JP4999842B2 - 医療用デバイス上における微生物バイオフィルムの生育および増殖を抑制するための抗菌性組成物 - Google Patents
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Description
本願は、2005年7月1日出願の米国仮特許出願第60/695,546号明細書ならびに2005年12月6日出願の米国仮特許出願第60/742,972号明細書に関連し、同出願の優先権を主張する。
尿路感染症(UTI)は、すべての院内感染のうち最大で40%を占める最も一般的な院内感染である。UTI症例の大多数は、経尿道的フォリーカテーテル、恥骨上カテーテル、および腎臓瘻術カテーテルを含む尿道カテーテルの使用に関係している。これらの尿道カテーテルは、高齢者、脳卒中の犠牲者、脊髄を負傷した患者、手術後の患者および閉塞性尿路疾患の患者を含む様々な人々に挿入される。尿道カテーテルの挿入およびメンテナンスに関する無菌ガイドラインを遵守しても、カテーテルに関連したUTIは大きな問題を提起し続けている。例えば、脊髄を負傷した入院患者のほぼ4分の1が入院中に症候性UTIを発症すると推測される。カテーテルに関連するUTI症例の原因は、グラム陰性桿菌がほぼ60〜70%であり、腸球菌が約25%であり、カンジダ属菌種が約10%である。更に、血管カテーテルを含む医療用留置デバイスは、静脈へのアクセスを提供することから入院患者の管理において不可欠になりつつある。これらのカテーテルならびに他のタイプの医療用デバイス、たとえば腹腔カテーテル、心臓血管デバイス、整形外科用インプラントおよび他の人工器官などからもたらされる恩恵は、感染合併症によってしばしば相殺されてしまう。これらの感染合併症を引き起こす最も一般的な生物は表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)および黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)である。血管カテーテルの場合、これら2種の生物がすべての感染生物のほぼ70〜80%を占め、表皮ブドウ球菌が最も一般的な生物である。真菌病原体であるカンジダ・アルビカンス(Candida albicans)は、カテーテル感染の10〜15%の原因となっている。
本発明の別の実施形態では、ビスグアニドは組成物中で約100mg/ml〜約400mg/mlである。
細菌は、大腸菌(Escherichia coli)、プロテウス・ミラビリス(Proteus mirabilis)、肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)、クレブシエラ・オキシトカ(Klebsiella oxytoca)、プロビデンティア・ステュアルティイ(Providentia stuartii)およびセラチア・マルセッセンス(Serratia marcescens)から成る群から選択されたグラム陰性細菌でもよい。
さらなる実施形態では、カチオン性ポリペプチドは、硫酸プロタミン、デフェンシン、ラクトペルオキシダーゼおよびリゾチームから成る群から選択される。
さらに別の実施形態では、ビスグアニドはクロルヘキシジン塩である。
さらなる実施形態では、カチオン性ポリペプチドは硫酸プロタミンであり、ビスグアニドはクロルヘキシジン塩である。
また別の実施形態では、本発明による組成物は、水;結合剤、接合剤もしくはカップリング剤または架橋剤;ビスフェノール;第四級アンモニウム化合物;マレイミド;抗生物質;およびpH調整剤から成る群から選択された一つ以上の成分をさらに含む。
さらなる態様では、本発明は、本発明の組成物をポリマーに組み込む行程を備えるデバイスの作製方法であって、ポリマーがデバイスの形成に使用される方法を提供する。
本発明の一実施形態では、デバイスは医療用デバイスである。
カテーテルは、中心静脈カテーテル、末梢静脈内カテーテル、動脈カテーテル、血液透析カテーテル、臍帯カテーテル、経皮的非トンネル式シリコーン・カテーテル、カフ付トンネル式中心静脈カテーテルおよび皮下中心静脈ポートから成る群から選択された留置カテーテルであってよい。
