与したり、また、美白効果も充分ではなく、多くの問題点があった。 However, ascorbic acid, cysteine, and derivatives thereof are susceptible to redox reactions and are unstable. In addition, when an effective amount of a placenta extract, an extract from a plant, or an algae is added, an unpleasant odor or color is imparted to the whitening cosmetics, and the whitening effect is not sufficient, resulting in many problems.

また最近では、特表2001-502360に記載されているような、ケラチノサイトによるメラノソームの貪食を抑制することにより、皮膚の色素沈着を抑制しようとする試みがなされている。メラニンはメラノサイトのなかのメラノソーム中で産生され、これがケラチノサイトに貪食される。これによりメラニンが表皮全体に分布されることになる。これをトリプシンインヒビターを用いることにより、ケラチノサイトによるメラノソームの貪食を抑制し、メラニンの拡散を防止しようとするものである。 Recently, attempts have been made to suppress skin pigmentation by suppressing melanosome phagocytosis by keratinocytes as described in JP-T-2001-502360. Melanin is produced in melanosomes among melanocytes, which are phagocytosed by keratinocytes. This causes melanin to be distributed throughout the epidermis. By using a trypsin inhibitor, the melanosome phagocytosis by keratinocytes is suppressed and the diffusion of melanin is prevented.

しかしながら、この方法によってもトリプシンインヒビターが直接メラニン産生に作用するもので無いため、美白化粧料として充分な効果を発揮するものではなかった。
特表2001−502360号公報
However, even with this method, the trypsin inhibitor does not directly act on melanin production, so that it does not exhibit a sufficient effect as a whitening cosmetic.
JP-T-2001-502360

本発明の課題は、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題がなく、強い皮膚のメラニン産生阻害作用を有し、かつ産生されたメラニンのケラチノサイトへの分散を阻害する高い美白効果を有する化粧料の提供である。 The problem of the present invention is that there is no safety problem such as skin irritation and skin sensitization, a strong skin melanin production inhibitory action, and a high whitening effect that inhibits the dispersion of produced melanin to keratinocytes The provision of cosmetics having

本発明においては、上記のような問題点を解決し、強い皮膚のメラニン産生阻害作用を有し、かつ産生されたメラニンのケラチノサイトへの分散を阻害することにより、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題のない効果の高い美白化粧料を開発するに至った。 In the present invention, by solving the above problems, having a strong skin melanin production inhibitory effect, and inhibiting the dispersion of the produced melanin to keratinocytes, skin irritation and skin sensitization This led to the development of whitening cosmetics that are highly effective and have no safety problems.

即ち、本発明はユリ科アマドコロ属、ネギ属、マメ科クララ属、クズ属、ダイズ属、フジ属、フォエヌム・グラエクム属、ウリ科カボチャ属、ニガウリ属、ヘチマ属、タデ科ソバ属、セリ科ウイキョウ属、アブラナ科アルバ属植物の中から選ばれる1種または2種以上の化合物を含有するセリンプロテアーゼ阻害剤とメラニン産生抑制剤を含有する美白用化粧料を提供するものである。 That is, the present invention is a lily family Amadokora, leek genus, leguminous clara genus, kudzu genus, soybean genus, fuji genus, foenum glaecum genus, cucurbitaceae pumpkin genus, nigauri genus, loofah genus, aceae genus buckwheat, sericidae The present invention provides a whitening cosmetic composition containing a serine protease inhibitor and a melanin production inhibitor containing one or two or more compounds selected from the genus Falcon and Brassicaceae Alba.

本発明の化粧料は、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題がなく、メラニン産生抑制物質とセリンプロテアーゼ阻害剤を配合することにより、高い美白効果を有するものである。 The cosmetic of the present invention does not have safety problems such as skin irritation and skin sensitization, and has a high whitening effect by blending a melanin production inhibitor and a serine protease inhibitor.

