KR20070009546A - 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한피라졸로[1,5-ａ]피리미딘-7-일-아민 유도체 - Google Patents

단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한피라졸로[1,5-ａ]피리미딘-7-일-아민 유도체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 키나제 의존성 질환의 치료에 있어서의, 또는 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물의 제조를 위한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체의 용도, 신규한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물, 및 신규한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한 피라졸로[1,5-ａ]피리미딘-7-일-아민 유도체{PYRAZOLO[1,5-A]PYRIMIDIN-7-YL-AMINE DERIVATIVES FOR USE IN THE TREATMENT OF PROTEIN KINASE DEPENDENT DISEASES}
발명의 요약
본 발명은 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 있어서의, 또는 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물의 제조를 위한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체의 용도, 상기 질환의 치료에 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체를 사용하는 방법, 상기 질환의 치료를 위한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체를 함유하는 약제학적 제제, 신규한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체, 신규한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체 및 약제학적 제제의 제조방법, 상기 언급한 바와 같은 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체의 용도 또는 사용방법, 및/또는 동물 또는 인체의 치료에 사용하기 위한 이들 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체에 관한 것이다.
발명의 배경
피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일 아민 유도체는 벤조디아제핀 수용체의 리간드 (예를 들어, S. Selleri et al., Bioorg. Med. Chem 7 (12), 2705-11 (1999)), 코르티코트로핀 유리인자의 길항제 (EP 1097709), 안지오텐신 II 수용체 길항제 (예를 들어, S. Takeshi et al., Japn. Pharm. Bull. 47 (7), 928-38 (1999)), 모노옥사이드 신테타제 억제제 (JP 10101671), 진통제 (WO 9535298), 살진균제 (EP 071792) 또는 항염증제 (WO 9218504)로서 문헌에 보고되어 있다.
본 발명자들은 피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일 아민 잔기가 강력한 키나제 억제제의 디자인을 위한 주형으로 사용될 수 있음을 밝혀내었다.
대다수의 단백질 키나제 억제제 및 다수의 증식성 및 그밖의 다른 단백질 키나제-관련된 질환의 관점에서, 단백질 키나제 억제제로서, 및 따라서, 관련된 질환의 치료시에 유용한 신규한 부류의 화합물을 제공하기 위한 끊임없는 필요성이 있다.
증식성 질환의 가능한 치료의 관점에서 바람직한 것은 각각 특이적인 단백질 키나제 또는 단백질 키나제 부류에 대해서 맞추어져서 특정한 치료가 이루어지도록 허용하는 과다한 화합물의 부류를 갖는 것이다. 따라서, 이러한 특이적 억제효과를 허용하는 새로운 부류의 화합물을 찾아내고자 하는 강력한 필요성이 존재한다.
발명의 요약
본 발명에 기술된 부류의 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물, 특히 이러한 부류에 속하는 신규한 화합물은 놀랍게도 키나제의 특정한 형태 또는 부류 또는 군, 특히 C-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-1, Flt-3, KDR, Her-1, PDGFR-키나제, c-Src, RET-수용체 키나제, FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4, 에프린 (Ephrin) 수용체 키나제 (예를 들어, EphB2 키나제, EphB4 키나제 및 관련된 Eph 키나제), 카제인 키나제 (CK-1, CK-2, G-CK), Pak, ALK, ZAP70, Jak1, Jak2, Ax1, Cdk1, cdk4, cdk5, Met, FAK, Pyk2, Syk, 인슐린 수용체 키나제, Tie-2, 또는 Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-3, FGF-R3, PDGF-수용체, RET 및 Met와 같은 키나제 (활성화 키나제)의 구성적 활성화 돌연변이체의 억제를 허용하는 약제학적으로 유리한 특성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 본 발명에 기술된 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물의 부류는 또한 상술한 키나제의 돌연변이체를 억제한다. 이렇게 확인된 활성 이외에도, 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체는 그들의 골격이 표적화된 키나제 또는 키나제들의 결합부위와의 특이적 상호작용을 위한 미세한 조정이 이루어지도록 하는 광범한 가능성을 부여하는 과다한 치환 패턴을 가능하게 함으로써 새로운 전망을 열고 다양한 특이성 정도의 키나제 억제제를 제공하도록 하는 이점을 갖는다. 이들 활성에 비추어, 이 화합물들은 특히 이러한 형태의 키나제, 특히 상기 언급된 키나제의 변형되거나 과도한 활성과 연관된 질환을 치료하기 위해서 사용될 수 있다.
한가지 구체예에서, 본 발명은 단백질 키나제 의존성 질환을 치료하기 위한 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용도에 관한 것이다:
상기 식에서,
R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기이며;
R3는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기일 수 있고;
R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며;
A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴 또는 치환되거나 비치환된 헤테로아릴이고;
R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬이다.
바람직한 구체예는 단백질 키나제 의존성 질환의 치료를 위한, R2가 H; 저급 알킬; 사이클로알킬; 벤질; 벤조 티에닐, 저급 알킬에 의해서 치환된 인딜, 임의로 저급 알킬에 의해서 치환된 피리딜 또는 티아졸릴; 비치환된 페닐 또는 할로, 하이드록시, 알콕시, 벤질옥시, 사이클로알킬, 아미노, 아세틸 아미노, 저급 알킬 설폰아미드, 및 하나 또는 두개의 할로에 의해서 치환된 벤젠 설폰아미드로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 두개의 치환체에 의해서 치환된 페닐이고; R3는 H; 할로에 의해서 임의로 치환된 저급 알킬; 페닐, 피리딜 또는 옥사졸릴이며; A는 (a) H; 할로; 벤조티에닐; 피리딜; 메틸 피페라지닐 페녹실; 저급 알킬에 의해서 치환된 인돌릴; (b) 모노-, 디- 또는 트리-저급 알콕시, 디-저급 알킬아미닐, 임의로 알킬에 의해서 이치환된 모르폴리닐, 및 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬 피페라지닐, 피롤리디닐, 디알킬 아미닐 및 저급 알칸올로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환된 피페라지닐로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환된 페닐이고; R1은 H인 상기에 따르는 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용도이다.
단백질 키나제 의존성 질환은 바람직하게는 C-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-1, Flt-3, Her-1, KDR, PDGFR-키나제, c-Src, RET-수용체 키나제, FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4, 에프린 수용체 키나제 (예를 들어, EphB2 키나제, EphB4 키나제 및 관련된 Eph 키나제), 카제인 키나제 (CK-1, CK-2, G-CK), Pak, ALK, ZAP70, Jak1, Jak2, Ax1, Cdk1, cdk4, cdk5, Met, FAK, Pyk2, Syk, 인슐린 수용체 키나제, Tie-2, 또는 Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-3, FGF-R3, PDGF-수용체, RET 및 Met와 같은 키나제 (활성화 키나제)의 구성적 활성화 돌연변이체에 대해서 의존적인 질환, 및 (특히 이상하게 고도로 발현되거나 활성화된) 키나제-의존성 질환 또는 키나제 경로의 활성화에 대해서 의존적인 질환, 또는 상기 언급된 키나제 중의 두개 또는 그 이상의 것에 대해서 의존적인 질환이다.
단백질 키나제 의존성 질환은 더욱 바람직하게는 c-abl, Flt-3, KDR, c-Src, RET, EphB4, c-kit, cdk1, FGFR-1, c-raf, Her-1, Ins-R 또는 Tek에 대해서 의존적인 질환이다.
가장 바람직하게는, 치료할 질환은 증식성 질환, 바람직하게는 양성 또는 특히 악성 종양, 더욱 바람직하게는 뇌, 신장, 간, 부신, 방광, 유방, 위 (특히 위종양), 난소, 결장, 직장, 전립선, 췌장, 폐, 질, 갑상선의 암, 육종, 교아종, 다발성 골수종 또는 위장관암, 특히 결장암, 결장직장선종, 또는 두경부의 종양, 표피 과증식증, 특히 건선, 전립선 비대증, 특히 상피 특성의 이상증식, 바람직하게는 유방암, 또는 백혈병이다.
추가의 구체예에서, 치료할 질환은 건선; 카포시 육종 (Kaposi's sarcoma); 재발협착증, 예를 들어, 스텐트 (stent)-유도된 재발협착증; 자궁내막증식증; 크론병 (Crohn's disease); 호지킨병 (Hodgkin's disease); 백혈병; 류마티스성 관절염과 같은 관절염; 혈관종; 혈관섬유종; 당뇨병성 망막증 및 혈관신생성 녹내장과 같은 안질환; 사구체신염과 같은 신장 질환; 당뇨병성 신장병; 악성 신경화증; 혈전성 미소혈관증 증후군; 이식 거부반응 및 신사구체병증; 간의 경화증과 같은 섬유성 질환; 사구체간질성 (mesangial) 세포-증식성 질환; 동맥경화증; 신경조직의 손상과 같이 지속적인 혈관형성에 의해서 유발되는 질환이다.
본 발명의 화합물은 또한, 풍선 카테터 (balloon catheter) 치료 후의 혈관의 재폐색을 억제하기 위하여, 혈관 보철물 (prosthetics)에서 사용하기 위하여, 또는 예를 들어, 스텐트와 같이 혈관 개방을 유지시키기 위한 기계적 장치를 삽입한 후에, 면역억제제로서, 반흔이 없는 창상 치유의 보조제로서, 및 검버섯 (age spot) 및 접촉성 피부염을 치료하기 위하여 사용될 수도 있다.
추가의 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 지방족 잔기이며;
R3는 H, 치환되거나 비치환된 아릴, 헤테로아릴, 지방족 잔기, 작용기, 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 지방족 잔기일 수 있고;
R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며, 단 R2 및 A 둘 다는 둘 다 비치환된 페닐일 수는 없으며;
A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬이다.
바람직한 구체예는 R2가 H; 저급 알킬; 사이클로알킬; 벤질; 벤조 티에닐, 저급 알킬에 의해서 치환된 인딜, 임의로 저급 알킬에 의해서 치환된 피리딜 또는 티아졸릴; 비치환된 페닐 또는 할로, 하이드록시, 알콕시, 벤질옥시, 사이클로알킬, 아미노, 아세틸 아미노, 저급 알킬 설폰아미드, 및 하나 또는 두개의 할로에 의해서 치환된 벤젠 설폰아미드로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 두개의 치환체에 의해서 치환된 페닐이고; R3는 H; 할로에 의해서 임의로 치환된 저급 알킬; 페닐, 피리딜 또는 옥사졸릴이며; A는 (a) H; 할로; 벤조티에닐; 피리딜; 메틸 피페라지닐 페녹실; 저급 알킬에 의해서 치환된 인돌릴; (b) 모노-, 디- 또는 트리-저급 알콕시, 디-저급 알킬아미닐, 임의로 알킬에 의해서 이치환된 모르폴리닐, 및 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬 피페라지닐, 피롤리디닐, 디알킬 아미닐 및 저급 알칸올로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환된 피페라지닐로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환된 페닐이고; R1은 H이며; 단 R2 및 A 둘 다는 둘 다 비치환된 페닐은 아닌 상기에 따르는 화합물이다.
가장 바람직하게는, 화합물은 하기 화합물들로 구성된 군으로부터 선택된다:
3-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일}-페놀;
6-(3-메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3,5-디메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-클로로-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-5-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
N-{4-[7-아미노-3-(4-디메틸아미노-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페닐}-2,3-디클로로-벤젠설폰아미드;
4-클로로-벤젠설폰산 4-[7-아미노-3-(4-디메틸아미노-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페닐 에스테르;
6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-3-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-브로모-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-브로모-페닐)-5-메틸-3-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(2,6-디클로로-페닐)-3-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-(3-메톡시-페닐)-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-브로모-5-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-벤조[b]티오펜-3-일-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-(4-브로모-페닐)-5-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-티오펜-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-벤조[b]티오펜-3-일-6-(3-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-벤조-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-메톡시-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(2-메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-메톡시-페닐)-3-피리딘-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-{7-아미노-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-{7-아미노-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(2-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
2-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(4-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
4-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(2-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
2-{7-아미노-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(4-벤질옥시-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
4-{7-아미노-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(2-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
2-{7-아미노-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(4-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
4-{7-아미노-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[1-메틸-1H-인돌-3-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[7-아미노-3-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페놀;
3-[7-아미노-3-피리딘-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(3-벤질옥시-페닐)-3-(2-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[7-아미노-3-(2-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페놀;
3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-티오페닐-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-티오펜-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-피리딘-4-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-아미노-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-아미노-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(2-아미노-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-(4-메틸-티아졸-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-벤조[b]티오펜-3-일-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-벤조[b]티오펜-3-일-3-[4-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-(3-메톡시-페닐)-6-티오펜-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-벤질옥시-페닐)-3-(3-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[7-아미노-3-(3-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
(4-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페닐)-카밤산 에틸 에스테르;
6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-[2-메톡시-4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-{7-아미노-3-[2-메톡시-4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
6-(2-클로로-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(2-클로로-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-{3-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피페라진-1-일]-페닐}-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-브로모-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-브로모-벤질)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-브로모-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-(3-모르폴린-4-일-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-[3-((2R,6S)-2,6-디메틸-모르폴린-4-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
2-(4-{3-[7-아미노-6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
6-벤질-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-플루오로메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-플루오로-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
2-(4-{3-[7-아미노-6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
6-(3,4-디플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3,4-디플루오로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
2-(4-{3-[7-아미노-6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
2-(4-{3-[7-아미노-6-(3,4-디플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-피롤리딘-1-일-피페리딘-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-피롤리딘-1-일-피페리딘-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-[3-(4-디에틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
3-[3-(4-디에틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-4-옥시-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-1,4-디옥시-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-[3-(4-디메틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3,4-디플루오로-페닐)-3-[3-(4-디메틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-(3,4,5-트리메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3,4-디플루오로-페닐)-5-메틸-3-(3,4,5-트리메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-(3-클로로-페닐)-3-(3-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
6-[7-아미노-3-(3,4-디메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-피리딘-2-올;
6-벤질-3-(3,4-디메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민; 및
3-(3,4-디메톡시-페닐)-6-(3-플루오로-벤질)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민.
또 다른 구체예는 약제학적 조성물의 제조시의 상기한 바에 따르는 화합물의 용도이다.
또 다른 구체예는 상기한 바에 따르는 화합물을 포함하는 약제학적 조상물이다.
약제학적 조성물은 바람직하게는 상기한 바에 따르는 화합물 및 허용되는 약제학적 캐리어를 포함한다.
또 다른 구체예에서는 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물의 제조시의 상기한 바에 따르는 화합물의 용도가 제공된다.
추가의 구체예에는 (a) 니트릴 A-CH2-C≡N을 유기 용매의 존재 하에서 에틸 포르메이트와 반응시켜 치환된 3-옥소-프로피오니트릴을 형성시키고, (b) 단계 (a)의 치환된 3-옥소-프로피오니트릴을 유기 용매 중에서 하이드라진 모노하이드레이트와 축합시켜 화학식 III의 2H-피라졸-3-일아민과 축합시키고, (d) 치환된 니트릴을 에탄올레이트 및 포름산 에틸 에스테르의 존재 하에서 포르밀화시켜 화학식 II의 3-옥소-프로피오니트릴을 제조하고, (c) 유기 용매의 존재 하에서 화학식 II의 3-옥소-프로피오니트릴을 화학식 III의 2H-피라졸-3-일아민과 축합시켜 화학식 I의 화합물을 형성시키는 단계를 포함하여 상기한 바에 따르는 화합물을 제조하는 방법이다:
본 발명은 특히 단백질 키나제 (특히, 타이로신 단백질 키나제) 의존성 질환의 치료시, 또는 상기 질환의 치료시에 사용하기 위한 약제학적 조성물의 제조를 위한 화학식 I의 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 상기 질환의 치료시에 화학식 I의 화합물을 사용하는 방법, 또는 상기 질환의 치료를 위한 화학식 I의 화합물을 함유하는 약제학적 제제에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기이며;
R3는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 지방족 잔기이고;
R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며;
A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로아릴이고;
R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬이다.
본 발명은 특히, 단백질 키나제 (특히, 타이로신 단백질 키나제) 의존성 질환의 치료시, 또는 상기 질환의 치료시에 사용하기 위한 약제학적 조성물의 제조를 위한 R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기이며; R3는 H, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴, 치환되거나 비치환된 지방족 잔기, 작용기, 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 지방족 잔기이고; R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴, 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며, 단 R2 및 A는 둘다 비치환된 페닐일 수는 없고; A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고; R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬인 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 상기 질환의 치료시에 화학식 I의 화합물을 사용하는 방법, 상기 질환의 치료를 위한 화학식 I의 화합물을 함유하는 약제학적 제제, 또는 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 화학식 I의 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물을 온혈동물, 특히 인간에게 투여하는 것을 포함하여 키나제 의존성 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 특히 키나제 의존성 질환을 치료하기 위한 화학식 I의 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물을 포함하는 약제학적 제제, 신규한 화학식 I의 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물, 화학식 I의 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 화합물을 제조하는 방법, 및 이들의 제조를 위한 신규한 출발물질 및 중간체에 관한 것이다. 본 발명은 또한, 키나제 의존성 질환의 치료를 위한 약제제학적 제제의 제조시의 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다.
이전 및 이하에서 사용된 일반적 용어는 바람직하게는, 다른 식으로 표시되지 않는 한은 본 기술내용과 관련하여 다음의 의미를 갖는다:
"아릴"은 6 내지 14개의 탄소 원자를 갖는 방향족 래디칼, 특히 페닐, 나프틸, 인데닐, 아줄레닐, 또는 안트릴이며, 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 하나 또는 두개의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환되며, 여기에서 치환체는 저급 할로, 알킬, 치환된 알킬, 할로 저급 알킬, 예를 들어, 트리플루오로메틸, 저급 알케닐, 저급 알키닐, 저급 알카노일, 저급 알콕시, 하이드록시, 또 다른 아릴, 에테르화 또는 에스테르화된 하이드록시, 아미노, 일치환 또는 이치환된 아미노, 아미노 저급 알킬, 아미노 저급 알콕시; 아세틸 아미노; 아미디노, 할로겐, 니트로, 시아노, 시아노 저급 알킬, 카복시, 에스테르화된 카복시, 특히 저급 알콕시 카보닐, 예를 들어, 메톡시 카보닐, n-프록폭시 카보닐 또는 이소-프로폭시 카보닐, 알카노일, 벤조일, 카바모일, N-일치환 또는 N,N-이치환된 카바모일, 카바메이트, 알킬 카밤산 에스테르, 아미디노, 구아니디노, 우레아, 우레이도, 머캅토, 설포, 저급 알킬티오, 설포아미노, 설폰아미드, 벤조설폰아미드, 설포네이트, 페닐, 벤질, 페녹시, 벤질옥시, 페닐티오, 페닐-저급 알킬티오, 알킬페닐티오, 저급 알킬설피닐, 페닐설피닐, 페닐-저급 알킬설피닐, 알킬페닐설피닐, 저급 알칸설포닐, 페닐설포닐, 페닐-저급 알킬설포닐, 알킬페닐설포닐, 할로겐-저급 알킬머캅토, 특히 트리플루오로메탄 설포닐과 같은 할로겐-저급 알킬설포닐, 디하이드록시보라 (-B(OH)2), 헤테로사이클릴, 및 메틸렌 디옥시와 같이 환의 인접한 C-원자에서 결합된 저급 알킬렌 디옥시, 포스포노 (-P(=O)(OH)2), 하이드록시-저급 알콕시 포스포릴 또는 디-저급 알콕시포스포릴, 카바모일, 모노- 또는 디-저급 알킬카바모일, 모노- 또는 디-(하이드록시-저급 알킬)-카바모일, 또는 -NR4R5 (여기에서 R4 및 R5는 동일하거나 상이할 수 있으며, 독립적으로 H; 저급 알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸 또는 프로필)이거나, R4 및 R5는 N 원자와 함께 1-4개의 질소, 산소 또는 황 원자를 함유하는 3- 내지 8-원 헤테로사이클릭 환 (예를 들어, 피페라지닐, 저급 알킬-피페라지닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디노, 모르폴리닐, 이미다졸리닐)을 형성한다)를 포함하는 이하에 정의하는 작용기로부터 선택된다.
아릴은 더욱 바람직하게는 비치환되거나, 할로 (예를 들어, Cl, Br 또는 F); 하이드록시; 저급 알킬 (예를 들어, C1-C3 저급 알킬 또는 메틸); 아릴 (예를 들어, 페닐 또는 벤질); 아미노; 아미노 저급 알킬 (예를 들어, 디메틸아미노); 아세틸 아미노; 아미노 저급 알콕시 (예를 들어, 에톡시아민); 치환된 저급 알킬 (예를 들어, 플루오로 에틸); 알콕시 (예를 들어, 메톡시, 또는 벤질 환이 치환되거나 비치환될 수 있는 벤질옥시, 예를 들어, 3,4-디클로로벤질옥시); 설폰아미노; 치환되거나 비치환된 설폰아미드 (예를 들어, 벤조 설폰아미드, 클로로벤젠 설폰아미드 또는 2,3-디클로로벤젠 설폰아미드); 치환되거나 비치환된 설포네이트 (예를 들어, 클로로-페닐 설포네이트); 치환된 우레아 (예를 들어, 3-트리플루오로-메틸-페닐 우레아 또는 4-모르폴린-4-일-3-트리플루오로메틸-페닐-우레아); 알킬 카밤산 에스테르 또는 카바메이트 (예를 들어, 에틸-N-페닐 카바메이트) 또는 -NR4R5 [여기에서 R4 및 R5는 동일하거나 상이할 수 있으며, 독립적으로 H; 저급 알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸 또는 프로필)이거나, R4 및 R5는 N 원자와 함께 1-4개의 질소, 산소 또는 황 원자를 함유하는 3- 내지 8-원 헤테로사이클릭 환 (예를 들어, 피페라지닐, 저급 알킬-피페라지닐, 피리딜, 인돌릴, 티오페닐, 티아졸릴, 모르폴리닐 n-메틸 피페라지닐, 벤조티오페닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피페리디노 또는 이미다졸리닐)을 형성하며, 여기에서 R4 및 R5가 N과 함께 헤테로사이클릭 환을 형성하는 경우에, 이 환은 여기에 기술된 치환체들 중의 1 개, 2 개 또는 그 이상, 바람직하게는 피페라지닐, 피롤리디닐, 메틸과 같은 알킬, 또는 에타닐과 같은 하이드록시 알킬에 의해서 치환될 수 있다]로 구성된 군으로부터 선택된 가용화기로부터 선택된 1 개 또는 2 개의 치환체에 의해서 독립적으로 치환된 페닐이다. R4 및 R5가 N 원자와 함께 형성하는 헤테로 환의 예로는 메틸 또는 에틸에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있는 모르폴리닐; 1, 2 또는 3 개의 치환체, 바람직하게는 메틸, 옥시 또는 에탄올에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있는 피페라지닐; 또는 1, 2 또는 3 개의 치환체, 바람직하게는 피롤리디닐, 아민, 알킬 아민, 메틸 아민, 디알킬 아민, 디메틸아민 또는 디에틸아민에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있는 피페라디닐이 포함된다.
헤테로아릴 기는 바람직하게는 모노사이클릭이지만, 비- 또는 트리-사이클릭일 수도 있으며, 3-24 개, 바람직하게는 4-16 개의 환 원자를 포함하고, 적어도 하나 또는 그 이상, 바람직하게는 1 내지 4 개의 환 원자는 O, N 또는 S로부터 선택된 헤테로원자에 의해서 치환된다. 바람직하게는, 헤테로아릴 기는 피리딜, 인돌릴, 피리미딜, 피라졸릴, 옥사졸릴, 티오페닐, 벤조티오페닐, 2H-피롤릴, 피롤릴, 이미다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 피라졸릴, 인다졸릴, 퓨리닐, 피라지닐, 피라다지닐, 4H-퀴놀리지닐, 이소퀴놀릴, 퀴놀릴, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 인돌리지닐, 3H-인돌릴, 이소인돌릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 푸라자닐 및 벤조[d]피라졸로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는, 헤테로아릴 기는 피리딜, 인돌릴, 피리미딜, 피라졸릴, 옥사졸릴, 티오페닐 또는 벤조티오페닐로 구성된 군으로부터 선택된다. 헤테로아릴 기는 아릴에 대한 치환체로 상기 정의한 기로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서, 더욱 바람직하게는 하이드록시, 할로겐, 메틸과 같은 저급 알킬, 또는 메톡시 또는 에톡시와 같은 저급 알콕시에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것으로 지방족은 어떤 비-방향족 탄소 기본 잔기라도 나타낼 수 있다. 지방족 잔기의 예로는 치환되거나 비치환된 알킬, 사이클로알킬, 알케닐 및 알키닐이 포함된다.
알킬은 저급 알킬, 바람직하게는 7 개 이하의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 5 개까지의 탄소 원자를 갖는 알킬이며, 직쇄 또는 측쇄이고; 바람직하게는 저급 알킬은 n-펜틸과 같은 펜틸, n-부틸, sec-부틸, 이소부틸, tert-부틸과 같은 부틸, n-프로필 또는 이소프로필과 같은 프로필, 에틸 또는 메틸이다. 바람직하게는 저급 알킬은 메틸, 프로필 또는 tert-부틸이다.
사이클로알킬 그룹은 바람직하게는 사이클로펜틸, 사이클로헥실 또는 사이클로헵틸이며, 아릴에 대한 치환체로 상기에서 정의한 기들로부터 선택된 하나 또는 그 이상, 특히 1 또는 2 개의 치환체에 의해서, 가장 바람직하게는 메틸과 같은 저급 알킬, 메톡시 또는 에톡시와 같은 저급 알콕시, 또는 하이드록시에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있다.
알케닐 및 알키닐은 바람직하게는 7 개 이하의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 5 개까지의 탄소 원자를 가지며, 직쇄 또는 측쇄일 수 있다.
알킬, 사이클로알킬, 알케닐 및 알키닐은 치환되거나 비치환될 수 있으며, 치환되는 경우에는 다른 알킬, 사이클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴에 대해서 상기 정의된 치환체, 또는 이하에 정의되는 작용기를 포함하는 3 개까지의 치환체에 의해서 치환될 수 있다.
할로 또는 할로겐은 바람직하게는 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도이며, 가장 바람직하게는 플루오로, 클로로 또는 브로모이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "연결 원자 또는 기"에는 알킬 (예를 들어, -CH2); 옥시 -O-; 케토 -CO-; 티오 -S-; 설포닐 -SO2-; 설폭사이드 -SO-; 아민 -NH- 또는 -NR-; 카복실산; 알콜; 에스테르 (-COO-); 아미드 (-CONR-, -CONHR'-); 설폰아미드 (-SO2NH-, -SO2NR'-); 설폰 (-SO2-); 설폭사이드 (-SO-); 아미노-기; 우레아 (-NH-CO-NH-, -NR-CO-NH-, -NH-CO-NR-, -NR-CO-NR-); 에테르 (-O-); 카바메이트 (-NH-CO-O-, -NR-CO-O-); 또는 역 아미드 설폰아미드 및 에스테르 (-NH-CO-, -NR-CO-, -NH-SO2-, -NR-CO2-, -OOC-)가 포함된다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "작용기"에는 카복실산; 하이드록실; 할로겐; 시아노 (-CN); 에테르 (-OR); 케톤 (-CO-R); 에스테르 (-COOR); 아미드 (-CONH2, -CONHR, -CONRR'); 티오에테르 (-SR); 설폰아미드 (-SO2NH2, -SO2NHR, -SO2NRR'); 설폰 (-SO2-R); 설폭사이드 (-SO-R); 아민 (-NHR, NR'R); 우레아 (-NH-CO-NH2, -NH-CO-NHR); 에테르 (-O-R); 할로겐; 카바메이트 (-NH-CO-OR); 알데히드-작용기 (-CHO); 및 또한 역 아미드; 설폰아미드 및 에스테르 (-NH-CO-R, -NH-SO2-R, -OOC-R)가 포함되며, R 및 R'는 동일하거나 상이하고, H일 수 있거나, 상기 정의한 바와 같은 지방족, 아릴 또는 헤테로아릴 부위이다.
화합물, 염, 약제학적 제제, 질병 등에 대해서 복수형태가 사용되는 경우에, 이것은 또한 단일 화합물, 염 등을 의미하는 것으로 이해된다.
염은 특히, 화학식 I의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염이다. 이러한 염은 예를 들어, 염기성 질소 원자를 갖는 화학식 I의 화합물로부터 바람직하게는 유기 또는 무기산에 의해서 산부가염으로, 특히는 약제학적으로 허용되는 염으로서 형성된다. 적합한 무기산은 예를 들어, 염산과 같은 할로겐 산, 황산, 또는 인산이다. 적합한 유기산은 예를 들어, 카복실산, 포스폰산, 설폰산 또는 설팜산, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 옥탄산, 데칸산, 도데칸산, 글리콜산, 락트산, 푸마르산, 석신산, 아디프산, 피멜산, 수베린산, 아젤라산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 글루탐산 또는 아스파르트산과 같은 아미노산, 말레산, 하이드록시말레산, 메틸말레산, 사이클로헥산카복실산, 아다만탄카복실산, 벤조산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 프탈산, 페닐아세트산, 만델산, 신남산, 메탄- 또는 에탄-설폰산, 2-하이드록시에탄설폰산, 에탄-1,2-디설폰산, 벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 1,5-나프탈렌디설폰산, 2-, 3- 또는 4-메틸벤젠설폰산, 메틸황산, 에틸황산, 도데실황산, N-사이클로헥실설팜산, N-메틸-, N-에틸- 또는 N-프로필-설팜산, 또는 아스코르빈산과 같은 그 밖의 유기 양자산이다.
카복시 또는 설포와 같이 음으로 하전된 래디칼의 존재 하에서, 염은 또한 염기에 의해서, 예를 들어, 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염, 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 마그네슘 또는 칼슘 염, 또는 암모니아 또는 삼급 모노아민, 예를 들어, 트리에틸아민 또는 트리(2-하이드록시에틸)아민과 같은 적합한 유기 아민, 또는 헤테로사이클릭 염기, 예를 들어, N-에틸-피페리딘 또는 N,N'-디메틸피페라진과 같은 금속 또는 암모늄염으로 형성될 수도 있다.
염기성 기 및 산 기가 동일한 분자에 존재하는 경우에, 화학식 I의 화합물은 또한 분자내염 (internal salt)을 형성할 수도 있다.
분리 또는 정제를 목적으로 하는 경우에는 또한 약제학적으로 허용되는 염, 예를 들어, 피크레이트 또는 퍼클로레이트가 사용될 수도 있다. 치료학적으로 사용하는 경우에는 단지 약제학적으로 허용되는 염 또는 유리 화합물이 사용되며 (약제학적 제제의 형태로 적용가능한 경우), 따라서 이들이 바람직하다.
유리 형태의 화합물과 예를 들어, 화합물의 정제 또는 동정 시에 중간체로서 사용될 수 있는 염을 포함한 이들의 염, 호변이성체 또는 호변이성체 혼합물 및 이들의 염 형태 사이의 밀접한 관계에 비추어, 이전 및 이하에서 화합물, 특히 화학식 I의 화합물에 대한 언급은 다른 식으로 언급되지 않은 한은 필요하고 편리한 바에 따라 이들 화합물, 특히 화학식 I의 화합물의 호변이성체, 이들 화합물, 특히 화학식 I의 화합물의 호변이성체 혼합물, 또는 이들 중의 어떤 것의 염을 또한 나타내는 것으로 이해된다.
"화합물,... 그의 호변이성체; 또는 그의 염" 등이 언급되는 경우에, 이것은 "화합물,... 그의 호변이성체, 또는 화합물 또는 호변이성체의 염"을 의미한다.
어떤 비대칭 탄소 원자라도 (R)-, (S)- 또는 (R,S)-배위, 바람직하게는 (R)- 또는 (S)-배위로 존재할 수 있다. 환에서 포화된 결합을 갖는 원자에서의 치환체는 필요하다면, 시스- (= Z-) 또는 트랜스 (= E-) 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 화합물은 이성체의 혼합물로서, 바람직하게는 순수한 이성체로서, 바람직하게는 에난티오머-부재 부분입체이성체 또는 순수 에난티오머로서 존재할 수 있다.
본 발명은 또한, 생체내에서 화학식 I의 화합물 그 자체로 전환하는 화학식 I의 화합물의 프로-드럭 (pro-drug)에 관한 것이다. 따라서, 화학식 I의 화합물에 대한 어떠한 언급이라도 필요하고 편리한 바에 따라, 화학식 I의 화합물의 상응하는 프로-드럭을 또한 의미하는 것으로 이해된다.
화학식 I의 화합물은 유용한 약물학적 특성을 가지며, 키나제 의존성 질환의 치료에, 예를 들어, 증식성 질환을 치료하기 위한 약제로서 유용하다. 용어 "타이로신 단백질 키나제 의존성 질환"은 상기의 질환, 특히 이하에 언급되는 질환의 예방적 또는 바람직하게는 치료학적 (완화 및/또는 치료를 포함) 치료에 관한 것이다.
이어서 용어 "용도 (USE)"가 언급되는 경우에, 이것은 다른 식으로 언급되지 않는 한은 필요하고 편리한 바에 따라 각각 본 발명의 다음의 구체예 중의 하나 또는 그 이상을 포함한다: (특히, 타이로신) 단백질 키나제 의존성 질환의 치료에 있어서의 용도, 상기 질환의 치료시에 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체를 사용하는 방법, 상기 질환의 치료를 위한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체를 포함하는 약제학적 제제, 및 상기 질환의 치료에 사용하기 위한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체. 특히, 치료할 질환 및 따라서, 화학식 I의 화합물을 사용하기에 바람직한 것은 이하에 언급되는 (특히, 타이로신) 단백질 키나제 의존성 ("의존성"은 "오로지 의존적"인 것만이 아니라 "지지되는" 것도 의미한다) 질환, 특히 상응하는 증식성 질환, 더욱 특히는 c-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-1, Flt-3, KDR, Her-1, PDGFR-키나제, c-Src, RET-수용체 키나제, FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4, 에프린 수용체 키나제 (예를 들어, EphB2 키나제, EphB4 키나제 및 관련된 Eph 키나제), 카제인 키나제 (CK-1, CK-2, G-CK), Pak, ALK, ZAP70, Jak1, Jak2, Ax1, Cdk1, cdk4, cdk5, Met, FAK, Pyk2, Syk, 인슐린 수용체 키나제, Tie-2, 또는 Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-3, FGF-R3, PDGF-수용체, RET 및 Met와 같은 키나제 (활성화 키나제)의 구성적 활성화 돌연변이체 (이하에서는 "상기의 키나제")에 의존적인 질환으로부터 선택되며, 따라서 키나제 의존성 질환, 특히 상기의 키나제에 의존적인 질환 및 (특히 비정상적으로 고도로-발현되거나 구성적으로 활성화된 상기 키나제-의존성 질환 또는 상기 키나제 경로 또는 언급된 키나제 중의 두개 또는 그 이상의 조합의 활성화에 의존적인 질환의 치료에 사용될 수 있다.
가장 바람직한 것은 c-Abl, Flt-3, KDR, c-Src, RET, EphB4, c-kit, cdk1, FGFR-1, c-raf, Her-1, Ins-R 및 Tek에 의존적인 질환을 치료하기 위한 화학식 I의 화합물의 용도, 및 c-abl, Flt-3, KDR, c-Src, RET, EphB4, c-kit, FGFR-1, c-raf, cdk1, Her-1, Ins-R 및 Tek의 억제제로서 화학식 I의 화합물의 용도이다.
또한, 생체내에서 화학식 I의 화합물의 항종양 활성을 입증하기 위한 실험들이 있다.
화학식 I의 화합물은 유용한 약물학적 특성을 가지며, 단백질 키나제 의존성 질환의 치료시에 예를 들어, 증식성 질환을 치료하기 위한 약물로서 유용하다.
RET 의 억제는 다음과 같이 측정된다: 바큘로바이러스 (baculovirus) 공여체 벡터 pFB-GSTX3을 사용하여 RET (wtRET) 및 활성화 루프 M918T에서 돌연변이를 활성화시킴으로써 wtRET와는 상이한 RET-Men2B의 야생형 키나제 영역에 상응하는 인간 RET-Men2A의 세포질내 키나제 영역의 아미노산 부분 658-1072 (Swiss prot No. Q9BTBO)를 발현하는 재조합체 바큘로바이러스를 생성시킨다. wtRET 및 RET-Men2B의 세포질 영역에 대한 코드화 서열은 플라스미드 pBABEpuro RET-Men2A 및 pBABEpuro RET-Men2B로부터 PCR에 의해서 증폭된다. 증폭된 DNA 단편 및 pFB-GSTX3 벡터는 SalI 및 KpnI에 의한 분해에 의해서 연결 (ligation)에 적합하도록 만든다. 이들 DNA 단편의 연결은 각각 바큘로바이러스 공여체 플라스미드 pFB-GX3-RET-Men2A 및 pFB-GX3-RET-Men2B를 생성한다.
바이러스의 생산: 키나제 영역을 함유하는 전이 벡터 (transfer vector)를 DH10Bac 세포주 (GIBCO)에 형질감염시키고, 선택적 한천 플레이트 상에 도말(plating)한다. 바이러스성 지놈 (박테리아에 의해서 운반됨) 내에 융합 서열이 삽입되지 않은 콜로니는 청색이다. 단일의 백색 콜로니를 수집하고, 표준 플라스미드 정제방법에 의해서 박테리아로부터 바이러스성 DNA (bacmid)를 분리한다. 그 후, Sf9 세포 또는 Sf21 (American Type Culture Collection) 세포는 셀펙틴 시약 (Cellfectin reagent)을 사용하여 25 ㎠ 플라스크 내에서 바이러스성 DNA로 형질감염시킨다.
Sf9 세포에서 소규모 단백질 발현의 측정: 바이러스-함유 배지를 형질감염된 세포 배양물로부터 수집하고, 그의 역가를 증가시키기 위한 감염에 사용한다. 2 회 감염시킨 후에 수득된 바이러스-함유 배지를 대규모 단백질 발현을 위해서 사용한다. 대규모 단백질 발현을 위해서, 100 ㎠ 둥근 조직배양 플레이트를 5×107 세포/플레이트로 접종하고, 1 ㎖의 바이러스-함유 배지 (약 5 MOIs)로 감염시킨다. 3 일 후에, 세포를 플레이트로부터 긁어서 500 rpm으로 5 분 동안 원심분리한다. 10-20 개의 100 ㎠ 플레이트로부터 수득한 세포 펠릿을 50 ㎖의 빙냉 용해 (lysis) 완충액 (25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1 mM DTT, 1 mM PMSF)에 재현탁시킨다. 세포를 얼음 상에서 15 분 동안 교반한 다음에, 5000 rpm으로 20 분 동안 원심분리한다.
GST -태깅된 ( tagged ) 단백질의 정제: 원심분리된 세포 용해물을 2 ㎖ 글루타치온-세파로즈 칼럼 (Pharmacia) 상에 로딩하고, 10 ㎖의 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3회 세척한다. 그 후, GST-태깅된 단백질을 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 10 mM 환원된-글루타치온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10% 글리세롤을 10 회 적용 (매 1 ㎖씩)함으로써 용출시키고, -70℃에서 저장한다.
효소 활성의 측정: 정제된 GST-wtRET 또는 GST-RET-Men2B 단백질에 의한 타이로신 단백질 키나제 시험은 15 ng의 GST-wtRET 또는 GST-RET-Men2B 단백질, 20 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 1 mM MnCl2, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 3 ㎍/㎖ 폴리(Glu, Tyr) 4:1, 1% DMSO, 2.0 μM ATP (γ-[33P]-ATP 0.1 μCi)를 함유하는 30 ㎕의 최종 용적으로 수행한다. 활성은 억제제의 존재 또는 부재 하에서 [γ33P]ATP로부터의 33P가 폴리(Glu, Tyr) 4:1 내로 통합되는 것을 측정함으로써 시험한다. 이 시험은 주위온도에서 15 분 동안, 이하에 기술된 조건 하에 96-웰 플레이트에서 수행하고, 20 ㎕의 125 mM EDTA를 첨가함으로써 종결시킨다. 이어서, 40 ㎕의 반응혼합물을 메탄올로 미리 5 분 동안 침지시키고, 물로 세정하고 다시 5 분 동안 0.5% H3PO4로 침지시킨 임모빌론 (Immobilon)-PVDF 막 (Millipore)에 옮기고, 연결되지 않은 진공 공급원을 갖는 진공 매니폴드 (vacuum manifold) 상에 장착한다. 모든 샘플을 스포팅한 후에, 진공을 연결시키고, 각각의 웰을 200 ㎕의 0.5% H3PO4로 세정한다. 막을 분리하여 진탕기 (shaker) 상에서 1.0% H3PO4로 4 회 및 에탄올로 1 회 세척한다. 막은 주위온도에서 건조시키고, 패카드 톱카운트 (Packard TopCount) 96-웰 프레임 (frame)에 장착하고 10 ㎕/웰의 마이크로신트 (Microscint) TM (Packard)를 첨가한 후에 계수한다. IC50 값은 4 가지 농도 (통상적으로 0.01, 0.1, 1 및 10 μM)의 각각의 화합물의 억제 백분율의 선형회귀분석을 이중으로 실시함으로써 계산된다. 단백질 키나제 활성의 1 유니트는 37℃에서 [γ33P] ATP로부터 기질 단백질에 전이된 33P ATP의 1 nmole/분/단백질의 ㎎로서 정의된다.
IC50 계산
투입 3×4 ㎕ 임모빌론 막 상에서의 시험을 중지함, 세척하지 않음
백그라운드 (3 웰) 효소 대신에 H2O를 사용한 시험
양성 대조군 (4 웰) 화합물 대신에 3% DMSO
액조 (bath) 대조군 (1 웰) 반응혼합물 부재.
IC50 값은 각각의 화합물의 4 가지 농도 (통상적으로 10 μM에서 시작하여 3- 또는 10-배 희석계열)에서의 억제 백분율의 대수적 회귀분석에 의해서 계산된다. 각각의 실험에서 기준 화합물에 의한 실제 억제가 기준 억제제의 평균값에 대하여 IC50 값을 표준화하기 위하여 사용된다:
표준화된 IC50 = 측정된 IC50 평균 기준 IC50 / 측정된 기준 IC50
예: 실험에서 기준 억제제 0.4 μM, 평균 0.2 μM
실험에서 시험화합물 1.0 μM, 표준화: 0.3/0.4 = 0.75 μM
예를 들어, 스타우로스포린 또는 합성 스타우로스포린 유도체가 기준 화합물로 사용된다.
이러한 프로토콜을 사용하여, 화학식 I의 화합물은 RET 억제에 대하여 0.005-100 μM의 범위, 바람직하게는 0.01-2 μM의 범위의 IC50 값을 나타내는 것으로 확인되었다.
c- Abl 단백질- 타이로신 키나제 활성의 억제제로서 본 발명의 화합물의 효능은 다음과 같이 입증될 수 있다: 시험관내 효소시험은 96-웰 플레이트에서, 다음과 같이 변형시킨 문헌 (Geissler et al., Cancer Res. 1992; 52:4492-4498)에 기술된 바와 같은 필터 결합시험으로 수행된다. c-Abl의 His-태깅된 키나제 영역은 문헌 (Bhat et al., J. Biol. Chem. 1997;272:16170-16175)에 기술된 바와 같이 바큘로바이러스/Sf9 시스템에서 클로닝되고 발현된다. 37 kD의 단백질 (c-Abl 키나제)은 코발트 금속 킬레이트 칼럼에 이은 음이온 교환칼럼 상에서 2-단계 방법에 의해서 정제하여 1-2 ㎎/L의 Sf9 세포를 수득한다 (Bhat et al., 인용된 문헌). c-Abl 키나제의 순도는 쿠마시 블루 염색 이후의 SDS-PAGE에 의해서 판단된 것으로서 > 90%이다. 시험은 다음을 함유한다 (총용적 30 ㎕): 1% DMSO의 존재 하에서 30 ㎍/㎖ 폴리-Ala,Glu,Lys,Tyr-6:2:5:1 (Poly-AEKY, Sigma P1152)을 사용하여 c-Abl 키나제 (50 ng), 20 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 μM Na3VO4, 1 mM DTT 및 0.06 μCi/시험의 [γ33P]-ATP (5 μM ATP).
반응은 10 ㎕의 250 mM EDTA를 첨가함으로써 종결되며, 30 ㎕의 반응혼합물을 미리 5 분 동안 메탄올로 침지시키고, 물로 세정한 다음에 5 분 동안 0.5% H3PO4로 침지시킨 임모빌론-PVDF 막 (Millipore, Bedford, MA, USA) 상에 옮기고, 연결되지 않은 진공 공급원을 갖는 진공 매니폴드 상에 장착한다. 모든 샘플을 스포팅한 후에, 진공을 연결시키고, 각각의 웰을 200 ㎕의 0.5% H3PO4로 세정한다. 막을 분리하여 진탕기 상에서 0.5% H3PO4 (4 회)로, 및 에탄올로 1 회 세척한다. 막은 주위온도에서 건조시키고, 패카드 톱카운트 96-웰 프레임에 장착하고 10 ㎕/웰의 마이크로신트 TM (Packard)를 첨가한 후에 계수한다.
이 시험 시스템을 사용하여, 화학식 I의 화합물은 c-Abl 억제에 대하여 0.002-100 μM의 범위, 통상적으로는 0.002-5 μM의 사이의 IC50 값을 나타낸다.
KDR 단백질- 타이로신 키나제 활성의 억제제로서 본 발명의 화합물의 효능은 다음과 같이 입증될 수 있다: VEGF-유도된 수용체 자가포스포릴화의 억제는 영구적으로 인간 VEGF-R2 수용체 (KDR)를 발현하며, 6-웰 세포-배양 플레이트 내의 완전 배양배지 (10% 태자 송아지 혈청 (=FCS)을 함유)에 접종되어 이들이 약 80%의 합류 (confluency)를 나타낼 때까지 5% CO2 하에 37℃에서 배양하는 형질감염된 CHO 세포와 같은 세포에서의 추가의 시험관내 실험으로 확인될 수 있다. 그 후, 시험할 화합물을 배양배지 (FCS가 없이 0.1% 소혈청알부민을 함유)에 희석시키고, 세포에 첨가한다 (대조군은 시험화합물이 없는 배지로 이루어진다). 37℃에서 2 시간 배양한 후에, 재조합 VEGF를 첨가하는데, 최종 VEGF 농도는 20 ng/㎖이다. 37℃에서 추가로 5 분 동안 배양한 후에, 세포를 빙냉 PBS (포스페이트-완충 식염수)로 2 회 세척하고, 웰 당, 100 ㎕의 용해 완충액에 즉시 용해시킨다. 그 후, 용해물을 원심분리하여 세포핵을 제거하고, 상등액의 단백질 농도는 시판 단백질 시험법 (BIORAD)을 사용하여 측정된다. 그 후, 용해물은 즉시 사용될 수 있거나, 또는 필요한 경우에 -20℃에서 저장할 수 있다.
샌드위치 ( sandwich ) ELISA 를 수행하여 VEGF - R2 포스포릴화를 측정한다: VEGF-R2에 대한 모노클로날 항체 (예를 들어, Mab 1495.12.14; ProQinase, Freiburg, Germany)를 블랙 (black) ELISA 플레이트 (OptiPlate TM HTRF-96; Packard) 상에 고정시킨다. 그 후, 플레이트를 세척하고, 나머지 유리 단백질-결합부위를 트윈 20 (Tween 20™; 폴리옥시에틸렌(20)-소르비탄 모노라우레이트, ICI/Uniquema)을 함유하는 포스페이트 완충된 식염수 (PBST) 중에서 3% 톱블럭 (TopBlock™; Juro, Cat. # TB232010)으로 포화시킨다. 그 후, 세포 용해물 (웰당, 20 ㎍ 단백질)을 이들 플레이트 내에서 알칼리성 포스파타제에 커플링된 안티포스포타이로신 항체 (Zymed로부터의 PY20:AP)와 함께 4℃에서 밤새 배양한다. (플레이트를 다시 세척한 다음에) 포획된 포스포릴화 수용체에 대한 안티포스포타이로신 항체의 결합은 발광성 AP 기질 (Emerald II와 함께 즉시 사용형의 CDP-Star; Applied Biosystems)을 사용하여 나타낸다. 발광도는 패카드 톱카운트 마이크로플레이트 신틸레이션 카운터 (Packard Top Count Microplate Scintillation Counter)에서 측정된다. 양성 대조군 (VEGF에 의해서 자극)의 시그날과 음성 대조군 (VEGF에 의해서 자극되지 않음)의 시그날 사이의 차이는 VEGF-유도된 VEGF-R2 포스포릴화 (= 100%)에 상응한다. 시험물질의 활성은 VEGF-유도된 VEGF-R2 포스포릴화의 억제율로 계산되며, 여기에서 최대 억제의 절반을 유도하는 물질의 농도가 IC50 (50% 억제를 위한 억제 용량)으로 정의된다. 여기에서, 화학식 I의 화합물은 KDR 억제에 대해서 0.005 내지 20 μM의 범위, 바람직하게는 0.005 내지 1 μM 사이의 IC50을 나타낸다.
Flt3 키나제 억제는 다음과 같이 측정된다: 바큘로바이러스 공여체 벡터 pFbacG01 (GIBCO)을 사용하여 인간 Flt-3의 세포질 키나제 영역의 아미노산 부분 아미노산 563-993를 발현하는 재조합체 바큘로바이러스를 생성시킨다. Flt3의 세포질 영역에 대한 코드화 서열은 인간 c-DNA 라이브러리 (Clontech)로부터 PCR에 의해서 증폭된다. 증폭된 DNA 단편 및 pFbacG01 벡터는 BamH1 및 HindIII에 의한 분해에 의해서 연결에 적합하도록 만든다. 이들 DNA 단편의 연결은 바큘로바이러스 공여체 플라스미드 Flt-3(1.1)을 생성한다. 바이러스의 생산, Sf9 세포에서 단백질의 발현 및 GST-융합된 단백질의 정제는 다음과 같이 수행된다.
바이러스의 생산: Flt-3 키나제 영역을 함유하는 전이 벡터 (pFbacG01-Flt-3)를 DH10Bac 세포주 (GIBCO)에 형질감염시키고, 형질감염된 세포를 선택적 한천 플레이트 상에 도말한다. 바이러스성 지놈 (박테리아에 의해서 운반됨) 내에 융합 서열이 삽입되지 않은 콜로니는 청색이다. 단일의 백색 콜로니를 수집하고, 표준 플라스미드 정제방법에 의해서 박테리아로부터 바이러스성 DNA (bacmid)를 분리한다. 그 후, Sf9 세포 또는 Sf21 세포 (American Type Culture Collection)는 셀펙틴 시약을 사용하여 플라스크 내에서 바이러스성 DNA로 형질감염시킨다.
Sf9 세포에서 소규모 단백질 발현의 측정: 바이러스-함유 배지를 형질감염된 세포 배양물로부터 수집하고, 그의 역가를 증가시키기 위한 감염에 사용한다. 2 회 감염시킨 후에 수득된 바이러스-함유 배지를 대규모 단백질 발현을 위해서 사용한다. 대규모 단백질 발현을 위해서, 100 ㎠ 둥근 조직배양 플레이트를 5×107 세포/플레이트로 접종하고, 1 ㎖의 바이러스-함유 배지 (약 5 MOIs)로 감염시킨다. 3 일 후에, 세포를 플레이트로부터 긁어서 500 rpm으로 5 분 동안 원심분리한다. 10-20 개의 100 ㎠ 플레이트로부터 수득한 세포 펠릿을 50 ㎖의 빙냉 용해 완충액 (25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1 mM DTT, 1 mM PMSF)에 재현탁시킨다. 세포를 얼음 상에서 15 분 동안 교반한 다음에, 5000 rpm으로 20 분 동안 원심분리한다.
GST -태깅된 단백질의 정제: 원심분리된 세포 용해물을 2 ㎖ 글루타치온-세파로즈 칼럼 (Pharmacia) 상에 로딩하고, 10 ㎖의 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3회 세척한다. 그 후, GST-태깅된 단백질을 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 10 mM 환원된-글루타치온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10% 글리세롤을 10 회 적용 (매 1 ㎖씩)함으로써 용출시키고, -70℃에서 저장한다.
효소 활성의 측정: 정제된 GST-Flt3에 의한 타이로신 단백질 키나제 시험은 200-1800 ng의 효소 단백질 (비활성에 따라서), 20 mM 트리스-HCl, pH 7.6, 3 mM MnCl2, 3 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 μM Na3VO4, 3 ㎍/㎖ 폴리(Glu, Tyr) 4:1, 1% DMSO, 8.0 μM ATP 및 0.1 μM [γ33P]ATP를 함유하는 30 ㎕의 최종 용적으로 수행한다. 활성은 억제제의 존재 또는 부재 하에서 [γ33P]ATP로부터의 33P가 폴리(Glu, Tyr) 기질 내로 통합되는 것을 측정함으로써 시험한다. 이 시험 (30 ㎕)은 주위온도에서 20 분 동안, 이하에 기술된 조건 하에 96-웰 플레이트에서 수행하고, 20 ㎕의 125 mM EDTA를 첨가함으로써 종결시킨다. 이어서, 40 ㎕의 반응혼합물을 메탄올로 미리 5 분 동안 침지시키고, 물로 세정하고 다시 5 분 동안 0.5% H3PO4로 침지시킨 임모빌론-PVDF 막 (Millipore, Bedford, MA, USA)에 옮기고, 연결되지 않은 진공 공급원을 갖는 진공 매니폴드 상에 장착한다. 모든 샘플을 스포팅한 후에, 진공을 연결시키고, 각각의 웰을 200 ㎕의 0.5% H3PO4로 세정한다. 막을 분리하여 진탕기 상에서 1.0% H3PO4로 4 회 및 에탄올로 1 회 세척한다. 막은 주위온도에서 건조시키고, 패카드 톱카운트 96-웰 프레임에 장착하고 10 ㎕/웰의 마이크로신트 TM (Packard)를 첨가한 후에 계수한다. IC50 값은 4 가지 농도 (통상적으로 0.01, 0.1, 1 및 10 μM)의 각각의 화합물의 억제 백분율의 선형회귀분석을 이중으로 실시함으로써 계산된다. 단백질 키나제 활성의 1 유니트는 37℃에서 [γ33P] ATP로부터 기질 단백질에 전이된 33P ATP의 1 nmole/분/단백질의 ㎎로서 정의된다. 화학식 I의 화합물은 Flt-3 억제에 대하여 0.01 내지 100 μM의 범위, 바람직하게는 0.05 내지 10 μM의 범위의 IC50 값을 나타낸다. 화학식 I의 화합물은 또한, 특히 c-Src 키나제, c-Kit, VEGF-R 및/또는 FGFR (이들은 모두 동물, 특히 인간 세포를 포함한 포유동물 세포에서 성장조절 및 형질전환에 참여하는 작용을 한다)과 같은 그 밖의 다른 타이로신 단백질 키나제를 억제한다. 적절한 시험방법은 문헌 (Andrejauskas-Buchdunger et al., Cancer Res. 52, 5353-8 (1992))에 기술되어 있다. 이 시험 시스템을 사용하여 화학식 I의 화합물은 c-Src의 억제에 대하여 0.005 내지 100 μM의 범위, 통상적으로는 0.005 내지 5 μM의 범위의 IC50 값을 나타낸다. 화학식 I의 화합물은 또한, c-kit 억제에 대하여 0.005 내지 10 μM의 범위, 통상적으로는 0.005 내지 5 μM의 범위의 IC50 값; 및 FGFR-1의 억제에 대하여 10 μM에서 95% 이하의 억제를 나타낸다.
IGF -1R 및 Ins -R의 억제는 다음과 같이 측정될 수 있다: 바큘로바이러스 공여체 벡터 pfbgx3IGF1Rcd를 사용하여 인간 IGF-1R의 성숙 펩타이드 세포질 영역의 아미노산 부분 950-1337을 발현하는 재조합체 바큘로바이러스를 생성시킨다. 인간 인슐린 수용체의 세포질내 키나제 영역의 아미노산 부분 919-1343을 코드화한 cDNA 단편을 생성시키기 위해서는 pC5hInsR이 사용된다. 인간 IGF-1R 및 Ins-R의 단편을 클로닝하고, 발현시키고, 재조합 바큘로바이러스 생성의 Bac-to-Bac™ 시스템 (GIBCO BRL)을 사용하여 인자 Xa-분해가능한 글루타치온-S-트랜스퍼라제 (GST)-융합 단백질로 소규모 정제한다. 바이러스-함유 배지를 형질감염된 세포 배양물로부터 수집하고, 그의 역가를 증가시키기 위한 감염에 사용한다. 2 회 감염시킨 후에 수득된 바이러스-함유 배지를 대규모 단백질 발현을 위해서 사용한다. 세포 추출물을 제조하여, 글루타치온-세파로즈 (Pharmacia) 칼럼 상에 로딩한다. 세척한 후에, GST-태깅된 단백질을 글루타치온-함유 완충액으로 용출시킨다. 정제된 단백질은 용출 완충액 중에서 -70℃로 저장한다. 정제된 GST-IGF-1R 및 GST-Ins-R에 의한 타이로신 단백질 키나제 시험은 20 mM 트리스-HCl, pH 7.6, 10 mM MgCl2, 0.01 mM Na3VO4, 1% DMSO, 1 mM DTT, 3 ㎍/㎖ 폴리(Glu, Tyr) 4:1, 및 10 μM ATP (γ-[33P]-ATP 0.1 μCi)를 함유하는 30 ㎕의 최종 용적으로 수행한다. 이 시험은 주위온도에서 20 분 동안 96-웰 플레이트에서 수행하고, 25 ㎕의 0.05 M EDTA pH 7.0을 첨가함으로써 종결시킨다. 40 ㎕의 분취액을 저진공 공급원에 연결된 밀리포어 마이크로타이터 필터 매니폴드 (Millipore Microtiter filter manifold) 내에 장착된 왓트만 (Whatman) P81 막 상에 멀티채널 디스펜서 (multichannel dispenser)로 스포팅한다. 액체를 제거한 후에, 막을 0.5% H3PO4를 함유하는 4 개의 세척욕 및 EtOH를 함유하는 하나의 세척욕의 순서 (각각 10분 동안 진탕배양)로 옮기고, 건조시키고, 휴렛 패카드 톱카운트 매니폴드 상에 장착하고, 10 ㎕ 마이크로신트™를 첨가한 후에 계수한다. 화학식 I의 화합물은 10,000 nM에서 Ins-R의 90% 이하의 억제, 바람직하게는 60-90% 억제를 나타낸다.
Tek 의 억제는 다음과 같이 측정될 수 있다: 이들 키나제를 발현, 정제 및 시험하는 방법은 문헌 (Fabbro et al., Pharmacol. Ther., 82(2-3), 293-301 (1999))에 기술되어 있다. 간략하면, pAcG1 벡터 (Pharmingen)로부터 글루타치온 S-트랜스퍼라제 (GST)를 EcoRV 및 EcoRI에 의해서 절제하고, 패스트-백 (Fast-Bac) 바큘로바이러스 벡터 (GIBCO)의 클로닝 부위에 삽입하여 pAcG1 융합벡터 (FBGO)로부터 유도된 N-말단 클로닝 부위를 갖는 5530 bp 벡터를 생성시킨다. C-말단 클로닝 부위는 사용된 N-말단 클로닝 부위의 하류의 어떤 클로닝 부위 (패스트-백 벡터로부터 유래)라도 될 수 있다. N-말단적으로 GST-융합된 (pAcG1, Pharminogen) KDR, Flt-1, Flk-1, Tek 및 PDGFR-β 키나제 영역은 프로퀴나제 (ProQinase, Freiburg, Germany)로부터 수득된다. Tek를 EcoRI 절제 및 EcoRI 분해된 FBG1 내로의 연결에 의해서 FBG1 벡터에서 재클로닝한다 (FBG1-Tek). c-Kit (aa 544-976) 및 c-Fms (aa 538-972)의 전체 세포질 영역에 대한 코드화 서열은 각각 인간 자궁으로부터 및 인간 골수 cDNA 라이브러리 (Clontech)로부터 PCR에 의해서 증폭된다. 증폭된 DNA 단편은 이들을 BamHI-EcoRI 삽입부로서 FBG1에 클로닝함으로써 GST에 융합시켜 FBG1-c-Kit 및 FBG1-c-Fms를 수득한다. Tek를 EcoRI 절제 및 EcoRI 분해된 FBG0 내로의 연결에 의해서 FBG0 벡터에서 재클로닝한다 (FBG-Tie2/Tek). FGFR-1 및 c-met 키나제 영역은 인간 A431 세포로부터 PCR에 의해서 수득된다. N-말단 프라이머는 현수된 (overhanging) EcoRI 부위를 함유하는 반면에, C-말단 프라이머는 전이 벡터 내로의 클로닝을 돕는 XhoI 부위를 함유한다. PCR 단편 및 FBG0 둘 다를 분해한 후에, 분해 생성물을 겔-정제하고, 함께 연결시켜 키나제 작제물 (FBG-Met, FBG-FGFR-1)을 형성한다.
키나제 각각에 대한 바이러스는 GIBCO에 의해서 공급된 프로토콜에 따라서 제조된다. 간략하면, 키나제 영역을 함유하는 전이 벡터를 DH10Bac 세포주 (GIBCO)에 형질감염시키고, 추천된 농도의 Blue-Gal, IPTG, 카나마이신, 테트라사이클린 및 겐타마이신을 함유하는 한천 플레이트 상에 도말한다. 바이러스성 지놈 (박테리아에 의해서 운반됨) 내에 융합 서열이 삽입되지 않은 콜로니는 청색이다. 통상적으로 단일의 백색 콜로니를 수집하고, 표준 플라스미드 미니 프렙 (mini prep)방법에 의해서 박테리아로부터 바이러스성 DNA (bacmid)를 분리한다. 그 후, Sf9 세포 또는 하이 화이브 (High Five) 세포 (GIBCO)는 셀펙틴 시약 및 Bac-to-Bac 키트 (GIBCO)와 함께 공급된 프로토콜을 사용하여 25 ㎠ 플라스크 내에서 바이러스성 DNA로 형질감염시킨다. 바이러스-함유 배지를 형질감염된 세포 배양물로부터 수집하고, 그의 역가를 증가시키기 위한 감염에 사용한다. 2 회 감염시킨 후에 수득된 바이러스-함유 배지를 대규모 단백질 발현을 위해서 사용한다. 대규모 단백질 발현을 위해서, 100 ㎠ 둥근 조직배양 플레이트를 5×107 세포/플레이트로 접종하고, 1 ㎖의 바이러스-함유 배지 (약 5 MOIs)로 감염시킨다. 3 일 후에, 세포를 플레이트로부터 긁어서 500 rpm으로 5 분 동안 원심분리한다.
10-20 개의 100 ㎠ 플레이트로부터 수득한 세포 펠릿을 50 ㎖의 빙냉 용해 완충액 (25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1 mM DTT, 1 mM PMSF)에 재현탁시킨다. 세포를 얼음 상에서 15 분 동안 교반한 다음에, 5000 rpm으로 20 분 동안 원심분리한다. 상등액을 2 ㎖ 글루타치온-세파로즈 칼럼 상에 로딩하고, 10 ㎖의 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 2 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 mM NaCl로 3회 세척한다. 그 후, GST-태깅된 단백질을 25 mM 트리스-HCl, pH 7.5, 10 mM 환원된-글루타치온, 100 mM NaCl, 1 mM DTT, 10% 글리세롤을 10 회 적용 (매 1 ㎖씩)함으로써 용출시키고, -70℃에서 저장한다.
시험 (30 ㎕)은 200-1800 ng의 효소 단백질 (비활성에 따라서), 20 mM 트리스-HCl, pH 7.6, 3 mM MnCl2, 3 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 μM Na3VO4, 3 ㎍/㎖ 폴리(Glu, Tyr) 4:1, 8 μM ATP (γ-[33P]-ATP 0.1 μCi)를 함유한다. 반응액은 주위온도에서 20 분 동안 배양한 다음에, 25 ㎕의 0.25 M EDTA (pH 7.0)를 첨가함으로써 중지시킨다. 40 ㎕의 분취액을 저진공 공급원에 연결된 밀리포어 마이크로타이터 필터 매니폴드 내에 장착된 임모비론 P 막 상에 멀티채널 디스펜서로 스포팅한다. 액체를 제거한 후에, 막을 0.5% H3PO4를 함유하는 4 개의 세척욕 및 EtOH를 함유하는 하나의 세척욕의 순서 (각각 10분 동안 진탕배양)로 옮기고, 건조시키고, 휴렛 패카드 톱카운트 매니폴드 상에 장착하고, 10 ㎕ 마이크로신트™를 첨가한 후에 계수한다. 화학식 I의 화합물은 선형회귀분석에 의해서 계산된 것으로, Tek 억제에 대하여 약 0.1-100 μM의 IC50 값을 나타낸다.
Cdk1 의 억제는 다음과 같이 측정될 수 있다: Cdk1/cycB: Cdk1/cycB는 프로퀴나제 (ProQinase, Freiburg, Germany)로부터 수득된다. 불가사리 난모세포는 10 μM 1-메틸아데닌에 의해서 세포주기의 M 상에 들어가도록 유도하고, 액체 질소 중에서 동결시키고, -80℃에서 저장한다. 필요한 경우에, 난모세포를 문헌 (Arion et al., Cell 55: 371-378 (1988) 및 Rialet et al., Ancticancer Res. 11: 158101590 (1991))에 기술된 바와 같이 균질화시키고 원심분리시킨다. Cdk1/cycB 키나제를 문헌 (Azzi et al., Eur. J. Biochem. 203: 353-360 (1992))에 기술된 바와 같이, p9CKSHs-세파로즈 비드 상에서 정제하고, 재조합 인간 p9CKShs로 용출시킨다. 간략하면, 난모세포로부터의 상등액을 p9CKShs 세파로즈 비드와 함께 일정하게 회전시키면서 4℃에서 30분 동안 평형화시킨다. 비드를 광범하게 세척하고, 활성 Cdk1/cycB 키나제를 정제된 p9CKShs (3 ㎎/㎖)로 용출시킨다. Cdk1/cycB의 활성은 문헌 (Arion et al., Cell 55: 371-378 (1988), Meijer et al., EMBO J. 1989; 8: 2275-2282, 및 Meijer et al., EMBO J. 1991; 8: 2275-2282)에 기술된 바와 같이 측정된다. 시험은 주위온도에서 20 분 동안, 96-웰 플레이트에서 약간 변형시켜 수행된다. 30 ㎕의 최종 용적은 0.1-0.3 U의 Cdk1/cycB, 기질로서 1 ㎎/㎖의 히스톤 H1, 60 mM β-글리세로포스페이트, 30 mM 니트로페닐포스페이트, 25 mM MOPS, 5 mM EGTA, 15 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.1 mM Na3VO4, 15 μM ATP 및 0.1 μCi γ-33P-ATP (75 μM, 8800 cpm/pmole)를 함유한다. 반응은 25 ㎕의 0.05 M EDTA pH 7.0을 첨가함으로써 종결시킨다. 40 ㎕의 분취액을 저진공 공급원에 연결된 밀리포어 마이크로타이터 필터 매니폴드 내에 장착된 임모비론 P 막 상에 멀티채널 디스펜서로 스포팅한다. 액체를 제거한 후에, 막을 0.5% H3PO4를 함유하는 4 개의 세척욕 및 EtOH를 함유하는 하나의 세척욕의 순서 (각각 10분 동안 진탕배양)로 옮기고, 건조시키고, 휴렛 패카드 톱카운트 매니폴드 상에 장착하고, 10 ㎕ 마이크로신트™를 첨가한 후에 계수한다. 화학식 I의 화합물은 10,000 nM에서 100% 까지의 Cdk1 억제를 나타낸다.
c- Raf -1의 억제는 다음과 같이 측정될 수 있다: 재조합 c-Raf-1 단백질은 Sf21 세포는 GST-c-Raf-1 재조합 바큘로바이러스와 함께 활성 c-Raf-1 키나제 생산에 필요한 v-Src 및 v-Ras 재조합 바큘로바이러스에 의해서 삼중 감염시킴으로써 수득된다 (Williams et al., PNAS 1992; 89: 2922-2926). 활성 Ras (v-Ras)는 세포막에 c-Raf-1를 보충하기 위해서 필요하며, v-Src는 c-Raf-1을 포스포릴화시켜 이것을 완전히 활성화시키는데 필요하다 (Williams et al., PNAS 1992; 89: 2922-2926). 세포를 150 ㎜ 접시당, 2.5×107 세포로 접종하고, RT에서 1시간 동안 150 ㎜ 접시에 부착하도록 허용하였다. 배지 (10% FBS를 함유하는 SF900II)를 흡인하고, 재조합 바큘로바이러스 GST-C-Raf-1, v-Ras 및 v-Src를 각각 4-5 ㎖의 총용적로 하여 3.0, 2.5 및 2.5의 MOI로 첨가한다. 세포를 RT에서 1 시간 동안 배양한 다음에, 15 ㎖의 배지를 첨가한다. 감염된 세포를 27℃에서 48-72 시간 동안 배양한다. 감염된 Sf21 세포를 긁어내어 50 ㎖의 튜브 내로 수집하고, 소르발 (Sorvall) 원심분리기에서 1100 g으로 4℃에서 10 분 동안 원심분리한다. 세포 펠릿을 빙냉 PBS로 1회 세척하고, 2.5×107 세포당, 0.6 ㎖ 용해 완충액으로 용해시킨다. 세포의 완전한 용해는 때때로 파이펫팅 (pipetting)하면서 얼음 상에서 10분 후에 이루어진다. 세포 용해물은 4℃에서 SS-34 회전자 (rotor)를 갖는 소르발 원심분리기에서 14,500 g으로 10 분 동안 원심분리하고, 상등액을 새로운 튜브에 옮겨 -80℃에서 저장한다. c-Raf-1은 2.5×107 세포당, 빙냉 PBS 중에서 평형화된 10 ㎕의 패킹된 (packed) 글루타치온-세파로즈 4B 비드를 사용하여 세포 용해물로부터 정제한다. GST-c-Raf-1은 4℃에서 1 시간 동안, 진동시키면서 비드에 결합하도록 하였다. 비드와 결합된 GST-c-Raf-1을 칼럼에 옮긴다. 칼럼을 라이신 완충액으로 한번 및 빙냉 트리스 완충 식염수로 두번 세척한다. 빙냉 용출 완충액을 첨가하고, 칼럼 유동을 중지시켜 유리 글루타치온이 GST-c-Raf-1과 글루타치온 세파로즈 비드와의 상호작용을 파괴하도록 하였다. 분획 (1 ㎖)을 전-충진된 튜브 내에 수집한다. 각각의 튜브는 동결해동주기 중에 키나제 활성을 유지하도록 10% 글리세롤 (최종 농도)을 함유한다. GST-c-Raf-1 키나제 단백질의 정제된 분획을 -80℃에서 저장한다.
IκB가 c-Raf-1 키나제를 위한 기질로 사용되었다. IκB는 박테리아에서 His-태깅된 단백질로 발현된다 (Dr . Eder ( ABM , Norvatis , Basel )에 의해서 클로닝되고, 기꺼이 제공됨). IκB 플라스미드를 함유하는 BL21 LysS 박테리아는 LB 배지에서 0.6의 OD600으로 성장시킨 다음에, 37℃에서 3 시간 동안, IPTG (최종 농도 1 mM)에 의해서 kb를 발현하도록 유도한 다음에, 박테리아를 초음파 (초음파 완충액 [50 mM 트리스 pH 8.0, 1 mM DTT, 1 mM EDTA] 중에서 매회 1 분씩 3 회로 설정한 마이크로팁 한계 (microtip limit))에 의해서 용해시키고, 15 분 동안 10,000 g으로 원심분리시킨다. 상등액을 황산암모늄과 혼합시켜 30%의 최종 농도를 제공한다. 이 혼합물을 4℃에서 진동시킨 다음에 15 분 동안 10,000 g으로 회전시킨다. 펠릿을 10 mM BSA를 함유하는 결합 완충액 (Novagen) 중에 재현탁시킨다. 이 용액을 Ni-아가로즈 (Novagen)에 적용하고 노바겐 매뉴얼 (Novagen manual)에 따라 세척한다. IκB는 용출 완충액 (0.4 M 이미다졸, 0.2 M NaCl, 8 mM 트리스 pH 7.9)을 사용하여 칼럼으로부터 용출시킨다. 단백질을 함유하는 분획을 50 mM 트리스 pH 8, 1 mM DTT에서 투석시킨다.
c-Raf-1 단백질 키나제의 활성은 억제제의 존재 또는 부재 하에서, [γ33P]로부터의 33P가 IB에 통합한 것을 측정함으로써 시험한다. 이 시험은 주위온도에서 60 분 동안 96-웰 플레이트에서 수행된다. 이것은 (30 ㎕의 총용적이) 1% DMSO의 존재 하에서 600 ng IB를 사용하며 c-rafl1 키나제 (400 ng), 25 mM 트리스ㆍHCl, pH 7.5, 5 mM MgCl2, 5 mM MnCl2, 10 μM Na3VO4, 1 mM DTT 및 0.3 μCi/시험 [γ33P]-ATP (10 마크로 μM ATP)를 함유한다. 반응은 10 ㎕의 250 mM EDTA를 첨가함으로써 종결시키고, 30 ㎕의 반응혼합물을 미리 5 분 동안 메탄올로 침지시키고, 물로 세척한 다음에 5 분 동안, 0.5% H3PO4로 침지시키고 연결되지 않은 진공 공급원을 갖는 진공 매니폴드 상에 장착된 임모빌론-PVDF 막 (Millipore, Bedford, MA, USA) 상에 옮긴다. 모든 샘플을 스포팅한 후에, 진공을 연결시키고, 각각의 웰을 200 ㎕의 0.5% H3PO4로 세정한다. 막을 분리하여 진탕기 상에서 0.5% H3PO4로 4 회 및 에탄올로 1 회 세척한다. 막은 실온에서 건조시키고, 패카드 톱카운트 96-웰 프레임에 장착하고, 10 ㎕/웰의 마이크로신트 TM (Packard)을 첨가한 후에 계수한다. 화학식 I의 화합물은 0.1-50 μM, 바람직하게는 0.1 내지 10 μM의 범위에서 c-Raf-1 억제를 나타낸다.
생체내에서 화학식 I의 화합물의 항종양 활성을 입증하기 위한 실험: 예를 들어, 화학식 I의 화합물, 예를 들어, 이하에 제시된 실시예 1의 화합물이 생체내에서 VEGF-매개된 혈관형성을 억제하는지 여부를 시험하기 위하여 마우스의 성장인자 임랜트 (imlant) 모델에서 VEGF에 의해서 유도된 혈관형성 반응에 대한 그의 효과를 시험한다: 다공성 테플론 챔버 (Teflon chamber)(용적 0.5 ㎖)를 성장인자 (2 ㎍/㎖ 인간 VEGF)의 존재 또는 부재 하에 헤파린 (20 유니트/㎖)을 함유하는 0.8% w/v 한천으로 충진시키고, C57/C6 마우스의 배면 측복부 (dorsal flank)에 피하로 이식한다. 마우스를 챔버를 이식한 날에 시작하여 그 후 4일 동안 계속해서 시험화합물 (예를 들어, 25, 50 또는 100 ㎎/㎏, 경구, 1 일 1 회) 또는 비히클로 처리한다. 처리의 종료시에 마우스를 치사시키고, 챔버를 분리한다. 챔버 주위에 성장한 혈관형성된 조직을 주의해서 분리하여 평량하고, 조직의 헤모글로빈 함량을 측정함으로써 혈액 함량을 평가한다 (드라브킨스 방법 (Drabkins method); Sigma, Deisenhofen, Germany). 이들 성장인자는 챔버 주위에서 성장하는 이 조직의 중량 및 혈액 함량에서 용량-의존적인 증가를 유도하며, 이 반응은 VEGF를 특이적으로 중화시키는 항체에 의해서 차단되는 것으로 이미 밝혀졌다 (참조: Wood JM et al., Cancer Res. 60(8), 2178-2189, (2000); 및 Schlaeppi et al., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 125, 336-342, (1999)). 이 모델을 사용하여 화학식 I의 화합물의 경우에 억제를 나타낼 수 있다.
합성방법
화학식 I의 화합물은 문헌 (Alicade, E; De Mendoza, J; Garcia-Marquina, JM; Almera, C; J. Heterocycl. Chem. 11, 423 (1974))에 기술된 방법과 유사하게 (a) 니트릴 A-CH2-C≡N을 유기용매의 존재 하에서 에틸 포르메이트와 반응시켜 치환된 3-옥소-프로피오니트릴을 형성시키고, (b) 단계 (a)의 치환된 3-옥소-프로피오니트릴을 유기용매 중에서 하이드라진 모노하이드레이트와 축합시켜 화학식 III의 2H-피라졸-3-일아민을 형성시키고, (d) 치환된 니트릴을 에탄올레이트 및 포름산 에틸 에스테르의 존재 하에서 포르밀화시켜 화학식 II의 3-옥소-프로피오니트릴을 제조하고, (c) 화학식 II의 3-옥소-프로피오니트릴과 화학식 III의 2H-피라졸-3-일아민을 유기용매의 존재 하에서 축합시켜 화학식 I의 화합물을 형성시킴으로써 제조된다:
[화학식 III]
[화학식 II]
구체적으로, 화학식 I의 화합물은 3-옥소-프로피오니트릴 (II)을 에탄올성 HCl의 존재 하에서 상응하는 2H-피라졸-3-일아민 (III)과 축합시킴으로써 제조된다 (반응식 2). 2H-피라졸-3-일아민 (III)은 하이드라진 모노하이드레이트를 몇 시간 동안 EtOH, 디옥산 또는 AcOH와 같은 유기용매에 용해되고 상승된 온도로 (바람직하게는 100℃로) 가열된 상응하는 3-옥소-프로피오니트릴과 축합시킴으로써 제조된다. 표제화합물의 피라졸로 부위를 제조하는 바람직한 방법은 하이드라진 모노하이드레이트를 100℃에서 2-3 시간 동안, 상응하는 3-옥소-프로피오니트릴과 함께 교반하고, 이어서 수성 HCl을 첨가하고, 반응혼합물을 추가로 20 분 동안 더 환류시키는 것이다. R1이 H가 아닌 경우에는 상응하게 치환된 하이드라진이 사용된다. 3-옥소-프로피오니트릴 (I) 및 (II)는 새로 제조된 나트륨 에탄올레이트 및 포름산 에틸 에스테르를 사용하는 전통적인 포르밀화 반응에 의해서 상응하는 니트릴로부터 합성된다 (EtOH 중에서 1 시간 동안 환류). 다른 식으로, 3-옥소-프로피오니트릴과의 축합반응을 수행하는 대신에 상응하는 3,3-디알콕시-프로피오니트릴 (문헌 (Seneci, P., Nicola, M., Inglesi, M., Vanotti, E., Resnati, G. Synth. Commun. 29 (2), 311-341 (1999)에 기술된 방법과 유사하게) 또는 3-디메틸아미노-아크릴로니트릴이 사용될 수 있다.
다른 식으로, 화학식 I의 화합물은 우선 상응하는 작용기 (X, 참조 반응식 3)를 수반하는 피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민 코어 골격 (core scaffold)(여기에서 A, R2 또는 R3는 각각 반응식 3에 나타낸 바와 같이 공지된 반응에 의해서 도입될 수 있다))을 합성하고, 필요한 경우에, 반응 (a), (b) 또는 (c) 이후에, 수득가능한 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키고; 수득가능한 화학식 I의 화합물의 염을 유리화합물 또는 다른 염으로, 또는 수득가능한 화학식 I의 유리화합물을 염으로 변형시키고/시키거나; 수득가능한 화학식 I의 화합물의 이성체의 혼합물을 개개 이성체로 분리함으로써 제조될 수 있다:
상기 반응식에서 R1, R2, R3 및 X는 화학식 I의 화합물에 대해서 정의한 바와 같으며, 여기에서 언급된 모든 반응의 경우에 반응에 참여하지 않아야하는 출발물질 내의 작용기는 경우에 따라서, 쉽게 제거가능한 보호기에 의해서 보호된 형태로 존재하며, 어떤 보호기라도 그 후에는 제거된다.
이하의 반응조건이 각각 바람직하다:
본 명세서의 범위 내에서는, 명세서에 다른 식으로 지시되지 않는 한은 화학식 I의 특정한 바람직한 목적생성물의 구성성분이 아닌 쉽게 제거가능한 기만을 "보호기"라고 칭한다. 이러한 보호기에 의한 작용기의 보호, 보호기 그 자체, 및 이들의 분해반응은 예를 들어, 다음과 같은 표준문헌에 기술되어 있다: J.F.W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973; T.W. Greene and P.G.M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999; "The Peptides", Volume 3 (저자: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981; "Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/1, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974; H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids , Peptides , Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982; 및 Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrate : Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974. 보호기의 특징은 이들이 예를 들어, 가용매분해, 환원, 광분해 또는 대신으로 생리적 조건 하에서 (예를 들어, 효소적 분해에 의해서) 쉽게 (즉, 바람직하지 않은 부반응을 일으키지 않으면서) 제거될 수 있는 것이다.
적어도 하나의 염-형성기를 갖는 화학식 I의 화합물의 염은 그 자체가 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 산기를 갖는 화학식 I의 화합물의 염은 예를 들어, 화합물을 적합한 유기 카복실산의 알칼리 금속염, 예를 들어, 2-에틸헥산산의 나트륨염과 같은 금속 화합물, 상응하는 하이드록사이드, 카보네이트 또는 하이드로젠 카보네이트와 같은 유기 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 화합물, 예를 들어, 수산화, 탄산 또는 탄산수소 나트륨 또는 칼륨, 상응하는 칼슘 화합물, 또는 암모니아 또는 적합한 유기 아민에 의해서 처리함으로써 형성될 수 있으며, 여기에서 바람직하게는 화학량론적 양 또는 단지 소과량의 염 형성제가 사용된다. 화학식 I의 화합물의 산부가염은 통상적인 방식으로, 예를 들어, 화합물을 산 또는 적합한 음이온 교환시약으로 처리함으로써 수득된다. 산성 및 염기성 염-형성기, 예를 들어, 유리 카복실기 및 유리 아미노기를 함유하는 화학식 I의 화합물의 분자내염은 예를 들어, 산부가염과 같은 염을 예를 들어, 약염기에 의해서 등전점까지 중화시키거나, 이온교환제로 처리함으로써 형성될 수 있다.
염은 통상적인 방식으로 유리화합물로 전환될 수 있으며; 금속 및 암모늄 염은 예를 들어, 적합한 산으로 처리함으로써, 산부가염은 예를 들어, 적합한 염기성 물질로 처리함으로써 전환될 수 있다.
본 발명에 따라 수득가능한 이성체의 혼합물은 그 자체가 공지된 방식으로 개개 이성체로 분리될 수 있으며; 부분입체이성체는 예를 들어, 다상성 (polyphasic) 용매 혼합물 사이에서의 분배, 재결정화 및/또는, 예를 들어, 실리카겔 상에서의 크로마토그라피 분리에 의해서, 또는 예를 들어, 역상 칼럼 상에서의 중압 액체크로마토그라피에 의해서 분리될 수 있고, 라세메이트는 예를 들어, 광학적으로 순수한 염-형성시약과의 염을 형성시키고, 이렇게 수득가능한 부분입체이성체의 혼합물을 예를 들어, 분별 결정화에 의해서, 또는 광학적으로 활성인 칼럼 물질 상에서의 크로마토그라피에 의해서 분리시킴으로써 분리될 수 있다.
중간체 및 최종 생성물은 표준방법에 따라서, 예를 들어, 크로마토그라피 방법, 분배방법, (재-)결정화 등을 사용하여 후처리 및/또는 정제할 수 있다.
