JP4836948B2 - 1,4−ブタンジアミンの生化学合成 - Google Patents
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Description
(i)アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speA(E.C.4.1.1.19に属する)およびアグマチナーゼをコードする遺伝子speB(E.C.3.5.3.11に属する;アグマチンウレアヒドロラーゼをコードする遺伝子とも称される);または
(ii)アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speA(E.C.4.1.1.19に属する)、およびアグマチンイミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguA(E.C.3.5.3.12に属する;アグマチンデイミナーゼをコードする遺伝子とも称される)、およびN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguB(E.C.3.5.1.53に属する)、および場合によりまた、アグマチナーゼをコードする遺伝子speB(E.C.3.5.3.11に属する)。
一般的手順
すべてのDNA操作については、標準的な手順を適用した(サンブルック,J(Sambrook,J.)ら(1989年)、Molecular cloning:a laboratory manual、第2版、Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor、ニューヨーク)。DNAは、他に示さない場合、大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら(2000年)、J Bacteriol.182,4443−4452)、枯草菌(Bacillus subtilis)ATCC 10783、またはコリネバクテリウム・グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ATCC 13032の染色体DNAから増幅した。PCR増幅は、製造のプロトコルに従い、プルーフリーディング酵素SAWADY Pwo−DNA−ポリメラーゼ(Peqlab Biotechnologie GmbH,Erlangen、独国)またはPlatinum Pfx DNAポリメラーゼ(Invitrogen,Karlsruhe、独国)を使用して実施する一方、構築された株の確認は、TaqポリメラーゼREADYMIX(Sigma,Taufkirchen、独国)を利用するコロニーPCRによって行った。その後のクローニングならびにさらなる操作のための制限部位は、MWG−Biotech(Ebersberg、独国)から購入したオリゴヌクレオチドにより導入した。DNAフラグメントは、製造のプロトコルに従い、MinElute Gel Extraction Kit(Qiagen,Hilden、独国)で精製した。プラスミドDNAの調製は、QIAprepスピンMiniprep Kit(Qiagen,Hilden、独国)の利用によって達成した。構築されたプラスミドの確認は、制限解析および以後の配列決定(Agowa,Berlin、独国)によって行った。
(i)プラスミドpDAB2(pJF119EH−speF)の構築
大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)の(誘導性、生分解性の)オルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speFを、発現ベクターpJF119EH(フェルステ,J.P.(Fuerste,J.P.)ら(1986年)、Gene48,119−131)にクローニングした。このベクターは、イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド(IPTG)誘導性tac促進剤およびlacリプレッサー系(laclQ)下で、クローニングされた遺伝子の転写制御に基づく高レベルタンパク質産生を可能にする。発現プラスミドpDAB2(pJF119EH−speF)の構築のために、コーディング遺伝子を、本来のRBS(リボソーム結合部位)、開始および終止コドンと共にクローニングした。
5’−GAC CTG CTG GTA CCT AAA ATA AAG AGA TGA AA−3’ [配列番号1]
(変異は太字、KpnI制限部位は斜字体)
および
5’−TCG ATC TAG ACT GAC TCA TAA TTT TTC CCC−3’ [配列番号2]
(変異は太字、XbaI制限部位は斜字体)。
大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)の(構成性、生合成性の)オルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speCを発現ベクターpJF119EH(フェルステ,J.P.(Fuerste,J.P.)ら(1986年)、(i)を参照のこと)にクローニングし、イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド(IPTG)誘導性tacプロモーターおよびlacリプレッサー系(laclQ)下の転写制御に基づく強力な遺伝子発現を可能にした。従って、コーディング遺伝子を、本来の開始および終止コドンと共にクローニングした。インシリコ研究を利用してspeCに対する保存されたリボソーム結合部位(RBS)を決定することができなかったため、変異誘発により、最適化されたRBSをspeC開始コドンの7bp上流に導入した。
5’−GAG CTC TAG ACC AGT TTG AGG AAT ATC T−3’ [配列番号3]
(変異は太字、XbaI制限部位は斜字体)
および
5’−TTT TGC ATG CTT ACT TCA ACA CAT AAC CGT AC−3’ [配列番号4]
(変異は太字、SphI制限部位は斜字体)。
