CN115109805A - 一种微生物制备5-氨基-1-戊醇的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种微生物制备5‑氨基‑1‑戊醇的方法，将同时过表达含赖氨酸脱羧酶、腐胺氨基转移酶、醛脱氢酶编码基因的微生物，通过生物法制备得到5‑氨基‑1‑戊醇。本发明开拓了利用微生物法生产5‑氨基‑1‑戊醇的新路径，反应条件温和、生产规模易放大，原料可再生、可有效减少碳排放，生产过程环保、温和。

Description

一种微生物制备5-氨基-1-戊醇的方法
技术领域
本发明属于生物领域，特别涉及一种微生物制备5-氨基-1-戊醇的方法。
背景技术
5-氨基-1-戊醇具有氨基和羟基官能团，可以和二元羧酸形成酯键和酰胺键，是制备高分子材料聚酯酰胺(PEAS)的重要单体。聚酯酰胺集合了酯键的可生物降解性和酰胺基团间氢键带来的优异的热稳定性和机械性能，可以应用在工程塑料、纺织材料和膜材料领域。此外，5-氨基-1-戊醇也是合成生物碱(manzamine)的起始原料，生物碱manzamine具备多种生物活性，被以为是最迷人的海洋天然产物之一。
目前为止，仅有很少的公开资料报道了5-氨基-1-戊醇的化学合成。5-氨基-1-戊醇的合成可以直接胺化醇类，该方法需要金属催化剂，反应温度在150～250℃，过程中有大量的副产物生成。还有的合成方法采用胺化酮或醛，该工艺反应温度可以控制在120℃以下。化学合成5-氨基-1-戊醇往往需要氯化氢、氢气、氨等易燃、易爆、易腐蚀化学品，生产条件苛刻，对环境不友好。
近几年，随着合成生物学的进展及其在代谢工程中的应用，越来越多的化学品可以用生物法来合成，如戊二胺、氨基己酸、丁二胺都可以用改造的微生物来合成。用微生物生产化学品或者材料具有原料可再生、反应过程常温、常压等优点，环境友好，利于碳减排。
目前国内外尚未有利用微生物合成5-氨基-1-戊醇的公开报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种微生物制备5-氨基-1-戊醇的方法，填补现有技术利用生物法进行5-氨基-1-戊醇合成的空缺。
本发明的一种微生物制备5-氨基-1-戊醇的方法，包括：将同时过表达含赖氨酸脱羧酶、腐胺氨基转移酶、醛脱氢酶编码基因的微生物，通过生物法制备得到5-氨基-1-戊醇。
所述微生物中还含过表达胺转运蛋白PotE编码基因。
进一步地，对微生物菌株进行代谢工程改造，在宿主中过表达含赖氨酸脱羧酶、腐胺氨基转移酶、醛脱氢酶。
可以对上述酶通过理性或者随机改造，从而使得5-氨基-1-戊醇的产率更高。
所述赖氨酸脱羧酶基因、腐胺氨基转移酶基因、醛脱氢酶基因、胺转运蛋白基因可以借助公开基因数据库(如KEGG、GenBank)，从任何种属的微生物获得，来源微生物包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、棒状杆菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、链霉菌属、弯曲杆菌属、肠杆菌属、沙雷氏菌属、埃希氏菌属、放线菌属、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体中的一种或几种。
进一步所述赖氨酸脱羧酶编码基因包括但不限于：如大肠杆菌(Escherichiacoli)来源的cadA、ldcC、来源于Serratia marcescens的赖氨酸脱羧酶(CadA)、来源于Raoultella terrigena的赖氨酸脱羧酶(CadA)、来源于Klebsiellavariicola的赖氨酸脱羧酶(CadA)、来源于Shigelladysenteriae的赖氨酸脱羧酶(LdcC)，来源于Citrobacteryoungae的赖氨酸脱羧酶(LdcC)；腐胺氨基转移酶编码基因包括但不限于：如大肠杆菌来源的patA；醛脱氢酶编码基因包括但不限于：如大肠杆菌来源的yqhD、来源于Shigellaflexneri的醛脱氢酶(YqhD)，来源于Yersinia aleksiciae醛脱氢酶(YqhD)；胺转运蛋白胺转运蛋白编码基因包括但不限于：如大肠杆菌来源的胺转运蛋白编码基因potE、来源于Shigellaflexneri的胺转运蛋白(PotE)，来源于Rahnellaaquatilis的胺转运蛋白(PotE)。
进一步，如所述赖氨酸脱羧酶编码基因如大肠杆菌(Escherichia coli)来源的cadA(SEQ ID NO:19)，ldcC(SEQ ID NO:20),大肠杆菌来源的腐胺氨基转移酶编码基因patA(SEQ ID NO:21)，大肠杆菌来源的醛脱氢酶yqhD(SEQ ID NO:22)，大肠杆菌来源的胺转运蛋白编码基因potE(SEQ ID NO:23)。
除了大肠杆菌外，上述酶基因可以来自于其它微生物，但不限于此，如来源于Raoultella terrigena的赖氨酸脱羧酶(CadA)编码基因(SEQ ID NO:24)，来源于Klebsiella variicola的赖氨酸脱羧酶(CadA)编码基因(SEQ ID NO:25)。来源于Shigellaflexneri的醛脱氢酶(YqhD)编码基因(SEQ ID NO:26)，来源于Yersiniaaleksiciae醛脱氢酶(YqhD)编码基因(SEQ ID NO:27)。来源于Shigellaflexneri的胺转运蛋白(PotE)编码基因(SEQ ID NO:28)，来源于Rahnellaaquatilis的胺转运蛋白(PotE)编码基因(SEQ ID NO:29)。
所述赖氨酸脱羧酶编码基因为SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.24-25中的一种或几种；所述腐胺氨基转移酶编码基因为SEQ ID NO.21；醛脱氢酶编码基因为SEQID NO.22、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27中的一种或几种。
所述胺转运蛋白PotE编码基因为SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29中的一种或几种。
优选地，基因来源于大肠杆菌。
本发明对于上述编码基因的来源无限定，可以为宿主细胞的内源基因，可以从外源微生物中克隆得到，也可以根据已知基因序列合成目的基因。
本发明所述宿主可以为未经基因工程手段改造的，但是天然含有上述酶编码基因的微生物，也可以是未经基因工程手段改造的，未含有上述酶编码基因的微生物。这些微生物的共同点是含有从葡萄糖到赖氨酸的天然合成途径，在此基础上，进一步通过过表达上述酶编码基因，实现5-氨基-1-戊醇的从头合成。也可以是不含有葡萄糖到赖氨酸的天然合成途径，在此基础上，进一步通过过表达上述酶编码基因，并在体外添加赖氨酸的基础上实现5-氨基-1-戊醇的合成。
所述微生物由下列方法制备：
(1)构建含权利要求1所述的编码基因表达的操纵子DNA；
(2)将所述操纵子DNA整合至表达载体并转化至宿主细胞进行独立复制和表达，或将所述操纵子DNA整合至宿主细胞染色体中稳定复制和表达，从而得到微生物。
所述步骤(1)中操纵子使用的启动子为诱导型启动子；其中诱导型启动子为乳糖/IPTG诱导型启动子Plac、Ptac、Ptrc、阿拉伯糖诱导型启动子、木糖诱导型启动子、鼠李糖诱导型启动子中的一种或几种。
优选地，所述步骤(2)中宿主细胞为大肠杆菌或谷氨酸棒杆菌。
含有所述操纵子的表达载体可以是任何能够方便地进行DNA重组和表达的载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将取决于该载体与有待引入该载体的宿主细胞的相容性。该载体可以是一种线性的或闭合的环状质粒。
用于整合到宿主细胞基因组中，该载体可以通过同源或非同源重组而整合到该基因组中的任何位点。
载体可以是自主复制载体，其复制独立于染色体复制。该载体可以包含用于确保自我复制的任何装置。可替代地，该载体可以是这样一种载体，当它被引入该宿主细胞中时，被整合到基因组中并且与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。载体可以包含一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因，该基因的产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、重金属抗性、营养缺陷型的原养型等。
对于自主复制，载体可以进一步包含使该载体能够在所讨论的宿主细胞中自主复制的复制起点。复制起点可以是在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制子。细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pSTV28、pSC101以及pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、以及pAMβ1的复制起点。
载体优选可以独立于染色体自主复制的质粒载体。
进一步的，可以将本发明所述基因的多于一个的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过使用高拷贝质粒载体增加基因数量，以增加上述酶基因的表达水平。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于：芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、棒状杆菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属、肠杆菌属、沙雷氏菌属、埃希氏菌属、放线菌属、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体属。优选大肠杆菌和谷氨酸棒杆菌。
所述生物法为发酵；其中发酵培养工艺参数为：接种量5-15％，摇床转速150-220rpm，培养温度30-40℃，发酵时间48-72小时。
优选地，所述培养温度为37℃，，优选培养时间为72小时。
所述发酵采用的培养基为：
对于通过本发明方法改造的含有从葡萄糖到赖氨酸的天然合成途径的微生物合成5-氨基-1-戊醇的生产5-氨基-1-戊醇的培养基：葡萄糖5～15g/L,(NH4)2SO4 3～8g/L，KH2PO4 3～6g/L,MgSO4·7H2O 0.5～1.5g/L,苏氨酸0.1～0.5g/L,谷氨酸钠0.2～0.6g/L,vitamin B1 0.05～0.2g/L，抗生素为30～150μg/mL。