別の実施形態では、デバイスは、カテーテル、ペースメーカー、人工心臓弁、人工関節、ボイスプロテーゼ、コンタクトレンズおよび子宮内避妊器具から成る群から選択されてもよい。
本発明の組成物は、任意の数の周知の活性成分および基剤を含んでもよい。組成物は、成分、例えば水のような適切な溶媒;抗細菌剤および抗真菌剤のような抗生物質; 結合剤、接合剤、もしくはカップリング剤、架橋剤;またはpH調整剤など(これらに限定はされない)をさらに含んでもよい。
移植可能な医療用デバイスには、バイオフィルムに包埋された微生物による汚染または感染の有無について内視鏡検査を使用して調査することができる、整形外科用インプラントが含まれる。挿入可能な医療用デバイスには、内視鏡検査のような侵襲性の技法を用いずに検査することができるカテーテルおよびシャントが含まれる。
バイオフィルムに包埋された、大腸菌、緑膿菌および表皮ブドウ球菌のようなカテーテル関連のバイオフィルム形成細菌の生育に対する、硫酸プロタミンとクロルヘキシジン塩との組み合わせの増強効果を測定するために、生体外におけるマイクロプレート分析を実施した。ルリア=ベルターニ(LB)またはトリプティックソイブロス(TSB)中で生育させた各菌株の一晩培養物を植菌物として使用した。細菌は、12ウェル・マイクロプレートにてコロニー形成抗原(CFA)培地(グラム陰性菌用)またはTSB(グラム陽性菌用)中で、各試験化合物(PSまたはCHX)単独の存在下または非存在下ならびに共存下(PS+CHX)において、試験化合物を12.5μg/ml、25μg/mlまたは50μg/mlとして生育させた。プレートを37℃で24時間インキュベートした。各ウェル中のプランクトン様細胞を含んだ培地を静かに取り出し、滅菌水ですすいだ。既知体積の水を各ウェルに加えて30秒間超音波処理した。各ウェルの内容物を滅菌チューブに移して1分間攪拌した後、10倍希釈系列とし、スプレッダを使用して寒天プレート上に塗り拡げた。プレートを37℃で24時間インキュベートした後、コロニー形成単位(CFU)を計数した。クロルヘキシジン塩は、バイオフィルムに包埋された3種の供試生物すべての生育の抑制において硫酸プロタミンよりも有効であったが、硫酸プロタミンとクロルヘキシジン塩との組み合わせは、緑膿菌および表皮ブドウ球菌に対して増強された抑制作用を有していた(図1〜3)。
1cm長のシリコーン・カテーテル片をPS+CHXでコーティング処理したもの、および未処理のものの抗菌活性を、シェレツ(Sheretz)らが先に述べたように(Antimicrob.Agents.Chemother.、第33巻、p.1174−1178、1989年)カービー=バウアー法を使用して評価した。カテーテルは、米国特許第6,475,434号明細書に記載のように、PS(100mg/ml)+CHX(400mg/ml)溶液中にディッピングした後で乾燥させることによりコーティングした。カテーテルをエチレンオキサイドでガス滅菌した。大腸菌、プロテウス・ミラビリス、緑膿菌、肺炎桿菌、エンテロコッカス・フェカーリス、バンコマイシン耐性腸球菌(VRE)、表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌およびカンジダ・アルビカンスのようなカテーテルに関連する微生物を、37℃で18時間普通ブロスにおいて生育させた。適切な植菌量の各細菌株または酵母株を用いて塗布プレートを作製した。その後、コーティング処理したカテーテル片および未処理のカテーテル片を、各プレートの中央に注意深く押しつけた。37℃で24時間インキュベートした後、各カテーテル片を囲む阻止帯を、長軸に垂直な向きに計測した。阻止帯は生物によって6mm〜21mmの範囲で変動した(表1)。コーティングされたカテーテルは、大腸菌、表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌およびカンジダ・アルビカンスに対し顕著な抑制活性を有していた。
