CN116143931A - 一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途。本公开制备的抗人IgM单克隆抗体对人IgM具有高亲和性、高反应活性、高灵敏度和特异性。本发明的抗人IgM单克隆抗体用于免疫检测具有良好的阻断、消除免疫干扰的作用，提供了一种重要的阻断剂原料来源。

Description

一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途
优先权信息
本申请请求2021年11月20日向中国国家知识产权局提交的、专利申请号为202111410598.8的专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入此处。
技术领域
本发明属于抗体技术领域。更具体地，涉及一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途。
背景技术
基于抗原抗体反应的免疫检测方法应用广泛，根据抗体标记物不同分为不同的检测方法，如：酶联免疫、放射免疫、化学发光等。在临床应用中，免疫检测结果的准确性往往在不同程度上受病人血清中干扰物的影响，从而导致错误的检测结果。血清中的干扰物可分为内源性干扰和外源性干扰。在内源性干扰中，以类风湿因子、嗜异性抗体(HA)最为常见。因此，研究和发展降低消除类风湿因子、嗜异性抗体(HA)干扰的有效手段，是保证医学免疫检验结果可靠性、保障医患利益的重要课题。针对消除免疫诊断中的类风湿因子、嗜异性抗体(HA)干扰，最简单、最有效的方法就是在检测系统中添加阻断剂，直接阻断干扰物质与检测系统中抗体或抗原的结合。
阻断剂是一种生物制剂，加入免疫检验体系中，可与内源性抗体反应，从而有效防止非分析物介导的抗体桥连。阻断剂可分为被动阻断剂和主动阻断剂。被动阻断剂是使用非特异性物质(如小鼠IgG，小鼠血清，非特异性单克隆抗体，聚集的IgG等)来阻断人异源抗体的结合。这类试剂用途有限，只能阻断一种人抗特定动物抗体的活性试剂(如人类抗鼠抗体)，阻断效果依赖于人异源抗体的亲和力，通常人异源抗体的亲和力通常在105-106的K值范围内。因此，被动阻断剂在使用过程中，往往通过高浓度添加来降低干扰。此外，异嗜性干扰涉及许多成分，阻断不同种类的异嗜性抗体时需要使用不同的被动阻断剂。
主动阻断剂是特异性针对人免疫球蛋白的，可以特异、主动、高效的中和干扰抗体的成分，从而阻断非预期结合的产生，如商品化试剂中的IIR、HBR等。这种制剂可排除各种异嗜性干扰，对造成干扰的异嗜性抗体具特异性结合力，只需要低浓度即可高效阻断，将影响减到最低。在主动阻断过程中，消除干扰的效果依赖于主动剂对异嗜性抗体的亲和力。由于主动阻断剂的高亲和力，在一些分析中的阻断能力强于被动阻断剂。
目前市场上的阻断剂产品虽然较多，但是均存在一定的性能缺陷，加之阻断剂本身用量就非常大，所以市场急需性能更优，成本更低的阻断剂。
发明内容
本发明利用重组抗体技术，开发出一种抗人IgM抗体，其对人IgM具有高亲和性、高反应活性、高灵敏度或特异性。所述抗人IgM单克隆抗体用于免疫检测具有良好的阻断、消除免疫干扰的作用，为免疫诊断提供了一种重要的阻断剂原料来源。
本公开提供了一种抗人IgM抗体或其功能性片段，包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述HCDR1～HCDR3包括或为与SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24任一所示重链可变区的HCDR1～HCDR3一致的氨基酸序列；所述LCDR1～LCDR3包括或为与SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:25～27任一项所示轻链可变区的LCDR1～LCDR3一致的氨基酸序列。
可选地，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3(简称CDRs)由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact系统定义。
本公开提供了一种抗人IgM的抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含以下互补决定区：
HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
可选地，所述的抗体或其功能性片段还包含重链可变区的骨架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，和轻链可变区的骨架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；
其中，HFR1包括如SEQ ID NO:7、21任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR2包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR3包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR4包括如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR1包括如SEQ ID NO:11、22任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR2包括如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR3包括如SEQ ID NO:13、23任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR4包括如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
本公开提供了一种抗人IgM抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含上述的HCDR1～HCDR3和上述的HFR1～HFR4，所述轻链可变区包含上述的LCDR1～LCDR3和上述的LFR1～LFR4。
可选地，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15、24任一所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:16、25、26、27任一所示。