或对于不含有葡萄糖到赖氨酸的天然合成途径的微生物按照本发明方法进行改造的微生物，可以在发酵培养中加入赖氨酸或其盐实现5-氨基-1-戊醇的生产，具体培养基为或培养基为葡萄糖5～15g/L,(NH4)2SO4 3～8g/L，KH2PO4 3～6g/L,MgSO4·7H2O 0.5～1.5g/L,苏氨酸0.1～0.5g/L,谷氨酸钠0.2～0.6g/L,vitamin B1 0.05～0.2g/L，抗生素30～150μg/mL，5～10g/L赖氨酸盐酸盐或者5～10g/L赖氨酸盐酸盐。
所述抗生素为氯霉素，氨苄青霉素，四环素，卡那霉素，链霉素中的一种或几种。
本发明的一种所述方法制备的5-氨基-1-戊醇。
本发明中利用代谢工程改造微生物菌株生产5-氨基-1-戊醇的方法。通过在微生物菌株中过表达含赖氨酸脱羧酶、腐胺氨基转移酶、醛脱氢酶使其能够利用葡萄糖产5-氨基-1-戊醇。
有益效果
与目前化学法生产5-氨基-1-戊醇相比，本发明开拓了利用微生物法生产5-氨基-1-戊醇的新路径，反应条件温和、生产规模易放大，原料可再生、可有效减少碳排放，生产过程环保、温和。
附图说明
图1为pSTV-Plac-T7rbs-cadA质粒的序列图谱；
图2为pSTV-Plac-T7rbs-ldcC质粒的序列图谱；
图3为pSTV-Plac-T7rbs-cadA-Plac-T7rbs-potE质粒的序列图谱；
图4为pSTV-Plac-T7rbs-ldcC-Plac-T7rbs-PotE质粒的序列图谱；
图5为pBR322-Plac-T7rbs-EcyqhD-Plac-T7rbs-PatA质粒的序列图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件如分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和分数按重量计算。
本发明实施例中所用的实验材料如无特殊说明均可从市售渠道获得，ClonExpress II One Step Cloning Kit一步法连接试剂盒购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司。
实施例1
pSTV-Plac-T7rbs-cadA质粒的构建：
以现有质粒pSTV-Plac-T7rbs-PpDavBA-dplac3作为出发质粒，利用BamHI和SacI对其进行双酶切，得到pSTV-Plac-dplac3质粒骨架；以大肠杆菌BL21基因组为模板，利用引物T7rbs-cadA-F1(SEQ ID NO:1)/SacI-KpnI-cadA-R((SEQ ID NO:2)组合进行扩增，得到T7rbs-cadA片段，再以T7rbs-cadA片段作为模板，利用BamHI-T7rbs-F2(SEQ ID NO:3)/SacI-KpnI-cadA-R进行扩增，得到BamHI-T7rbs-cadA片段；利用ClonExpress II One StepCloning Kit一步法连接试剂盒对质粒骨架和BamHI-T7rbs-cadA片段进行连接，转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，涂布至LB+Cmr的固体平板上，37℃培养过夜，对长出的转化子进行PCR验证，并将阳性转化子在LB+Cmr的试管中摇菌过夜，进一步抽提质粒利用BamHI和SacI对其进行双酶切验证，得到pSTV-Plac-T7rbs-cadA质粒。其质粒序列图谱如图1所示。
实施例2
pSTV-Plac-T7rbs-ldcC质粒的构建：
以大肠杆菌BL21基因组为模板，利用引物T7rbs-ldcC-F1(SEQ ID NO:4)/SacI-KpnI-ldcC-R(SEQ ID NO:5)组合进行扩增，得到T7rbs-ldcC片段，再以T7rbs-ldcC片段作为模板，利用BamHI-T7rbs-F2/SacI-KpnI-ldcC-R引物组合进行扩增，得到BamHI-T7rbs-ldcC片段；利用ClonExpress II One Step Cloning Kit一步法连接试剂盒对pSTV-Plac-dplac3质粒骨架和BamHI-T7rbs-ldcC片段进行连接，转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，涂布至LB+Cmr的固体平板上，37℃培养过夜，对长出的转化子进行PCR验证，并将阳性转化子在LB+Cmr的试管中摇菌过夜，进一步抽提质粒利用BamHI和KpnI对其进行双酶切验证，得到pSTV-Plac-T7rbs-ldcC质粒。其质粒序列图谱如图2所示。
实施例3
pSTV-Plac-T7rbs-cadA-Plac-T7rbs-potE质粒的构建：
以pSTV-Plac-T7rbs-cadA作为出发质粒，利用KpnI对其进行单酶切，得到质粒骨架；以pUC57质粒作为模板，利用引物cadA-KpnI-Plac-F(SEQ ID NO:6)/T7rbs-R(SEQ IDNO:7)进行扩增，得到cadA-Plac-T7rbs片段，以大肠杆菌BL21基因组为模板，利用引物T7rbs-PotE-F(SEQ ID NO:8)/KpnI-potE-R(SEQ ID NO:9)组合进行扩增，得到T7rbs-PotE片段，Plac-T7rbs片段和T7rbs-PotE片段各取1μL作为模板，利用cadA-KpnI-Plac-F/KpnI-potE-R引物组合进行融合PCR，得到cadA-Plac-T7rbs-PotE融合片段；利用ClonExpress IIOne Step Cloning Kit一步法连接试剂盒对质粒骨架和cadA-Plac-T7rbs-PotE片段进行连接，转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，涂布至LB+Cmr的固体平板上，37℃培养过夜，对长出的转化子进行PCR验证，并将阳性转化子在LB+Cmr的试管中摇菌过夜，进一步抽提质粒利用KpnI对其进行单酶切验证，得到pSTV-Plac-T7rbs-cadA-Plac-T7rbs-potE质粒。其质粒序列图谱如图3所示。
实施例4
pSTV-Plac-T7rbs-ldcC-Plac-T7rbs-PotE质粒的构建
以pSTV-Plac-T7rbs-ldcC作为出发质粒，利用KpnI对其进行单酶切，得到质粒骨架；以pUC57质粒作为模板，利用引物ldcC-KpnI-Plac-F(SEQ ID NO:10)/T7rbs-R进行扩增，得到ldcC-Plac-T7rbs片段，以大肠杆菌BL21基因组为模板，利用引物T7rbs-PotE-F/KpnI-potE-R组合进行扩增，得到T7rbs-PotE片段，Plac-T7rbs片段和T7rbs-PotE片段各取1μL作为模板，利用ldcC-KpnI-Plac-F/KpnI-potE-R引物组合进行融合PCR，得到ldcC-Plac-T7rbs-PotE融合片段；利用ClonExpress II One Step Cloning Kit一步法连接试剂盒对质粒骨架和ldcC-Plac-T7rbs-PotE片段进行连接，转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，涂布至LB+Cmr的固体平板上，37℃培养过夜，对长出的转化子进行PCR验证，并将阳性转化子在LB+Cmr的试管中摇菌过夜，进一步抽提质粒利用KpnI对其进行单酶切验证，得到pSTV-Plac-T7rbs-ldcC-Plac-T7rbs-potE质粒。其质粒序列图谱如图4所示。
实施例5
pBR322-Plac-T7rbs-EcyqhD-Plac-T7rbs-PatA质粒的构建
以pBR322质粒作为出发质粒，利用引物pBR322M-F(SEQ ID NO:11)/pBR322M-R(SEQ ID NO:12)组合进行扩增，PCR产物纯化后，利用DpnI进行单酶切，酶切产物转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，涂布至LB+Ampr的固体平板上，37℃培养过夜，对长出的转化子进行测序验证，得到质粒pBR322M。进一步利用HindIII/XbaI对pBR322M质粒进行双酶切，得到质粒骨架；以pUC57质粒作为模板，利用引物pBR322M-HindIII-Plac-F(SEQ ID NO:13)/T7rbs-R组合进行扩增，得到HindIII-Plac-T7rbs片段，以大肠杆菌BL21基因组作为模板，利用T7rbs-PatA-F(SEQ ID NO:14)/XbaI-PatA-R(SEQ ID NO:15)组合进行扩增，得到T7rbs-PatA片段，HindIII-Plac-T7rbs片段和T7rbs-PatA片段各取1μL作为模板，利用pBR322M-HindIII-Plac-F/XbaI-PatA-R组合进行融合PCR，得到HindIII-Plac-T7rbs-PatA片段；利用ClonExpress II One Step Cloning Kit一步法连接试剂盒对质粒骨架和HindIII-Plac-T7rbs-PatA片段进行连接，转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，涂布至LB+Ampr的固体平板上，37℃培养过夜，对长出的转化子进行PCR验证，并将阳性转化子在LB+Ampr的试管中摇菌过夜，进一步抽提质粒利用HindIII/XbaI对其进行双酶切验证，得到pBR322-Plac-T7rbs-PatA质粒。
以pBR322-Plac-T7rbs-PatA质粒作为出发质粒，利用KpnI对其进行单酶切，得到质粒骨架；以pUC57质粒作为模板，利用引物pBR322M-KpnI-Plac-F(SEQ ID NO:16)/T7rbs-R组合进行扩增，得到KpnI-Plac-T7rbs片段，以大肠杆菌BL21基因组作为模板，利用T7rbs-yqhD-F(SEQ ID NO:17)/KpnI-yqhD-R(SEQ ID NO:18)组合进行扩增，得到T7rbs-yqhD片段，KpnI-Plac-T7rbs片段和T7rbs-yqhD片段各取1μL作为模板，利用pBR322M-KpnI-Plac-F/KpnI-yqhD-R组合进行融合PCR，得到KpnI-Plac-T7rbs-yqhD片段；利用ClonExpress IIOne Step Cloning Kit一步法连接试剂盒对质粒骨架和KpnI-Plac-T7rbs-yqhD片段进行连接，转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，涂布至LB+Ampr的固体平板上，37℃培养过夜，对长出的转化子进行PCR验证，并将阳性转化子在LB+Ampr的试管中摇菌过夜，进一步抽提质粒利用KpnI对其进行双酶切验证，得到pBR322-Plac-T7rbs-EcyqhD-Plac-T7rbs-PatA质粒。其质粒序列图谱如图5所示。
