JP4693392B2 - キャピラリ電気泳動および免疫転位による単クローン性蛋白質の分析ならびに分類 - Google Patents
キャピラリ電気泳動および免疫転位による単クローン性蛋白質の分析ならびに分類 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4693392B2 JP4693392B2 JP2004328416A JP2004328416A JP4693392B2 JP 4693392 B2 JP4693392 B2 JP 4693392B2 JP 2004328416 A JP2004328416 A JP 2004328416A JP 2004328416 A JP2004328416 A JP 2004328416A JP 4693392 B2 JP4693392 B2 JP 4693392B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- biological sample
- protein
- modified
- electrophoresis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 213
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 213
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 title claims description 44
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 23
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 103
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 67
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 50
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 45
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 42
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 42
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 41
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 40
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 38
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 38
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 23
- 238000013508 migration Methods 0.000 claims description 21
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims description 20
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims description 20
- 230000005012 migration Effects 0.000 claims description 20
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 14
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 9
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- YDSWCNNOKPMOTP-UHFFFAOYSA-N mellitic acid Chemical compound OC(=O)C1=C(C(O)=O)C(C(O)=O)=C(C(O)=O)C(C(O)=O)=C1C(O)=O YDSWCNNOKPMOTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims 2
- ARCGXLSVLAOJQL-UHFFFAOYSA-N trimellitic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C(C(O)=O)=C1 ARCGXLSVLAOJQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 186
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 65
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 16
- SRPWOOOHEPICQU-UHFFFAOYSA-N trimellitic anhydride Chemical compound OC(=O)C1=CC=C2C(=O)OC(=O)C2=C1 SRPWOOOHEPICQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 14
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 13
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 12
- -1 benzenetricarboxylic anhydride Chemical class 0.000 description 9
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 4
