JP4780549B2

JP4780549B2 - キナーゼ阻害活性を有するピロロピラジン誘導体およびその生物学的用途

Info

Publication number: JP4780549B2
Application number: JP2004528508A
Authority: JP
Inventors: ローランメイイェル; ジャンミシェルヴィエルフォン; イヴェットメッテ
Original assignee: サーントゥルナシオナルドゥラルシェルシュシャーンティフィク
Priority date: 2002-08-09
Filing date: 2003-08-08
Publication date: 2011-09-28
Anticipated expiration: 2023-08-08
Also published as: WO2004016614A2; CA2495060A1; US20080161312A1; US8106050B2; JP2006502137A; EP1388541A1; EP1527077A2; AU2003271566A1; WO2004016614A3; CA2495060C; AU2003271566A8

Description

本発明は、キナーゼ阻害活性を有するピロロピラジン誘導体およびその生物学的用途に関する。プロテインキナーゼは、ＡＴＰまたはＧＴＰをリン酸基供与体として用いて、タンパク質のセリン、スレオニンおよびチロシン残基のリン酸化を触媒する。タンパク質リン酸化は、細胞の代謝および調整経路を最終的に調節するためにその細胞によって用いられる主要な翻訳後機構（post-translational mechanism）の一つとして考えられる。

プロテインキナーゼ（ヒトゲノムにおいて推定８００）、およびそれらの等価体であるプロテインホスファターゼは、大抵のヒトの病気に影響するようである。これが、強くかつ選択的なプロテインキナーゼ阻害剤に対するスクリーニングが最近数年にわたって強化された理由である。

本発明者らは、２つのキナーゼファミリー（サイクリン依存性キナーゼ（cyclin-dependent kinases：ＣＤＫ）およびグリコーゲン・シンターゼ・キナーゼ−３（glycogen synthase kinase-3：ＧＳＫ−３））に関するそれら阻害剤の作用力に焦点を合わせた。

ＣＤＫは、細胞周期、アポトーシス、神経機能および神経変性（neurodegeneration）、転写およびエキソサイトーシスを制御することに必要とされる。

ＧＳＫ−３は、ＷＮＴシグナリング経路の必須要素であり、サイクリンＤ１およびβ−カテニンのレベルを制御することによる細胞周期調節、発生時の背腹軸形成（dorso-ventral patterning）、グリコーゲン合成に関するインシュリン作用、軸索の成長、ＨＩＶ−１Ｔａｔ媒介神経毒性、およびタウのリン酸化（アルツハイマー病の特徴）を含む複数の生理学的プロセスに必要とされる。ＣＤＫ／ＧＳＫ−３阻害剤の適用は、癌、神経変性疾患（アルツハイマー病等）、糖尿病、原生類寄生虫の増殖およびウイルス感染（ＨＩＶ、サイトメガロウイルスおよびヘルペスウイルス）に対して評価されている（１（非特許文献１））。

ＣＤＫ阻害剤は、プリン類であるオロモーシン（olomoucine）、ロスコビスチン（roscovitine）、パーバラノール（purvalanol）、ＣＶＴ−３１３、Ｃ２アルキル化プリン類であるＨ７１７およびＮＵ２０５８、ピペリジン置換プリン類であるトヨカマイシン（toyocamycin）、フラボピリドール（flavopiridol）、インジルビン類（indirubins）、パウロン類（paullones）、γ−ブチロラクトン、ヒメニアルディシン（hymenialdisine）、インデノピラゾール類（indenopyrazoles）、ピリミジン類であるＮＵ６０２７およびＣＧＰ６０４７４、ピリドピリミジン、アミノピリミジンであるＰＮＵ１１２４５５Ａ、オキシンドール類（oxindoles）、ＰＤ０１８３８１２、シンナムアルデヒド類、キナゾリン類、ファスクラプリシン（fasclaplysin）、ＳＵ９５１６およびベンゾカルバゾール類を含む（参照１（非特許文献１）、参照２〜８（非特許文献２〜８）に概観される）。ＧＳＫ−３阻害剤は、インジルビン類（indirubins）、パウロン類（paullones）、マレイミド類（maleimides）およびリチウムを含む。
「Cyclin-dependent kinases inhibitors as potential anticancer,anti-neurodegenerative,anti-viral and anti-parasitic agent」 Drug Resistance Update 2000,3,83-88 Meijer,L. 「Cyclin-dependent kinase inhibitors for treating cancer.」Med.Res.Rev.2001,21,487~498 Toogood,P.L. 「ATP-site directed inhibitors of cyckin-dependent kinases.」Curr.Med.Chem.1999,6,859~876 Gray,N;Detivaud,L;Doerig,C.;Meijer,L. 「Inhibitors of cyclin-dependent kinases as anti-cancer therapeutics.」Curr.Med.Chem.2000,7,1213~1245. Fischer,P.M.;Lane,D.P. 「Cyclin-dependent kinase inhibitors:novel anticancer agents.」Expert Opin.Investig.Drugs 2000,9,1849~1870.Pestell,R.;Mani,S.;Wange,C.;Wu,K.;Francis,R. 「Targeting hyperproliferative disorders with cyclin dependent kinase inhibitors.」Exp.Opin.Ther.Patents 2000,10,1~16. Rosiana,G.R.;Chang,Y.T. 「Cyclin-dependent kinase inhibitors:useful targets in cell cycle regulation.」J.Med.Chem.2000,43,1~18. Sielecki,T.M.;Boylan,J.F.;Benfield,P.A.;Trainor,G.L. 「Cyclin-dependent kinase and protein kinase C inhibitors: a novel class of antineoplastic agents in clinical dependent.」Cancer J.2000,6,192~212. Kaubisch,A.;Schwartz G.K.

本発明者らは、今、ＣＤＫ１／２／５およびＧＳＫ−３α／βに選択的であり、酵素学的研究および結晶構造研究により示されるように、ＡＴＰと競争してキナーゼの活性部位に結合することによって１００万分の１モル未満の範囲（sub-micromolar）で作用する新しいキナーゼファミリー阻害剤を確認した。

前記ファミリーは、ＣＤＫ（複数）および／またはＧＳＫ−３α／β脱調節を伴う病的状況において治療価値を有する。

本発明は、このため、新規なピロロピラジン誘導体に関する。

本発明はまた、前記誘導体を合成する方法に関する。

さらに別の局面によると、本発明は、前記誘導体の薬物有効成分としての使用に関する。

本発明のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体は、一般式（Ｉ）を有する。

ここで、
−Ｒ２およびＲ３は、同一または異なって、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルを示し、該アルキルは、直鎖または分枝鎖アルキルであり、置換されていてもよく、
−Ｒ６は、置換されていてもよい芳香環Ａｒまたはシクロアルキルであり、該シクロアルキルは、アリール基によって置換されていてもよく、このアリール基もまた置換されていてもよく、
−Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、ＣＨ_２−シクロアルキル、ＣＨ_２−Ａｒであり、
−Ｚは、ＨまたはＣＨ_３である。

好ましくは、Ｒ２およびＲ３、および／またはＺおよび／またはＲ７は、Ｈではない。

Ａｒは、好ましくは、フェニル、ナフチル、フリル、チエニル、ピリジル、シクロプロピルフェニル、フェニルジオキソリルである。

「シクロアルキル」は、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルである。

アルキル基、芳香環またはシクロアルキルの置換基は、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ_３）、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｎ（Ｈ，アルキル）、Ｎ（アルキル）_２、Ｏ−アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、ＣＯＮＨ_２、ＣＯＮ（Ｈ，アルキル）、ＣＯＮ（アルキル）_２、ＮＨＣＯＮＨ_２、ＮＨＣＯＮ（Ｈ，アルキル）、ＮＨＣＯＮ（アルキル）_２、Ｎ（アルキル）ＣＯＮＨ_２、Ｎ（アルキル）ＣＯＮ（Ｈ，アルキル）、Ｎ（アルキル）ＣＯＮ（アルキル）_２、アルコキシ、ＣＮ、Ｏ−ＳＯ_２−ＮＨ_２、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ＳＨ、Ｓ−アルキルの１以上からなる群において選択される。１以上の置換基が存在していてもよい。

「アルキル」は、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、異性体を含む。

「アルコキシ」は、Ｃ１−Ｃ６アルキル基を有する。

「Ａｌｋ．」は、Ｃ１−Ｃ６アルキレン基であり、ｎは、１〜６であり、「ｈａｌ．」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＦ_３である。

前記ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン類（以後、アロイシン類（aloisines）とも称する）は、強力なキナーゼ阻害性骨格であり、ＣＤＫ（複数）およびＧＳＫ−３α／βに対して選択的であり、１００万分の１モル未満の範囲でそれらのほとんどに対して作用する。

反応速度論研究、およびＣＤＫ／アロイシン類の共結晶構造の解明は、アロイシン類が触媒サブユニットへのＡＴＰ結合の競争阻害によって作用することを立証する。それらは、骨格のＬｅｕ８３の窒素および酸素原子の２つとの水素結合を通じてＡＴＰ−結合ポケットと相互作用する。

前記アロイシン類はまた、後述の複数の実施例によって例示されるように、Ｇ１およびＧ２の双方において細胞を抑制することによって細胞増殖を阻害する点で特徴付けられる。

好ましいピロロピラジン誘導体は、式（ＩＩ）を有する。

ここで、
− ６位のフェニル基は、１、２または３つのＲ置換基によって置換され、該Ｒは、
− Ｈ、ＯＨ、アルキル、−Ｏ−アルキル、ｈａｌ．、−ＮＨ_２、−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｎ（アルキル）_２、−Ｏ−ＳＯ_２−ＮＨ_２、−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−アルキル、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（Ｈ，アルキル）およびＣＯＮ（アルキル）_２
を含む群内で選択され、
− Ｒ７は、Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎｈａｌ．、−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキルまたはａｌｋ．−Ａｒであり、そして、
− Ｚは、ＨまたはＣＨ_３である。

好ましい基において、Ｚおよび／またはＲ７は、Ｈとは異なっている。

前記ファミリーの好ましい群（group）は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１０μｍである。それらは、
Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ｈａｌ．またはアルキルであり、かつ、Ｒ７＝Ｈである化学式（ＩＩ）の誘導体または、Ｒ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である誘導体、または、
Ｒ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２、好適には、ｈａｌ．またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであり、かつ、ｎ＝１〜３であり、かつ、Ｚ＝Ｈである誘導体に対応する。

前記化学式（ＩＩ）のファミリーのより好ましい群は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦５μｍである。

それらは、Ｒ＝Ｈ、ｐ−アルコキシ、ｐ−およびｍ−アルコキシ、ｐ−ＯＨ、ｐ−ｈａｌ．、ｐ−アルキルまたはｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２またはＨであり、かつ、Ｚ＝Ｈであり、かつ、ｎ＝１〜３である、化学式（ＩＩ）の誘導体に対応する。

前記群の好ましい誘導体は、
−フェニル基は無置換であり、かつ、Ｒ７はＨであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、
−ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２であるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである
化合物（ａ〜ｅは、フェニル基上のＲの位置に対応する）に対応する。

前記化学式（ＩＩ）のファミリーのさらにより好ましい群は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１μｍである。

それらは、Ｒがｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２またはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７がアルキルである化学式（ＩＩ）の誘導体に対応する。

好ましい誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである化合物に対応する。

特により好ましい群では、誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μｍである。特に有利な誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

前記化学式（ＩＩ）のファミリーの別の好ましい群は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＣＤＫ５／ｐ２５またはＧＳＫ−３に対して、または、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１０μＭである。

本発明は、特に、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１０μＭである誘導体を有する群に関する。

このような群では、Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ｈａｌ．、アルキルまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である。

前記群の好ましい誘導体は、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦５μＭである。前記誘導体では、ＲはＨ、ｐ−アルコキシ、ＯＨ、ｈａｌ．またはＯ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である。

有利な誘導体は、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｄおよびＲ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ｈａｌ．、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｈａｌ．またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、またはＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルをである。

前記群のより好ましい誘導体は、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭである。このような誘導体では、
Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−およびｍ−ジアルコキシ、ｈａｌ．、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝Ｈまたはアルキルである。

特に有利な誘導体は、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

さらにより好ましい誘導体は、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭである。有利な誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

本発明の別の群では、誘導体は、ＣＤＫ１およびＧＳＫ３に対してＩＣ_５０≦１０μＭである。

前記群の誘導体では、Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ｈａｌ．、アルキル、ＣＮまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、ａｌｋ．−シクロアルキルまたはａｌｋ．−アリールである。

前記ファミリーの好ましい群では、誘導体は、ＣＤＫ１およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦５μＭである。

有利な誘導体では、Ｒ＝Ｈ、ｐ−アルコキシ、ｐ−およびｍ−アルコキシ、ｐ−ＯＨ、ｐ−ｈａｌ．、ｐ−ＯＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはｐ−ＣＮであり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキルまたは（ａｌｋ．）_ｎ−アリールである。

対応する好ましい誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨ、ｈａｌ．、アルキルまたはＣＮであり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２であるか、または、ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃ＝Ｈであり、かつ、Ｒｄ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝ｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝（ａｌｋ．）_ｎ−アリールである。

前記ファミリーのさらにより好ましい群では、誘導体は、ＣＤＫ１およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭである。

対応する誘導体は、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｐ−ｈａｌ．、Ｈまたはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキルまたは（ａｌｋ．）_ｎ−アリールである。

好ましい誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨ、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝アルキル、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２またはＣＨ_２−シクロアルキルである。

前記ファミリーの特により好ましい群では、誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦０．５μＭである。

有利な誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

本発明はまた、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＣＤＫ５／ｐ２５に対してＩＣ_５０≦１０μＭである誘導体を有する群に関する。

好ましい誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦５μＭである。

このような誘導体では、Ｒは、好ましくは、Ｈ、ｏ−アルコキシ、ｐ−アルコキシ、ｍ−およびｐ−アルコキシ、ｐ−ＯＨ、ｐ−ｈａｌ．またはｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７はＨ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である。

特に有利な誘導体は、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｄおよびＲ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ＝ＯＨであり、かつ、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｄおよびＲ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２またはアルキルであるか、または、ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２またはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

さらにより好ましい群では、誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１μＭである。

有利な誘導体は、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｐ−ｈａｌ．またはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

特に好ましい誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

特に好ましい群では、誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭである。

好ましい誘導体では、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである。

ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１０μＭである別の好ましいファミリーは、化学式（ＩＩＩ）を有し、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対して５μＭ以下のものすらある。

さらに別の好ましいファミリーは、化学式ＩＶを有し、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦５μＭである。

前記誘導体は、興味深いことに、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭである。

本発明はまた、化学式（Ｖ）のアルキルピラジン類を反応させる工程を含む前記アロイシン類を合成する方法に関する。

ここで、
Ｒ１およびＲ３は、上記定義の通りであり、Ａｌｋｙｌは、芳香族ニトリル類Ｒ６ＣＮを有するＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、Ｒ６は、上記定義の通りである。

有利には、化学式（Ｖ）のアルキルピラジン誘導体は、ブチルリチウムまたはその類似物を含む有機溶媒に、０℃を超えない温度、好ましくは、約−４０℃の温度で加えられる。結果として生じる溶液は、３０分〜約１時間攪拌される。次いで、ニトリル誘導体が加えられ、その溶液は、３０分〜約１時間、さらに、周囲温度（２０℃前後）で約１〜２０時間攪拌される。

加水分解後、生じる誘導体が回収され、所望であれば、精製および結晶化される。

アルキルピラジン類は、ピラジニルメチルリチウムをブロモアルカン類、およびベンゾニトリルと反応させることによって得られてもよい。メトキシ化合物の脱メチル化は、酸性条件で環流させることによって達成され得る。脱メチル化に要求される時間は、３〜２０時間で変動された。

上記に言及したように、そして、後述の複数の実施例に例示されるように、前記化合物は、ＣＤＫ１および／またはＣＤＫ５および／またはＧＳＫ−３を強力に阻害する。

前記キナーゼ（これは、神経変性病（neurodegeneration disease）における基質の過リン酸化に必要な主要なキナーゼを代表する）に対して作用させることによって、前記誘導体は、対応する状態を予防および治療するための薬物の有効成分として大きな興味対象になる。それらはまた、抗増殖作用を有する。

したがって、本発明は、有効成分として少なくとも一つの上記定義の誘導体の有効量を、医薬的に許容される担体と組み合わせて含む医薬組成物に関する。

前記担体は、投薬形式に応じて固体または液体であってもよい。

前記医薬組成物は、アルツハイマー病またはパーキンソン病等の神経変性病の治療または予防に有用である。本発明はまた、癌等の増殖疾患または単細胞または多細胞寄生生物の増殖を治療するための前記医薬組成物の使用に関する。他の用途は、増殖に関連する心臓血管病に対する前記医薬組成物の使用を含む。それらはまた、ウイルス感染（ＨＩＶ、サイトメガロウイルスおよびヘルペスウイルス）を治療するためのそれらの使用を含む。本発明はまた、除草剤としての前記誘導体の使用に関する。

前記医薬組成物は、種々の方式で、例えば、経口的に、局所的に、注射（静脈内、皮下、腹腔内、または、直腸）により投薬され得る。それらは、より特定的には、経口ルートによって投薬される。

経口ルートによる投薬のために、口内錠（lozenges）、圧縮錠剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、滴剤、シロップ剤、懸濁剤または乳剤が用いられてもよい。これらの組成物は、有利には、投与量単位あたり１００〜１０００ｍｇ、好ましくは、３００〜６００ｍｇの有効成分を含む。

投薬の他の方式は、静脈内、皮下または筋肉内のルートに注射可能であり、消毒されたまたは消毒可能な溶液から処方された溶液を含む。それらはまた、懸濁剤または乳剤であってもよい。

これらの注射可能な方式は、投与量単位あたり１００〜１０００ｍｇ、好ましくは、３００〜６００ｍｇの有効成分を含む。

目安として、必要な患者に用いられ得る投与量は、以下の投与量に対応する。：例えば、神経変性疾患の治療のために１００〜１０００ｍｇ／日が、こうして、１日あたり１〜４回患者に投薬される。

本発明はまた、有効成分が上記定義の式（Ｉ）の化合物からなる生物学的試薬に関する。

これらの試薬は、細胞分割およびリン酸化機構の研究において参照または基準として用いられ得る。

本発明の他の特徴および利点が、図１〜７を参照しながら、以下に開示された複数の実施例において与えられる。

（Ａ．化学）
融点は、Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ９２００装置によりオープンキャピラリーチューブにおいて測定され、無修正とした。ＩＲスペクトルは、ＡＴＩＭａｔｔｓｏｎｇｅｎｅｓｉｓｓｅｒｉｅｓＦＴＩＲによりＫＢｒにおいて得られた。^１ＨＮＭＲは、ＶａｒｉａｎＥＭ３６０Ａ分光計（６０ＭＨｚ）により記録され、ケミカルシフト（ｐｐｍ）は、ＴＭＳに関して記録された。シグナルは、以下のように表される。：ｂｓ（ブロード・シングレット：broad singlet）、ｓ（シングレット：singlet）、ｄ（ダブレット：doublet）、ｄｄ（ダブレット・オフ・ダブレット：doublet of doublets）、ｔ（トリプレット：triplet）、ｍ（マルチプレット：multiplet）。マススペクトルは、ＬＫＢ２０９（７０ｅＶでのＥＩ）により決定された。元素微量分析は、元素記号によって示され、その結果は、他の記載がなければ理論値の±０．４％の範囲内であった。それらは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ２４０装置により行われた。

ブチルリチウムまたは水素化ナトリウムを必要とする全ての実験は、無水無酸素−窒素の雰囲気の下、無水装置中で実施された。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）は、ベンゾフェノン−ナトリウムから蒸留された。ジイソプロピルアミンおよびメチルヘテロ環類は、蒸留され、酸化バリウムで保存された。ブチルリチウム（１．６Ｍヘキサン溶液）は、Ａｃｒｏｓによって供給され、ジフェニル酢酸に対する滴定によって分析された。アルキルおよびアラルキルピラジン類は、通常の手順にしたがって合成された。Ｇｒａｃｅｓｉｌｉｃａｇｅｌ６０Ａ２０〜４５μｍがカラムクロマトグラフィーのために採用された。２−フェニルインドールは、Ａｌｄｒｉｃｈから購入され、受け取った状態で使用された。

（ａ−アロイシン類合成の一般法）
ジイソプロピルアミン（２．２３ｇ；０．０２２モル）（ＴＨＦ（５０ｍＬ）中）を０℃に冷却し、ブチルリチウム（０．０２２モル）を滴下して加えた。０℃で３０分攪拌した後、溶液を−４０℃に冷却してからアルキルピラジン誘導体（０．０２モル）（ＴＨＦ（２０ｍＬ）中）を加えた。３０分後、ニトリル誘導体Ｒ６−ＣＮ（０．０１モル）（ＴＨＦ（２０ｍＬ）中）を加え、溶液を−４０℃で３０分、さらに、２０℃で１時間〜２０時間攪拌し、その後、１０％のＮＨ_４Ｃｌ水溶液で加水分解した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、減圧下に濃縮した。粗生成物をシリカゲルによるクロマトグラフィー精製に付し、塩化メチレン、次いで、酢酸エチルで溶離した。必要な場合には、生成物を、エタノールまたは塩化メチレン−エタノール混合物から結晶化した。

（ｂ−実験結果）
６−（２−フリル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１、ＲＰ１９）：融点２３２．６℃；ＩＲ３１５７、３１４３、３１０２ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）６．５０−６．７０（ｍ，１Ｈ）、６．８０（ｓ，１Ｈ）、７．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、７．８０（ｂｓ，１Ｈ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１０Ｈ_７Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（２−チエニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２、ＲＰ６）：融点２６０．３℃；ＩＲ３２０８、３１５０、３０６８ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）６．９５（ｂｓ，１Ｈ）、７．１５−７．４５（ｍ，１Ｈ）、７．７５（ｓ，１Ｈ）、７．８５（ｂｄ，１Ｈ）、８．２５および８．４５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、１２．８５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１０Ｈ_７Ｎ_３Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（３−チエニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３、ＲＰ１２８）：融点２３０℃（分解）；ＩＲ３０９５、３０５０、３０００ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）６．９５（ｓ，１Ｈ）、７．６０−７．７５（ｍ，２Ｈ）、８．１０−８．２０（ｍ，２Ｈ）、８．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、１２．３０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１０Ｈ_７Ｎ_３Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（２−ピリジル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４、ＲＰ１３）：融点２３３．１℃；ＩＲ３１００、３０５９ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．３０−７．６０（ｍ，２Ｈ）、７．９５−８．２０（ｍ，２Ｈ）、８．３０および８．４５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ）、８．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ）、１２．６５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１１Ｈ_８Ｎ_４）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−フェニル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（５、ＲＰ７）：融点２１６℃（文献融点２１５〜２１６℃）；ＩＲ３１３５、３０５０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．００（ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｍ，３Ｈ）、７．９０（ｍ，２Ｈ）、８．２５および８．５０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１１．９０（ｂｓ，１Ｈ）；ＭＳｍ／ｅ２０９（Ｍ^＋）（１００）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_９Ｎ_３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（１−ナフチル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（６、ＲＰ１７）：融点２１６．４℃；ＩＲ３２１４、３１１０、３０４８ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）６．９５（ｓ，１Ｈ）、７．５０−７．８５（ｍ，４Ｈ）、７．９５−８．４０（ｍ，４Ｈ）、８．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１２．０５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１１Ｎ_３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