实施例6
将构建的氨基戊醇合成途径所涉及的质粒组合转化至大肠杆菌BW25113宿主细胞中，质粒组合方式如下表1所示，涂布于对应抗性的种子培养基固体平板上，于37℃培养48小时后，各平板上长出数个单克隆，各分别挑取三个单克隆进行菌落PCR验证，验证正确的转化子进一步进行摇瓶发酵实验。
表1质粒组合方式、重组菌株名称以及抗性
重组菌 质粒1 质粒2
5AP-1 pSTV-Plac-T7rbs-CadA pBR322-Plac-T7rbs-EcyqhD-Plac-T7rbs-PatA
5AP-2 pSTV-Plac-T7rbs-CadA-Plac-T7rbs-PotE 同上
5AP-3 pSTV-Plac-T7rbs-LdcC 同上
5AP-4 pSTV-Plac-T7rbs-LdcC-Plac-T7rbs-PotE 同上
实施例7
重组菌株摇瓶发酵及产物氨基戊醇检测
分别挑取各重组菌株的各三个单克隆至添加了对应抗生素的LB液体培养基中，于37℃，170rpm摇菌培养24小时后，按5％的比例转接至500ml挡板摇瓶中的50ml摇瓶发酵液体培养基中，发酵培养基的配方为:葡萄糖10g/L,(NH4)2SO4 5g/L，KH2PO4 6g/L,MgSO4·7H2O 1.2g/L,苏氨酸0.5g/L,谷氨酸钠0.5g/L,vitamin B1 0.2g/L，添加100μg/mL的氨苄青霉素和50μg/mL氯霉素，发酵72h后，取发酵液，离心去掉菌体，取上清液样测定5-氨基-1-戊醇的产量，对应结果如表2所示。发酵液中的5-氨基-1-戊醇的产率用GC法进行检测，方法如下：用10mol/L的NaOH调节pH至12以上。色谱条件：进样口温度280℃，恒压117.6KPa，分流20，进样体积0.5μL，色谱柱流量1.2mL/min，吹扫流量3mL/min。检测器FID，温度300℃，空气400mL/min，氮气30mL/min，氢气40mL/min。柱温：起始温度为120℃，维持2分钟，以每分钟15℃的速率升温至290℃，维持7分钟。色谱柱：Agilent DB-5 30*0.25mm*1um编号：GC-9。
表2重组菌发酵产5-氨基-1-戊醇
Figure BDA0003569739160000081
SEQUENCE LISTING
<110> 东华大学
2, 1
<120> 一种微生物制备5-氨基-1-戊醇的方法
<130> 1
<160> 29
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
agaaataatt ttgtttaact ttaagaagga gaacagctat gaacgttatt gcaatattg 59
<210> 2
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
atgaggccgc tcatggcgtt gagctcggta ccccacttcc cttgtacgag ctaattatt 59
<210> 3
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
atttcacaca ggaaacagct ggatccagaa ataattttgt ttaactttaa gaaggagaa 59
<210> 4
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
agaaataatt ttgtttaact ttaagaagga gaacagctat gaacatcatt gccattatg 59
<210> 5
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
atgaggccgc tcatggcgtt gagctcggta ccttatttgt taacagcacg ttactcgcc 59
<210> 6
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
agctcgtaca agggaagtgg ggtaccggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctg 58
<210> 7
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
agctgttctc cttcttaaag ttaaacaaaa ttatttctag ctgtttcctg tgtgaaatt 59
<210> 8
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
agaaataatt ttgtttaact ttaagaagga gaacagctat gagtcaggct aaatcgaac 59
<210> 9
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
ccgctcatgg cgttgagctc ggtaccgcgg cataaataac gaactatttg ccaacaaac 59
<210> 10
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
aacgtgctgt taacaaataa ggtaccggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctg 58
<210> 11
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
ggtaccatcg ataagctttc tagataatgc ggtagtttat cacagttaaa ttgctaacg 59
<210> 12
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
tctagaaagc ttatcgatgg taccgaaagg gcctcgtgat acgcctattt ttatagg 57
<210> 13
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
gccctttcgg taccatcgat aagcttggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctg 58
<210> 14
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
agaaataatt ttgtttaact ttaagaagga gaacagcttt gaacaggtta ccttcgagc 59
<210> 15
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
tgtgataaac taccgcatta tctagaaaag atcggatggc gacgtcgtat cgccatccg 59
<210> 16
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
gcgtatcacg aggccctttc ggtaccggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctg 58
<210> 17
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
agaaataatt ttgtttaact ttaagaagga gaacagctat gaacaacttt aatctgcac 59
<210> 18
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
agctcgtaca agggaagtgg ggtaccggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctg 58
<210> 19
<211> 2148
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
atgaacgtta ttgcaatatt gaatcacatg ggggtttatt ttaaagaaga acccatccgt 60
gaacttcatc gcgcgcttga acgtctgaac ttccagattg tttacccgaa cgaccgtgac 120
gacttattaa aactgatcga aaacaatgcg cgtctgtgcg gcgttatttt tgactgggat 180
aaatataatc tcgagctgtg cgaagaaatt agcaaaatga acgagaacct gccgttgtac 240
gcgttcgcta atacgtattc cactctcgat gtaagcctga atgacctgcg tttacagatt 300
agcttctttg aatatgcgct gggtgctgct gaagatattg ctaataagat caagcagacc 360
actgacgaat atatcaacac tattctgcct ccgctgacta aagcactgtt taaatatgtt 420
cgtgaaggta aatatacttt ctgtactcct ggtcacatgg gcggtactgc attccagaaa 480
agcccggtag gtagcctgtt ctatgatttc tttggtccga ataccatgaa atctgatatt 540
tccatttcag tatctgaact gggttctctg ctggatcaca gtggtccaca caaagaagca 600
gaacagtata tcgctcgcgt ctttaacgca gaccgcagct acatggtgac caacggtact 660
tccactgcga acaaaattgt tggtatgtac tctgctccag caggcagcac cattctgatt 720
gaccgtaact gccacaaatc gctgacccac ctgatgatga tgagcgatgt tacgccaatc 780