可选地，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区。
可选地，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区。
可选地，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。
可选地，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
可选地，所述恒定区的种属来源为小鼠。
可选地，所述重链恒定区为SEQ ID NO:17或与SEQ ID NO:17具有80％以上同源性的氨基酸序列；所述轻链恒定区为SEQ ID NO:18或与SEQ ID NO:18具有80％以上同源性的氨基酸序列。
可选地，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
本公开提供了一种抗人IgM抗体或其功能性片段，包括重链和/或轻链，所述重链包括上述的重链可变区和上述的重链恒定区；所述轻链包括上述的轻链可变区和上述的轻链恒定区。
可选地，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19、28任一所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20、29、30、31任一所示。
本公开提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段。
可选地，所述偶联部分选自纯化标签或可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质、酶，例如荧光标记、发色团标记、电子致密标记，例如放射性同位素、荧光团、罗丹明及其衍生物、荧光素酶、荧光素、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记、药物中的一种或多种。
可选地，所述偶联部分选自固相载体，例如磁性微球、塑料微球、塑胶微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜。
本公开还提供了一种核酸，所述核酸编码上述任一项所述的抗体或其功能性片段。
本公开还提供了一种细胞，所述细胞包含上述的核酸。
本公开还提供了一种制备上述任一项所述的抗体或其功能性片段的方法，所述方法包括培养上述的细胞。
本公开提供了上述抗体或其功能性片段在免疫检测中或在制备免疫阻断剂中的应用。
本公开提供了一种阻断剂，所述阻断剂包括上述的抗体或其功能性片段。
可选地，所述抗体在阻断剂中的浓度为5～100μg/ml。
本公开提供了一种检测试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段、上述的抗体偶联物或上述的阻断剂。
本公开提供了一种降低/消除内源性干扰的方法，在免疫检测系统中添加上述的抗体或其功能性片段、上述的抗体偶联物、或上述的阻断剂。
本公开提供了一种免疫检测的方法，包括：在免疫检测系统中添加上述的抗体或其功能性片段、上述的抗体偶联物、或上述的阻断剂。
本公开提供了一种检测IgM的方法，包括：A)在足以发生结合反应的条件下，采用上述任一项所述的抗体或其功能性片段、上述所述的抗体偶联物、上述所述的核酸、上述所述的细胞或上述的试剂或试剂盒与来自所述受试者的样品接触以进行结合反应；以及B)检测结合反应产生的免疫复合物。
本申请公开涉及的氨基酸序列如下：
Figure BDA0003949465280000041
/>
Figure BDA0003949465280000051
/>
Figure BDA0003949465280000061
/>
附图说明
图1是8G5MRAb1至8G5MRAb6抗体的还原性SDS-PAGE结果(从左至右)。
具体实施方式
本公开的一些实施方式提供了一种抗人IgM抗体或其功能性片段，包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，所述HCDR1～HCDR3包括或为与SEQ IDNO:15、SEQ IDNO:24任一所示重链可变区的HCDR1～HCDR3一致的氨基酸序列；所述LCDR1～LCDR3包括或为与SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:25～27任一项所示轻链可变区的LCDR1～LCDR3一致的氨基酸序列。在本文中，术语“抗体”在最广义上使用，其可以包括全长单克隆抗体，双特异性或多特异性抗体，以及嵌合抗体，只要它们展示所需的生物学活性。
在本文中，术语“互补性决定区”、“CDR”或“CDRs”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体或抗原结合片段与其识别的抗原或表位的结合亲和力起作用的主要氨基酸残基的区域。在本公开具体实施方式中，CDRs是指所述抗体的重链和轻链的高度可变区。
在本文中，重链互补决定区用“HCDR”表示，其包括HCDR1、HCDR2和HCDR3；轻链互补决定区用“LCDR”表示，其包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。本领域常用的CDR标示方法包括：Kabat编号方案、IMGT编号方案、Chothia和Lesk编号方案以及1997年Lefranc等人为免疫球蛋白超家族的所有蛋白质序列引入的新的标准化编号系统。Kabat等人是第一个为免疫球蛋白可变区提出标准化编号方案的人。在过去的几十年中，序列的积累导致了KABATMAN数据库的创建，Kabat编号方案通常被认为是编号抗体残基广泛采用的标准。本公开采用Kabat注释标准标示CDR区，但其他方法标示的CDR区也属于本发明的保护范围。
对所述CDR进行定义的系统不受特别限制，本领域常规系统定义的CDR序列均在本申请的保护范围之内。例如CDR定义方法参见如Kabat等，U.S.Dept.of Health andHumanServices,Sequences of Proteins of Immunological Interest(1983)或Chothia等，J Mol Biol 196：901-917(1987)。示例性的定义的CDR列于下表1中。在给定抗体的可变区氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定CDR。
表1：CDR定义1
Figure BDA0003949465280000071
/>
Figure BDA0003949465280000081
1表1中所有CDR定义的编号是依据Kabat编号系统(参见下文)。
2如表1中使用的“AbM”具有小写“b”，是指通过Oxford Molecular的“AbM”抗体建模软件定义的CDR。
Kabat等还定义了适用于任何抗体的可变区序列的编号系统。本领域普通技术人员可以明确地将该Kabat编号系统对应到任何可变区序列，而不依赖于序列本身之外的任何实验数据。如本文所述，“Kabat编号”是指Kabat等，U.S.Dept.of Health andHumanServices，“Sequenceof Proteins of Immunological Interest”(1983)所述的编号系统。序列表中的多肽序列未根据Kabat编号系统编号。然而，本领域普通技术人员完全能够将序列表的序列编号转换为Kabat编号。
在可选的实施方式中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3(简称CDRs)由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact系统定义。在可选的实施方式中，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3依次包含重链可变区的31～35位、50～65位、94～99位氨基酸序列，或依次如重链可变区的31～35位、50～65位、94～99位氨基酸序列所示；
所述LCDR1、LCDR2和LCDR3依次包含轻链可变区的24～34位、50～56位、89～95位氨基酸序列，或依次如轻链可变区的24～34位、50～56位、89～95位氨基酸序列所示。
且，所述氨基酸位点的编号是依据Kabat编号系统。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段包含以下互补决定区：
HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
在本文中，“骨架区”或“FR”区包括重链骨架区和轻链骨架区，是指抗体重链可变区(可以表示为VH)和轻链可变区(可以表示为VL)中除CDR之外的区域；其中，重链骨架区用“HFR”表示，并且可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4骨架区；轻链骨架区用“LFR”表示，并且可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4骨架区。
在可选的实施方式中，所述的抗体或其功能性片段还包含重链可变区的骨架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，和轻链可变区的骨架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；
其中，HFR1包括如SEQ ID NO:7、21任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR2包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR3包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR4包括如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR1包括如SEQ ID NO:11、22任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR2包括如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR3包括如SEQ ID NO:13、23任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR4包括如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
在可选的实施方式中，
HFR1氨基酸序列如SEQ ID NO:7、21任一所示，或与其具有至少80％同源性；
HFR2氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示或与其具有至少80％同源性；
HFR3氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示或与其具有至少80％同源性；
HFR4氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示或与其具有至少80％同源性；
LFR1氨基酸序列如SEQ ID NO:11、22任一所示，或与其具有至少80％同源性；
LFR2氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示或与其具有至少80％同源性；
LFR3氨基酸序列如SEQ ID NO:13、23任一所示，或与其具有至少80％同源性；
LFR4氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示或与其具有至少80％同源性。
在本文中，重链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4；轻链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4。
需要说明的是，在其他的实施例中，本公开提供的抗体或其功能性片段的各骨架区氨基酸序列可以与上述对应骨架区(SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13或14)具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段以KD≤10-7M、KD≤10-8M、KD≤10-9M、KD≤10-10M或KD≤10-11的亲和力结合人IgM。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段以KD≤1.06×10-10或KD≤6.14×10-11或KD≤8.02×10-12的亲和力结合人IgM。KD的检测参考本公开实施例中的方法进行。本公开的一些实施方式还提供了一种抗人IgM抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含上述的HCDR1～HCDR3和上述的HFR1～HFR4，所述轻链可变区包含上述的LCDR1～LCDR3和上述的LFR1～LFR4。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15、24任一所示；
在可选的实施方式中，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:16、25、26、27任一所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。
在可选的实施方式中，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示；所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区。
在可选的实施方式中，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区；如本文所用，“重链恒定区”可以表示为CH；“轻链恒定区”可以表示为CL。
在可选的实施方式中，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区，所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。
在可选的实施方式中，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
在可选的实施方式中，所述恒定区的种属来源为小鼠。
在可选的实施方式中，所述重链恒定区序列(CH)如SEQ ID NO:17或与SEQ ID NO:17具有80％以上同源性的氨基酸序列；所述轻链恒定区为SEQ ID NO:18或与SEQ ID NO:18具有80％以上同源性的氨基酸序列。
需要说明的是，在其他的实施方式中，本公开提供的恒定区序列可以与上述恒定区(SEQID NO:17或18)具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。
在可选的实施方式中，所述功能性片段选自所述抗体的VHH、F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
上述抗体的功能性片段通常具有与其来源抗体相同的结合特异性。本领域技术人员根据本公开记载的内容容易理解到，上述抗体的功能性片段可以通过比如酶消化的方法(包括胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)和/或通过化学还原分裂二硫键的方法获得。在本公开公开中完整抗体的结构基础上，本领域技术人员容易获得上述的功能性片段。
上述抗体的功能性片段还可以通过也是本领域技术人员所知的重组遗传学技术或通过例如自动肽合成仪，比如Applied BioSystems等销售的自动肽合成仪合成获得。
本公开的一些实施方式还提供了一种抗人IgM抗体或其功能性片段，包括重链和/或轻链，所述重链包括上述的重链可变区和上述的重链恒定区；所述轻链包括上述的轻链可变区和上述的轻链恒定区。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19、28任一所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20、29、30、31任一所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示。
在可选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示。
本公开的一些实施方式还提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上述的抗体或其功能性片段以及与其偶联的偶联部分。
在可选的实施方式中，所述偶联部分包括选自纯化标签(如His标签)；可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质、酶，例如荧光标记、发色团标记、电子致密标记，例如放射性同位素、荧光团、罗丹明及其衍生物、荧光素酶、荧光素、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记中的一种或多种。
在可选的实施方式中，所述偶联部分选自固相载体。
在可选的实施方式中，所述固相载体选自微球、板或膜。
在可选的实施方式中，所述固相载体包括但不限于磁性微球、塑料微球、塑胶微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜。
在可选的实施方式中，所述固相载体为磁性微球。
本公开的一些实施方式还提供了一种编码上述抗体或其功能性片段的核酸。
核酸通常是RNA或DNA，核酸分子可以是单链或双链的。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。当其连入载体时采用DNA核酸。
本公开的一些实施方式还提供了含有上述核酸分子的载体。
本公开的一些实施方式还提供了含有上述载体的细胞。
本公开的一些实施方式还提供了一种制备抗体或其功能性片段的方法，其包括：培养如上所述的细胞，从培养产物中分离纯化得到所述抗体或其功能性片段。
在本公开中抗体或其功能性片段的氨基酸序列的基础上，本领域技术人员容易想到采用基因工程技术或其他技术(化学合成、重组表达)制备得到该抗体或其功能性片段，例如从能够重组表达如上任一项所述的抗体或其功能性片段的重组细胞的培养产物中分离纯化得到该抗体或其功能性片段，这对本领域技术人员来说是容易实现的，基于此，无论采用何种技术制备本公开的抗体或其功能性片段，其均属于本公开的保护范围。
本公开的一些实施方式还提供了上述抗体或其功能性片段在免疫检测中或在制备免疫阻断剂中的应用。
本公开的一些实施方式还提供了一种阻断剂，所述阻断剂包括上述的抗体或其功能性片段。
阻断剂是一种生物制剂，加入免疫检验体系中，可与内源性抗体反应，从而有效防止非分析物介导的抗体桥连。
本发明抗体或其功能性片段是特异性针对人IgM免疫球蛋白的，可以特异、主动、高效的中和干扰性IgM成分，从而阻断非预期结合的产生。本发明抗体或其功能性片段只需要低浓度即可高效阻断，将影响减到最低。
在可选的实施方式中，所述抗体在阻断剂中的浓度为5～100μg/ml。
在可选的实施方式中，所述抗体在阻断剂中的浓度为5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/ml。
本公开的一些实施方式还提供了一种检测试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物或上述的阻断剂。
在可选的实施方式中，所述试剂盒中包含的所述阻断剂可为液体溶液形式、附着于固体支持物上的形式、或为干燥粉剂。当阻断剂为一种液体溶液时，该液体溶液可以是水溶液。当免疫阻断剂是附着于固体支持物上的形式时，优选的固体支持物可以是层析介质如薄膜、测试条、塑料珠或平板、或显微镜载玻片。当阻断剂为一种干燥粉剂时，通过加入适当溶剂可重构粉剂。
本公开的一些实施方式还提供了一种降低/消除内源性干扰的方法，在免疫检测系统中添加上述的抗体或其功能性片段、上述的抗体偶联物、或上述的阻断剂。
在可选的实施方式中，所述内源性干扰为类风湿因子干扰或嗜异性抗体干扰。
本公开的一些实施方式还提供了一种免疫检测的方法，包括：在免疫检测系统中添加上述的抗体或其功能性片段、上述的抗体偶联物、或上述的阻断剂。
本公开的一些实施方式还提供了一种检测IgM的方法，包括：A)在足以发生结合反应的条件下，采用上述任一项所述的抗体或其功能性片段、上述所述的抗体偶联物、或上述的试剂或试剂盒与来自所述受试者的样品接触以进行结合反应；以及B)检测结合反应产生的免疫复合物。
为使本公开实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本公开实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例或实施方式中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本文的制剂或单位剂量的实践或测试，但现在描述一些方法和材料。除非另有说明，否则本文采用或考虑的技术是标准方法。材料、方法和实例仅是说明性而非限制性的。
除非另外指明，否则实践本公开将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratoryManual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methodsin Enzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbookof Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors forMammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，2011)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。
以下实施例中，限制性内切酶、rTaq DNA聚合酶购自Takara公司。MagExtractor-RNA提取试剂盒购自TOYOBO公司。BD SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒购自Takara公司。pMD-18T载体购自Takara公司。质粒提取试剂盒购自天根公司。引物合成和基因测序由Invitrogen公司完成。
实施例
以下结合实施例对本公开中的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1：8G5MRAb 1抗体的制备
1、表达质粒构建
(1)8G5MRAb1抗体基因制备
发明人前期通过杂交瘤制备技术获得分泌抗人IgM单克隆抗体(8G5MRAb1抗体)的杂交瘤细胞株，从分泌抗人IgM单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取mRNA，通过RT-PCR方法获得DNA产物，该产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取Heavy Chain(重链)及Light Chain(轻链)基因克隆各4个克隆送基因测序公司进行测序。
(2)8G5MRAb1抗体可变区基因的序列分析
将上述步骤1-(1)测序得到的基因序列放在Kabat抗体数据库中进行分析，并利用VNTI11.5软件进行分析确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的，其中LightChain扩增出的基因片段中，轻链可变区(VL)基因序列为324bp，其前方有57bp的前导肽序列；Heavy Chain引物对扩增出的基因片段中，重连可变区(VH)基因序列为348bp，属于VH1基因家族，其前方有57bp的前导肽序列。
(3)重组抗体表达质粒的构建
pcDNATM 3.4
Figure BDA0003949465280000141
vector为构建的重组抗体真核表达载体，该表达载体已经引入HindIII、BamHI、EcoRI等多克隆酶切位点，并命名为pcDNA3.4A表达载体，后续简称3.4A表达载体；根据上述步骤1-(2)获得的pMD-18T载体中抗体可变区基因测序结果，设计8G5MRAb1抗体的VL和VH基因特异性引物，两端分别带有HindIII、EcoRI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.73KB的Light Chain基因片段和1.4kb的Heavy Chain基因片段。Heavy Chain和Light Chain基因片段分别采用HindIII/EcoRI双酶切，3.4A载体采用HindIII/EcoRI双酶切，将片段和载体纯化回收后Heavy Chain基因和Light Chain基因分别连接3.4A表达载体中，得到Heavy Chain和Light Chain的重组表达质粒。
2、稳定细胞株筛选
(1)重组抗体表达质粒瞬时转染CHO细胞，确定表达质粒活性
将上述步骤1-(3)制备得到的质粒用超纯水稀释至40μg/100μL，于离心管中将CHO细胞的细胞浓度调节至1.43×107cells/mL，取100μL上述质粒与700μL细胞混合，转入电转杯进行电转，电转后的第3、5、7天取样计数，第7天收样检测。
采用包被液(主要成分NaHCO3)稀释人IgM(购自菲鹏)至1μg/mL，每孔100μL，4℃过夜；次日，使用洗涤液(主要成份Na2HPO4+NaCl)清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μL，于37℃条件下培养1h，拍干；加入稀释后的CHO细胞上清，100μL/孔，于37℃条件下培养30min(部分上清1h)；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG-HRP，每孔100μL，于37℃条件下培养30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μL/孔，主要成份柠檬酸+醋酸钠+乙酰苯胺+过氧化脲)，加入显色液B液(50μL/孔，主要成份柠檬酸+EDTA·2Na+TMB+浓HCl)，培养10min；加入终止液(50μL/孔，EDTA·2Na+浓H2SO4)；在酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。
结果显示加入CHO细胞上清稀释1000倍后反应OD仍大于1.0，未加CHO细胞上清孔反应OD小于0.1，表明质粒瞬转后产生的8G5MRAb1抗体对人IgM有活性。
(2)重组抗体表达质粒线性化
准备下述试剂：Buffer 50μL、步骤1-(3)制备得到的质粒100μg/管、PvuⅠ酶10μL、无菌水补至500μL，37℃水浴酶切过夜；先用等体积的酚/氯仿/异戊醇(下层)(酚：氯仿：异戊醇的体积比为25:24:1)，再用氯仿(水相)依次进行抽提；0.1倍体积(水相)3M醋酸钠和2倍体积乙醇冰上沉淀，70％乙醇漂洗沉淀，去除有机溶剂，待乙醇挥发完全用适量的灭菌水进行复融，最后进行浓度的测定。
(3)重组抗体表达质粒稳定转染，加压筛选稳定细胞株
将步骤2-(2)得到的质粒用超纯水稀释至40μg/100μL，于离心管中将CHO细胞的细胞浓度调至1.43×107cells/mL，取100μL上述质粒与700μLCHO细胞混合，转入电转杯进行电转，次日计数；25μmol/L MSX 96孔加压培养约25天。
显微镜下观察标记长有细胞的克隆孔，并记录汇合度；取培养上清，送样检测；挑选抗体浓度、相对浓度高的细胞株转24孔，3天左右转6孔；3天后保种批量培养，调整CHO细胞的细胞密度至0.5×106cells/mL，取2.2mL进行批量培养，将CHO细胞的细胞密度调节至0.3×106cells/mL，取2mL进行保种；7天6孔批量培养后，将上清送样检测，挑选抗体浓度及细胞直径较小的细胞株转TPP保种传代。
3、重组抗体生产
(1)细胞扩培
将步骤2-(3)获得的细胞复苏之后先在125mL规格的摇瓶中培养，接种体积为30mL，培养基为100％Dynamis培养基，放置于转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％的摇床中。培养72h后，以50万cells/mL接种密度接种扩培，扩培体积根据生产需求进行计算，培养基为100％Dynamis培养基。之后每72h扩培一次。当细胞量满足生产需求时，严格控制接种密度为50万cells/mL左右进行生产。
(2)摇瓶生产及纯化
摇瓶参数：转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳的浓度为8％。流加补料：在摇瓶中培养至72h时开始每天补料，HyCloneTM Cell BoostTM Feed 7a每天流加初始培养体积的3％，Feed 7b每天流加量为初始培养体积的千分之一，一直补到第12天(第12天补料)。葡萄糖在第六天补加3g/L。第13天收样。用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化，纯化步骤采用本领域常规方法进行。取6.6μg纯化的抗体进行还原性SDS-PAGE，电泳图如图1所示。在还原性SDS-PAGE后显示两条带，1条Mr为50KD(重链)，另一条Mr为28KD(轻链)。结果表明，纯化后的抗体为8G5MRAb1。
经上述步骤获得的8G5MRAb1，经测序及Kabat分析，8G5MRAb1的重链CDR1、CDR2、CDR3分别如SEQ ID NO:1～3的氨基酸序列所示，轻链CDR1、CDR2、CDR3分别如SEQ IDNO:4～6的氨基酸序列所示，重链可变区具有如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列、轻链可变区具有如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，重链具有如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列、轻链具有如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
4、发明人对8G5MRAb1的结构进行分析，并进行突变引物设计，重复步骤1-(3)至步骤3-(2)，经活性鉴定，筛选得到突变抗体，分别命名为8G5MRAb2、8G5MRAb3、8G5MRAb4、8G5MRAb5、8G5MRAb6、8G5MRAb7、8G5MRAb8。其中，8G5MRAb1至8G5MRAb8(简称8G5MRAb1～8)八个抗体的重链和轻链的氨基酸序列如表2所示。
表2：8G5MRAb1至8的重链和轻链的氨基酸序列
Figure BDA0003949465280000161
实施例2：不同抗体的亲和力分析、活性鉴定以及性能评估
1、亲和力分析
利用AMC传感器，将实施例1纯化获得的抗体(8G5MRAb1～8)和对照抗体用PBST稀释到20μg/mL，人IgM(购自菲鹏)用PBST进行梯度稀释。
运行流程：缓冲液1(PBST)中平衡60s，抗体溶液中固化抗体300s，缓冲液2(PBST)中孵育180s，抗原溶液中结合420s，缓冲液2中解离1200s，用10mM pH值为1.69的GLY溶液及缓冲液3(PBST)进行传感器再生，输出数据，具体数据如表3所示。
表3：不同抗体的亲和力结果
抗体名称 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s)
对照抗体 1.06E-10 2.17E+04 2.31E-06
8G5MRAb1 6.14E-11 2.20E+05 1.35E-05
8G5MRAb2 6.84E-12 2.09E+05 1.43E-06
8G5MRAb3 5.83E-12 2.16E+05 1.26E-06
8G5MRAb4 1.45E-11 2.24E+05 3.25E-06
8G5MRAb5 8.02E-12 2.17E+05 1.74E-06
8G5MRAb6 1.14E-11 2.26E+05 2.58E-06
8G5MRAb7 4.95E-11 2.12E+05 1.05E-05
8G5MRAb8 8.66E-12 2.99E+05 2.59E-06
注：KD表示平衡解离常数即亲和力；Kon表示结合速率常数；Kdis表示解离速率常数。
2、活性鉴定
使用包被液(主要成分NaHCO3)稀释人IgM(购自菲鹏)至3μg/mL，每孔100μL，4℃过夜；次日，采用洗涤液(主要成份Na2HPO4+NaCl)清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μL，于37℃条件下培养1h，拍干；加入稀释后的实施例1获得的8G5MRAb1～8抗体和对照抗体，100μL/孔，于37℃条件下培养30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG-HRP，每孔100μL，于37℃条件下培养30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μL/孔，主要成份柠檬酸+醋酸钠+乙酰苯胺+过氧化脲)，加入显色液B液(50μL/孔，主要成份柠檬酸+EDTA·2Na+TMB+浓HCl)，培养10min；加入终止液(EDTA·2Na+浓H2SO4)，50μL/孔；在酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值，检测结果如表4所示，8G5MRAb1～8抗体的结合活性高于对照抗体的结合活性。
表4：不同抗体的结合活性结果
Figure BDA0003949465280000171
Figure BDA0003949465280000181
3、抗体的性能评价
3.1在CTNI荧光平台验证阻断效果
在CTNI荧光平台配对检测中，实验组分别用8G5系列阻断剂原料(实施例1获得的8G5MRAb1～8作为阻断剂，即为实验组)和市场主流阻断剂原料分别处理样品垫，对照组样品垫不作处理(即为无阻断剂(空白)组)；分别检测假阳标本，实验结果如表5所示。结果显示，实验组对假阳标本有明显的消除作用，说明8G5系列阻断剂原料起到了阻断效果，同时也略优于市场主流阻断剂原料。
表5：不同抗体的阻断效果
Figure BDA0003949465280000182
表4中，T/C值说明：待测样本加入到检测试剂卡的加样口中，在侧向毛细管作用下，待检样本先经过结合垫，与结合垫上的荧光基团标记抗体发生特异的免疫结合，各自结合形成抗原-抗体荧光复合物，从而被固定在T线中。C线上包被有与游离的荧光基团标记抗体发生反应的物质，当游离的荧光基团标记抗体经过C线时，能够与C线上的物质发生特异的免疫结合，从而被固定在C线中。荧光免疫分析仪检测出的两条带的荧光强度以峰面积体现，并通过仪器自身的计算软件计算T/C值。仪器读值T/C表示T峰面积与C峰面积比值，在质控样本和阳性样本下，T/C越高代表活性越高；在假阳样本下T/C越低，代表阻断效果越好；当T/C值＜0.1时，即判断为阴性样本。
3.2在GRP化学发光平台验证不同抗体的阻断效果
在GRP化学发光平台配对检测中，实验组将8G5系列阻断剂原料(实施例1获得的8G5MRAb1～8作为阻断剂，即为实验组)和市场主流阻断剂原料分别加入到包被体系中，对照组包被体系中不加(即为无阻断剂(空白)组)；分别检测RF标本，实验结果参见表6。结果显示，实验组对RF标本有明显的消除作用，说明8G5系列阻断剂原料起到了阻断效果，同时也略优于市场主流阻断剂原料。
表6：不同抗体的阻断效果
Figure BDA0003949465280000191
表5中的数值为化学发光免疫分析仪读取的OD值，OD值越低，代表检测信号越弱，说明阻断效果越好。
实施例3：抗体稳定性检测
将实施例1获得的8G5MRAb1～8抗体置于4℃(冰箱)、-80℃(冰箱)、37℃(恒温箱)放置21天，取7天、14天、21天抗体样品进行状态观察，并对21天抗体样品进行活性检测，利用酶免法检测OD结果，具体的操作步骤参考实施例2的步骤2，检测结果参见表7。结果显示三种考核条件下抗体放置21天均未见明显蛋白状态变化，活性也未随考核温度的升高呈下降越势。因此，进一步说明实施例1获得的8G5MRAb1～8抗体稳定。
表7：抗体的稳定性检测结果
样品浓度(ng/mL) 125 15.625 0
4℃，21天样品 2.262 1.953 0.038
-80℃，21天样品 2.192 1.962 0.021
37℃，21天样品 2.242 1.988 0.036
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
工业实用性
本公开提供的抗IgM的抗体，其对人IgM具有高亲和性、高反应活性、高灵敏度或特异性。用于免疫检测具有良好的阻断、消除免疫干扰的作用，为免疫诊断提供了一种重要的阻断剂原料来源。因此，本公开提供的抗IgM的抗体、免疫检测的试剂和试剂盒均具备优异的实用性能和广阔的市场应用前景。

Claims (18)

1.一种抗人IgM的抗体或其功能性片段，包括HCDR1、HCDR2、HCDR3和LCDR1、LCDR2、LCDR3，其特征在于，所述HCDR1～HCDR3包括与SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24任一所示重链可变区的HCDR1～HCDR3一致的氨基酸序列；所述LCDR1～LCDR3包括与SEQ ID NO:16、SEQID NO:25～27任一项所示轻链可变区的LCDR1～LCDR3一致的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3由Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact系统定义。
3.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包含以下互补决定区：
HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述的抗体或其功能性片段还包含重链可变区的骨架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，和轻链可变区的骨架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4；
其中，HFR1包括如SEQ ID NO:7、21任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR2包括如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR3包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR4包括如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR1包括如SEQ ID NO:11、22任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR2包括如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR3包括如SEQ ID NO:13、23任一所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR4包括如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
5.一种抗人IgM的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含权利要求1～3任一项所述的HCDR1～HCDR3和权利要求4所述的HFR1～HFR4，所述轻链可变区包含权利要求1～3任一项所述的LCDR1～LCDR3和权利要求4所述的LFR1～LFR4；
可选地，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:15、24任一所示；
所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:16、25、26、27任一所示。
6.根据权利要求1～5任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，还包含恒定区；
可选地，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区；
可选地，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区；
可选地，所述恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人；
可选地，所述恒定区的种属来源为小鼠；
可选地，所述重链恒定区为SEQ ID NO:17或与SEQ ID NO:17具有80％以上同源性的氨基酸序列；
所述轻链恒定区为SEQ ID NO:18或与SEQ ID NO:18具有80％以上同源性的氨基酸序列。
7.根据权利要求1～6任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
8.一种抗人IgM的抗体或其功能性片段，包括重链和/或轻链，其特征在于，所述重链包括权利要求5所述的重链可变区和权利要求6所述的重链恒定区；
所述轻链包括权利要求5所述的轻链可变区和权利要求6所述的轻链恒定区；
可选地，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19、28任一所示；
所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20、29、30、31任一所示。
9.一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物包含权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段以及与其偶联的偶联部分；
可选地，所述偶联部分选自纯化标签或可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质、酶，例如荧光标记、发色团标记、电子致密标记，例如放射性同位素、荧光团、罗丹明及其衍生物、荧光素酶、荧光素、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记中的一种或多种；
可选地，所述偶联部分选自固相载体，例如磁性微球、塑料微球、塑胶微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜。
10.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段。
11.一种细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求10所述的核酸。
12.一种制备权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段的方法，其特征在于，所述方法包括培养权利要求11所述的细胞。
13.权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段在免疫检测中或在制备免疫阻断剂中的应用。
14.一种阻断剂，其特征在于，所述阻断剂包括权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段；
可选地，所述抗体在阻断剂中的浓度为5～100μg/ml。
15.一种检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求9所述的抗体偶联物或权利要求14所述的阻断剂。
16.一种降低/消除内源性干扰的方法，其特征在于，在免疫检测系统中添加权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求9所述的抗体偶联物、或权利要求14所述的阻断剂。
17.一种免疫检测的方法，其特征在于，所述方法包括：
在免疫检测系统中添加权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求9所述的抗体偶联物、或权利要求14所述的阻断剂。
18.一种检测IgM的方法，其特征在于，所述方法包括：
A)在足以发生结合反应的条件下，采用权利要求1～8任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求9所述的抗体偶联物、权利要求14所述的阻断剂或权利要求15所述的试剂或试剂盒与来自所述受试者的样品接触以进行结合反应；以及
B)检测结合反应产生的免疫复合物。
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