JPH11352409A - 蛍光検出装置 - Google Patents

蛍光検出装置

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JPH11352409A
JPH11352409A JP10157986A JP15798698A JPH11352409A JP H11352409 A JPH11352409 A JP H11352409A JP 10157986 A JP10157986 A JP 10157986A JP 15798698 A JP15798698 A JP 15798698A JP H11352409 A JPH11352409 A JP H11352409A
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wavelength
filter set
fluorescence
excitation
interference film
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JP10157986A
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Eiji Yokoi
英司 横井
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Original Assignee
Olympus Optical Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 極めて高Ｓ／Ｎの明るい蛍光像を得ることが
でき、更に高精度のフィルタを必要としない蛍光検出装
置を提供する。 【解決手段】 光源１と、励起フィルタセット１４と、
ダイクロイックミラー１５と、対物レンズ８と、吸収フ
ィルタセット１６と、観察光学系１３とを備えている。
励起フィルタセット１４の長波長側における分光透過率
曲線と吸収フィルタセット１６の短波長側における分光
透過率曲線とが交わる点の波長をクロスオーバー波長と
する時、励起フィルタセット１４はクロスオーバー波長
よりも２０nm短い波長において透過率が２５％以上の２
面の干渉膜面１４ａ，１４ｃを有している。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医学や生物学等の
分野において生物組織や細胞を観察、測定する際に利用
される蛍光検出装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】一般に、蛍光検出装置は、医学や生物学
等の分野において生物組織や細胞上で蛍光標識を施した
タンパク質や遺伝子等を検出する目的で広く使用されて
いる。特に、近年では１分子の蛍光色素を検出する超微
弱蛍光観察も行なわれつつあり、絶対的な明るさやＳ／
Ｎの更なる向上が期待されている。
【０００３】図１８は、蛍光検出装置の代表例として従
来周知の落射蛍光顕微鏡の基本構成を示している。図
中、１は水銀ランプその他の光源、２はコレクターレン
ズ、３は開口絞り、４は視野絞り、５は励起フィルタセ
ット、６は標本、７はダイクロイックミラー、８は対物
レンズ、９はステージ、１０は吸収フィルタセット、１
１はビームスプリッター、１２は撮影レンズ、１３は結
像レンズと接眼レンズから成る観察光学系である。光源
１から出射した光束は、コレクターレンズ２により集光
され、開口絞り３及び視野絞り４を経て、励起フィルタ
セット５を通過するが、この時、標本６の所望の励起波
長のみに高い強度を有する光束に変換される。励起フィ
ルタセット５を透過した光束は、ダイクロイックミラー
７で反射され、対物レンズ８を通してステージ９上の標
本６に照射される。標本６から発せられた蛍光は、対物
レンズ８を介してダイクロイックミラー７を透過し、所
望の蛍光波長帯に高い透過率を有する吸収フィルタセッ
ト１０により照明光などの不要な波長域の光が除去され
た後、ビームスプリッター１１により投影レンズ１２と
観察光学系１３へ導かれる。
【０００４】図１９及び２０は、これら落射蛍光顕微鏡
における励起フィルタセット５と吸収フィルタセット１
０の分光透過率を示しており、図１９は蛍光色素が１種
類の場合を、図２０は蛍光色素が２種類の場合を夫々示
している。図中、Ａｂ１，Ａｂ２，Ａｂ３は励起フィル
タセット５の透過帯を、Ｅ１，Ｅ２，Ｅ３は吸収フィル
タセット１０の透過帯を、Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３は蛍光発光
帯を夫々示している。検出器に励起光が到達すると、バ
ックグラウンドノイズとなりＳ／Ｎが悪化して、コント
ラストの低い蛍光像しか得られないので、Ｅ１とＡｂ１
の透過帯は殆ど重なりを持ってはいけない。これは、Ｅ
２，Ｅ３とＡｂ２，Ａｂ３の透過帯についても同様であ
る。励起フィルタセット５と吸収フィルタセット１０の
分光透過率が交差する点の波長をクロスオーバー波長と
云うが、図１９のＸ１、図２０のＸ２，Ｘ３及びＸ４が
これに相当する。対物レンズ８や標本封入剤等から発す
る自家蛍光や検出器の特性を除けば、蛍光検出装置のＳ
／Ｎは、吸収フィルタセット１０の透過波長帯の広さと
クロスオーバー波長での各フィルタセットの透過率とで
決定されると云うことができる。又、多くの蛍光色素は
励起波長に極めて近い波長で蛍光強度のピークを持つの
で、励起フィルタセットと吸収フィルタセットの透過波
長帯が近いと云うことも非常に重要である。
【０００５】一方、レーザを光源としたレーザ蛍光顕微
鏡も蛍光検出装置として実現されているが、この場合、
光源の波長は略単色であり、所望の蛍光を効率良く励起
する波長を選択するので、励起フィルタセットを用いる
必要がない。レーザ顕微鏡では、前記蛍光顕微鏡のクロ
スオーバー波長に対応するのがレーザの波長であると云
える。Ｓ／Ｎは吸収フィルタセットの透過波長帯の広さ
とレーザ波長との近さと、レーザ波長での各フィルタセ
ットの透過率とで決定される。
【０００６】このように、蛍光検出装置のＳ／Ｎは、励
