JP4448552B1 - ゲル状集合体中への物質の混合方法 - Google Patents
ゲル状集合体中への物質の混合方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4448552B1 JP4448552B1 JP2009054982A JP2009054982A JP4448552B1 JP 4448552 B1 JP4448552 B1 JP 4448552B1 JP 2009054982 A JP2009054982 A JP 2009054982A JP 2009054982 A JP2009054982 A JP 2009054982A JP 4448552 B1 JP4448552 B1 JP 4448552B1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gel
- sol
- mixed
- aggregate
- self
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/227—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L27/222, A61L27/225 or A61L27/24
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Colloid Chemistry (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Physical Or Chemical Processes And Apparatus (AREA)
- Jellies, Jams, And Syrups (AREA)
Abstract
【課題】ゲル状集合体中に混合対象物を短時間で均一に混合し得る混合方法を提供すること。
【解決手段】ゲル状集合体を凍結すること、凍結した集合体を融解してゾルを得ること、得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む、ゲル状集合体中に混合対象物を混合する方法。
【選択図】なし
【解決手段】ゲル状集合体を凍結すること、凍結した集合体を融解してゾルを得ること、得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む、ゲル状集合体中に混合対象物を混合する方法。
【選択図】なし
Description
本発明は、ゲル状集合体中への物質の混合方法に関する。
近年、ゲル状集合体が注目されており、特に自己集合性を有する分子が分子集合して形成されたゲル状集合体が注目され、様々な用途への展開が期待されている。このようなゲル状集合体としては、例えば、自己集合性ペプチドの分子集合体であるペプチドゲルが挙げられ、該ペプチドゲルは、再生医療等の分野でスキャフォールド（細胞の足場）としての用途を有している。該ペプチドゲルをスキャフォールドとして使用する場合において、既にゲル化したペプチドゲルと細胞等の物質とを混合する際には、ゲルに３０分程度超音波処理してから混合するという方法が採用されている（非特許文献１）。しかしながら、該方法によれば、超音波処理に時間と手間がかかり、さらには、物質が十分に混合されないという問題がある。
Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００５，１０２（２４） ８４１４−８４１９
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであり、その目的は、ゲル状集合体中に混合対象物を短時間で均一に混合し得る混合方法を提供することである。
本発明によれば、ゲル状集合体中に混合対象物を混合する方法が提供される。該方法は、
ゲル状集合体を凍結すること、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む。
好ましい実施形態においては、上記ゲル状集合体が、自己集合性分子が分子集合することによって形成されたゲルである。
好ましい実施形態においては、上記ゲル状集合体が、粘土鉱物が集合することによって形成されたゲルである。
好ましい実施形態においては、上記自己集合性分子が、自己集合性ペプチドである。
本発明の別の局面によれば、混合対象物が混合されたゲル状集合体の製造方法が提供される。該方法は、
ゲル状集合体を凍結すること、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む。
ゲル状集合体を凍結すること、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む。
好ましい実施形態においては、上記ゲル状集合体が、自己集合性分子が分子集合することによって形成されたゲルである。
好ましい実施形態においては、上記ゲル状集合体が、粘土鉱物が集合することによって形成されたゲルである。
好ましい実施形態においては、上記自己集合性分子が、自己集合性ペプチドである。
本発明の別の局面によれば、混合対象物が混合されたゲル状集合体の製造方法が提供される。該方法は、
ゲル状集合体を凍結すること、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む。
本発明によれば、ゲル状集合体をゾル化した状態で混合を行うので、混合対象物を短時間で均一に混合し得る。
Ａ．語句の定義
（１）ゲル状集合体
「ゲル状集合体」とは、自己集合性分子または自己集合性を有する結晶が、媒質中において自発的に集合することによって形成されたゲルをいう。
（２）自己集合性分子
「自己集合性分子」とは、媒質中において、分子同士の相互作用を介して自発的に集合する分子をいう。このような分子は、分子間引力により自発的に凝集し、秩序正しく、安定に、共有結合によらずに分子集団を形成（いわゆる、分子集合）し得る。相互作用としては、特に限定されず、例えば、水素結合、イオン間相互作用、ファンデルワールス力等の静電的相互作用、疎水性相互作用が挙げられる。
（３）ゲル
「ゲル」とは、流動性を失ったコロイドである。ゲルは、粘性的な性質と弾性的な性質とを併せ持つ。具体的には、例えば、動的粘弾性測定を行なって、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’を測定したときに、「Ｇ’＞Ｇ’’」となるものをいう。
（４）ゾル
「ゾル」とは、流動性を有するコロイドである。具体的には、例えば、動的粘弾性測定を行なって、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’を測定したときに、「Ｇ’＜Ｇ’’」となるものをいう。
（５）ゾル‐ゲル転移
「ゾル‐ゲル転移」とは、貯蔵弾性率Ｇ’と損失弾性率Ｇ’’が「Ｇ’＞Ｇ’’」である状態から「Ｇ’＜Ｇ’’」である状態、または「Ｇ’＜Ｇ’’」である状態から「Ｇ’＞Ｇ’’」である状態へ転移する現象をいい、該現象が生じる温度をゾル‐ゲル転移点という。すなわち、ゾル‐ゲル転移点は「Ｇ’＝Ｇ’’」となる点である。