以下、本発明について詳述する。本発明に用いるセリンプロテアーゼ阻害作用を示すユリ科アマドコロ属植物としてはアマドコロ(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce var.
pluriflorum(Miq.)Ohwi)、ヒメイズイ(P. humile Fisch.)、ナルコユリ(P.
falcatum A. Gray)が、ネギ属植物としてはニラ(Allium
tuberosum ROTLER)が、マメ科クララ属植物としてはクララ(Sophora flavescens Aiton)、エンジュ(S. japonica L.)イソフジ(S.
tomentosa L.が)、クズ属植物としてはクズ(Pueraria
lobata (Willd.)ohwi)が、ダイズ属植物としてはダイズ(Glycine max Merr.)、ツルマメ(G.soja Siebold et Zucc.)が、フジ属植物としてはノダフジ(Wistaria Floribunda(Willd.)DC.)、ヤマフジ(W.brachybotrys Siebold et Zucc.)が、フォエヌム・グラエクム属としてはコロハ(Trigonella foenum−graecum L.)が、ウリ科カボチャ属植物としてはカボチャ(Cucurbita moschata(Duchesne)Poir. var. meloniformis(Carriere)Makino)、セイヨウカボチャ(C. pepo L.)が、ニガウリ属植物としてはツルレイシ(Momordica charantia L.)(別名ニガウリ)が、ヘチマ属植物としてはヘチマ(Luffa aegyptiaca Mill.)が、タデ科ソバ属植物としてはソバ(Fagopyrum esculentum Moench)、(F.dibotrys(D.Don)H.Hara)が、セリ科ウイキョウ属植物としてはウイキョウ(Foeniculum vulgare Mill.)、アブラナ科アルバ属植物としてはシロガラシ(Sinapis alba L.)が利用できる。
Hereinafter, the present invention will be described in detail. Examples of the plant belonging to the genus Amidokolo, which exhibits serine protease inhibitory action for use in the present invention, are Amadochoro (Polygonatum odoratum (Mill.) Druce var.
pluriflorum (Miq.) Ohwi), P. humile Fisch., Naruko Yuri (P.
falcatum A. Gray) is a leek plant.
tuberosum R OTLER ), but the leguminous Clara genus is Clara (Sophora flavescens Aiton), Enju (S. japonica L.) Isofuji (S.
tomentosa L.), as a genus of genus Kudzu (Pueraria)
lobata (Willd.) ohwi), soybeans (Glycine max Merr.), peas (G.soja Siebold et Zucc.) as genus plants, Nodafuji (Wistaria Floribunda (Willd.) DC.) , Yamafuji (W.brachybotrys Siebold et Zucc.), Foenum Graekum genus Koroha (Trigonella foenum-graecum L.), Cucurbita moschata (Duchesne) Poir. Var. Meloniformis (Cucurbita moschata (Duchesne) Poir. Carriere) Makino), pumpkin (C. pepo L.), but as a plant of the genus Nigauri, Momordica charantia L. (aka Nigauri), and as a plant of the genus Locha (Luffa aegyptiaca Mill.) Buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) and (F.dibotrys (D.Don) H.Hara) are the common buckwheat plants, Feniculum vulgare Mill. Brush (Sinapis alba L.) is available.

また、上記植物類は種々の適当な有機溶媒を用いて、低温下及び/又は加温下で抽出されたエキスとして使用できる。 Moreover, the said plant can be used as an extract extracted under various low temperature and / or heating using various suitable organic solvents.

抽出溶媒としては、特に限定はされないが、例えば、水;メチルアルコール、エチルアルコール等の低級1価アルコール;グリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等の液状多価アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等のケトン;酢酸エチルなどのアルキルエステル;ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素;ジエチルエーテル等のエーテル類;ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の1種または2種以上を用いることが出来る。 とりわけ、水、エチルアルコール、1,3-ブチレングリコールの1種または2種以上の混合溶媒が特に好適である。   The extraction solvent is not particularly limited. For example, water; lower monohydric alcohols such as methyl alcohol and ethyl alcohol; liquid polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol; acetone, methyl ethyl ketone, and the like. One type or two or more types of ketones; alkyl esters such as ethyl acetate; hydrocarbons such as benzene and hexane; ethers such as diethyl ether; halogenated alkanes such as dichloromethane and chloroform can be used. In particular, water, ethyl alcohol, or a mixed solvent of one or more of 1,3-butylene glycol is particularly suitable.

本発明に用いるメラニン産生抑制剤はエラグ酸及びその誘導体並びにそれらの塩、エンドセリン拮抗薬、アスコルビン酸及びその誘導体並びにそれらの塩、グルタチオン及びその誘導体並びにそれらの塩、システイン及びその誘導体並びにそれらの塩、レゾルシン及びその誘導体並びにそれらの塩、ハイドロキノン及びその誘導体並びにそれらの塩は市販の試薬類を利用することが出来る。また、これらの化合物を多く含有する植物から各種の溶媒、例えば、水;メチルアルコール、エチルアルコール等の低級1価アルコール;グリセリン、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール等の液状多価アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等のケトン;酢酸エチルなどのアルキルエステル;ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素;ジエチルエーテル等のエーテル類;ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の1種または2種以上を用いて抽出し、精製して使用することが出来る。さらには、化学的な合成によっても上記化合物を作成することが可能である。 Melanin production inhibitors used in the present invention are ellagic acid and its derivatives and their salts, endothelin antagonists, ascorbic acid and its derivatives and their salts, glutathione and their derivatives and their salts, cysteine and its derivatives and their salts Commercially available reagents can be used for resorcin and its derivatives and their salts, hydroquinone and its derivatives and their salts. Various solvents from plants containing a large amount of these compounds, such as water; lower monohydric alcohols such as methyl alcohol and ethyl alcohol; liquid polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol and 1,3-butylene glycol; acetone Extraction using 1 type or 2 types or more of alkyl esters such as ethyl acetate; hydrocarbons such as benzene and hexane; ethers such as diethyl ether; halogenated alkanes such as dichloromethane and chloroform; It can be used after purification. Furthermore, the above compound can be prepared by chemical synthesis.

また、グラブリジン、グラブレン、リクイリチン、イソリクイリチン及びこれらを含有するカンゾウ抽出物、胎盤抽出物、カロチノイド類及びこれらを含有する動植物抽出物、イレイセン抽出物、ひまわり種子抽出物、イブキトラノオ抽出物、エイジツ抽出物、オウゴン抽出物、オノニス抽出物、海藻抽出物、ゴカヒ抽出物、リノール酸を含有する植物抽出物、リノレン酸を含有する植物抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、シャクヤク抽出物、センプクカ抽出物、ソウハクヒ抽出物、茶抽出物、トウキ抽出物、ビャクレン抽出物、ブナノキ抽出物、ブドウ種子抽出物、ホップ抽出物、マイカイカ抽出物、ユキノシタ抽出物、ヨクイニン抽出物の調製は特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出される。抽出溶媒としては、例えば、水;メチルアルコール、エチルアルコール等の低級1価アルコール;グリセリン、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール等の液状多価アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等のケトン;酢酸エチルなどのアルキルエステル;ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素;ジエチルエーテル等のエーテル類;ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の1種または2種以上を用いることが出来る。とりわけ、水、エチルアルコール、1,3−ブチレングリコールの1種または2種以上の混合溶媒が特に好適である。 Also, grabrizine, glabrene, liquiritin, isoliquiritin and licorice extract, placenta extract, carotenoids and animal and plant extracts containing these, irasen extract, sunflower seed extract, ibukitoranoo extract, age extract , Ogon extract, Ononis extract, Seaweed extract, Gokahi extract, Plant extract containing linoleic acid, Plant extract containing linolenic acid, Saisin extract, Hawthorn extract, Shirayuri extract, Peonies extract , Sempukuka extract, Sakuhakuhi extract, tea extract, Toki extract, sandalwood extract, beech extract, grape seed extract, hop extract, mica squid extract, saxifrage extract, Yokuinin extract are particularly limited Not at low temperature, for example using various suitable organic solvents It is extracted under heating from. Examples of the extraction solvent include water; lower monohydric alcohols such as methyl alcohol and ethyl alcohol; liquid polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; and ethyl acetate. One or more of alkyl esters; hydrocarbons such as benzene and hexane; ethers such as diethyl ether; and halogenated alkanes such as dichloromethane and chloroform can be used. In particular, one, two or more mixed solvents of water, ethyl alcohol, and 1,3-butylene glycol are particularly suitable.

本発明に用いるセリンプロテアーゼ阻害作用を示すユリ科アマドコロ属植物のアマドコロ、ヒメイズイ、ナルコユリ、ネギ属植物のニラ、マメ科クララ属植物のクララ、エンジュ、イソフジ、クズ属植物のクズ、ダイズ属のダイズ、ツルマメ、フジ属のノダフジ、ヤマフジ、フォエヌム・グラエクム属のコロハ、ウリ科カボチャ属のカボチャ、セイヨウカボチャ、ニガウリ属のツルレイシ(別名ニガウリ)、ヘチマ属のヘチマ、タデ科ソバ属のソバ、セリ科ウイキョウ属のウイキョウ、アブラナ科アルバ属のシロガラシの植物抽出エキスの配合量は、0.0001〜10.0重量%が好ましく、特に0.01〜1.0重量%の範囲が最適である。 Lentiaceae Amadokolo, Amadokolo, Nymphaea lily, Leek genus leek, Lariaceae Clara genus Clara, Enju, Isofuji, Kudzu genus kudzu, Soybean genus soybean , Wild bean, nodafuji of the genus Fuji, Yamafuji, Koroha of the genus Forenum graekum, pumpkin of the cucurbitaceae pumpkin, pumpkin of the sun 0.0001-10.0 wt% is preferable, and the range of 0.01-1.0 wt% is most suitable for the blending amount of the plant extract of Fennel spp.