起フィルタセットや吸収フィルタセット等の光学フィル
タの分光特性に大きく左右される。クロスオーバー波長
での透過率を抑えながら、励起フィルタセットの励起光
透過波長帯と吸収フィルタセットの蛍光透過波長帯を十
分近づけることが出来れば、高いＳ／Ｎの検出が達成で
きるだけでなく、蛍光を効率良く検出することで、励起
光強度を上げなくても十分明るい蛍光像を得ることがで
き、励起光による標本へのダメージや標本の退色を低減
させる効果も期待することができる。ところが、実際に
は光学フィルタの製造誤差があるため、多少のばらつき
があってもクロスオーバー波長で照明の漏れ光が発生し
ないように、励起フィルタセットの励起光透過波長帯と
吸収フィルタセットの蛍光透過波長帯を必要以上に離し
ていることが多く、高Ｓ／Ｎの蛍光像を得ることが従来
は難しかった。
【０００７】このような問題を解決し、高Ｓ／Ｎ蛍光検
出装置を実現する手段として、特開平５−１８８２９９
号及び特開平９−１５１７１号公報に記載の方法が挙げ
られる。特開平５−１８８２９９号公報には、干渉フィ
ルタで構成された励起フィルタ及び吸収フィルタを、光
軸と直交する軸の周りに回転可能に支持して、これらを
連動して回転させることにより、フィルタの製造誤差や
標本の状態に影響されることなく常に最適な条件で蛍光
観察を行うことの出来る落射蛍光顕微鏡が提案されてい
る。又、特開平９−１５１７１号公報には、チューニン
グ可能な励起光源として、励起フィルタを長波長透過型
干渉フィルタと短波長透過型干渉フィルタを組み合わせ
て、夫々光軸と直交する軸の周りに回転できるように構
成し、励起光の波長幅と波長を連続的に変化させる方法
が記載されている。
【０００８】上記公報に開示された何れの方法も、干渉
フィルタの透過波長帯が入射角度に依存して連続的に長
波長又は短波長側へシフトする現像を利用したもので、
干渉フィルタで構成された励起フィルタ及び吸収フィル
タを光軸と直交する軸の周りに回転させて調整すること
により、フィルタの製造誤差を補正して、クロスオーバ
ー波長での漏れを抑えながら、励起フィルタと吸収フィ
ルタの透過波長帯を近づけることを可能にしている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】然しながら、特開平５
−１８８２９９号及び特開平９−１５１７１号公報に開
示された方法は、フィルタの特性を最大限に効率良く利
用できるようにしたもので、フィルタの特性で決まる限
界を越えるものではない。又、一般に、干渉フィルタの
透過帯から反射帯への透過率の立ち上がりは、干渉膜面
を光軸に対して垂直な面から傾ける程急峻さを失って行
くことが分かっている。図２１は、この干渉フィルタの
特性を示したもので、吸収フィルタの光軸に垂直な面か
らの傾斜角に対する分光透過率の変化を表わしている。
この図から分かるように、特開平５−１８８２９９号及
び特開平９−１５１７１号公報に記載された方法は、フ
ィルタの上記傾斜角や蛍光の発光波長帯によっては逆に
Ｓ／Ｎが悪化することもあり得る。現在、重要な蛍光色
素の中で励起波長帯の極めて近傍に蛍光強度のピーク波
長を有するものが少なくない。又、生きた細胞の蛍光観
察では、標本へのダメージや退色を減らすために励起光
は出来るだけ弱くする必要があるなど、蛍光検出の条件
が非常に厳しくなって来ている今日では、少しでも高Ｓ
／Ｎで明るい像を得ることの出来る検出装置が要求され
ている。
【００１０】本発明は、このような実情に鑑みてなされ
たもので、その目的とするところは、励起フィルタセッ
トと吸収フィルタセットのクロスオーバー波長での漏れ
を抑えつつ、励起光透過波長帯と蛍光透過波長帯とを極
限まで近づけることにより、極めて高Ｓ／Ｎの明るい蛍
光像を得ることができ、更に高精度のフィルタを必要と
しない蛍光検出装置を提供することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、本発明による蛍光検出装置は、光源と、該光源が発
する光を標本に照射する照明光学系と、該照明光学系に
配置され特定の波長域の光を透過させる励起フィルタセ
ットと、前記標本から発生した蛍光を検出する検出光学
系と、該検出光学系に配置され前記蛍光を透過させる吸
収フィルタセットを備えた蛍光検出装置において、前記
励起フィルタセットの長波長側における分光透過率曲線
と前記吸収フィルタセットの短波長側における分光透過
率曲線とが交わる点の波長をクロスオーバー波長とする
時、前記励起フィルタセットは前記クロスオーバー波長
よりも２０nm短い波長において透過率が２５％以上の第
１の干渉膜面を少なくとも２面有するか、或いは前記吸
収フィルタセットは前記クロスオーバ波長よりも２０nm
長い波長において透過率が５０％以上の第２の干渉膜を
少なくとも２面有するか、或いは前記励起フィルタセッ
トが前記第１の干渉膜面を少なくとも２面有すると共
に、前記吸収フィルタセットが前記第２の干渉膜面を少
なくとも２面ずつ有するかしていて、前記第１の干渉膜
面と前記第２の干渉膜面は、０．０５％＜Ｔ＜１０％な
る条件を満足するようにしたことを特徴としている。但
し、Ｔは前記クロスオーバー波長における前記干渉膜面
の透過率である。
【００１２】又、本発明による蛍光検出装置は、単色若
しくは準単色の光源と、該光源が発する光を標本に照射
する照明光学系と、前記標本から発生した蛍光を検出す
る検出光学系と、該検出光学系に配置された前記蛍光を
透過させる吸収フィルタセットを備えた蛍光検出装置に
おいて、前記吸収フィルタセットの蛍光透過波長帯の短
波長側は前記光源の中心波長よりも２０nm長い波長にお
いて透過率が５０％以上の干渉膜面を少なくとも２面有
し、Ｔ1 を前記光源の中心波長での前記干渉膜面の透過
率とした時０．０５％＜Ｔ1 ＜１０％なる条件を満足す
るようにしている。
【００１３】又、本発明による蛍光検出装置は、光源
と、該光源が発する光を標本に照射する照明光学系と、
該照明光学系に配置され特定の波長域の光を透過させる
励起フィルタセットと、前記標本から発生した蛍光を検
出する検出光学系と、該検出光学系に配置され前記蛍光