（１）ゲル状集合体
「ゲル状集合体」とは、自己集合性分子または自己集合性を有する結晶が、媒質中において自発的に集合することによって形成されたゲルをいう。
（２）自己集合性分子
「自己集合性分子」とは、媒質中において、分子同士の相互作用を介して自発的に集合する分子をいう。このような分子は、分子間引力により自発的に凝集し、秩序正しく、安定に、共有結合によらずに分子集団を形成（いわゆる、分子集合）し得る。相互作用としては、特に限定されず、例えば、水素結合、イオン間相互作用、ファンデルワールス力等の静電的相互作用、疎水性相互作用が挙げられる。
（３）ゲル
「ゲル」とは、流動性を失ったコロイドである。ゲルは、粘性的な性質と弾性的な性質とを併せ持つ。具体的には、例えば、動的粘弾性測定を行なって、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’を測定したときに、「Ｇ’＞Ｇ’’」となるものをいう。
（４）ゾル
「ゾル」とは、流動性を有するコロイドである。具体的には、例えば、動的粘弾性測定を行なって、貯蔵弾性率Ｇ’及び損失弾性率Ｇ’’を測定したときに、「Ｇ’＜Ｇ’’」となるものをいう。
（５）ゾル‐ゲル転移
「ゾル‐ゲル転移」とは、貯蔵弾性率Ｇ’と損失弾性率Ｇ’’が「Ｇ’＞Ｇ’’」である状態から「Ｇ’＜Ｇ’’」である状態、または「Ｇ’＜Ｇ’’」である状態から「Ｇ’＞Ｇ’’」である状態へ転移する現象をいい、該現象が生じる温度をゾル‐ゲル転移点という。すなわち、ゾル‐ゲル転移点は「Ｇ’＝Ｇ’’」となる点である。
Ｂ．混合方法
本発明の混合方法は、ゲル状集合体中に混合対象物を混合する方法であって、
ゲル状集合体を凍結すること（凍結工程）、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること（融解工程）、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること（混合工程）、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成すること（ゲル化工程）を含む。該方法は、必要に応じて、任意の工程をさらに含んでもよい。ゲル状集合体が、自己集合性分子が分子集合することによって形成されたゲルである場合、凍結融解することにより、分子間の結合が切断されてゲルを構成する三次元網目構造が崩壊するので、分子が均一に分散したゾルが得られ得る。また、ゲル状集合体が、自己集合性を有する結晶が集合することによって形成されたゲルである場合、凍結融解することにより、結晶間の結合が切断されて、結晶が均一に分散したゾルが得られ得る。本発明においては、このようにして得られた均一性の高いゾルと混合対象物とを混合するので、再形成されたゲル状集合体の内部においては、混合対象物が均一に分散された状態で存在し得る。凍結融解という極めて簡易な操作でゲル状集合体中に均一に混合対象物を混合し得ることは、本発明の大きな効果の１つである。
本発明の混合方法は、ゲル状集合体中に混合対象物を混合する方法であって、
ゲル状集合体を凍結すること（凍結工程）、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること（融解工程）、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること（混合工程）、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成すること（ゲル化工程）を含む。該方法は、必要に応じて、任意の工程をさらに含んでもよい。ゲル状集合体が、自己集合性分子が分子集合することによって形成されたゲルである場合、凍結融解することにより、分子間の結合が切断されてゲルを構成する三次元網目構造が崩壊するので、分子が均一に分散したゾルが得られ得る。また、ゲル状集合体が、自己集合性を有する結晶が集合することによって形成されたゲルである場合、凍結融解することにより、結晶間の結合が切断されて、結晶が均一に分散したゾルが得られ得る。本発明においては、このようにして得られた均一性の高いゾルと混合対象物とを混合するので、再形成されたゲル状集合体の内部においては、混合対象物が均一に分散された状態で存在し得る。凍結融解という極めて簡易な操作でゲル状集合体中に均一に混合対象物を混合し得ることは、本発明の大きな効果の１つである。
Ｂ−１．凍結工程
ゲル状集合体としては、凍結融解によってゾルを形成し、可逆的なゾル−ゲル転移特性を有する限り、任意の適切な集合体が採用され得る。凍結融解によってゾルを形成した後のゲルへの転移は、時間応答性、温度応答性、圧力応答性のいずれによるものであってもよく、また上記応答性のうち２つ以上の要因によるものであってもよい。ゲル状集合体は、該集合体を形成する分子または結晶と、媒質と、必要に応じて任意の添加物を含む。
ゲル状集合体としては、凍結融解によってゾルを形成し、可逆的なゾル−ゲル転移特性を有する限り、任意の適切な集合体が採用され得る。凍結融解によってゾルを形成した後のゲルへの転移は、時間応答性、温度応答性、圧力応答性のいずれによるものであってもよく、また上記応答性のうち２つ以上の要因によるものであってもよい。ゲル状集合体は、該集合体を形成する分子または結晶と、媒質と、必要に応じて任意の添加物を含む。
上記自己集合性分子または自己集合性を有する結晶としては、可逆的なゾル−ゲル転移特性を有するコロイドを形成し、凍結融解によってゾルを形成する限り、任意の適切な分子または結晶が選択され得る。好ましい自己集合性分子としては、自己集合性ペプチド等が挙げられる。好ましい自己集合性を有する結晶としては、粘土鉱物等が挙げられる。このような分子または結晶から形成されたゲルは、架橋剤、凝集剤等のゲル化剤を用いることなく、自己集合性分子間または結晶間に形成された比較的弱い非共有結合に依存しているので、凍結融解処理により、これらの結合が容易に切断されてゾル化し得る。また、分子集合によってゾルからゲルの再形成が自発的に行われ得るからである。
自己集合性ペプチドの好ましい例としては、下記のアミノ酸配列からなる自己集合性ペプチドがあげられる。
アミノ酸配列：ａ１ｂ１ｃ１ｂ２ａ２ｂ３ｄｂ４ａ３ｂ５ｃ２ｂ６ａ４
（該アミノ酸配列中、ａ１〜ａ４は、塩基性アミノ酸残基であり；ｂ１〜ｂ６は、非電荷極性アミノ酸残基および／または疎水性アミノ酸残基であり、ただし、そのうちの少なくとも５個は、疎水性アミノ酸残基であり；ｃ１およびｃ２は、酸性アミノ酸残基であり；ｄは、疎水性アミノ酸残基である。）
アミノ酸配列：ａ１ｂ１ｃ１ｂ２ａ２ｂ３ｄｂ４ａ３ｂ５ｃ２ｂ６ａ４
（該アミノ酸配列中、ａ１〜ａ４は、塩基性アミノ酸残基であり；ｂ１〜ｂ６は、非電荷極性アミノ酸残基および／または疎水性アミノ酸残基であり、ただし、そのうちの少なくとも５個は、疎水性アミノ酸残基であり；ｃ１およびｃ２は、酸性アミノ酸残基であり；ｄは、疎水性アミノ酸残基である。）