大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)のN−アセチルグルタミン酸シンターゼをコードする遺伝子argAを、発現ベクターpJF119EH(フェルステ,J.P.(Fuerste,J.P.)ら(1986年)、(i)を参照のこと)にクローニングした。遺伝子を、本来のRBS(リボソーム結合部位)および終止コドンと共にクローニングした。しかし、翻訳開始をGTGからATGに変更した。
5’−ATA AGA ATT CAA AGA GGT GTG CCA TGG TAA AG−3’ [配列番号5]
(変異は太字、EcoRI制限部位は斜字体)
および
5’−TTT TGG TAC CTT ACC CTA AAT CCG CCA T−3’ [配列番号6]
(変異は太字、KpnI制限部位は斜字体)。
オルニチンデカルボキシラーゼSpeFおよびN−アセチルグルタミン酸シンターゼArgAの同時産生を可能にするために、大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)のspeFをコードする遺伝子を、argA発現ベクターpDAB1(iiiを参照のこと))にクローニングした。
オルニチンデカルボキシラーゼSpeCおよびN−アセチルグルタミン酸シンターゼArgAの同時産生を可能にするために、大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)のspeCをコードする遺伝子を、argA発現ベクターpDAB1((iii)1を参照のこと))にクローニングした。
大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)の、アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speAならびにアグマチナーゼをコードするspeBを、発現ベクターpJF119EH(フェルステ,J.P.(Fuerste,J.P.)ら(1986年)、(i)を参照のこと)にクローニングした。このように、遺伝子の本来のオペロン構造ならびにRBS、開始および終止コドンを維持した。
5’−ACA CTT TCT AGA ATA ATT TGA GGT TCG CTA TG−3’ [配列番号7]
(変異は太字、XbaI制限部位は斜字体)
および
5’−CAT GGC ATG CGG TGC TTA CTC G−3’ [配列番号8]
(変異は太字、SphI制限部位は斜字体)
オルニチンデカルボキシラーゼSpeF、アルギニンデカルボキシラーゼSpeAおよびアグマチナーゼSpeBの同時産生を可能にするために、大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)のspeAB遺伝子を、speF発現ベクターpDAB2((i)を参照のこと))にクローニングした。
オルニチンデカルボキシラーゼSpeF、アルギニンデカルボキシラーゼSpeA、アグマチナーゼSpeBおよびN−アセチルグルタミン酸シンターゼArgAの同時産生を可能にするために、大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)のspeAB遺伝子を、argA−speF発現ベクターpDAB5((iv)を参照のこと)にクローニングした。
オルニチンデカルボキシラーゼSpeFおよび枯草菌(Bacillus subtilis)ATCC 10783由来のN2−アセチル−L−オルニチン:L−グルタミン酸N−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子ArgJの同時産生を可能にするために、本argA遺伝子を置き換えることによって、枯草菌(B.subtilis)のargJをコードする遺伝子をspeF発現ベクターpDAB5((iv)を参照のこと)にクローニングした。遺伝子を、本来のRBSおよび終止コドンと共にクローニングした。
5’−TCA CGC GAA TTC ATC CAT AGA ACG GGA GAG−3’ [配列番号9]
(変異は太字、EcoRI制限部位は斜字体)
および
5’−CTT CAT TTC GGT ACC CTT TAT TAC GTG CGA TAG CTC−3’ [配列番号10]
(変異は太字、KpnI制限部位は斜字体)。オリゴヌクレオチドを、株枯草菌(B.subtilis)亜種サブチリス(subtilis)str.168のゲノムに存在するargJの配列に従って構築した。
オルニチンデカルボキシラーゼSpeFおよびコリネバクテリウム・グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)由来のN2−アセチル−L−オルニチン:L−グルタミン酸N−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子ArgJの同時産生を可能にするために、本argA遺伝子を置き換えることによって、C.グルタミカム(C.glutamicum)ATCC 13032のargJをコードする遺伝子をspeF発現ベクターpDAB5((iv)を参照のこと)にクローニングした。遺伝子を、本来のRBSおよび終止コドンと共にクローニングした。
5’−ACA CAT CGA ATT CAG TAG GAG TTC CAC ATG G−3’ [配列番号11]
(変異は太字、EcoRI制限部位は斜字体)
および
5’−AGT GCT GGT ACC TTT TAA GAG CTG TAC GC 3’ [配列番号12]
(変異は太字、KpnI制限部位は斜字体)。
大腸菌(E.coli)LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)の(構成性、生合成性の)オルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speCを発現ベクターpJF119EH(フェルステ,J.P.(Fuerste,J.P.)ら(1986年)、Gene48,119−131)にクローニングし、イソプロピル−β−D−チオガラクトピラノシド(IPTG)誘導性tacプロモーターおよびlacリプレッサー系(laclQ)下の転写制御に基づく強力な遺伝子発現を可能にした。従って、本来のRBS、開始および終止コドンを伴うコーディング遺伝子speCをクローニングした。
5’−GAG CTC TAG ACC AGT TTG ACC CAT ATC T−3’ [配列番号13]
(変異は太字、XbaI制限部位は斜字体)
および
5’−TTT TGC ATG CTT ACT TCA ACA CAT AAC CGT AC−3’ [配列番号14]
(変異は太字、SphI制限部位は斜字体)。
IPTGによって誘導される遺伝子発現によるオルニチンデカルボキシラーゼspeCの唯一の過剰発現を介する1,4−ブタンジアミンの産生(フラスコ振盪法)
DAB産生に対するオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speCの過剰発現の影響を、プラスミドpDAB3((ix)を参照のこと)を担持する大腸菌(E.coli)宿主株LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)内において調べた。
実施例1.ODCならびにArgA過剰産生を利用する1,4−ブタンジアミンの産生(フラスコ振盪法)
DAB産生に対するグルタミン酸から出発するオルニチン生合成における第1の工程を触媒するN−アセチルグルタミン酸シンターゼArgAおよびオルニチンデカルボキシラーゼSpeFまたはSpeCの同時産生の影響について、プラスミドpDAB5((iv)を参照のこと)またはpDAB6((v)を参照のこと)を担持する大腸菌(E.coli)宿主株LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)内において調べた。
DAB産生に対するL−グルタミン酸およびN−アセチルオルニチンから、N−アセチルグルタミン酸およびオルニチンの形成を触媒するC.グルタミカム(C.glutamicum)または枯草菌(B.subtilis)のいずれか一方由来のN2−アセチル−L−オルニチン:L−グルタミン酸N−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子ArgJならびにオルニチンデカルボキシラーゼSpeFまたはSpeCの同時産生の影響を、プラスミドpDAB37((ix)を参照のこと)またはpDAB38((x)を参照のこと)を担持する大腸菌(E.coli)宿主株LJ110(ゼッペンフィールド(Zeppenfeld)ら、一般的手順を参照のこと)内において調べた。
オルニチンならびにアルギニンから出発するDAB形成のさらなる改善を実証するために、オルニチンデカルボキシラーゼSpeF、アルギニンデカルボキシラーゼSpeAおよびアグマチナーゼSpeBの組み合わされた過剰産生の影響について調べた。さらに、適切な前駆体供給を確実にするために、これらの試験を、さらなる実験において、グルタミン酸から出発するオルニチン生合成の最初の段階を触媒するN−アセチルグルタミン酸シンターゼArgAの過剰産生と組み合わせた。
Claims (19)
- 生来のレベルのオルニチンデカルボキシラーゼ活性と比較して増加したレベルのオルニチンデカルボキシラーゼ活性(増加したODC活性)を有する微生物における1,4−ブタンジアミンの生化学合成のための方法であって、
微生物においても、微生物におけるN−アセチルグルタミン酸形成の生来のレベルの活性と比較して、増加した活性のN−アセチルグルタミン酸形成が存在し、そして微生物において産生される1,4−ブタンジアミンは、発酵ブロスに分泌され、発酵ブロスから回収され、
前記増加したODC活性はオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speFまたはspeC(それぞれE.C.4.1.1.17に属する)の過剰発現によって達成され、前記N−アセチルグルタミン酸形成の増加した活性は、N−アセチルグルタミン酸シンターゼをコードする遺伝子argA(E.C.2.3.1.1に属する)またはN2−アセチル−L−オルニチン:L−グルタミン酸N−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子argJ(E.C.2.3.1.35に属する)のいずれかの過剰発現によって達成されることを特徴とする、方法。 - 増加したODC活性は、エシェリキア(Escherichia)、赤痢菌(Shigella)、サルモネラ(Salmonella)、エルシニア(Yersinia)、およびシェワネラ(Shewanella)からなる群から選択される属のうちの1つから由来するオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speFまたはspeC(それぞれE.C.4.1.1.17に属する)の過剰発現によって達成される、請求項1に記載の方法。
- オルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子は、大腸菌(Escherichia coli)、B群赤痢菌(Shigella flexneri)、サルモネラ・チフィムチウム(Salmonella typhimutium)、ペスト菌(Yersinia pestis)、およびシェワネラ・オネイデンシス(Shewanella oneidensis)からなる群から選択される種のうちの1つから由来している、請求項2に記載の方法。
- オルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子は、大腸菌(Escherichia coli)、サルモネラ・チフィムチウム(Salmonella typhimutium)、およびシェワネラ・オネイデンシス(Shewanella oneidensis)からなる群から選択される種のうちの1つから由来するspeFである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- N−アセチルグルタミン酸形成の増加した活性は、エシェリキア(Escherichia)、赤痢菌(Shigella)、サルモネラ(Salmonella)、エルシニア(Yersinia)、フォトルハブダス(Photorhabdus)、およびブフネラ(Buchnera)からなる群から選択される属のうちの1つから由来するN−アセチルグルタミン酸シンターゼをコードする遺伝子argAの過剰発現によって達成される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- N−アセチルグルタミン酸形成の増加した活性は、大腸菌(Escherichia coli)、B群赤痢菌(Shigella flexneri)、サルモネラ・エンテリカ(Salmonella enterica)、ペスト菌(Yersinia pestis)、フォトルハブダス・ルミネセンス(Photorhabdus luminescens)、およびブフネラ・アフィディコラ(Buchnera aphidicola)からなる群から選択される種のうちの1つから由来するN−アセチルグルタミン酸シンターゼをコードする遺伝子argAの過剰発現によって達成される、請求項5に記載の方法。
- N−アセチルグルタミン酸形成の増加した活性は、バチルス(Bacillus)、リステリア(Listeria)、オーシャノバチルス(Oceanobacillus)、スタフィロコッカス(Staphylococcus)、ラクトバチルス(Lactobacillus)、コリネバクテリウム(Corynebacterium)、マイコバクテリウム(Mycobacterium)、サーモビフィダ(Thermobifida)、ストレプトマイセス(Streptomyces)、およびビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)からなる群から選択される属のうちの1つから由来するN2−アセチル−L−オルニチン:L−グルタミン酸N−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子argJ(E.C.2.3.1.35に属する)の過剰発現によって達成される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- N−アセチルグルタミン酸形成の増加した活性は、セレウス菌(Bacillus cereus)、リステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)、オーシャノバチルス・イヘエンシス(Oceanobacillus iheyensis)、表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermis)、ラクトバチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ラクティス(Lactobacillus lactis)、コリネバクテリウム・グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)、らい菌(Mycobacterium leprae)、サーモビフィダ・フスカ(Thermobifida fusca)、ストレプトマイセス・コエリコル(Streptomyces coelicor)、およびビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)からなる群から選択される種のうちの1つから由来するN2−アセチル−L−オルニチン:L−グルタミン酸N−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子argJの過剰発現によって達成される、請求項7に記載の方法。
- さらに、
(i)アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speA(E.C.4.1.1.19に属する)およびアグマチナーゼをコードする遺伝子speB(E.C.3.5.3.11に属する、アグマチンウレアヒドロラーゼをコードする遺伝子とも称される)、
(ii)アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speA(E.C.4.1.1.19に属する)、およびアグマチンイミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguA(E.C.3.5.3.12に属する、アグマチンデイミナーゼをコードする遺伝子とも称される)、およびN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguB(E.C.3.5.1.53に属する)、または
(iii)アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speA(E.C.4.1.1.19に属する)、およびアグマチンイミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguA(E.C.3.5.3.12に属する、アグマチンデイミナーゼをコードする遺伝子とも称される)、N−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguB(E.C.3.5.1.53に属する)、およびアグマチナーゼをコードする遺伝子speB(E.C.3.5.3.11に属する)
のいずれかの過剰発現によって、少なくとも2つの他の酵素についても増加した酵素活性が得られる、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - 過剰発現されるアルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speAは、エシェリキア(Escherichia)、赤痢菌(Shigella)、サルモネラ(Salmonella)、エルシニア(Yersinia)、パスツレラ(Pasteurella)、およびナイセリア(Neisseria)からなる群から選択される属のうちの1つから由来するアルギニンデカルボキシラーゼ遺伝子speAである、請求項9に記載の方法。
- 過剰発現されるアルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speAは、大腸菌(Escherichia coli)、B群赤痢菌(Shigella flexneri)、サルモネラ・エンテリカ(Salmonella enterica)、ペスト菌(Yersinia pestis)、パスツレラ菌(Pasteurella multocida)、および髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)からなる群から選択される種のうちの1つから由来するアルギニンデカルボキシラーゼ遺伝子speAである、請求項10に記載の方法。
- 過剰発現されるアグマチナーゼをコードする遺伝子speBは、エシェリキア(Escherichia)、サルモネラ(Salmonella)、プロテウス(Proteus)、フォトルハブダス(Photorhabdus)、ビブリオ(Vibrio)、およびナイセリア(Neisseria)からなる群から選択される属のうちの1つから由来するアグマチナーゼ遺伝子speBである、請求項9に記載の方法。
- 過剰発現されるアグマチナーゼをコードする遺伝子speBは、大腸菌(Escherichia coli)、サルモネラ・エンテリカ(Salmonella enterica)、プロテウス・ミラビリス(Proteus mirabilis)、フォトルハブダス・ルミネセンス(Photorhabdus luminescens)、コレラ菌(Vibrio cholerae)、および髄膜炎菌(Neisseria meningitidis)からなる群から選択される種のうちの1つから由来するアグマチナーゼ遺伝子speBである、請求項12に記載の方法。
- 過剰発現されるアグマチンイミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguAおよび/または過剰発現されるN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguBは、シュードモナス(Pseudomonas)、連鎖球菌(Streptococcus)、ストレプトマイセス(Streptomyces)、アゾトバクター(Azotobacter)、アラビドプシス(Arabidopsis)、ノボスフィンゴビウム(Novosphingobium)、およびバチルス(Bacillus)からなる群から選択される属のうちの1つから由来するアグマチンイミノヒドロラーゼ遺伝子aguAおよび/またはN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼ遺伝子aguBである、請求項9に記載の方法。
- 過剰発現されるアグマチンイミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguAおよび/または過剰発現されるN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼをコードする遺伝子aguBは、シュードモナス・エアルギノサ(Pseudomonas aeruginosa)、ミュータンス菌(Streptococcus mutans)、ストレプトマイセス・アバーミチリス(Streptomyces avermitilis)、アゾトバクター・フィネランディ(Azotobacter vinelandii)、シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)、ノボスフィンゴビウム・アロマチシボラン(Novosphingobium aromaticivorans)、およびセレウス菌(Bacillus cereus)からなる群から選択される種のうちの1つから由来するアグマチンイミノヒドロラーゼ遺伝子aguAおよび/またはN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼ遺伝子aguBである、請求項14に記載の方法。
- 方法は、サッカロミセス(Saccharomyces)sp.、バチルス(Bacillus)sp.、コリネバクテリウム(Corynebacterium)sp.、エシェリキア(Escherichia)sp.およびピキア(Pichia)sp.からなる群から選択される宿主生物体において行われる、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 方法は、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、コリネバクテリウム(Corynebacterium)sp.およびエシェリキア(Escherichia)sp.からなる群から選択される宿主生物体において行われ、オルニチンデカルボキシラーゼおよびN−アセチルグルタミン酸形成の増加したレベルの活性とは別に、少なくともアグマチナーゼならびに/またはアグマチンイミノヒドロラーゼおよびN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼと組み合わされたアルギニンデカルボキシラーゼの活性のレベルも増加する、請求項10〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 生来のレベルのオルニチンデカルボキシラーゼ活性と比較して増加したレベルのオルニチンデカルボキシラーゼ活性(増加したODC活性)、ならびに生来のレベルの活性のN−アセチルグルタミン酸形成と比較して増加した活性のN−アセチルグルタミン酸形成を有する微生物であり、前記増加したODC活性はオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子speFまたはspeC(それぞれE.C.4.1.1.17に属する)の過剰発現によって達成され、前記N−アセチルグルタミン酸形成の増加した活性は、N−アセチルグルタミン酸シンターゼをコードする遺伝子argA(E.C.2.3.1.1に属する)またはN2−アセチル−L−オルニチン:L−グルタミン酸N−アセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子argJ(E.C.2.3.1.35に属する)のいずれかの過剰発現によって達成される、微生物。
- アルギニンデカルボキシラーゼ、アグマチナーゼ、アグマチンイミノヒドロラーゼ、及びN−カルバモイルプトレシンアミノヒドロラーゼからなる群より選択される1つもしくはそれ以上のさらなる酵素活性の増加したレベルの活性をさらに有し、前記増加したレベルの活性は、前記酵素をコードする遺伝子の過剰発現によって達成される請求項18に記載の微生物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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