３−メチル−６−フェニル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（８、ＲＰ１８）：融点２６１．８℃；ＩＲ３１０４、３０３０、２９８５、２９１５、２８７８、２８０１ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．５５（ｓ，１Ｈ）、７．１５（ｓ，１Ｈ）、７．３５−７．６０（ｍ，３Ｈ）、７．７５−８．１０（ｍ，２Ｈ）、８．４０（ｓ，１Ｈ）、１２．３０（ｂｓ，１Ｈ）；ＭＳｍ／ｅ２０９（Ｍ^＋）（１００）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_１１Ｎ_１３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−［１−（４−クロロフェニル）−１−シクロプロピル］［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（９、ＲＰ１２４）：融点１８９．７℃；ＩＲ３２１０、３１２５、３０４９、３０００、２９４０、２８５０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．５０（ｄ，４Ｈ）、６．１５（ｓ，１Ｈ）、７．３０（ｓ，４Ｈ）、８．１０および８．２５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．００（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１５Ｈ_１２Ｎ_３Ｃｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（２−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１０、ＲＰ９）：融点１５６．９℃；ＩＲ３０８０、３０５１、２９２５、２８８７、２８３０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．９０（ｓ，３Ｈ）、６．９５−７．３５（ｍ，４Ｈ）、７．８０−８．１０（ｍ，１Ｈ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１１．９０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_１１Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（３−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１２、ＲＰ１０）：融点１９５．７℃；ＩＲ３１２３、２９６８、２９２１、２８３６ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．９５（ｓ，３Ｈ）、６．９０−７．８０（ｍ，５Ｈ）、８．２５および８．４０（２ｄ，それそれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１２．５５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_１１Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１４、ＲＰ１１）：融点２５６．１℃（文献２３８〜２４０℃分解）；ＩＲ３１４３、３０３５、２９５９、２８５７ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．８０（ｓ，３Ｈ）、６．９５−７．１０（ｍ，３Ｈ）、８．００（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．１５および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、１２．３５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_１１Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（３，５−ジメトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１６、ＲＰ２１）：融点２１６．７℃；ＩＲ３１５０、２９５０、２８８０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．９０（ｓ，６Ｈ）、６．５５（ｓ，１Ｈ）、７．２０（ｍ，３Ｈ）、８．１５および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１２．４０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１４Ｈ_１３Ｎ_３Ｏ_２）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１７、ＲＰ１６）：融点２３１．７℃；ＩＲ３０９８、２９６４、２９３９、２８３４ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．９５（ｓ，６Ｈ）、７．２５（ｓ，１Ｈ）、７．４０（ｂｓ，２Ｈ）、８．２５および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２Ｈｚ）、１２．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１５Ｈ_１５Ｎ_３Ｏ_３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−フルオロフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１８、ＲＰ７６）：融点２４４℃分解；ＩＲ３１４９ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．０５−７．５０（ｍ，３Ｈ）、７．６５−８．１０（ｍ，２Ｈ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、１２．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_８Ｎ_３Ｆ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−クロロフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（１９、ＲＰ１４）：融点２５０℃分解（文献２５０℃分解）；ＩＲ３３００ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２０（ｓ，１Ｈ）、７．５５および８．０５（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、１２．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_８Ｎ_３Ｃｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（３，５−ジクロロフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２０、ＲＰ１５）：融点２５２℃分解；ＩＲ３２１６、３１６４、３１１４ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．３５（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｍ，１Ｈ）、８．１５（ｄ，２Ｈ）、８．２５および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）、１２．４０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_７Ｎ_３Ｃｌ_２）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−ブロモフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２１、ＲＰ７７）：融点２５６℃分解；ＩＲ３２１１、３１０９ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．２０（ｓ，１Ｈ）、７．７０および８．００（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１２．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_８Ｎ_３Ｂｒ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−トリフルオロメチルフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２２、ＲＰ８）：融点２３８℃分解；ＩＲ３１６４ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．３５（ｓ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．１０−８．５０（ｍ，４Ｈ）、１２．７０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_８Ｎ_３Ｆ_３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−シアノフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２３、ＲＰ２０）：融点３４０℃分解；ＩＲ３４６４、３０５６、２２０５ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）７．４５（ｓ，１Ｈ）、７．９０−８．６５（ｍ，６Ｈ）、１２．８５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_８Ｎ_４）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−メチルフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２４、ＲＰ７８）：融点２６５．４℃；ＩＲ３１５０、３１２０、２９４０、２９２０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．４０（ｓ，３Ｈ）、７．０５（ｓ，１Ｈ）、７．３０および７．９０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．１５および８．３０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、１２．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_１１Ｎ_３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−［４−（２−ジオキソリル）−フェニル］［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２５、ＲＰ１２２）：融点２６５．６℃；ＩＲ３１２０、２９８０、２８８９ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．９５（ｓ，４Ｈ）、５．７５（ｓ，１Ｈ）、７．１５（ｓ，１Ｈ）、７．５０および８．０５（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１５Ｈ_１３Ｎ_３Ｏ_２）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−ジメチルアミノフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２６、ＲＰ１２９）：融点２７１℃分解；ＩＲ３２１１、３１５７、２９００、２８１８ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）３．１５（ｓ，６Ｈ）、６．８０−６．９０（ｍ，３Ｈ）、７．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．０５および８．２０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．１５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１４Ｈ_１４Ｎ_４）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−メトキシフェニル）−７−メチル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２７、ＲＰ９５）：融点２２１．６℃；ＩＲ３１４２、３０４３、２９５５、２８４４ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．４０（ｓ，３Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、７．１０および７．７０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、８．１５および８．３０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、１２．００（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１４Ｈ_１３Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（３，４−メトキシフェニル）−７−メチル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（２９、ＲＰ１２３）：融点２３０．２℃；ＩＲ３１０２、２９６３、２９２０、２８５０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．５５（ｓ，３Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、３．８５（ｓ，３Ｈ）、７．００−７．４０（ｍ，３Ｈ）、８．１５および８．３０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１５Ｈ_１５Ｎ_３Ｏ_２）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−クロロフェニル）−７−メチル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３０、ＲＰ８０）：融点２６０℃分解；ＩＲ３１４８、２９２０、２８５３ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．４０（ｓ，３Ｈ）、７．４０−７．８５（ｍ，４Ｈ）、８．１５および８．３０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１２．００（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_１０Ｎ_３Ｃｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−ジメチルアミノスルファモイルオキシフェニル）−７−メチル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３１、ＲＰ１２５）：融点２３５．１℃；ＩＲ３１４０、３０４５、２９７０、２９２５、２８８０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．４５（ｓ，３Ｈ）、２．９５（ｓ，６Ｈ）、７．４５および７．９０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．３０−８．５０（ｍ，２Ｈ）、１２．２５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１５Ｈ_１６Ｎ_４ＳＯ_３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−メトキシフェニル）−７−プロピル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３２、ＲＰ１２７）：融点１８８．５℃；ＩＲ３２１５、３１５８、３０５５、２９５８、２９３４、２８６６、２８３６ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、１．７０（ｍ，２Ｈ）、２．８０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、７．０５および７．６５（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．１５および８．３０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．００（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１７Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−アリル−６−（４−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３４、ＲＰ１１０）：融点１９３．８℃；ＩＲ３１３５、３０６３、２９６２、２９３４、２８７８、２８３８ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）３．６５−３．８５（ｍ，２Ｈ）、３．９０（ｓ，３Ｈ）、４．８０−５．２０（ｍ，２Ｈ）、５．７６−６．４５（ｍ，１Ｈ）、７．１０および７．７５（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．０５および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、１１．８５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１５Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−（３−クロロプロピル）−６−（４−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３５、ＲＰ１２６）：融点１７８℃分解；ＩＲ３２２０、３１５９、３０５０、３０００、２８３５ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．００−２．６０（ｍ，２Ｈ）、３．００（ｍ，２Ｈ）、３．６０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、７．１０および７．７０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．１５および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．００（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１６Ｎ_３ＯＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−イソプロピル−６−（４−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３６、ＲＰ１０２）：融点２０４．８℃；ＩＲ３１３５、３０５０、２９５７、２９２４、２８５９ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．３０（ｄ，６Ｈ）、３．５０（ｍ，１Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、７．１０および７．５５（２ｄ，それぞれ２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、８．１５および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、１１．７５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１７Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−クロロフェニル）−７−イソプロピル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３７、ＲＰ９０）：融点２０８．６℃；ＩＲ３１３０、３０５１、２９７７、２９２５、２８６９ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）１．５０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、３．２５（ｍ，１Ｈ）、７．６０（ｓ，４Ｈ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１２．００（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１５Ｈ_１４Ｎ_３Ｃｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−ｎ−ブチル−６−（４−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３８、ＲＰ１０６）：融点１８３．８℃；ＩＲ３１４３、３０５０、２９５６、２９３４、２８７０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．００（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．６０（ｍ，４Ｈ）、３．００（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、３．９０（ｓ，３Ｈ）、７．１０および７．７０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）、８．００および８．３０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、１１．７５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１７Ｈ_１９Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−ｎ−ブチル−６−（４−クロロフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４０、ＲＰ１０８）：融点２００℃；ＩＲ３１６１、３０４８、２９５４、２９２４、２８５６ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．９０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、１．２０−２．００（ｍ，４Ｈ）、２．９５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、７．６５（ｓ，４Ｈ）、８．２５および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１２．０５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１６Ｎ_３Ｃｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−ｎ−ヘプチル−６−（４−メトキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４１、ＲＰ１１１）：融点１３２．５℃；ＩＲ３１４２、３０６４、２９５５、２９２５、２８５０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）０．９０−２．００（ｍ，１３Ｈ）、３．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．９０（ｓ，３Ｈ）、７．０５および７．７０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．００および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．０５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_２０Ｈ_２５Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−メトキシフェニル）−７−メチルシクロプロピル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４２、ＲＰ１０４）：融点１９３．９℃；ＩＲ３１４２、３０８０、３０４６、３０００、２９３１、２８２０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．２０−０．５０（ｍ，４Ｈ）、１．００−１．４０（ｍ，１Ｈ）、２．９０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、３．８５（ｓ，３Ｈ）、７．１５および７．７５（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．２０および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、１２．２０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１７Ｈ_１７Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−ベンジル−６−フェニル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４４、ＲＰ９２）：融点２０９．８℃；ＩＲ３１４４、３０５６、３０２４、２９２９、２８７１ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）４．３０（ｓ，２Ｈ）、７．２０（ｓ，６Ｈ）、７．７５−８．２５（ｍ，４Ｈ）、８．３０および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．２５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１９Ｈ_１５Ｎ_３）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−ベンジル−６−（４−クロロフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４５、ＲＰ９１）：融点２６６．３℃；ＩＲ３１３８、３０５０、３０２５、２９２８、２８５８ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）４．２５（ｓ，２Ｈ）、７．１５（ｓ，５Ｈ）、７．５５（ｓ，４Ｈ）、８．２０および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、１２．２５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１９Ｈ_１４Ｎ_３Ｃｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−メトキシフェニル）−７−メチルシクロヘキシル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４６、ＲＰ９８）：融点２２０．３℃；ＩＲ３４３４、３１３５、２９２１、２８５０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．８５−１．８０（ｍ，１１Ｈ）、２．８０（ｄ，２Ｈ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）、７．１５および７．７０（２ｄ，それぞれ２Ｈ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．１５および８．３５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．５Ｈｚ）、１１．９０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_２０Ｈ_２３Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−クロロフェニル）−７−メチルシクロヘキシル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（４７、ＲＰ９９）：融点２０３．５℃；ＩＲ３１４２、３０４８、２９２８、２８４７ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．８０−１．７５（ｍ，１１Ｈ）、２．８０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ）、７．６５（ｓ，４Ｈ）、８．２０および８．４０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、１２．１０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１９Ｈ_２０Ｎ_３Ｃｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

（ｃ．メトキシ置換６−フェニル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン類の脱メチル化の一般法）
まず、痕跡量の５０％の次リン酸により臭化水素酸を再蒸留した。：４８％臭化水素酸の各１００ｇに対して１ｇ。メトキシ化合物（０．００３モル）を臭化水素酸（２０ｍｌ）とともに加熱した。前留水（aqueous forerun）を除去した後、温度は１２６℃に達する。脱メチル化に要する時間は、３〜１０時間で変動する。過剰の臭化水素酸を減圧下に除去し、粗生成物をエタノールから結晶化した。

６−（２−ヒドロキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン臭化水素酸塩（１１、ＲＰ１０９）：融点２５０℃分解；ＩＲ３４１９、３３５４、３０９０、２７１０、２６４１ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）５．８０（ｓ，３Ｈ）、６．８０−７．３０（ｍ，４Ｈ）、７．７０−８．００（ｍ，１Ｈ）、８．４０（ｂｓ，３Ｈ）、１２．８５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_９Ｎ_３Ｏ，ＨＢｒ，Ｈ_２Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（３−ヒドロキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン臭化水素酸塩（１３、ＲＰ１３４）：融点２５８℃分解；ＩＲ３４４８、３１３７、３０８５、２７００、２６３０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）６．７０−７．５０（ｍ，７Ｈ）、８．６５（ｂｓ，２Ｈ）、１３．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_９Ｎ_３Ｏ，ＨＢｒ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−ヒドロキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン臭化水素酸塩（１５、ＲＰ２６）：融点２５５℃分解；ＩＲ３４４８、３１７６、３０６０ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）６．６５−６．８５（ｍ，４Ｈ）、７．７０および７．８５（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．１５および８．２５（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ）、９．６５（ｓ，１Ｈ）、１２．１０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１２Ｈ_９Ｎ_３Ｏ，ＨＢｒ，Ｈ_２Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−ヒドロキシフェニル）−７−メチル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン臭化水素酸塩（２８、ＲＰ９６）：融点２６２℃分解；ＩＲ３４６５、３１４３、３０９０、２７９６、２７５９ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）２．４５（ｓ，３Ｈ）、７．００および７．７０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．５０（ｂｓ，２Ｈ）、９．８０（ｓ，２Ｈ）、１３．００（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１３Ｈ_１１Ｎ_３Ｏ，ＨＢｒ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−ヒドロキシフェニル）−７−ピロピル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン臭化水素酸塩（３３、ＲＰ１３２）：融点２４４℃分解；ＩＲ３１８７、３１００、２９６５、２８７３、２７９８ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．８５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、１．３５−１．９０（ｍ，２Ｈ）、３．１０−２．７５（ｍ，２Ｈ）、７．２０および７．６５（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．５０（ｓ，２Ｈ）、９．８（ｓ，２Ｈ）、１３．１（ｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１５Ｈ_１５Ｎ_３Ｏ，ＨＢｒ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

７−ｎ−ブチル−６−（４−ヒドロキシフェニル）［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン（３９、ＲＰ１０７）：融点２８１．４℃；ＩＲ３１３４、３１００、２９４６、２９２４、２８６７ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）０．９０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、１．２０−１．９０（ｍ，４Ｈ）、２．９０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、６．９５および７．６０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ）、８．１５および８．３０（２ｄ，それぞれ１Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ）、９．８０（ｂｓ，１Ｈ）、１１．８０（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１７Ｎ_３Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

６−（４−ヒドロキシフェニル）−７−メチルシクロプロピル［５Ｈ］ピロロ［２，３−ｂ］ピラジン臭化水素酸塩（４３、ＲＰ１１２）：融点２６０℃分解；ＩＲ３４８２、３３３５、３０６４、２９８３ｃｍ^−１；^１ＨＮＭＲ δ（６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）１．６０（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ）、２．００−２．６０（ｍ，３Ｈ）、２．９０−３．６０（ｍ，４Ｈ）、７．０５および７．９０（２ｄ，それぞれ２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．５５−８．８０（ｍ，２Ｈ）、１３．４５（ｂｓ，１Ｈ）。元素分析（Ｃ_１６Ｈ_１５Ｎ_３Ｏ，ＨＢｒ，Ｈ_２Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。

（Ｂ．生化学）
（生化学試薬）
オルトバナジン酸ナトリウム、ＥＧＴＡ（ethylene glycol bis(2-aminoethylether)tetraacetic acid）、ＥＤＴＡ（ethylendiaminetetraacetic acid）、Ｍｏｐｓ（3-(N-morpholino)propanesulfonic acid）、β−グリセロリン酸塩、フェニルリン酸塩、フッ化ナトリウム、ジチオトレイトール（dithiothreitol：ＤＴＴ）、グルタチオン−アガロース、グルタチオン、ウシ血清アルブミン（bovine serum albumin：ＢＳＡ）、ニトロフェニルリン酸塩、ロイペプチン、アプロチニン、ペプスタチン、ダイズトリプシンインヒビター、ベンズアミジン、ヒストンＨ１（タイプＩＩＩ−Ｓ）が、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌｓから得られた。［γ−^３２Ｐ］−ＡＴＰ（ＰＢ１６８）がＡｍｅｒｓｈａｍから得られた。ＧＳ−１ペプチドは、配列番号１ＹＲＲＡＡＶＰＰＳＰＳＬＳＲＨＳＳＰＨＱＳＰＥＤＥＥＥを有する。

（緩衝液）
均質化緩衝液：６０ｍＭのβ−グリセロリン酸塩、１５ｍＭのｐ−ニトロフェニルリン酸塩、２５ｍＭのＭｏｐｓ（ｐＨ７．２）、１５ｍＭのＥＧＴＡ、１５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのバナジン酸ナトリウム、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのフェニルリン酸塩、１０μｇのロイペプチン／ｍｌ、１０μｇのアプロチニン／ｍｌ、１０μｇのダイズトリプシンインヒビター／ｍｌおよび１００μＭのベンズアミジン。

緩衝液Ａ：１０ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、２５ｍＭのトリス（tris(hydroxymethyl)aminomethane:Tris）−ＨＣｌｐＨ７．５、５０μｇのヘパリン／ｍｌ。

緩衝液Ｃ：ＥＧＴＡが５ｍＭであり、ＮａＦを含まず、プロテアーゼ阻害剤を含まない以外は均質化緩衝液。

Ｔｒｉｓ−ＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ−Ｔｗｅｅｎ−２０（ＴＢＳＴ）：５０ｍｌのトリス（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％のトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）−２０。

ＨｙｐｏｔｏｎｉｃＬｙｓｉｓＢｕｆｆｅｒ（ＨＬＢ）：５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１％のノニデット−Ｐ４０、５ｍＭのＤＴＴ、１ｍＭのＥＧＴＡ、２０ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのオルトバナジン酸塩、５μＭのミクロシスチン、ロイペプシン、アプロチニンおよびペプスタチンをそれぞれ１００μｇ／ｍｌ。

（キナーゼ調製およびアッセイ）
キナーゼ活性は、３０℃で、最終的なＡＴＰ濃度が１５μＭとなるように、（別の記載がなければ）緩衝液ＡまたはＣにおいてアッセイされた。ブランク値が差し引かれ、１０分のインキュベートの間に取り込まれたリン酸塩のｐモルとして活性が計算された。活性は、通常、最大活性、すなわち、阻害剤がないときの％で表現される。コントロールは、ジメチルスルホキシドの適切な希釈液で行われた。２，３の場合には、基質のリン酸化は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）後のオートラジオグラフィーによって評価された。

ＧＳＫ−３α／βは、ブタの脳から精製するか、または、昆虫のＳｆ９細胞を圧搾し、これを精製するかのいずれかによって得られた。１ｍｇＢＳＡ／ｍｌの１０ｍＭＤＴＴで１／１０００に希釈した後、これは、基質としての５μｌの４０μＭＧＳ−１ペプチドで、緩衝液Ａにおいて、１５μＭの［γ−^３２Ｐ］ＡＴＰ（３，０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１ｍＣｉ／ｍｌ）の存在下に、３０μｌの最終容量でアッセイされた。３０℃で３０分インキュベートした後、２５μｌの一定分量の上澄みを、一片が２．５×３ｃｍのＷｈａｔｍａｎＰ８１ホスホセルロースペーパー上に点在させ、２０秒後、フィルタを５回（各回、少なくとも５分）、（１０ｍｌのリン酸／１リットルの水）の溶液で洗浄した。湿ったフィルタを、１ｍｌのＡＣＳ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）シンチレーション流体の存在下に計数した。

ＣＤＫ／サイクリンＢは、均質化緩衝液において、Ｍ期のヒトデ（Marthasterias glacialis）の卵母細胞から抽出し、そして、ｐ９^{ＣＫＳｈｓ１}−セファロースビーズを用いたアフィニティ・クロマトグラフィによって精製する（遊離のｐ９^{ＣＫＳｈｓ１}によって溶離された）ことにより得られた。キナーゼ活性は、緩衝液Ｃにおいて、１ｍｇのヒストンＨ１／ｍｌで、１５μＭの［γ−^３２Ｐ］ＡＴＰ（３，０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１ｍＣｉ／ｍｌ）の存在下に、３０μｌの最終容量でアッセイされた。３０℃で１０分インキュベートした後、２５μｌの一定分量の上澄みを、Ｐ８１ホスホセルロースペーパー上に点在させ、上記のように処理した。

ＣＤＫ５／ｐ２５は、等量の組み換え哺乳動物のＣＤＫ５およびｐ２５（大腸菌（E.coli）において発現された）をＧＳＴ（Glutathion-S-transferase）融合タンパク質と混合することによって再構成し、そして、グルタチオン−アガロースを用いたアフィニティ・クロマトグラフィーによって精製することにより得られた（ｐ２５は、ｐ３５（３５ｋＤａのＣＤＫ５活性化因子）の不完全な異形である）。その活性は、緩衝液Ｃにおいて、ＣＤＫ１／サイクリンＢについて記載されたようにしてアッセイされた。

他のキナーゼは、参照（９）、（１０）に記載されたように、圧搾、精製することにより得られ、アッセイされた。

（結果）
（ＣＤＫ１、ＣＤＫ５およびＧＳＫ−３についてのアロイシン類の阻害効果）
複数のキナーゼは、増加する濃度のアロイシン類の存在下に、上記のようにアッセイされた。ＩＣ_５０は、投与量−応答曲線から計算され、表１に与えられ、以降、μＭで示す。

図１は、増加する濃度のアロイシンＡおよびＢの存在下に得られた結果を与える。活性は、最大活性（すなわち、阻害剤が存在しないときに測定される活性）の％として表されている。

前記結果は、本発明のアロイシン類がＣＤＫおよびＧＳＫ−３の強い阻害剤であり、それらの大部分については、１００万分の１モルよりも小さい範囲にあることを示す。

（アロイシンは、ＡＴＰバインディングの競争阻害剤である）
アロイシン作用の機構を調べるために、反応速度論実験を、ＡＴＰレベルおよびアロイシンＡ濃度の双方を変更することによって行った。アロイシンＡの異なる濃度におけるＣＤＫ１／サイクリンＢ（Ａ）、ＣＤＫ５／ｐ２５（Ｂ）およびＧＳＫ−３β（Ｃ）のキナーゼ活性のアッセイからの速度論データの両逆数プロット（double reciprocal plot）が図２に与えられる。酵素活性は、実験項に記載されるようにアッセイされた。反応混合物におけるＡＴＰ濃度は、０．１から０．２５ｍＭに（ＣＤＫ１およびＣＤＫ５）、または、０．０１５から０．１５ｍＭに（ＧＳＫ−３β）に変動した。ヒストンＨ１（Ａ、Ｂ）およびＧＳ−１（Ｃ）の濃度は、０．７ｍｇ／ｍｌおよび６．７μＭの一定にそれぞれ維持された。

データは、アロイシンＡがＡＴＰに対する競争阻害剤として作用することを立証している。これらの結果は、ＣＤＫ２のＡＴＰバインディングポケット内へのアロイシンＢの局在化と完全に一致する（以下を参照）。

（結晶学）
（ヒトＣＤＫ２の圧搾、精製および結晶化）
ヒトＣＤＫ２は、Ｓｆ９昆虫細胞における組み換えバキュロウイルスから圧搾し、そして、精製することにより得られる。モノマーのリン酸化されていないＣＤＫ２結晶は、参照（１１）にすでに記載されるように成長される。

（Ｘ線結晶学データ収集および処理）
ＣＤＫ２−アロイシンＢのデータセットを、（１×母液溶液（５０ｍＭ酢酸アンモニウム、１０％のＰＥＧ３３５０、１５ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）＋５％ＤＭＳＯ）中の１ｍＭのアロイシンＢに６０時間浸漬されたモノマーのＣＤＫ２結晶から収集した。結晶が一時的に低温予備保護剤（２０％グリセロールを含むように調整された母液）に移された後、１００ＫでＥｌｅｔｔｒａＬｉｇｈｔＳｏｕｒｃｒによるＸ−ＲＡＹＤＩＦＦＲＡＣＴＩＯＮの光線によりデータを収集した。画像を、ＭＯＳＦＬＭパッケージを用いて積算し（参照（１２））、続いて、ＳＣＡＬＡを用いて反射光をスケール調整および併合した（参照（１３））。続いて、データ整復および構造細分を、ＣＣＰ４スート（suite）のプログラムを通じて実行した。