上記アミノ酸配列を有する自己集合性ペプチドの具体例としては、以下の配列を有するペプチドが挙げられる。
ｎ−ＲＬＤＬＲＬＡＬＲＬＤＬＲ−ｃ（配列番号１）
ｎ−ＲＬＤＬＲＬＬＬＲＬＤＬＲ−ｃ（配列番号２）
ｎ−ＲＬＤＬＲＬＡＬＲＬＤＬＲＬ−ｃ（配列番号３）
ｎ−ＲＬＤＬＲＬＡＬＲＬＤＬＲ−ｃ（配列番号１）
ｎ−ＲＬＤＬＲＬＬＬＲＬＤＬＲ−ｃ（配列番号２）
ｎ−ＲＬＤＬＲＬＡＬＲＬＤＬＲＬ−ｃ（配列番号３）
自己集合性ペプチドの別の好ましい具体例としてはＷＯ２００７／０００９７９号パンフレット、米国特許５６７０４８３号等に記載のペプチドが挙げられる。また、これらの自己集合性ペプチドに保護基の導入等の修飾を施したペプチドも本発明の方法に好ましく適用され得る。
上記自己集合性ペプチドは、Ｆｍｏｃ法等の固相法又は液相法等の化学合成方法、遺伝子組換え発現等の分子生物学的方法で作製し得る。
粘土鉱物の好ましい具体例としては、モンモリロナイト、バイデライト、ヘクトライト、サポナイト、スチブンサイト等のスメクタイト族鉱物が挙げられる。これらは、天然のものであってもよく、合成品であってもよい。
ゲル状集合体の媒質は、該集合体を形成する分子または結晶の種類、濃度等に応じて適切に選択され得る。例えば、自己集合性ペプチドまたは粘土鉱物から形成されるゲル状集合体においては、媒質は、好ましくは水である。
上記添加物は、該集合体を形成する分子または結晶の種類、濃度等に応じて適切に選択され得る。該添加物としては、例えば、緩衝剤、界面活性剤、キレート剤などが挙げられる。
ゲル状集合体中の添加物の濃度は、ゲル化工程におけるゲルの再形成に悪影響を及ぼさない濃度に設定され得る。該濃度は、ゲル状集合体を形成する分子または結晶の種類、濃度等に応じて、適切に設定され得るが、通常、低い濃度であることが好ましい。例えば、自己集合性ペプチドゲルの場合、緩衝剤としては、ＨＥＰＥＳおよびＴｒｉｓ−ＨＣｌは終濃度が、好ましくは５０ｍＭ以下、さらに好ましくは４０ｍＭ以下である。炭酸水素ナトリウム溶液および炭酸ナトリウム溶液は終濃度が、好ましくは５ｍＭ以下、さらに好ましくは４ｍＭ以下である。ＰＢＳは終濃度が、好ましくは０．５×ＰＢＳ以下、さらに好ましくは０．３×ＰＢＳ以下である。また緩衝剤以外の添加物として、局方生理食塩水は終濃度が、好ましくは０．５重量％以下、さらに好ましくは０．４重量％以下である。
上記ゲル状集合体は、該集合体を構成する分子または結晶の種類および濃度、媒質の種類等に応じて、任意の適切な方法によって調製され得る。例えば、自己集合性ペプチドゲルは、自己集合性ペプチドを好ましくは０．１〜５ｗ／ｖ％、さらに好ましくは０．２〜３ｗ／ｖ％となるように所望の媒質中に溶解または分散してペプチドゾルを調製し、該ペプチドゾルを静置して自己集合性ペプチドを分子集合させることにより調製され得る。また、自己集合性ペプチドゲルは、例えば、商品名「ＢＤＴＭ ＰｕｒａＭａｔｒｉｘＴＭ ペプチド ハイドロゲル」（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）等の市販品として入手可能である。また、粘土鉱物から形成されるゲル状集合体は、例えば、商品名「ラポナイトＸＬＧ」（ラポート社製）、商品名「ラポナイトＲＤ」（ラポート社製）等の市販品として入手可能である。
凍結条件は、ゲル状集合体が凍結する限りにおいて、任意の適切な条件が採用され得る。凍結温度は、ゲル状集合体が凍結する温度以下であればよい。凍結速度にも制限はなく、徐々に冷凍してもよく、急速冷凍してもよい。例えば、自己集合性ペプチドゲルの場合は、好ましくは−１０℃以下の温度条件下に置くことで好適に凍結され得る。
凍結手段としては、家庭用または業務用冷凍庫、液体窒素等の任意の適切な凍結手段が選択され得る。なお、凍結した集合体は、融解工程に供するまでの任意の期間、凍結したまま保存することが可能である。
Ｂ−２．融解工程
融解温度は、上記凍結した集合体が融解してゾルを形成する温度であれば、任意の適切な温度に設定され得る。一定の温度で融解してもよく、異なる温度で段階的に融解してもよい。融解速度および時間に制限はなく、徐々に融解してもよく、急速に融解してもよい。例えば、自己集合性ペプチドのゾルを得る場合は、好ましくは５〜７０℃、さらに好ましくは１５〜４５℃の温度条件下に凍結した自己集合性ペプチドを置くことで好適に融解を行い得る。
融解温度は、上記凍結した集合体が融解してゾルを形成する温度であれば、任意の適切な温度に設定され得る。一定の温度で融解してもよく、異なる温度で段階的に融解してもよい。融解速度および時間に制限はなく、徐々に融解してもよく、急速に融解してもよい。例えば、自己集合性ペプチドのゾルを得る場合は、好ましくは５〜７０℃、さらに好ましくは１５〜４５℃の温度条件下に凍結した自己集合性ペプチドを置くことで好適に融解を行い得る。
融解手段としては、任意の適切な手段が選択され得る。融解手段の具体例としては、水浴、油浴、恒温槽等が挙げられる。
上記のようにゲル状集合体を凍結融解することにより、ゲルを形成する分子間または結晶間の種々の結合が切断されて、ゾルが得られる。３０分程度の超音波処理によってもゲルをゾル化することが可能であるが、分子間または結晶間の種々の結合を十分に切断することができず、照射後、すばやくゲル化してしまう。そのため、混合対象物を均一に混合することができない。これに対し、凍結融解によって得られたゾルは分子間または結晶間の種々の結合が十分に切断されるので、粘度が著しく低下し、後述の混合工程において、混合対象物質と均一に混合することが可能である。
Ｂ−３．混合工程
混合対象物は、目的等に応じて、任意の適切な物質が選択され得る。混合対象物の具体例としては、ビタミン類；単糖；二糖；オリゴ糖；ヒアルロン酸、キトサン、親水化セルロース等の多糖類；アルコール；グリセリン、プロピレングリコール等のポリオール；ジルコニア、酸化チタン等の金属酸化物；色素；ホルモン、サイトカイン、造血因子、増殖因子等の生理活性物質；ペプチド；酵素；抗体；ＤＮＡ；ＲＮＡ；触媒；架橋剤；培養液；その他一般的な低分子化合物が挙げられる。また、混合対象物は、細胞、細胞群、組織、微生物、ウイルス等の生物試料であってもよい。細胞は、動物細胞であっても、植物細胞であってもよい。微生物としては、例えば、細菌、酵母、原生動物が挙げられる。混合対象物は１種のみを用いてもよく、２種以上用いてもよい。
混合対象物は、目的等に応じて、任意の適切な物質が選択され得る。混合対象物の具体例としては、ビタミン類；単糖；二糖；オリゴ糖；ヒアルロン酸、キトサン、親水化セルロース等の多糖類；アルコール；グリセリン、プロピレングリコール等のポリオール；ジルコニア、酸化チタン等の金属酸化物；色素；ホルモン、サイトカイン、造血因子、増殖因子等の生理活性物質；ペプチド；酵素；抗体；ＤＮＡ；ＲＮＡ；触媒；架橋剤；培養液；その他一般的な低分子化合物が挙げられる。また、混合対象物は、細胞、細胞群、組織、微生物、ウイルス等の生物試料であってもよい。細胞は、動物細胞であっても、植物細胞であってもよい。微生物としては、例えば、細菌、酵母、原生動物が挙げられる。混合対象物は１種のみを用いてもよく、２種以上用いてもよい。