일반적인 공정조건
다음의 조건들은 이전 및 이후에 기술된 모든 방법에 대해서 일반적으로 적용되는 한편, 상기 또는 이하에서 구체적으로 언급된 반응조건이 바람직하다:
상기 언급된 모든 공정단계들은 용매 또는 희석제, 바람직하게는 사용된 시약에 대해서 불활성이며, 이들을 용해시키는 용매 또는 희석제의 부재, 또는 통상적으로는 존재 하에, 촉매, 축합 또는 중화제, 예를 들어, 반응의 성질 및/또는 반응물의 성질에 따라서 예를 들어, H+ 형태인 양이온 교환제와 같은 이온교환제의 부재 또는 존재 하에, 저하되거나, 표준이거나 상승된 온도에서, 예를 들어, 약 -100℃ 내지 약 190℃, 바람직하게는 약 -80℃ 내지 약 150℃, 예를 들어, -80℃ 내지 -60℃, 실온, -20 내지 40℃, 또는 환류온도의 온도 범위에서, 대기압 하에, 또는 필요에 따라 가압 하의 밀폐된 용기 내에서, 및/또는 불활성 대기 중에서, 예를 들어, 아르곤 또는 질소 대기 하에서 그 자체가 공지된 반응조건, 바람직하게는 구체적으로 언급된 반응조건 하에서 수행될 수 있다.
반응의 모든 스테이지에서, 형성된 이성체의 혼합물은 예를 들어, "추가의 공정단계" 이하에 기술된 방법과 유사하게, 개개 이성체, 예를 들어, 부분입체이성체 또는 에난티오머로, 또는 어떤 바람직한 이성체의 혼합물, 예를 들어, 라세메이트 또는 부분입체이성체의 혼합물로 분리될 수 있다.
어떤 특정의 반응에 적합한 용매를 선택할 수 있는 용매들에는 공정의 설명에서 다른 식으로 나타내지 않는 한은, 구체적으로 언급된 용매, 또는 예를 들어, 물, 저급 알킬-저급 알카노에이트와 같은 에스테르, 예를 들어, 에틸 아세테이트, 지방족 에테르와 같은 에테르, 예를 들어, 디에틸 에테르, 또는 사이클릭 에테르, 예를 들어, 테트라하이드로푸란 또는 디옥산, 벤젠 또는 톨루엔과 같은 액체 방향족 탄화수소, 메탄올, 에탄올 또는 1- 또는 2-프로판올과 같은 알콜, 아세토니트릴과 같은 니트릴, 메틸렌 클로라이드 또는 클로로포름과 같은 할로겐화 탄화수소, 디메틸포름아미드 또는 디메틸아세트아미드와 같은 산아미드, 헤테로사이클릭 질소 염기와 같은 염기, 예를 들어, 피리딘 또는 N-메틸피롤리딘-2-온, 저급 알칸산 무수물과 같은 카복실산, 예를 들어, 아세트산 무수물, 사이클로헥산, 헥산 또는 이소펜탄과 같은 사이클릭, 선형 또는 분지된 탄화수소, 또는 이들 용매의 혼합물, 예를 들어, 수용액이 포함된다. 이러한 용매 혼합물은 또한, 예를 들어, 크로마토그라피 또는 분배시킴에 의한 후처리 시에 사용될 수도 있다.
그들의 염을 포함한 화합물은 또한 하이드레이트의 형태로 수득될 수도 있거나, 이들의 결정은 예를 들어, 결정화를 위해서 사용된 용매를 포함할 수 있다. 다양한 결정성 형태가 존재할 수 있다.
본 발명은 또한, 공정의 어떤 스테이지에서 중간체로 수득할 수 있는 화합물을 출발물질로 사용하고, 나머지 공정단계를 수행하거나, 출발물질을 반응조건 하에서 형성시키거나, 유도체의 형태, 예를 들어, 보호된 형태 또는 염의 형태로 사용하거나, 또는 본 발명에 따르는 방법에 의해서 수득가능한 화합물을 공정조건 하에서 생산하고, 동일계에서 더 처리하는 방법의 형태에 관한 것이다. 본 발명의 방법에서는 처음에 특히 유용한 것으로 기술된 신규한 화학식 I의 화합물을 제공하는 이들 출발물질이 바람직하게 사용된다. 실시예에 언급된 것과 동일 또는 유사한 반응조건이 특히 바람직하다.
본 발명에 따르는 바람직한 구체예 :
이하의 바람직한 구체예에서, 일반적 표현은 상기 및 이하에 제시된 상응하는 더 구체적인 정의에 의해서 대체될 수 있으며, 이렇게 하여 본 발명의 더 유력하게 바람직한 구체예가 제공된다.
바람직한 것은 화학식 I의 화합물, 그의 호변이성체 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염의 용도이며, 여기에서 치료할 타이로신 단백질 키나제 의존성 질환은 이하의 타이로신 단백질 키나제 중의 하나 또는 그 이상에 의존하는 증식성 질환이다: 특히 c-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-1, Flt-3, KDR, Her-1, PDGFR-키나제, c-Src, RET-수용체 키나제, FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4, 에프린 수용체 키나제 (예를 들어, EphB2 키나제, EphB4 키나제 및 관련된 Eph 키나제), 카제인 키나제 (CK-1, CK-2, G-CK), Pak, ALK, ZAP70, Jak1, Jak2, Ax1, Cdk1, cdk4, cdk5, Met, FAK, Pyk2, Syk, 인슐린 수용체 키나제, Tie-2, 또는 Bcr-Abl, c-Kit, cdk1, c-Raf, Flt-3, FGF-R3, PDGF-수용체, RET 및 Met와 같은 키나제의 구성적 활성화 돌연변이체 (활성화 키나제).
더욱 바람직하게는, 화학식 I의 화합물은 이하의 키나제에 의존하는 증식성 질환을 치료하기 위해서 사용될 수 있다: c-abl, Flt-3, KDR, c-Src, RET, EphB4, c-kit, cdk1, FGFR-1, c-raf, Her-1, Ins-R 및 Tek.
본 발명은 특히 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 및 키나제 의존성 질환의 치료 또는 키나제 의존성 질환의 치료를 위한 약제학적 제제의 제조에 있어서의 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기이며;
R3는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 지방족 잔기일 수 있고;
R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며;
A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴 또는 치환되거나 비치환된 헤테로아릴이고;
R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬이다.
본 발명은 또한, 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 및 키나제 의존성 질환의 치료 또는 키나제 의존성 질환의 치료를 위한 약제학적 제제의 제조에 있어서의 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기이며;
R3는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기일 수 있고;
R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며;
단 R2 및 A가 둘 다 비치환된 페닐일 수는 없고;
A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴이며;
R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬이다.
더욱 바람직한 것은 그 자체로서, 또는 특히 약제학적 제제의 제조 시에서 사용하기 위한, 또는 온혈동물, 특히 인간의 진단적 또는 치료학적 치료에 사용하기 위한 것으로서 연결 원자 또는 기가 알킬 (예를 들어, -CH2-); 옥시 -O-; 케토 -CO-; 티오 -S-; 설포닐 -SO2-; 설폭사이드 -SO-; 아민 -NH- 또는 -NR-; 카복실산; 알콜; 에스테르 (-COO-); 아미드 (-CONR-, -CONHR'-); 설폰아미드 (-SO2NH-, -SO2NR'-); 설폰 (-SO2-); 설폭사이드 (-SO-); 아미노-기; 우레아 (-NH-CO-NH-, -NR-CO-NH-, -NH-CO-NR-, -NR-CO-NR-); 에테르 (-O-); 카바메이트 (-NH-CO-O-, -NR-CO-O-); 또는 역 아미드 설폰아미드 및 에스테르 (-NH-CO-, -NR-CO-, -NH-SO2-, -NR-CO2-, -OOC-)로 구성된 군으로부터 선택되며, 특히 바람직하게는 알킬 (예를 들어, -CH2-); 옥시 -O-; 케토 -CO-; 설포닐 -SO2-; 설폰아미드 (-SO2NH-, -SO2NR'-); 설폰 (-SO2-); 및 우레아 (-NH-CO-NH-, -NR-CO-NH-, -NH-CO-NR-, -NR-CO-NR-)이며, 작용기가 카복실산; 하이드록실; 할로겐; 시아노 (-CN); 에테르 (-OR); 케톤 (-CO-R); 에스테르 (-COOR); 아미드 (-CONH2, -CONHR, -CONRR'); 티오에테르 (-SR); 설폰아미드 (-SO2NH2, -SO2NHR, -SO2NRR'); 설폰 (-SO2-R); 설폭사이드 (-SO-R); 아민 (-NHR, NR'R); 우레아 (-NH-CO-NH2, -NH-CO-NHR); 에테르 (-O-R); 할로겐; 카바메이트 (-NH-CO-OR); 알데히드-작용기 (-CHO); 및 또한 역 아미드; 설폰아미드 및 에스테르 (-NH-CO-R, -NH-SO2-R, -OOC-R)로 구성된 군으로부터 선택되고, 특히 바람직하게는 할로겐; 하이드록실; 에테르 (-OR); 아미드 (-CONH2, -CONHR, -CONRR'); 설폰아미드 (-SO2NH2, -SO2NHR, -SO2NRR'); 아민 (-NHR, NR'R); 및 우레아 (-NH-CO-NH2, -NH-CO-NHR)인 화학식 I의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이다.
특히 바람직한 것은 그 자체로서, 또는 특히 약제학적 제제의 제조 시에서 사용하기 위한, 또는 온혈동물, 특히 인간의 진단적 또는 치료학적 치료에 사용하기 위한 것으로서, A가 H; 할로 (예를 들어, Br); 또는 아릴 (예를 들어, 페닐 또는 벤질) 또는 헤테로사이클릴 (예를 들어, 피리디닐, 인돌릴 또는 벤조티오페닐)이며, 여기에서 아릴 또는 헤테로사이클릴은 4 개 이하, 바람직하게는 2 개 이하의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있으며, 여기에서 치환체는 동일하거나 상이할 수 있고, 할로 (예를 들어, Cl 또는 Br); 하이드록시; 아미노; 아미노 저급 알킬 (예를 들어, 디메틸아미노); 아미노 저급 알콕시 (예를 들어, 에톡시아민); 저급 알킬 (예를 들어, 메틸); 저급 알콕시 (예를 들어, 메톡시); 치환되거나 비치환된 설폰아미드 (예를 들어, 벤조 설폰아미드, 클로로벤젠 설폰아미드 또는 디클로로벤젠 설폰아미드); 카바메이트; 및 R4R5 [여기에서 R4 및 R5는 동일하거나 상이할 수 있으며, 독립적으로 H; 저급 알킬 (예를 들어, 메틸, 에틸 또는 프로필)이거나, R4 및 R5는 N 원자와 함께 1-4 개의 질소, 산소 또는 황 원자를 함유하는 3- 내지 8-원 헤테로사이클릭 환 (예를 들어, 피페라지닐 또는 저급 알킬 피페라지닐)을 형성하며, R4 및 R5가 N 원자와 함께 헤테로사이클릭 환을 형성하는 경우에, 상기의 환은 본 명세서에 기술된 치환체들 중의 1, 2 또는 그 이상, 바람직하게는 피페라지닐, 피롤리디닐, 메틸과 같은 알킬, 또는 에타닐과 같은 하이드록시 알킬에 의해서 치환될 수 있다 (N과 함께 R4 및 R5에 의해서 형성된 헤테로환의 예로는 메틸 또는 디메틸에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있는 모르폴리닐; 1, 2 또는 3 개의 치환체, 바람직하게는 메틸, 옥시 또는 에탄올에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있는 피페라지닐; 또는 1, 2 또는 3 개의 치환체, 바람직하게는 피롤리디닐, 아민, 알킬 아민, 메틸 아민, 디알킬 아민, 디메틸아민 또는 디에틸아민에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있는 피페라디닐이 포함된다)]로부터 독립적으로 선택되며; R2가 H, C1-C3 저급 알킬 (예를 들어, 메틸) 또는 아릴 (예를 들어, 페닐 또는 벤질) 또는 헤테로사이클릴 (예를 들어, 피리딜, 인돌릴, 티오페닐, 티아졸릴 또는 벤조티오페닐)이고, 여기에서 아릴 또는 헤테로사이클릴은 4 개 이하, 바람직하게는 2 개 이하의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있으며, 여기에서 치환체는 동일하거나 상이하고 할로 (예를 들어, Cl, F 또는 Br); 하이드록시; 아미노; 아미노 저급 알킬; C1-C3 저급 알킬; 알콕시 (예를 들어, 메톡시, 및 3,4-디클로로벤질옥시와 같이 벤질 환이 치환되거나 비치환될 수 있는 벤질옥시); 설포아미노; 치환되거나 비치환된 벤조설폰아미드 (예를 들어, 2,3-디클로로벤젠 설폰아미드); 치환되거나 비치환된 설포네이트 (예를 들어, 클로로-페닐 설포니에트); 치환되거나 비치환된 우레아 (예를 들어, 3-트리플루오로-메틸-페닐 우레아 또는 4-모르폴린-4-일-3-트리플루오로메틸-페닐-우레아) 또는 카바메이트 (예를 들어, 에틸-N-페닐 카바메이트)로부터 독립적으로 선택되며; R3는 H; C1-C3 알킬, 메틸; 페닐; 피리딜 또는 옥사즈-5-일인 화학식 I의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이다.
특히 바람직한 것은 키나제 의존성 질환의 치료를 위한 약제학적 제제의 제조에 있어서의 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용도이다.
또한 바람직한 것은 키나제 의존성 질환, 특히 상기 키나제에 의존적인 것 및 (특히, 이상적으로 고도로 발현되거나 구성적으로 활성화된) 키나제-의존성 질환 또는 상기 키나제 경로의 활성화에 의존적인 질환 또는 상기 키나제 중의 두개 또는 그 이상의 의존적인 질환의 치료에 사용하기 위한 상기에 나타낸 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염이다.
본 발명의 광범한 개념에서, 키나제 의존성 질환은 백혈병, 과형성, 섬유증 (특히 폐섬유증뿐만 아니라 그 밖의 다른 형태의 섬유증, 예를 들어, 신섬유증, 혈관형성, 건선, 아테롬성경화증, 및 협착증 또는 혈관성형술 이후의 재발협착증과 같은 혈관에서의 평활근 증식과 같은 과증식성 상태를 포함하는 증식성 질환일 수 있다.
매우 바람직한 것은 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하여 키나제 의존성 질환을 치료하는 방법이며, 여기에서 치료할 질환은 증식성 질환, 바람직하게는 양성, 또는 특히 악성 종양, 더욱 바람직하게는 뇌, 신장, 간, 부신, 방광, 유방, 위 (특히 위종양), 난소, 결장, 직장, 전립선, 췌장, 폐 (특히 SCLC), 질, 갑상선, 육종, 교아종, 다발성 골수종 또는 위장관암, 특히 결장암, 결장직장선종, 또는 두경부의 종양, 표피 과증식증, 특히 건선, 전립선 비대증, 특히 상피 특성의 이상증식, 바람직하게는 유방암, 또는 백혈병이며, 또한 아테롬성경화증, 혈전증, 건선, 공피증 및 섬유증의 치료를 위한 것이다.
화학식 I의 화합물은 또한, 종양의 퇴행을 유도하고, 종양 전이의 형성 및 (또한 마이크로)전이의 성장을 방지할 수 있다. 또한, 이들은 표피 과증식증 (예를 들어, 건선), 전립선 비대증, 및 특히 상피 특성의 이상증식, 바람직하게는 유방암의 치료에 사용될 수 있다. 또한, 화학식 I의 화합물은 몇가지 또는 특히 개별적인 타이로신 단백질 키나제가 연루되는 한에 있어서는 면역계의 질환의 치료에도 사용할 수 있으며; 또한 화학식 I의 화합물은 특히 구체적으로 언급된 것들로부터 선택된 적어도 하나의 타이로신 단백질 키나제에 의한 시그날 전달이 연루된 중추 또는 말초 신경계의 질환을 치료하는데에도 사용될 수 있다.
따라서, KDR 억제제는 특히 VEGF 수용체 타이로신 키나제 과발현과 연관된 질환의 치료에 적절하다. 이들 질환 중에서 특히 망막증, 노화-관련된 황반변성, 건선, 혈관모세포종 (haemangioblastoma), 혈관종, 동맥경화증, 류마티스 또는 류마티스성 염증성 질환, 특히 류마티스성 관절염과 같은 관절염과 같은 염증성 질환, 또는 만성 천식, 동맥성 또는 이식-후 아테롬성경화증과 같은 기타 만성 염증성 질환, 자궁내막증, 및 특히 신생물성 질환, 예를 들어, 소위 고형 종양 (특히, 위장관, 췌장, 유방, 위, 경부, 방광, 신장, 전립선, 난소, 자궁내막, 폐, 뇌의 암, 흑색종, 카포시 육종, 두경부의 편평세포암, 악성 흉막중피종, 림프종 또는 다발성 골수종) 및 액체 종양 (liquid tumor)(예를 들어, 백혈병)이 특히 중요하다.
Flt3 (FMD-양 타이로신 키나제)은 특히 조혈성 조상세포에서 및 림프성 및 골수성 계열의 조상세포에서 발현된다. Flt3 유전자의 이상발현은 AML (급성 골수성 백혈병), 삼계통 (trilineage) 골수이형성을 갖는 AML (AML/TMDS), ALL (급성 림프아구성 백혈병), CML ( 만성 골수성 백혈병), 및 골수이형성 증후군 (MDS)을 포함하는 성인 및 소아의 백혈병 모두에서 증명되었으며, 따라서 이들은 화학식 I의 화합물에 의해서 치료되는 바람직한 질환이다. Flt3에서 활성화 돌연변이는 AML이 있는 환자의 약 25 내지 30%에서 확인되었다. 따라서, 인간 백혈병에서 Flt3의 역할에 대한 증거가 누적되고 있으며, Flt3 억제제로서 본 발명에 따라 유용한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체, 특히 화학식 I의 화합물은 특히 이러한 형태의 질환의 치료에 유용하다 (참조: Tse et al., Leukemia 15(7), 1001-1010 (2001); Tomoki et al., Cancer Chemother. Pharmacol. 48 (Suppl. 1), S27-S30 (2001); Birkenkamp et al., Leukemia 15(12), 1923-1921 (2001); Kelly et al., Neoplasia 99(1), 310-318 (2002)).
만성 골수성 백혈병 (CML)에서, 조혈성 간세포 (HSCs)에서의 상호 균형잡힌 염색체 전위는 BCR-ABL 하이브리드 유전자를 생성한다. 후자는 종양원성 Bcr-Abl 융합 단백질을 코드화한다. ABL은 세포 증식, 유착 및 세포소멸을 조절하는데 기본적인 역할을 하는 단단히 조절된 단백질 타이로신 키나제를 코드화하는 반면에, BCR-ABL 융합 유전자는 HSCs를 변형시켜 조절해제된 클론성 증식, 골수 기질에 부착하는 감소된 능력, 및 진행적으로 더 악성인 변형을 축적시킬 수 있는 돌연변이원성 자극에 대한 감소된 세포소멸성 반응을 나타내는 표현형을 생성시키는 구성적으로 활성화된 키나제로서 코드화한다. 생성된 과립구는 성숙한 림프구로 발육에 실패하고, 순환계로 방출되어 성숙세포의 결핍 및 감염에 대한 증가된 감수성을 제공한다. Bcr-Abl의 ATP-경쟁성 억제제는 키나제가 유사분열촉진성 및 항-세포소멸성 경로 (예를 들어, P-3 키나제 및 STAT5)를 활성화시키는 것을 방지함으로써 BCR-ABL 표현형 세포의 사망을 유도하고, 이에 의해서 CML에 대한 효과적인 치료를 제공하는 것으로 기술되었다. 따라서, Bcr-Abl 억제제로서 본 발명에 따라 유용한 피라졸로[1,5a]피리미딘-7-일 아민 유도체, 특히 화학식 I의 화합물은 그의 과발현과 연관된 질환, 특히 백혈병, 예를 들어, CML 또는 ALL을 치료하는데 적절하다.
따라서, EGF-R 또는 언급된 그 밖의 다른 단백질 타이로신 키나제의 타이로신 키나제 활성을 억제하는 화학식 I의 화합물은 예를 들어, 양성 또는 악성 종양을 치료하는데 유용하다. 화학식 I의 화합물은 예를 들어, 동시에 조절해제된 EGF-R 및/또는 ErbB-2 활성에 의해서 종양의 성장을 억제할 뿐만 아니라 VEGF에 의해서 유발된 고형 종양의 혈관신생을 억제할 수 있다. 이러한 결합된 활성은 개선된 항종양 효과를 유도한다 (또한, WO 02/41882를 참조). 더구나, 이중 억제제의 사용은 약물-약물 상호작용의 위험을 감소시키며, 또한 배합치료에 비해서 총 약물 로드를 감소시킨다. 화학식 I의 화합물은 종양 성장을 느리게 하거나, 종양 퇴행을 야기하며, 종양 전이의 형성 및 마이크로전이의 성장을 방지할 수 있다. 이들은 특히, 표피 과증식증 (건선)의 경우, 예를 들어, 비소세포 폐암, 편형암 (두경부), 유방, 위, 난소, 결장 및 전립선 암, 및 신경교종의 치료, 및 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 만성 골수성 백혈병 (CML)과 같은 백혈병의 치료에 사용될 수 있다. 또한, 화학식 I의 화합물은 몇가지 또는 특히 개별적인 단백질 타이로신 키나제 및/또는 (추가로) 세린/트레오닌 단백질 키나제가 연루되는 면역계의 질환의 치료에도 사용할 수 있으며; 또한 화학식 I의 화합물은 몇가지 또는 특히, 단일 단백질 타이로신 키나제(들) 및/또는 (추가로) 세린/트레오닌 단백질 키나제(들)에 의한 시그날 전달이 연루된 중추 또는 말초 신경계의 질환을 치료하는데에도 사용될 수 있다.
혈관형성은 약 1-2 ㎜의 최대 직경 이상으로 성장하는 이들 종양에 대한 절대적인 필요조건으로 간주되며; 이러한 한계까지 산소 및 영양소가 확산에 의해서 종양세포에 공급될 수 있다. 따라서, 모든 종양은 그의 기원 및 원인과는 무관하게, 일정한 크기에 도달한 후에는 그의 성장을 위한 혈관형성에 따라 좌우된다.
이하의 3가지 주된 기전이 종양에 대한 혈관형성 억제제의 활성에서 중요한 역할을 한다: 1) 혈관, 특히 모세혈관이 무혈관성 정지상 (resting) 종양으로의 성장을 억제함으로써 세포소멸과 증식 사이에서 도달된 균형으로 인하여 순수한 종양 성장이 일어나지 않도록 한다; 2) 종양에 대한, 그리고 종양으로부터의 혈류의 부재로 인하여 종양세포의 이동을 방지한다; 3) 내피세포 증식을 억제함으로써 통상적으로 혈관을 정렬하는 내피세포에 의해서 주변 조직 상에서 나타나는 파라크린 성장-촉진효과를 피할 수 있다.
본 발명은 또한, 건선; 카포시 육종; 재발협착증, 예를 들어, 스텐트-유도된 재발협착증; 자궁내막증식증; 크론병; 호지킨병; 백혈병; 류마티스성 관절염과 같은 관절염; 혈관종; 혈관섬유종; 당뇨병성 망막증 및 혈관신생성 녹내장과 같은 안질환; 사구체신염과 같은 신장 질환; 당뇨병성 신장병; 악성 신경화증; 혈전성 미소혈관증 증후군; 이식 거부반응 및 신사구체병증; 간의 경화증과 같은 섬유성 질환; 사구체간질성 세포-증식성 질환; 동맥경화증; 신경조직의 손상과 같이 지속적인 혈관형성에 의해서 유발되는 질환을 예방 또는 치료하기 위해서, 풍선 카테터 치료 후의 혈관의 재폐색을 억제하기 위하여, 혈관 보철물에서 사용하기 위하여, 또는 예를 들어, 스텐트와 같이 혈관 개방을 유지시키기 위한 기계적 장치를 삽입한 후에, 면역억제제로서, 반흔이 없는 창상 치유의 보조제로서, 및 검버섯 및 접촉성 피부염을 치료하기 위하여 사용될 수도 있다.
더욱 바람직한 것은 이하에서 '실시예'에 예시된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 본 발명에 따른 용도이다.
약제학적 조성물
본 발명은 또한, 화학식 I의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물, 치료학적 (본 발명의 광범한 개념에서는 또한 예방적) 치료 또는 키나제 의존성 질환, 특히 상기 언급된 바람직한 질환의 치료방법에서의 그들의 용도, 상기의 용도를 위한 화합물, 및 특히 상기의 용도를 위한, 약제학적 제제의 제조에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 생체내에서 화학식 I의 화합물 그 자체로 전환하는 화학식 I의 화합물의 프로-드럭에 관한 것이다. 따라서, 화학식 I의 화합물에 대한 어떤 언급이라도 적절하고 편리하게는 화학식 I의 화합물의 상응하는 프로-드럭도 또한 나타내는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 약제학적으로 허용되는 화합물은 예를 들어, 상당량의 하나 또는 그 이상의 무기 또는 유기 고체 또는 액체 약제학적으로 허용되는 캐리어와 함께 활성성분으로서 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물의 제조를 위해서 사용될 수 있다.
본 발명은 또한, 키나제 활성의 억제에 대하여 반응하는 질환의 치료, 또는 본 발명의 광범한 관점에서는 방지 (= 이에 대한 예방)를 위하여 온혈동물, 특히 인간 (또는 온혈동물, 특히 인간으로부터 유도된 세포 또는 세포주, 예를 들어 림프구)에게 투여하기에 적합한 것으로서, 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 캐리어와 함께 상기의 억제에 효과적인 양의 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르는 약제학적 조성물은 유효량의 약물학적 활성성분을 단독으로 또는 상당량의 약제학적으로 허용되는 캐리어와 함께 함유하는, 온혈동물 (특히 인간)에게 비내, 직장내 또는 경구와 같은 장내 (enteral), 또는 근육내 또는 정맥내와 같은 장관외 (parenteral) 투여하기 위한 것이다. 활성성분의 용량은 온혈동물의 종, 체중, 연령 및 개별적 상태, 개별적인 약력학적 데이타, 치료할 질환, 및 투여의 모드 (mode)에 따라서 좌우된다.
본 발명은 또한, 특히 언급된 질환 중의 하나로 인하여 치료가 필요한 온혈동물, 예를 들어 인간에게 (언급된 질환에 대한) 예방적 또는 특히 치료학적 유효량의 본 발명에 따르는 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하여, 키나제의 억제에 대하여 반응하는 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
온혈동물, 예를 들어, 체중 약 70 ㎏의 인간에게 투여될 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용량은 바람직하게는 1-3 개의 단일 용량 (이들은 예를 들어, 동일한 크기일 수 있다)으로 분할되는, 바람직하게는 약 3 ㎎ 내지 약 10 g, 더욱 바람직하게는 약 10 ㎎ 내지 약 1.5 g, 가장 바람직하게는 약 100 ㎎ 내지 약 1000 ㎎/인간/일이다. 통상적으로, 소아는 성인 용량의 절반을 투여한다.
약제학적 조성물은 약 1% 내지 약 95%, 바람직하게는 약 20% 내지 약 90%의 활성성분을 포함한다. 본 발명에 따르는 약제학적 조성물은 예를 들어, 앰플, 바이알, 좌제, 당의정, 정제 또는 캅셀제의 형태와 같은 단위 용량형일 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 그 자체가 공지된 방식으로, 예를 들어, 통상적인 용해, 동결건조, 혼합, 과립화 또는 당제화 (confectioning) 방법을 이용하여 제조된다.
활성성분의 용액, 및 또한 현탁액, 및 특히 등장성 수용액 또는 현탁액은 가능하다면, 사용하기 전에 생성될 이러한 용액 또는 현탁액을 위하여 활성성분을 단독으로 또는 캐리어, 예를 들어, 만니톨과 함께 포함하는 동결건조된 조성물의 경우에 바람직하게 사용된다. 약제학적 조성물은 멸균될 수 있고/있거나 부형제, 예를 들어, 보존제, 안정화제, 수화제 및/또는 유화제, 가용화제, 삼투압 조절용 염류 및/또는 완충제를 포함할 수 있으며, 그 자체가 공지된 방식으로, 예를 들어, 통상적인 용해 또는 동결건조 방법을 이용하여 제조된다. 상기의 용액 또는 현탁액은 나트륨 카복시메틸셀룰로즈, 카복시메틸셀룰로즈, 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈 또는 젤라틴과 같은 점도-증가용 물질을 포함할 수 있다.
오일 중의 현탁액은 오일 성분으로서 주사 목적에 통상적인 식물성, 합성 또는 반합성 오일을 포함한다. 이러한 것으로는 특히, 필요에 따라서 항산화제, 예를 들어, 비타민 E, β-캐로틴 또는 3,5-디-tert-부틸-4-하이드록시톨루엔을 첨가한, 산 성분으로서 8-22, 특히는 12-22 개의 탄소 원자를 갖는 장쇄 지방산을 함유하는 액체 지방산 에스테르, 예를 들어, 라우르산, 트리데실산, 미리스트산, 펜타데실산, 팔미트산, 마르가르산, 스테아르산, 아라키드산, 베헨산 또는 상응하는 불포화된 산, 예를 들어, 올레산, 엘라이드산, 에루스산, 브라시드산 또는 리놀레산이 언급될 수 있다. 이들 지방산 에스테르의 알콜 성분은 최대 6 개의 탄소 원자를 가지며, 모노- 또는 폴리-하이드록시, 예를 들어, 모노-, 디- 또는 트리-하이드록시, 알콜, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 또는 펜탄올 또는 그의 이성체, 특히 글리콜 및 글리세롤이다. 따라서, 지방산 에스테르의 다음과 같은 예가 언급될 수 있다: 에틸 올리에이트, 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, "라브라필 (Labrafil) M 2375" (폴리옥시에틸렌 글리세롤 트리올리에이트, Gattefosse, Paris), "미글리올 (Miglyol) 812" (C8 내지 C12의 쇄 길이를 갖는 포화 지방산의 트리글리세라이드, Huels AG, Germany), 특히 식물성 오일, 예를 들어, 면실유, 아몬드유, 올리브유, 피마자유, 호마유, 대두유, 및 더욱 특히는 낙화생유.
주사용 조성물은 멸균조건 하에서 통상적인 방식으로 제조되며; 이것은 또한 조성물을 앰플 또는 바이알에 도입시키고, 용기를 밀봉하는데에도 적용한다.
경구 투여용 약제학적 조성물은 활성성분을 고체 캐리어와 함깨 배합시키고, 필요한 경우에 생성된 혼합물을 과립화하고, 원하거나 필요한 경우에 적절한 부형제를 첨가한 후에, 혼합물을 정제, 당의정 코어 또는 캅셀제로 가공함으로써 수득될 수 있다. 이들은 또한, 활성성분을 측정된 양으로 분배 또는 방출시키도록 하는 플라스틱 용기 내에 혼입시킬 수도 있다.
적합한 캐리어는 특히 당류, 예를 들어, 락토즈, 사카로즈, 만니톨 또는 소르비톨, 셀룰로즈 제제 및/또는 칼슘 포스페이트, 예를 들어, 트리칼슘 포스페이트 또는 칼슘 하이드로젠 포스페이트와 같은 충진제, 및 예를 들어, 옥수수, 밀, 쌀 또는 감자 전분을 사용한 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 하이드록시프로필메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리돈과 같은 결합제, 및/또는 필요한 경우에, 상기 언급된 전분 및/또는 카복시메틸 전분, 교차결합된 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알진산 또는 나트륨 알지네이트와 같은 그의 염과 같은 붕해제이다. 부형제는 특히, 유동 컨디쇼너 (flow conditioner) 및 윤활제, 예를 들어, 규산, 탈크, 스테아르산, 또는 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트와 같은 그의 염, 및/또는 폴리에틸렌 글리콜이다. 당의정 코어는 임의로는 장용성인 적합한 코팅이 제공되며, 여기에서는 특히 아라비아 고무, 탈크, 폴리비닐피롤리돈, 폴리에틸렌 글리콜 및/또는 티타늄 디옥사이드를 포함할 수 있는 농축된 당 용액, 또는 적합한 유기용매 중의 코팅 용액, 또는 장용성 코팅의 제조를 위한 에틸셀룰로즈 프탈레이트 또는 하이드록시프로필메틸셀룰로즈 프탈레이트와 같은 적합한 셀룰로즈 제제의 용액이 사용된다. 캅셀제는 젤라틴으로 만들어진 건조-충진된 캅셀제, 및 젤라틴과 글리세롤 또는 소르비톨과 같은 가소제로 만들어진 연질 밀봉 캅셀제이다. 건조-충진된 캅셀제는 예를 들어, 락토즈와 같은 충진제, 전분과 같은 결합제, 및/또는 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 활주제, 및 필요한 경우에 안정화제와 함께 과립 형태의 활성성분을 포함할 수 있다. 연질 캅셀제에서 활성성분은 바람직하게는 지방 오일, 파라핀유 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 오일상 부형제에 용해 또는 현탁되며, 안정화제 및/또는 항균제를 첨가할 수도 있다. 염료 또는 안료가 예를 들어, 식별을 목적으로 또는 활성성분의 상이한 용량을 나타내기 위해서 정제 또는 당의정 코팅 또는 캅셀제 케이스에 첨가될 수도 있다.
배합
화학식 I의 화합물은 또한 다른 항증식제와 배합하여 유리하게 사용될 수도 있다. 이러한 항증식제에는 아로마타제 억제제; 안티에스트로젠; 토포이소머라제 I 억제제; 토포이소머라제 II 억제제; 미소관 활성제; 알킬화제; 히스톤 데아세틸라제 억제제; 세포분화 과정을 유도하는 화합물; 사이클로옥시게나제 억제제; MMP 억제제; mTOR 억제제; 항신생물성 항대사물질; 플라틴 (platin) 화합물; 단백질 또는 리피드 키나제 활성을 표적화/감소시키는 화합물 및 추가의 항-혈관형성 화합물; 단백질 또는 리피드 포스파타제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 고나도렐린 작용제; 안티안드로젠; 메티오닌 아미노펩티다제 억제제; 비스포스포네이트; 생물학적 반응 변형제; 항증식성 항체; 헤파라나제 억제제; Ras 종양원성 이소폼 (isoform)의 억제제; 텔로머라제 억제제; 프로테아좀 억제제; 혈액학적 악성종양의 치료에 사용되는 약제; Flt-3의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; Hsp90 억제제; 테모졸로마이드 (테모달 (TEMODAL™)); 및 류코보린이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "아로마타제 억제제"는 에스트로젠 생성, 즉 기질 안드로스텐디온 및 테스토스테론의 각각 에스트론 및 에스트라디올로의 전환을 억제하는 화합물에 관한 것이다. 이 용어에는 스테로이드, 특히 아타메스테인, 엑세메스테인 및 포르메스테인, 및 특히 비-스테로이드, 특히 아미노글루테트이미드, 로글레티미드, 피리도글루테트이미드, 트리로스테인, 테스토락톤, 케토코나졸, 보로졸, 파드로졸, 아나스트로졸 및 레트로졸이 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다. 엑세메스테인은 예를 들어, 상품명 아로마신 (AROMASIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 파드로졸은 예를 들어, 상품명 아페마 (AFEMA)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아나스트로졸은 예를 들어, 상품명 아리미덱스 (ARIMIDEX)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 레트로졸은 예를 들어, 상품명 페마라 (FEMARA) 또는 페마르 (FEMAR)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아미노글루테트이미드는 예를 들어, 상품명 오리메텐 (OTIMETEN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아로마타제 억제제인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 배합제는 호르몬 수용체 양성 종양, 예를 들어, 유방종양의 치료에 특히 유용하다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "안티에스트로젠"은 에스트로젠 수용체 레벨에서 에스트로젠의 효과를 길항하는 화합물에 관한 것이다. 이 용어는 타목시펜, 풀베스트란트, 랄록시펜 및 랄록시펜 하이드로클로라이드를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 타목시펜은 예를 들어, 상품명 놀바덱스 (NOLVADEX)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 랄록시펜 하이드로클로라이드는 예를 들어, 상품명 에비스타 (EVISTA)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 풀베스트란트는 US 4,659,516에 기술된 바와 같이 제제화될 수 있거나, 예를 들어, 상품명 파슬로덱스 (FASLODEX)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 안티에스트로젠인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 배합제는 에스트로젠 수용체 양성 종양, 예를 들어, 유방종양의 치료에 특히 유용하다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "안티-안드로젠"은 안드로젠 호르몬의 생물학적 효과를 억제할 수 있는 모든 물질을 의미하며, 예를 들어, US 4,636,505에 기술된 바와 같이 제제화될 수 있는 비칼루타마이드 (CASODEX)를 포함하나, 이것으로 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "고나도렐린 작용제"는 아바렐릭스, 고세렐린 및 고세렐린 아세테이트를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 고세렐린은 US 4,100,274에 기술되어 있으며, 예를 들어, 상품명 졸라덱스 (ZOLADEX)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아바렐릭스는 예를 들어, US 5,843,901에 기술된 바와 같이 제제화될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "토포이소머라제 I 억제제"는 토포테칸, 지마테칸, 이리노테칸, 캄프토테시안 및 그의 동족체, 9-니트로캄프토테신 및 고분자 캄프토테신 컨쥬게이트 PNU-166148 (WO 99/17804에서 화합물 A1)을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 이리노테칸은 예를 들어, 상품명 캄프토사르 (CAMPTOSAR)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 토포테칸은 예를 들어, 상품명 하이캄틴 (HYCAMTIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "토포이소머라제 II 억제제"는 독소루비신 (리포좀성 제제, 예를 들어, 카엘릭스 (CAELYX)를 포함), 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신 및 네모루비신과 같은 안트라사이클린, 안트라퀴논 미톡산트론 및 로속산트론, 및 포도필로톡신 에토포사이드 및 테니포사이드를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 에토포사이드는 예를 들어, 상품명 에토포포스 (ETOPOPHOS)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 테니포사이드는 예를 들어, 상품명 VM 26-브리스톨 (BRISTOL)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 독소루비신은 예를 들어, 상품명 아드리블라스틴 (ADRIBLASTIN) 또는 아드리아마이신 (ADRIAMYCIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 에피루비신은 예를 들어, 상품명 파르모루비신 (FARMORUBICIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 이다루비신은 예를 들어, 상품명 자베도스 (ZAVEDOS)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 미톡산트론은 예를 들어, 상품명 노르반트론 (NORVANTRON)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
용어 "미소관 활성제"는 탁산, 예를 들어, 파클리탁셀 및 도세탁셀, 빈카 알카로이드, 예를 들어, 빈블라스틴, 특히 빈블라스틴 설페이트, 빈크리스틴, 특히 빈크리스틴 설페이트, 및 비노렐빈, 디스코더몰라이드, 코치신 및 에포틸론 및 그의 유도체, 예를 들어, 에포틸론 B 또는 D 또는 그의 유도체를 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 미소관 안정화, 미소관 불안정화제 및 마이크로튜불린 중합억제제를 의미한다. 파클리탁셀은 예를 들어, 탁솔 (TAXOL)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 도세탁셀은 예를 들어, 상품명 탁소테레 (TAXOTERE)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 빈블라스틴 설페이트는 예를 들어, 상품명 빈블라스틴 (VINBLASTIN) R.P.로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 빈크리스틴 설페이트는 예를 들어, 상품명 파르미스틴 (FARMISTIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 디스코더몰라이드는 예를 들어, US 5,010,099에 기술된 바와 같이 수득될 수 있다. 또한, WO 98/10121, US 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 및 WO 00/31247에 기술된 에포틸론 유도체도 포함된다. 특히 바람직한 것은 에포틸론 A 및/또는 B이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "알킬화제"는 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜파란 또는 니트로소우레아 (BCNU 또는 글리아델 (Gliadel))를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 사이클로포스파마이드는 예를 들어, 상품명 사이클로스틴 (CYCLOSTIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 이포스파마이드는 예를 들어, 상품명 홀록산 (HOLOXAN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
용어 "히스톤 데아세틸라제 억제제" 또는 "HDAC 억제제"는 히스톤 데아세틸라제를 억제하고, 항증식성 활성을 갖는 화합물에 관한 것이다. 이것에는 WO 02/22577에 기술된 화합물, 특히 N-하이드록시-3-[4-[[(2-하이드록시에틸)[2-(1H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, N-하이드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드 및 그의 약제학적으로 허용되는 염이 포함된다. 이것은 또한, 특히 수베로일아닐리드 하이드록삼산 (SAHA)을 포함한다.
용어 "항신생물성 항대사물질"은 5-플루오로우라실 또는 5-FU, 카페시타빈, 젬시타빈, 5-아자사이티딘 및 데시타빈과 같은 DNA 탈메틸화제, 메토트렉세이트 및 에다트렉세이트, 및 페메트렉시드와 같은 엽산 길항제를 포함한, 이들로 제한되지는 않는다. 카페시타빈은 예를 들어, 상품명 젤로다 (XELODA)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 젬시타빈은 예를 들어, 상품명 젬자르 (GEMZAR)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 또한, 예를 들어, 상품명 헤르셉틴 (HERCEPTIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있는 모노클로날 항체 트라스투주마브도 포함된다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "플라틴 화합물"은 카보플라틴, 시스플라틴, 시스플라티눔 및 옥살리플라틴을 포함한, 이들로 제한되지는 않는다. 카보플라틴은 예를 들어, 상품명 카보플라트 (CARBOPLAT)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 옥살리플라틴은 예를 들어, 상품명 엘록산틴 (ELOXANTIN)으로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "단백질 또는 리피드 키나제 활성; 단백질 또는 리피드 포스파타제 활성을 표적화/감소시키는 화합물; 또는 추가로 항혈관형성성 화합물"은 단백질 타이로신 키나제 및/또는 세린 및/또는 트레오닌 키나제 억제제 또는 리피드 키나제 억제제, 예를 들어, 다음의 화합물들을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다:
a) PDGFR의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물과 같은 혈소판-유도 성장인자-수용체 (PDGFR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 PDGF 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어, N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들어, 이마티니브, SU101, SU6668 및 GFB-111;
b) 섬유아세포 성장인자-수용체 (FGFR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
c) IGF-IR의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물과 같은 인슐린-양 성장인자 수용체 (IGF-IR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 IGF-IR 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어, WO 02/092599에 기술된 화합물;
d) Trk 수용체 타이로신 키나제 집단의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
e) Axl 수용체 타이로신 키나제 집단의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
f) c-Met 수용체의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
g) Kit/SCFR 수용체 타이로신 키나제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
h) c-Kit 수용체 타이로신 키나제 집단의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물과 같은 C-kit 수용체 타이로신 키나제 (PDGFR 집단의 일부)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 c-Kit 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어, 이마티니브 (imatinib);
i) c-Abl 집단 구성원 및 이들의 유전자 융합 생성물의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물과 같은 c-Abl 집단의 구성원 및 이들의 유전자-융합 생성물 (예를 들어, BCR-Abl 키나제)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예를 들어, N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들어, 이마티니브; PD180970; AG957; NSC 680410; 또는 PD173955 (ParkeDavis로부터 제공됨);
j) 단백질 키나제 C (PKC) 및 세린/트레오닌 키나제의 Raf 집단의 구성원, MEK, SRC, JAK, FAK, PDK 및 Ras/MAPK 집단 구성원, 또는 PI(3) 키나제 집단 또는 PI(3)-키나제-관련된 키나제 집단의 구성원, 및/또는 사이클린-의존성 키나제 집단 (CDK)의 구성원의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 US 5,093,330에 기술된 스타우로스포린 유도체, 예를 들어, 미도스타우린; 추가의 화합물의 예로는 예를 들어, UCN-01, 사핑골, BAY 43-9006, 브리오스타틴 1, 페리포신; 리모포신; RO 318220 및 RO 320432; GO 6976; 이시스 (Isis) 3521; LY333531/LY379196; WO 00/09495에 기술된 것과 같은 이소키놀린 화합물; FTIs; PD184352 또는 QAN697 (P13K 억제제)이 포함된다;
k) 단백질-타이로신 키나제 억제제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물과 같은 단백질-타이로신 키나제 억제제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 이마티니브 메실레이트 (글리벡 (GLEEVEC)) 또는 티르포스틴을 포함한다. 티르포스틴은 바람직하게는 저분자량 (Mr < 1500) 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 특히 화합물의 벤질리덴말로니트릴 부류 또는 S-아릴벤젠말로니트릴 또는 비서브스트레이트 퀴놀린 부류, 더욱 특히는 티르포스틴 A23/RG-50810; AG 99; 티르포스틴 AG 213; 티르포스틴 AG 1748; 티르포스틴 AG 490; 티르포스틴 B44; 티르포스틴 B44 (+) 에난티오머; 티르포스틴 AG 555; AG 494; 티르포스틴 AG 556, AG957 및 아다포스틴 (4-{[(2,5-디하이드록시페닐)메틸]아미노}-벤조산 아다만틸 에스테르; NSC 680410, 아다포스틴)으로 구성된 군으로부터 선택된 화합물; 및
l) 표피 성장인자 수용체 집단의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물과 같은 수용체 타이로신 키나제 (호모- 또는 헤테로다이머로서 EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4)의 표피 성장인자 집단의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 EGF 수용체 타이로신 키나제 집단의 구성원, 예를 들어, EGF 수용체, ErbB2, ErbB3 및 ErbB4를 억제하거나, EGF 또는 EGF 관련된 리간드에 결합하는 화합물, 단백질 또는 항체를 포함하며, 특히 WO 97/02266 (예를 들어, 실시예 39의 화합물), EP 0 564 409, WO 99/03854, EP 0520722, EP 0 566 226, EP 0 787 222, EP 0 837 063, US 5,747,498, WO 98/10767, WO 97/30034, WO 97/49688, WO 97/38983 및 특히 WO 96/30347 (예를 들어, CP 358774로 공지된 화합물), WO 96/33980 (예를 들어, 화합물 ZD 1839) 및 WO 95/03283 (예를 들어, 화합물 ZM105180)에 일반적이고 구체적으로 기술된 화합물, 단백질 또는 모노클로날 항체; 예를 들어, 트라스투주마브 (헤르셉틴 (HERCEPTIN)), 세툭시마브, 이레자, 타르세바, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 또는 E7.6.3, 및 WO 03/013541에 기술된 7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 유도체이다.
추가의 항혈관형성성 화합물에는 그들의 활성에 대하여, 예를 들어, 단백질 또는 리피드 키나제 억제와 무관한 다른 기전을 갖는 화합물, 예를 들어, 탈리도마이드 (탈로미드 (THALOMID)) 및 TNP-470을 포함한다.
단백질 또는 리피드 포스파타제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 포스파타제 1, 포스파타제 2A, PTEN 또는 CDC25의 억제제, 예를 들어, 오카다산 또는 그의 유도체이다.
세포분화 과정을 유도하는 화합물은 예를 들어, 레티노산, α-, γ- 또는 δ-토코페롤 또는 α-, γ- 또는 δ-토코트리에놀이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 사이클로옥시게나제 억제제는 Cox-2 억제제, 5-알킬 치환된 2-아릴아미노페닐아세트산 및 유도체, 예를 들어, 셀레콕시브 (셀레브렉스 (CELEBREX)), 로페콕시브 (비옥스 (VIOXX)), 에토리콕시브, 발데콕시브 또는 5-알킬-2-아릴아미노페닐아세트산, 예를 들어, 5-메틸-2-(2'-클로로-6'-플루오로아닐리노)페닐 아세트산, 루미라콕시브를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "비스포스포네이트"는 에트리돈산, 클로드론산, 틸루드론산, 파미드론산, 알렌드론산, 이반드론산, 리세드론산 및 졸레드론산을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. "에티드론산"은 예를 들어, 상품명 디드로넬 (DIDRONEL)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "클로드론산"은 예를 들어, 상품명 보네포스 (BONEFOS)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "틸루드론산"은 예를 들어, 상품명 스켈리드 (SKELID)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "파미드론산"은 예를 들어, 상품명 아레디아 (AREDIA™)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "알렌드론산"은 예를 들어, 상품명 포사맥스 (FOSAMAX)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "이반드론산"은 예를 들어, 상품명 본드라나트 (BONDRANAT)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "리세드론산"은 예를 들어, 상품명 액토넬 (ACTONEL)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "졸레드론산"은 예를 들어, 상품명 조메타 (ZOMETA)로 판매되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
용어 "mTOR 억제제"는 라파마이신의 포유동물 표적 (mTOR)을 억제하며, 시롤리무스 (라파뮨 (Rapamune™)), 에베로리무스 (세르티칸 (Certican™)), CCI-779 및 ABT578과 같은 항증식성 활성을 갖는 화합물에 관한 것이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "헤파라나제 억제제"는 헤파린 설페이트 분해를 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 의미한다. 이 용어는 PI-88을 포함하나, 이것으로 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "생물학적 반응 변형제"는 림포킨 또는 인터페론, 예를 들어, 인터페론 γ를 의미한다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "Ras 종양원성 이소폼의 억제제", 예를 들어, H-Ras, K-Ras, 또는 N-Ras는 Ras의 종양원성 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예를 들어, "파르네실 트랜스퍼라제 억제제", 예를 들어, L-744832, DK8G557 또는 P115777 (Zarnestra)을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "텔로머라제 억제제"는 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 의미한다. 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히, 텔로머라제 활성을 억제하는 화합물, 예를 들어, 텔로메스타틴이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "메티오닌 아미노펩티다제 억제제"는 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 의미한다. 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물는 예를 들어, 벤가미드 또는 그의 유도체이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "프로테아좀 억제제"는 프로테아좀의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 의미한다. 프로테아좀의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물는 예를 들어, PS-341 및 MLN 341을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제" 또는 ("MMP 억제제)"는 콜라젠 펩타이드유사 (peptidomimetic) 및 비펩타이드유사 억제제, 테트라사이클릭 유도체, 예를 들어, 하이드록사메이트 펩타이드유사 억제제 바티마스타트 및 그의 경구적으로 생체이용가능한 동족체 마리마스타트 (BB-2516), 프리노마스타트 (AG3340), 메타스타트 (NSC 683551), BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B 또는 AAJ996을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "혈액학적 악성종양의 치료에 사용되는 약제"는 FMS-양 타이러신 키나제 억제제, 예를 들어, FMS-양 타이로신 키나제 수용체 (Flt-3R)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 인터페론, 1-b-D-아라비노푸란실시토신 (ara-c) 및 비설판; 및 ALK 억제제, 예를 들어, 퇴행성 림프종 키나제를 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다.
FMS-양 타이로신 키나제 수용체 (Flt-3R)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 Flt-3R 수용체 키나제 집단의 구성원을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예를 들어, PKC412, 미도스타우린, 스타우로스포린 유도체, SU11248 및 MLN518이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "HSP90 억제제"는 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 의미한다. 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물는 예를 들어, 벤가미드 또는 그의 유도체이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "HSP90 억제제"는 HSP90의 내인성 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 유비퀴틴 프로테아좀 경로를 통해서 HSP90 클라이언트 (client) 단백질을 분해, 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. HSP90의 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 HSP90의 ATPase 활성을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예를 들어, 17-알릴아미노, 17-데메톡시젤다나마이신 (17AAG), 젤다나마이신 유도체; 그 밖의 다른 젤다나마이신 관련된 화합물; 래디시콜 및 HDAC 억제제이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "항증식성 항체"는 트라스투주마브 (헤르셉틴 (Herceptin™)), 트라스투주마브 (Trastuzumab)-DM1, 에를로티니브 (타르세바 (Tarceva™)), 베바시주마브 (아바스틴 (Avastin™)), 리툭시마브 (리툭산 (Rituxan™)), PRO64553 (안티-CD40), 및 2C4 항체를 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다. 항체는 예를 들어, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 적어도 2 개의 온전한 항체로부터 형성된 다중특이성 항체, 및 이들이 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한은 항체 단편을 의미한다.
급성 골수성 백혈병 (AML)을 치료하기 위해서, 화학식 I의 화합물은 표준 백혈병 치료법과 함께, 특히 AML의 치료를 위해서 사용된 치료법과 함께 사용될 수 있다. 특히, 화학식 I의 화합물은 예를 들어, 파르네실 트랜스퍼라제 억제제 및/또는 다우노루비신, 아드리아마이신, Ara-C, VP-16, 테니포사이드, 미톡산트론, 이다루비신, 카보플라티눔 및 PKC412와 같은 AML의 치료에 유용한 다른 약물과 함께 투여될 수 있다.
용어 "항백혈병 화합물"은 예를 들어, Ara-C, 데옥시사이티딘의 2'-알파-하이드록시 리보즈 (아라비노사이드) 유도체인 피리미딘 동족체를 포함한다. 또한, 하이포크산틴의 퓨린 동족체, 6-머컵토퓨린 (6-MP) 및 플루다라빈 포스페이트가 포함된다.
나트륨 부티레이트 및 수베로일아닐리드 하이드록삼산 (SAHA)과 같은 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 억제제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 히스톤 데아세틸라제로 공지된 효소의 활성을 억제한다. 특이적 HDAC 억제제는 MS275, SAHA, FK228 (이전에는 FR901228), 트리코스타틴 A 및 US 6,552,065에 기술된 화합물, 특히 N-하이드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 및 N-하이드록시-3-[4-[(2-하이드록시에틸){2-(1H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 특히 락테이트 염을 포함한다.
세린/트레오닌 mTOR 키나제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은 특히 mTOR 키나제 집단의 구성원을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예를 들어, RAD, RAD001, CCI-779, ABT578, SAR543, 라파마이신 및 그의 유도체; AP23573 (Ariad로부터 공급); 에버롤리무스 (세르티칸 (CERTICAN™)); 및 시롤리무스이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 소마토스타틴 수용체 길항제는 옥트레오라이드 및 SOM230과 같은 소마토스타틴 수용체를 표적화, 치료 또는 억제하는 약제를 의미한다.
종양세포 손상방법은 이온화 방사선과 같은 방법을 나타낸다. 상기 및 이하에서 언급된 용어 "이온화 방사선"은 전자기선 (예를 들어, X-선 및 감마선) 또는 입자 (예를 들어, 알파 및 베타 입자)로 나타나는 이온화 방사선을 의미한다. 이온화 방사선은 방사선 요법으로 제공되나, 이것으로 한정되지는 않으며, 본 기술분야에서 공지되어 있다 (참조: Hellman, Priciples of Radiation Therapy, Cancer, in Principles and Practice of Oncology, Devita et al., Eds., 4th Edition, Vol. 1, pp. 248-275 (1993)).
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 EDG 결합제는 FTY720과 같은 림프구 재순환을 변조시키는 면역억제제의 부류를 의미한다.
세르티칸 (CERTICAN)(에버롤리무스, RAD)은 T-세포 및 혈관 평활근 세포의 증식을 방지하는 연구용의 신규한 증식 시그날 억제제이다.
용어 리보뉴클레오타이드 리덕타제 억제제는 플루다라빈 및/또는 사이토신 아라비노사이드 (ara-C), 6-티오구아닌, 5-플루오로우라실, 클라드리빈, 6-머캅토퓨린 (특히, ALL에 대한 ara-C와 함께) 및/또는 펜토스타틴을 포함하는 (단, 이들로 제한되지는 않는다) 피리미딘 또는 퓨린 뉴클레오사이드 동족체를 의미한다. 리보뉴클레오타이드 리덕타제 억제제는 특히 문헌 (Nandy et al., Acta Oncologica, Vol. 33, No. 8, pp. 953-961 (1994))에 언급된 PL-1, PL-2, PL-3, PL-4, PL-5, PL-6, PL-7 또는 PL-8과 같은 2-하이드록시-1H-이소인돌-1,3-디온 유도체 또는 하이드록시우레아이다.
본 명세서에서 사용된 것으로 용어 "S-아데노실메티오닌 데카복실라제 억제제"는 US 5,461,076에 기술된 화합물을 포함하나, 이들로 제한되지는 않는다.
또한, 특히 WO 98/35958 (예를 들어, 1-(4-클로로아닐리노)-4-(4-피리딜메틸)프탈라진 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염, 예를 들어, 석시네이트), WO 00/09495, WO 00/27820, WO 00/59509, WO 98/11223, WO 00/27819 및 EP 0 769 947에 기술된 VEGF의 화합물, 단백질 또는 모노클로날 항체; 문헌 [Prewett et al., Cancer Res. Vol. 59, pp. 5209-5218 (1999); Yuan et al., Proc Natl Acad Sci U S A, Vol. 93, pp. 14765-14770 (1996); Zhu et al., Cancer Res, Vol. 58, pp. 3209-3214 (1998); 및 Mordenti et al., Toxicol Pathol, Vol. 27, No. 1, pp. 14-21 (1999); WO 00/37502 및 WO 94/10202]에 기술된 것; 문헌 (O'Reilly et al., Cell, Vol. 79, pp. 315-328 (1994))에 기술된 안지오스타틴 (ANGIOSTATIN); 문헌 (O'Reilly et al., Cell, Vol. 88, pp. 277-285 (1997))에 기술된 엔도스타틴 (ENDOSTATIN); 안트라닐산 아미드; ZD4190; ZD6474; SU5416; SU6668; 베바시주마브; 또는 안티-VEGF 항체 또는 안티-VEGF 수용체 항체, 예를 들어, rhuMAb 및 RHUFab, VEGF 애프타머 (aptamer), 예를 들어, 마쿠곤 (Macugon); FLT-4 억제제, FLT-3 억제제, VEGFR-2 IgG1 항체, 안지오자임 (Angiozyme)(RPI 4610) 및 아바스탄도 포함된다.
본 명세서에서 사용된 것으로 광역학적 요법은 암을 치료 또는 예방하는 광감작제로 공지된 특정의 화학물질을 사용하는 요법을 의미한다. 광역학적 요법의 예로는 예를 들어, 비수다인 (VISUDYNE) 및 포르피머 나트륨과 같은 약제에 의한 치료가 포함된다.
본 명세서에서 사용된 것으로 앤지오스타틱 (angiostatic) 스테로이드는 예를 들어, 아네코르테이브 (anecortave), 트리암시놀론, 하이드로코르티존, 11-α-에피하이드로코티졸, 코르텍솔론, 17α-하이드록시프로제스테론, 코르티코스테론, 데족시코르티코스테론, 테스토스테론, 에스트론 및 덱사메타존과 같이 혈관형성을 차단 또는 억제하는 약제를 의미한다.
코르티코스테로이드를 함유하는 이식물은 예를 들어, 플루오시놀론, 덱사메타존과 같은 약제를 의미한다.
그 밖의 다른 화학요법제에는 식물 알칼로이드, 호르몬제 및 길항제; 생물학적 반응 변형제, 바람직하게는 림포킨 또는 인터페론; 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 올리고뉴클레오타이드 유도체; 또는 잡다한 약제 또는 그 밖의 또는 미지의 작용기전을 갖는 약제가 포함되나, 이들로 제한되지는 않는다.
코드 번호, 일반명 또는 상품명으로 인식되는 활성약제의 구조는 표준 요약서 "The Merck Index"의 현재 판으로부터, 또는 데이타베이스, 예를 들어, 국제특허 (예를 들어, IMS World Publications)로부터 채택될 수 있다.
화학식 I의 화합물과 함께 사용될 수 있는 상기 언급된 화합물은 상기 인용된 문헌에서와 같이 본 기술분야에서 기술된 바와 같이 제조 및 투여될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 또한, 공지의 치료학적 방법, 예를 들어, 호르몬 또는 특히 방사선의 투여와 함께 유리하게 사용될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 특히, 방사선요법에 대하여 불량한 감수성을 나타내는 종양의 치료를 위한 방사선감작제로서 사용될 수 있다.
"배합"은 하나의 단위투약형인 고정된 배합물로, 또는 화학식 I의 화합물과 배합 파트너가 동시에 독립적으로, 또는 특히 배합 파트너가 협력적, 예를 들어, 상승적 효과를 나타내도록 허용하는 시간 간격을 두고 별도로 투여될 수 있는 배합투여를 위한 부분들의 키트, 또는 이들의 조합을 의미한다.
이하의 실시예는 본 발명의 범위를 제한하지 않으면서 본 발명을 설명하는 작용을 한다.
약어
DMSO 디메틸설폭사이드
ES-MS 전자분무 질량분석법
EtOAc 에틸 아세테이트
HPLC 고압 액체크로마토그라피
㎖ 밀리리터
NMR 핵자기공명
RT 실온
AtRET HPLC 체류시간, 분 (방법 A)
BtRET HPLC 체류시간, 분 (방법 B)
CtRET HPLC 체류시간, 분 (방법 C)
DtRET HPLC 체류시간, 분 (방법 D)
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라하이드로푸란
TMSCl 트리메틸실릴 클로라이드
온도가 제시되지 않은 경우에, 반응은 주위온도 (실온)에서 수행한다.
예를 들어, 용출제 또는 용매 혼합물에서 용매의 비는 용량/용량 (v/v)으로 제시된다.
합성
플래쉬 (flash) 크로마토그라피는 실리카겔 (Merck; 40-63 ㎛)을 사용하여 수행된다. 박층 크로마토그라피를 위해서는 전-코팅된 실리카겔 (Merck 60 F254) 플레이트가 사용된다. HPLC는 뉴클레오실 (Nucleosil) 100-3 C18 HD 125×4.0 ㎜ 칼럼 [1 ㎖/분; 20-100% NeCN/0.1% TFA, 7 분]을 사용하여 애질런트 (Agilent) HP 1100 상에서 (방법 A); 뉴클레오실 100-5 C18 AB 250×4.6 ㎜ 칼럼 [2 ㎖/분; 2-100% MeCN/0.1% TFA, 10 분]을 사용하여 스펙트라시스템 (SpectraSystem) SP8800/UV2000 상에서 (방법 B); 크로마리스 스피드 (Chromalith Speed) ROD RP18 50-4.6 ㎜ 칼럼 (Merck)(2 ㎖/분; 2-100% MeCN/0.1% TFA, 2 분]을 사용하여 (방법 C); 또는 C8 2.1-50 ㎜ 3 ㎛ 칼럼 (Waters)(2 ㎖/분; 5-95% MeCN/0.1% TFA, 2 분]을 사용하여 (방법 D) 수행된다. 1H-NMR 측정은 내부 표준물로서 테트라에틸실란을 사용하여 배리안 제미니 (Varian Gemini) 400 또는 브루커 (Bruker) DRX 500 분광계 상에서 수행된다. 화학적 쉬프트 (shift)는 테트라에틸실란으로부터의 하부장 ppm으로 표현되며, 커플링 상수 (J)는 헤르츠 (Hz)로 표현된다. 전자분무 질량 스펙트럼은 피존스 인스트루먼츠 VG 플랫폼 II (Fisons Instruments VG Platform II)에 의해서 수득된다. 융점은 부치 (Buchi) 510 융점 장치에 의해서 측정된다. 시판품으로 이용가능한 용매 및 화학물질이 합성을 위해서 사용된다.
분석용 HPLC 조건:
시스템 1:
선형 구배 20-100% CH3CN (0.1% TFA) 및 H2O (0.1% TFA), 7 분 + 2 분 100% CH3CN (0.1% TFA); 215 ㎚에서 검출, 유속 30℃에서 1 ㎖/분. 칼럼: 뉴클레오실 100-3 C18HD (125×4 ㎜)
시스템 2:
선형 구배 2-100% CH3CN (0.1% TFA) 및 H2O (0.1% TFA), 7 분 + 2 분 100% CH3CN (0.1% TFA); 215 ㎚에서 검출, 유속 30℃에서 1 ㎖/분. 칼럼: 뉴클레오실 100-3 C18HD (125×4 ㎜)
실시예 1
3-{7-아미노-3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -6-일}-페놀
THF (6 ㎖)에 용해된 6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민 (스테이지 1.1)(25 ㎎, 0.051 mmol)을 Pd/C (10% Engelhard 4505, 6 ㎎)의 존재하에서 13 시간 동안 수소화시킨다. 여과하고, 용매를 감압 하에서 증발시킨 후에, 잔류물을 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, CH2Cl2/MeOH/NH3 = 95:5:0.1)하여 백색 고체로서 실시예 1의 화합물을 수득한다 (14 ㎎, 0.035 mmol, 70%): ES-MS: M+H = 401.1, Rf (CH2Cl2/MeOH/NH3 = 90:10:0.1) = 0.33, HPLC: AtRet = 2.77 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 9.59 (s, 1H, OH), 8.58/8.18 (s/s, 1H/1H, 피라졸로피리미디닐), 8.01 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 7.48 (s, 2H, NH2), 7.32 (t, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 6.99 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 6.96 (d, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 6.93 (s, 1H, 페닐-OH), 6.80 (d, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 3.17/2.48 (m/m, 4H/4H, 피페라지닐), 2.24 (s, 3H, CH3).
스테이지 1.1 6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민
EtOH (1 ㎖)에 용해된 4-(4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (스테이지 1.2)(100 ㎎, 0.388 mmol), 2-(3-벤질옥시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴 (스테이지 1.3)(98 ㎎, 0.388 mmol), HCl (EtOH 중의 2.5 mM; 1.55 mmol, 0.9 ㎖)을 RT에서 17 시간 동안 교반한다. H2O (4 ㎖) 및 K2CO3 (250 ㎎)를 첨가한 후에 반응혼합물을 CH2Cl2 (20 ㎖, 2×)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (10 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압하에서 농축시키고, 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 2.5×15 ㎝, CH2Cl2/MeOH = 9:1)하여 백색 고체로서 스테이지 1.1의 화합물을 수득한다 (60 ㎎, 0.122 mmol; 32%); ES-MS: M+H = 491.0, Rf (CH2Cl2/MeOH/NH3 = 90:10:0.1) = 0.42, HPLC: AtRet = 4.69 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.79/8.21 (s/s, 1H/1H, 피라졸로피리미디닐), 8.03 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 7.53 (s, 2H, NH2), 7.44 (m, 5H, 벤질), 7.32 (t, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 7.29 (s, 1H, 페닐-OH), 7.13 (d, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 7.06 (d, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 7.06 (d, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 6.97 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 5.19 (s, 2H, 벤질), 3.17/2.48 (m/m, 4H/4H, 피페라지닐), 2.24 (s, 3H, CH3).
스테이지 1.2 4-(4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
AcOH에 용해된 2-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-3-옥소-프로피오니트릴 (스테이지 1.4)(370 ㎎, 1.52 mmol), 하이드라진 모노하이드레이트 (0.185 ㎖, 3.8 mmol)를 98℃에서 3 시간 동안 교반한다. RT로 냉각시킨 후에, H2O (8 ㎖) 및 진한 HCl (0.8 ㎖)을 첨가하고, 반응혼합물을 환류하에서 20 분 동안 교반한다. RT로 냉각시킨 후에, 반응혼합물을 NH3 (25%)를 서서히 첨가함으로써 알칼리성 pH로 조정한다. 침전한 물질을 여과하여 더 정제하기 위해서 유지시킨다. 반응용액을 CH2Cl2 (50 ㎖, 3×)로 추출하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압하에서 농축시킨다. 침전된 물질과 추출된 물질을 합하고, 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 3.0×18 ㎝, CH2Cl2/MeOH/NH3 = 9:1:0.1)하여 백색 고체로서 스테이지 1.2의 화합물을 수득한다 (277 ㎎, 1.08 mmol; 71%); ES-MS: M+H = 258.1, Rf (CH2Cl2/MeOH/NH3 = 90:10:0.1) = 0.28, HPLC: AtRet = 4.33 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 11.55 (s/브로드, 1H, NH), 7.55 (s, 1H, 피롤릴), 7.35 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 6.91 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 4.55 (s/브로드, 2H, NH2), 3.10/2.46 (m/m, 4H/4H, 피페라지닐), 2.23 (s, 3H, CH3).
스테이지 1.3 2-(3-벤질옥시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
Na (260 ㎎, 11.3 mmol)을 Ar 하에서 20분 동안 무수 EtOH (11 ㎖)에 용해시킨다. (3-벤질옥시-페닐)-아세토니트릴 (1.9 g, 8.68 mmol) 및 에틸 포르메이트 (1.05 ㎖, 13.0 mmol)를 첨가한 후에, 반응혼합물을 환류하에서 2 시간 동안 교반한다. 감압하에서 용매를 증발시키고, H2O (20 ㎖)를 첨가하고, AcOH를 첨가하여 pH를 4.0으로 조정한 후에, 반응 현탁액을 CH2Cl2 (30 ㎖, 2×)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (10 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압하에서 농축시키고, 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 4.5×25 ㎝, CH2Cl2/MeOH = 98:2)하여 백색 고체로서 스테이지 1.3의 화합물을 수득한다 (780 ㎎, 3.11 mmol; 36%); ES-MS: M-H = 250.0, Rf (CH2Cl2/MeOH = 95:5) = 0.49, HPLC: AtRet = 6.07 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 7.45-7.25/6.98-6.88 (m/m, 8H, 아릴), 5.09 (s, 2H, CH2), 3.98 (s, 2H, CH2).
스테이지 1.4 2-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
Na 160 ㎎ (7.0 mmol)을 Ar 하에서 10분 동안 무수 EtOH (6 ㎖)에 용해시킨다. [4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-아세토니트릴 (스테이지 1.5)(1 g, 4.64 mmol) 및 에틸 포르메이트 (0.56 ㎖, 7.0 mmol)를 첨가한 후에, 반응혼합물을 환류하에서 1 시간 동안 교반한다. 반응펄프를 에테르 (50 ㎖, 3×)로 세척한 후에, 고체 잔류물을 H2O (60 ㎖)에 용해시키고, AcOH를 첨가하여 pH를 3.9로 조정한다. 수용액을 CH2Cl2 (50 ㎖, 3×)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (50 ㎖)로 세척한다. 수성상을 모두 합하여 동결건조시킨다. 생성된 잔류물을 MeOH/CH2Cl2로부터 결정화시켜 백색 고체로서 스테이지 1.4의 화합물을 수득한다 (721 ㎎, 3.0 mmol; 64%); ES-MS: M+H = 244.1; HPLC: AtRet = 2.43 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 7.87/7.77 (s/s, 1H, CH=/CH-OH), 7.53/7.17 (d/d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 7.84/7.82 (d/d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 3.10 (m, 4H, 피페라지닐), 2.57/2.51 (m/m, 4H, 피페라지닐), 2.29/2.26 (s, 3H, CH3).
스테이지 1.5 [4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-아세토니트릴
1,2-디메톡시에탄 (70 ㎖)에 용해된 (4-브로모-페닐)-아세토니트릴 (5 g, 25.5 mmol), 1-메틸-피페라진 (3.4 ㎖, 30.6 mmol), K2CO3 (7.68 g, 35.7 mmol), Pd(AcO)2 (280 ㎎, 1.275 mmol), 2-(디-tert-부틸포스피노)-비페닐 (1.14 g, 3.825 mmol)을 Ar 하에 85℃에서 20 시간 동안 교반한다. H2O (100 ㎖)를 첨가한 후에, 반응혼합물을 CH2Cl2 (100 ㎖, 3×)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (100 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압하에서 농축시키고, 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 4.5×34 ㎝, CH2Cl2/MeOH = 95:5)하여 백색 고체로서 스테이지 1.5의 화합물을 수득한다 (2.8 g, 13 mmol; 51%); ES-MS: M+H = 216.1; Rf (CH2Cl2/MeOH = 9:1) = 0.47; HPLC: AtRet = 2.24 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 7.14/6.91 (d/d, 9.5 Hz, 2H/2H, 페닐), 7.53 (s, 2H, NH2), 7.44 (m, 5H, 벤질), 7.32 (t, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OH), 7.29 (s, 1H, 페닐-OH), 3.84 (s, 2H, 벤질), 3.09/2.42 (t/t, 5.0 Hz, 4H/4H, 피페라지닐), 2.18 (s, 3H, CH3).
실시예 2
6-(3- 메톡시 - 페닐 )-3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
6-(3-메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리디민-7-일아민은 실시예 1의 화합물의 제조방법과 유사하게 단계 1.2의 화합물과 2-(3-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴 (스테이지 2.1)을 축합시킴으로써 합성된다. 수율: 48%, 고체 분말; ES-MS: M+H = 415.1; HPLC: AtRet = 3.45 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.59/8.23 (s/s, 1H/1H, 피라졸로피리미디닐), 8.06 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 7.55 (s, 2H, NH2), 7.43 (t, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OMe), 7.10 (d, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OMe), 7.08 (s, 1H, 페닐-OMe), 6.80 (d, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OMe), 6.98 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 3.83 (s, 3H, CH3-O), 3.16/2.47 (m/m, 4H/4H, 피페라지닐), 2.25 (s, 3H, CH3).
스테이지 2.1 2-(3-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(3-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 76%; 백색 분말; ES-MS: M-H = 174.0; HPLC: AtRet = 4.75 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 8.09/7.67 (s/s, 1H, CH=/CH-OH), 7.38-7.23 (m, 2H, 페닐), 7.01-6.97 (m, 1H, 페닐), 6.88-6.79 (m, 1H, 페닐), 3.74 (s/브로드, 3H, CH3-O).
실시예 3
6-(3,5- 디메톡시 - 페닐 )-3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
6-(3,5-디메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리디민-7-일아민은 실시예 1의 화합물의 제조방법과 유사하게 단계 1.2의 화합물과 2-(3,5-디메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴 (스테이지 3.1)을 축합시킴으로써 합성된다. 수율: 44%, 고체 분말; ES-MS: M+H = 445.0; HPLC: AtRet = 3.77 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.59/8.23 (s/s, 1H/1H, 피라졸로피리미디닐), 8.06 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 7.55 (s, 2H, NH2), 7.43 (t, 8.5 Hz, 1H, 페닐-OMe), 7.10 (d, 8.4 Hz, 1H, 페닐-OMe), 7.57 (s, 2H, NH2), 7.01 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 6.89 (s, 2H, 페닐-OMe), 6.54 (s, 1H, 페닐-OMe), 3.83 (s, 6H, CH3-O), 3.16/2.47 (m/m, 4H/4H, 피페라지닐), 2.24 (s, 3H, N-CH3).
스테이지 3.1 2-(3,5-디메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(3,5-디메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 48%; 백색 분말; ES-MS: M+H = 206.0; HPLC: AtRet = 4.79 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 8.11/7.68 (s/s, 1H, CH=/CH-OH), 6.85/6.54 (s/s, 2H, 페닐), 6.44/6.38 (s/s, 1H, 페닐), 3.74 (s/브로드, 6H, CH3-O).
실시예 4
6-(3- 벤질옥시 - 페닐 )-3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
스테이지 1.1에 기술된 단계에 의해서 제조된다.
실시예 5-69
표 1에 제시된 이하의 실시예는 실시예 1의 제조방법과 유사하게 합성된다. 시판품으로 이용할 수 없는 실시예 5-69의 화합물의 제조를 위한 중간체의 합성은 표 1 이하의 설명에 기술되어 있다. 표제화합물이 유리 아미노기를 함유하는 경우에 (실시예 52-54), 최종 생성물은 THF/MeOH 중의 Pd/C (10%)의 존재하에서 몇시간 동안 수소화시킴으로써 그들의 상응하는 니트로-작용기 함유 전구체로부터 생성된다.
Nb. A R2 R3 분석 데이타
5 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-클로로페닐 H
6 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 3-클로로페닐 H
7 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 페닐 H
8 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 페닐 메틸
9 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 메틸 페닐
10 4-디메틸아미노페닐 H
11 4-디메틸아미노페닐 H
12 페닐 4-메톡시페닐 메틸
13 4-메톡시-페닐 페닐 메틸
14 4-메톡시-페닐 4-브로모페닐 메틸
15 페닐 4-브로모페닐 메틸
16 페닐 2,6-디클로로페닐 H
17 3-메톡시-페닐 페닐 H
18 Br H 페닐
19 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
20 4-브로모-페닐 H 페닐
21 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
22 3-메톡시-페닐 H
23 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 벤질 H
24 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 3-메톡시페닐 H
25 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
26 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-메톡시페닐 H
27 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 2-메톡시페닐 H
28 피리딘-3-일 3-메톡시페닐 H
29 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 3-하이드록시페닐 H
30 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 3-벤질옥시페닐 H
31 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 3-하이드록시페닐 H
32 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 2-벤질옥시페닐 H
33 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 2-하이드록시페닐 H
34 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-벤질옥시페닐 H
35 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-하이드록시페닐 H
36 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 2-벤질옥시페닐 H
37 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 2-하이드록시페닐 H
38 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-벤질옥시페닐 H
39 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-하이드록시페닐 H
40 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 2-벤질옥시페닐 H
41 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 2-하이드록시페닐 H
42 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-벤질옥시페닐 H
43 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-하이드록시페닐 H
44 1-메틸-1H-인돌-3-일 3-벤질옥시페닐 H
45 1-메틸-1H-인돌-3-일 3-하이드록시페닐 H
46 3-피리딜 3-하이드록시페닐 H
47 2-메톡시페닐 3-벤질옥시페닐 H
48 2-메톡시페닐 3-하이드록시페닐 H
49 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
50 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
51 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
52 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
53 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
54 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
55 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 4-메틸티아졸-2-일 H
56 2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
57 4-메톡시페닐 H
58 3-메톡시페닐 H
59 3-메톡시페닐 H
60 3-메톡시페닐 H
61 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
62 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
63 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
64 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
65 3-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
66 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
67 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
68 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐 H
69 4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐/ H
스테이지 5.1 2-(4-클로로-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(4-클로로-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 89%; ES-MS [M-1]_ = 177.9/179.9; HPLC AtRet = 5.67 분.
스테이지 6.1 2-(3-클로로-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(3-클로로-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 89%; ES-MS [M-1]_ = 177.9/179.9; HPLC AtRet = 5.60 분.
스테이지 8.1 3-옥소-2-페닐-부티로니트릴
3-옥소-2-페닐-부티로니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 62%, 백색 결정, m.p. > 215℃; ES-ES-MS M-H = 157.9, Rf (헥산/AcOEt = 1:1) = 0.57.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 7.84 (d, 9.0 Hz, 2H), 7.04 (t, 9.0 Hz, 2H), 6.68 (t, 9.0 Hz, 1H), 3.21 (s/브로드, 1H, CH), 2.03 (s, 3H, CH3).
스테이지 9.1 2-메틸-3-옥소-3-페닐-프로피오니트릴
2-메틸-3-옥소-3-페닐-프로피오니트릴은 문헌 (Yoo et al., Tetrahedron Lett., Vol. 43, No. 27, pp. 4813-4815 (2002))의 방법과 유사하게 제조된다. 2-브로모-프로피오니트릴 (0.965 ㎖, 11.05 mmol) 및 In-분말 (975 ㎎, 8.5 mmol)을 Ar 하에 THF (15 ㎖) 중에서 1 시간 동안 교반한다. 2 분 동안 벤조일니트릴 (735 ㎎, 5.6 mmol)을 첨가한 후에, 반응혼합물을 마이크로웨이브 오펜 (microwave ofen; Emrys optimizer, personal chemistry, Sweden) 중에서 60℃에서 30 분 동안 교반한다. 하이플로 (Hyflo) 상에서 여과하고 THF (5 ㎖)로 세척한 후에, 반응용액을 감압하에서 농축시키고, 에테르 (150 ㎖)와 포스페이트 완충액 (pH = 7, 150 ㎖) 사이에 분배시킨다. 유기상을 분리한 후에, 수성상을 에테르 (150 ㎖)로 추출한다. 유기상을 합하여 염수 (30 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압하에서 농축시키고, 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 2×18 ㎝, 헥산/AcOEt = 3:1)하여 연황색 오일로서 스테이지 9.1의 화합물을 수득한다 (300 ㎎, 1.9 mmol; 34%); ES-MS: M-H = 157.9; Rf (헥산/AcOEt = 1:1) = 0.60.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.06 (d, 8.5 Hz, 2H), 7.74 (t, 8.5 Hz, 1H), 7.62 (t, 8,5 Hz, 2H), 5.17 (q, 8.5 Hz, 1H, CH), 1.52 (s, 3H, CH3).
실시예 10의 화합물은 2,3-디클로로-N-[4-(시아노-포르밀-메틸)-페닐]-벤젠설폰아미드 (스테이지 10.1)를 4-(4-디메틸아미노-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (스테이지 10.3)과 축합시킴으로써 스테이지 1.1의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다.
스테이지 10.1 2,3-디클로로-N-[4-(시아노-포르밀-메틸)-페닐]-벤젠설폰아미드
N2의 대기 하에서 나트륨의 새로 절단한 조각 (총 2.3 g, 100 mmol)을 15 분 이내에 무수 EtOH (230 ㎖)에 첨가하는데 약간의 발열 (43℃까지)이 있다. 모든 나트륨이 용해된 후 (약 1 시간)에, 2,3-디클로로-N-(4-시아노메틸-페닐)-벤젠-설폰아미드 (스테이지 10.2)(26.27 g, 77 mmol) 및 포름산 에틸 에스테르 (11.2 ㎎, 139 mmol)를 RT에서 무색 용액에 첨가한다. 혼합물을 2 시간 동안, 환류하도록 가열한다. RT로 냉각시킨 후에, 용매를 감압하에서 제거하고, 잔류물을 H2O (20 ㎖)에 용해시키고, 이어서 AcOH (200 ㎖; pH 4)를 첨가한다. 수층을 CH2Cl2 (2×, 500 ㎖)로 추출하고, 유기상을 합하여 H2O로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시킨다. 반복된 크로마토그라피 (실리카겔, EtOAc 및 CH2Cl2/MeOH = 98:2)에 의해서 정제하여 베이지색 결정으로 2,3-디클로로-N-[4-(시아노-포르밀-메틸)-페닐]-벤젠설폰아미드 (233 ㎎, 1% 수율)를 수득한다: m.p. 88-102℃; (CH2Cl2/MeOH = 95:5): 0.22; ES-MS [M+1]+ = 368; HPLC BtRet = 5.61 분.
스테이지 10.2 2,3-디클로로-N-(4-시아노메틸-페닐)-벤젠설폰아미드
RT에서 피리딘 (11 ㎖) 중의 4-아미노벤질시아나이드 (12 g, 90.8 mmol)의 용액에 THF (80 ㎖) 중의 2,3-디클로로벤젠-설포닐클로라이드 (22.29 g, 90.8 mmol)를 20 분 이내에 첨가한다. 반응액을 2 시간 동안 환류하에 교반한다. 냉각시킨 후에, 용매를 감압하에서 제거하고 잔류하는 고체를 10% HCl (200 ㎖)에 현탁시킨다. 조결정성 생성물을 여과하여 H2O로 세척하고, 60℃에서 건조시킨다. 최종 정제는 조화합물을 MeOH (250 ㎖)에 현탁시키고, 환류하도록 가열하고, 여과하고 건조시킴으로써 수행된다. 2,3-디클로로-N-(4-시아노메틸-페닐)-벤젠설폰아미드 (26.54 g, 86%)는 오렌지색 결정으로 수득된다: m.p. 202-206℃; (CH2Cl2/MeOH = 98:2): 0.54; ES-MS [M-1]_ = 338.8; HPLC BtRet = 5.85 분.
스테이지 10.3 4-(4-디메틸아미노-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
4-(4-디메틸아미노-페닐)-2H-피라졸-3-일아민은 미국 특허 제 2,989,539 호 (20.6.61; Anderson and Reiff; 실시예 18)에 기술된 바와 같이 2-(4-디메틸아미노-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴 (스테이지 10.4) 및 하이드라진 하이드레이트로부터 제조된다. 4-(4-디메틸아미노-페닐)-2H-피라졸-3-일아민: m.p. 173-176℃; (CH2Cl2/MeOH/NH3 = 90:10:1): 0.37; ES-MS [M+1]+ = 203; HPLC BtRet = 1.40 분.
스테이지 10.4 2-(4-디메틸아미노-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(4-디메틸아미노-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 미국 특허 제 2,989,539 호 (실시예 18)에 기술된 바와 같이 (4-디메틸아미노-페닐)-아세토니트릴, 에틸 포르메이트 및 나트륨으로부터 제조된다.
2-(4-디메틸아미노-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴: m.p. 175-178℃; ES-MS [M+1]+ = 189; HPLC BtRet = 2.00 분.
실시예 11의 화합물은 4-(4-디메틸아미노-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (스테이지 10.3) 및 4-클로로-벤젠설폰산 4-(시아노-포르밀-메틸)-페닐 에스테르 (스테이지 11.1)를 사용하여 실시예 10의 화합물의 합성과 유사하게 제조된다.
스테이지 11.1 4-클로로-벤젠설폰산 4-(시아노-포르밀-메틸)-페닐 에스테르
4-클로로-벤젠설폰산 4-(시아노-포르밀-메틸)-페닐 에스테르는 시판품으로 이용할 수 있는 4-(시아노메틸)페닐-4-클로로벤젠-1-설포네이트를 대신 사용하여 실시예 10에 기술된 바와 같이 제조된다.
4-클로로-벤젠설폰산 4-(시아노-포르밀-메틸)-페닐 에스테르 (162 ㎎); 황색 고체; (CH2Cl2/MeOH = 95:2): 0.32; ES-MS [M+1]+ = 335; HPLC BtRet = 6.23 분.
스테이지 12.1 2-(4-메톡시-페닐)-3-옥소-부티로니트릴
2-(4-메톡시-페닐)-3-옥소-부티로니트릴은 문헌 (Smith, Breen, Hajek and Awang, J. Org . Chem ., Vol. 35, No. 7, pp. 2215-2221 (1970))에 기술된 바와 같이 제조된다.
스테이지 14.1 2-(4-브로모-페닐)-3-옥소-부티로니트릴
2-(4-브로모-페닐)-3-옥소-부티로니트릴은 문헌 (Rau, Ger . Offen., DE 3001266 (1980))의 방법에 따라 합성된다.
스테이지 16.1 1,2-(2,6-디클로로-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
1,2-(2,6-디클로로-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 문헌 (Menzer, Lankau and Unverferth, Ger . Offen ., DE 19521822 (1996))에 기술된 바와 같이 제조된다.
스테이지 17.1 4-(3-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
4-(4-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 및 스테이지 22.2는 문헌 (Bruni et al., Heterocyclic . Chem ., Vol. 32, No. 1, pp. 291-298 (1995))에 기술된 바와 같이 제조된다.
스테이지 19.1 2-벤조[b]티오펜-3-일-3-옥소-프로피오니트릴
2-벤조[b]티오펜-3-일-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 56%; 백색 분말; ES-MS: M-H = 123.9; HPLC: AtRet = 2.20 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 12.0 (s/broad, 1H), 8.00-7.70 (m, 3H), 7.45-7.35 (m, 2H).
스테이지 21.1 3-옥소-2-티오펜-3-일-프로피오니트릴
3-옥소-2-티오펜-3-일-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 51%; 백색 분말; ES-MS: M-H = 112.9; HPLC: AtRet = 2.03 분.
화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 7.95/7.55 (s/s, 1H, CH=/CH-OH), 7.55-7.50 (m, 2H), 7.30-7.20 (m, 1H).
스테이지 22.1 4-벤조[b]티오펜-3-일-1H-피라졸-3-일아민
4-벤조[b]티오펜-3-일-1H-피라졸-3-일아민은 스테이지 1.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 80%; 백색 분말; ES-MS: M+H = 216.0.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 12.6 (s/broad, 1H), 8.00-7.80 (m, 3H), 7.75 (s/브로드, 1H), 7.60 (s/브로드, 1H), 7.40-7.30 (m, 2H).
스테이지 22.2 (2-(3-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴)
(2-(3-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴)은 문헌 (Bruni et al., Heterocyclic. Chem ., Vol. 32, No. 1, pp. 291-298 (1995))에 기술된 바와 같이 기술된다.
스테이지 23.1 2-포르밀-3-페닐-프로피오니트릴
2-포르밀-3-페닐-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 77%; 오일; ES-MS: M-H = 158.0.
화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 7.40-7.15 (m, 5H), 2.85-2.75 (m, 2H).
스테이지 24.1 4-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-아세토니트릴
4-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-아세토니트릴은 스테이지 1.5의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 55%; 갈색 고체; ES-MS: M+H = 216.7; HPLC: CtRet = 1.65 분.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): 7.30-7.25 (m, 1H), 6.90-6.82 (m, 2H), 6.80-6.75 (m, 1H), 3.70 (s, 2H), 3.25-3.15 (m, 4H), 2.60-2.50 (m, 4H), 2.35 (s, 3H).
스테이지 24.2 2-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-3-옥소-프로피오니트릴
2-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 100%; 갈색 고체; ES-MS: M+H = 244.1; HPLC: CtRet = 1.67 분.
스테이지 24.3 4-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-1H-피라졸-3-일아민
4-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-1H-피라졸-3-일아민은 스테이지 1.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 36%; 황색 포움; ES-MS: M+H = 258.2; HPLC: CtRet = 1.46 분.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): 7.45 (s, 1H), 7.30-7.25 (m, 1H), 7.05-7.00 (m, 1H), 6.95-6.90 (m, 1H), 6.85-6.80 (m, 1H), 4.00 (s/브로드, 2H), 3.30-3.20 (m, 4H), 2.65-2.58 (m, 4H), 2.35 (s, 3H).
스테이지 25.1 2-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 59%; 오일; ES-MS: M+H = 199.1.
화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 1H-NMR (300 MHz, CDCl3): 8.00/7.95 (s/s, 1H), 7.60-7.20 (m, 5H), 3.75 (s, 3H).
스테이지 26.1 2-(4-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(4-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 80%; 백색 고체; ES-MS: M-H = 174.3.
화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 7.80/7.58 (s/s, 1H), 7.55-7.50 (m, 1H), 7.30-7.20 (m, 1H), 6.90-6.80 (m, 2H), 3.73-3.70 (s/s, 3H).
스테이지 27.1 2-(2-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(2-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 40%; 갈색 오일; ES-MS: M-H = 174.3; HPLC CtRet = 2.01 분.
스테이지 28.1 3-옥소-2-피리딘-3-일-프로피오니트릴
3-옥소-2-피리딘-3-일-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 71%; 갈색 고체; ES-MS: M+H = 147.2; HPLC: CtRet = 1.31 분.
스테이지 28.2 4-피리딘-3-일-1H-피라졸-3-일아민
4-피리딘-3-일-1H-피라졸-3-일아민은 스테이지 1.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 68%; 갈색 고체; ES-MS: M+H = 161.2; HPLC CtRet = 0.50 분.
스테이지 30.1 [2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-아세토니트릴
[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-아세토니트릴은 스테이지 1.5의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 51%; 갈색 고체; ES-MS: M+H = 246.6; HPLC: CtRet = 1.72 분.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): 7.00-6.95 (m, 1H), 6.85-6.75 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.65 (s, 2H), 3.15-3.05 (m, 4H), 2.60-2.55 (m, 4H), 2.35 (s, 3H).
스테이지 30.2 2-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-3-옥소-프로피오니트릴
2-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.4의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 100%; 갈색 고체; ES-MS: M+H = 274.1; HPLC: CtRet = 1.62 분.
스테이지 30.3 4-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민
4-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민은 스테이지 1.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 32%; 갈색 고체; ES-MS: M+H = 288.2; HPLC: CtRet = 1.46 분.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): 7.50 (s, 1H), 7.00-6.95 (m, 1H), 6.90-6.80 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.20-3.10 (m, 4H), 2.65-2.55 (m, 4H), 2.35 (s, 3H).
스테이지 32.1 2-(2-벤질옥시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(2-벤질옥시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 85%; 백색 고체; ES-MS: M+H = 252.6; HPLC: CtRet = 2.35 분.
화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 11.6/7.78 (s, 1H), 7.55-7.45 (m, 2H), 7.40-7.20 (m, 5H), 7.15-7.05 (m, 1H), 7.00-6.90 (m, 1H), 5.15 (s, 2H).
스테이지 34.1 2-(4-벤질옥시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(4-벤질옥시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 95%; 백색 고체; ES-MS: M-H = 250.3; HPLC: CtRet = 2.41 분.
화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 12.0/11.7 (s, 1H), 7.90-7.80 및 7.60-7.50 (m, 1H), 7.40-7.25 (m, 6H), 7.05-6.95 (m, 2H), 5.10 (s, 2H).
스테이지 44.1 4-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-2H-피라졸-3-일아민
4-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-2H-피라졸-3-일아민은 스테이지 1.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 10%; 갈색 포움; ES-MS: M+H = 213.2; HPLC: CtRet = 1.66 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 7.70 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.30-7.25 (m, 1H), 7.20-7.10 (m, 2H), 3.80 (s, 3H).
스테이지 47.1 2-(2-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴
2-(2-메톡시-페닐)-3-옥소-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 59%; 백색 고체; ES-MS: M+H = 175.3; HPLC: CtRet = 2.01 분.
스테이지 47.2 4-(2-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
4-(2-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민은 스테이지 1.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 35%; 백색 고체; ES-MS: M+H = 190.1; HPLC: CtRet = 1.40 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 11.5 (bs, 1H), 7.50 (bs, 1H), 7.30 (bs, 1H), 7.20-7.05 (m, 1H), 7.00-6.85 (m, 2H), 4.30 (bs, 2H), 3.75 (s, 3H).
스테이지 51.1 3-옥소-2-피리딘-4-일-프로피오니트릴
3-옥소-2-피리딘-4-일-프로피오니트릴은 스테이지 1.3의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 59%; 오렌지색 고체; ES-MS: M+H = 147.2; HPLC: CtRet = 1.00 분.
화합물은 용액 중에서 호변이성체 평형을 형성한다: 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 13.1/9.60 (bs, 1H), 9.10 (bs, 1H), 8.20-8.00 (m, 2H), 7.95-7.80 (m, 1H).
스테이지 52.1 (Z)-3-디메틸아미노-2-(3-니트로-페닐)-아크릴로니트릴
크실렌 (30 ㎖) 중의 (3-니트로-페닐)-아크릴로니트릴 (1.51 g, 9.31 mmol), 디메톡시메틸-디메틸-아민 (6.2 ㎖, 46.5 mmol)을 1 시간 동안 환류 하에서 교반한다. 헥산 (20 ㎖)을 첨가한 후에, 반응혼합물을 0℃로 냉각시킨다. 침전된 물질을 여과하여 갈색 고체로서 스테이지 52.1의 화합물을 수득한다 (1.76 g, 8.19 mmol; 88%); ES-MS: M+H = 218.1; HPLC: CtRet = 2.24 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8.10-8.05 (m, 1H), 7.90-7.85 (m, 1H), 7.75-7.72 (m, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.65-7.60 (m, 1H), 3.30 (s, 6H).
스테이지 52.2 3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-(3-니트로-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민
AcOH (10 ㎖) 및 BuOH (10 ㎖)에 용해된 4-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-1H-피라절-3-일아민 (스테이지 24.3)(305 ㎎, 1.18 mmol), (Z)-3-디메틸아미노-2-(3-니트로-페닐)-아크릴로니트릴 (스테이지 52.1)(335 ㎎, 1.54 mmol)을 환류 하에서 16 시간 동안 교반한다. 포화 NaHCO3 수용액을 첨가한 후에, 반응혼합물을 EtOAc (50 ㎖, 2×)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (10 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압 하에서 농축시키고 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 2.5×15 ㎝, CH2Cl2/MeOH = 9:1)하여 오렌지색 고체로서 스테이지 52.2의 화합물을 수득한다 (224 ㎎, 0.52 mmol; 44%); ES-MS: M+H = 430.1; HPLC: CtRet = 1.91 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8.70 (s, 1H), 8.35-8.30 (m, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.22-8.18 (m, 1H), 7.98-7.95 (m, 1H), 7.90 (bs, 2H), 7.80-7.70 (m, 2H), 7.65-7.60 (m, 1H), 7.25-7.18 (m, 1H), 6.80-6.75 (m, 1H), 3.20-3.10 (m, 4H), 2.50-2.40 (m, 4H), 2.20 (s, 3H).
스테이지 53.1 3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-(3-니트로-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민
3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-(3-니트로-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일은 스테이지 52.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 30%; 적색 고체; ES-MS: M+H = 430.0.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8.60 (s, 1H), 8.35-8.30 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.20-8.10 (m, 1H), 8.00 (d, 2H, J=7.9 Hz), 7.95-7.90 (m, 1H), 7.85 (bs, 2H), 7.80-7.75 (m, 1H), 6.95 (d, 1H, J=7.9 Hz), 3.20-3.10 (m, 4H), 2.50-2.40 (m, 4H), 2.20 (s, 3H).
스테이지 54.1 (Z)-3-디메틸아미노-2-(2-니트로-페닐)-아크릴로니트릴
(Z)-3-디메틸아미노-2-(2-니트로-페닐)-아크릴로니트릴은 스테이지 52.1의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 97%; 갈색 고체.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 7.82-7.78 (m, 1H), 7.62-7.55 (m, 1H), 7.45-7.35 (m, 2H), 7.20 (s, 1H), 3.15 (s, 6H).
스테이지 54.2 3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-(2-니트로-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민
3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-(2-니트로-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민은 스테이지 55.2의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 갈색 고체; ES-MS: M+H = 430.0; HPLC: DtRet = 1.61 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 8.55 (s, 1H), 8.20-8.15 (m, 1H), 8.05-7.95 (m, 3H), 7.82-7.60 (m, 5H), 7.00-6.95 (m, 2H), 3.15-3.05 (m, 4H), 2.45-2.40 (m, 4H), 2.20 (s, 3H).
스테이지 55.1 (E)-3-디메틸아미노-2-(4-메틸-티아졸-2-일)-아크릴로니트릴
(E)-3-디메틸아미노-2-(4-메틸-티아졸-2-일)-아크릴로니트릴은 스테이지 52.1의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: 수율: 74%; 흑색 고체; ES-MS: M+H = 194.2; HPLC: CtRet = 1.57 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 7.76 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 3.25 (bs, 6H), 2.35 (s, 3H).
실시예 61
3-{7-아미노-2- 메틸 -3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -6-일}-페놀
3-{7-아미노-2-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)페닐]-피라졸로[1,5-a]피리디민-6-일}-페놀은 피라졸 환이 형성될 때에 하이드라진 대신에 메틸 하이드라진을 사용하여 실시예 1의 제조방법과 유사하게 합성된다: ES-MS: M+H = 415.2; HPLC: DtRet = 1.45 분.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 9.53 (s, 1H, OH), 2.56 (s, 3H CH3), 2.24 (s, 3H CH3).
실시예 62
(4-{7-아미노-3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -6-일}-페닐)-카밤산 에틸 에스테르
EtOH (4 ㎖) 및 에탄올성 HCl (1.6 ㎖, 2.5 N)에 용해된 4-(4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (스테이지 1.2)(200 ㎎, 0.81 mmol) 및 [4-(2-시아노-1-포르밀-에틸)-페닐]-카밤산 에틸 에스테르 (스테이지 62.1)(275 ㎎, 0.04 mmol)을 Ar 하에서 17 시간 동안, 환류하에 교반한다. H2O (4 ㎖) 및 K2CO3 (250 ㎎)를 첨가한 후에, 반응혼합물을 CH2Cl2 (20 ㎖, 2×)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (10 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압 하에서 농축시키고, 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 2.5×15 ㎝, CH2Cl2/MeOH/NH3 = 95:5:0.5)하여 백색 고체로서 실시예 62의 화합물을 수득한다 (58 ㎎, 0.123 mmol; 15%): ES-MS: M+H = 472.0; Rf (CH2Cl2/MeOH/NH3 = 90:10:0.1) = 0.42; HPLC: AtRet = 4.26 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.75/8.58 (s/s, 1H/1H, 피라졸로피리미디닐), 8.03 (d, 9.0 Hz, 2H, 페닐), 7.61 (d, 9 Hz, 2H, 페닐), 7.53 (s, 2H, NH2), 7.46 (d, 9 Hz, 2H, 페닐), 7.00 (d, 9 Hz, 2H, 페닐), 4.18 (q, 7.5 Hz, 2H, CH2-에틸), 3.17/2.48 (m/m, 4H/4H, 피페라지닐), 2.24 (t, 7.5 Hz, 3H, CH3).
스테이지 62a.1 [4-(시아노-1-포르밀-메틸)-페닐]-카밤산 에틸 에스테르
[4-(시아노-메틸)-페닐]-카밤산 벤질 에스테르 (스테이지 62a.2)(1 g, 3.76 mmol)를 스테이지 1.3의 제조방법과 유사하게 포르밀화시켜 상응하는 카밤산 에틸 에스테르를 수득한다 (이렇게 함으로써 벤질 에스테르 작용기도 에틸 에스테르 작용기로 전환한다): 무색 결정 (654 ㎎, 2.66 mmol, 70%). ES-MS: M+H = 233.0.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 4.12 (q/브로드, 7.5 Hz, 2H, CH2-에틸), 1.23 (t/브로드, 7.5 Hz, 3H, CH3-에틸).
스테이지 62.2 [4-(시아노-메틸)-페닐]-카밤산 벤질 에스테르
디옥산 (16 ㎖)에 용해된 (4-아미노-페닐)-아세토니트릴 (2 g, 15.1 mmol) 및 디벤질 디카보네이트 (4.33 g, 15.1 mmol)를 RT에서 1 시간 동안 교반한다. 용매를 증발시킨 후에, 생성물을 플래쉬 크로마토그라피 (실리카겔, 4.5×25 ㎝, CH2Cl2/MeOH = 95:5) = 0.49; HPLC: AtRet = 6.32 분.
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): 9.82 (s, 1H, NH), 7.51-7.35 (m, 7H, 아릴), 7.26 (d, 8.5 Hz, 2H, 아릴), 5.15 (s, 2H, CH2), 3.95 (s, 2H, CH2).
(Z)-3-디메틸아미노-2-티아졸-4-일- 아크릴로니트릴
(Z)-3-디메틸아미노-2-티아졸-4-일-아크릴로니트릴은 스테이지 52.1의 화합물의 제조방법과 유사하게 합성된다: ES-MS [M+1]+ = 180.1; HPLC: CtRet = 1.91 분.
설폰아미드 및 아세틸아미드 작용기 (화합물 63, 65 및 69)를 보유하는 화합물 61, 62, 64, 67 및 68은 아미노 전구체를 피리딘의 존재 하에서 상응하는 설폰산 클로라이드 또는 아세트산 무수물과 반응시킴으로써 제조된다.
실시예 70 및 71
표 2 및 표 3의 화합물은 실시예 1에 따라서 제조된다.
실시예 72
6-(3- 클로로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
4-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-1H-피라졸-3-일아민 (스테이지 72.2)(1.29 g, 5 mmol)을 EtOH (25 ㎖)에 용해시키고, 이어서 RT에서 2-(3-클로로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (스테이지 72.3)(0.97 g, 5 mmol) 및 HCl (EtOH 중의 1.25 M; 20 mmol, 16 ㎖)을 첨가한다. 황색 용액을 20 시간 동안 교반하에서 환류시킨다. RT로 냉각시킨 후에, H2O (80 ㎖) 뿐만 아니라 K2CO3 (2.5 g)를 첨가하여 혼합물을 염기성으로 만든다. 수층을 CH2Cl2 (200 ㎖, 2×)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (50 ㎖, 2×)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압하에서 농축시키고, 크로마토그라피 (실리카겔, 120 g RediSep, ISCO Sg-100 CH2Cl2/MeOH/NH3 = 95:5:0.1)하여 백색 결정으로서 표제화합물 72를 수득한다 (1.03 g, 2.38 mmol; 48%): mp. 110-115℃; MS(ESI+): m/z = 433 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.72 분 (시스템 1).
스테이지 72.1: 2-(3-클로로-페닐)-3-옥소-부티로니트리릴
355 ㎖의 에탄올을 N2 하에서 55℃로 가열한다. 이 용액에 30 분 이내에 나트륨 (3.91 g; 0.17 mol)을 첨가하고, 모든 금속이 용해될 때까지 1.5 시간 동안 교반한다. 3-클로로벤질 시아나이드 (15.31 g; 0.1 mol) 및 에틸 아세테이트 (28.53 ㎖; 0.29 mol)를 무색 용액에 첨가하고, 이어서 5 시간 동안 환류하에 교반한다. 반응이 완료된 후에, 황색 혼합물을 RT로 냉각시키고, 감압 하에서 증발시킨다. 조물질을 물 (200 ㎖)에 녹이고, 25 g의 시트르산을 첨가하여 중화시킨다. 수층을 CH2Cl2 (2×250 ㎖)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (2×150 ㎖)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압하에서 농축시키고, 크로마토그라피 (실리카겔, 1 ㎏, Merck 60 (0.040-0.063), EtOAc/헥산 1:1로 용출시킴)하여 황색 결정으로서 표제화합물 72.1을 수득한다 (9.7 g, 0.05 mol; 50%); mp. 92-97℃; MS(ESI+): m/z = 302.9 (M+H)+; HPLC: AtRet = 5.67 분 (시스템 1).
스테이지 72.2 4-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-1H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 실시예 24, 스테이지 24.1-24.3에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 73
6-(3- 클로로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 1; 스테이지 1.2) 및 2-(3-클로로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 73, 스테이지 73.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 베이지색 결정; mp. 113-115℃; MS(ESI+): m/z = 433 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.56 분 (시스템 1).
실시예 74
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-[2- 메톡시 -5-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민 및 2-(3-클로로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 72, 스테이지 72.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 베이지색 결정; mp. 116-121℃; MS(ESI+): m/z = 463 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.68 분 (시스템 1).
스테이지 74.1: 4-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 5-브로모-2-메톡시-페닐아세토니트릴 및 N-메틸피페라진을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2; 스테이지 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 포움; MS(ESI+): m/z = 288.2 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.53 분 (시스템 2).
실시예 75
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-[2- 메톡시 -4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[2-메톡시-4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민 및 2-(3-클로로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 72, 스테이지 72.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 베이지색 결정; mp. 215-217℃; MS(ESI+): m/z = 463 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.63 분 (시스템 1).
스테이지 75.1: 4-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 4-브로모-2-메톡시-페닐아세토니트릴 및 N-메틸피페라진을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2; 스테이지 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 녹갈색 결정; MS(ESI+): m/z = 288.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.40 분 (시스템 2).
실시예 76
3-{7-아미노-3-[2- 메톡시 -4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -6-일}-페놀
표제화합물은 6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민을 메탄올에 용해시키고, 이것을 실시예 1에 기술된 바와 같이 Pd/C의 존재 하에서 촉매적 수소화시킴으로써 제조된다. 베이지색 결정; mp. 217-220℃; MS(ESI+): m/z = 431.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 2.65 분 (시스템 1).
스테이지 76.1: 6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민
표제화합물은 4-브로모-2-메톡시-페닐아세토니트릴 및 N-메틸피페라진을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2; 스테이지 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 고체; MS(ESI+): m/z = 521 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.38 분 (시스템 2).
실시예 77
6-(2- 클로로 - 페닐 )-3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민 및 (Z)-2-(2-클로로-페닐)-3-디메틸아미노-아크릴로니트릴을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 고체; mp. 197-200℃; MS(ESI+): m/z = 419 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.33 분 (시스템 1).
스테이지 77.1: (Z)-2-(2-클로로-페닐)-3-디메틸아미노-아크릴로니트릴
N,N-디메틸포름아미드-디메틸아세탈 (9.06 ㎖, 64.3 mmol) 및 2-클로로벤질시아나이드 (1.95 g, 12.86 mmol)를 아르곤의 대기 하에 교반하면서 100℃로 가열한다. RT로 냉각시킨 후에, 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 크로마토그라피 (실리카겔, 120 g RediSep, ISCO Sg-100, EtOAc/헥산 1:1로 용출시킴)에 의해서 정제하여 황색의 농후한 오일로서 표제화합물을 수득한다 (2.44 g, 11.8 mmol; 92%); MS(ESI+): m/z = 207 (M+H)+; TLC (EtOAc/헥산 1:1) Rf = 0.38.
실시예 78
6-(2- 클로로 - 페닐 )-3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 (Z)-2-(2-클로로-페닐)-3-디메틸아미노-아크릴로니트릴 (실시예 77, 스테이지 77.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 결정; mp. 200-203℃; MS(ESI+): m/z = 419.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.65 분 (시스템 1).
실시예 79
6-(4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[4-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민 및 2-(4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 289-291℃; MS(ESI+): m/z = 417.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.21 분 (시스템 1).
스테이지 79.1: 2-(4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴
표제화합물은 (4-플루오로-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 72, 스테이지 72.1에 기술된 바와 같이 제조된다. 베이지색 결정; mp. 77-83℃; MS(ESI+): m/z = 176.9 (M+H)+; HPLC: AtRet = 5.15 분 (시스템 1).
실시예 80
6-(4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 2-(4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 79, 스테이지 79.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 204-206℃; MS(ESI+): m/z = 417.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.34 분 (시스템 1).
실시예 81
6-(3- 클로로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-{3-[4-(1- 메틸 -피페리딘-4-일)-피페라진-1-일]- 페닐 }- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-{3-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피페라진-1-일]-페닐}-2H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 베이지색 결정; mp. 180-185℃; MS(ESI+): m/z = 516.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.96 분 (시스템 1).
스테이지 81.1: 4-{3-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피페라진-1-일]-페닐}-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴 및 1-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피페라진을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2; 스테이지 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 결정; mp. 213-220℃; MS(ESI+): m/z = 341.18 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.57 분 (시스템 1).
실시예 82
6-(3- 클로로 -4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 2-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 224-226℃; MS(ESI+): m/z = 451 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.86 분 (시스템 1).
스테이지 82.1: 2-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴
표제화합물은 (3-클로로-4-플루오로-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 72, 스테이지 72.1에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 133-134℃; MS(ESI_): m/z = 209.9 (M-H)_; HPLC: AtRet = 5.79 분 (시스템 1).
실시예 83
6-(3- 클로로 -4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[4-[4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민 및 2-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 82; 스테이지 82.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 264-265℃; MS(ESI+): m/z = 451 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.72 분 (시스템 1).
실시예 84
6-(3- 브로모 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 2-(3-브로모-페닐)-3-옥소-부티로니트릴을 대신 사용하여 실시예 72, 스테이지 72.1에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 107-113℃; MS(ESI+): m/z = 477 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.90 분 (시스템 1).
스테이지 84.1: 2-(3-브로모-페닐)-3-옥소-부티로니트릴
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 72, 스테이지 72.1에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 96-100℃; MS(ESI_): m/z = 235.9 (M-H)_; HPLC: AtRet = 5.76 분 (시스템 1).
실시예 85
6-(3- 브로모 -벤질)-3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 3-(3-브로모-페닐)-2-포르밀-프로피오니트릴을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 170-171℃; MS(ESI+): m/z = 477.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.84 분 (시스템 1).
스테이지 85.1: 3-(3-브로모-페닐)-2-포르밀-프로피오니트릴
3-(3-브로모페닐)프로피오니트릴 (0.703 ㎖; 4.66 mmol) 및 에틸 포르메이트 (1.499 ㎖; 18.64 mmol)를 무수 THF (12.5 ㎖)에 용해시키고, 이어서 RT에서 NaH (광유 중의 60%; 670 ㎎)를 첨가한다. RT에서 17 시간 후에, 추가의 NaH (448 ㎎) 및 에틸 포르메이트 (0.765 ㎖)를 첨가한다. 이에 의해서 강력한 발열반응이 일어나기 때문에, 추가의 용매를 첨가한다 (THF 15 ㎖). 완료 (3 일)된 후에, 반응혼합물을 0℃로 냉각시키고, 소량의 작은 각빙 (ice cube)으로 처리하고, 이어서 6 N HCl (3 ㎖)을 첨가하여 혼합물을 산성화시킨다. 물 (50 ㎖)을 첨가한 후에, 혼합물을 EtOAc (3×100 ㎖)로 추출한다. 유기상을 합하여 H2O (50 ㎖, 2×), 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 감압 하에서 농축시키고, 크로마토그라피 (실리카겔, 40 g RediSep, ISCO Sg-100, EtOAc/헥산 1:1로 용출시킴)하여 갈색 오일로서 표제화합물을 수득한다 (220 ㎎; 20%); MS(ESI-): m/z = 235.9 (M-H)_; TLC (EtOAc/헥산 1:1) Rf = 0.28.
실시예 86
6-(3- 브로모 - 페닐 )-3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 (Z)-2-(3-브로모-페닐)-3-디메틸아미노-아크릴로니트릴을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 195.3-197.2℃; MS(ESI+): m/z = 463.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.05 분 (시스템 1).
스테이지 86.1: (Z)-2-(3-브로모-페닐)-3-디메틸아미노-아크릴로니트릴은 실시예 77, 스테이지 77.1에 기술된 바와 같이 제조된다: 황금갈색 결정; mp. 102-105℃; MS(ESI+): m/z = 251.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 6.45 분 (시스템 1).
실시예 87
6-(3- 클로로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-(3-모르폴린-4-일- 페닐 )- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3-모르폴린-4-일-페닐)-2H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 결정; mp. 165-167℃; MS(ESI+): m/z = 420 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.49 분 (시스템 1).
스테이지 87.1: 4-(3-모르폴린-4-일-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴 및 모르폴린을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2; 스테이지 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 결정; mp. 166-168℃; MS(ESI+): m/z = 245.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 1.79 분 (시스템 1).
실시예 88
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-(4- 메톡시 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(4-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 171-172℃; MS(ESI+): m/z = 365 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.96 분 (시스템 1).
스테이지 88.1: 4-(4-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (4-메톡시-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.4 및 1.2)에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 198-201℃; MS(ESI+): m/z = 190 (M+H)+; HPLC: AtRet = 2.85 분 (시스템 1).
실시예 89
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-[3-((2R,6S)-2,6-디메틸-모르폴린-4-일)- 페닐 ]-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[3-((2R,6S)-2,6-디메틸-모르폴린-4-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 165-167℃; MS(ESI+): m/z = 448 (M+H)+; HPLC: AtRet = 5.14 분 (시스템 1).
스테이지 89.1: 4-[3-((2R,6S)-2,6-디메틸-모르폴린-4-일)-페닐]-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴 및 (2R,6S)-2,6-디메틸-모르폴린을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2; 스테이지 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 158-160℃; MS(ESI+): m/z = 273.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.02 분 (시스템 1).
실시예 90
2-(4-{3-[7-아미노-6-(3- 클로로 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -3-일]- 페닐 }-피페라진-1-일)-에탄올
표제화합물은 2-{4-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페라진-1-일]-에탄올을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 결정; mp. 108-116℃; MS(ESI+): m/z = 463 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.62 분 (시스템 1).
스테이지 90.1: 2-{4-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페라진-1-일}-에탄올
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴 및 2-피페라진-1-일-에탄올을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2; 스테이지 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 포움; mp. 40-48℃; MS(ESI+): m/z = 288.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.45 분 (시스템 1).
실시예 91
6-벤질-3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 2-포르밀-3-페닐-프로피오니트릴 (실시예 23; 스테이지 23.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 결정; mp. 72-75℃; MS(ESI+): m/z = 399.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.30 분 (시스템 1).
실시예 92
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-(3,4- 디메톡시 - 페닐 )-5- 플루오로메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3,4-디메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 93; 스테이지 93.1) 및 2-(3-클로로-페닐)-4-플루오로-3-옥소-부티로니트릴을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 결정; mp. 228-230℃; MS(ESI+): m/z = 413 (M+H)+; HPLC: AtRet = 6.65 분 (시스템 1).
스테이지 92.1: 2-(3-클로로-페닐)-4-플루오로-3-옥소-부티로니트릴
표제화합물은 플루오로-아세트산 에틸 에스테르를 대신 사용하여 실시예 72, 스테이지 72.1에 기술된 바와 같이 제조된다. 베이지색 결정; mp. 90-96℃; MS(ESI_): m/z = 209.9 (M-H)_; HPLC: AtRet = 5.66 분 (시스템 1).
실시예 93
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-(3,4- 디메톡시 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3,4-디메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 고체; mp. 223-226℃; MS(ESI+): m/z = 395.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.69 분 (시스템 1).
스테이지 93.1: 4-(3,4-디메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (3,4-디메톡시-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.4 및 1.2)에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 143-146℃; MS(ESI+): m/z = 220.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 2.28 분 (시스템 1).
실시예 94
6-(3- 클로로 -4- 플루오로 - 페닐 )-3-(3,4- 디메톡시 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3,4-디메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 93; 스테이지 93.1) 및 2-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 82; 스테이지 82.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 고체; mp. 235-238℃; MS(ESI+): m/z = 413.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.83 분 (시스템 1).
실시예 95
6-(3- 클로로 -4- 플루오로 - 페닐 )-3-(4- 메톡시 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(4-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 88; 스테이지 82.1) 및 2-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 82; 스테이지 82.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 224-227℃; MS(ESI+): m/z = 383 (M+H)+; HPLC: AtRet = 5.08 분 (시스템 1).
실시예 96
6-(4- 플루오로 - 페닐 )-3-(4- 메톡시 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(4-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 88, 스테이지 88.1) 및 2-(4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 79; 스테이지 79.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 243-244℃; MS(ESI+): m/z = 349.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.56 분 (시스템 1).
실시예 97
2-(4-{3-[7-아미노-6-(4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -3-일]- 페닐 }-피페라진-1-일)-에탄올
표제화합물은 2-{4-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페라진-1-일}-에탄올 (실시예 90, 스테이지 90.1) 및 2-(4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 79; 스테이지 79.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 결정; mp. 209-212℃; MS(ESI+): m/z = 447.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.24 분 (시스템 1).
실시예 98
6-(3,4- 디플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 메틸 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 2-(3,4-디플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 고체; mp. 216-219℃; MS(ESI+): m/z = 435 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.30 분 (시스템 1).
스테이지 98.1: 2-(3,4-디플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴
표제화합물은 (3,4-디플루오로-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.4 및 1.2)에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 147-152℃; MS(ESI+): m/z = 195 (M+H)+; HPLC: AtRet = 5.39 분 (시스템 1).
실시예 99
6-(3,4- 디플루오로 - 페닐 )-3-(3,4- 디메톡시 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3,4-디메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 93; 스테이지 93.1) 및 2-(3,4-디플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 98; 스테이지 98.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 고체; mp. 230-235℃; MS(ESI+): m/z = 397.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.53 분 (시스템 1).
실시예 100
2-(4-{3-[7-아미노-6-(3- 클로로 -4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -3-일]- 페닐 }-피페라진-1-일)-에탄올
표제화합물은 2-{4-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페라진-1-일}-에탄올 (실시예 90, 스테이지 90.1) 및 2-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 82; 스테이지 82.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 결정; mp. 104-107℃; MS(ESI+): m/z = 481 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.00 분 (시스템 1).
실시예 101
2-(4-{3-[7-아미노-6-(3,4- 디플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -3-일]- 페닐 }-피페라진-1-일)-에탄올
표제화합물은 2-{4-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페라진-1-일}-에탄올 (실시예 90, 스테이지 90.1) 및 2-(3,4-디플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 98; 스테이지 98.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 회백색 결정; mp. 172-174℃; MS(ESI+): m/z = 465 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.71 분 (시스템 1).
실시예 102
6-(3- 클로로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 피롤리딘 -1-일-피페리딘-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[3-(4-피롤리딘-1-일-피페리딘-1-일)-페닐]-1H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 결정; mp. 188-193℃; MS(ESI+): m/z = 487.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.21 분 (시스템 1).
스테이지 102.1: 4-[3-(4-피롤리딘-1-일-피페리딘-1-일)-페닐]-1H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴 및 4-피롤리딘-1-일-피페리딘을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2 및 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 황색 결정; mp. 214-216℃; MS(ESI+): m/z = 312.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.71 분 (시스템 1).
실시예 103
6-(4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 피롤리딘 -1-일-피페리딘-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-[3-(4-피롤리딘-1-일-피페리딘-1-일)-페닐]-1H-피라졸-3-일아민 )실시예 102; 스테이지 102.1) 및 2-(4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 79; 스테이지 79.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 244-249℃; MS(ESI+): m/z = 471.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.82 분 (시스템 1).
실시예 104
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-[3-(4- 디에틸아미노 -피페리딘-1-일)- 페닐 ]-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 {1-[3-(3-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페리딘-4-일}-디에틸-아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 163-168℃; MS(ESI+): m/z = 489.0 (M+H)+; HPLC: AtRet = 4.02 분 (시스템 1).
스테이지 104.1: {1-[3-(3-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페리딘-4-일}-디에틸-아민
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴 및 디에틸-피페리딘-4-일-아민을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2 및 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다. 베이지색 고체; 무정형; MS(ESI+): m/z = 314.2 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.75 분 (시스템 1).
실시예 105
3-[3-(4- 디에틸아미노 -피페리딘-1-일)- 페닐 ]-6-(4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 {1-[3-(3-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페리딘-4-일}-디에틸-아민 (실시예 104, 스테이지 104.1) 및 2-(4-플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 79; 스테이지 79.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다. 백색 결정; mp. 208-210℃; MS(ESI+): m/z = 473.1 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.63 분 (시스템 1).
실시예 106
6-(4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 메틸 -4- 옥시 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민 (실시예 80)(50 ㎎; 0.12 mmol)을 CH2Cl2 (10 ㎖)에 용해시키고, 0℃에서 1 시간 동안, 3-클로로벤조산 (31.1 ㎎; 0.126 mmol)으로 처리하고, 이어서 RT에서 2 시간 동안 교반한다. 감압 하에서 용매를 제거한 후에 조혼합물을 크로마토그라피 (실리카겔, 12 g RediSep, ISCO Sg-100 CH2Cl2/MeOH/NH3 = 80:20:1)에 의해서 정제하여 베이지색 결정으로서 표제화합물을 수득한다 (44 ㎎); mp. 210-223℃; MS(ESI+): m/z = 449 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.31 분 (시스템 1).
실시예 107
6-(4- 플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-[3-(4- 메틸 -1,4- 디옥시 -피페라진-1-일)- 페닐 ]- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 실시예 106에 기술된 동일한 반응으로부터 분리된다: 베이지색 결정 (20 ㎎); mp. 161-169℃; MS(ESI+): m/z = 433 (M+H)+; HPLC: AtRet = 3.89 분 (시스템 1).
실시예 108
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-[3-(4-디메틸아미노-피페리딘-1-일)- 페닐 ]-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 {1-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페리딘-4-일}-디메틸-아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다.
스테이지 108.1: {1-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페리딘-4-일}-디메틸-아민
표제화합물은 (3-브로모-페닐)-아세토니트릴 및 디메틸-피페리딘-4-일-아민을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.2 및 1.4 및 1.5)에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 109
6-(3,4- 디플루오로 - 페닐 )-3-[3-(4-디메틸아미노-피페리딘-1-일)- 페닐 ]-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 {1-[3-(5-아미노-1H-피라졸-4-일)-페닐]-피페리딘-4-일}-디메틸-아민 (실시예 108; 스테이지 108.1) 및 2-(3,4-디플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 98; 스테이지 98.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 110
6-(3- 클로로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-(3,4,5- 트리메톡시 - 페닐 )- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3,4,5-트리메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다.
스테이지 110.1: 4-(3,4,5-트리메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (3,4,5-트리메톡시-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.4 및 1.2)에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 111
6-(3,4- 디플루오로 - 페닐 )-5- 메틸 -3-(3,4,5- 트리메톡시 - 페닐 )- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3,4,5-트리메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 110; 스테이지 110.1) 및 2-(3,4-디플루오로-페닐)-3-옥소-부티로니트릴 (실시예 98; 스테이지 98.1)을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 112
6-(3- 클로로 - 페닐 )-3-(3- 메톡시 - 페닐 )-5- 메틸 - 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민을 대신 사용하여 실시예 72에 기술된 바와 같이 제조된다.
스테이지 112.1: 4-(3-메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민
표제화합물은 (3-메톡시-페닐)-아세토니트릴을 대신 사용하여 실시예 1 (스테이지 1.4 및 1.2)에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 113
6-[7-아미노-3-(3,4- 디메톡시 - 페닐 )- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -6-일]-피리딘-2-올
표제화합물은 2-(6-하이드록시-피리딘-2-일)-3-옥소-프로피오니트릴 및 4-(3,4-디메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 93; 스테이지 96.1)을 대신 사용하여 실시예 1에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 114
6-벤질-3-(3,4- 디메톡시 - 페닐 )- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 4-(3,4-디메톡시-페닐)-2H-피라졸-3-일아민 (실시예 93; 스테이지 93.1)을 대신 사용하여 실시예 93에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 115
3-(3,4- 디메톡시 - 페닐 )-6-(3- 플루오로 -벤질)- 피라졸로[1,5-a]피리미딘 -7- 일아민
표제화합물은 2-(3-플루오로-벤질)-3-옥소-프로피오니트릴을 대신 사용하여 실시예 114에 기술된 바와 같이 제조된다.
실시예 116
화학식 I의 화합물을 포함하는 정제 1
약제학적 조성물 내에 활성성분으로서 50 ㎎의 전술한 실시예 1-115에 언급된 화학식 I의 화합물 중의 어느 하나를 포함하는 정제는 통상적인 방법을 사용하여 제조된다.
조성:
활성성분 50 ㎎
밀전분 60 ㎎
락토즈 50 ㎎
콜로이드성 실리카 5 ㎎
탈크 9 ㎎
마그네슘 스테아레이트 1 ㎎
175 ㎎
제조: 활성성분을 밀전분, 락토즈 및 콜로이드성 실리카의 일부분과 배합시키고, 혼합물을 체를 통과시킨다. 밀전분의 나머지 부분을 수욕 상에서 5-배량의 물과 혼합시켜 페이스트를 형성시키고, 처음에 만든 혼합물을 약하게 가소성인 매스가 형성될 때까지 이 페이스트와 함께 반죽한다.
건조 과립을 3 ㎜의 메쉬 크기를 갖는 체를 통과시키고, 나머지 옥수수 전분, 마그네슘 스테아레이트 및 탈크의 미리 체질한 혼합물 (1 ㎜ 체)과 혼합시키고, 압축시켜 양쪽이 볼록한 정제를 형성시킨다.
실시예 117
화학식 I의 화합물을 포함하는 정제 2
활성성분으로서 100 ㎎의 전술한 실시예 1-115에 언급된 화학식 I의 화합물 중의 어느 하나를 포함하는 정제는 다음의 조성으로 표준 방법을 사용하여 제조된다.
조성:
활성성분 100 ㎎
결정성 락토즈 240 ㎎
아비셀 80 ㎎
PVPPXL 20 ㎎
에어로실 2 ㎎
마그네슘 스테아레이트 5 ㎎
447 ㎎
제조: 활성성분을 캐리어 물질과 혼합시키고 정제화기 (Korsch EKO, Stempeldurchmesser 10 ㎜)를 이용하여 압축시킨다.
실시예 118
캅셀제
활성성분으로서 100 ㎎의 전술한 실시예 1-115에 언급된 화학식 I의 화합물 중의 어느 하나를 포함하는 이하의 조성의 캅셀제는 표준 방법을 사용하여 제조된다.
조성:
활성성분 100 ㎎
아비셀 200 ㎎
PVPPXL 15 ㎎
에어로실 2 ㎎
마그네슘 스테아레이트 1.5 ㎎
318.5 ㎎
제조는 성분들을 혼합시키고, 1호 크기의 경질 젤라틴 캅셀에 충진함으로써 수행된다.
실시예 119
본 발명의 화합물에 의한 키나제 억제
이하의 화학식 I의 화합물의 시험화합물과 함께 상술한 시험방법을 사용한 전술한 실시예의 화합물의 활성측정은 표 4에 나타낸 이하의 키나제에 대한 활성을 나타낸다 ("x"는 해당 키나제에 대한 활성을 나타낸다). 본 명세서에서 사용된 것으로 "활성"은 10 μM 또는 그 미만의 키나제 억제에 대한 IC50 값을 갖는 것으로 정의된다.

Claims (14)

  1. 단백질 키나제 의존성 질환을 치료하기 위한 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용도:
    [화학식 I]
    상기 식에서,
    R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기이며;
    R3는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 치환되거나 비치환된 지방족 잔기; 작용기; 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 치환되거나 비치환된 지방족 잔기일 수 있고;
    R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며;
    A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴 또는 치환되거나 비치환된 헤테로아릴이고;
    R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬이다.
  2. 제 1 항에 있어서, 단백질 키나제 의존성 질환을 치료하기 위한,
    R2가 H; 저급 알킬; 사이클로알킬; 벤질; 벤조 티에닐, 저급 알킬에 의해서 치환된 인딜, 임의로 저급 알킬에 의해서 치환된 피리딜 또는 티아졸릴; 비치환된 페닐 또는 할로, 하이드록시, 알콕시, 벤질옥시, 사이클로알킬, 아미노, 아세틸 아미노, 저급 알킬 설폰아미드, 및 하나 또는 두개의 할로에 의해서 치환된 벤젠 설폰아미드로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 두개의 치환체에 의해서 치환된 페닐이고;
    R3는 H; 할로에 의해서 임의로 치환된 저급 알킬; 페닐, 피리딜 또는 옥사졸릴이며;
    A는 (a) H; 할로; 벤조티에닐; 피리딜; 메틸 피페라지닐 페녹실; 저급 알킬에 의해서 치환된 인돌릴; (b) 모노-, 디- 또는 트리-저급 알콕시, 디-저급 알킬아미닐, 임의로 알킬에 의해서 이치환된 모르폴리닐, 및 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬 피페라지닐, 피롤리디닐, 디알킬 아미닐 및 저급 알칸올로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환된 피페라지닐로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환된 페닐이고; R1은 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  3. 제 1 항 또는 2 항에 있어서, 키나제 의존성 질환이 c-Abl, Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-1, Flt-3, Her-1, KDR, PDGFR-키나제, c-Src, RET-수용체 키나제, FGF-R1, FGF-R2, FGF-R3, FGF-R4, 에프린 수용체 키나제 (예를 들어, EphB2 키나제, EphB4 키나제 및 관련된 Eph 키나제), 카제인 키나제 (CK-1, CK-2, G-CK), Pak, ALK, ZAP70, Jak1, Jak2, Ax1, Cdk1, cdk4, cdk5, Met, FAK, Pyk2, Syk, 인슐린 수용체 키나제, Tie-2, 또는 Bcr-Abl, c-Kit, c-Raf, Flt-3, FGF-R3, PDGF-수용체, RET 및 Met와 같은 키나제 (활성화 키나제)의 구성적 활성화 돌연변이체에 대해서 의존적인 질환, 및 (특히 이상하게 고도로 발현되거나 활성화된) 키나제-의존성 질환 또는 키나제 경로의 활성화에 대해서 의존적인 질환, 또는 상기 언급된 키나제 중의 두개 또는 그 이상의 것에 대해서 의존적인 질환인 용도.
  4. 제 1 항 내지 3 항 중의 어느 한 항에 있어서, 키나제 의존성 질환이 c-abl, Flt-3, KDR, c-Src, RET, EphB4, c-kit, cdk1, FGFR-1, c-raf, Her-1, Ins-R 또는 Tek에 대해서 의존적인 질환인 용도.
  5. 제 1 항 내지 4 항 중의 어느 한 항에 있어서, 치료할 질환이 증식성 질환, 바람직하게는 양성 또는 특히 악성 종양, 더욱 바람직하게는 뇌, 신장, 간, 부신, 방광, 유방, 위 (특히 위종양), 난소, 결장, 직장, 전립선, 췌장, 폐, 질, 갑상선의 암, 육종, 교아종, 다발성 골수종 또는 위장관암, 특히 결장암, 결장직장선종, 또는 두경부의 종양, 표피 과증식증, 특히 건선, 전립선 비대증, 특히 상피 특성의 이상증식, 바람직하게는 유방암, 또는 백혈병인 용도.
  6. 제 1 항 내지 5 항 중의 어느 한 항에 있어서, 치료할 질환이 건선; 카포시 육종; 재발협착증, 예를 들어, 스텐트-유도된 재발협착증; 자궁내막증식증; 크론병; 호지킨병; 백혈병; 류마티스성 관절염과 같은 관절염; 혈관종; 혈관섬유종; 당뇨병성 망막증 및 혈관신생성 녹내장과 같은 안질환; 사구체신염과 같은 신장 질환; 당뇨병성 신장병; 악성 신경화증; 혈전성 미소혈관증 증후군; 이식 거부반응 및 신사구체병증; 간의 경화증과 같은 섬유성 질환; 사구체간질성 세포-증식성 질환; 동맥경화증; 신경조직의 손상과 같이 지속적인 혈관형성에 의해서 유발되는 것이며; 풍선 카테터 치료 후의 혈관의 재폐색을 억제하기 위하여, 혈관 보철물에서 사용하기 위하여, 또는 예를 들어, 스텐트와 같이 혈관 개방을 유지시키기 위한 기계적 장치를 삽입한 후에, 면역억제제로서, 반흔이 없는 창상 치유의 보조제로서, 및 검버섯 및 접촉성 피부염을 치료하기 위한 용도.
  7. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 I]
    상기 식에서,
    R2는 H; 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 지방족 잔기; 작용기; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 지방족 잔기이며;
    R3는 H, 치환되거나 비치환된 아릴, 헤테로아릴, 지방족 잔기, 작용기, 또는 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결될 수 있는 지방족 잔기일 수 있고;
    R2 및 R3 중의 적어도 하나는 치환되거나 비치환된 아릴; 치환되거나 비치환된 헤테로아릴; 또는 하나의 연결기 또는 원자에 의해서 피라졸로[1,5a]피리미디닐 환에 연결된 치환되거나 비치환된 헤테로아릴 또는 치환되거나 비치환된 아릴 잔기이며, 단 R2 및 A 둘 다는 둘 다 비치환된 페닐일 수는 없으며;
    A는 H, 할로겐 (예를 들어, 브로모), 지방족 부위, 작용기, 치환되거나 비치환된 아릴 또는 헤테로아릴이고;
    R1은 H, 할로겐 또는 저급 알킬이다.
  8. 제 7 항에 있어서, R2가 H; 저급 알킬; 사이클로알킬; 벤질; 벤조 티에닐, 저급 알킬에 의해서 치환된 인딜, 임의로 저급 알킬에 의해서 치환된 피리딜 또는 티아졸릴; 비치환된 페닐 또는 할로, 하이드록시, 알콕시, 벤질옥시, 사이클로알킬, 아미노, 아세틸 아미노, 저급 알킬 설폰아미드, 및 하나 또는 두개의 할로에 의해서 치환된 벤젠 설폰아미드로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 두개의 치환체에 의해서 치환된 페닐이고; R3는 H; 할로에 의해서 임의로 치환된 저급 알킬; 페닐, 피리딜 또는 옥사졸릴이며; A는 (a) H; 할로; 벤조티에닐; 피리딜; 메틸 피페라지닐 페녹실; 저급 알킬에 의해서 치환된 인돌릴; (b) 모노-, 디- 또는 트리-저급 알콕시, 디-저급 알킬아미닐, 임의로 알킬에 의해서 이치환된 모르폴리닐, 또는 저급 알킬, 저급 알콕시, 저급 알킬 피페라지닐, 피롤리디닐, 디알킬 아미닐 및 저급 알칸올로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환된 피페라지닐로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환된 페닐이고; R1은 H이며; 단 R2 및 A 둘 다는 둘 다 비치환된 페닐은 아닌 화합물.
  9. 하기 화합물들로 구성된 군으로부터 선택되는 화합물:
    3-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일}-페놀;
    6-(3-메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3,5-디메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-클로로-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-5-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    N-{4-[7-아미노-3-(4-디메틸아미노-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페닐}-2,3-디클로로-벤젠설폰아미드;
    4-클로로-벤젠설폰산 4-[7-아미노-3-(4-디메틸아미노-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페닐 에스테르;
    6-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-3-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-브로모-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-브로모-페닐)-5-메틸-3-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(2,6-디클로로-페닐)-3-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-(3-메톡시-페닐)-6-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-브로모-5-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-벤조[b]티오펜-3-일-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-(4-브로모-페닐)-5-페닐-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-티오펜-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-벤조[b]티오펜-3-일-6-(3-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-벤조-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-메톡시-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(2-메톡시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-메톡시-페닐)-3-피리딘-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-{7-아미노-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-{7-아미노-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(2-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    2-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(4-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    4-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(2-벤질옥시-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    2-{7-아미노-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(4-벤질옥시-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    4-{7-아미노-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(2-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    2-{7-아미노-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(4-벤질옥시-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    4-{7-아미노-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(3-벤질옥시-페닐)-3-[1-메틸-1H-인돌-3-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[7-아미노-3-(1-메틸-1H-인돌-3-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페놀;
    3-[7-아미노-3-피리딘-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(3-벤질옥시-페닐)-3-(2-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[7-아미노-3-(2-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-페놀;
    3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-티오펜-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-티오펜-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-피리딘-4-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-아미노-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-아미노-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(2-아미노-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-6-(4-메틸-티아졸-2-일)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-벤조[b]티오펜-3-일-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-벤조[b]티오펜-3-일-3-[4-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-(3-메톡시-페닐)-6-티오펜-3-일-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-벤질옥시-페닐)-3-(3-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[7-아미노-3-(3-메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    (4-{7-아미노-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페닐)-카밤산 에틸 에스테르;
    6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-[2-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-[2-메톡시-4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-{7-아미노-3-[2-메톡시-4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일}-페놀;
    6-(2-클로로-페닐)-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(2-클로로-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-{3-[4-(1-메틸-피페리딘-4-일)-피페라진-1-일]-페닐}-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[4-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-브로모-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-브로모-벤질)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-브로모-페닐)-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-(3-모르폴린-4-일-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-[3-((2R,6S)-2,6-디메틸-모르폴린-4-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    2-(4-{3-[7-아미노-6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
    6-벤질-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-플루오로메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-플루오로-페닐)-3-(4-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    2-(4-{3-[7-아미노-6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
    6-(3,4-디플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3,4-디플루오로-페닐)-3-(3,4-디메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    2-(4-{3-[7-아미노-6-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
    2-(4-{3-[7-아미노-6-(3,4-디플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-일]-페닐}-피페라진-1-일)-에탄올;
    6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-피롤리딘-1-일-피페리딘-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-피롤리딘-1-일-피페리딘-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-[3-(4-디에틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    3-[3-(4-디에틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-4-옥시-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(4-플루오로-페닐)-5-메틸-3-[3-(4-메틸-1,4-디옥시-피페라진-1-일)-페닐]-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-[3-(4-디메틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3,4-디플루오로-페닐)-3-[3-(4-디메틸아미노-피페리딘-1-일)-페닐]-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-5-메틸-3-(3,4,5-트리메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3,4-디플루오로-페닐)-5-메틸-3-(3,4,5-트리메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-(3-클로로-페닐)-3-(3-메톡시-페닐)-5-메틸-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민;
    6-[7-아미노-3-(3,4-디메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-6-일]-피리딘-2-올;
    6-벤질-3-(3,4-디메톡시-페닐)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민; 및
    3-(3,4-디메톡시-페닐)-6-(3-플루오로-벤질)-피라졸로[1,5-a]피리미딘-7-일아민.
  10. 약제학적 조성물 제조 시의 제 7 항 내지 9 항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 용도.
  11. 제 7 항 내지 9 항 중 어느 한 항에 따르는 화합물을 포함하는 약제학적 조성물.
  12. 제 7 항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따르는 화합물 및 약제학적으로 허용되는 캐리어를 포함하는 약제학적 조성물.
  13. 키나제 의존성 질환의 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물 제조 시의 제 1 또는 2 항에 따르는 화합물의 용도.
  14. (a) 니트릴 A-CH2-C≡N을 유기용매의 존재 하에서 에틸 포르메이트와 반응시켜 치환된 3-옥소-프로피오니트릴을 형성시키고,
    (b) 단계 (a)의 치환된 3-옥소-프로피오니트릴을 유기용매 중에서 하이드라진 모노하이드레이트와 축합시켜 화학식 III의 2H-피라졸-3-일아민을 형성시키고,
    (d) 치환된 니트릴을 에탄올레이트 및 포름산 에틸 에스테르의 존재 하에서 포르밀화시켜 화학식 II의 3-옥소-프로피오니트릴을 제조하고,
    (c) 화학식 II의 3-옥소-프로피오니트릴과 화학식 III의 2H-피라졸-3-일아민을 유기용매의 존재 하에서 축합시켜 화학식 I의 화합물을 형성시키는 단계
    를 포함하는, 제 7 항 내지 9 항 중 어느 한 항에 따르는 화합물을 제조하는 방법:
    [화학식 III]
    [화학식 II]
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