を透過させる吸収フィルタセットを備えた蛍光検出装置
において、前記励起フィルタセットは複数の励起光透過
波長帯τi （ｉ＝１，２，・・・・，ｎ）を有し、前記吸収
フィルタセットは前記励起光透過波長帯τi に対応した
複数の蛍光波長帯Ｅi （ｉ＝１，２，・・・・，ｎ）を有
し、前記励起フィルタセットの任意の前記励起光透過波
長帯域τi の長波長側における分光透過率曲線と該任意
の励起光透過波長帯域に対応する前記蛍光透過波長帯Ｅ
i の短波長側における分光透過率曲線とが変わる点の波
長をクロスオーバー波長λi とする時、前記励起フィル
タセットは、前記クロスオーバー波長λi よりも２０nm
短い波長において透過率が２５％以上の第１の干渉膜面
を少なくとも２面有するか、或いは前記吸収フィルタセ
ットは前記クロスオーバー波長λi よりも２０nm長い波
長において透過率が５０％以上の第２の干渉膜面を少な
くとも２面有するか、或いは前記励起フィルタセットが
前記第１の干渉膜面を少なくとも２面有すると共に、前
記吸収フィルタセットが前記第２の干渉膜面を少なくと
も２面有するかしていて、前記第１の干渉膜面と前記第
２の干渉膜面は０．０５％＜Ｔi ＜１０％なる条件を満
足するようにしたことを特徴としている。但し、Ｔi は
前記クロスオーバー波長λi における前記干渉膜面の透
過率である。
【００１４】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施形態を説明す
るに先立ち、本発明の原理と作用効果について説明す
る。一般に、分光透過率曲線の略等しいフィルタを２枚
重ねて使用した場合、その分光透過率は、１枚の場合の
２乗の特性となる。即ち、透過率が１００％近くの波長
帯では、２枚であっても１枚の場合に比べて透過率の減
少は殆どないが、それ以外の波長帯では２枚の場合は１
枚の場合に比べ透過率が急激に低下する。即ち、この場
合の分光透過率曲線の傾斜部は、フィルタが１枚の場合
に比べ非常に急峻なものとなる。この効果は、フィルタ
の数即ちフィルタ面の数が多い程顕著になるが、本発明
は、この効果を、急峻な分光透過率特性を必要とするク
ロスオーバー波長に近い波長帯、つまり励起フィルタセ
ットの場合にはクロスオーバー波長より短波長側に、吸
収フィルタセットの場合にはクロスオーバー波長より長
波長側に、夫々２０nm以内の波長範囲で利用することに
よって、励起フィルタセットの励起光透過波長帯と吸収
フィルタセットの蛍光透過波長帯を近づけるようにした
ものである。
【００１５】図１は本発明による励起フィルタセットと
吸収フィルタセットの分光透過率を従来のものと比較し
て示した特性線図、図２は図１に示した特性線図を底が
１０のlog スケールで表わした特性線図である。図中、
Ａ，Ａ′は照明光路中に配置された２つの干渉膜面Ａ，
Ａ′の分光透過率曲線を、Ｂ，Ｂ′は検出光路中に配置
された２つの干渉膜面Ｂ，Ｂ′の分光透過率曲線を、
Ａ″は干渉膜面Ａ，Ａ′を有する励起フィルタセット
Ａ″の分光透過率曲線を、Ｂ″は干渉膜面Ｂ，Ｂ′を有
する吸収フィルタセットＢ″の分光透過率曲線を、ａは
従来の励起フィルタセットａの分光透過率曲線を、ｂは
従来の吸収フィルタセットｂの分光透過率曲線を、ｘは
クロスオーバー波長を夫々示している。
【００１６】励起フィルタセットＡ″と吸収フィルタセ
ットＢ″は本発明装置において用いられるフィルタセッ
トであるが、これらのフィルタセットＡ″及びＢ″の分
光透過率を従来のフィルタセットａ及びｂの分光透過率
と比較すると、クロスオーバー波長ｘからの透過率の立
ち上がりが僅かな波長範囲で行われているのが分かる。
これは、干渉膜面Ａ，Ａ′の透過率の立ち上がり部分と
干渉膜面Ｂ，Ｂ′の透過率の立ち上がり部分に、透過率
に関する前記の２乗特性を利用したものである。結果と
して、クロスオーバー波長での各フィルタセットの透過
率を変えないとすると、励起光透過帯と蛍光透過帯は、
従来のフィルタセットよりも波長δだけ近づき、蛍光透
過波長帯が励起波長側に広がった分多くの蛍光を検出で
きることになり、Ｓ／Ｎの大幅な向上が期待できるわけ
である。又、干渉膜面Ａ，Ａ′とＢ，Ｂ′は必ずしも両
方が必要ではなく、何れか一方でも十分な効果を上げる
ことが出来る。更に、クロスオーバー波長で許されるフ
ィルタセットの透過率をＴとすると、干渉膜面Ａ，Ａ′
とＢ，Ｂ′の各１枚に対して必要な透過率は従来の略Ｔ
1/2 で良いので、フィルタ製造時のコスト，歩留まりの
点からしても極めて有利である。例えば、Ｔ＝０．０１
％が必要であるとすれば、１枚のフィルタは１％の透過
率で良いことになる。
【００１７】然しながら、干渉膜面Ａ，Ａ′，Ｂ，Ｂ′
のクロスオーバー波長での透過率が０．０５％を下回る
ことになれば、過剰に励起光をカットすることになり、
本発明の利点である蛍光透過波長帯を励起光透過波長帯
に近づける効果は十分に発揮できず、Ｓ／Ｎの向上は期
待できなくなる。一方、干渉膜面Ａ，Ａ′，Ｂ，Ｂ′の
クロスオーバー波長での透過率が１０％を越えると、照
明光を十分にカットすることができずＳ／Ｎが悪化して
しまう。
【００１８】光源に単色光若しくは準単色光を使用する
場合、所望の蛍光色素を効率良く励起する波長を選択す
るので、励起フィルタセットは必要なく、検出光路中に
照明光を排除して高い透過率で蛍光を透過させる吸収フ
ィルタセットを配置すればよい。クロスオーバー波長が
検出器へ到達する漏れ光の最も大きくなる波長とすれ
ば、上記光源の波長がクロスオーバー波長と考えてよ
く、前記のクロスオーバー波長を光源の波長に置き換え
ると、前記と同様の効果を期待することができる。即
ち、検出光路中に、光源の中心波長よりも２０nm長い波
長で５０％以上の透過率を有する少なくとも２つの干渉
膜面を配置することで、従来の吸収フィルタセットより
も蛍光透過波長帯を光源の波長側に広げられ、Ｓ／Ｎの
大幅な向上が可能となる。
【００１９】本発明によれば、複数の励起光波長帯によ
る複数蛍光波長帯の蛍光検出も可能である。図３はこの
場合の励起フィルタセットと吸収フィルタセットの分光
透過率特性を、図４はｉ番目の励起光透過波長帯τi と