混合対象物の混合量は、ゾルがゲル状集合体を再形成し得る限り、任意の適切な量に設定され得る。例えば、自己集合性ペプチドゾルは、混合後のペプチド濃度が、好ましくは０．１〜５ｗ／ｖ％、さらに好ましくは０．２〜３ｗ／ｖ％となるように設定される。
混合は、上記融解工程で得られたゾルがゾル状態を維持する間に行われる。例えば、自己集合性ペプチドのゾルの場合は、好ましくは−２〜１５℃、さらに好ましくは−２〜５℃で好適に混合が行われ得る。このような温度範囲であれば、急速なゲル化を防止し得、その結果、十分な混合時間を確保し得るからである。なお、上記温度範囲は、混合対象物を含むペプチドゾル、すなわち、混合対象物と混合中のペプチドゾルの温度範囲である。
混合は、ゾル中に分子または結晶および混合対象物が十分に分散するように行われることが好ましく、混合時間および混合手段に制限はない。混合手段としては、任意の適切な手段が選択され得る。大スケールな混合においては、攪拌棒、混合機等が用いられ得、小スケールな混合は、ピペッティング等の手作業で行われてもよい。
上記凍結、融解、混合工程は２回以上繰り返して行ってもよい。
Ｂ−４．ゲル化工程
ゲルの再形成条件（温度、時間等）は、ゲル状集合体が再形成される限り制限はなく、分子または結晶の種類および濃度、媒質の種類等に応じて適切に設定され得る。ゾル中に含まれる分子が自己集合性分子である場合、適切な条件に設定することにより、分子集合によってゲルが自発的に再形成され得る。
ゲルの再形成条件（温度、時間等）は、ゲル状集合体が再形成される限り制限はなく、分子または結晶の種類および濃度、媒質の種類等に応じて適切に設定され得る。ゾル中に含まれる分子が自己集合性分子である場合、適切な条件に設定することにより、分子集合によってゲルが自発的に再形成され得る。
例えば、自己集合性ペプチドゲルを再形成する場合、上記混合工程で得られた混合対象物が混合されたゾルを静置すればよい。静置温度は、好ましくは１５℃以上、さらに好ましくは２５℃以上である。静置時間は、好ましくは１分以上、さらに好ましくは５分以上である。また静置する場所に制限はなく、ガラス、プラスチック等の容器内、シャーレ等の細胞培養器具内、注射器等の医療器具内が挙げられる。さらには、上記混合対象物が混合されたゾルを混合直後に生体内へ注入し、その場でゲル化させてもよい。
再形成されたゲル状集合体においては、混合対象物が均一に分散した状態で存在し得る。
Ｃ．製造方法
本発明の別の局面によれば、混合対象物が混合されたゲル状集合体の製造方法が提供され得る。該製造方法は、ゲル状集合体を凍結すること、凍結した集合体を融解してゾルを得ること、得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む。各工程については、上記Ｂ項で記載したとおりである。該製造方法によれば、混合対象物が均一に混合されたゲル状集合体が得られ得る。
本発明の別の局面によれば、混合対象物が混合されたゲル状集合体の製造方法が提供され得る。該製造方法は、ゲル状集合体を凍結すること、凍結した集合体を融解してゾルを得ること、得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む。各工程については、上記Ｂ項で記載したとおりである。該製造方法によれば、混合対象物が均一に混合されたゲル状集合体が得られ得る。
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって限定されるものではない。
［試験例１］
常法により、Ｎ末端をアセチル化し、Ｃ末端をアミド化した自己集合性ペプチド１（［ＣＨ３ＣＯ］−ＲＬＤＬＲＬＡＬＲＬＤＬＲ−［ＮＨ２］）を得た。該自己集合性ペプチド１を水に溶解し、ＮａＨＣＯ３水溶液を終濃度が１．２ｍＭとなるように加えた。得られたペプチド溶液中のペプチド濃度は１ｗ/ｖ％であった。該ペプチド溶液を室温で１０分静置し、自己集合性ペプチドゲルを得た。
常法により、Ｎ末端をアセチル化し、Ｃ末端をアミド化した自己集合性ペプチド１（［ＣＨ３ＣＯ］−ＲＬＤＬＲＬＡＬＲＬＤＬＲ−［ＮＨ２］）を得た。該自己集合性ペプチド１を水に溶解し、ＮａＨＣＯ３水溶液を終濃度が１．２ｍＭとなるように加えた。得られたペプチド溶液中のペプチド濃度は１ｗ/ｖ％であった。該ペプチド溶液を室温で１０分静置し、自己集合性ペプチドゲルを得た。
得られた自己集合性ペプチドゲルを液体窒素で凍結した。次いで、凍結した自己集合性ペプチドゲルを３７℃の温水で一部融解し、その後室温で静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μｌを、３．２５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度でＮＩＨ３Ｔ３細胞を含むＤＭＥＭ培地２００μｌが入った容器に加え、ピペッティングを３回行って混合することにより、細胞が混合されたゾルを得た。
得られた細胞混合ゾルの上層、中層、および下層から１００μｌずつサンプリングし、それぞれの試料をＰＢＳで５倍希釈した。希釈した各試料を用いて血球計算盤上の４区画の細胞数を計測することにより、細胞混合ゾル中の各位置における細胞数を求めた。結果を表１に示す。
［試験例２］
自己集合性ペプチドゲルとして、商品名「ＢＤＴＭ ＰｕｒａＭａｔｒｉｘＴＭ ペプチド ハイドロゲル」（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ペプチド濃度：１ｗ／ｖ％、ｐＨ３）を用いた。
自己集合性ペプチドゲルとして、商品名「ＢＤＴＭ ＰｕｒａＭａｔｒｉｘＴＭ ペプチド ハイドロゲル」（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ペプチド濃度：１ｗ／ｖ％、ｐＨ３）を用いた。
上記自己集合性ペプチドゲルを液体窒素で凍結した。次いで、凍結した自己集合性ペプチドゲルを３７℃の温水で一部融解し、その後室温で静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μｌを、５．３８×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度でＮＩＨ３Ｔ３細胞を含むＤＭＥＭ培地２００μｌが入った容器に加え、ピペッティングを３回行って混合することにより、細胞が混合されたゾルを得た。
得られた細胞混合ゾル中の各位置における細胞数を試験例１と同様にして求めた。結果を表１に示す。
［比較試験例１］
試験例１と同様にして得た自己集合性ペプチドゲルに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）を施すことにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μｌを、３．２５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度でＮＩＨ３Ｔ３細胞を含むＤＭＥＭ培地２００μｌが入った容器に加え、ピペッティングを３回行って混合することにより、細胞が混合されたゾルを得た。
試験例１と同様にして得た自己集合性ペプチドゲルに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）を施すことにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μｌを、３．２５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度でＮＩＨ３Ｔ３細胞を含むＤＭＥＭ培地２００μｌが入った容器に加え、ピペッティングを３回行って混合することにより、細胞が混合されたゾルを得た。
得られた細胞混合ゾル中の各位置における細胞数を試験例１と同様にして求めた。結果を表１に示す。
［比較試験例２］
試験例２と同様の自己集合性ペプチドゲルに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）を施すことにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μｌを、５．３８×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度でＮＩＨ３Ｔ３細胞を含むＤＭＥＭ培地２００μｌが入った容器に加え、ピペッティングを３回行って混合することにより、細胞が混合されたゾルを得た。
試験例２と同様の自己集合性ペプチドゲルに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）を施すことにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μｌを、５．３８×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度でＮＩＨ３Ｔ３細胞を含むＤＭＥＭ培地２００μｌが入った容器に加え、ピペッティングを３回行って混合することにより、細胞が混合されたゾルを得た。
得られた細胞混合ゾル中の各位置における細胞数を試験例１と同様にして求めた。結果を表１に示す。
表１に示されるとおり、凍結融解によって得られるゾルには、超音波処理によって得られるゾルよりも均一に混合対象物を混合することができる。
［実施例１］
上記自己集合性ペプチド１を水に溶解し、ＮａＨＣＯ３水溶液を終濃度が１．２ｍＭとなるように加えた。得られたペプチド溶液中のペプチド濃度は０．８ｗ/ｖ％であった。該ペプチド溶液を室温で１０分静置し、自己集合性ペプチドゲルを得た。
上記自己集合性ペプチド１を水に溶解し、ＮａＨＣＯ３水溶液を終濃度が１．２ｍＭとなるように加えた。得られたペプチド溶液中のペプチド濃度は０．８ｗ/ｖ％であった。該ペプチド溶液を室温で１０分静置し、自己集合性ペプチドゲルを得た。
得られた自己集合性ペプチドゲルを液体窒素で凍結した。次いで、凍結した自己集合性ペプチドゲルを３７℃の温水で一部融解し、その後室温で静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μＬをサンプリングチューブに移し、フェノールレッドを含むＤＭＥＭ培地４５０μＬを加えて、５回ピペッティングした。
ついで、該サンプリングチューブを２５℃で５分静置することにより、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図１に示す。
［実施例２］
自己集合性ペプチドゲルとして、商品名「ＢＤＴＭ ＰｕｒａＭａｔｒｉｘＴＭ ペプチド ハイドロゲル」（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ペプチド濃度：１ｗ／ｖ％、ｐＨ３）を用いた。
自己集合性ペプチドゲルとして、商品名「ＢＤＴＭ ＰｕｒａＭａｔｒｉｘＴＭ ペプチド ハイドロゲル」（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、ペプチド濃度：１ｗ／ｖ％、ｐＨ３）を用いた。
上記自己集合性ペプチドゲルを液体窒素で凍結した。次いで、凍結した自己集合性ペプチドゲルを３７℃の温水で一部融解し、その後室温で静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾル３００μＬをサンプリングチューブに移し、エオシン水溶液４５０μＬを加えて、５回ピペッティングした。
ついで、該サンプリングチューブを２５℃で２０分静置することにより、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図２に示す。
［実施例３］
フェノールレッドを含むＤＭＥＭ培地の代わりに５０μＭ ＦＩＴＣ標識インスリン水溶液を混合したこと以外は実施例１と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図３に示す。
フェノールレッドを含むＤＭＥＭ培地の代わりに５０μＭ ＦＩＴＣ標識インスリン水溶液を混合したこと以外は実施例１と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図３に示す。
［実施例４］
エオシン水溶液の代わりに５０μＭ ＦＩＴＣ標識インスリン水溶液を混合したこと以外は実施例２と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図４に示す。
エオシン水溶液の代わりに５０μＭ ＦＩＴＣ標識インスリン水溶液を混合したこと以外は実施例２と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図４に示す。
［比較例１］
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例１と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図１に示す。
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例１と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図１に示す。
［比較例２］
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例２と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図２に示す。
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例２と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図２に示す。