tatttccgcc cgacccgtaa cgcttacggt attcttggtg gtatcccaca gagtgaattc 840
cagcacgcta ccattgctaa gcgcgtgaaa gaaacaccaa acgcaacctg gccggtacat 900
gctgtaatta ccaactctac ctatgatggt ctgctgtaca acaccgactt catcaagaaa 960
acactggatg tgaaatccat ccactttgac tccgcgtggg tgccttacac caacttctca 1020
ccgatttacg aaggtaaatg cggtatgagc ggtggccgtg tagaagggaa agtgatttac 1080
gaaacccagt ccactcacaa actgctggcg gcgttctctc aggcttccat gatccacgtt 1140
aaaggtgacg taaacgaaga aacctttaac gaagcctaca tgatgcacac caccacttct 1200
ccgcactacg gtatcgtggc gtccactgaa accgctgcgg cgatgatgaa aggcaatgca 1260
ggtaagcgtc tgatcaacgg ttctattgaa cgtgcgatca aattccgtaa agagatcaaa 1320
cgtctgagaa cggaatctga tggctggttc tttgatgtat ggcagccgga tcatatcgat 1380
acgactgaat gctggccgct gcgttctgac agcacctggc acggcttcaa aaacatcgat 1440
aacgagcaca tgtatcttga cccgatcaaa gtcaccctgc tgactccggg gatggaaaaa 1500
gacggcacca tgagcgactt tggtattccg gccagcatcg tggcgaaata cctcgacgaa 1560
catggcatcg ttgttgagaa aaccggtccg tataacctgc tgttcctgtt cagcatcggt 1620
atcgataaga ccaaagcact gagcctgctg cgtgctctga ctgactttaa acgtgcgttc 1680
gacctgaacc tgcgtgtgaa aaacatgctg ccgtctctgt atcgtgaaga tcctgaattc 1740
tatgaaaaca tgcgtattca ggaactggct cagaatatcc acaaactgat tgttcaccac 1800
aatctgccgg atctgatgta tcgcgcattt gaagtgctgc cgacgatggt aatgactccg 1860
tatgctgcat tccagaaaga gctgcacggt atgaccgaag aagtttacct cgacgaaatg 1920
gtaggtcgta ttaacgccaa tatgatcctt ccgtacccgc cgggagttcc tctggtaatg 1980
ccgggtgaaa tgatcaccga agaaagccgt ccggttctgg agttcctgca gatgctgtgt 2040
gaaatcggcg ctcactatcc gggctttgaa accgatattc acggtgcata ccgtcaggct 2100
gatggccgct ataccgttaa ggtattgaaa gaagaaagca aaaaataa 2148
<210> 20
<211> 2142
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
atgaacatca ttgccattat gggaccgcat ggcgtctttt ataaagatga gcccatcaaa 60
gaactggagt cggcgctgct ggcgcaaggc tttcagatta tctggccaca aaacagcgtt 120
gatttgctga aatttatcga acataaccct cgaatttgcg gcgtgatttt tgactgggat 180
gagtacagtc tcgatttatg tagcgatatc aatcagctta atgaatatct cccgctttat 240
gccttcatca acacccactc gacgatggat gtcagcgtgc aggatatgcg gatggcgctc 300
tggttttttg aatatgcgct ggggcaggcg gaagatatcg ccattcgtat gcgtcagtac 360
accgacgaat atcttgataa cattacaccg ccgttcacga aagccttgtt tacctacgtc 420
aaagagcgga agtacacctt ttgtacgccg gggcatatgg gcggtaccgc ctatcaaaaa 480
agcccggttg gctgtctgtt ttatgatttt ttcggcggga ataccctcaa ggctgatgtc 540
tctatttcgg ttaccgagct tggttcgttg ctcgaccaca ccgggccaca cctggaagcg 600
gaagagtaca tcgcgcggac ttttggcgcg gaacagagtt atatcgttac caacggaaca 660
tcgacgtcga acaaaattgt gggtatgtac gccgcgccat ccggcagtac gctgttgatc 720
gaccgcaatt gtcataaatc gctggcgcat ctgttgatga tgaacgatgt agtgccagtc 780
tggctgaaac cgacgcgtaa tgcgttgggg attcttggtg ggatcccgcg ccgtgaattt 840
actcgcgaca gcatcgaaga gaaagtcgct gccaccacgc aggcacaatg gccggttcat 900
gcggtgatta ccaactccac ctatgatggc ttgctctaca acaccgactg gatcaaacag 960
acgctggatg tcccgtcgat ccacttcgat tccgcctggg tgccgtacac ccattttcat 1020
ccgatctacc aggggaaaag tggtatgagc ggcgagcgtg ttgcgggaaa agtgatcttc 1080
gaaacgcaat cgacccacaa aatgctggcg gcgttatcgc aggcttcgct gatccacatt 1140
aaaggcgagt atgacgaaga ggcgtttaac gaagccttta tgatgcatac caccacctcg 1200
cccagttatc ccattgttgc ttcggttgag acggcggcgg cgatgctgcg tggtaatccg 1260
ggcaaacggc tgattaaccg ttcggtggag cgggcgctgc attttcgcaa agaggtccag 1320
cggttgcggg aagagtctga cggttggttt ttcgatatct ggcaaccgcc gcaggtggat 1380
gaagccgaat gctggcccgt tgcgccaggc gaacagtggc acggctttaa cgatgcggat 1440
gccgatcata tgtttctcga tccggttaaa gtcactattt tgacaccggg gatggacgaa 1500
cagggcaata tgagcgagga ggggatcccg gcggcgctgg tggcaaaatt cctcgacgaa 1560
cgtgggatcg tagtagagaa aaccggccct tataacctgc tgtttctctt tagtattggt 1620
atcgataaaa ccaaagcaat gggattattg cgtgggttga cggaatttaa acgctcttac 1680
gatctcaacc tgcggatcaa aaatatgcta cccgatctct atgctgaaga tcccgatttc 1740
taccgcaata tgcgtattca ggatctggcg caagggatcc ataagctgat tcgtaaacac 1800
gatcttcccg gtttgatgtt gcgggcattc gatactttgc cggaaatgat catgacgcca 1860
catcaggcat ggcagagaca gattaaaggt gaagtagaaa ccattgcgct ggaacaactg 1920
gtcggtagag tatcggcaaa tatgatcctg ccttatccac cgggcgtacc gctgttgatg 1980
ccaggagaaa tgctgaccaa agagagccgc acggtactcg attttctact gatgctttgt 2040
tccgtagggc aacattaccc cggttttgaa acggatattc acggcgcgaa acaggacgaa 2100
gacggcgttt accgcgtacg agtcctaaaa atggcgggat aa 2142
<210> 21
<211> 1380
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
ttgaacaggt taccttcgag cgcatcggct ttagcgtgca gcgcccacgc cctgaatctc 60
attgagaagc gaacgctgga tcatgaggag atgaaagcac ttaaccgaga ggtgattgaa 120
tacttcaaag agcatgtcaa tccggggttt ttagagtatc gcaaatctgt taccgccggc 180
ggggattacg gagccgtaga gtggcaagcg ggaagtttaa atacgcttgt cgacacccag 240
ggccaggagt ttatcgactg cctgggaggt tttggaattt tcaacgtggg gcaccgtaat 300