細菌コロニー形成に抵抗するためにPS+CHX、PSおよびCHXでコーティングしたシリコーン・カテーテルの能力について、コーティング処理片と未処理片とを大腸菌、緑膿菌および表皮ブドウ球菌に曝露することにより三連で試験した。シリコーン・カテーテルを、PS(100mg/ml)、CHX(100mg/ml)およびPS(100mg/ml)+CHX(100mg/ml)でコーティングし、エチレンオキサイドでガス滅菌した。このコーティング処理カテーテル片を、細菌に曝露する前に滅菌人工尿中で37℃にて24時間、100rpm(毎分回転数)でインキュベートした。インキュベートした後、カテーテル片を滅菌水ですすぎ、BHI培地中の細菌培養物中で37℃にて3時間、100rpmでインキュベートした。3時間インキュベートした後、カテーテル片を穏やかに2度洗浄した。洗浄した各カテーテル片を、1mlの滅菌水が入った滅菌チューブに移し、30秒間超音波処理した後に1分間攪拌した。さらに、滅菌水を使用して各区分を段階希釈し、LB寒天プレート上に塗り拡げた。プレートを37℃で24時間インキュベートし、コロニー(CFU)を計数した。CHXのみでコーティングしたカテーテルは、PSおよびPS+CHXでコーティングしたカテーテルよりも、大腸菌および表皮ブドウ球菌の付着の抑制において優れていた(図4および6)。しかしながら、PS+CHXの組み合わせでコーティングしたカテーテルは、緑膿菌に対して増強された抗付着効果を示した(図5)。
PS+CHXでコーティングした1cm長のシリコーン・カテーテル片の抗菌活性を、シェレツ(Sheretz)らが先に述べたように(Antimicrob.Agents.Chemother.、第33巻、p.1174−1178、1989年)カービー=バウアー法を使用して評価した。カテーテルは、米国特許第6,475,434号明細書の記載のように、PS(100mg/ml)+CHX(400mg/ml)溶液中にディッピングした後で乾燥させることによりコーティングした。カテーテルをエチレンオキサイドでガス滅菌した。大腸菌、プロテウス・ミラビリス、緑膿菌、肺炎桿菌、エンテロコッカス・フェカーリス、バンコマイシン耐性腸球菌(VRE)、表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌およびカンジダ・アルビカンスのようなカテーテルに関連する微生物を、37℃で18時間普通ブロスにおいて生育させた。適切な植菌量の各細菌株を用いて塗布プレートを作製した。その後、コーティング処理したカテーテル片を、各プレートの中央に注意深く押しつけた。37℃で24時間インキュベートした後、各カテーテル片を囲む阻止帯を、長軸に垂直な向きに計測した。阻止帯を計測した後、カテーテル片を、それぞれの供試生物が植菌された新しいプレート上に移し、再び37℃で24時間インキュベートした。各カテーテル片を囲む阻止帯を再び計測した。コーティング処理したカテーテル片の抑制活性の耐久性を測定するために、各供試生物を用いて3日間、7日間、および10日間、上記の手順を繰り返した。コーティング処理したカテーテル片の、肺炎桿菌、VREおよび緑膿菌に対する抑制活性は、3日しか続かなかった(表2)。しかしながら、コーティングされたカテーテル片は、10日間経過した後でも大腸菌、表皮ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌およびカンジダ・アルビカンスに対する顕著な抑制活性を示した。
PS+CHXでコーティングしたシリコーン・カテーテルが7日間細菌コロニー形成に抵抗する能力について、コーティング処理片と未処理片とを大腸菌および表皮ブドウ球菌に(二連で)曝露することにより試験した。シリコーン・カテーテルを、PS(100mg/ml)+CHX(400mg/ml)でコーティングし、エチレンオキサイドでガス滅菌した。コーティング処理したカテーテル片および未処理片を、細菌に曝露する前に別々に滅菌人工尿中で37℃にて7日間、100rpmでインキュベートした。フラスコ中の人工尿は24時間ごとに新しい人工尿に取り替えた。コーティング処理したカテーテル片および未処理のカテーテル片(三連)を、1、3、5および7日目の時点で取り出し、滅菌水で穏やかにすすいだ。さらに、これらをひとつずつ上記の供試生物に曝露した。インキュベートした後、カテーテル片を滅菌水で穏やかに3回すすぎ、供試生物の培養ブロス中で37℃にて3時間、100rpmでインキュベートした。3時間インキュベートした後、カテーテル片を穏やかに2回洗浄した。洗浄した各片を1mlの滅菌水が入った滅菌チューブに移し、30秒間超音波処理してから1分間攪拌した。さらに、滅菌水を使用して各区分を段階希釈し、LB寒天プレート上に塗り拡げた。プレートを37℃で24時間インキュベートし、コロニー形成単位(CFU)を計数した。この手順を各時点について同様に実施した。PS+CHXでコーティングしたカテーテル片は細菌細胞の付着防止において有効であり、第7日ではいずれの細菌株の付着についても約80%の抑制が観察された(図7〜8)。
生体内における有効性の検討は、以前に報告されたウサギモデル(ダルーシェ(Darouiche)ら、J.Heart.Valve.Dis.、第11巻、p.99−104、2002年)に軽微な改良を加えて実施した。この予備的検討は、PS(100mg/ml)+CHX(400mg/ml)でコーティングしたシリコーン・カテーテルの生体内における有効性を、皮下に注入されたシリコーン・カテーテル片の大腸菌感染の防止において評価するものとした。シリコーン・カテーテルを、PS(100mg/ml)+CHX(400mg/ml)でコーティングし、エチレンオキサイドでガス滅菌した。合計15個のコーティングしていない1cm長のシリコーン・カテーテル片と、15個のコーティングしたカテーテル片とを、グラム陽性の皮膚微生物相に対する予防のためにバンコマイシン(体重1kgあたり20mg)を1回投与済みの合計4羽のウサギの背部に皮下移植した。各デバイスに、大腸菌の臨床分離株を2×104CFU/mlとして50μl植菌し、次いで創傷部を閉じた。体重1kgあたり2mgのケトプロフェンを、抗炎症剤/鎮痛剤として各ウサギに毎日筋肉内(IM)注射した。7日後にこの4羽のウサギを殺処分した。デバイスを体外に取り出し、超音波処理法およびプレート塗布を用いて培養した。周囲の流体を回収してスワブ培養物を得た。コーティングしていないカテーテル片15個のうちの3個(20%)には大腸菌のコロニーが形成されたが、コーティングされたカテーテル片15個ではすべて細菌のコロニー形成が全くなかった(表3)。
本実施例の目的は、(1)クロルヘキシジン/プロタミンでコーティングしたカテーテルの生体内における有効性を、コーティングしていないカテーテルと比較して確認すること、(2)クロルヘキシジン/プロタミンでコーティングしたカテーテルと、ヒドロゲル銀でコーティングしたカテーテルとについて、大腸菌によるデバイスでのコロニー形成およびデバイスに関連した感染の割合を比較すること、(3)クロルヘキシジン/プロタミンでコーティングしたカテーテルがバイオフィルムに包埋された微生物の生育または増殖の防止に有用であることを示すこと、ならびに(4)クロルヘキシジン/プロタミンでコーティングしたカテーテルがデバイス関連の感染に対する防御に有用であることを示すこと、とした。
a.超音波処理法の使用によるデバイスからの定量培養
b.デバイスに隣接している部位の定性的スワブ培養を実施した。
Claims (24)
- デバイス上における、バイオフィルムに包埋された微生物の生育または増殖を防止するための組成物であって、(a)硫酸プロタミンおよび(b)クロルヘキシジンまたはクロルヘキシジン塩を含有する組成物。
- 前記硫酸プロタミンは組成物中で12.5mg/ml〜100mg/mlである、請求項1に記載の組成物。
- クロルヘキシジンまたはクロルヘキシジン塩は組成物中で100mg/ml〜400mg/mlである、請求項1または請求項2に記載の組成物。
- 前記微生物は細菌である、請求項1から請求項3のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記細菌は、大腸菌(Escherichia coli)、プロテウス・ミラビリス(Proteus mirabilis)、肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)、クレブシエラ・オキシトカ(Klebsiella oxytoca)、プロビデンティア・ステュアルティイ(Providentia stuartii)およびセラチア・マルセッセンス(Serratia marcescens)から成る群から選択されたグラム陰性細菌である、請求項4に記載の組成物。
- 前記細菌は、エンテロコッカス・フェカーリス(Enterococcus faecalis)、バンコマイシン耐性腸球菌(VRE)、ヴィリダンス型連鎖球菌(Streptococcus viridans)、表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)およびスタフィロコッカス・サプロフィティクス(Staphylococcus saprophyticus)から成る群から選択されたグラム陽性細菌である、請求項4に記載の組成物。
- 前記微生物は真菌である、請求項1に記載の組成物。
- 前記真菌はカンジダ・アルビカンス(Candida albicans)である、請求項7に記載の組成物。
- 前記クロルヘキシジン塩は、ジグルコン酸クロルヘキシジン、二酢酸クロルヘキシジンおよび二塩酸クロルヘキシジンから成る群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- 前記硫酸プロタミンは100mg/mlであり、クロルヘキシジン塩は400mg/mlである、請求項1に記載の組成物。
- 水;ビスフェノール;第四級アンモニウム化合物;マレイミド;抗生物質;およびpH調整剤から成る群から選択された一つ以上の成分をさらに備える、請求項1から請求項10のいずれか一項に記載の組成物。
- 追加の抗菌性成分をさらに備える、請求項1から請求項11のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記追加の抗菌性成分は、ビスフェノール、N置換マレイミド、および第四級アンモニウム化合物から成る群から選択される、請求項12に記載の組成物。
- 前記ビスフェノールは、トリクロサンおよびヘキサクロロフェンから成る群から選択される、請求項13に記載の組成物。
- 前記第四級アンモニウム化合物は、塩化ベンザルコニウム、トリドデシル・メチル塩化アンモニウム、およびジデシル・ジメチル塩化アンモニウムから成る群から選択される、請求項13に記載の組成物。
- 請求項1から請求項15のいずれか一項に記載の組成物を用いてデバイスの少なくとも一つの表面を処理する工程を含む、デバイスの作製方法。
- 請求項1から請求項15のいずれか一項に記載の組成物をポリマーに組み込む行程を備えるデバイスの作製方法であって、前記ポリマーがデバイスの形成に使用される方法。
- デバイスの作製方法であって、請求項1から請求項15のいずれか一項に記載の組成物でデバイスの少なくとも一つの表面上をコーティングする行程を備える方法。
- 前記デバイスは医療用デバイスである、請求項16から請求項18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記デバイスはカテーテルである、請求項19に記載の方法。
- 前記カテーテルは留置カテーテルである、請求項20に記載の方法。
- 前記留置カテーテルは、中心静脈カテーテル、末梢静脈内カテーテル、動脈カテーテル、血液透析カテーテル、臍帯カテーテル、経皮的非トンネル式シリコーン・カテーテル、カフ付トンネル式中心静脈カテーテルおよび皮下中心静脈ポートから成る群から選択される、請求項21に記載の方法。
- 前記留置カテーテルは、尿道カテーテル、腹腔カテーテルおよび中心静脈カテーテルから成る群から選択される、請求項22に記載の方法。
- 前記デバイスは、カテーテル、ペースメーカー、人工心臓弁、人工関節、ボイスプロテーゼ、コンタクトレンズおよび子宮内避妊器具から成る群から選択される、請求項16から請求項18のいずれか一項に記載の方法。
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