［比較例３］
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例３と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図３に示す。
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例３と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図３に示す。
［比較例４］
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例４と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図４に示す。
凍結融解する代わりに超音波処理（製品名「超音波洗浄機 ＵＳ−４Ｒ」（アズワン社製、槽内体積９．５Ｌ）、１６０Ｗ、３０分間）をしてゾルを得たこと以外は実施例４と同様にして、自己集合性ペプチドゲルを再形成した。再形成されたゲルの写真を図４に示す。
図１〜４に示されるとおり、本発明の方法によれば、一旦ゲル化した分子集合体に対して、凍結融解を行ってゾル化することにより、混合対象物を短時間で均一に混合することができる。一方、超音波処理によって得られたゾルを用いた場合、再形成されたゲルはモヤがかっており、混合対象物が不均一に混合されたことがわかる。
［参考例１］
商品名「ラポナイトＸＬＧ」（ラポート社製）を６ｗ／ｖ％の濃度で含むゲル状集合体（媒質：水）を液体窒素で凍結した。次いで、凍結した集合体を３７℃の温水で一部融解し、その後室温で静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾルを２５℃で５時間静置することにより、ゲル状集合体を再形成した。
商品名「ラポナイトＸＬＧ」（ラポート社製）を６ｗ／ｖ％の濃度で含むゲル状集合体（媒質：水）を液体窒素で凍結した。次いで、凍結した集合体を３７℃の温水で一部融解し、その後室温で静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾルを２５℃で５時間静置することにより、ゲル状集合体を再形成した。
［参考例２］
商品名「ラポナイトＸＬＧ」（ラポート社製）を２ｗ／ｖ％の濃度で含むゲル状集合体（媒質：０．７５重量％界面活性剤（商品名「ＯＳ−１４」、日光ケミカルズ社製）および１．０重量％ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有水溶液）液体窒素で凍結した。次いで、凍結した集合体を３７℃の温水で一部融解し、その後室温静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾルを２５℃で１５分静置することにより、ゲル状集合体を再形成した。
商品名「ラポナイトＸＬＧ」（ラポート社製）を２ｗ／ｖ％の濃度で含むゲル状集合体（媒質：０．７５重量％界面活性剤（商品名「ＯＳ−１４」、日光ケミカルズ社製）および１．０重量％ＥＤＴＡ−２Ｎａ含有水溶液）液体窒素で凍結した。次いで、凍結した集合体を３７℃の温水で一部融解し、その後室温静置して融解することにより、ゾルを得た。得られたゾルを２５℃で１５分静置することにより、ゲル状集合体を再形成した。
本発明の混合方法および製造方法は、再生医療、ドラッグデリバリーシステム、化粧品、人工硝子体、止血剤、美容整形用注射剤、骨充填、関節潤滑剤、湿潤用保水材等の製造または使用において好適に適用され得る。
配列番号１は、本発明に使用され得る自己集合性ペプチドである。
配列番号２は、本発明に使用され得る自己集合性ペプチドである。
配列番号３は、本発明に使用され得る自己集合性ペプチドである。
配列番号２は、本発明に使用され得る自己集合性ペプチドである。
配列番号３は、本発明に使用され得る自己集合性ペプチドである。
Claims (5)
- ゲル状集合体を凍結すること、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む、ゲル状集合体中に混合対象物を混合する方法。 - 前記ゲル状集合体が、自己集合性分子が分子集合することによって形成されたゲルである、請求項１に記載の方法。
- 前記ゲル状集合体が、粘土鉱物が集合することによって形成されたゲルである、請求項１に記載の方法。
- 前記自己集合性分子が、自己集合性ペプチドである、請求項２に記載の方法。
- ゲル状集合体を凍結すること、
凍結した集合体を融解してゾルを得ること、
得られたゾルと混合対象物とを混合すること、および
混合対象物が混合されたゾルからゲル状集合体を再形成することを含む、混合対象物が混合されたゲル状集合体の製造方法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009054982A JP4448552B1 (ja) | 2009-03-09 | 2009-03-09 | ゲル状集合体中への物質の混合方法 |
| US12/705,914 US7863412B2 (en) | 2009-03-09 | 2010-02-15 | Method for mixing object into gelled assembly |
| SG2011064664A SG174293A1 (en) | 2009-03-09 | 2010-02-24 | Method for mixing substance into gel assembly |
| PCT/JP2010/052831 WO2010103926A1 (ja) | 2009-03-09 | 2010-02-24 | ゲル状集合体中への物質の混合方法 |
| EP10002315A EP2228382B1 (en) | 2009-03-09 | 2010-03-05 | Method for mixing object into gelled assembly |
| AT10002315T ATE543830T1 (de) | 2009-03-09 | 2010-03-05 | Verfahren zum mischen eines gegenstands in eine gelierte zusammensetzung |
| TW099106576A TWI454308B (zh) | 2009-03-09 | 2010-03-08 | 物質混合至膠狀聚集體中之方法 |
| CN201010133459.0A CN101829510B (zh) | 2009-03-09 | 2010-03-09 | 将物体混合到胶凝聚集体中的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2009054982A JP4448552B1 (ja) | 2009-03-09 | 2009-03-09 | ゲル状集合体中への物質の混合方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2010010637A Division JP2010207801A (ja) | 2010-01-21 | 2010-01-21 | ゲル状集合体中への物質の混合方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP4448552B1 true JP4448552B1 (ja) | 2010-04-14 |
| JP2010207679A JP2010207679A (ja) | 2010-09-24 |
Family
ID=42101862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2009054982A Expired - Fee Related JP4448552B1 (ja) | 2009-03-09 | 2009-03-09 | ゲル状集合体中への物質の混合方法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7863412B2 (ja) |
| EP (1) | EP2228382B1 (ja) |
| JP (1) | JP4448552B1 (ja) |
| CN (1) | CN101829510B (ja) |
| AT (1) | ATE543830T1 (ja) |
| SG (1) | SG174293A1 (ja) |
| TW (1) | TWI454308B (ja) |
| WO (1) | WO2010103926A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG11201607493QA (en) * | 2014-03-11 | 2016-10-28 | Toppan Printing Co Ltd | Droplet producing device, droplet producing method, liposome producing method, fixture, and droplet producing kit |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US1949360A (en) * | 1928-12-29 | 1934-02-27 | Burgess Lab Inc C F | Method for making artificial zeolites |
| JPS62115063A (ja) * | 1985-11-13 | 1987-05-26 | Agency Of Ind Science & Technol | 可逆伸縮性高分子材料の製造法 |
| JP2758084B2 (ja) * | 1991-03-15 | 1998-05-25 | 伊那食品工業株式会社 | 寒天ゲルの製造方法及び製造装置 |
| GB9124403D0 (en) * | 1991-11-16 | 1992-01-08 | Foseco Int | Ceramic material |
| US5670483A (en) * | 1992-12-28 | 1997-09-23 | Massachusetts Insititute Of Technology | Stable macroscopic membranes formed by self-assembly of amphiphilic peptides and uses therefor |
| JP2000069917A (ja) * | 1998-08-31 | 2000-03-07 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ゼリー状食品 |
| US7473391B2 (en) * | 2001-03-13 | 2009-01-06 | Ngk Insulators, Ltd. | Methods for making molding material, molded body, and sintered body |
| JP3989250B2 (ja) * | 2002-01-15 | 2007-10-10 | 日本碍子株式会社 | 成形用材料の製造方法、成形体の製造方法、焼結体の製造方法、成形用材料および成形体 |
| JP2003192448A (ja) * | 2001-12-27 | 2003-07-09 | Ngk Insulators Ltd | 成形体の製造方法、成形用材料、成形体および焼結体 |
| DE10247409B4 (de) * | 2002-10-11 | 2008-09-25 | Robert Bosch Gmbh | Keramischer Substratkörper und Verfahren zu dessen Herstellung |
| JP4245406B2 (ja) * | 2003-05-19 | 2009-03-25 | 財団法人川村理化学研究所 | ゲル発泡体及びその製造方法 |
| GB0316742D0 (en) * | 2003-07-17 | 2003-08-20 | Fermentas Uab | Electrophoretic gels and their manufacture |
| DE10335224A1 (de) * | 2003-07-30 | 2005-03-24 | Universität Bremen | Verfahren und Schlicker zur Herstellung eines Formkörpers aus keramischem Material, keramischer Formkörper und Verwendung eines solchen Formkörpers |
| JP4920176B2 (ja) * | 2004-03-25 | 2012-04-18 | セーレン株式会社 | 生体適合性をもつ多孔質体およびその製造方法 |
| US8299032B2 (en) | 2005-06-27 | 2012-10-30 | Menicon Co., Ltd. | Self-assembling peptide and gel produced from the same |
| JP2007217375A (ja) * | 2006-02-17 | 2007-08-30 | Nagoya Institute Of Technology | 自己組織化ペプチド |
| CN101368198A (zh) * | 2008-09-24 | 2009-02-18 | 江南大学 | 一种纳米金和λDNA链连接的自组装材料的制备方法 |
-
2009