アロイシンＢは、ＣＤＫ２ＡＴＰバインディング部位を占め、キナーゼの２つのローブ（lobe）を連結するヒンジ配列内のＣＤＫ２骨格に対して２つの水素結合を形成する。ＣＤＫ２は、リボン状表示で描写され、Ｎ末端で始まる青から赤にカラー勾配が付けられる。Ｎ末端のローブは、５−ストランド・アンチパラレルβ−シート（5-Stranded anti-parallel β-sheet）によって占められ、Ｃ末端のローブは、α−へリックスによって占められている。アロイシンＢは、２つのドメイン間の裂け目にあるＡＴＰ−バインディング部位に結合されたボールおよび棒の形式で描写されている。アロイシンＢの炭素原子は、シアンに色付けされ、窒素原子は青に、塩素原子は黄色に描写されている。

天然のリガンドであるＡＴＰとは違って、アロイシンＢは、Ｇｌｕ８１の骨格酸素と相互作用しないが、代わりに、Ｌｅｕ８３の骨格窒素および酸素原子からそれぞれ水素結合を受け入れ、そしてこれを占める（図３）。：結合したアロイシンＢ分子の４Å内にある残基は、ボールおよび棒の様式で描写される。アロイシンＢの炭素原子は、シアンで描写され、ＣＤＫ２の炭素原子は緑で描写される。酸素原子は、赤に色付けされ、窒素原子は青に、塩素原子は、黄色で描写される。点線は、アロイシンＢとＬｅｕ８３の骨格窒素および酸素原子と間の水素結合（ｄＯ−＞ＮまたはｄＮ−Ｏ＜３．４Å）を示す。図はまた、２０〜１．９Åの分解能でＲＥＦＭＡＣからのマップ計数出力を用いて細分の終了時に計算されたアロイシンＢに対する（２Ｆｏ−Ｆｃ）α−計算電子密度を含む。マップは、平均値からのマップの自乗平均ルート（root-mean-square：ｒ．ｍ．ｓ．）偏差の１．０倍に対応して０．１９ｅ⁻・Å^−３のレベルで等高線表示される。

この水素結合パターンは、以前に、オロモーシン、ロスコビスチン、パーバラノールＢ、ＯＬ５６７およびＨ７１７と複合体を形成したモノマーのＣＤＫ２の構造において観察された。ＣＤＫ２ＡＴＰ−バインディング部位は、今日確認されたＣＤＫ阻害剤の特徴である平面のヘテロ環系に対して複数の位置を許容する。最も近接するＣＤＫ２ＡＴＰバインディング部位内のアロイシンＢの縮合環系の位置は、インジルビン−５−スルホネートおよびオキシンドール−３の位置に似ている。しかしながら、インジルビン−５−スルホネートより小さく、オキシンドール−３に対して異なる配向にあるので、アロイシンＢは、ＡＴＰ−バインディングの裂け目の後部を満たさず、Ｐｈｅ８０の側鎖との等価な端部から環へのスタッキング相互作用を形成することはない。

（アロイシン類、キナーゼの選択性）
ここまでで最も活性が強いアロイシンであるアロイシンＡが、２６の高度に精製されたキナーゼに関する選択性について試験された。キナーゼの活性は、適切な基質（例えば、ヒストンＨ１、カゼイン、ミエリン塩基性タンパク質およびペプチド）を用いて、１５μＭのＡＴＰとともに、アロイシンＡの増加する濃度の存在中でアッセイされた。ＩＣ_５０値は、投与量−応答曲線から評価され、表３に表されている。

試験された大部分のキナーゼは、不十分に阻害されたかまたは阻害されなかった（ＩＣ_５０＞１０μＭ）。しかしながら、２つのキナーゼファミリーとして、ＧＳＫ−３α／βおよびＣＤＫｓは、アロイシンＡに対する感受性が強かった（それぞれ０．６５および０．１５μＭのＩＣ_５０）（図１；表３）。複数のＣＤＫの中で、ＣＤＫ４ではなくＣＤＫ１、ＣＤＫ２およびＣＤＫ５は、アロイシンＡによって阻害される。これは、ＣＤＫ１／２／５を阻害するが、ＣＤＫ４／６に対して効果が著しく劣るか、または効果がない、プリン類、ヒメニアルディシン、パウロン類、およびインジルビン類等の他のＣＤＫ阻害剤を思い出させる。アロイシン類は、ＣＤＫおよびＧＳＫ−３に対して顕著に特異的であるようであるが、それらの細胞内標的の実際のスペクトルは、識別されたように維持される。この目的のために、我々は、現在、プリン類およびパウロン類について記載されたアフィニティ・クロマトグラフィ法によりアロイシン−バインディングタンパク質を精製するための固定されたアロイシンマトリクスを設計している。

（Ｃ．細胞生物学）
（試薬）
ペニシリン、ストレプトマイシン、ノコダゾール、インシュリン、トランスフェリン、プロゲステロン、プトレシン、セレン酸ナトリウム、臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）、ＲＮＡｓｅＡ、ヨウ化プロピジウムがＳｉｇｍａから購入された
（細胞培養）
クローンヒトＮＴ２テラテロカルシノーマ（teraterocarcinoma）細胞を、Ｓｔｒａｔａｇｅｎ（ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）から取得し、ダルベッコ改変イーグル液体培地（Dulbecco’s Modified Eagle Medium):5%ＦＣＳ(fetal calf serum：牛胎児血清）が補足され、３７℃でペニシリン（２０ＵＩ／ｍｌ）およびストレプトマイシン（２０μｇ／ｍｌ）を含む２ｍＭのＬ−グルタミン（ＢＩＯＷＨＩＴＴＡＫＥＲ）含有Ｆ−１２培地（Nutrient Mixture F-12）において、空気中に５％のＣＯ_２を含む湿気のある雰囲気で成長させた。

（ＮＴ２分化）
ＮＴ２細胞のｈＮＴ細胞への分化は、Ｓｏｕｌｉｅらによって改変されたＰｌｅａｓｕｒｅらの方法（参照（１７））にしたがって誘導された。簡単には、２回目の再塗布の後、細胞は、処理前５日間、分裂抑制剤（１μＭのサイトシン・アラビノシッド（cytosine arabinoside）、１０μＭのフルオロデオキシウリジンおよび１０μＭのウリジン）と、塩とホルモン（２５μｇインシュリン／ｍｌ、１００μｇトランスフェリン／ｍｌ、２０ｎＭのプロゲステロン、６０μＭのプトレッシンおよび３０ｎＭのセレン酸ナトリウム）の混合物とを加えた血清除去培地において培養された。

（アロイシンによる処理）
指数関数的な増殖細胞をアロイシンＡ（ジメチルスルホキシドに溶解された保存液）存在下に２４時間インキュベートした。細胞のノコダゾール処理を０．０４μｇノコダゾール／ｍｌ（培養液）の濃度で２４時間行った。ノコダゾール処理の後、新しい培養液で細胞を２回洗浄し、アロイシンＡ存在下または非存在下に２４時間培養した。血清廃除を実施するために、血清がない培地中に４０時間細胞を維持した。血清廃除の後、細胞を２回洗浄し、アロイシンＡの存在下または非存在下に新しい血清含有培地中で４０時間培養した。

（細胞生存度アッセイ）
ＮＴ２細胞およびｈＮＴヒトニューロンについてのアロイシンＡの毒性を定量するために、ＮＴＴホルマザンに対するＮＴＴの細胞減少の阻害を、Ｓａｉｌｌｅらにしたがって評価した。アロイシンＡの暴露の後、０．５ｍｇ・ＭＴＴ／ｍｌ（新しい培地）の存在下に３７℃１時間細胞をインキュベートした。ホルマザン生成物をＤＭＳＯに溶解し、５６２ｎｍでの吸収の測定によって定量した。

（流動細胞計測法（flow cytometry）による細胞周期分析）
細胞をトリプシン処理し、遠心分離により収集し、冷却７０％エタノールで少なくとも４時間凝集させた。凝集された細胞をＰＢＳ（phosphate buffered saline：リン酸緩衝生理食塩水）で洗浄し、１０μｇＲＮＡｓｅ／ｍｌの存在下にインキュベートし、２５μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムにより３７℃で１時間染色した。次いで、ＦＡＣＳｏｒｔ流動細胞計測器（ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて染色された細胞を細胞周期分布について分析した。ｍｕｌｔｉＣＹＣＬＥにより細胞周期分析を実施した（参照（１８））。

細胞周期分布に関するアロイシンＡの効果を流動細胞計測法によってＮＴ２細胞について調べた。非同調（unsynchronised）細胞（図４Ｅ）を２０μＭのアロイシンＡに４０時間暴露した（図４Ｆ）。指数関数的成長細胞におけるアロイシンＡによって誘導された増殖停止が、Ｇ２／Ｎ相での蓄積によって明らかに加えられた。アポトーシスの徴候は検出されず、以前に観察された明らかな毒性の欠落を確認した。

血清廃除によるＧ０／Ｇ１においてまたはノコダゾール処理によるＧ２／Ｍにおいて同調されたＮＴ２細胞に関するアロイシンＡの効果も調べた。その結果を図４に示す。：ヨウ化プロピジウム染色後の細胞周期相分布を流動細胞計測法によって分析した（Ａ、Ｂ、Ｃ）。ＮＴ２細胞は、２４時間の血清廃除によって同調され（Ａ）、次いで、２０μＭアロイシンＡの非存在下で（Ｂ）または存在下に（Ｃ）新しい培地において４０時間培養された（Ｄ、Ｅ、Ｆ）。ＮＴ２細胞は、ノコダゾール処理（０．２μｇ／ｍｌ）によって２４時間同調され（Ｄ）、その後、アロイシンＡの非存在下（Ｅ）または存在下（Ｆ）に新しい培地において４０時間培養された。

２４時間の血清廃除により、Ｇ０／Ｇ１における細胞の有意な増加がみられた（図５Ａ）。次いで、細胞を、２０μＭのアロイシンＡの非存在下（図５Ｂ）または存在下（図５Ｃ）に血清濃厚化培地（serum-enriched media）に４０時間再暴露した。アロイシンＡで処理した細胞は、本質的にはＧ０／Ｇ１で残るが、わずかにＧ２／Ｍ細胞で蓄積する（最も有望には、最初のＳ相副次集団（sub-population）から誘導される）（図５Ｃ）。コントロール細胞は、古典的な細胞周期パターンに再配分される（図５Ｂ）。２４時間のノコダゾール処理により、Ｇ２／Ｍの細胞が大規模に蓄積される（図５Ｄ）。次いで、細胞を洗浄してノコダゾールを取り除き、２０μＭのアロイシンＡの非存在下（図５Ｅ）または存在下（図５Ｆ）に４０時間インキュベートした。ノコダゾールを除去して４０時間後、コントロール細胞を、種々の細胞周期相に再配分した（図８Ｅ）。対照的に、ノコダゾール処理後にアロイシンＡに暴露された大部分の細胞は、Ｇ２／Ｍで残され（図５Ｆ）、コントロール細胞で見られたＧ１／Ｇ０の増加を妨げた。小さい副Ｇ２ピーク（sub-G2-peak）が、アポトーシスによる細胞死の少数の始まりを示しているかもしれない。

全ての合わせたこれらのデータが示しているのは、アロイシンＡが抗増殖特性を有していること、およびＧ０／Ｇ１からの退出およびＧ２／Ｍからの退出の双方を阻害することが可能であることであり、いくつかの細胞内ターゲットの存在を示唆している。Ｇ１阻止は、ＣＤＫ２／サイクリンＥに抗するアロイシンＡの高い潜在力と対応する。Ｓ相に入る能力がないこともまた、ＧＳＫ−３（サイクリンＤ１分解に必要であることが知られるキナーゼ）の阻害からの結果であるかもしれない。Ｇ２／Ｍ阻止は、ＣＤＫ１／サイクリンＢに抗するアロイシンＡの潜在力と良く対応する。

（参照）
1. Meijer, L. Cyclin-dependent kinases inhibitors as potential anticancer,anti-neurodegenerative,anti-viral and anti-parasitic agent. Drug Resistance Update 2000,3,83-88.
2. Toogood, P.L. Cyclin-dependent kinase inhibitors for treating cancer. Med.Res.Rev.2001,21,487~498.
3. Gray,N.; Detivaud,L.; Doerig,C.; Meijer,L. ATP-site directed inhibitors of cyckin-dependent kinases.Curr. Med.Chem.1999,6,859~876.
4. Fischer, P.M.; Lane, D.P. Inhibitors of cyclin-dependent kinases as anti-cancer therapeutics. Curr.Med.Chem.2000,7,1213~1245.
5. Pestell,R.; Mani,S.; Wange,C.; Wu,K.; Francis,R. Cyclin-dependent kinase inhibitors:novel anticancer agents. Expert Opin.Investig.Drugs 2000,9,1849~1870.
6. Rosiana,G.R.; Chang,Y.T. Targeting hyperproliferative disorders with cyclin dependent kinase inhibitors. Exp.Opin.Ther.Patents 2000,10,1~16.
7. Sielecki,T.M.; Boylan,J.F.; Benfield,P.A.; Trainor,G.L. Cyclin-dependent kinase inhibitors:useful targets in cell cycle regulation. J.Med.Chem.2000,43,1~18.
8. Kaubisch,A.; Schwartz G.K. Cyclin-dependent kinase and protein kinase C inhibitors: a novel class of antineoplastic agents in clinical dependent.Cancer J.2000,6,192~212.
9. Meijer,L.; Borgne,A.; Mulner,O.; Chong,J.P.J.; Blow,J.J.; Inagaki,M.; Delcros,J.G.; Moulinoux,J.P. Biochemical and cellular effects of roscovitine,a potent and selective inhibitor of the cyclin-dependent kinases cdc2,cdk2 and cdk5. Eur.J.Biochem.1997,243,527-536.
10. Meijer,L.; Thunissen,A.M.W.H.; White,A.; Garnier,M.; Nikolic,M.; Tsai,L.H.; Walter,J.; Cleveley,K.E.; Salinas,P.C.; Wu,Y.Z.; Biernat,J.; Mandelkow,E.M.; Kim,S.-H.; Pettit,G.R. Inhibition of cyclin-dependent kinases,GSK-3β and casein kinase 1 by hymenialdisine,a marine sponge constituent. Chem. & Biol.2000,,7-51-63.
11. Lawrie,A.M.; Noble,N.E.; Tunnah,P.; Brown,N.R.; Johnson,L.N.; Endicott,J.A. Protein kinase inhibition by staurosporine revealed in details of the molecular interaction with CDK2. Nature Structural Biol.1997,4,796-800.
12. Leslie,A.G.W. Joint CCP4 and ESF-EAMCB Newsletter on Protein Crystallography.1992,vol.26.
13. CCP4. The CCP4(Collaborative Computational Project Number 4)suite:Programs for protein crystallography.Acta Cryst.D,1994,50,760-763.
14. Navaza,J.AMoRe: An automated package for molecular replacement.Acta.Cryst.,1994,A50,157-163.
15. Murshudov,G.N.; Vagin,A.A.; and Dodson,E.J.Refinement of macromolecular structures by the maximum-likelihood method. Acta Cryst.D,1997,53,240-255.
16. Jones,T.A.,Zou,J.Y.,Cowan,S.W.,Kjeldgaard,M. Improved methods for building protein models in electron density maps and the location of errors in these models. Acta Cryst.A,1991,47,110-119.
17. Pleasure,S.J.; Page,C.; Lee,V.M.Y. Pure,post-mitotic polarized human neurons derived from NT2 cells provide a system for expressing exogenous proteins in terminally differentiated neurons. J.Neurosci.1992,12,1802-1815.
18. Damiens,E.; Baratte,B.; Marie,D.; Eisenbrand,G.; and Meijer,L. Anti-mitotic properties of indirubin-3’-monoxime,a CDK/GSK-3 inhibitor: induction of endoreplication following prophase arrest. Oncogene,2001,20,3786-3797.

本発明のアロイシン類によるＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３β阻害結果である。Ａ〜Ｃは、ＡＴＰ存在下でのアロイシンＡに対する酵素活性（ＣＤ１／サイクリンＢ：Ａ、ＣＤＫ５／ｐ２５：Ｂ、ＧＳＫ−３β：Ｃ）である。アロイシンＢとＣＤＫ２ＡＴＰ結合部位との間の相互作用のステレオ図である。Ａ〜Ｅは、アロイシンＡによる指数関数的な細胞成長の可逆阻害である。Ｇ０／Ｇ１（Ａ、Ｂ、Ｃ）およびＧ２／Ｍ（Ｄ、Ｅ、Ｆ）でのアロイシンＡの効果の比較である。

Claims

ピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体を含む、神経変性疾患を治療または予防するための医薬組成物であって、該誘導体は、一般式（Ｉ）：

（式中、
− Ｒ２およびＲ３は、同一または異なって、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルを示し、前記アルキルは、直鎖または分枝鎖アルキルであり、置換されてもよく、
− Ｒ６は、置換されてもよい芳香環Ａｒまたはシクロアルキルであり、前記シクロアルキルは、置換されてもよいアリール基によって置換されてもよく、
− Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、ＣＨ_２−シクロアルキルまたはＣＨ_２−Ａｒであり、ここで、「ａｌｋ．」はＣ１−Ｃ６アルキレン基であり、ｎは１〜６であり、
− ＺはＨまたはＣＨ_３である）
により示される、医薬組成物。
Ａｒはフェニル、ナフチル、フリル、チエニル、ピリジル、シクロプロピルフェニルまたはフェニルジオキソリルである、請求項１に記載の医薬組成物。
シクロアルキル基はＣ３−Ｃ６シクロアルキルである、請求項１に記載の医薬組成物。
置換基は、１種以上のハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＦ_３）、ＯＨ、ＮＨ_２、Ｎ（Ｈ，アルキル）、Ｎ（アルキル）_２、Ｏ−アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、ＣＯＮＨ_２、ＣＯＮ（Ｈ，アルキル）、ＣＯＮ（アルキル）_２、ＮＨＣＯＮＨ_２、ＮＨＣＯＮ（Ｈ，アルキル）、ＮＨＣＯＮ（アルキル）_２、Ｎ（アルキル）ＣＯＮＨ_２、Ｎ（アルキル）ＣＯＮ（Ｈ，アルキル）、Ｎ（アルキル）ＣＯＮ（アルキル）_２、アルコキシ、ＣＮ、Ｏ−ＳＯ_２−ＮＨ_２、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ＳＨおよびＳ−アルキルからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよび／またはＣＤＫ５／ｐ２５および／またはＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１０μＭを有し、化学式（ＩＩ）：

（式中、
−６位のフェニル基は、
−Ｈ、−ＯＨ、アルキル、−Ｏアルキル、ｈａｌ．、−ＮＨ_２、−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｎ（アルキル）_２、−Ｏ−ＳＯ_２−ＮＨ_２、−ＳＯ_２−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−アルキル、ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（Ｈ，アルキル）および−ＣＯＮ（アルキル）_２
からなる群から選択される１、２または３つの置換基Ｒによって置換され、
−Ｒ７は、Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎｈａｌ．、−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキルまたはａｌｋ．−Ａｒであり、
−ＺはＨまたはＣＨ_３である）
により示される、請求項１〜４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
式（ＩＩ）の誘導体において、
Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ｈａｌ．またはアルキルであり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、
Ｒ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２であるか、または、
Ｒ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｈａｌ．またはＯＨであり、Ｒ７＝アルキルであり、ｎ＝１〜３であり、かつ、Ｚ＝Ｈである、
請求項５に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦５μＭを有する、請求項５に記載の医薬組成物。
式（ＩＩ）の誘導体において、Ｒ＝Ｈ、ｐ−アルコキシ、ｐ−およびｍ−アルコキシ、ｐ−ＯＨ、ｐ−ｈａｌ．、ｐ−アルキルまたはｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７はアルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２またはＨであり、ＺはＨであり、かつ、ｎ＝１〜３である、請求項７に記載の医薬組成物。
−フェニル基は、無置換であり、かつ、Ｒ７はＨであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、
−ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２であるか、または、
−Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである（ａ−ｅはフェニル基上のＲの位置に対応する）、請求項８に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１μＭを有する、請求項５に記載の医薬組成物。
式（ＩＩ）の誘導体において、Ｒがｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２またはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７がアルキルである、請求項１０に記載の医薬組成物。
Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである化合物を含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項５に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＣＤＫ５／ｐ２５またはＧＳＫ−３に対して、または、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１０μＭを有する、請求項１〜４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１０μＭを有する、請求項１４に記載の医薬組成物。
Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ｈａｌ．、アルキルまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である、請求項１５に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦５μＭを有し、ＲはＨ、ｐ−アルコキシ、ＯＨ、ｈａｌ．またはＯ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７はＨ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である、請求項１５に記載の医薬組成物。
前記誘導体において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｄおよびＲ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ｈａｌ．、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｈａｌ．またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項１７に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭを有し、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−およびｍ−ジアルコキシ、ｈａｌ．、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝Ｈまたはアルキルである、請求項１５に記載の医薬組成物。
前記誘導体において、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝アルキルであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項１９に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項１５に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１およびＧＳＫ３に対してＩＣ_５０≦１０μＭを有し、Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ｈａｌ．、アルキル、ＣＮまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、ａｌｋ．−シクロアルキルまたはａｌｋ．−アリールである、請求項１４に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦５μＭを有し、Ｒ＝Ｈ、ｐ−アルコキシ、ｐ−およびｍ−アルコキシ、ｐ−ＯＨ、ｐ−ｈａｌ．、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはｐ−ＣＮであり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキルまたは（ａｌｋ．）_ｎ−アリールである、請求項２２に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨ、ｈａｌ．、アルキル、ＣＮ、およびＲ７＝Ｈ、または、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｄ＝Ｈ、Ｒｃ＝アルコキシおよびＲ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、または、ＲａおよびＲｄ＝Ｈ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシ、およびＲ７＝アルキル、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃ＝Ｈ、Ｒｄ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２、およびＲ７＝アルキル、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈ、Ｒｃ＝ｈａｌ．および、Ｒ７＝（ａｌｋ．）_ｎ−アリールを有する、請求項２３に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭを有し、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｐ−ｈａｌ．、Ｈまたはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキルまたは（ａｌｋ．）_ｎ−アリールである、請求項２２に記載の医薬組成物。
Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨ、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝アルキル、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２またはＣＨ_２−シクロアルキルである、請求項２５に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項２２に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＣＤＫ５／ｐ２５に対してＩＣ_５０≦１０μＭを有し、Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、ｈａｌ．、アルキルまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である、請求項１４に記載の医薬組成物。
ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦５μＭを有し、ＲはＨ、ｏ−アルコキシ、ｐ−アルコキシ、ｍ−およびｐ−アルコキシ、ｐ−ＯＨ、ｐ−ｈａｌ．、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７はＨ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．またはＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２である、請求項２８に記載の医薬組成物。
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｄおよびＲ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ＝ＯＨであり、かつ、Ｒｂ、Ｒｃ、ＲｄおよびＲ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝Ｈ、（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ．、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２またはアルキルであるか、または、ＲａおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシであり、かつ、Ｒ７＝Ｈであるか、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２またはｈａｌ．であり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項２９に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１μＭを有し、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｐ−ｈａｌ．またはｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項２８に記載の医薬組成物。
Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項３１に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、かつ、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項２８に記載の医薬組成物。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１０μＭを有し、式（ＩＩＩ）：

により示され、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対して≦５μＭでさえある、請求項１〜４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
前記誘導体は、式（ＩＶ）：

により示され、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦５μＭであり、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭである、請求項１〜４のいずれか１つに記載の医薬組成物。
Ｒ２およびＲ３および／またはＺおよび／またはＲ７はＨではない、請求項１〜３５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
アルツハイマー病またはパーキンソン病を治療または予防するための、請求項１〜３６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
ピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体であって、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよび／またはＣＤＫ５／ｐ２５および／またはＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１μＭを有し、式（Ｉ）：

（式中、
Ｒ６は、置換フェニル基または置換されてもよいナフチル、フリル、チエニル、ピリジル、シクロプロピル、フェニルジオキソリルであり、
ここで、式（ＩＩ）：

の６位フェニル基は、
−Ｈ、アルキル、−Ｏ−アルキル、−ＮＨ_２、−Ｎ（Ｈ，アルキル）、―Ｎ（アルキル）_２、−Ｏ−ＳＯ_２−ＮＨ_２、−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−アルキル、ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮ（Ｈ，アルキル）、−ＣＯＮ（アルキル）_２
からなる群において選択される１、２または３つの置換基Ｒによって置換され、
− Ｒ７は、Ｈ、アルキル、（ａｌｋ．）_ｎｈａｌ．、−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキル、ａｌｋ．−Ａｒであり、
−ＺはＨまたはＣＨ_３である）
により示され、ただし、
−Ｒ６がフェニル基である場合、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７およびＺはＨではなく、
−Ｒ３、Ｒ７およびＺがＨであり、Ｒ６がフェニル基である場合、Ｒ２はメチルではなく、
−Ｒ３およびＺがＨであり、Ｒ７がメチルであり、Ｒ６がフェニル基である場合、Ｒ２はＨではなく、
−Ｒ６がフリル基である場合、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７およびＺはＨではなく、および
−Ｒ６が、アルキル、−Ｏ−アルキル、−Ｎ（Ｈ，アルキル）、−Ｎ（アルキル） _２および−ＮＨ _２からなる群において選択される１、２または３つの置換基Ｒによって置換されたフェニル基である場合、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７およびＺはＨではない、
ピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＦＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１μＭを有する、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
式（ＩＩ）の誘導体に対応し、Ｒは、ｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ−（アルキル）_２、ｐ−ＯＨであり、Ｒ７はアルキルである、請求項３９に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈ、Ｒｃ＝アルコキシ、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである化合物に対応する、請求項４０に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭを有し、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−およびｍ−ジアルコキシ、ｈａｌ．、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝Ｈまたはアルキルである、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｄ＝Ｈ、Ｒｃ＝アルコキシおよびＲ７＝アルキル、またはＲａおよびＲｄ＝Ｈ、ＲｂおよびＲｃ＝アルコキシおよびＲ７＝アルキル、または、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈ、Ｒｃ＝Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２またはＯＨおよびＲ７＝アルキルである、請求項４３に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
ＣＤＫ５／ｐ２５およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつＲ７＝アルキルである、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
ＣＤＫ１およびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦１μＭを有し、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｐ−ｈａｌ．、Ｈ、ｐ−ＯＨであり、Ｒ７＝アルキルまたは（ａｌｋ．）_ｎ−ｈａｌ、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、（ａｌｋ．）_ｎ−シクロアルキル、（ａｌｋ．）_ｎ−アリールである、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨ、Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｈａｌ．であり、Ｒ７＝アルキル、ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、ＣＨ_２−シクロアルキルである、請求項４６に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０値≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦１μＭを有し、Ｒ＝ｐ−アルコキシ、ｐ−Ｏ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２、ｐ−ｈａｌ．、ｐ−ＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、Ｒｃ＝アルコキシ、ＯＨまたはＯ−ＳＯ_２−Ｎ（アルキル）_２であり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項４９に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
前記誘導体は、ＣＤＫ１／サイクリンＢおよびＧＳＫ−３に対してＩＣ_５０≦０．５μＭを有し、Ｒａ、ＲｂおよびＲｄ＝Ｈであり、Ｒｃ＝アルコキシまたはＯＨであり、かつ、Ｒ７＝アルキルである、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
式（ＩＩＩ）：

の、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
式（ＩＶ）：

の、請求項３８に記載のピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体。
化学式（Ｖ）：

（式中、
Ｒ２およびＲ３は、同一または異なって、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルを示し、前記アルキルは、直鎖または分枝鎖アルキルであり、置換されてもよく、Ａｌｋｙｌは、芳香族ニトリル類であるＲ６ＣＮを有するＣ１−Ｃ６アルキルであり、ここで、Ｒ６は請求項３８のように定義される）
のアルキルピラジン類を反応させる工程を包含する、請求項３８〜５３のいずれか１つに記載された化学式Ｉのピロロ［２，３ｂ］−ピラジン誘導体を合成する方法。
有効成分として請求項３８〜５３のいずれかの少なくとも一つの誘導体の有効量を、医薬的に許容される担体と組み合わせて含む医薬組成物。
神経変性疾患を治療または予防するための請求項５５の医薬組成物。
抗増殖疾患を治療または予防するための請求項５５に記載の医薬組成物。
経口により、局所に、または、注射（静脈内、皮下、腹腔、または直腸）によって投与される、請求項５６または５７に記載の医薬組成物。
投与量単位当たり１００〜１０００ｍｇの有効成分を含む経口ルートによる投与のための請求項５８の医薬組成物。
注射可能な形式の下、投与量単位当たり１００〜１０００ｍｇの有効成分を含む、請求項５８の医薬組成物。