ccagttgtgg tttccgccgt acagaatcaa cttgcgaaac aaccgctgca cagccaggag 360
ctgctcgatc cgttacgggc gatgttggcg aaaacccttg ctgcgctaac gcccggtaaa 420
ctgaaataca gcttcttctg taatagcggc accgagtccg ttgaagcagc gctgaagctg 480
gcgaaagctt accagtcacc gcgcggcaag tttactttta ttgccaccag cggcgcgttc 540
cacggtaaat cacttggcgc gctgtcggcc acggcgaaat cgaccttccg caaaccgttt 600
atgccgttac tgccgggctt ccgtcatgtg ccgtttggca atatcgaagc catgcgcacg 660
gctcttaacg agtgcaaaaa aaccggtgat gatgtggctg cggtgatcct cgaaccgatt 720
cagggtgaag gtggcgtaat tctgccgccg ccgggctatc tcaccgccgt acgtaagcta 780
tgcgatgagt tcggcgcact gatgatcctc gatgaagtac aaacgggcat ggggcgcacg 840
ggcaagatgt tcgcctgcga gcatgagaac gtacagccgg atatcctctg ccttgccaaa 900
gcgctcggcg gcggcgtgat gccgattggc gcgaccatcg ccactgaaga ggtgttttca 960
gttctgttcg acaacccatt cctgcatacc accacctttg gcggcaaccc gctggcctgt 1020
gcggcggcgc tggcgaccat caatgtgttg ctggagcaga acttaccggc tcaggctgag 1080
caaaaaggcg atatgttgct ggacggtttc cgtcaactgg cgcgggaata tcccgatctg 1140
gtacaggaag cgcgtggtaa agggatgttg atggcgattg agtttgttga taacgaaatc 1200
ggctataact ttgccagcga gatgttccgc cagcgcgtac tggtggccgg aacgctcaat 1260
aacgccaaaa cgatccgcat tgaaccgcca ctgacactga ccattgaaca gtgtgaactg 1320
gtgatcaaag cggcgcgtaa ggcgctggcg gccatgcgag taagtgtcga agaagcgtaa 1380
<210> 22
<211> 1164
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
atgaacaact ttaatctgca caccccaacc cgcattctgt ttggtaaagg cgcaatcgct 60
ggtttacgcg aacaaattcc tcacgatgct cgcgtattga ttacctacgg cggcggcagc 120
gtgaaaaaaa ccggcgttct cgatcaagtt ctggatgccc tgaaaggcat ggacgtgctg 180
gaatttggcg gtattgagcc aaacccggct tatgaaacgc tgatgaacgc cgtgaaactg 240
gttcgcgaac agaaagtgac tttcctgctg gcggttggcg gcggttctgt actggacggc 300
accaaattta tcgccgcagc ggctaactat ccggaaaata tcgatccgtg gcacattctg 360
caaacgggcg gtaaagagat taaaagcgcc atcccgatgg gctgtgtgct gacgctgcca 420
gcaaccggtt cagaatccaa cgcaggcgcg gtgatctccc gtaaaaccac aggcgacaag 480
caggcgttcc attctgccca tgttcagccg gtatttgccg tgctcgatcc ggtttatacc 540
tacaccctgc cgccgcgtca ggtggctaac ggcgtagtgg acgcctttgt acacaccgtg 600
gaacagtatg ttaccaaacc ggttgatgcc aaaattcagg accgtttcgc agaaggcatt 660
ttgctgacgc taatcgaaga tggtccgaaa gccctgaaag agccagaaaa ctacgatgtg 720
cgcgccaacg tcatgtgggc ggcgactcag gcgctgaacg gtttgattgg cgctggcgta 780
ccgcaggact gggcaacgca tatgctgggc cacgaactga ctgcgatgca cggtctggat 840
cacgcgcaaa cactggctat cgtcctgcct gcactgtgga atgaaaaacg cgataccaag 900
cgcgctaagc tgctgcaata tgctgaacgc gtctggaaca tcactgaagg ttccgatgat 960
gagcgtattg acgccgcgat tgccgcaacc cgcaatttct ttgagcaatt aggcgtgccg 1020
acccacctct ccgactacgg tctggacggc agctccatcc cggctttgct gaaaaaactg 1080
gaagagcacg gcatgaccca actgggcgaa aatcatgaca ttacgttgga tgtcagccgc 1140
cgtatatacg aagccgcccg ctaa 1164
<210> 23
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
atgagtcagg ctaaatcgaa caaaatgggc gtcgttcagt taaccatact gacgatggtc 60
aacatgatgg gctccggtat catcatgctg ccgacaaagc ttgccgaagt cgggacaatc 120
tcaattatct cctggctggt gacagccgta ggctcaatgg cactggcatg ggcattcgca 180
aaatgcggta tgttcagccg taaatcaggc ggtatgggcg gttatgccga gtatgctttc 240
ggtaaatccg gtaactttat ggcgaactat acctacggcg tctcactgct gattgctaac 300
gtcgcgattg ctatttcggc ggttggttac ggcaccgaac tgctcggcgc gagtttgtcg 360
ccagtgcaga ttggtcttgc gaccatcggg gtgctgtgga tttgtaccgt ggctaacttt 420
ggtggtgcgc gcattaccgg gcaaatcagt agcattaccg tgtggggggt cattattccg 480
gtcgtcggtc tgtgcattat tggctggttc tggtttagcc cgacgctgta cgttgattcc 540
tggaatccgc atcatgcacc gttcttcagt gcggtaggtt cttccatcgc tatgacgctg 600
tgggcttttc ttggtctgga gtctgcgtgt gcaaatactg atgtagtgga aaacccggaa 660
cgtaatgtgc caatcgcggt actcggcggt acgttaggtg cggcggtgat ttatatcgtc 720
tccaccaacg tgattgccgg gattgtgcca aatatggagc tggcaaattc aacggcacca 780
tttggtctgg ccttcgcgca gatgttcacg ccggaagtgg gtaaagtcat tatggcgctg 840
atggtgatgt cctgctgcgg ttcgctactt ggctggcagt tcaccattgc ccaggtgttt 900
aaatcttcat ctgatgaagg ctacttccct aaaattttct cccgtgtaac caaagtggat 960
gcaccggtgc agggaatgtt gaccattgtg attattcaga gtggattggc actgatgacc 1020
attagcccgt cgctaaacag tcagttcaac gtgctggtta acctggccgt ggtgaccaat 1080
atcattccgt atattctgtc aatggcggca ttagtcatta ttcagaaggt cgctaatgtg 1140
cctccctcaa aagcgaaagt tgcaaacttt gttgcttttg ttggcgcgat gtatagcttt 1200
tatgcgctgt actcatccgg ggaagaagcc atgctgtacg gttccatcgt gaccttcctt 1260
ggttggacac tgtatggtct ggtatcacca cgctttgaac tgaaaaataa acacggttaa 1320
<210> 24
<211> 2148
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
atgaacgtta tcgcaatcat gaatcacatg ggcgtctact ttaaagaaga gcctatccgt 60
gaactgcatc gtgcccttga acgcctggac ttccgtattg tctatccgaa cgaccgcgaa 120
gatttactga aacttatcga aaataactcc cgcctgtgcg gcgttatctt tgactgggat 180
