JP4873462B2 - 蛍光顕微鏡 - Google Patents
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射率を極めて低くすることができ、背景光の影響等を低減できる。但し、一般的な場合よりもP偏光光を多くするということで、励起光の全てが必ずしもP偏光光でなくても良い。
般に、これら蛍光タンパク質の蛍光発光波長帯域は、50〜100nmのものが多い。そこで、可視光領域で同時多色染色をする場合、各蛍光波長が重ならないように染色するためには、一蛍光色100nm程度の波長幅にすれば、各色が重ならないので、観察が可能である。すなわち、多色染色を行う場合、可視光域(約400nmから700nm)に数色(3色程度)染色し、同時に観測できる。
らなる薄膜の多層膜により形成されており、任意の波長特性の光学フィルタを構成することができる。
、入射角θ1と屈折率n1、n2により決まる。
7に設けられ2次元平面に多数の図示しないCCD固体撮像素子が配置された固体撮像素子のそれぞれに対して、マイクロレンズ21bとピンホール31bとのセットによって測定された蛍光に基づく2次元受光検出を行うことができる。
図9は、P偏光とS偏光を同等にした場合の3波長ダイクロイックミラーを利用した場合の透過率の波長依存性を示す図である。図9に示すように、P偏光とS偏光との透過率のピークがほぼ同等になっており、本願実施例1による特性と比較すると、ピーク領域以外の波長領域においても有意の透過率を持っており、図7と比較すると、蛍光顕微鏡に利用する場合には、不利であることがわかる。
Claims (7)
- 光源から出射されダイクロイックミラー(DM)を透過した励起光が測定試料内の蛍光色素に対して照射される際に発生する蛍光を受光して前記測定対象を観測する前記ダイクロイックミラーに対して励起光透過光路方式の蛍光顕微鏡において、
前記ダイクロイックミラーに対してP偏光を励起光として用いることを特徴とする励起光透過光路方式の蛍光顕微鏡。 - 前記光源と前記試料との間の光路に対して前記ダイクロイックミラーをブリュースター角に近い角度で傾斜させることにより、P偏光の割合を高めることを特徴とする請求項1に記載の蛍光顕微鏡。
- 前記ダイクロイックミラーに設けられ、屈折率の異なる誘電体膜を含む誘電体多層膜からなり多波長領域に高い透過率と狭い波長半値幅を持つ透過帯域を形成する波長フィルタを備えることを特徴とする請求項1又は2に記載の蛍光顕微鏡。
- 前記多波長領域に対応する波長は、観測対象となる蛍光たんぱくの蛍光スペクトルのピーク波長に合わせられていることを特徴とする請求項1から3までのいずれか1項に記載の蛍光顕微鏡。
- 前記励起光の光源と測定対象との間の光路であって前記ダイクロイックミラーを挟んで前記光源側に設けられ多数のマイクロレンズを有するマイクロレンズアレイと、前記試料側に設けられ多数のピンホールであって前記マイクロレンズアレイと同期して移動するピンホールアレイと、を有することを特徴とする請求項1から4までのいずれか1項に記載の蛍光顕微鏡。
- さらに、前記P偏光の割合を多くする手段を有することを特徴とする請求項1から4までのいずれか1項に記載の蛍光顕微鏡。
- 前記ダイクロイックミラーの傾斜角度を調整する手段を有することを特徴とする請求項1から6までのいずれか1項に記載の蛍光顕微鏡。
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