- 208000021161 Plasma cell disease Diseases 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 3
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- 108700004676 Bence Jones Proteins 0.000 description 2
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 2
- 208000002774 Paraproteinemias Diseases 0.000 description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003966 Alpha-1-microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 101800001761 Alpha-1-microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108010012919 B-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000019260 B-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000011038 Cold agglutinin disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009868 Cold type haemolytic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 1
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 1
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010036030 Polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000008151 electrolyte solution Substances 0.000 description 1
- 238000005370 electroosmosis Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000019420 lymphoid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 206010035485 plasmacytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000030428 polyarticular arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 150000003628 tricarboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
- G01N27/44721—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means
- G01N27/44726—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones by optical means using specific dyes, markers or binding molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
- G01N33/561—Immunoelectrophoresis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
a)特定の抗原特異性を有し、生体試料中に存在する可能性のある単クローン性蛋白質と抗原−抗体型複合体を形成することができる負に過剰に帯電した修飾抗体の存在下に、生体試料の第1のアリコート部分の成分をキャピラリ電気泳動により分離した後、分離した生体試料の成分を検出し、
b)特定の抗原特異性を有する該負に過剰に帯電した修飾抗体の非存在下にキャピラリ電気泳動により分離した同じ試料からの別のアリコート部分の成分の電気泳動プロフィルと、工程a)で得られた電気泳動プロフィルを比較する。
1)負に過剰に帯電した修飾抗体と、生体試料中に存在する、該抗体により特異的に認識される目的蛋白質との免疫反応を可能にするインキュベーション条件の下で、特定の抗原特異性を有する該抗体を含有するメジウムを生体試料の1つのアリコート部分と接触させ、および別のアリコート部分を修飾抗体は含有しない該メジウムと接触させ、
2)工程1でインキュベートした生体試料の両アリコート部分を電気泳動キャピラリに注入する。
1)特定の抗原特異性を有する負に過剰に帯電した修飾抗体を含有するメジウムを電気泳動キャピラリに注入し、および該修飾抗体は含有しない該メジウムを別の電気泳動キャピラリに注入し、
2)該抗体と、生体試料中に存在する目的蛋白質もしくは目的蛋白質類との免疫反応を可能にする条件の下で、工程1)によって処理した電気泳動キャピラリに生体試料を注入する。
少なくとも1つのカルボン酸基を含む無水物をジメチルホルムアミド(DMF)に即座に溶解する工程、および
この無水物と抗体を反応させてアルカリ性pHで負に過剰に帯電する修飾抗体を得ることができる条件下に、抗体と、上記の溶解した無水物とを接触させる工程
を含む、負に過剰に帯電した修飾抗体を調製する方法に関する。
内径25ミクロンの石英ガラス製キャピラリを8本装着したCE装置(CAPILLARYS、セビア社(Sebia))を用い、臨床試料のキャピラリ電気泳動を実施した。検出は200nmで行った。試料は、この装置の試料フィーダに入れ、落差法により自動注入した。試料は、約400V/cmの電場をかけることにより、5分未満で分離した。キャピラリは、それぞれの分析の前に、0.25Mの水酸化ナトリウムで洗浄した後、分析用緩衝液で洗浄した。