aaatacaatc ttgagctgtg cgaagagatc agcaagctga acgaatatat gccgctgtac 240
gctttcgcca acacctactc cacgctggac gtcagtctca acgatctgcg gatgcaggtt 300
cgcttcttcg aatatgcgct gggcgcggct gacgacatcg ccgataaaat caaacagaac 360
accgatgagt atatcgatac gattctgccg ccgctgacca aggcgctgtt caaatacgtg 420
cgtgaaggca aatacacctt ctgtacccca ggccacatgg gcggtaccgc cttccagaaa 480
agcccggtag gcagcatctt ctacgatttc tttggcccga acaccatgaa gtcggatatc 540
tcgatttcgg tttctgagct gggctccctg ctggatcaca gcggcccgca caaagaagcg 600
gaagagtata tcgcccgcgt ctttaacgct gaacgcagct acatggtgac caacggcacc 660
tctaccgcca acaaaatcgt cggtatgtac tcggccccgg ccggcagcac cgtgctgatt 720
gaccgtaact gccacaaatc gctgacccat ctgatgatga tgagcgacat tacgccaatc 780
tacttccgcc cgacccgtaa cgcctacggt atcctcggcg gcatcccgca gagcgaattc 840
cagcacgcga ccatcgcgaa gcgcgttaaa gagaccccga acgcgacctg gccggtgcac 900
gcggttatca ccaactccac ctacgatggc ctgctgtaca acaccgattt catcaagaaa 960
accctcgatg ttaaatccat ccactttgac tcagcgtggg tgccttacac caacttctcg 1020
ccaatctatg ccggtaaatg cgggatgagc ggcggccgcg tggaagggaa aatcatttac 1080
gaaacccagt ccacccacaa gctgctggcg gcgttctccc aggcttcaat gatccacgtg 1140
aaaggtgaca tcaacgaaga aacctttaac gaagcctaca tgatgcacac caccacctct 1200
ccgcactacg ggatcgtggc ctccaccgaa accgccgcgg cgatgatgaa aggcaacgcc 1260
ggtaagcgtc tgatcgacgg ctctattgaa cgttcaatca agttccgtaa agagatcaag 1320
cgtctgaaag gcgagtccga aggctggttc ttcgacgtat ggcagccgga gcatatcgac 1380
ggtgcagaat gctggccgct gcgctccgac agcgcatggc acggtttcaa aaacatcgat 1440
aacgagcaca tgtacctcga cccgattaag gtcactctgc tgactccggg gatgaaaaaa 1500
gacggcacca tggatgagtt cggtattccg gccagcatcg tggcgaaata cctcgacgaa 1560
cacggcatcg tggtcgagaa aaccggtccg tacaacctgc tgttcctgtt cagcattggt 1620
atcgacaaaa ccaaggccct gagcctgctg cgcgcgctaa ccgacttcaa acgcgcgttc 1680
gacctcaacc tgcgtgtgaa aaacatgctg ccgtctctgt accgcgaaga tcctgaattc 1740
tatgaaaaca tgcgcgttca ggagctggca cagaacattc acaaactggt cgagcatcac 1800
aacctgccgg acctgatgtt ccgcgcgttc gaagtgctgc caaaaatgat ggtgacaccg 1860
tacgctgcgt tccagaaaga gctgcacggt cagaccgaag aggtctatct cgaagagatg 1920
gttggtcgcg tcaatgccaa catgatcctg ccgtatcctc cgggagttcc gctggtcatg 1980
ccgggtgaga tgatcaccga agagagccgt ccggtgctgg agttcctgca gatgctgtgc 2040
gaaatcggcg cccactaccc gggcttcgaa accgatatcc acggcgcata tcgtcaggcg 2100
gatggtcgct acaccgttaa ggtgctgaaa gacgaaaaca ccaagtaa 2148
<210> 25
<211> 2148
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
atgaacgtta ttgcaatcat gaatcacatg ggtgtttact tcaaagaaga acccatccgt 60
gaactgcatc gtgctctcga acgcctggac ttccgtattg tctacccgaa cgaccgtgac 120
gacttattaa aacttatcga aaacaactct cgtctgtgcg gcgtgatctt cgactgggat 180
aaatacaatc tcgaactgtg cgaagaaatc agcaaaatga acgagtacat gccgctgtac 240
gcgttcgcta acacctactc gactctggac gttagcctga acgatctgcg catgcaggtt 300
cgcttcttcg aatatgcgct gggcgctgcg gaagatatcg cgaacaaaat caaacagaac 360
actgatgaat acatcgatac cattctgccg ccgctgacca aagcgctgtt caaatatgta 420
cgtgaaggta aatacacctt ctgcacccca ggccacatgg gcggtaccgc gttccagaaa 480
agcccggtag gcagcatctt ctatgatttc tttggcccga ataccatgaa atccgatatc 540
tccatttcgg tttctgaact gggttctctg ctggaccaca gcggcccgca caaagaagcg 600
gaagagtata tcgctcgcgt ctttaacgct gaacgcagct acatggtgac caacggtacc 660
tctactgcta acaaaatcgt cggcatgtac tccgcgccgg ccggcagcac cgtgctgatt 720
gaccgtaact gccacaaatc gctgactcac ctgatgatga tgagcgacat tacgccgatc 780
tacttccgtc cgacccgtaa cgcctacggt atcctcggcg gtatcccgca gagcgaattc 840
cagcacgcga ctatcgccaa gcgtgtgaaa gagacgccga acgcgacctg gccggtacac 900
gcggtgatca ccaactcgac ctatgatggc ctgctgtata acaccgactt catcaagaaa 960
accctggatg tgaaatccat ccactttgac tccgcatggg tgccttacac caacttctcg 1020
ccgatctatg aaggcaaatg cgggatgagc ggcggccgcg tcgaagggaa agtgatctac 1080
gaaacccagt ccacgcacaa actgctggcg gcattctccc aggcgtcgat gatccacgtg 1140
aaaggcgacg taaacgaaga gaccttcaac gaagcctaca tgatgcacac caccacttcc 1200
ccgcactacg ggatcgtggc gtccaccgaa accgcggcgg cgatgatgaa gggtaacgcc 1260
ggtaagcgtc tgatcgacgg ctctattgaa cgttccatca agttccgtaa agagatcaaa 1320
cgtctgaaag gcgagtctga cggctggttc ttcgacgttt ggcagccgga gcatatcgat 1380
ggcgctgaat gctggccgct gcgttccgac agtgcatggc acggtttcaa aaacatcgat 1440
aacgagcaca tgtacctcga cccgatcaaa gtcacgctgc tgacgccggg gatgaagaaa 1500
gacggcacca tggatgactt cggtattccg gcgagcatcg tggcgaaata tctcgacgaa 1560
cacggcatcg tggtggagaa aaccggtccg tacaacctgc tgttcctgtt cagcatcggt 1620
atcgacaaaa ccaaagcgct gagcctgctg cgtgcgctga ccgacttcaa acgcgcgttc 1680
gacctgaacc tgcgggtgaa aaacatgctg ccgtcgctgt accgtgaaga tcctgaattc 1740
tatgaaaaca tgcgtattca ggacctggcg cagaacattc acaaactgat tgagcatcac 1800
aacctgccgg acctgatgtt ccgcgcgttt gaagtgctgc catcgatggt gatgaccccg 1860
tatgccgcgt tccagaaaga gctgcacggt cagactgaag aggtttatct cgaagagatg 1920