メラニン産生抑制剤として用いるエラグ酸及びその誘導体並びにそれらの塩、エンドセリン拮抗薬、アスコルビン酸及びその誘導体並びにそれらの塩、グルタチオン及びその誘導体並びにそれらの塩、システイン及びその誘導体並びにそれらの塩、レゾルシン及びその誘導体並びにそれらの塩、ハイドロキノン及びその誘導体並びにそれらの塩、グラブリジン、グラブレン、リクイリチン、イソリクイリチン及びこれらを含有するカンゾウ抽出物、胎盤抽出物、カロチノイド類及びこれらを含有する動植物抽出物、イレイセン抽出物、ひまわり種子抽出物、イブキトラノオ抽出物、エイジツ抽出物、オウゴン抽出物、オノニス抽出物、海藻抽出物、ゴカヒ抽出物、リノール酸を含有する植物抽出物、リノレン酸を含有する植物抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、シャクヤク抽出物、センプクカ抽出物、ソウハクヒ抽出物、茶抽出物、トウキ抽出物、ビャクレン抽出物、ブナノキ抽出物、ブドウ種子抽出物、ホップ抽出物、マイカイカ抽出物、ユキノシタ抽出物、ヨクイニン抽出物については、それぞれの素材を乾燥した後、細かく粉砕したものを重量比で1〜1000倍量、特に10〜100倍量の溶媒を用い、常温抽出の場合には、0℃以上、特に20℃〜40℃で1時間以上、特に3〜7日間行うのが好ましい。また、60〜100℃で1時間、加熱抽出しても良い。 Ellagic acid and its derivatives and their salts, endothelin antagonists, ascorbic acid and its derivatives and their salts, glutathione and their derivatives and their salts, cysteine and its derivatives and their salts, resorcin and their use as melanin production inhibitors Derivatives thereof and salts thereof, hydroquinone and derivatives thereof, and salts thereof, glabrizine, glabrene, liquiritin, isoliquiritin and licorice extract containing them, placenta extract, carotenoids and animal and plant extracts containing these, irasen extract , Sunflower seed extract, Ibukitorano extract, Ages extract, Ogon extract, Ononis extract, Seaweed extract, Gokahi extract, Plant extract containing linoleic acid, Plant extract containing linolenic acid, Saishi Extract, hawthorn extract, white lily extract, peony extract, sempukuka extract, Sakuhakuhi extract, tea extract, tea extract, juniper extract, beech extract, grape seed extract, hop extract, squid extract In the case of extraction at room temperature, using a 1 to 1000-fold amount, especially 10 to 100-fold amount of a solvent by weight of a finely pulverized product after drying each material, Is preferably carried out at 0 ° C. or higher, particularly 20 ° C. to 40 ° C. for 1 hour or longer, particularly 3 to 7 days. Moreover, you may heat-extract at 60-100 degreeC for 1 hour.

以上のような条件で得られる上記各抽出物は、抽出された溶液のまま用いても良いが、さらに必要により、濾過等の処理をして濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。 Each of the above-mentioned extracts obtained under the above conditions may be used as an extracted solution. However, if necessary, it is necessary to appropriately use a concentrated and powdered product after filtration or the like. I can do it.

本発明の化粧料におけるメラニン産生抑制剤の配合量は、蒸発乾燥分に換算して0.0001〜20.0重量%が好ましく、特に0.01〜10.0重量%の範囲が最適である。 The blending amount of the melanin production inhibitor in the cosmetic of the present invention is preferably 0.0001 to 20.0% by weight, particularly 0.01 to 10.0% by weight in terms of the evaporated and dried content. .

本発明の化粧料は、上記必須成分のほか、水性成分、油性成分、植物抽出物、動物抽出物、粉末、賦形剤、界面活性剤、油剤、アルコール、pH調整剤、防腐剤、酸化防止剤、増粘剤、甘味剤、色素、香料等を必要に応じて混合して適宜配合することにより調製される。本発明の化粧料の剤型は特に限定されず、化粧水、乳液、クリーム、パック、パウダー、スプレー、軟膏、分散液、洗浄料等種々の剤型とすることができる。 In addition to the above essential components, the cosmetics of the present invention are aqueous components, oily components, plant extracts, animal extracts, powders, excipients, surfactants, oils, alcohols, pH adjusters, preservatives, antioxidants. It is prepared by mixing agents and thickeners, sweeteners, pigments, fragrances, and the like as necessary and blending appropriately. The dosage form of the cosmetic of the present invention is not particularly limited, and can be various dosage forms such as lotion, milky lotion, cream, pack, powder, spray, ointment, dispersion, and cleaning agent.

以下、本発明によるセリンプロテアーゼ阻害剤、なかでもトリプシン阻害剤、およびメラニン産生抑制剤による美白効果に関する実施例を示すと共にその素材を用いた化粧料への応用処方例等について述べるが、ここに記載された実施例に限定されないのは言うまでもない。 Examples of serine protease inhibitors according to the present invention, in particular, trypsin inhibitors, and whitening effects by melanin production inhibitors will be described below, and examples of prescriptions applied to cosmetics using the materials will be described. It goes without saying that the present invention is not limited to the embodiment described.

トリプシン阻害効果を測定する植物抽出物としては、ユリ科アマドコロ属植物としてナルコユリの根茎、ネギ属植物としてニラの種子、マメ科クララ属植物としてクララの種子、クズ属植物としてクズの花、ダイズ属植物としてダイズ種子、フジ属植物としてノダフジの花穂、フォエヌム・グラエクム属植物としてコロハの種子、ウリ科カボチャ属植物としてカボチャの種子、ニガウリ属植物としてニガウリの果実、ヘチマ属植物としてヘチマの種子、タデ科ソバ属植物としてソバ種子、セリ科ウイキョウ属植物としてウイキョウの種子、アブラナ科アルバ属植物としてシロガラシの種子を乾燥したのち粉砕し、50%エタノール水溶液で室温で1週間放置し、エキスを抽出した。抽出したエキスは蒸発残分を測定し、2%濃度になるように調製した。さらに、2%濃度に調製した植物エキスに、0023に記載した沈澱試薬を等量加え、タンパク類を除去し、1%濃度の植物抽出エキスとした。 The plant extracts for measuring the trypsin inhibitory effect include the roots of Narcolili as a plant of the genus Amadocora, the seeds of leek as the plant of the genus Leek, the seeds of Clara as the plant of the genus Clariaceae, the flower of the genus Kuzu, Soybean seeds as plants, Nodafuji's ears as genus Fuji, Koroha seeds as Forenum glacum genus plants, Pumpkin seeds as cucurbitaceae genus pumpkins, Nigauri fruit as genus genus plants, Loofah seeds as seedlings, Tade Dry buckwheat seeds as genus buckwheat plants, fennel seeds as celebratory genus plants, and white seeds as cruciferous alba genus plants, pulverize them, leave them in 50% ethanol aqueous solution at room temperature for 1 week, and extract the extract . The extracted extract was prepared by measuring the evaporation residue to a concentration of 2%. Furthermore, an equal amount of the precipitation reagent described in 0023 was added to the plant extract prepared to a concentration of 2% to remove proteins to obtain a plant extract of 1% concentration.

(トリプシン阻害活性の測定)
〔試 薬〕
リン酸緩衝液 :0.1M−NaH2PO4と0.1M−Na2HPO4を5:25で混ぜPH7.4に調製する。
基質溶液 :カゼイン(Hammerstein Cazein)0.6gを0.05M−Na2HPO4 80mlに
加え、沸騰水浴中で加熱溶解させる。冷却後、PHを7.4に調製する。
トリプシン溶液:1:250トリプシン(DIFCO)を10μg/mlになるようにリン酸緩衝液に溶解
する。
沈澱試薬 :トリクロル酢酸、酢酸Na、酢酸溶液を、それぞれ0.11M、0.22M、0.33M
濃度になるように溶液を調製する。
試料溶液 :所定の濃度になるように水またはエタノールを加え調製する。
〔測 定〕
カゼイン基質溶液0.9mlに試料溶液0.1mlを加え混合する。さらに、トリプシン溶液2ml
を加え撹拌し、37℃で10分間放置する。沈澱試薬3ml加えよく撹拌し、室温で15分間放置する。その後3.000rpm、15分間遠心し、上澄み液をとり280nmの吸光度を測定する。
〔阻害率の測定〕
阻害率の算定は式1により求める。
コントロール(C):トリプシン溶液を沈澱試薬の後に添加する。
対照(T):試料の代わりに蒸留水を用いたもの。
試験区(S):各試料を用いて上記の操作を行ったもの。
(Measurement of trypsin inhibitory activity)
(Reagent)
Phosphate buffer solution: 0.1M-NaH 2 PO 4 and 0.1M-Na 2 HPO 4 are mixed at 5:25 to prepare PH7.4.
Substrate solution: 0.6 g of Hammerstein Cazein to 80 ml of 0.05M-Na 2 HPO 4
In addition, it is dissolved by heating in a boiling water bath. After cooling, adjust PH to 7.4.
Trypsin solution: 1: 250 Trypsin (DIFCO) dissolved in phosphate buffer to a concentration of 10 μg / ml
To do.
Precipitation reagent: Trichloroacetic acid, Na acetate, and acetic acid solution, 0.11M, 0.22M, 0.33M, respectively
Prepare the solution to a concentration.
Sample solution: Prepare by adding water or ethanol to a predetermined concentration.
(Measurement)
Add 0.1 ml of sample solution to 0.9 ml of casein substrate solution and mix. In addition, trypsin solution 2ml
Add and stir and leave at 37 ° C for 10 minutes. Add 3 ml of precipitation reagent, stir well and let stand at room temperature for 15 minutes. Thereafter, the mixture is centrifuged at 3.000 rpm for 15 minutes, and the supernatant is taken and the absorbance at 280 nm is measured.
(Measurement of inhibition rate)
The inhibition rate is calculated by Equation 1.
Control (C): Trypsin solution is added after the precipitation reagent.
Control (T): Distilled water was used instead of the sample.
Test section (S): A sample obtained by performing the above operation using each sample.