a)濃度10g/lの結合対象抗血清(抗ヒトIgG、A、M、抗カッパもしくはラムダ、DAKO社、デンマーク)10mlをpH7.4、100mMのリン酸緩衝溶液に対して透析した。
b)DMFを用いて無水1,2,4−ベンゼントリカルボン酸の100mM溶液を調製した。
c)上記の透析した抗体溶液を5N水酸化ナトリウムと混合した後、これを上記無水物のDMF溶液と混合した(5N水酸化ナトリウム213μl+抗体溶液10ml+無水物のDMF溶液5.33ml)。
d)次いで、この反応メジウムをロッカに入れ、37℃で1時間、ゆるやかに撹拌した。
e)次に、この混液を100mM、pH7.4のリン酸緩衝溶液に対して透析し、この間、透析液を数回交換した。
f)透析が完了するとすぐに、カラムをPEG6000の粉末中に1時間入れておいた。
g)濃縮が完了するとすぐに、後者を100mM、pH7.4のリン酸塩+1g/lの窒化ナトリウムに対して透析した。
h)100mM、pH7.4のリン酸塩+1g/lの窒化ナトリウムの溶液を用いて、カラムの容量を10mlに調整した。
i)得られた溶液は、0.45μmの孔を有する膜でろ過した後、4℃で貯蔵した。他の貯蔵メジウムでも、そのイオン強度が抗体を確実に保存できるのに十分(即ち、生理食塩水のそれに近い)であれば、用いることができよう。
a)濃度10g/lの分析対象抗血清(抗ヒトIgG、A、M、抗カッパもしくはラムダ、DAKO社、デンマーク)10mlをpH7.4、40mMのリン酸緩衝溶液に対して透析した。
b)これに、50μl/mlの5N水酸化ナトリウムを加えた。
c)(18mg/mlのメリト酸、次いで50mg/mlのEDCIを)加えた。
d)次いで、この反応メジウムをロッカに入れ、37℃で1時間、ゆるやかに撹拌した。
e)次に、この混液を100mM、pH7.4のリン酸緩衝溶液に対して透析し、この間、透析液を数回交換した。
f)透析が完了するとすぐに、カラムをPEG6000の粉末中に1時間入れておいた。
g)濃縮が完了するとすぐに、後者を100mM、pH7.4のリン酸塩+1g/lの窒化ナトリウムに対して透析した。
h)100mM、pH7.4のリン酸塩+1g/lの窒化ナトリウムの溶液を用いて、カラムの容量を10mlに調整した。
i)得られた溶液は、0.45μmの孔を有する膜でろ過した後、4℃で保存した。
キャピラリーズ(セビア社)は、8回分のキャピラリ分析を同時に行う装置である。イムノタイピング・ヘッドは、6個の100μlウェルおよび1個の400μlダブルウェルからなるタイピング専用のCAPILLARYSヘッドである。これは、ウェル1に100mMリン酸塩、ウェル2に修飾抗IgG抗体、ウェル3に修飾抗IgA抗体、ウェル4に修飾抗IgM抗体、ウェル5に修飾抗カッパ抗体、ウェル6に修飾抗ラムダ抗体をそれぞれ60μl含み、ダブルウェル7/8は、380μlのイムノタイピング用希釈液(セビア社が用いているベンジルアルコールの0.02M分析緩衝溶液)を含む。
b)このキャリアを装置に導入すると、次いで、この自動装置はダブルウェル7/8においてこの血清を20倍希釈し、ダブルウェルを均質化して、ウェル1ないし6のそれぞれに40μlずつ分配し、これらのウェルをそれぞれ均質化する。
c)次に、以下の条件でキャピラリ分析を行う:
分析用緩衝液は、セビア・キャピラリーズ(Sebia Capillarys)B1B2+もしくはセビア・キャピラリーズ・プロテイン(Sebia Capillarys Protein)緩衝液とすることができる;
B1B2+緩衝液:温度32℃、泳動電圧7kV、捕捉時間枠(acquisition window)100ないし235s、注入250mbars*5s;
セビア・キャピラリーズ・プロテイン(e)緩衝液:温度37℃、泳動電圧6.5kV、捕捉時間枠110ないし275s、注入250mbars*5s;
d)ウェル1で得られたキャピラリ分析結果を続く5個のウェルでの結果と比較して分析血清をタイピングする。
血清のガンマの割合が低い場合、b)の希釈液による希釈は10倍とする。このガンマの割合は、B1B2+緩衝液を用いたキャピラリーズ装置によるその分析値がこの緩衝液を用いて該割合について規定された正常値を下回る値、即ち、約10%未満(もしくは<7.5g/l)を示す場合、低いと見なされている。
この場合は、2つのヘッドを用いる:
ウェル1に100mMリン酸塩、ウェル2に修飾抗IgG抗体、ウェル3に修飾抗IgA抗体、ウェル4に修飾抗IgM抗体、ウェル5に修飾抗カッパ抗体、ウェル6に修飾抗ラムダ抗体をそれぞれ100μl含む6穴のウェルからなる1つのヘッド;
ダブルウェル7/8に380μlのイムノタイピング用希釈液(ベンジルアルコールの0.02Mセビア・キャピラリーズB1B2+緩衝液)を含む7穴のウェルからなる血清希釈用の1つのヘッド;
a)上記抗血清ヘッドを含む第1のキャリアを装置に導入すると、次いで、この自動装置が該抗体をキャピラリに注入する(250mbars*5s)。
b)位置1に上記血清希釈ヘッドおよび血清チューブを含む第2のキャリアを装置に導入すると、次いで、この自動装置がダブルウェル7/8において20倍希釈を行い、ダブルウェルを均質化して、ウェル1ないし6に(ウェル当たり20倍希釈血清40μl+分析用緩衝液60μlを)分配し、次に、この希釈血清をキャピラリに注入する(250mbars*5s)。
c)分析用緩衝液は、セビア・キャピラリーズ(Sebia Capillarys)B1B2+緩衝液もしくはセビア・キャピラリーズ・プロテイン(Sebia Capillarys Protein(e))緩衝液とすることができる;
B1B2+緩衝液:温度32℃、泳動電圧7kV、捕捉時間枠(acquisition window)100ないし235s;
セビア・キャピラリーズ・プロテイン(e)緩衝液:温度37℃、泳動電圧6.5kV、捕捉時間枠110ないし275s。
d)ウェル1で得られたキャピラリ分析結果を続く5個のウェルでの結果と比較してこの血清をタイピングする。
Claims (24)