ｉ番目の蛍光透過波長帯Ｅiの分光透過率曲線を示して
いる。図中、λi は励起光透過波長帯τi と該励起光透
過波長帯の光で励起される蛍光の透過波長帯Ｅi におい
て分光透過率曲線の交わる波長、Ａi ，Ａi ′は波長λ
i より２０nm短い波長で２５％以上の透過率を有する励
起フィルタセットを構成する少なくとも２面の干渉膜面
及びその分光透過率曲線、Ｂi ，Ｂi ′は波長λi より
２０nm長い波長で５０％以上の透過率を有する吸収フィ
ルタセットを構成する少なくとも２面の干渉膜面及びそ
の分光透過率曲線である。
【００２０】１〜ｎの励起光透過波長帯τi の光によっ
て励起された所望の蛍光は、１〜ｎの蛍光透過波長帯Ｅ
i を透過して検出される。図４に示す任意のｉ番目の励
起光透過波長帯τi と蛍光透過波長帯Ｅi に着目する
と、その作用効果は既述の通りである。即ち、励起光透
過波長帯若しくは蛍光透過波長帯をクロスオーバー波長
側に広げることで、所望の蛍光を効率よく検出できるの
である。この場合、図４に示すように、干渉膜面Ａi ，
Ａi ′とＢi ，Ｂi ′は同じｉ番目の励起光透過波長帯
τi と蛍光透過波長帯Ｅi に合わせる必要はなく、又、
必ずしも励起フィルタセットと吸収フィルタセットの両
方にこれらの干渉膜面を配置せず、何れか一方であって
も、十分なＳ／Ｎの向上が可能である。又、励起フィル
タセットと吸収フィルタセットは、干渉膜面全てが同時
に照明光束若しくは蛍光光束中に入っている必要はな
く、ｉ番目の励起光透過波長帯を形成する干渉膜面が照
明光束中に配置された時に、少なくとも同じくｉ番目の
蛍光透過波長帯を形成する干渉膜面が蛍光光束中に配置
されていればよい。
【００２１】Ｓ／Ｎを向上させる手段は、上述のよう
に、励起光透過波長帯τi と蛍光透過波長帯Ｅi とを近
づける方法のほかに、蛍光透過波長帯Ｅi を励起光透過
波長帯τi ＋１側に広げる方法によっても可能である。
図５は、ｉ＋１番目の励起光透過波長帯τi ＋１とｉ番
目の蛍光透過波長帯Ｅi の分光透過率曲線を示してい
る。図中、λ′i はｉ＋１番目に対応する励起光透過波
長帯τi ＋１とｉ番目の励起光透過波長帯τi との光で
励起される蛍光の透過波長帯Ｅi における分光透過率曲
線の交わる波長（但し、ｉ＝１，２，・・・・，ｎ−１）、
Ｃi ，Ｃ′i は波長λ′i より２０nmの長い波長で２５
％以上の透過率を有する励起フィルタセットを構成する
少なくとも２面の干渉膜面及びその分光透過率曲線、Ｄ
i ，Ｄ′i は波長λ′i より２０nm短い波長で５０％以
上の透過率を有する吸収フィルタセットを構成する少な
くとも２面の干渉膜面及びその分光透過率曲線である。
図５から分かるように、ｉ番目の蛍光透過波長帯Ｅi を
広げるには、励起光透過波長帯τi ＋１の中心波長を変
えないのでクロスオーバー波長λ′i を励起光透過波長
帯τi ＋１に出来るだけ近づけるか、或いはｉ番目の蛍
光透過波長帯Ｅi をクロスオーバー波長λ′i に近づけ
なければならない。本発明は、干渉膜面Ｃi ，Ｃ′i 及
びＤi ，Ｄ′i に前述の干渉膜面を重ねることによる２
乗効果によりｉ番目の蛍光透過波長帯Ｅi を広げて、蛍
光像の高Ｓ／Ｎ検出を可能にしたものである。
【００２２】以下、本発明の実施形態を図示した実施例
に基づき説明する。実施例１ 図６は本発明に係る蛍光検出装置の一実施例である落射
蛍光顕微鏡の光学構成図である。図中、従来例で用いた
のと実質上同一の光学部材には同一符号が付されてい
る。図７はここで用いられる励起フィルタセット１４と
ダイクロイックミラー１５と吸収フィルタセット１６の
分光透過率曲線を示している。本実施例では、励起フィ
ルタセット１４は、第１の干渉膜面１４ａと第２の干渉
膜面１４ｂと第３の干渉膜面１４ｃとを有していて、励
起光透過波長帯１４Ｔを形成している。ここで、干渉膜
面１４ａと１４ｃが励起透過波長帯域１４Ｔの長波長側
の透過波長を決定し、干渉膜面１４ｂが励起透過波長帯
域１４Ｔの短波長側の透過波長を決定している。干渉膜
面１４ａと１４ｃは共に、クロスオーバー波長から２０
nm短波長側で９０％、クロスオーバー波長で５％の透過
率を夫々有しており、各干渉膜面は互いに非平行に配置
されている。一方、吸収フィルタセット１６は、第１の
干渉膜面１６ａと第２の干渉膜面１６ｂとを有してい
て、蛍光透過波長帯１６Ｔを形成している。干渉膜面１
６ａと１６ｂは、共にクロスオーバー波長から２０nm短
波長側で８０％、クロスオーバー波長で５％の透過率を
夫々有しており、各干渉膜面は互いに非平行に配置され
ている。
【００２３】光源１から出射した光束は、コレクターレ
ンズ２により集光され、開口絞り３及び視野絞り４を経
て、励起フィルタセット１４を通過する。励起フィルタ
セット１４を透過した光束はダイクロイックミラー１５
へ入射される。ダイクロイックミラー１５は、図７に示
すような分光透過特性を有しているので、励起フィルタ
セット１４を透過した光束は、このダイクロイックミラ
ー１５で反射されて、対物レンズ８を通過し、ステージ
９上の標本６に照射される。標本６から発せられた蛍光
は、対物レンズ８を介してダイクロイックミラー１５へ
入射される。ダイクロイックミラー１５は、励起フィル
タセット１４の励起光透過波長帯１４Ｔを透過した光束
で励起された蛍光を透過させて、次の吸収フィルタセッ
ト１６に入射させる。各蛍光は、この吸収フィルタセッ
トによって照明光などの不要な波長が除去されて、所望
の蛍光のみがビームスプリッター１１により撮影レンズ
１２と観察光学系１３へ導かれる。
【００２４】本実施例では、上述のように、励起フィル
タセット１４と吸収フィルタセット１６の両方で、クロ
スオーバー波長からの透過率の立ち上がり特性を急峻に
せしめて、照明光を十分に排除しつつ蛍光透過波長帯を
励起波長側に広げたので、高効率且つ高Ｓ／Ｎで蛍光を
検出することが出来る。
【００２５】実施例２ 図８は、本発明の第２実施例を示す要部構成図で、他の
構成部分は図６に示した第１実施例と同一であるため省
略されている。図中、１７は励起フィルタセット、１８
は吸収フィルタセット、１９はダイクロイックミラーで
ある。吸収フィルタセット１８は、平行平面の２枚のガ
ラス基盤２０上に夫々形成された干渉膜面１８ａ，１８
ｂから成り、各ガラス基盤２０は夫々フィルタ回転部材
２２を有するガラス基盤押え枠２１に固定されている。
一対のフィルタ回転部材２２は、夫々ガラス基盤２０と
平行に延びているが、互いに非平行となるように設けら
れている。従って、各フィルタ回転部材２２を回動する
と、干渉膜面１８ａ，１８ｂは、観察光軸２３に垂直な
面に対して夫々傾きが変えられるが、互いに平行になる
ことはない。
【００２６】図９は、本実施例の励起フィルタセット１
７の全体の分光透過率曲線１７Ｔと、吸収フィルタセッ
ト１８全体の分光透過率曲線１８Ｔと、吸収フィルタセ
ット１８の第１の干渉膜面１８ａの分光透過率曲線と、
第２の干渉膜面１８ｂの分光透過率曲線を夫々示してい
る。干渉膜面１８ａと１８ｂは、共に、クロスオーバー
波長から２０nm短波長側で８０％、クロスオーバー波長
で１％の透過率を有する。
【００２７】かくして、本実施例によれば、吸収フィル
タセット１８のクロスオーバー波長からの透過率の立ち
上り特性を急峻にすることで、照明光を十分に排除しつ
つ、蛍光透過波長帯を励起波長側に広げ、効率よく蛍光
を検出することができる。又、干渉膜面１８ａ，１８ｂ
は、観察光軸２３に垂直な面に傾きを変えることによ
り、蛍光透過波長を長短波長方向に調整できるので、干
渉膜面１８ａ，１８ｂの分光特性の製造誤差や、励起フ
ィルタセット１７の分光透過率のばらつきを補正し、Ｓ
／Ｎの最適化を図ることができる。
【００２８】実施例３ 図１０は、本発明の第３実施例を示す要部構成図で、他
の構成部分は図６に示した第１実施例と同一であるため
省略されている。図中、２４は励起フィルタセット、２
５は吸収フィルタセット、２６はダイクロイックミラー
である。励起フィルタセット２４は、平行に配置された
複数枚のフィルタから成る固定のフィルタ群２４ａと可
動の干渉膜面２４ｂとから構成され、又、吸収フィルタ
セット２５は、平行に配置された複数枚のフィルタから
成る固定のフィルタ群２５ａと可動の干渉膜面２５ｂと
から構成されている。干渉膜面２４ａ，２５ｂは、第２
実施例の場合と同様に、平行平面のガラス基盤２０上に
形成され、ガラス基盤押さえ枠２７に取付けられてい
る。ガラス基盤押さえ枠２７の一端部は、フィルタ固定
枠３０にバネ２９を介してネジ２８により取付けられ、
対向する他端部は、フィルタ固定枠３１にバネ３２を用
いて圧着されている。ネジ２８はフィルタ固定枠３０へ
のねじ込み量を変えることにより進退できるようになっ
ている。３３は照明光軸である。
【００２９】図１１は、本実施例の各フィルタの分光透
過率曲線を示している。励起フィルタセット２４全体の
透過率曲線２４Ｔは、フィルタ群２４ａと干渉膜面２４
ｂの各透過率曲線から構成され、短波長側から第１，第
２，第３の蛍光を励起させるための励起光透過波長帯２
４ｃ，２４ｄ，２４ｅを有している。干渉膜面２４ａ，
２４ｂからの透過率は、蛍光透過波長帯２５ｄと励起光
透過波長帯２４ｅとのクロスオーバー波長Ｘｄｅで夫々
５％と８％、クロスオーバー波長Ｘｄｅから２０nm長波
長側で夫々８０％と８５％であるので、照明光を十分に
排除しつつ、蛍光透過波長帯２５ｄは励起光透過波長帯
２４ｅ側に広がり、第２の蛍光を高効率、高Ｓ／Ｎで検
出することができる。又、干渉膜面２４ｂは、ネジ２８
を回すことにより照明光軸３３に垂直な面に対する傾き
を変えて、分光透過率特性を長短波長方向に調整できる
ので、干渉膜面２４ｂの分光透過率特性のばらつきを補
正し、Ｓ／Ｎの最適化を図ることが出来る。
【００３０】又、吸収フィルタセット２５全体の分光透
過率曲線２５Ｔは、フィルタ群２５ａと干渉膜面２５ｂ
の各分光透過率曲線から構成され、３つの励起光透過波
長帯２４ｃ，２４ｄ，２４ｅの光で励起された３つの蛍
光波長に対応した３つの蛍光透過波長帯２５ｃ，２５
ｄ，２５ｅを有する。フィルタ群２５ａ，干渉膜面２５
ｂの分光透過率は蛍光透過波長帯２５ｃと励起光透過波
長帯２４ｄとのクロスオーバー波長Ｘｃｄで３％、該ク
ロスオーバー波長Ｘｃｄから２０nm短波長側で夫々９０
％と８５％である。従って、照明光を十分に排除しつ
つ、蛍光透過波長帯２５ｃは励起光透過波長帯２４ｄ側
へ広がり、第１の蛍光を高効率且つ高Ｓ／Ｎで検出する
ことが出来る。又、干渉膜面２５ｂは、ネジ２８を回す
ことにより観察光軸２３に垂直な面に対する傾きを変え
て、分光透過率特性を長短波長方向に調整できるので、
干渉膜面２５ｂの分光特性のばらつきを補正し、Ｓ／Ｎ
の最適化を図ることが出来る。
【００３１】実施例４ 図１２は、本発明の第４実施例としてのレーザ走査型落
射蛍光顕微鏡の光学系の構成図である。図中、３４，３
５は発振波長の異なるレーザ光源、３６はレーザミック
ス用ダイクロイックミラー、３７はビームエクスパンダ
ー、３８はスペーシャルフィルタ、３９は図１３に示さ
れた如き分光透過率特性を有するダイクロイックミラ
ー、４０は標本６を２次元的に走査するために光束を偏
向させるＸＹスキャナ、４１は対物レンズ、４２は結像
レンズ、４３はピンホール、４４はレーザ光源３４の波
長Ｌ１で励起された第１の蛍光とレーザ光源３５の波長
Ｌ２で励起された第２の蛍光とを分離するためのダイク
ロイックミラー、４５は第１の吸収フィルタセット、４
６は第２の吸収フィルタセット、４７はフォトマルチプ
ライヤ等の光検出器である。なお、吸収フィルタセット
４５はガラス基盤上に形成された干渉膜面４５ａ，４５
ｂ及び４５ｃから成り、吸収フィルタセット４６はガラ
ス基盤上に形成された干渉膜面４６ａ及び４６ｂから成
っている。
【００３２】レーザ光源３４と３５から出射した光束
は、ダイクロイックミラー３６で合成され、ビームエク
スパンダー３７とスペーシャルフィルタ３８を経て、ダ
イクロイックミラー３９へ入射し、そこで反射されて、
ＸＹスキャナ４０と対物レンズ４１を透過し、標本６上
に照射される。かくして、標本６から発せられた蛍光
は、対物レンズ４１，ＸＹスキャナ４０を介してダイク
ロイックミラー３９を透過し、結像レンズ４２によりピ
ンホール４３上に集光せしめられる。ピンホール４３上
に集光せしめられた蛍光の内、ピンホール４３を抜けた
蛍光は、ダイクロイックミラー４４により２光路に分離
され、第１の蛍光と第２の蛍光は夫々第１の吸収フィル
タセット４５と第２の吸収フィルタセット４６で光源波
長や他の蛍光波長を遮断されて、光検出器４７で検出さ
れる。
【００３３】図１３には吸収フィルタセット４５の分光
透過率曲線が、図１４には吸収フィルタセット４６の分
光透過率曲線が夫々示されている。図中、４５Ｔは吸収
フィルタセット４５全体の分光透過率曲線を示してい
る。干渉膜面４５ａと４５ｂは共に第２のレーザ波長Ｌ
２から２０nm短波長側で９０％、Ｌ２で１％の透過率を
有し、干渉膜面４５ａと４５ｃは共に第１のレーザ波長
Ｌ１から２０nm短波長側で９０％、Ｌ１で１％の透過率
を有する。従って、吸収フィルタセット４５の蛍光透過
波長帯が、レーザ波長Ｌ１，Ｌ２の両方の波長側に広が
り、第１の蛍光を極めて高効率且つ高Ｓ／Ｎで検出する
ことができる。４６Ｔは吸収フィルタセット４６全体の
分光透過率曲線を示している。干渉膜面４６ａと４６ｂ
は共に第２のレーザ波長Ｌ２から２０nm長波長側で９０
％、Ｌ２で１％の透過率を有している。従って、吸収フ
ィルタセット４６の蛍光透過波長帯がレーザ波長Ｌ２側
に広がり、第２の蛍光を極めて高効率且つ高Ｓ／Ｎで検
出することが出来る。
【００３４】実施例５ 図１５は本発明の第５実施例を示す要部構成図で、他の
構成部分は図６に示した第１実施例と同一であるため省
略されている。図１６はフィルタセットホルダー部の構
造を示す断面図である。図中、４８は励起フィルタセッ
ト、４９は吸収フィルタセット、５０はダイクロイック
ミラーである。励起フィルタセット４８は、３つのフィ
ルタセットホルダー部５２を有するフィルタセット回転
部５３とモータ５１から構成され、フィルタセット回転
部５３は、照明光軸３３上に３つのフィルタセットホル
ダー部５２の各々の励起フィルタの中心が通るように、
モータ５１によって照明光軸３３に対し僅かに角度をも
った軸線の周りに回転するように配置されている。３つ
のフィルタセットホルダー部５２には、分光透過率の異
なる３つの励起フィルタセット５４，５５，５６が挿入
されている。励起フィルタセット５４，５５，５６は、
夫々、フィルタ枠５７に取付けられたガラス基盤５８上
に形成された干渉膜面５４ａ，５４ｂ，５４ｃ；５５
ａ，５５ｂ，５５ｃ；５６ａ，５６ｂ，５６ｃから構成
されている。
【００３５】本実施例においては、蛍光検出はフィルタ
セット回転部５３を高速回転させることによって行われ
る。この場合、照明光は３種類の励起フィルタセット５
４，５５，５６により時間的に異なる３種類の励起光波
長に変換されて標本６に照射され、この３種類の励起光
波長で励起された蛍光は時間的に別々のタイミングでダ
イクロイックミラー５０を透過し、吸収フィルタセット
４９によって照明光が排除された後、検出される。この
場合、励起フィルタセット５４，５５，５６の切換えが
検出器の時間分解能を越える程度に高速であれば、３種
類の励起フィルタセット５４，５５，５６で励起された
蛍光は同時に検出することができる。
【００３６】図１７は本実施例の各フィルタの分光透過
率曲線を示している。干渉膜面５４ａ，５４ｂ，５４ｃ
は励起フィルタセット５４の励起光透過波長帯５４Ｔ
を、干渉膜面５５ａ，５５ｂ，５５ｃは励起フィルタセ
ット５５の励起光透過波長帯５５Ｔを、干渉膜面５６
ａ，５６ｂ，５６ｃは励起フィルタセット５６の励起光
透過波長帯５６Ｔを夫々形成している。吸収フィルタセ
ット４９は、励起光透過波長帯５４Ｔ，５５Ｔ，５６Ｔ
の各光で夫々励起された蛍光を透過させる３つの蛍光透
過波長帯４９ａ，４９ｂ，４９ｃを有している。干渉膜
面５４ａ，５４ｂは共に励起光透過波長帯５４Ｔと蛍光
透過波長帯４９ａとのクロスオーバー波長Ｘａで５％、
Ｘａから短波長側で８５％の透過率を、干渉膜面５５
ａ，５５ｂは共に励起光透過波長帯５５Ｔと蛍光透過波
長帯４９ｂとのクロスオーバー波長Ｘｂで６％、Ｘｂか
ら短波長側で８５％の透過率を、また干渉膜面５６ａ，
５６ｂは共に励起光透過波長帯５６Ｔと蛍光透過波長帯
４９ｃとのクロスオーバー波長Ｘｃで３％、Ｘｃから短
波長側で９０％の透過率を夫々有する。従って、励起フ
ィルタセット５４，５５，５６の各々のクロスオーバー
波長Ｘａ，Ｘｂ，Ｘｃからの透過率の立ち上がり特性を
急峻にすることで、照明光を十分排除しつつ、蛍光透過
波長帯４９ａ，４９ｂ，４９ｃを励起波長側に広げ、３
種類の蛍光を非常に高効率且つ高Ｓ／Ｎで検出すること
ができる。
【００３７】以上説明したように、本発明の蛍光検出装
置は、特許請求の範囲に記載した特徴のほかに、下記の
特徴を有している。
【００３８】（１）光源と、該光源が発する光を標本に
照射する照明光学系と、該照明光学系に配置され特定の
波長域の光を透過させる励起フィルタセットと、前記標
本から発生した蛍光を検出する検出光学系と、該検出光
学系に配置され前記蛍光を透過させる吸収フィルタセッ
トを備えた蛍光検出装置において、前記励起フィルタセ
ットは複数の励起光透過波長帯多τi （ｉ＝１，２，・・
・・ｎ）を有し、前記吸収フィルタセットは前記励起光透
過波長帯τi に対応した複数の蛍光透過波長帯Ｅi （ｉ
＝１，２，・・・・ｎ）を有し、前記励起フィルタセットの
任意の励起光透過波長帯域τi ＋１の短波長側における
分光透過曲線と、該任意の励起光透過波長帯域に対応す
る前記蛍光透過波長帯Ｅi の長波長側における分光透過
率曲線が交わる波長をクロスオーバー波長λi ′とする
時、前記励起フィルタセットは、該クロスオーバー波長
λi ′よりも２０nm長い波長において透過率が２５％以
上の第１の干渉膜面を少なくとも２面有するか、或いは
前記吸収フィルタセットは該クロスオーバー波長λi ′
よりも２０nm短い波長において透過率が５０％以上の第
２の干渉膜面を少なくとも２面有するか、或いは前記励
起フィルタセットが前記第１の干渉膜面を少なくとも２
面有すると共に、前記吸収フィルタセットが前記第２の
干渉膜面を少なくとも２面ずつ有するかしていて、前記