gtcggccgcg tcaacgccaa catgatcctg ccgtatcctc cgggagtgcc gctggtgatg 1980
ccgggtgaaa tgatcaccga agaaagccgc ccggtgctgg agttcctgca gatgctgtgc 2040
gaaatcggcg cccactaccc gggcttcgaa accgatatcc acggcgccta tcgtcaggcg 2100
gatggtcgtt acaccgttaa agtgctgaaa gaagaaaaca acaagtaa 2148
<210> 26
<211> 1164
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
atgaacaact ttaatctgca caccccaacc cgcattctgt ttggtaaagg cgcaatcgct 60
ggtttacgcg aacaaattcc tcacgatgct cgcgtattga ttacctacgg tggcggcagc 120
gtgaaaaaaa ccggcgttct cgatcaagtt ctggatgccc tgaaaggcat ggacgtgctg 180
gaatttggcg gtattgagcc aaacccggct tatgaaacgc tgatgaacgc cgtgaaactg 240
gttcgcgaac agaaagtgac tttcctgctg gcggttggcg gcggttctgt actggacggc 300
accaaattta tcgccgcagc ggctaactat ccggaaaata tcgatccgtg gcacattctg 360
caaacgggcg gtaaagagat taaaagcgcc atcccgatgg gctgtgtgct gacgctgcca 420
gcaaccggtt cagaatccaa cgcaggcgcg gtgatctccc gtaaaaccac aggcgacaag 480
caggcgttcc attctgcaca tgttcagccg gtatttgccg tgctcgatcc ggtttatacc 540
tacaccctgc cgccgcgtca ggtggctaac ggcgtagtgg acgcctttgt acacaccgtg 600
gaacagtatg ttaccaaacc ggttgatgcc aaaattcagg accgtttcgc agaaggcatt 660
ttgctgacgc taatcgaaga tggtccgaaa gccctgaaag agccagaaaa ctacgatgtg 720
cgcgccaacg tcatgtgggc ggcgactcag gcgctgaacg gtttgattgg cactggcgta 780
ccgcaggact gggcaacgca tatgctgggc cacgaactga ctgcgatgca cggtctggat 840
cacgcgcaaa cactggctat cgtcctgcct gcactgtgga atgaaaaacg cgagaccaag 900
cgcgctaagc tgctgcaata tgctgaacgc gtctggaaca tcactgaagg ttccgacgat 960
gagcgtattg acgccgcgat tgccgcaacc cgcaatttct ttgagcaatt aggcgtgccg 1020
acccacctct ccgactacgg tctggacggc agctccatcc cggctttgct gaaaaaactg 1080
gaagagcacg gcatgaccca actgggcgaa aatcatgaca ttacgttgga tgtcagccgc 1140
cgtatatacg aagccgcccg ctaa 1164
<210> 27
<211> 1158
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
atgcaaaact tcactctcca caccccgact aaagtgctgt tcggtactgg ccagatagcg 60
caactgagta aagagattcc tgctgatgcc cgcattttaa ttacctacgg tggcggcagt 120
attaagcaaa atggcgtgtt ggaccaagtc catgacgcac tgaaaggctt tgatttccta 180
gagtttggcg ggattgaacc taacccaacc tatgaaaccc tgatgaaagc cgtcgaactg 240
attcgggtag aaaaaatcaa cttcctgctg gcggtgggcg gtggttcggt attggatggc 300
accaagttca ttgctgccgc cgttaactat ccacaagatc catggcacat tctggaaacc 360
acaggtagtg atatcactga agcattgcca atgggctcag tgctaacctt gcctgctacc 420
ggttctgaaa ccaacagtgg cgcggtaatc agccgtcgca gtactggcga taagcaacac 480
ttcttctcac ctcatgtcca accgctgttt gctgtgctgg acccggttgt gacttacagt 540
ctgccgccac gtcaggttgc caatggtgtt gtcgatgcct ttgtgcatac catcgagcaa 600
tacctgactt acccggtgga tgcaaaagtg caagatcgct tcgcagaagg gctgctgtta 660
accctgattg aagatggtcc gaaagcattg accgacccag aaaattacga cgtgcgcgcc 720
aatattatgt ggagcgccac tatggcatta aatggcctga ttggggcggg tgtaccgcaa 780
gactgggcaa cgcatatgct gggccacgaa ttaaccgcac gccatggtct tgaccatgca 840
caaaccctgg cggtggtact gcctgcactg ctggttgcca agaaagaaca aaaacgcgcc 900
aaactgctgc aatatgctga gcgtgtctgg ggcctgcgtg aagggagtga agaacaacgc 960
atcgatgcag ccattgaagc aacccgtcat ttctttgaaa gcatgggtgt cgcgacacgt 1020
ctgtccgcct acaaactcga tggcagttcg attcccgatt taatcaaaaa gttggaagag 1080
cacggcatga cccaacttgg cgaacacggt gatatcacat taaccgagag taaacgtatc 1140
tacgaagctg cggtctaa 1158
<210> 28
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
atgagtcagg ctaaatcgaa caaaatgggc gtcgttcagt taaccatact gacgatggtc 60
aacatgatgg gctccggtat catcatgctg ccgacaaagc ttgccgaagt tgggacaatt 120
tcaattatct cctggctggt gacagccgta ggctcaatgg cactggcatg ggcattcgca 180
aaatgcggta tgttcagccg taaatcaggt ggtatgggcg gttatgccga gtatgctttc 240
ggtaaatccg gtaactttat tgcgaactat acctacggcg tctcactgct gattgctaac 300
gtcgcgattg ctatttcggc ggttggttac ggcaccgaac tgctcggcgc gagtttgtcg 360
ccagtgcaga ttggtcttgc gaccatcggg gtgctgtgga tttgtaccgt ggctaacttt 420
ggtggtgcgc gcattaccgg gcaaatcagt agcattaccg tgtggggggg cattattccg 480
gtggtaggcc tgtgcattat cggctggttc tggtttagcc cgacgcttta cgttgattcc 540
tggaatccgc atcatgcacc gttcttcagt gcagtaggtt cttccatcgc tatgacgctg 600
tgggcttttc ttggtctgga gtctgcgtgt gcgaatactg atgtagtgga aaacccggaa 660
cgtaatgtgc caatcgcggt actcggcggt acgttaggtg cggcggtgat ttatatcgtc 720
tccaccaacg tgattgcagg gattgtgcct aatatggagc tggcaaattc aacggcacca 780
tttggcctgg ccttcgcaca gatgtttaca ccagaagtgg gtaaagtcat tatggcgctg 840
atggtgatgt cctgctgcgg ttcgctgctt ggctggcagt tcaccattgc ccaggtgttt 900
aaatcttcat ctgatgaagg ctacttccct aaaattttct cccgtgtaac caaagtggat 960
gcaccggtgc agggaatgtt gaccattgtg attatccaga gcgggttggc gctgatgacg 1020
attagcccgt cgctaaacag tcagttcaac gtgctggtta acctggccgt ggtgaccaat 1080
atcattccgt atattctgtc aatggcggca ttagtcatta ttcagaaggt cgctaatgtg 1140
cccccctcaa aagcgaaagt tgcaaacttt gttgcttttg ttggcgcgat gtatagcttt 1200
tatgcgctgt actcatccgg ggaagaagcc atgctgtacg gttccatcgt gaccttcctt 1260
ggttggacac tgtatggtct ggtatcacca cgctttgaac tgaaaaataa acacggttaa 1320
<210> 29
<211> 1317
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
atgagtaagt cgaataataa aatgggggtt gtgcagttaa caattctcac ggcagtcaat 60
atgatgggtt ccggtattat tatgctgccc accaaactgg ccgaagtcgg aacgatttct 120
atcgtttcct ggctggtcac agccctcggt tcgatggcac tggcctatgc cttcgccaag 180
tgcggaatgt tcagccgtaa atccggcggc atgggaggtt atgcagaata cgcctttggt 240
aaatccggta atttcatggc gaattacacc tacggcgtgt cactgctgat tgccaatatt 300
gccattgcga tttccgccgt gggttacggc accgagttgt tcggggtggc actgccgcca 360
ctggggattt gtattgcgac tattgcggta ctgtggatcg cgactgtcgc gaattttggt 420
ggcgcgcgga tcaccggaca aatcagttcc attaccgtct ggggggtcat catcccggtg 480
gtcggcatct ccattatcgg ctggtactgg tttagcggcg aagcctatct ggcggcgtgg 540
aacccgcatg cagagccaac atttaaagcc gtcggtgcct ctatctcaat gacattgtgg 600
gcatttcttg ggctggaatc ggcctgtgcc aatacggatg tagtggaaaa cccggagcga 660
aacgtgccga ttgccgtcat gggcggcaca ctgggcgcgg cggtgattta cgtggtgtcc 720
accaacgtga ttgccggtat tgtaccgaat atggatctgg cgaattccac tgcgccattc 780
gggctggcgt tctcacatat gttcaatccg acggtcggga aaatcatcat ggcgctgatg 840
atcatgtcct gcgtcggttc actgcttggc tggcagttca ccattgccca ggtcttcaaa 900
tcctccgccg acagcggctt cttcccgaaa atattttcta agctcaataa ggcagatgcc 960
ccggtgaaag ggatgctgac tatcgtgatt ttccagagtg tgctgtcgct gatgaccatc 1020
agcccgtcac tcagcaaaca gttcgatacg ctggtgaatc tggcggtggt gaccaatatc 1080
atcccgtata tcttgtcgat ggcagcactg gtgatcatcc agaaagtggc gaaagtaccg 1140
gaaggaaaag ccaaaatcgc caatgtcatt gccggtatcg gtgcgttata cagcttctat 1200
gccctttaca gttccggcca ggaagccatg atgtggggtg caatcgccac cttcctgggc 1260
tggacgttgt acggactggt gtcaccgcgt tttgaaatgg ccggtaagaa aggataa 1317

Claims (10)

1.一种微生物制备5-氨基-1-戊醇的方法，包括：将同时过表达含赖氨酸脱羧酶、腐胺氨基转移酶、醛脱氢酶编码基因的微生物，通过生物法制备得到5-氨基-1-戊醇。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述微生物中还含过表达胺转运蛋白PotE编码基因。
3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述基因来源于芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、棒状杆菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、链霉菌属、弯曲杆菌属、肠杆菌属、沙雷氏菌属、埃希氏菌属、放线菌属、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体中的一种或几种。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述基因来源于大肠杆菌。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述微生物由下列方法制备：
(1)构建含权利要求1所述的编码基因表达的操纵子DNA；
(2)将所述操纵子DNA整合至表达载体并转化至宿主细胞进行独立复制和表达，或将所述操纵子DNA整合至宿主细胞染色体中稳定复制和表达，从而得到微生物。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中操纵子使用的启动子为诱导型启动子；其中诱导型启动子为乳糖/IPTG诱导型启动子、阿拉伯糖诱导型启动子、木糖诱导型启动子、鼠李糖诱导型启动子中的一种或几种。
7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述步骤(2)中宿主细胞为大肠杆菌或谷氨酸棒杆菌。
8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述生物法为发酵法；其中发酵培养工艺参数为：接种量5-15％，摇床转速150～220rpm，培养温度30～40℃，发酵时间48～72小时；所述发酵培养基为：葡萄糖5～15g/L,(NH4)2SO4 3～8g/L，KH2PO4 3～6g/L,MgSO4·7H2O 0.5～1.5g/L,苏氨酸0.1～0.5g/L,谷氨酸钠0.2～0.6g/L,vitamin B1 0.05～0.2g/L，抗生素为30～150μg/mL；
或培养基为葡萄糖5～15g/L,(NH4)2SO4 3～8g/L，KH2PO4 3～6g/L,MgSO4·7H2O 0.5～1.5g/L,苏氨酸0.1～0.5g/L,谷氨酸钠0.2～0.6g/L,vitamin B1 0.05～0.2g/L，抗生素为30～150μg/mL，5～10g/L赖氨酸盐酸盐或者5～10g/L赖氨酸盐酸盐。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述抗生素为氯霉素，氨苄青霉素，四环素，卡那霉素，链霉素中的一种或几种。
10.一种权利要求1所述方法制备的5-氨基-1-戊醇。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106906175A (zh) * 2009-12-17 2017-06-30 巴斯夫欧洲公司 用于生产尸胺的方法和重组微生物
CN109136295A (zh) * 2018-08-17 2019-01-04 北京化工大学 一种生物合成戊二酸的方法
JP2019062788A (ja) * 2017-09-29 2019-04-25 旭化成株式会社 遺伝的に操作された微生物による１，５−ペンタンジオールの製造方法
US20190233858A1 (en) * 2018-02-01 2019-08-01 Invista North America S.A.R.L. Methods and materials for the biosynthesis of compounds involved in lysine metabolism and derivatives and compounds related thereto
CN112226398A (zh) * 2020-10-30 2021-01-15 江南大学 一种高效生产戊二酸的重组大肠杆菌及其构建方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106906175A (zh) * 2009-12-17 2017-06-30 巴斯夫欧洲公司 用于生产尸胺的方法和重组微生物
JP2019062788A (ja) * 2017-09-29 2019-04-25 旭化成株式会社 遺伝的に操作された微生物による１，５−ペンタンジオールの製造方法
US20190233858A1 (en) * 2018-02-01 2019-08-01 Invista North America S.A.R.L. Methods and materials for the biosynthesis of compounds involved in lysine metabolism and derivatives and compounds related thereto
CN109136295A (zh) * 2018-08-17 2019-01-04 北京化工大学 一种生物合成戊二酸的方法
CN112226398A (zh) * 2020-10-30 2021-01-15 江南大学 一种高效生产戊二酸的重组大肠杆菌及其构建方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NCBI: "GenBank ACCESSION NC_000913 REGION: 3155355..3156518，Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655, complete genome", Retrieved from the Internet <URL:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_000913.3?from=3155355&to=3156518> *

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