- 生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体を用いることによって、電気泳動による分離時に、負に過剰に帯電した修飾抗体と生物試料中に存在する可能性のある単クローン性蛋白質との間で形成された抗原−抗体型の複合体を生体試料のグロブリンの泳動帯から外れた位置の帯域へ泳動させることを含み、前記修飾抗体は所定の目的単クローン性蛋白質に対して抗原特異性を有しており、及び前記修飾抗体は(i)EDCI(1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド・ヒドロクロリド)の存在下でメリト酸と、または(ii)少なくとも1つのカルボン酸基を含む無水物と反応させることによって得られる、方法。
- 生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する請求項1に記載の方法であって、
a)特定の抗原特異性を有し、生体試料中に存在する可能性のある単クローン性蛋白質と抗原−抗体型の複合体を形成することができる負に過剰に帯電した修飾抗体の存在下に、キャピラリ電気泳動によって生体試料の第1のアリコート部分の成分を分離し、分離した生体試料の成分を検出する工程と、
b)工程a)で得られた電気泳動プロフィルと、所定の抗原特異性を有する前記負に過剰に帯電した修飾抗体の非存在下にキャピラリ電気泳動により分離した同じ試料からの別のアリコート部分の成分の電気泳動プロフィルとを比較する工程
を含む方法。 - 請求項1または請求項2に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体を用いて、異なる抗原特異性を有する一連の抗体を形成して、生体試料の同一アリコート部分と接触させてキャピラリ電気泳動により試料の成分を分離する、方法。
- 請求項3に記載の方法であって、前記一連の抗体において各タイプの抗体は免疫グロブリン・アイソタイプに対し所定の抗原特異性を有するものである、方法。
- 少なくとも2つのアリコート部分に分けた生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する、請求項2ないし請求項4のいずれか一項に記載の方法であって、電気泳動により生体試料の成分を分離する前に、
1)特定の抗原特異性を有する負に過剰に帯電した修飾抗体と、生体試料中に存在する該抗体により特異的に認識される目的単クローン性蛋白質との間の免疫反応を可能にするインキュベーション条件の下に、該抗体を含むメジウムと該生体試料の1つのアリコート部分とを接触させ、該生体試料の別のアリコート部分と、修飾抗体を含まない該メジウムとを接触させる工程と、
2)工程1)でインキュベートした生体試料の両アリコート部分を電気泳動キャピラリに注入する工程
を含む方法。 - 生体試料をキャピラリ電気泳動により分析する請求項1または請求項2に記載の方法であって、電気泳動により生体試料の成分を分離する前に、
1)特定の抗原特異性を有する負に過剰に帯電した修飾抗体を含むメジウムを該電気泳動キャピラリに注入し、該修飾抗体を含まない該メジウムを別の電気泳動キャピラリに注入する工程と、
2)該抗体と生体試料中に存在する目的単クローン性蛋白質または目的単クローン性蛋白質類との免疫反応を可能にする条件下で、工程1)によって処理された電気泳動キャピラリに生体試料を注入する工程
を含む方法。 - 請求項1ないし6の何れか1項に記載の方法であって、一連の負に過剰に帯電した修飾抗体が所定の異なる特異性を有するn種のタイプの抗体を含む場合、生体試料を少なくともn+1個のアリコート部分に分ける方法。
- 請求項1ないし7の何れか1項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗カッパ、抗ラムダ抗体、抗遊離型カッパ抗体および抗遊離型ラムダ抗体から選ばれることを特徴とする方法。
- 請求項1ないし7の何れか1項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗カッパ及び抗ラムダ抗体の混合物、又は抗IgG、抗IgA及び抗IgM抗体の混合物であること特徴とする方法。
- 請求項1ないし7の何れか1項に記載の方法によって生体試料の種々のアリコート部分をキャピラリ電気泳動を用いて分析し、各アリコート部分を、負に過剰に帯電するように修飾された抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗カッパ、抗ラムダ、抗遊離型カッパおよび抗遊離型ラムダ免疫グロブリンからそれぞれ選ばれる抗体に接触させることを含む、生体試料中のMc蛋白質と呼ばれる単クローン性蛋白質を検査し、タイピングする方法。
- 請求項1ないし10の何れか1項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が、目的単クローン性蛋白質が生体試料中に存在する場合に、認識する目的単クローン性蛋白質に対して過剰であることを特徴とする方法。
- 請求項1ないし11の何れか1項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が無水1,2,4−ベンゼントリカルボン酸との反応生成物である方法。
- 請求項1ないし12の何れか1項に記載の方法であって、負に過剰に帯電した修飾抗体が抗体と少なくとも1つのカルボン酸基を含む無水物との反応生成物であり、該反応が、無水物をジメチルホルムアミド(DMF)に即座に溶かし、溶かした無水物を抗体溶液と接触させて無水物と抗体とを反応させることを含み、該反応が、負電荷を抗体に付加することができる条件下に37℃で行われる方法。
- 請求項1ないし13の何れか1項に記載の方法であって、キャピラリ電気泳動はpHが9ないし11の範囲にあるアルカリ性緩衝液中で行い、該緩衝液は緩衝剤と該分析用緩衝液のイオン強度を増大させることが可能な少なくとも1種の添加剤を含む方法。
- 請求項1ないし14の何れか1項に記載の方法であって、生体試料が血漿、尿もしくは頭脊柱液の試料から選ばれる方法。
- 請求項1ないし14の何れか1項に記載の方法であって、生体試料が血清試料である方法。
- 生体試料中の単クローン性蛋白質(Mc蛋白質)を検査し、タイピングする方法であって、生体試料中のMc蛋白質の存在は、該Mc蛋白質に相当するピークのイムノサブトラクションによって検出され、生体試料からの蛋白質の電気泳動プロフィルにおいて、負に過剰に帯電した修飾抗体−Mc蛋白質複合体の移動は生体試料のグロブリンの電気泳動プロフィルの帯域を超えて生じるものであって、前記負に過剰に帯電した抗体は(i)EDCI(1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド・ヒドロクロリド)の存在下においてメリト酸と、または(ii)少なくとも1つのカルボン酸基を含む無水物と反応させることによって得られるものである、方法。
- 負に過剰に帯電した修飾抗体であって、該抗体に酸性官能基が付加されることにより、同一のキャピラリ電気泳動分離条件下で分離されるタイプIgG、IgA、IgM、IgEおよびIgD免疫グロブリンの泳動プロフィルの帯域を超えて電気泳動する能力が、負に過剰に帯電した修飾抗体と生物試料中に存在する可能性のある単クローン性蛋白質との間で形成された抗原−抗体型の複合体に付与され、前記酸性官能基は、前記抗体を(i)EDCI(1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミド・ヒドロクロリド)の存在下においてメリト酸と、または(ii)少なくとも1つのカルボン酸基を含む無水物、と反応させることで該抗体に付加されることを特徴とする、修飾抗体。
- 抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗カッパ、抗ラムダ、抗遊離型カッパおよび抗遊離型ラムダ免疫グロブリンから選ばれる、請求項18に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体。
- 前記負に過剰に帯電した修飾抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗カッパおよび抗ラムダ抗体を含む5価抗血清として、または前記負に過剰に帯電した修飾抗IgG、抗IgAおよび抗IgM抗体を含む3価抗血清として混合されている、請求項18に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体。
- 請求項18ないし20の何れか1項に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体であって、ポリクロナール抗体であることを特徴とする修飾抗体。
- 請求項18ないし21の何れか1項に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体を含む、生体試料中の単クローン性蛋白質を検出しタイピングするためのキット。
- 負に過剰に帯電した修飾抗体と生物試料中に存在する可能性のある単クローン性蛋白質との間で形成された抗原−抗体型の複合体のキャピラリ電気泳動および免疫転位により生体試料中に存在する単クローン性蛋白質を検出するための、請求項18ないし21の何れか1項に記載の負に過剰に帯電した修飾抗体の使用。
- 負に過剰に帯電した修飾抗体と生物試料中に存在する可能性のある単クローン性蛋白質との間で形成された抗原−抗体型の複合体のキャピラリ電気泳動および免疫転位により生体試料中に存在する単クローン性蛋白質をタイピングするための、請求項18ないし21の何れか1項による負に過剰に帯電した修飾抗体の使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR0313246A FR2862134B1 (fr) | 2003-11-12 | 2003-11-12 | Analyse et typage de proteines monoclonales par electrophorese capillaire et immunodeplacement |
FR0313246 | 2003-11-12 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2005181299A JP2005181299A (ja) | 2005-07-07 |
JP2005181299A5 JP2005181299A5 (ja) | 2007-12-27 |
JP4693392B2 true JP4693392B2 (ja) | 2011-06-01 |
Family
ID=34429975
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004328416A Active JP4693392B2 (ja) | 2003-11-12 | 2004-11-12 | キャピラリ電気泳動および免疫転位による単クローン性蛋白質の分析ならびに分類 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8609435B2 (ja) |
EP (1) | EP1531332B1 (ja) |
JP (1) | JP4693392B2 (ja) |
CN (1) | CN1641353B (ja) |
AR (1) | AR046834A1 (ja) |
AT (1) | ATE418735T1 (ja) |
BR (1) | BRPI0406265B8 (ja) |
CY (1) | CY1110461T1 (ja) |
DE (1) | DE602004018598D1 (ja) |
DK (1) | DK1531332T3 (ja) |
ES (1) | ES2318251T3 (ja) |
FR (1) | FR2862134B1 (ja) |
PL (1) | PL1531332T3 (ja) |
PT (1) | PT1531332E (ja) |
SI (1) | SI1531332T1 (ja) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2878033B1 (fr) * | 2004-11-18 | 2007-05-04 | Sebia Sa | Procede d'analyse de l'hemoglobine par electrophorese capillaire, trousse pour electrophorese capillaire et utilisation de ralentisseur de flux dans un tel procede |
ATE455302T1 (de) * | 2005-09-02 | 2010-01-15 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Komplexformierungs- und -trennungsverfahren |
CA2646944A1 (en) * | 2007-11-30 | 2009-05-30 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Serum components that bind to threat agents |
EP2184606B1 (en) | 2008-11-03 | 2015-06-24 | Helena Laboratories (UK) Ltd. | Immunodisplacement Electrophoresis |
GB201010405D0 (en) * | 2010-06-21 | 2010-08-04 | Binding Site Group The Ltd | Assay |
US20120077184A1 (en) * | 2010-09-28 | 2012-03-29 | Starkdx Incorporated | Electromagnetic multiplex assay biosensor |
WO2013181267A1 (en) * | 2012-05-29 | 2013-12-05 | Health Diagnolstic Laboratory. Inc. | Compsition and method for gel electrophoresis with in-situ clalibration |
PT3276351T (pt) | 2016-07-27 | 2020-07-21 | Sebia Sa | Método de eletroforese por imunofixação com imunodeslocamento do componente alvo no gel |
GB201709387D0 (en) * | 2017-06-13 | 2017-07-26 | Genetic Microdevices Ltd | Method |
JP2022519246A (ja) * | 2019-01-31 | 2022-03-22 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 抗体電荷不均一性についてのネイティブマイクロ流体ce-ms解析法 |
IT202000006694A1 (it) * | 2020-03-31 | 2021-10-01 | Bioci Di Ciaiolo Carlo | Procedimento per la rivelazione di componenti immunoglobuliniche monoclonali in un fluido biologico e relativo kit |
CN113552370B (zh) * | 2021-09-23 | 2021-12-28 | 北京小蝇科技有限责任公司 | 一种毛细管免疫分型单克隆免疫球蛋白定量分析方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08508576A (ja) * | 1994-01-25 | 1996-09-10 | ベックマン インスツルメンツ インコーポレーテッド | M−蛋白質の分類及びタイピングのための毛細管電気泳動免疫サブトラクション法 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2564540B2 (ja) * | 1987-04-01 | 1996-12-18 | 株式会社日立製作所 | 免疫分析方法 |
US5010176A (en) * | 1988-11-10 | 1991-04-23 | Eli Lilly And Company | Antibody-drug conjugates |
US5169764A (en) * | 1990-08-08 | 1992-12-08 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Multitrophic and multifunctional chimeric neurotrophic factors, and nucleic acids and plasmids encoding the chimeras |
US5459272A (en) * | 1990-10-16 | 1995-10-17 | Research Corporation Technologies | Quinoline-2-(carboxaldehyde) reagents for detection of primary amines |
NL9100434A (nl) | 1991-03-11 | 1992-10-01 | Rijksuniversiteit | Farmaceutische preparaten voor de bestrijding van virale infecties en immuundeficientieziekten, de bereiding en toepassing daarvan. |
US5228960A (en) | 1992-07-17 | 1993-07-20 | Beckman Instruments, Inc. | Analysis of samples by capillary electrophoretic immunosubtraction |
US5958202A (en) * | 1992-09-14 | 1999-09-28 | Perseptive Biosystems, Inc. | Capillary electrophoresis enzyme immunoassay |
DE69422604T2 (de) * | 1994-03-08 | 2000-06-08 | Zeptosens Ag Witterwil | Vorrichtung und Verfahren, die Bioaffinitätsassay und elektrophoretische Auftrennung kombinieren |
US5431793A (en) * | 1994-07-29 | 1995-07-11 | Beckman Instruments, Inc. | Quantitative analysis of glycosylated hemoglobin by immunocappillary electrophoresis |
JP3596821B2 (ja) * | 1994-09-09 | 2004-12-02 | キヤノン株式会社 | 画像形成装置 |
US5985275A (en) * | 1995-04-12 | 1999-11-16 | New York Blood Center | β-Lactoglobulin modified with aromatic anhydride compound for preventing HIV infection |
US5630924A (en) | 1995-04-20 | 1997-05-20 | Perseptive Biosystems, Inc. | Compositions, methods and apparatus for ultrafast electroseparation analysis |
US5753094A (en) * | 1995-09-20 | 1998-05-19 | Beckman Instruments, Inc. | Borate storage buffer and sample diluent |
JPH10307376A (ja) * | 1997-03-05 | 1998-11-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | ハロゲン化銀感光材料および画像形成方法 |
US6156179A (en) * | 1998-07-09 | 2000-12-05 | Bio-Rad Laboratories | Computer directed identification of paraproteins |
US6656899B1 (en) * | 1999-08-10 | 2003-12-02 | The Procter & Gamble Company | Nonaqueous liquid detergent with wash-water soluble low-density filler particles |
CA2380329A1 (en) | 1999-08-10 | 2001-02-15 | Christopher John Lienhart | Non-aqueous liquid detergents with water-soluble low-density particles |
FR2819888B1 (fr) | 2001-01-19 | 2003-09-12 | Sebia Sa | Procede de separation de proteines par electrophorese capillaire et compositions de tampon pour electrophorese capillaire |
FR2819889B1 (fr) * | 2001-01-19 | 2003-08-01 | Sebia Sa | Procede d'electrophorese capillaire en solution libre a ph alcalin |
-
2003
- 2003-11-12 FR FR0313246A patent/FR2862134B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-11-08 AR ARP040104115A patent/AR046834A1/es active IP Right Grant
- 2004-11-09 ES ES04292651T patent/ES2318251T3/es active Active
- 2004-11-09 PL PL04292651T patent/PL1531332T3/pl unknown
- 2004-11-09 SI SI200431047T patent/SI1531332T1/sl unknown
- 2004-11-09 DE DE602004018598T patent/DE602004018598D1/de active Active
- 2004-11-09 PT PT04292651T patent/PT1531332E/pt unknown
- 2004-11-09 AT AT04292651T patent/ATE418735T1/de active
- 2004-11-09 US US10/984,252 patent/US8609435B2/en active Active
- 2004-11-09 DK DK04292651T patent/DK1531332T3/da active
- 2004-11-09 EP EP04292651A patent/EP1531332B1/fr active Active
- 2004-11-10 BR BRPI0406265A patent/BRPI0406265B8/pt active IP Right Grant
- 2004-11-12 CN CN2004101033704A patent/CN1641353B/zh active Active
- 2004-11-12 JP JP2004328416A patent/JP4693392B2/ja active Active
-
2009
- 2009-03-24 CY CY20091100354T patent/CY1110461T1/el unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08508576A (ja) * | 1994-01-25 | 1996-09-10 | ベックマン インスツルメンツ インコーポレーテッド | M−蛋白質の分類及びタイピングのための毛細管電気泳動免疫サブトラクション法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SI1531332T1 (sl) | 2009-04-30 |
ATE418735T1 (de) | 2009-01-15 |
PT1531332E (pt) | 2009-02-03 |
EP1531332A1 (fr) | 2005-05-18 |
JP2005181299A (ja) | 2005-07-07 |
US8609435B2 (en) | 2013-12-17 |
FR2862134A1 (fr) | 2005-05-13 |
AR046834A1 (es) | 2005-12-28 |
CN1641353B (zh) | 2012-06-06 |
CN1641353A (zh) | 2005-07-20 |
BRPI0406265B1 (pt) | 2016-11-01 |
BRPI0406265B8 (pt) | 2021-07-27 |
DE602004018598D1 (de) | 2009-02-05 |
US20050164302A1 (en) | 2005-07-28 |
PL1531332T3 (pl) | 2009-06-30 |
DK1531332T3 (da) | 2009-04-14 |
FR2862134B1 (fr) | 2007-07-27 |
BRPI0406265A (pt) | 2005-08-23 |
CY1110461T1 (el) | 2015-04-29 |
ES2318251T3 (es) | 2009-05-01 |
EP1531332B1 (fr) | 2008-12-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101307614B1 (ko) | Fc 영역 포함 단백질의 정제 방법 | |
JP4693392B2 (ja) | キャピラリ電気泳動および免疫転位による単クローン性蛋白質の分析ならびに分類 | |
US20230203189A1 (en) | Clinical assessment of m-protein response in multiple myeloma | |
US20190242891A1 (en) | Improved immunofixation electrophoresis method with target component on-gel immunodisplacement | |
JP2005181299A5 (ja) | ||
Coleman et al. | Purification of Fab fragments from a monoclonal antibody papain digest by Gradiflow electrophoresis | |
JPH08508576A (ja) | M−蛋白質の分類及びタイピングのための毛細管電気泳動免疫サブトラクション法 | |
JP7299309B2 (ja) | 抗ヒト心筋型トロポニンi組換え抗体 | |
EP3872092A1 (en) | Recombinant antibody of anti-human cardiac troponin i | |
EP3548899B1 (en) | Rapid semiquantitative method for determining adamts-13 activity in a patient plasma sample | |
JP2009508087A (ja) | モノクローナル抗体試薬 | |
Kohn et al. | The use of alkaline-phosphatase conjugated second antibody for the enhancement of immunoprecipitation techniques on cellulose acetate membranes | |
CN116143931A (zh) | 一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途 | |
WO2018132639A1 (en) | Methods and kits for the diagnosis and/or prognosis of ocular cicatricial pemphigoid | |
JPS6170464A (ja) | 精製リウマチ特異蛋白質およびその特異抗体 | |
JP2009139372A (ja) | ラットIgE測定試薬 | |
JPH02264863A (ja) | ヒトイムノグロブリンFc断片と人以外の哺乳動物抗体とのコンジユゲート | |
JPS60224636A (ja) | 高品質抗体を製造する方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071112 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071112 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20100526 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100629 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100928 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101001 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101012 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110125 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110222 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140304 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4693392 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |