JP4754487B2 - グルカゴン様ペプチド（ｇｌｐ）−１化合物またはメラノコルチン４受容体（ｍｃ４）アゴニストペプチドの経口デリバリーのための化合物、方法および製剤 - Google Patents

Description

活性物質デリバリーのための従来の手段は、多くの場合、生物学的、化学的、および物理的な制約により極度に制限されている。通常、これらの制約はデリバリーが起こる環境、デリバリーの標的の環境、または標的自身によって課される。生物学的または化学的な活性物質は、特にこれらの制約に対し脆弱である。生物学的に活性または化学的に活性の薬剤および治療薬の動物へのデリバリーにおいて、物理的および化学的な制約は身体により課される。物理的制約の例は、標的に到達する前に通過する必要のある皮膚および様々な内臓膜であり、化学的制約の例は、ｐＨ値の違い、脂質二重層および分解酵素を含むが、これに限定されるものではない。

これらの制約は、経口デリバリーシステムの設計において特に重要である。多くの生物学的または化学的活性物質の経口デリバリーは、胃腸（ＧＩ）管における様々なｐＨ値、強力な消化酵素、活性物質不浸透性の胃腸膜など、生物学的、化学的および物理的制約がなければ、動物への投与の選択経路になるであろう。多数の物質のうち、一般的に経口投与に適していないのは、例えばカルシトニンおよびインスリン、多糖類、および特にヘパリン、ヘパリノイド、抗生物質およびその他有機物質を含むがこれらに限定されないムコ多糖類のような生物学的または化学的に活性のペプチドである。これらの物質は胃腸管内において酸加水分解、酵素などによって、急速に効力を失うか、あるいは破壊される。

脆弱な薬剤を経口投与するための従来の方法は、人為的に腸壁の浸透性を高める賦形剤またはエンハンサー（例えばレゾルシールおよびポリオキシエチレンオレイルエーテルやｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルなどの非イオン界面活性剤）の同時投与、ならびに酵素分解を抑制する酵素阻害剤（例えば膵臓トリプシン阻害剤、フルオロリン酸ジイソプロピル）の同時投与に依存してきた。

リポソームもまたインスリンおよびヘパリンのための薬物デリバリーシステムであると説明されてきた。例えば、米国特許番号４２３９７５４、パテル（Ｐａｔｅｌ）他（１９７６年）、ＦＥＢＳレター（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ）、６２巻、６０ページ、およびハシモト（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ）他（１９７０年）、日本内分泌学誌（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ Ｊａｐａｎ）、２６巻、３３７ページを参照のこと。

しかしながら、このような薬物デリバリーシステムの広範囲での利用は、次のような理由により妨げられる。（１）当該システムが有毒な量の賦形剤、エンハンサーまたは阻害剤を必要とする。（２）適合する低分子量負荷、すなわち活性物質の入手が困難である。（３）活性物質が安定性の乏しさと不十分な保存寿命を示す。（４）当該システムが製造に困難である。（５）当該システムが活性物質（負荷）の保護をしない。（６）当該システムが活性物質を不利に作り変える。または（７）当該システムが活性物質の吸収を許可または促進しない。

最近になり、混合アミノ酸（プロテイノイド）の人工ポリマーのミクロスフィアが薬物をデリバリーするために使用されるようになった。例えば、米国特許番号４，９２５，６７３は薬物含有プロテイノイドミクロスフィア担体ならびにその調整と使用の方法について記載する。これらのプロテイノイドミクロスフィアは多くの活性物質のデリバリーに有用である。

デリバリー物質分子は、米国特許番号５５４１１５５、５６９３３３８、５９７６５６９、５６４３９５７、５９５５５０３、６１００２９８、５６５０３８６、５８６６５３６、５９６５１２１、５９８９５３９、６００１３４７、６０７１５１０、５８２０８８１および６２４２４９５においても開示されている。また、ＷＯ０２／０２５０９、ＷＯ０１／５１４５４、ＷＯ０１／４４１９９、ＷＯ０１／３２１３０、ＷＯ００／５９８６３、ＷＯ００／５０３８６、ＷＯ００／４７１８８およびＷＯ００／４０２０３を参照のこと。

本発明は式Ｉ：

Ｉ；
［式中、
Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、ＣＦ₃、ハロまたはＮＲ⁴Ｒ^4'であり、
Ｒ³はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｘは、適宜Ｃ₁−Ｃ₄アルキルで置換される五員芳香族ヘテロ環であり、ここで前記ヘテロ環はＮ、ＳおよびＯから選択された少なくとも２つまたは３つのヘテロ原子を含み、ここで少なくともひとつのヘテロ原子はＮでなくてはならず、
ＹはＳ、ＣＲ⁵＝ＮまたはＮ＝ＣＲ⁵であり、
ｎは２、３、４、５、６または７であり、
Ｒ⁴はＨ、ＣＯＲ⁶、ＳＯ₂Ｒ⁷またはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｒ^4'はＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｒ⁵はＨであるか、またはＸとの結合を形成し、
Ｒ⁶はＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｒ⁷はＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルである］
で示される化合物、またはその医薬的な塩に関する。

本発明はさらに式Ｉの化合物に関し、ここでＲ³はＨである。当該化合物については式ＩＩの化合物として後に記述する。

本発明は式ＩＩの化合物またはその医薬的な塩、および医薬的な担体を含む医薬組成物にも関する。

本発明は式ＩＩの化合物またはその医薬的な塩、およびＧＬＰ−１化合物を含む医薬組成物にも関する。

本発明は式ＩＩの化合物またはその医薬的な塩、およびＭＣ４アゴニストペプチドを含む医薬組成物にも関する。

発明の詳述
以下、「式Ｉの化合物」または「式ＩＩの化合物」とは、その医薬的な塩を含む。

本発明の目的のために、ここで開示および請求するとおり、次の用語を以下のように定義する。

「ハロ」という用語はフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを示す。「Ｃ₁−Ｃ₆アルキル」という用語は、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロブチル、ペンチル、シクロペンチル、ヘキシル、シクロヘキシル等、１つから６つの炭素原子を持つ直鎖型、分岐型または環状型炭化水素部分を意味する。シクロブチルメチレンのような部分はＣ₁−Ｃ₆アルキルグループの範囲にも含まれる。「Ｃ₁−Ｃ₄アルキル」という用語は、具体的にメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチルおよびシクロブチルを示す。「Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ」グループは、オキシ連結基によって結合したＣ₁−Ｃ₆アルキル部分である。

「医薬／医薬的な」という用語は、形容詞として使用される場合、被治療患者に対し実質的に有害ではないことを意味する。

「患者」という用語は、ヒトおよびコンパニオンアニマル（イヌ、ネコ、ウマ等）のようなヒト以外の動物を含む。治療における好適な患者はヒトである。

「ＧＬＰ−１化合物」という用語は、ここで使用される場合、１つ以上の天然ＧＬＰ−１ポリペプチド（ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨおよびＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ₂）、ＧＬＰ−１断片、ＧＬＰ−１アナログ、天然ＧＬＰ−１ポリペプチド、ＧＬＰ−１断片またはＧＬＰ−１アナログのＧＬＰ−１誘導体、およびＧＬＰ−１受容体と結合して信号変換経路を開始し、引用により本出願に含まれるＰＣＴ公開番号ＷＯ０３／０７２１９５（出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０３／０３１１１）に記載のインスリン分泌促進作用を示す能力を有するエキセンディン−３とエキセンディン−４を示す。

「ＭＣ４アゴニストペプチド」という用語は、ここで使用される場合、ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０４／１６６２５（２００４年６月１７日出願）において開示されている医薬的に有用なペプチド（そこで開示されている式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩのペプチド）を示す。

式ＩＩの化合物は、前記化合物が活性物質と混合され複合組成物を形成する場合、活性物質、すなわちＧＬＰ−１化合物またはＭＣ４アゴニストペプチドの経口バイオアベイラビリティ上昇に有用である。前記複合は本発明の具体的態様である。本発明の組成物は式ＩＩの化合物、すなわちデリバリー物質（式ＩＩ化合物）およびＧＬＰ−１化合物またはＭＣ４アゴニストペプチドを含む。

本発明は特に、そうしなければ活性物質が目標ゾーン（すなわちデリバリー組成物の活性物質が開放される領域）に到達する前に遭遇する状況により、およびそれが投与される動物の体内において、破壊されるかまたは効果を下げられるＧＬＰ−１化合物またはＭＣ４アゴニストペプチド（活性物質）のデリバリーに好都合である。当該組成物は式ＩＩの化合物を１つ以上含み（１つが好ましく、また最も一般的である）、活性物質は選択された生体系への前記活性物質のデリバリーにおいて、またデリバリー物質を用いない活性物質投与と比較して上昇または改良された活性物質のバイオアベイラビリティにおいて、有用性を有する。ある期間にわたって多くの活性物質をデリバリーすることにより、または特定期間（例えばより迅速もしくは遅延デリバリーのため）あるいはある期間（例えば持続性デリバリー）における活性物質のデリバリーにおいて、デリバリーは改良されることができる。

本発明の好ましい化合物（具体的態様）
本発明のある一部の化合物は特に興味深く好ましい。以下の一覧は好ましい化合物のいくつかのグループを示したものである。一覧の各記載物は、好ましい化合物の追加グループを作成するために他の一覧掲載物と組み合わせ可能であることがわかるであろう。
ｎが２、３、４または５であり、
Ｒ¹およびＲ²がそれぞれ独立にＨ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＣＨ₃、ＣＦ₃、ＣｌまたはＢｒであり、
Ｒ¹およびＲ²がそれぞれ独立にＨ、ＯＨ、ＯＣＨ₃、ＣＨ₃またはＣＦ₃であり、
Ｒ¹およびＲ²がそれぞれ独立にＨ、ＯＨ、ＯＣＨ₃またはＮＨ₂であり、
Ｒ¹がＨ、Ｒ²がＯＨであり、
Ｒ¹およびＲ²がともにＨであり、
Ｒ³がＨであり、
Ｒ⁴がＨであり、
Ｒ⁴がＣＯＲ⁶であり、Ｒ⁶がＣＨ₃であり、
Ｒ⁴がＳＯ₂Ｒ⁷であり、Ｒ⁷がＣＨ₃であり、
Ｒ^4'がＨであり、
Ｒ⁷がＣ₁−Ｃ₆アルキルであり、
Ｘが式：

であり、アリール（ピリジンまたはチオフェン）置換基が４位の炭素原子にて付加しており、アルカン酸鎖が２位の炭素原子にて付加しており、
Ｘが式：

であり、アリール置換基が３位の炭素原子にて付加しており、アルカン酸が５位の炭素原子にて付加している。

調製および実施例
すべての非水系反応は、別段の定めのない限り、窒素の乾燥雰囲気下で実施される。商用の試薬および無水溶媒は業者から配送後直ちに使用され、これらの成分をさらに精製または乾燥させる試みは実施されない。減圧下における溶媒の除去は、テフロン加工のＫＮＦ製真空ポンプを使用し、およそ２８ｍｍＨｇの圧力で、ブッチ（Ｂｕｃｈｉ）製ロータリーエバポレータを用いて実現される。薄層クロマトグラフィーは１”×３”アナルテック（Ａｎａｌｔｅｃｈ）製０２５２１番、ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）製ＭＫ６Ｆ番、またはＥＭサイエンス（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ）（メルク（Ｍｅｒｃｋ））製５７１９−２番蛍光指示薬付シリカゲルプレートを用いて実行される。ＴＬＣプレートの可視化は短波紫外線またはエタノールまたはヨウ素蒸気内での１０％リンモリブデン酸を用いた観察により行われる。フラッシュカラムクロマトグラフィーはキーゼルゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ）シリカゲル６０を使用して行われる。プロトンＮＭＲスペクトルはブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）製ＡＣ３００ＭＨｚ核磁気共鳴装置で得られ、テトラメチルシランを内部基準として使用したｐｐｍδ値で報告される。融点はエレクトロサーマル（Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ）融点観測装置を使用して得られ、訂正されない。ＣＩ質量分光分析は直接噴射による島津製ＱＰ−５０００ＧＣ／質量分析計（メタン）で実行される。ＡＰＩ質量分光分析は電子スプレーイオン化（ＥＳＩ）法または大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）法を使用して、フィネガン（Ｆｉｎｎｅｇａｎ）製ＬＣＱデュオイオントラップ（ＤｕｏＩｏｎＴｒａｐ）またはＰＥＳｃｉｅｘＡＰＩ１５０ＥＸ質量分析計で実行される。ＨＰＬＣ分析はウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）製シンメトリー（Ｓｙｍｍｅｔｒｙ）Ｃ１８、５ｕｍ、ＷＡＴ０４６９８０、３．９×１５０ｍｍカラムを使用して行われる。溶出系は、２０分で９０：１０（Ｈ₂Ｏ中に０．１％ＴＦＡ）／（ＣＨ₃ＣＮ中に０．１％ＴＦＡ）から１０：９０（Ｈ₂Ｏ中に０．１％ＴＦＡ）／（ＣＨ₃ＣＮ中に０．１％ＴＦＡ）になる勾配溶離、続いて１０分間の１０：９０（Ｈ₂Ｏ中に０．１％ＴＦＡ）／（ＣＨ₃ＣＮ中に０．１％ＴＦＡ）定組成溶離、続いて１０分間の９０：１０（Ｈ₂Ｏ中に０．１％ＴＦＡ）／（ＣＨ₃ＣＮ中に０．１％ＴＦＡ）の定組成溶離から構成される。流量は１ｍｌ／分である。紫外検出は２１４ｎｍと２５４ｎｍの両方で実施される。

調製１
６−オキソ−６−［Ｎ’−（ピリジン−２−カルボニル）ヒドラジノ］ヘキサン酸メチルエステル

２−ピコリニルヒドラジド溶媒（８．０５ｇ、５８．８ｍｍｏｌ）とアシビン酸モチノメル塩化物（１０．５ｇ、５８．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１１７ｍｌ）で溶解し窒素下、室温で１２時間攪拌する。減圧下において溶媒を除去する。ジチエルエーテル（３００ｍｌ）で残留物を粉砕し、濾過により固形物を収集し、水（２００ｍｌ）で溶解し、酢酸エチル（２００ｍｌ）で洗浄する。飽和ＮａＨＣＯ₃溶媒を用いてｐＨ値を８に調整し、酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）で抽出する。結合した有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去すると、６−オキソ−６−［Ｎ’−（ピリジン−２−カルボニル）ヒドラジノ］ヘキサン酸メチルエステル（３．８５ｇ、５９％）が得られる。

実施例１
５−（５−ピリジン−２−イル［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ペンタン酸メチルエステル

トリエルアミン（１４．４ｍｌ、１０４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３５ｍｌ）中の６−オキソ−６−［Ｎ’−（ピリジン−２−カルボニル）ヒドラジノ］ヘキサン酸メチルエステル（９．６３ｇ、３４ｍｍｏｌ）、四塩化炭素（２６．６ｇ、１７２ｍｍｏｌ）およびトリフェルホスフィン（２０．３ｇ、７８ｍｍｏｌ）の混合物に加え、窒素下、室温で３０分間撹拌する。濾過により固形物を除去し、減圧下で濾過液を除去する。水（５００ｍｌ）で残留物を希釈し、酢酸エチル（３ｘ５００ｍｌ）で抽出する。結合した有機抽出物を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去する。酢酸エチルで残留物を粉砕し、濾過によって収集すると、５−（５−ピリジン−２−イル［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ペンタン酸メチルエステル（８．１５ｇ、９１％）が得られる。

実施例２
５−（５−ピリジン−２−イル［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ペンタン酸
２Ｎ水酸化ナトリウム（２０ｍｌ）をＴＨＦ（６０ｍｌ）およびメタノール（２０ｍｌ）中の５−（５−ピリジン−２−イル［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ペンタン酸メチルエステル（８．１６ｇ、３１ｍｍｏｌ）溶液に窒素下、室温で加え、混合物を１２時間加熱還流する。減圧下で溶媒を除去し、残留物を水（５００ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（２００ｍｌ）で洗浄する。濃縮ＨＣｌを用いて水層のｐＨ値を３に調整し、酢酸エチル（３ｘ２００ｍｌ）で抽出する。結合した有機抽出物を塩水（２００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去すると、５−（５−ピリジン−２−イル［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）ペンタン酸（２．０５ｇ、２７％）が得られる。ＡＰＣＩマススペクトルｍ／ｚ２４６［Ｃ₁₂Ｈ₁₃Ｎ₃Ｏ₃＋Ｈ］⁺

実施例３
８−（３−ピリジン−２−イル［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）オクタン酸

２Ｎ水酸化ナトリウム（２０ｍｌ）をメタノール（１００ｍｌ）中のエチル８−（３−ピリジン−２−イル［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）オクタン酸塩に窒素下、室温で加え、混合物を３時間攪拌する。減圧下で溶媒を除去し、残留物を水で希釈し、ジエチルエーテルで洗浄する。２Ｎ Ｈｃｌを用いて水層のｐＨ値を１に調整し、真空濾過によって固形物を収集すると、表題の化合物が得られる。ＡＰＣＩマススペクトル ｍ／ｚ２８８［Ｃ₁₅Ｈ₁₉Ｎ₃Ｏ₃−Ｈ］

調製２
メチル２−オキソ−２−チノフェン−３−イルヘキサンジオアート

水中の重炭酸ナトリウム溶液をメタノール（５０ｍｌ）中のスベリン酸モノメチルエステルに室温で加え、３０分間攪拌する。減圧下で溶媒を除去し、残留物をアセトン中の２−ブロモ−１−チオフェン−３−イルエタノン溶液に窒素下、室温で加える。混合物を１０時間加熱還流後、減圧下で溶媒を除去する。残留物をジエチルエーテルで希釈し、２０分間攪拌し、シリカゲルショートカラムで濾過し、ジエチルエーテルで２回洗浄する。減圧下で溶媒を除去すると、表題の化合物が得られる。

実施例４
メチル５−（４−チオフェン−３−イルオキサゾール−２−イル）ペンタン酸

メチル２−オキソ−２−チオフェン−３−イルヘキサンジオアート、アセトアミドおよび三フッ化ホウ素ジエチルエーテルの混合物を１３５−１４０℃、窒素下で４時間加熱する。混合物を冷却し、飽和ＮａＨＣＯ₃溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機抽出物を飽和水酸化ナトリウム塩化物（塩水）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。減圧下で溶媒を除去し、シリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーを行いヘキサン／酢酸エチルで溶出し、残留物を精製すると表題の化合物が得られる。ＡＰＣＩマススペクトル ｍ／ｚ２６６［Ｃ₁₃Ｈ₁₅ＮＯ₃Ｓ＋Ｈ］⁺

実施例５
５−（４−チオフェン−３−イル−オキサゾール−２−イル）ペンタン酸

水中の水酸化ナトリウム溶液を、エタノール中のメチル５−（４−チオフェン−３−イルオキサゾール−２−イル）吉草酸溶液に室温で加え、混合物を４０℃で２時間加熱する。１Ｎ ＨＣｌで混合物のｐＨ値を２に調整し、酢酸エチルで抽出する。有機抽出物を水で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去する。残留物をヘキサン／酢酸エチルで粉砕し、濾過により固形物を収集すると表題の化合物が得られる。ＡＰＣＩマススペクトル ｍ／ｚ２５２［Ｃ₁₂Ｈ₁₃ＮＯ₃Ｓ＋Ｈ］

実施例６の化合物の調整における説明と同様の処理過程で、下記の表１に記載された化学式ＩＩ（ａ）の化合物、実施例６−１１の調整を行う。

ＩＩ（ａ）
表１： 化学式ＩＩ（ａ）の化合物

調製３
２−ブロモ−１−（３−メトキシ−ピリジン−２−イル）エタノン

水素化ナトリウム（５．９１ｇ、１４７．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（無水、２００ｍｌ）中の急速に攪拌した２−ブロモ−３−ピリジノール溶液に加える。３０分後、ヨードメタン（９．２ｍｌ、１４７．８ｍｍｏｌ）を加え、窒素ガス（Ｎ₂）下で２．５時間攪拌する。水でクエンチし、濃縮する。残留物をＥｔ₂Ｏと水に分配し、層を分離させる。Ｅｔ₂Ｏ（ｘ２）で水層から抽出し、結合層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ濃縮する。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを行い０−２５％Ｅｔ₂Ｏ／ヘキサンで溶出し、残留物を精製すると２−ブロモ−３−メトキシ−ピリジン（２１．０ｇ、８３％）が得られる。

銅（Ｉ）ヨウ化物（３８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を密閉した試験管内の２−ブロモ−３−メトキシ−ピリジン（１８８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、トリブチル（１−エキトシビニル）スズ（０．６８ｍｌ、２．０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（無水、４ｍｌ）の混合物に加える。Ｎ₂を注入し、密閉し、８０℃で３０時間加熱する。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを行い０−３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出し、残留物を精製すると２−（１−エトキシ−ビニル）−３−メトキシ−ピリジン（１５１ｍｇ、８４％）が得られる。

Ｎ−ブロモ−スクシニミド（３０６ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３０ｍｌ）および水（２ｍｌ）中で攪拌した２−（１−エトキシ−ビニル）−３−メトキシ−ピリジン（３０５ｍｇ、１．７ｍｇ）溶液に加える。窒素ガス（Ｎ₂）下、ＲＴで１５分間攪拌する。ＳｉＯ₂に吸着させ、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを行い０−４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出し、残留物を精製すると表題の化合物（２１１ｍｇ、５４％）が得られる。

実施例１２
５−［４−（３−メキトシ−ピリジン−２−イル）オキサゾール−２−イル］ペンタン酸メチルエステル

三フッ化ホウ素エーテル（０．３０ｍｌ、１．００ｍｍｏｌ）を、２−ブロモ−１−（３−メトキシ−ピリジン−２−イル）エタノン（２３１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、５−カルバモイル−ペンタン酸メチルエステル（２２２ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（無水、３ｍｌ）を入れて密閉した試験管に加える。Ｎ₂を注入し、密閉し、８０℃で一晩加熱する。ＮａＨＣＯ₃水溶液と２０％ｉ−ＰｒＯＨ／ＣＨＣｌ₃に分配し、層を分離させる。２０％ｉ−ＰｒＯＨ／ＣＨＣｌ₃（ｘ３）で水層から抽出し、結合層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ濃縮する。ＳｉＯ₂に吸着させ、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを行い１−３％、メタノール／ＣＨＣｌ₃で溶出し、残留物を精製すると表題の化合物（９７ｍｇ、３３％）が得られる。ＭＳ（ＩＳ）２９１（Ｍ＋１）⁺

実施例１３
５−［４−（３−ヒドロキシ−ピリジン−２−イル）オキサゾール−２−イル］ペンタン酸
５−［４−（３−メトキシ−ピリジン−２−イル）オキサゾール−２−イル］ペンタン酸メチルエステルを三フッ化ホウ素で処理し、続いて標準的な加水分解を行うと、表題の化合物が得られる。

製剤
式ＩＩの化合物は塩基性および／または酸性部分（すなわちアミノおよび／またはカルボン酸）を含むことができるため、前記化合物は、医薬的な塩、例えばナトリウム塩または塩酸塩または「医薬的な塩のハンドブック：特性、選択および使用（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ）」ワインハイム（Ｗｅｉｎｈｅｉｍ）、ニューヨーク：ＶＨＣＡ；ワイリーＶＣＨ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ）、２００２年に記載の塩として製剤されることができる。式ＩＩの化合物は、被治療患者に投与される前に、好ましくは容量単位の形態で、すなわち個別のデリバリー媒体、例えばタブレットやカプセルの形で製剤される。従って、本発明のさらにもう１つの具体的態様は、化学式ＩＩの化合物またはその医薬的な塩、活性物質、および医薬的な担体を含む医薬組成物である。

本医薬組成物は、周知であり容易に入手できる材料を用い、既知の手法により調製される。本発明の製剤の製造において、デリバリー物質（式ＩＩ化合物）は活性物質と混合され、通常は担体と混合され、または担体により希釈されるか、カプセル、小袋、紙または他の容器の形態をとる可能性のある担体内に包括される。担体が希釈剤として機能する場合、担体は固体、半固体、または活性材料の媒体、賦形剤、媒介物として作用する液状物質でありうる。

バイオアッセイ手法
デリバリー物質製剤開発
ＧＬＰ−１化合物の経口服用を行うには、一般にそれぞれの製剤はｐＨ範囲を７．４から８．４に設定され、一方でＭＣ４アゴニストペプチドを製剤とするためのｐＨ範囲は一般的に６．８から７．２（最も一般的には７．０）が利用される。両方の場合において、標的デリバリー物質濃度は１５０ｍｇ／ｍｌが代表的である。初期フィージビリティスタディが担体製剤の最終決定のために行われる。

つまり、デリバリー物質２００ｍｇをタイプＩガラスバイアルで計量し、ミリキュー（ＭｉｌｌｉＱ）水１ｍｌを加える。それぞれの混合物の溶解度を視覚的に調べ、続いて溶解度を上げるためにＮａＯＨを追加、またはｐＨ値を経口服用範囲まで下げるためにＨＣｌを追加する。製剤はその後ミリキュー（ＭｉｌｌｉＱ）水で１５０ｍｇ／ｍｌに希釈される。このアプローチを用いて、製剤は一般に３つの範疇に分類される。水溶性、ほとんど完全な可溶性（例えば残留している少数の非溶解粒子、大変純度の高い水性懸濁液または曇った懸濁液）および非水溶性（例えば重懸濁液）である。非水溶性を示すデリバリー物質は、必要に応じ４％ｗ／ｖ（水性）ヒドロキシプロピルセルロース（クルーセル（登録商標）ＬＦ、ヘラクレス、ウィルミントン、ＤＥ）中で製剤される。これらの場合、５０〜１００ｍｇの物質をタイプＩガラスバイアル内のクルーセル（登録商標）ＬＦ中で懸濁し、濃度を２００ｍｇ／ｍｌとする。重水およびクルーセル（登録商標）ＬＦ懸濁液を使用するには、調合液を３分間氷で冷却し、続いてミゾニックス ソニケーター（登録商標）（Ｍｉｓｏｎｉｘ Ｓｏｎｉｃａｔｏｒ（登録商標））（ウルトラソニック プロセッサ ＸＬ（３／１６インチ マイクロチップ）を用い、氷上で３０分間超音波処理を行って、粒径を小さくする。ＮａＯＨまたはＨＣｌでｐＨ調整後、製剤はミリキュー（ＭｉｌｌｉＱ）水またはクルーセル（登録商標）ＬＦで１５０ｍｇ／ｍｌに希釈される。

貯蔵用活性物質溶液の製剤
ここで使用されるＧＬＰ−１化合物（例えばＶａｌ⁸−Ｇｌｕ²²−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨおよびＶａｌ⁸−Ｇｌｕ²²−Ｉ³³−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ）およびＭＣ４アゴニストペプチド（例えばＡｃ−Ａｒｇ−シクロ［Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ］−ＮＨ₂、Ａｃ−シクロ［ｈＣｙｓ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ］−ＮＨ₂、Ａｃ−シクロ［ｈＣｙｓ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ペニシラミン］−ＮＨ₂およびＮ−シクロヘキサンカルボニル−シクロ［ｈＣｙｓ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ペニシラミン］−ＮＨ₂）は、ＰＣＴ特許公開番号ＷＯ０３／０７２１９５およびＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０４／１６６２５（６月１７日出願）にそれぞれ記載されている。

ＧＬＰ−１化合物活性物質の原液は以下のように調整される。つまり、既知の量の凍結乾燥した活性物質をタイプＩガラスバイアルで計量する。その後、ミリキュー（ＭｉｌｌｉＱ）水を加え、最初の濃度をおよそ７〜１０ｍｇ／ｍｌとする。１Ｎ ＮａＯＨと５Ｎ ＮａＯＨで媒介物のｐＨ値をゆっくり１０．５まで上昇させることによってペプチドを完全に溶解させ、続いて室温で３０分間培養する。ｐＨ８．０の１Ｍ トリス緩衝液を大量に加え、２０ｍＭ トリス最終緩衝剤で処理し、１Ｎ ＨＣｌと５Ｎ ＨＣｌでｐＨ値を７．８に調整する。続いて溶媒を低タンパク結合０．２２μＭのシリンジフィルター（マイレクス−ＧＶ、ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）製）により濾過する。ペプチド濾過液の濃度は紫外線分光器（λ_max＝２８０ｎｍ）により測定される。その後溶媒を２０ｍＭトリス緩衝液ｐＨ７．８を使用して、およそ５．０ｍｇ／ｍｌのストック濃度まで希釈する。活性物質溶液は、使用するまで１．０ｍｌに等分して−７０℃で保存する。

ＭＣ４Ｒアゴニストペプチドの貯蔵用溶液は、以下のように調整する。つまり、既知の量の冷凍乾燥したＭＣ４ＲアゴニストペプチドをタイプＩガラスバイアルで計量する。その後、ミリキュー（ＭｉｌｌｉＱ）水を加え、最初の濃度をおよそ１９〜２１ｍｇ／ｍｌとする。１Ｎ ＮａＯＨと５Ｎ ＮａＯＨでｐＨ値を６．０まで上昇させ、続いて室温で３０分間培養する。ペプチド溶液の濃度は、紫外線分光器（ｍａｘ＝２８０ｎｍ、散乱光補正２５０ｎｍ〜４１０ｎｍ適用）により測定される。溶液はその後、濃度およそ２０．０ｍｇ／ｍｌのストックとして保存される。ペプチド溶液は、使用するまで４〜８℃で冷凍保存する。

ラット経口デリバリー方法
これらの調査には、雄のスプレーグ−ドウリィ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）（大腿部動脈にカニューレを挿入、チャールズ・リバー（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）、ウィルミントン、ＭＡ）２５０〜３００ｇのラットを用いる。ラットはひとつのステンレス鋼ケージに収容し、イーライリリーアンドカンパニー（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）アニマルケア・アンド・ユース・ポリシーズ・アンド・プロシージャーズ（Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｐｏｌｉｃｉｅｓ ＆ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）に従って飼育する。ラットは薬剤投与前最低１２時間絶食させておく（水は自由に摂取させる）。それぞれの実験（デリバリー物質＋活性物質）は４個体のラットを１グループとして行う。それぞれのデリバリー物質の最終製剤は生体内投与のおよそ５〜１０分前に新たに調整する。

具体的には、デリバリー物質製剤（〜１６５ｍｇ／ｍｌ貯蔵物）およびＧＬＰ−１化合物活性物質溶液（〜５．０ｍｇ／ｍｌ貯蔵物）を同時に加え、デリバリー物質＋活性物質の混合物を生成する。前述の各製剤の最終的な濃度は、それぞれ１５０ｍｇ／ｍｌおよび０．５ｍｇ／ｍｌである。製剤は経口胃管栄養法（ＰＯ）によって、３００ｍｇ／ｋｇの最後のデリバリー物質および１．０ｍｇ／ｋｇの活性物質が投薬される。全身（大腿部動脈）カニューレを用い、５分、１０分、２０分時点の血液サンプルを各ラットから（各時点ごとに１サンプル）ＥＤＴＡ試験管内に１ｍｌ採集する。試験管は採集後すぐに氷上で冷却し、およそ５℃／３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離機にかける。血漿を除去し、１２×７５ｍｍのスナップキャップ付のポリプロピレン試験管内へ移し、直ちに−７０℃にして放射線免疫アッセイ検査による分析を行うまで保存する。

ＭＣ４アゴニストペプチド活性物質の場合は、デリバリー物質製剤（〜１６５ｍｇ／ｍｌ貯蔵物）およびペプチド溶液（〜２０ｍｇ／ｍｌ貯蔵物）を同時に加え、デリバリー物質＋活性物質の混合物を生成する。前述の各製剤の最終濃度は、それぞれ１５０ｍｇ／ｍｌおよび５．０ｍｇ／ｍｌである。製剤は経口胃管栄養法（ＰＯ）によって、３００ｍｇ／ｋｇの最後のデリバリー物質および１０．０ｍｇ／ｋｇの活性物質が投薬される。全身（大腿部動脈）カニューレを用い、５分、１５分、３０分、６０分、９０分、１２０分時点の血液サンプルを各ラットから（各時点ごとに１サンプル）ヘパリン試験管内に０．４０ｍｌ採集する。試験管は採集後すぐに氷上で冷却し、およそ５℃／３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離機にかける。血漿を除去し、９６ウェルプレートに移し、直ちに−７０℃にしてＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる分析を行うまで保存する。

放射線免疫アッセイ検査および薬物動態解析
ラット血漿中の免疫反応性活性物質の濃度をネイティブな（ｎａｔｉｖｅ）ペプチドおよび代謝産物を非特異的に検出する放射線免疫アッセイ検査により分析する。これらの濃度はその後、報告された薬物動態パラメータを測定するために使用される。血漿サンプルを、放射性同位元素により識別した活性物質およびウサギ多クローン性抗血清と混合し、その後４℃で一晩培養する。結合および遊離形状の免疫反応性活性物質は、ポリエチレングリコール処理した第二次抗体沈殿を使用して結合画分を沈殿することによって分離される。遠心分離により結合画分を収集後、ガンマ線測定装置にて放射能を測定する。データを加重４／５パラメータの論理的アルゴリズムで分析する。ＧＬＰ−１化合物の場合、標準曲線は９．８ｐｇ／ｍｌから１００００ｐｇ／ｍｌの範囲をとり、数量化の上限および下限はそれぞれ１５０ｐｇ／ｍｌおよび４０００ｐｇ／ｍｌである。ＭＣ４アゴニストペプチドの場合、標準曲線は５．０ｎｇ／ｍｌから５０００ｎｇ／ｍｌの範囲をとり、数量化の上限および下限はそれぞれ１０ｎｇおよび５０００ｎｇ／ｍｌである。薬物動態解析はウィンノンリン（商標）（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ^TM）バージョン３．０（ファーサイトコーポレーション（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、マウンテンビュー、ＣＡ）を用いて行われる。血漿濃度の時間データは平均±標準偏差（ＳＤ）で報告される。デリバリー物質の効率は、０分から２０分で測定される血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）として明示される。式ＩＩの代表的な化合物（デリバリー物質）はラット経口デリバリーアッセイにて分析され、デリバリー物質の存在下における活性物質のＡＵＣは、活性物質の非存在下における活性物質のＡＵＣより大きい。

Claims (7)

1. 式Ｉ：
   

   

   Ｉ；
   ［式中、
   Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ独立してＨ、ＯＨ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、ＣＦ₃、ハロまたはＮＲ⁴Ｒ^4'であり；
   Ｒ³はＨ、Ｃ₁−Ｃ₆アルキルであり；
   Ｘは、以下の式：
   

   

   で示される基であり；
   ＹはＳ、ＣＲ⁵＝ＮまたはＮ＝ＣＲ⁵であり；
   ｎは４であり；
   Ｒ⁴はＨ、ＣＯＲ⁶、ＳＯ₂Ｒ⁷またはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり；
   Ｒ^4'はＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり；
   Ｒ⁵はＨであるか、またはＸとの結合を形成し；
   Ｒ⁶はＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルであり；
   Ｒ⁷はＨまたはＣ₁−Ｃ₆アルキルである］
   で示される化合物、またはその医薬的な塩。
2. Ｒ³がＨである、請求項１記載の化合物。
3. Ｘが式：
   

   

   であり；Ｒ³がＨであり、（ＣＨ₂）_nＣＯ₂Ｒ³部分が２の位置にて付加している、請求項１または２記載の化合物、またはその医薬的な塩。
4. ａ）請求項２もしくは３記載の化合物またはその医薬的な塩；およびｂ）Ｖａｌ^８−Ｇｌｕ^２２−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ、Ｖａｌ^８−Ｇｌｕ^２２−Ｉ^３３−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨおよびその組合せから選択されるＧＬＰ−１化合物を含む、医薬組成物。
5. ａ）請求項２もしくは３記載の化合物またはその医薬的な塩；およびｂ）Ａｃ−Ａｒｇ−シクロ［Ｃｙｓ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ］−ＮＨ_２、Ａｃ−シクロ［ｈＣｙｓ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ］−ＮＨ_２、Ａｃ−シクロ［ｈＣｙｓ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ペニシラミン］−ＮＨ_２、Ｎ−シクロヘキサンカルボニル−シクロ［ｈＣｙｓ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ペニシラミン］−ＮＨ_２およびその組合せから選択されるＭＣ４アゴニストペプチドを含む、医薬組成物。
6. 以下の式：
   

   

   で示される化合物からなる群から選択される、請求項１記載の化合物およびその医薬的な塩。
7. 以下の式：
   

   

   で示される化合物またはその医薬的な塩。