- 2009-03-09 JP JP2009054982A patent/JP4448552B1/ja not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-02-15 US US12/705,914 patent/US7863412B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-02-24 WO PCT/JP2010/052831 patent/WO2010103926A1/ja not_active Ceased
- 2010-02-24 SG SG2011064664A patent/SG174293A1/en unknown
- 2010-03-05 AT AT10002315T patent/ATE543830T1/de active
- 2010-03-05 EP EP10002315A patent/EP2228382B1/en not_active Not-in-force
- 2010-03-08 TW TW099106576A patent/TWI454308B/zh not_active IP Right Cessation
- 2010-03-09 CN CN201010133459.0A patent/CN101829510B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7863412B2 (en) | 2011-01-04 |
| TWI454308B (zh) | 2014-10-01 |
| ATE543830T1 (de) | 2012-02-15 |
| CN101829510A (zh) | 2010-09-15 |
| US20100227398A1 (en) | 2010-09-09 |
| TW201036694A (en) | 2010-10-16 |
| JP2010207679A (ja) | 2010-09-24 |
| EP2228382B1 (en) | 2012-02-01 |
| CN101829510B (zh) | 2014-03-12 |
| SG174293A1 (en) | 2011-10-28 |
| EP2228382A1 (en) | 2010-09-15 |
| WO2010103926A1 (ja) | 2010-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xu et al. | A moldable thermosensitive hydroxypropyl chitin hydrogel for 3D cartilage regeneration in vitro and in vivo | |
| CN102348717B (zh) | 自组装肽和高强度肽凝胶 | |
| Wu et al. | Stem cell niche-inspired microcarriers with ADSCs encapsulation for diabetic wound treatment | |
| CN103289107B (zh) | 一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用 | |
| CN103502262A (zh) | 基于双头两亲性肽的自组装水凝胶 | |
| JP2018511622A (ja) | 擬塑性ミクロゲルマトリクスの組成物およびキット | |
| Payne et al. | A methylcellulose and collagen based temperature responsive hydrogel promotes encapsulated stem cell viability and proliferation in vitro | |
| CN107099042A (zh) | 一种温敏型可注射水凝胶的制备方法 | |
| JP6071468B2 (ja) | コラーゲン水溶液及びそれから得られるゲル | |
| CN110743038A (zh) | 一种双网络结构复合水凝胶及其制备方法和应用 | |
| US20140005306A1 (en) | Hyaluronic Acid-Gelatin Crosslinked Thermoreversible Pluronic Hydrogels | |
| CN108744057A (zh) | 一种可注射复合凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN110180026A (zh) | 一种生物支架及其制备方法和应用 | |
| CN105148322B (zh) | 可注射水凝胶及其制备方法 | |
| CN102399370A (zh) | 一种壳聚糖聚合物及其制备方法 | |
| CN118440506A (zh) | 一种明胶-海藻酸钠双交联水凝胶制备方法 | |
| JP4448552B1 (ja) | ゲル状集合体中への物質の混合方法 | |
| CN114763415A (zh) | 一种高性能可加工水凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN114957714A (zh) | 一种可促进伤口愈合的含姜黄素水凝胶材料及其制备方法 | |
| CN104189951B (zh) | 一种注射用快速形成原位小分子水凝胶的液态制剂及其制备方法和应用 | |
| JP2024506853A (ja) | ハイブリッドネットワークヒドロゲルの作製および使用のための組成物および方法 | |
| JP2010207801A (ja) | ゲル状集合体中への物質の混合方法 | |
| US20160158410A1 (en) | Polysaccharide hydrogels for injection with tunable properties | |
| CN115845073B (zh) | 一种能够靶向形变的共组装纳米材料及其制备方法与应用 | |
| CN113559331B (zh) | 一种高活性可注射材料及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100105 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100122 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130129 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4448552 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130129 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140129 Year of fee payment: 4 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |