JP4623954B2 - 靭帯または腱の修復用の生体相容性の支持骨格装置 - Google Patents
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Description
本特許出願は2002年10月18日に出願されていて「バイオコンパチブル・スキャフォルド・ウイズ・テイシュー・フラグメンツ(Biocompatible Scaffold With Tissue Fragments)」を発明の名称とする米国仮特許出願第60/420,093号、および2002年10月18日に出願されていて「バイオコンパチブル・スキャホルド・フォー・リガメント・オア・テンドン・リペア(Biocompatible Scaffold for Ligament or Tendon Repair)」を発明の名称とする米国仮特許出願第60/419,539号に対して優先権を主張している。
本発明は各種組織の傷害の治療において使用するための生体相容性の組織移植装置に関連しており、さらに、当該生体相容性の組織移植装置を作成する方法およびこれらを使用する方法に関連している。
本発明は以下の添付図面と共に考察した場合の上記の詳細な説明を参照することによりさらに完全に理解される。
種々の関節部分からの健康な軟骨組織をウシの肩関節から入手した。この軟骨組織は骨の組織を実質的に含んでおらず、複数のメス・ブレードを用いて細分化することにより0.2%のコラーゲナーゼの存在下に小さな組織フラグメントを得た。これらの組織フラグメントの大きさは変化しているが、平均で約1mm×1mmの大きさにする必要がある。その後、この細分化した組織を4cm×5cmの合成の生体吸収性のポリカプロラクトン/ポリグリコール酸(PCL/PGA)の支持骨格材料の上に均一に分布した。この場合に、エチレン・オキシドにより滅菌処理したポリマーの支持構造体を種々の組織フラグメントの分布の前にダルベッコ修飾イーグル培地の中に4時間にわたり予備浸漬した。その後、この細分化したフラグメントを充填した支持骨格材料を軟骨細胞増殖培地を含有している一定の10cmの細胞培養皿の中に入れた。このダルベッコ修飾イーグル培地(DMEM−高濃度グルコース)は20%のウシ胎児血清(FCS)、10mMのヘペス(HEPES)、0.1mMの可欠アミノ酸、20mg/mlのL−プロリン、50mg/mlのアスコルビン酸、100mg/mlのペニシリン、100mg/mlのストレプトマイシンおよび0.25mg/mlのアンホテリシンBが補充されている。さらに、この増殖培地は一日おきに補給されている。各支持骨格材料を一定の細胞培養インキュベーターの中において37℃で培養した。さらに、培養後6週間目のサンプルを取り出して各支持骨格材料の中における細胞の分布および移動および軟骨様の基質の生成について分析した。図1は各細胞が細分化した軟骨組織のフラグメントからポリマーの支持骨格材料の中に広く移動している状態を示している(図1A)。これらの移動している細胞はそれぞれの表現型を維持しており、サフラニン−O染色材料による硫酸塩化グリコスアミノグリカンに対して陽性に染色した基質を生成している(図1B)。
上記実施例による細分化した軟骨の組織および細胞を含有している生体吸収性の支持骨格材料をSCIDマウス中に移植した。この対象を生体内における細分化した軟骨性の組織のポリマー支持骨格材料中への軟骨細胞の内部増殖について評価した。直径5mmのポリマー支持骨格材料を各SCIDマウスの外側の胸部領域内において両側に皮下移植した。この移植した支持骨格材料は4週間にわたり細胞増殖を支持するために自然放置した。その後、これらの皮下移植部位およびそれぞれを被覆している皮膚を切除して10%の緩衝液化したホルマリン固定液中に保存した。固定後に、各移植部位を組織学的構造について処理した。これらの組織学的構造はヘマトキシリンおよびエオシン、およびサフラニン−Oにより染色した。図2Aおよび図2Bは十分な細胞が支持骨格材料の中に分布している状態をそれぞれ示している図である。これらの細胞は上記合成の基質におけるサフラニン−Oに対応する強い陽性の染色により示される軟骨細胞様の形態学的構造を示している。
上記実施例1において記載されている方法により調製した細分化した軟骨細胞を一定の4cm×5cmの合成の生体吸収性のポリカプロラクトン/ポリグリコール酸(PCL/PGA)の支持骨格材料において均一に分布した。それぞれの細分化した軟骨組織フラグメントを1mLの高濃度血小板血漿(PRP、ヒューマン社(Human))によりこの支持骨格材料に接着した。60マイクロリットル(60単位)のトロンビンを用いてPRP中のクロット形成を誘発した。細分化した軟骨フラグメントのみを充填した対照の支持骨格材料およびPRPにより接着した細分化した軟骨フラグメントを充填した支持骨格材料を1週間にわたり生体外において培養した後に、実施例2において記載されているように各SCIDマウスに移植した。図3Aは細分化した組織を充填した一定の対照の支持骨格材料の顕微鏡写真である。図3Bは細分化した組織およびPRPを充填した一定の支持骨格材料を示している顕微鏡写真である。この図3BはPRPが軟骨細胞の移動を促進することにおいて有益的であり、各支持骨格材料内の軟骨細胞の分化した表現型の維持を助長することにおいても有益的であることを示している。これらの移動している細胞はそれぞれの表現型を維持しており、サフラニン−O染色材料による硫酸塩化グリコスアミノグリカンに対応して陽性に染色した基質を生成している(図3B)。
複数のブタの背面部に形成した1cm×1cmの傷から集めた健康な全層の皮膚サンプルを10倍の抗体/抗真菌剤を伴うDMEMを入れた50mlの円錐形の試験管内に速やかに入れた。その後、これらの組織サンプルを10倍の抗体/抗真菌剤を含有するPBS中において1回すすぎ洗いしてから、1倍の抗体/抗真菌剤を含有するPBSによるさらに別のすすぎ洗い工程を行なった。その後、この組織を一定の層流フード内において一定のメス・ブレードにより無菌状態で細分化した。このように分散した皮膚のサンプルを15分間にわたり37℃において1mlの0.25%コラーゲナーゼ/0.25%デイスパーゼによる酵素消化処理にかけた(自己由来型細胞分散1番)。別の組のサンプルは最初に500μlの0.25%トリプシンにより10分間にわたり消化し、PBSにより洗浄してトリプシンを除去した後に、15分間にわたり37℃において1mlの0.25%コラーゲナーゼ/0.25%デイスパーゼにより培養した(自己由来型細胞分散2番)。消化後に、これらのサンプルを5分間にわたり2500rpmで遠心処理した。上澄み液を吸引して廃棄した。その後、分散して部分的に消化している皮膚サンプルをPBS中において1回洗浄した後に500μlのPBS中に再懸濁した。約20μlの細胞懸濁液を一定の傷床中に均一に分布して、生体吸収性の支持骨格材料を細胞懸濁液が移動しないように分散状態の細胞の上部に注意深く供給した。この結果、分散状態の細胞は支持骨格材料上に均一に分散して傷床に配置できたと考えられる。図4は自己由来型の細胞の分散状態がケラチノサイトの「島(islands)」状の形態学的構造として存在しており、その一部が傷の表面に向かって支持骨格材料の中を移動していることを示している。
健康な前十字靭帯組織をウシの膝関節から得た。この靭帯組織をメス・ブレードおよび/またははさみを用いて細分化して小さな組織フラグメントを得た。この組織フラグメントの大きさは変化しているがその平均の粒子の大きさは約1mm3 であった。この実施例において、上記靭帯は0.2%のコラーゲナーゼの存在下または非存在下に細分化されている。その後、この細分化した組織を4cm×5cmの合成の生体吸収性のポリカプロラクトン/ポリグリコール酸(PGA/PCL)の支持骨格材料またはポリ乳酸/ポリグリコール酸(PLA/PGA)の支持骨格材料の上に均一に分布した。この場合に、これらの支持骨格材料を1時間にわたり70%エタノール中において滅菌処理してから、PBSにより3回にわたり洗浄した。その後、これらの支持骨格材料を組織フラグメントの分布の前に1倍の抗体/抗真菌剤を伴うダルベッコ修飾イーグル培地中において1時間乃至2時間にわたり予備浸漬した。このようにして細分化したフラグメントを充填した支持骨格材料を増殖培地を入れた一定の10cmの細胞培養皿の中に入れ、この増殖培地は20%のウシ胎児血清(FCS)、100mg/mlのペニシリン、100mg/mlのストレプトマイシンおよび0.25mg/mlのアンホテリシンBが補充されているダルベッコ修飾イーグル培地(DMEM−高濃度グルコース)により構成されている。その後、細分化した組織を伴う各支持骨格材料を一定の細胞培養インキュベーターの中において37℃で培養し、上記増殖培地を一日おきに交換した。この培養後の3週間目および6週間目に、各サンプルを取り出してそれぞれの支持骨格材料内への細胞の分布および移動について分析した。図5はコラーゲナーゼを伴う(図5A)およびコラーゲナーゼを伴わない(図5B)で処理した場合の細分化した前十字靭帯の組織フラグメントによる培養の6週間後におけるポリマー支持骨格材料中に広く移動している細胞をそれぞれ示している。
半月板を成育したヤギの膝関節から採取して、4mmの直径の体外移植組織片(2mmの厚さ)を白色および赤色/白色の各領域から採取した。2mmのパンチ生検試料をこれらの体外移植片の中心部から取り出した。その後、2mmの直径および2mmの厚さの一定の生体吸収性の支持骨格材料であるポリ乳酸/ポリカプロラクトン(PLA/PCL)を上記半月板の体外移植組織片の中心部に挿入した。これらの支持骨格材料を伴う体外移植組織片を一日おきの培地(1%FBS、1倍の抗体/抗真菌剤)の交換を伴って標準的な細胞培養条件下において2週間および3週間にわたり培養した。培養後の14日目および21日目において、各サンプルの半分を組織学的処理のために10%の緩衝液化したホルマリン中に入れた。この結果、複数の部分がヘマトキシリンにより染色して細胞が可視化した。さらに、各支持骨格材料における残りのサンプルを取り出してその細胞数をサイクオント(CyQuant)アッセイ法によるDNAの定量化により推定した。図6Aは上記の半月板体外移植組織片からポリマー支持骨格材料中への細胞移動の存在を示している図である。また、図6Bは各支持骨格材料中への細胞移動を示している各支持骨格材料の断面における組織学的構造を示している図である。
ウシの肩関節から健康な軟骨組織および骨軟骨栓子を入手した。細分化した軟骨組織を上記実施例1において記載されている方法に従って調製した。加えて、骨軟骨栓子(1cm×1cm)を一定のダイアモンド形骨鋸によりウシの肩関節から採取して、骨カッターにより切断することにより骨軟骨ペースト材を得た。次に、250mgのサンプル(細分化した軟骨または骨軟骨ペースト)を2cm×5cmの合成で生体吸収性の(PCL/PGA)支持骨格材料上に分布した。その後、この細分化した軟骨フラグメントまたは骨軟骨ペースト材を充填した支持骨格材料を軟骨増殖培地を入れた一定の10cmの細胞培養皿の中に入れて、上記実施例1において記載されているように一定の細胞培養インキュベーターの中で培養した。培養後の3週間目において、各サンプルを取り出して上記実施例2において記載されているように各SCIDマウスの中に移植した。この対象を4週間にわたり移植後の支持骨格材料内に形成される組織の性質について評価した。さらに、ヘマトキシリンおよびエオシン(H/E)、サフラニン−O(SO)および修飾マロリーズ・アニリン・ブルー(Modified Mallory's Aniline Blue)(MMAB)による染色により各支持骨格材料内における細胞分布および当該支持骨格材料内において形成した基質の性質についてそれぞれの組織学的構造の部分を分析した。図7A乃至図7Cは細胞が細分化した軟骨組織フラグメントから支持骨格材料内に広く移動してサフラニン−Oに対して陽性に染色していることをそれぞれ示している。このことは図7Bにおいて特に明らかであり、この図においては、写真の中心部および上部における比較的に暗い領域が陽性の染色を示している。さらに、図8A乃至図8Cは各細胞が骨軟骨ペーストから各ポリマー支持骨格構造中に移動していることを示している図である。しかしながら、形成されている組織は軟骨ならびに新しい骨を含んでいる。この新しい骨は図8Cにおいて比較的に明るい矢印により示されており、古い骨は図8Aおよび図8Cにおいて比較的に暗い矢印により示されている。
健康な軟骨組織をウシの肩関節の接合部分から得た。その後、細分化した軟骨組織を上記実施例1において記載されている方法に従って調製した。生検パンチ体を用いて2mmおよび3mmの直径の各軟骨組織フラグメントを得た。これらのフラグメントの厚さは約1mmであった。直径2mmまたは3mmで250mgの細分化した軟骨または軟骨フラグメントを2cm×5cmの合成の生体吸収性の(PCL/PGA)支持骨格材料上に分布した。その後、この軟骨フラグメントを充填した支持骨格材料を軟骨増殖培地を入れた一定の10cmの細胞培養皿の中に入れて、上記実施例1において記載されているように一定の細胞培養インキュベーター内において培養した。培養後3週間において、各サンプルを取り出してDNA含有量の定量により細胞数を推定した。さらに、5mmの生検パンチ体を実施例2において記載されているように各SCIDマウス内に移植した。この対象を上記処理における組織フラグメントの最適な寸法について評価するために用いた。図9は細分化した軟骨組織を充填した各支持骨格材料において最大の細胞数が観察されたこと、および直径3mmの軟骨フラグメントを充填した各支持骨格材料において最小の細胞数が観察されたことを示している。図10A乃至図10Cは各SCIDマウス内に移植されてサフラニン−Oにより染色されている各支持骨格材料の組織学的な評価を示している。これらの結果は細分化した軟骨組織および直径2mmの軟骨フラグメントを充填した各支持骨格材料における均一な軟骨様組織(染色されている比較的に暗い領域)を示している(図10Aおよび図10B)。一方、直径3mmの軟骨フラグメントを充填した各支持骨格材料は均一に充たされていなかった(図10C)。
(a)腱または靭帯の修復移植片において、
1よりも大きなアスペクト比を有する一定の生体相容性の支持骨格材料、および
靭帯組織または腱組織から由来していて、前記支持骨格材料の少なくとも一部分に結合している少なくとも1種類の細分化した組織粒子を備えている移植片。 (1)前記支持骨格材料が一定の円筒形状または一定の楕円形状を有している実施態様(a)に記載の移植片。
(2)前記アスペクト比が約2よりも大きく100よりも小さい範囲内である実施態様(a)に記載の移植片。
(3)前記支持骨格材料が95:5のラクチドおよびグリコリドの一定のコポリマーである実施態様(a)に記載の移植片。
(4)前記支持骨格材料がラクチド、グリコリド、ジオキサノン、およびカプロラクトンから成る群から選択されるモノマーにより形成される種々のポリマーまたはコポリマーにより作成されている実施態様(a)に記載の移植片。
(5)前記移植片がコラーゲン、フィブリン、およびシルクから成る群から選択される種々の天然ポリマーを含む実施態様(a)に記載の移植片。
(7)前記支持骨格材料が約3mm乃至12mmの範囲内の一定の直径を有している実施態様(a)に記載の移植片。
(8)前記支持骨格材料が天然の腱または靭帯の組織の引張強さおよび弾性率に類似している一定の引張強さおよび一定の弾性率を有している実施態様(a)に記載の移植片。
(9)前記支持骨格材料の引張強さが約1000N乃至2500Nの範囲内である実施態様(8)に記載の移植片。
(10)前記支持骨格材料の弾性率が約150N/m乃至200N/mの範囲内である実施態様(8)に記載の移植片。
(12)前記支持骨格材料の再吸収特性が少なくとも3ヶ月に及ぶ実施態様(11)に記載の移植片。
(13)前記支持骨格材料が一定のメッシュ材部品により補強されている一定の発泡体部品により形成されている実施態様(a)に記載の移植片。
(14)前記メッシュ材部品がポリジオキサノンを含み、前記発泡体部品が35:65のε−カプロラクトンおよびグリコリドの一定のコポリマーである実施態様(13)に記載の移植片。
(15)前記支持骨格材料が細胞および組織の内部成長を可能にするために十分な一定の大きさを有する複数の気孔を伴う一定の連続気泡型の多孔質構造を有している実施態様(13)に記載の移植片。
(17)前記発泡体部品が約300ミクロン乃至2mmの範囲内の一定の厚さを有している実施態様(13)に記載の移植片。
(18)前記メッシュ材部品が約12%乃至80%の範囲内の一定のメッシュ密度を有している実施態様(13)に記載の移植片。
(19)前記支持骨格材料が複数のフィラメントにより形成されている実施態様(a)に記載の移植片。
(20)前記フィラメントを形成している繊維の大部分が一定の長手方向に沿って整列している実施態様(19)に記載の移植片。
(22)前記メッシュ材が前記支持骨格材料の外表面部において形成されている実施態様(13)に記載の移植片。
(23)前記メッシュ材が一定の編み状または一定の織り状の構造である実施態様(21)に記載の移植片。
(24)前記メッシュ材が生体崩壊性で生体相容性である実施態様(21)に記載の移植片。
(25)さらに、靭帯組織、骨−膝蓋骨腱、腱−骨腱、膝窩腱、または腸頸靭帯から成る群から選択される一定の自家移植片を含む実施態様(a)に記載の移植片。
(27)前記生体相容性の支持骨格材料がさらに当該支持骨格材料に供給されている少なくとも1種類の付加的な生物学的要素を含む実施態様(a)に記載の移植片。
(28)前記少なくとも1種類の付加的な生物学的要素が種々の増殖因子、基質タンパク質、ペプチド、抗体、酵素、サイトカイン、ウイルス、核酸、ペプチド、単離した細胞、血小板、およびこれらの組み合わせ物を含む実施態様(27)に記載の移植片。
(29)前記生体相容性の支持骨格材料がさらに当該生体相容性の支持骨格材料に対して一定の組織フラグメントの懸濁液を固定するための一定の接着剤を含む実施態様(a)に記載の移植片。
(30)前記接着剤がヒアルロン酸、フィブリン・グルー、フィブリン・クロット、コラーゲン・ゲル、ゼラチン−レゾルシン−ホルマリン接着剤、貽貝基材接着剤、ジヒドロキシフェニルアラニン(DOPA)基材接着剤、キトサン、トランスグルタミナーゼ、ポリ(アミノ酸)基材接着剤、セルロース基材接着剤、合成アクリレート基材接着剤、高濃度血小板血漿(PRP)、マトリゲル、モノステアロイル・グリセロール・コ−スクシネート(MGSA)、モノステアロイル・グリセロール・コ−スクシネート/ポリエチレン・グリコール(MGSA/PEG)コポリマー、ラミニン、エラスチン、プロテオグリカン、およびこれらの組み合わせ物から成る群から選択される一定の固定剤を含む実施態様(29)に記載の移植片。
(31)前記接着剤がジビニル・スルホン(DVS)、ポリエチレン・グリコール・ジビニル・スルホン(VS-PEG-VS)、ヒドロキシエチル・メタクリレート・ジビニル・スルホン(HEMA-DIS-HEMA)、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、アルデヒド、イソシアネート、アルキルおよびアリールのハロゲン化物、イミドエステル、N−置換マレイミド、アシル化化合物、カルボジイミド、塩酸化物、N−ヒドロキシスクシンイミド、光、pH、温度、およびこれらの組み合わせ物から成る群から選択される一定の架橋−連結剤を含む実施態様(29)に記載の移植片。
Claims (31)
- 腱または靭帯の修復移植片において、
1よりも大きなアスペクト比を有する一定の生体相容性の支持骨格材料、および
靭帯組織または腱組織から由来していて、前記支持骨格材料の少なくとも一部分に結合している少なくとも1種類の細分化した組織粒子を備え、
前記少なくとも1種類の細分化した組織粒子は、前記組織粒子から前記支持骨格材料上に移動できる、生活可能な細胞を含む、移植片。 - 前記支持骨格材料が円筒形状または楕円形状を有している請求項1に記載の移植片。
- 前記アスペクト比が2よりも大きく100よりも小さい範囲内である請求項1または2に記載の移植片。
- 前記支持骨格材料が95:5のラクチドおよびグリコリドのコポリマーである請求項1から3のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記支持骨格材料がラクチド、グリコリド、ジオキサノン、およびカプロラクトンから成る群から選択されるモノマーにより形成される種々のポリマーまたはコポリマーにより作成されている請求項1から4のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記移植片がコラーゲン、フィブリン、およびシルクから成る群から選択される種々の天然ポリマーを含む請求項1から5のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記移植片が前記支持骨格材料における内側部分の中または当該支持骨格材料における周縁部分の上に存在しているコラーゲンまたはシルクの材料片を含む請求項2に記載の移植片。
- 前記支持骨格材料が3mm乃至12mmの範囲内の一定の直径を有している請求項1から7のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記支持骨格材料の引張強さが1000N乃至2500Nの範囲内である請求項1から8のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記支持骨格材料の弾性率が150N/m乃至200N/mの範囲内である請求項1から9のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記支持骨格材料がメッシュ材部品により補強されている発泡体部品により形成されている請求項1から10のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記メッシュ材部品がポリジオキサノンを含み、前記発泡体部品が35:65のε−カプロラクトンおよびグリコリドのコポリマーである請求項11に記載の移植片。
- 前記支持骨格材料が細胞および組織の内部成長を可能にするために十分な大きさを有する複数の気孔を伴う連続気泡型の多孔質構造を有している請求項11に記載の移植片。
- 前記気孔が50ミクロン乃至1000ミクロンの範囲内の平均直径を有している請求項13に記載の移植片。
- 前記発泡体部品が300ミクロン乃至2mmの範囲内の厚さを有している請求項11に記載の移植片。
- 前記メッシュ材部品が12%乃至80%の範囲内のメッシュ密度を有している請求項11に記載の移植片。
- 前記支持骨格材料が複数のフィラメントにより形成されている請求項1から16のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記フィラメントを形成している繊維の大部分が一定の長手方向に沿って整列している請求項17に記載の移植片。
- 前記支持骨格材料が編み状の材料、織り状の材料、および編み組み状の材料から成る群から選択される材料により形成されている請求項1から18のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記メッシュ材が前記支持骨格材料の外表面部において形成されている請求項11に記載の移植片。
- 前記メッシュ材が編み状または織り状の構造である請求項19に記載の移植片。
- 前記メッシュ材が生体崩壊性で生体相容性である請求項19に記載の移植片。
- さらに、靭帯組織、骨−膝蓋骨腱、腱−骨腱、膝窩腱、または腸頸靭帯から成る群から選択される自家移植片を含む請求項1から22のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記移植片および自家移植片が、当該移植片が自家移植片の周囲に配置されている状態、当該移植片が自家移植片により囲まれている状態、および当該移植片が自家移植片と並んで配置されている状態から成る群から選択される配向状態で構成されている請求項23に記載の移植片。
- 前記生体相容性の支持骨格材料がさらに当該支持骨格材料に供給されている少なくとも1種類の付加的な生物学的要素を含む請求項1から24のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記少なくとも1種類の付加的な生物学的要素が種々の増殖因子、基質タンパク質、ペプチド、抗体、酵素、サイトカイン、ウイルス、核酸、ペプチド、単離した細胞、血小板、およびこれらの組み合わせ物を含む請求項25に記載の移植片。
- 前記生体相容性の支持骨格材料がさらに当該生体相容性の支持骨格材料に対して組織フラグメントの懸濁液を固定するための接着剤を含む請求項1から26のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記接着剤がヒアルロン酸、フィブリン・グルー、フィブリン・クロット、コラーゲン・ゲル、ゼラチン−レゾルシン−ホルマリン接着剤、貽貝基材接着剤、ジヒドロキシフェニルアラニン基材接着剤、キトサン、トランスグルタミナーゼ、ポリアミノ酸基材接着剤、セルロース基材接着剤、合成アクリレート基材接着剤、高濃度血小板血漿、マトリゲル、モノステアロイル・グリセロール・コ−スクシネート、モノステアロイル・グリセロール・コ−スクシネート/ポリエチレン・グリコールコポリマー、ラミニン、エラスチン、プロテオグリカン、およびこれらの組み合わせ物から成る群から選択される固定剤を含む請求項27に記載の移植片。
- 前記接着剤がジビニル・スルホン、ポリエチレン・グリコール・ジビニル・スルホン、ヒドロキシエチル・メタクリレート・ジビニル・スルホン、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、アルデヒド、イソシアネート、アルキルおよびアリールのハロゲン化物、イミドエステル、N−置換マレイミド、アシル化化合物、カルボジイミド、N−ヒドロキシスクシンイミド、およびこれらの組み合わせ物から成る群から選択される架橋−連結剤を含む請求項27に記載の移植片。
- 前記少なくとも1種類の細分化した組織粒子は、0.1mm3 乃至3mm3 の範囲内の大きさを有する請求項1から29のいずれか1つに記載の移植片。
- 前記少なくとも1種類の細分化した組織粒子は、0.1mm3 乃至1mm3 の範囲内の大きさを有する請求項1から30のいずれか1つに記載の移植片。
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