JP4956753B2 - 細胞の分化/増殖を制御するための基材 - Google Patents
細胞の分化/増殖を制御するための基材 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4956753B2 JP4956753B2 JP2007505992A JP2007505992A JP4956753B2 JP 4956753 B2 JP4956753 B2 JP 4956753B2 JP 2007505992 A JP2007505992 A JP 2007505992A JP 2007505992 A JP2007505992 A JP 2007505992A JP 4956753 B2 JP4956753 B2 JP 4956753B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture substrate
- substrate according
- cells
- cell
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/20—Material Coatings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/02—Membranes; Filters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
- C12N2533/40—Polyhydroxyacids, e.g. polymers of glycolic or lactic acid (PGA, PLA, PLGA); Bioresorbable polymers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Immunology (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
本発明は、幹細胞を分化させることなく増殖させるための培養基材を提供する。一実施形態において、本発明に係る培養基材は、好ましくは0.01〜100μmの範囲の膜厚を有している薄膜を備えている。本実施形態に係る培養基材において、上記薄膜は1層であっても複数積層されていてもよく、基板(例えば、プラスチック、ガラスなど)上に該薄膜が積層されていてもよい。
本発明は、幹細胞を分化させるための培養基材を提供する。一実施形態において、本発明に係る培養基材は、好ましくは0.01〜100μmの範囲の膜厚を有している薄膜を備えている。本実施形態に係る培養基材において、上記薄膜は1層であっても複数積層されていてもよく、基板(例えば、プラスチック、ガラスなど)上に該薄膜が積層されていてもよい。
〔1:細胞培養基板の作製〕
〔1.1:自己組織化多孔フィルムおよび平膜の作製〕
ポリ(ε−カプロラクトン)(Poly(ε−caprolactone);(株)和光純薬工業、MW70,000〜100,000:以下PCLと称する)と両親媒性アクリルアミドポリマー(Cap)とを重量比10:1の割合で混合した後にクロロホルムに溶解し、濃度を10mg/mLに調製した。多孔フィルムを、ガラスシャーレ(直径9cm)にて作製した高分子混合溶液をキャストして高湿度雰囲気下にて作製した。多孔フィルムの孔径は、キャストする高分子溶液の量を変えることにより制御することができた。各フィルムの孔径、幹径および空孔率を、走査型電子顕微鏡(SEM)(HITACHI,S−3500)を用いて測定した。画像1枚あたり5個の孔を選択してその直径の平均を孔径として求め、合計5枚の画像について孔径を測定した。多孔フィルムの幹幅の最も細い部分を幹径として測定し、画像解析用ソフトウエアScion Image(Scion Corporation)を用いて空孔率を測定した(図1)。またPCL平膜を、上記混合溶液を18mm角のカバーガラス上に滴下し、1000rpm、30秒の条件でスピンコーター(MIKASA)を用いて作製した。
作製した自己組織化多孔フィルムを切り取り、18mm角のカバーガラス(MATSUNAMI)に密着させた。PCL多孔フィルムおよびPCL平膜を、1−プロパノール(Wako)中で5分間浸漬して洗浄し、細胞培養容器35mm/non−treated polystylene culture dish(IWAKI)中にてエタノールおよびUV照射によって滅菌した後、Poly(L−Lysin)溶液(50mg/l Poly(L−Lysine)(Sigma)、0.1M ホウ酸(Wako)(pH8.3))に1時間浸漬した後、滅菌水で3回洗浄し、さらにFBS(Fetal Bovine Serum)を含む培地(Opti−MEM、10% FBS)中にて37℃で1時間インキュベートしてコンディショニングを行った後に細胞培養に供した。
神経細胞を、胎生14日目のICRマウスの大脳皮質組織から、以下のように調製した。まず、妊娠14日目のマウスから胎仔を取り出した後に脳を摘出した。さらに、大脳半球から大脳皮質を分離して培地中(Opti−MEM、Gibco)に回収し、パスツールピペットによって細胞を分散させた。次いで、血球計算板を用いて細胞数を計数し、トリパンブルー(Gibco)染色によるViability測定を行った。
マウス胎仔大脳皮質組織から調製した細胞懸濁液を、細胞密度2.0×104細胞/cm2になるように培養基板上に播種した。37℃、5%CO2の条件下にて、1日目は血清培地(Opti−MEM、10%FBS、2−Mercaptoethanol(Gibco))、2日目以降は無血清培地(Opti−MEM、B27 Supplement(Gibco)、2−Mercaptoethanol)を用いて培養した。5日間培養した後、走査型電子顕微鏡および共焦点レーザー顕微鏡観察(OLYMPUS、FLUOVIEW FV300)を用いて細胞形態および突起伸展の様子を観察した。
5日間培養した神経細胞をPBSで洗浄し、2.5%グルタールアルデヒド/PBSを用いて4℃で一晩固定した。次いで、PBS、90%PBS、70%PBS、50%PBS、30%PBS、およびMilliQ水で洗浄し、エタノール(20%、50%、70%、99%)で順次脱水した後3時間減圧乾燥した。乾燥させた試料にイオンスパッタリング装置(HITACHI,E−1030)を用いて白金パラジウムを蒸着させSEMを用いて観察した。
〔6.1:β−TubulinIII免疫化学染色〕
5日間培養した神経細胞をPBSで洗浄し、4%パラホルムアルデヒド/PBSを添加して、室温で1時間放置して細胞を固定した。PBSで3回(各10分間ずつ)洗浄した後、Blocking solution(PBS中5%ヤギ血清、2.5% BSA、0.2% Triton−X 100)を添加して、室温で1時間細胞をインキュベートした。Blocking solutionを除去して、細胞を、一次抗体(抗β−TubulinIII(PBSにて1:800))とともに室温で1時間インキュベートした。PBSで3回(各10分間ずつ)洗浄した後、細胞を、2次抗体(FITC複合体化マウスIgG(PBSにて1:400)とともに室温で1時間インキュベートした。PBSで3回(各10分間ずつ)、蒸留水で1回洗浄した後、サンプルをスライドガラスに載せMounting media(KPL)によってマウントした。
5日間培養した神経細胞をPBSで洗浄し、4%パラホルムアルデヒド/PBSを加えて室温で1時間放置して細胞を固定した。PBSで3回(各10分間ずつ)洗浄した後、Blocking solution(PBS中5%ヤギ血清、2.5% BSA、0.2% Triton−X 100)を添加して、室温で1時間細胞をインキュベートした。Blocking solutionを除去して、細胞を、一次抗体(抗Nestin抗体(PBSにて1:1000))とともに室温で1時間インキュベートした。PBSで3回(各10分間ずつ)洗浄した後、細胞を、ビオチン化抗マウスIgG(PBSにて1:1000)とともに室温で1時間インキュベートした。PBSで洗浄した後、細胞を、Alexa488標識avidin(PBSにて1:2000)とともに30分間インキュベートした。PBSで3回(各10分間ずつ)、蒸留水で1回洗浄した後、サンプルをスライドガラスに載せMounting media(KPL)によってマウントした。
培養培地を20μM BrdUを含む培地と交換して2時間培養することによって、増殖している細胞の核内にBrdUを取り込ませた。次いで、10%ホルマリンを用いて室温にて2時間細胞を固定した。PBSで3回(各10分間ずつ)洗浄し、2M HCl溶液中にて37℃で60分間インキュベートした後、0.1M H3BO4緩衝液で2回(5分間ずつ)、PBSで2回洗浄した。次いで、Blocking solution(PBS中5%ヤギ血清、2.5% BSA、0.2% Triton−X 100)を添加して、室温で1時間細胞をインキュベートした。Blocking solutionを除去した後、細胞を、一次抗体(抗BrdUマウスIgG(PBSにて1:1000)とともに室温で1時間インキュベートした。PBSで3回(各10分間ずつ)洗浄した後、細胞を、ビオチン化抗マウスIgG(PBSにて1:1000)とともに室温で1時間インキュベートした。さらにPBSで洗浄した後、Alexa488標識avidin(PBSにて1:2000)で細胞を30分間インキュベートした。PBSで3回(各10分間)、蒸留水で1回洗浄した後、サンプルをスライドガラスに載せMounting media(KPL)によってマウントした。
胎生14日目のマウス胎仔大脳皮質組織から調製した細胞中には、多くの神経幹細胞が存在している。神経幹細胞と平膜または多孔フィルムとの接着による細胞の形態変化に対する影響および細胞の増殖または分化に対する影響を、SEMおよび免疫化学染色による形態観察によって検討した。
Claims (7)
- 増殖因子を用いることなく神経幹細胞を未分化状態を維持すると同時に自己増殖させるための培養基材であって、
平均孔径が0.1〜3μmの複数の孔を有する薄膜を複数積層して備えており、該薄膜が、生分解性ポリマーおよび両親媒性ポリマーからなる樹脂からなり、該生分解性ポリマーと両親媒性ポリマーとの混合溶液をキャストして高湿度雰囲気下にて作製されたことを特徴とする培養基材。 - 前記薄膜の膜厚が孔径より大きく100μm以下であることを特徴とする請求項1に記載の培養基材。
- 前記生分解性ポリマーが、ポリ乳酸、ポリ(ε−カプロラクトン)、およびポリ(グリコール酸−乳酸)共重合体からなる群より選択されることを特徴とする請求項1に記載の培養基材。
- 前記両親媒性ポリマーが、疎水性側鎖としてドデシル基を有し親水性側鎖としてラクトース基またはカルボキシル基を有している、アクリルアミドポリマーを主鎖骨格とする両親媒性樹脂;ポリエチレングリコール系共重合体;および、アニオン性高分子と長鎖アルキルアンモニウム塩とのポリイオンコンプレックスからなる群より選択されることを特徴とする請求項1に記載の培養基材。
- 前記複数の孔がハニカム様に配列されていることを特徴とする請求項1に記載の培養基材。
- 各孔が貫通していることを特徴とする請求項1に記載の培養基材。
- 各孔が連通していることを特徴とする請求項1に記載の培養基材。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007505992A JP4956753B2 (ja) | 2005-03-02 | 2006-03-01 | 細胞の分化/増殖を制御するための基材 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005058236 | 2005-03-02 | ||
JP2005058236 | 2005-03-02 | ||
PCT/JP2006/303909 WO2006093207A1 (ja) | 2005-03-02 | 2006-03-01 | 細胞の分化/増殖を制御するための基材 |
JP2007505992A JP4956753B2 (ja) | 2005-03-02 | 2006-03-01 | 細胞の分化/増殖を制御するための基材 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2006093207A1 JPWO2006093207A1 (ja) | 2008-08-07 |
JP4956753B2 true JP4956753B2 (ja) | 2012-06-20 |
Family
ID=36941236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007505992A Active JP4956753B2 (ja) | 2005-03-02 | 2006-03-01 | 細胞の分化/増殖を制御するための基材 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4956753B2 (ja) |
WO (1) | WO2006093207A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20210071147A1 (en) * | 2017-12-27 | 2021-03-11 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Scaffolding material for stem cell cultures and stem cell culture method using same |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7727759B2 (en) * | 2006-02-21 | 2010-06-01 | Scivax Corporation | Structure for cell culture, cell culture vessel, structure with spheroid, vessel with spheroid, and manufacturing methods thereof |
US20100167401A1 (en) * | 2007-03-19 | 2010-07-01 | Vasif Hasirci | Stacked, patterned biomaterials and/or tissue engineering scaffolds |
DE102007028423A1 (de) | 2007-06-20 | 2008-12-24 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Verfahren und Vorrichtung zur Bildung von Aggregaten biologischer Zellen |
SG194351A1 (en) * | 2008-05-27 | 2013-11-29 | Univ Aarhus | Biocompatible materials for mammalian stem cell growth and differentiation |
WO2011052281A1 (ja) * | 2009-10-30 | 2011-05-05 | 国立大学法人 東京大学 | 神経スフェロイドネットワークの構築方法 |
US10196610B2 (en) | 2011-04-05 | 2019-02-05 | Hiroshima University | Animal cell culture kit, method for culturing animal cells, method for selective culture of animal cells and cell differentiation method |
WO2014208778A1 (ja) * | 2013-06-28 | 2014-12-31 | 国立大学法人東北大学 | 細胞担持パターン化ナノ薄膜 |
JP2014138605A (ja) * | 2014-03-05 | 2014-07-31 | Aarhus Universitet | 哺乳類の幹細胞の成長および分化のための生体適合性材料 |
US20170121679A1 (en) * | 2014-06-26 | 2017-05-04 | Zeon Corporation | Cultured cell differentiation promotion method and cultured cell differentiation promoter |
JP6530638B2 (ja) * | 2015-05-20 | 2019-06-12 | 株式会社幹細胞&デバイス研究所 | 細胞培養担体及びこれを備える細胞シート |
CN109790515B (zh) * | 2016-09-27 | 2023-05-05 | 富士胶片株式会社 | 细胞组织的制造方法及多孔膜 |
WO2018066512A1 (ja) * | 2016-10-07 | 2018-04-12 | 株式会社バイオ未来工房 | 幹細胞の分離方法、分化誘導方法及び細胞培養容器の使用 |
JP7056260B2 (ja) * | 2018-03-15 | 2022-04-19 | 株式会社リコー | 中空構造体 |
US20210317394A1 (en) * | 2018-08-06 | 2021-10-14 | Nissan Chemical Corporation | Cell culture system and cell mass production method using same |
JP2020167966A (ja) * | 2019-04-04 | 2020-10-15 | 大日本印刷株式会社 | 細胞培養基材の製造方法、細胞培養基材、細胞付細胞培養基材、細胞培養容器、及び細胞付細胞培養容器 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004148014A (ja) * | 2002-10-31 | 2004-05-27 | Nipro Corp | 生分解性基材及び組織再生用補綴材並びに培養組織 |
JP2004290133A (ja) * | 2003-03-28 | 2004-10-21 | Teijin Ltd | 細胞培養基材およびその製造方法 |
JP2005027532A (ja) * | 2003-07-09 | 2005-02-03 | Fuji Xerox Co Ltd | 細胞培養基材及びその製造方法、並びに細胞培養方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4431233B2 (ja) * | 1999-11-30 | 2010-03-10 | テルモ株式会社 | ハニカム構造体およびその調製方法、ならびにその構造体を用いたフィルムおよび細胞培養基材 |
JP4731044B2 (ja) * | 2001-05-22 | 2011-07-20 | 独立行政法人理化学研究所 | 延伸フィルムおよびそれを用いた細胞培養基材 |
JP2002335949A (ja) * | 2001-05-22 | 2002-11-26 | Inst Of Physical & Chemical Res | ハニカム構造体フィルムを用いた細胞の三次元組織培養法 |
JP4247432B2 (ja) * | 2003-05-07 | 2009-04-02 | 独立行政法人理化学研究所 | 凹凸を有するハニカム構造体フィルム |
JP4486347B2 (ja) * | 2003-11-20 | 2010-06-23 | 帝人株式会社 | 軟骨組織再生用基材および軟骨細胞との複合体とその製造方法 |
JP4342338B2 (ja) * | 2004-02-17 | 2009-10-14 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 3次元多孔質構造体とその製造方法 |
JP2005278711A (ja) * | 2004-03-26 | 2005-10-13 | Cardio Corp | ハニカムフィルムを用いた機能的人工組織の生産 |
-
2006
- 2006-03-01 WO PCT/JP2006/303909 patent/WO2006093207A1/ja active Application Filing
- 2006-03-01 JP JP2007505992A patent/JP4956753B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004148014A (ja) * | 2002-10-31 | 2004-05-27 | Nipro Corp | 生分解性基材及び組織再生用補綴材並びに培養組織 |
JP2004290133A (ja) * | 2003-03-28 | 2004-10-21 | Teijin Ltd | 細胞培養基材およびその製造方法 |
JP2005027532A (ja) * | 2003-07-09 | 2005-02-03 | Fuji Xerox Co Ltd | 細胞培養基材及びその製造方法、並びに細胞培養方法 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20210071147A1 (en) * | 2017-12-27 | 2021-03-11 | Sekisui Chemical Co., Ltd. | Scaffolding material for stem cell cultures and stem cell culture method using same |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2006093207A1 (ja) | 2006-09-08 |
JPWO2006093207A1 (ja) | 2008-08-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4956753B2 (ja) | 細胞の分化/増殖を制御するための基材 | |
Redenti et al. | Retinal tissue engineering using mouse retinal progenitor cells and a novel biodegradable, thin-film poly (e-caprolactone) nanowire scaffold | |
Bratt‐Leal et al. | Engineering the embryoid body microenvironment to direct embryonic stem cell differentiation | |
JP4567936B2 (ja) | 細胞培養用支持体材料、細胞の共培養方法およびそれより得られる共培養細胞シート | |
Su et al. | Microgrooved patterns enhanced PC12 cell growth, orientation, neurite elongation, and neuritogenesis | |
US20080057578A1 (en) | Process and substrate for culturing cartilage cell, material for reproducing biological tissue containing cartilage cell, and cartilage cell | |
Takezawa et al. | Characterization of morphology and cellular metabolism during the spheroid formation by fibroblasts | |
US20070274968A1 (en) | Substrate for cell culture | |
WO2003096972A2 (en) | Angiogenesis and cardiac tissue engineering with peptide hydrogels and related compositions and methods of use thereof | |
TW200907053A (en) | Cell culture container and cell culture method | |
JPH06327462A (ja) | 細胞凝集体の形成方法 | |
TW201014914A (en) | Materials and methods for cell growth | |
Kojima et al. | Establishment of self-organization system in rapidly formed multicellular heterospheroids | |
Nho et al. | Adsorption of mesenchymal stem cells and cortical neural stem cells on carbon nanotube/polycarbonate urethane | |
Marcelo et al. | Characterization of a unique technique for culturing primary adult human epithelial progenitor/“stem cells” | |
JP2010136706A (ja) | 細胞培養担体 | |
Esfahani et al. | Micro/nanoengineered technologies for human pluripotent stem cells maintenance and differentiation | |
JP2012175983A (ja) | 細胞培養用基板 | |
JP2007006987A (ja) | 皮膚再生用の細胞シートを作製するための構造体およびその利用 | |
Hasan et al. | Neuron and astrocyte aggregation and sorting in three-dimensional neuronal constructs | |
JP5098007B2 (ja) | 非スフェロイド化幹細胞の調製方法 | |
WO2021079931A1 (ja) | 細胞培養用基材及び細胞付き細胞培養用基材 | |
JP5522340B2 (ja) | 胎生肝細胞のスフェロイドを含む培養細胞構築物 | |
JP2008278769A (ja) | 膵島細胞からなる3次元凝集体をインビトロで製造する方法 | |
JPH08131153A (ja) | 細胞培養容器とその製造方法、及び細胞培養方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110913 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111110 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20111213 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120131 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120221 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |