JP4834789B2 - フェリチンの配置方法 - Google Patents
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Description
フェリチンの配置方法であって、
前記配置方法は、
サブユニットN末端部に配列番号1に記載のペプチドを修飾し、金属又は金属を含む化合物からなる無機粒子を内包したフェリチンと、0.01v/v%以上10v/v%以下の非イオン界面活性剤とを含み、pHが7.4以上8.2以下の範囲にある溶液を調製する調製工程と、
表面の一部にクロム、モリブデン、およびタングステンから選択された1種の金属部分が形成された酸化シリコン基板上に前記溶液を滴下することによって、前記フェリチンを選択的に前記金属部分に結合させる結合工程と、
を包含する、配置方法である。
調製工程では、サブユニットN末端部に配列番号1に記載のペプチドを修飾したフェリチンと、0.01v/v%以上10v/v%以下の非イオン界面活性剤とを含み、pHが7.4以上8.2以下の範囲にある溶液を調製する。
結合工程では、調製工程で調製した、フェリチンと非イオン界面活性剤を含む溶液を、酸化シリコン基板上に滴下する。
除去工程では、酸化シリコン基板上に滴下した溶液中に残存しているフェリチンを除去することが目的となる。除去する方法としては、乾燥を抑制した状態で遠心により溶液を除去するか、フェリチンを含まない溶液で洗い流すことにより除去するという主に二つの方法がある。遠心による除去では、基板表面の凹凸により、除去しきれないフェリチンが残ることがあるため、フェリチンを含まない溶液で洗い流す方法が好ましい。
まず、以下の実施例に用いたフェリチンの製造方法について説明する。本願の実施例では、配列番号1に示すポリペプチドでN末端部を修飾したリコンビナントフェリチン「minT1−LF」と配列番号1を有しないリコンビナントフェリチン「△1−LF」を使用した。
まず、△1−LFの製造方法について説明する。天然のウマ脾臓由来フェリチンのサブユニットにはわずかに構造の異なるL型とH型があるため、天然フェリチンは、一定の構造を有さない。そこで、本願の実施例ではL型サブユニットのみから構成されるリコンビナントフェリチンを使用した。
次に、配列番号1でN末端部を修飾したフェリチン(minT1−LF)の製造方法について説明する。
本発明において、フェリチンに内包させる無機粒子の種類は、特に限定されるものではないが、実施例においては、無機粒子として酸化第二鉄(Fe2O3)を用いた。minT1−LFへのFe2O3コアの導入は、以下のようにして行った。
次に、本願の実施例に用いた基板の作製方法について説明する。
次に、本願の実施例に用いた溶液の調製方法について説明する。
上述した洗浄を行った基板を1インチウェハートレイ中に置き、調製した溶液100μLを滴下した後、乾燥を防ぐために蓋をし、10分間静置した。その後、緩衝溶液のみを500μL滴下し、希釈された溶液を500μL吸引し除去するという工程を3回繰り返した後、同様に超純水のみを1mL滴下し、希釈された溶液を1mL吸引除去する工程を3回繰り返した後に、ビーカー中で超純水を流しながら5分間洗浄した。最後に、窒素ブローにより超純水を吹き飛ばし乾燥させた。
結合工程を行った基板に対し、高解像度電子顕微鏡(JEOL:JSM-7400F)を用いてフェリチンが内包する無機粒子コアを観察することにより、基板上のフェリチンの個数を計測した。SEM画像から200nm×200nm角の領域を切り出し、個数をカウントした。個数が100に満たない場合は3カ所の計測値を平均した。
緩衝液として50mMのMES−Trisを用い、pHを6.7、7.4、7.8、8.0、8.2に調製した緩衝液を用い、フェリチン濃度2.0mg/mL、非イオン性界面活性剤濃度Tween20 1v/v%とした溶液を調製した。
緩衝液として50mMのMES−Tris(pH7.8)、フェリチン濃度として0.5mg/mLの溶液に、非イオン性界面活性剤Tween20の濃度を0.005、0.01、0.1、1、5、10、15、20v/v%と変えた溶液を調製した。この溶液を酸化シリコン/タングステン基板上に滴下し、結合工程を行った。
緩衝液として50mMのMES−Tris(pH7.8)、フェリチン濃度として0.5mg/mL、非イオン性界面活性剤としてTween20 1v/v%の溶液を調製した。この溶液を、幅20nm、長さ200nmのタングステン細線を形成した5mm×10mmの酸化シリコン基板上に滴下し、結合工程を行った。溶液の除去工程として、容量1.5mLのエッペンドルフチューブの中に封入し、2,000Gで遠心することで溶液を除去した。minT1−LFは、細線上に幅2〜3個の列で配置された。また、酸化シリコン基板上には、基板端とシリコンかけらゴミ近傍以外にはminT1−LFは見られなかった。
Claims (4)
- フェリチンの配置方法であって、
前記配置方法は、
サブユニットN末端部に配列番号1に記載のペプチドを修飾し、金属又は金属を含む化合物からなる無機粒子を内包したフェリチンと、0.01v/v%以上10v/v%以下の非イオン界面活性剤とを含み、pHが7.4以上8.2以下の範囲にある溶液を調製する調製工程と、
表面の一部にクロム、モリブデン、およびタングステンから選択された1種の金属部分が形成された酸化シリコン基板上に前記溶液を滴下することによって、前記フェリチンを選択的に前記金属部分に結合させる結合工程と、
を包含する、配置方法。 - 前記結合工程の後に、前記溶液を除去し、前記金属部分に選択的に結合した前記フェリチンを前記酸化シリコン基板上に残す除去工程をさらに包含する、請求項1に記載のフェリチンの配置方法。
- 前記結合工程の後に、前記フェリチンを含まない溶液により前記酸化シリコン基板の表面を洗浄し、前記金属部分に選択的に結合した前記フェリチンを、前記酸化シリコン基板上の前記金属部分に残す洗浄工程をさらに包含する、請求項1に記載のフェリチンの配置方法。
- 前記結合工程の後に、前記酸化シリコン基板を加熱して前記フェリチンを分解し、前記フェリチンが内包していた無機粒子を、前記酸化シリコン基板上の前記金属部分に配置する分解工程をさらに包含する、請求項1に記載の方法。
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