第１の干渉膜面と前記第２の干渉膜面は、０．０５％＜
Ｔ′i ＜１０％なる条件を満足するようにしたことを特
徴とする蛍光検出装置。但し、Ｔ′i は前記クロスオー
バー波長における前記干渉膜面の透過率である。
【００３９】（２）単色若しくは準単色の光源と、該光
源が発する光を標本に照射する照明光学系と、前記標本
から発生した蛍光を検出する検出光学系と、該検出光学
系に配置され前記蛍光を透過させる吸収フィルタセット
を備えた蛍光検出装置において、前記光源は複数の中心
波長λ１ｊ（ｊ＝１，２，・・・・ｎ）の光を発生させ、前
記吸収フィルタセットは前記光源の中心波長λ１ｊに対
応した複数の蛍光透過波長帯Ｅｊ（ｊ＝１，２，・・・・
ｎ）を有し、前記吸収フィルタセットの蛍光透過波長帯
Ｅｊの短波長側は、前記光源の中心波長λ１ｊよりも２
０nm長い波長において透過率が５０％以上の干渉膜面を
少なくとも２面有し、Ｔ１ｊを前記光源の複数の中心波
長における前記干渉膜面の透過率とした時０．０５％＜
Ｔ１ｊ＜１０％なる条件を満足するようにしたことを特
徴とする蛍光検出装置。これにより、光源の波長をクロ
スオーバー波長と考えて良いので、従来の吸収フィルタ
セットよりも蛍光透過波長帯を光源の長波長側に広げら
れ、Ｓ／Ｎを大幅に向上させることが出来る。
【００４０】（３）単色若しくは準単色の光源と、該光
源が発する光を標本に照射する照明光学系と、前記標本
から発生した蛍光を検出する検出光学系と、該検出光学
系に配置され前記蛍光を透過させる吸収フィルタセット
を備えた蛍光検出装置において、前記光源は複数の中心
波長λ１ｊ（ｊ＝１，２，・・・・ｎ）の光を発生させ、前
記吸収フィルタセットは前記光源の中心波長λ１ｊに対
応した複数の蛍光透過波長帯Ｅｊ（ｊ＝１，２，・・・・
ｎ）を有し、前記吸収フィルタセットの蛍光透過波長帯
Ｅｊの長波長側は、前記光源の中心波長λ１ｊ＋１より
も２０nm短い波長において透過率が５０％以上の干渉膜
面を少なくとも２面有し、Ｔ１′ｊを前記光源の複数の
中心波長における前記干渉膜面の透過率とした時０．０
５％＜Ｔ１′ｊ＜１０％なる条件を満足するようにした
ことを特徴とする蛍光検出装置。これにより、光源の波
長をクロスオーバー波長と考えて良いので、従来の吸収
フィルタセットよりも蛍光透過波長帯を光源の長波長側
に広げられ、Ｓ／Ｎを大幅に向上させることが出来る。
【００４１】（４）前記干渉膜面の少なくとも一つは、
光軸に垂直な面に対して傾けて配置されていることを特
徴とする請求項１乃至３の何れか又は上記（１）乃至
（３）の何れかに記載の蛍光検出装置。
【００４２】（５）前記干渉膜面の光軸に対する傾きは
調整可能であることを特徴とする上記（４）に記載の蛍
光検出装置。
【００４３】（６）前記干渉膜面は、非平行に配置され
ていることを特徴とする請求項１乃至３の何れか又は上
記（１）乃至（３）の何れかに記載の蛍光検出装置。
【００４４】（７）前記干渉膜面はＴ″を前記クロスオ
ーバー波長における前記干渉膜面の透過率又は前記光源
の複数の中心波長における前記干渉膜面の透過率とした
時０．１％＜Ｔ″＜５％なる条件を満足するようにした
ことを特徴とする請求項１乃至３の何れか又は上記
（１）乃至（６）の何れかに記載の蛍光検出装置。
【００４５】
【発明の効果】上記したように本発明によれば、バック
グランドノイズとなる励起光の漏れを十分に抑えつつ、
励起フィルタセットの励起光透過波長帯と吸収フィルタ
セットの蛍光透過波長帯を極限まで近づけることで、極
めて高Ｓ／Ｎの明るい蛍光像を得ることができ、而も高
価で高精度なフィルタを必要としない蛍光検出装置を提
供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明による励起フィルタセットと吸収フィル
タセットの分光透過率を従来のものと比較して示した特
性線図である。
【図２】図１に示した特性線図を底が１０のlog スケー
ルで表わした特性線図である。
【図３】複数の励起光波長帯による複数蛍光波長帯の蛍
光検出を行う場合の励起フィルタセットと吸収フィルタ
セットの分光透過率特性を示す図である。
【図４】ｉ番目の励起光透過波長帯とｉ番目の蛍光透過
波長帯の分光透過率曲線を示す図である。
【図５】ｉ＋１番目の励起光透過波長帯とｉ番目の蛍光
透過波長帯の分光透過率曲線を示す図である。
【図６】本発明に係る蛍光検出装置の第１実施例の光学
構成図である。
【図７】第１実施例における励起フィルタセットと吸収
フィルタセットの分光透過率曲線を示す図である。
【図８】本発明に係る蛍光検出装置の第２実施例の要部
構成図である。
【図９】第２実施例における励起フィルタセット、吸収
フィルタセット及びダイクロイックミラーの分光透過率
曲線を示す図である。
【図１０】本発明に係る蛍光検出装置の第３実施例の要
部構成図である。
【図１１】第３実施例における励起フィルタセットと吸
収フィルタセットの分光透過率曲線を示す図である。
【図１２】本発明に係る蛍光検出装置の第４実施例の光
学構成図である。
【図１３】第４実施例における第１の吸収フィルタセッ
トとダイクロイックミラーの分光透過率曲線を示す図で
ある。
【図１４】第４実施例における第２の吸収フィルタセッ
トの分光透過率曲線を示す図である。
【図１５】本発明に係る蛍光検出装置の第５実施例の要
部構成図である。
【図１６】第５実施例における励起フィルタセットの構
成図である。
【図１７】第５実施例における励起フィルタセットと吸
収フィルタセットの分光透過率曲線を示す図である。
【図１８】従来の蛍光検出装置の一例の光学構成図であ
る。
【図１９】図１８に示した蛍光検出装置に用いられる励
起フィルタセットと吸収フィルタセットの分光透過率曲
線の一例を示す図である。
【図２０】図１８に示した蛍光検出装置に用いられる励
起フィルタセットと吸収フィルタセットの分光透過率曲
線の他の例を示す図である。
【図２１】干渉膜面への光線入射角に対する分光透過率
の変化を示す図である。
【符号の説明】
１ 光源 ２ コレクターレンズ ３ 開口絞り ４ 視野絞り ５，１４，１７，２４，５４，５５，５６ 励起フィ
ルタセット ６ 標本 ７，１５，１９，２６，３６，３９，４４，５０ ダ
イクロイックミラー ８，４１ 対物レンズ ９ ステージ １０，１６，１８，２５，４５，４６，４９ 吸収フ
ィルタセット １１ ビームスプリッタ １２ 撮影レンズ １３ 観察光学系 １４ａ，１４ｂ，１４ｃ，１６ａ，１６ｂ，１８ａ，１
８ｂ，２４ｂ，２５ｂ，４５ａ，４５ｂ，４５ｃ，４６
ａ，４６ｂ，５４ａ，５４ｂ，５４ｃ，５５ａ，５５
ｂ，５５ｃ，５６ａ，５６ｂ，５６ｃ，Ａ，Ａ′，Ｂ，
Ｂ′，Ａ１〜Ａｉ〜Ａｎ，Ａ′１〜Ａ′ｉ〜Ａ′ｎ，Ｂ
１〜Ｂｉ〜Ｂｎ，Ｃ１〜Ｃｉ〜Ｃｎ，Ｃ′ i 〜Ｃ′１〜
Ｃ′ｎ，Ｄ１〜Ｄｉ〜Ｄｎ，Ｄ′１〜Ｄ′i 〜Ｄ′ｎ
干渉膜面 ２０，５８ ガラス基盤 ２１，２７ ガラス基盤押さえ枠 ２２ フィルタ回転部材 ２３，３３ 光軸 ２５ａ フィルタ群 ２８ ネジ ２９，３２ バネ ３０，３１ フィルタ固定枠 ３４ レーザ光源 ３７ ビームエクスパンダー ３８ スペーシャルフィルタ ４０ ＸＹスキャナ ４２ 結像レンズ ４３ ピンホール ４７ 光検出器 ４８ 励起フィルタセット部 ５１ モータ ５２ フィルタセットホルダー部 ５３ フィルタセット回転部 ５８ フィルタ枠 Ａ″，ａ，１４Ｔ，１７Ｔ，２４Ｔ，５４Ｔ，５５Ｔ，
５６Ｔ 励起フィルタセット全体の分光透過率 Ｂ″，ｂ，１６Ｔ，１８Ｔ，２５Ｔ，４５Ｔ，４６Ｔ
吸収フィルタセット全体の分光透過率 ａｂ１，Ａｂ２，Ａｂ３，τ１〜τi 〜τｎ，２４ｃ，
２４ｄ，２４ｅ励起波長透過帯 Ｅ１〜Ｅi 〜Ｅｎ，２５ｃ，２５ｄ，２５ｅ 蛍光透
過波長帯 Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３ 蛍光発光帯 Ｘ，Ｘ１〜Ｘ４，λ１〜λi 〜λｎ，λ′１〜λ′i 〜
λ′ｎ，Ｘｃｄ，Ｘｄｅ，Ｘａ，Ｘｂ，Ｘｃ クロス
オーバー波長 δ 波長幅 Ｌ１，Ｌ２ レーザ波長

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 光源と、該光源が発する光を標本に照射
    する照明光学系と、該照明光学系に配置され特定の波長
    域の光を透過させる励起フィルタセットと、前記標本か
    ら発生した蛍光を検出する検出光学系と、該検出光学系
    に配置され前記蛍光を透過させる吸収フィルタセットを
    備えた蛍光検出装置において、前記励起フィルタセット
    の長波長側における分光透過率曲線と前記吸収フィルタ
    セットの短波長側における分光透過率曲線とが交わる点
    の波長をクロスオーバ波長とする時、前記励起フィルタ
    セットは前記クロスオーバ波長よりも２０nm短い波長に
    おいて透過率が２５％以上の第１の干渉膜面を少なくと
    も２面有するか、或いは前記吸収フィルタセットは前記
    クロスオーバ波長よりも２０nm長い波長において透過率
    が５０％以上の第２の干渉膜を少なくとも２面有する
    か、或いは前記励起フィルタセットが前記第１の干渉膜
    面を少なくとも２面有すると共に、前記吸収フィルタセ
    ットが前記第２の干渉膜面を少なくとも２面ずつ有する
    かしていて、前記第１の干渉膜面と前記第２の干渉膜面
    は、０．０５％＜Ｔ＜１０％なる条件を満足するように
    したことを特徴とする蛍光検出装置。但し、Ｔは前記ク
    ロスオーバー波長における前記干渉膜面の透過率であ
    る。
  2. 【請求項２】 単色若しくは準単色の光源と、該光源が
    発する光を標本に照射する照明光学系と、前記標本から
    発生した蛍光を検出する検出光学系と、該検出光学系に
    配置された前記蛍光を透過させる吸収フィルタセットを
    備えた蛍光検出装置において、前記吸収フィルタセット
    の蛍光透過波長帯の短波長側は前記光源の中心波長より
    も２０nm長い波長において透過率が５０％以上の干渉膜
    面を少なくとも２面有し、Ｔ1 を前記光源の中心波長で
    の前記干渉膜面の透過率とした時０．０５％＜Ｔ1 ＜１
    ０％なる条件を満足するようにしたことを特徴とする蛍
    光検出装置。
  3. 【請求項３】 光源と、該光源が発する光を標本に照射
    する照明光学系と、該照明光学系に配置され特定の波長
    域の光を透過させる励起フィルタセットと、前記標本か
    ら発生した蛍光を検出する検出光学系と、該検出光学系
    に配置され前記蛍光を透過させる吸収フィルタセットを
    備えた蛍光検出装置において、前記励起フィルタセット
    は複数の励起光透過波長帯τi （ｉ＝１，２，・・・・，
    ｎ）を有し、前記吸収フィルタセットは前記励起光透過
    波長帯τi に対応した複数の蛍光波長帯Ｅi （ｉ＝１，
    ２，・・・・，ｎ）を有し、前記励起フィルタセットの任意
    の前記励起光透過波長帯域τi の長波長側における分光
    透過率曲線と該任意の励起光透過波長帯域に対応する前
    記蛍光透過波長帯Ｅi の短波長側における分光透過率曲
    線とが変わる点の波長をクロスオーバー波長λi とする
    時、前記励起フィルタセットは、前記クロスオーバー波
    長λi よりも２０nm短い波長において透過率が２５％以
    上の第１の干渉膜面を少なくとも２面有するか、或いは
    前記吸収フィルタセットは前記クロスオーバー波長λi
    よりも２０nm長い波長において透過率が５０％以上の第
    ２の干渉膜面を少なくとも２面有するか、或いは前記励
    起フィルタセットが前記第１の干渉膜面を少なくとも２
    面有すると共に、前記吸収フィルタセットが前記第２の
    干渉膜面を少なくとも２面有するかしていて、前記第１
    の干渉膜面と前記第２の干渉膜面は０．０５％＜Ｔi ＜
    １０％なる条件を満足するようにしたことを特徴とする
    蛍光検出装置。但し、Ｔi は前記クロスオーバー波長λ
    i における前記干渉膜面の透過率である。
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