〔式1〕

Figure 0005053519
[Formula 1]
Figure 0005053519

Figure 0005053519
Figure 0005053519

表-1に各種植物抽出エキスのトリプシン阻害率を示した。なお、陽性対照物質としては、トリプシン阻害薬として生化学分野で汎用されているロイペプチンを使用し、各種植物抽出エキスと比較した。 Table 1 shows the trypsin inhibition rates of various plant extracts. As a positive control substance, leupeptin, which is widely used in the biochemical field as a trypsin inhibitor, was used and compared with various plant extracts.

表-1より、陽性対照物質として試験したロイペプチンは0.1%濃度で65.0%のトリプシン阻害率を示した。なお、本試験に用いた植物抽出エキスは、トリクロル酢酸を含む沈澱試薬でタンパクを沈澱させたエキスを調製し、試験に用いた。これは、従来の植物由来のトリプシン阻害剤は、タンパク類が多く知られていた。しかし、植物抽出エキスを皮膚に塗布する場合は、タンパク類は分子量が大きくほとんど経皮吸収されない。本実験ではこの点を考慮し、タンパク類でない、トリプシン阻害剤の検索を行った。その結果、表-1より各種植物抽出エキスは、いずれも高い阻害活性を示した。なかでも、ダイズ、コロハ、ヘチマ、ソバ抽出エキスは、0.5%濃度でいずれも50%以上の阻害を示し、ダイズ、ヘチマ抽出液は0.1%濃度で陽性対照物質のロイペプチンとほぼ同等の阻害活性を示すことがわかった。 From Table 1, leupeptin tested as a positive control substance showed a trypsin inhibition rate of 65.0% at 0.1% concentration. In addition, the plant extract used for this test prepared the extract which precipitated the protein with the precipitation reagent containing a trichloroacetic acid, and used it for the test. This is because many conventional trypsin inhibitors derived from plants are known to be proteins. However, when a plant extract is applied to the skin, proteins have a large molecular weight and are hardly absorbed through the skin. In this experiment, considering this point, we searched for trypsin inhibitors that are not proteins. As a result, from Table 1, all plant extracts showed high inhibitory activity. Among them, extracts of soybean, fenugreek, loofah, and buckwheat show inhibition of 50% or more at 0.5% concentration, and soybean and loofah extract have almost the same inhibitory activity as leupeptin as a positive control substance at 0.1% concentration. I found out.

次に、本発明の各種成分を配合した化粧料の処方例の例を示すが、本発明はこれに限定されるものでない。 Next, although the example of the formulation example of the cosmetics which mix | blended various components of this invention is shown, this invention is not limited to this.

(1)化粧用クリーム
(重量%)
a)ミツロウ
2.0
b)ステアリルアルコール
5.0
c)ステアリン酸
8.0
d)スクワラン
10.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート
3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)
1.0
g)ホホバ油 10.0
h)ヘチマ抽出物
0.5
i)アスコルビン酸グルコシド 2.0
j)1,3-ブチレングリコール
5.0
k)水酸化カリウム
0.3
l)防腐剤・酸化防止剤
適量
m)精製水
残部
製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。H)〜m)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化し、40℃まで撹拌しながら冷却する。その後、g)を加え、攪拌し均一に溶解する。
(1) Cosmetic cream
(weight%)
a) Beeswax
2.0
b) Stearyl alcohol
5.0
c) Stearic acid
8.0
d) Squalane
10.0
e) Self-emulsifying glyceryl monostearate
3.0
f) Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.)
1.0
g) Jojoba oil 10.0
h) Loofah extract
0.5
i) Ascorbic acid glucoside 2.0
j) 1,3-butylene glycol
5.0
k) Potassium hydroxide
0.3
l) Preservatives and antioxidants
Appropriate amount
m) Purified water
The remaining preparation methods a) to f) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. Heat up to H) to m), keep at 80 ° C., add to a) to f), emulsify, and cool to 40 ° C. with stirring. Then g) is added and stirred to dissolve uniformly.

(2)乳液
(重量%)
a)ミツロウ
0.5
b)ワセリン
2.0
c)スクワラン
8.0
d)ソルビタンセスキオレエート
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.) 1.2
f)クズ抽出物
1.0
g)アルブチン
2.0
h)1,3-ブチレングリコール
7.0
i)カルボキシビニルポリマー
0.2
j)水酸化カリウム
0.1
k)精製水
残部
l)防腐剤・酸化防止剤
適量
m)エタノール
7.0
製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。h)〜l)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でf)、g)、m)を添加し、40℃まで攪拌、冷却する。
(2) Latex
(weight%)
a) Beeswax
0.5
b) Petrolatum
2.0
c) Squalane
8.0
d) Sorbitan sesquioleate
0.8
e) Polyoxyethylene oleyl ether (20E.O.) 1.2
f) Scrap extract
1.0
g) Arbutin
2.0
h) 1,3-butylene glycol
7.0
i) Carboxyvinyl polymer
0.2
j) Potassium hydroxide
0.1
k) Purified water
The rest
l) Preservatives and antioxidants
Appropriate amount
m) ethanol
7.0
The process up to production methods a) to e) are dissolved by heating and kept at 80 ° C. Heat up to h) to l), keep at 80 ° C., add to a) to e), emulsify, and cool to 50 ° C. with stirring. Add f), g), m) at 50 ° C., stir to 40 ° C. and cool.

(3)化粧水
(重量%)
a)ソバ抽出物
0.1
b)アスコルビン酸リン酸マグネシウム
1.0
c)グリセリン
5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.) 1.0
e)エタノール
6.0
f)香料 適量
g)防腐剤・酸化防止剤
適量
h)精製水
残部
製法 a)とb)を均一に混合する。c)〜h)までを混合し、均一に溶解する。使用時に2剤を混合して使用する。
(3) Lotion
(weight%)
a) Buckwheat extract
0.1
b) Magnesium ascorbate phosphate
1.0
c) Glycerin
5.0
d) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.) 1.0
e) ethanol
6.0
f) Perfume appropriate amount
g) Preservatives and antioxidants
Appropriate amount
h) Purified water
The remaining preparation methods a) and b) are mixed uniformly. c) to h) are mixed and dissolved uniformly. Mix two agents when using.

(4)化粧水
(重量%)
a)コロハ抽出物 0.05
b)グルタチオン 0.1
c)グリセリン

5.0
d)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)
1.0
e)エタノール
6.0
f)香料 適量
g)防腐剤・酸化防止剤
適量
h)精製水
残部
製法 a)〜b)までを混合する。c)〜h)までを混合し、均一に溶解する。使用時に2剤を混合して使用する。
(4) Lotion
(weight%)
a) Fenugreek extract 0.05
b) Glutathione 0.1
c) Glycerin

5.0
d) Polyoxyethylene sorbitan monolaurate (20E.O.)
1.0
e) ethanol
6.0
f) Perfume appropriate amount
g) Preservatives and antioxidants
Appropriate amount
h) Purified water
Mix the remaining preparation methods a) to b). c) to h) are mixed and dissolved uniformly. Mix two agents when using.

(5)洗顔剤
(重量%)
a)ダイズ抽出物
0.5
b)アスコルビン酸グルコシド
2.0
c)シャクヤク抽出液 0.5
d)タルク
残部
e)セルロース
20.0
f)ミリスチン酸カリウム 30.0
g)ラウリルリン酸ナトリウム
10.0
h)香料
適量
i)防腐剤
適量
製法 a)〜i)までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
(5) Face wash
(weight%)
a) Soybean extract
0.5
b) Ascorbic acid glucoside
2.0
c) Peonies extract 0.5
d) Talc
The rest
e) Cellulose
20.0
f) Potassium myristate 30.0
g) Sodium lauryl phosphate
10.0
h) Fragrance
Appropriate amount
i) Preservatives
Appropriate amount of production method a) to i) are mixed and stirred and dispersed well to make uniform.

〔効果確認試験〕
(1)塗布によるヒトでの効果確認試験
被験者として、25〜55歳の女性20名に1日2回(朝、夜)連続2.5ヵ月間、本発明品と比較品のそれぞれを使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。本試験には、試験品として0029で示した化粧料を用い、対照品 1 には0029に示した化粧料からヘチマ抽出物を除いた化粧料、対照品 2 には0029に示した化粧料からアスコルビン酸グルコシドを除いた化粧料を作成し、その使用による効果について調べた。そして、本発明の有効成分を配合した化粧料を毎日使用しながら肌のクスミおよび美白効果を塗布開始前及び2ヶ月塗布後におけるアンケートで集計し、効果の確認を行った。その結果を表-2に示す。
[Effect confirmation test]
(1) As a test subject for human effect by application, 20 females aged 25 to 55 years old use the products of the present invention and comparative products twice a day (morning and night) for 2.5 consecutive months. The state of the application site was compared before and after the test to investigate the improvement effect. In this study, cosmetics using shown in 0029 as a test, cosmetics excluding loofah extract from cosmetics shown in 0029 in the control product 1, the cosmetics shown in 0029 in the control product 2 A cosmetic material from which ascorbic acid glucoside was removed was prepared, and the effects of its use were investigated. Then, while using the cosmetics containing the active ingredient of the present invention every day, skin smears and whitening effects were tabulated before and after application for 2 months, and the effects were confirmed. The results are shown in Table-2.

Figure 0005053519
Figure 0005053519

表-2からも明らかなように、従来のメラニン産生抑制剤のみからなる対照品 1 、セリンプロテアーゼ阻害剤のみからなる対照品 2 と比較して、メラニン産生抑制物質およびセリンプロテアーゼ阻害物質からなる試験品は、評点合計が80点となった。これに対して対照品1は53点、対照品2の評点合計は52点であり、本発明品の高い美白効果が認められた。 As is clear from Table 2, the test consisting of a melanin production inhibitor and a serine protease inhibitor compared to a control product 1 consisting only of a conventional melanin production inhibitor and a control product 2 consisting only of a serine protease inhibitor. The product scored a total of 80 points. On the other hand, the control product 1 had 53 points and the control product 2 had a total score of 52 points, and the high whitening effect of the product of the present invention was recognized.

本発明は、皮膚刺激性や皮膚感作性といった安全性上の問題がなく、メラニン産生抑制物質とセリンプロテアーゼ阻害剤を提供することにより、高い美白効果を有する医薬品及び化粧品への応用が広く期待できる。 The present invention has no safety problems such as skin irritation and skin sensitization, and is widely expected to be applied to pharmaceuticals and cosmetics having a high whitening effect by providing a melanin production inhibitor and a serine protease inhibitor. it can.

Claims (1)

ユリ科アマドコロ属植物がアマドコロ(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce var. pluriflorum(Miq.)Ohwi)、ヒメイズイ(P. humile Fisch.)、ネギ属植物がニラ(Allium tuberosum ROTLER)、マメ科クララ属植物がクララ(Sophora flavescens Aiton)、エンジュ(S. japonica L.)、イソフジ(S. tomentosa
L.)、クズ属植物がクズ(Pueraria lobata (Willd.)ohwi)、フジ属がノダフジ(Wistaria Floribunda(Willd.)DC.)、ヤマフジ(W.brachybotrys Siebold et Zucc.)、フォエヌム・グラエクム属がコロハ(Trigonella foenum−graecum L.)、ウリ科カボチャ属がカボチャ(Cucurbita moschata(Duchesne)Poir. var. meloniformis(Carriere)Makino)、セイヨウカボチャ(C.pepo L.)、ニガウリ属がツルレイシ(Momordicacharantia L.)(別名ニガウリ)、タデ科ソバ属がソバ(Fagopyrum esculentum Moench)、(F.dibotrys(D.Don)H.Hara)から選ばれる1種又は2種以上の除タンパクをした抽出物からなるセリンプロテアーゼ阻害剤。
Lilyaceae Amadokora plants are Amagonokoro (Polygonatum odoratum (Mill.) Druce var. Pluriflorum (Miq.) Ohwi), Japanese apricots (P. humile Fisch.), Allium plants are leek (Allium tuberosum ROTLER), Leguminosae Are Clara (Sophora flavescens Aiton), Enju (S. japonica L.), Isofuji (S. tomentosa)
L.), Kudzu plant is Kudzu (Pueraria lobata (Willd.) Ohwi), Fuji genus is Nodafuji (Wistaria Floribunda (Willd.) DC.), Yamafuji (W.brachybotrys Siebold et Zucc.), Forenum Graekum genus Fenugreek (Trigonella foenum-graecum L.), Cucurbita moschata (Duchesne) Poir. Var. Meloniformis (Carriere) Makino, E. paposa (C. pepo L.), Bitter moth (Momordicacharantia L) .) (Also known as bitter gourd), the genus buckwheat is composed of an extract from one or more deproteinized species selected from buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) and (F.dibotrys (D.Don) H.Hara) Serine protease inhibitor.
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