JP4227474B2 - メシマコブの培養法 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、美白効果を向上させるキノコの菌床培養方法に関するものであり、更に詳しくは、キコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ（Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．）の美白効果を向上させるための菌床培養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
メシマコブは抗腫瘍作用を持つことから、従来から健康食品または漢方薬として利用されている。しかし、その供給源としての天然の子実体は入手が難しく、また入手した後も、子実体の個体差による有用性の変動や量産化等実用面での問題点が多い。これらの問題点を回避する方法として、メシマコブの菌糸を液体培養し、その培養液及び培養菌糸が入浴剤、頭髪料及び皮膚外用剤に利用されている。（例えば、特許文献１、特許文献２、及び特許文献３参照。）
【０００３】
一方近年になって、メシマコブの栽培方法が検討され、一定の条件下で子実体が得られるようになってきた。これにより、天然の子実体において問題点として上がっていた個体差による有用性の変動が回避され、大量供給源の確保を可能にした。（例えば、特許文献４、及び特許文献５参照。）
【０００４】
担子菌類は、胞子が発芽した後、菌糸が成長し、ある特定条件下で子実体が形成される。一般には、この菌糸から分化した子実体が「キノコ」と呼ばれ、市場に出回っているのは菌糸から子実体への栽培が確立したものである。スーパー等で販売されているマイタケ等が一般に良く知られている。また、担子菌類は、菌糸や子実体自体に含まれる成分や代謝物は、摂取する有機物の種類により、分化の段階によってもその種類や量が変動することが知られており、培養、栽培した場合は、培地組成によって大きく左右される。そして、キノコ愛好家の中では、「天然物のマイタケは栽培物より香りが強く、味も良いため、一度食べたら忘れられない。」と言われている。これは、人工の栽培物が天然に生息・発生した子実体とは成分的にも大きく異なることに起因していると考えられている。
【０００５】
上述したように、菌糸は子実体とは形態的にも成分的にも大きく異なっている。更に本発明で言う菌床は、オガクズ培地に菌糸を接種し、培養後オガクズ培地中に菌糸が蔓延した状態のものを指している。これは一般的に、子実体栽培用として調製されたものであって、菌糸の増殖・増産を目的として行われている液体培養物とは明らかに成分的に異なったものである。
【０００６】
以上のように、液体培養により得られた菌糸と、子実体の構成組織として存在する菌糸、また菌床培養により得られた菌糸では各々含有する成分が大きく異なっていると考えられ、また、同じ菌床培養物においても、菌床に添加する組成物により、培養菌糸の成分は、大きく異なってくると考えられている。また、キコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブには、美白効果を有することが知られている。（例えば、特許文献６参照）しかし、従来の液体培養等の方法では、その美白効果が十分ではなく、高い美白効果が得られる培養方法の確立が望まれていた。
【０００７】
【特許文献１】
特開昭６１−１２９１１３号公報
【特許文献２】
特開平０７−３１６０２６号公報
【特許文献３】
特開平０７−３１６０３５号公報
【特許文献４】
特開平１１−２６２３２９号公報
【特許文献５】
特開２０００−２３６７４５号公報
【特許文献６】
特開２００３−７３２２５号公報
【０００８】
【問題を解決する手段】
本発明者等は、鋭意研究を重ねた結果、キコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ（Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．）の菌床培養方法として、桑オガクズにその添加剤として、米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンからなる組成分による培養抽出物を用いることで、高い美白効果が得られることを見いだした。また、特定の培養組成条件で培養することにより、美白効果が向上することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００９】
一般的に菌床に用いられる組成物は、オガクズと、栄養分として、米ぬか（生ぬかまたは脱脂ぬか）、トウモロコシぬか、フスマ等が用いられてきた。しかし、本発明者等は種々の栄養物を検討する過程において、栄養物の多い菌床組成物は、培養された菌床培養物の抽出物の美白効果が弱く、栄養分の種類と量を特定することにより、飛躍的に美白効果が向上することをも見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明で使用するメシマコブ菌床は、特定の配合量の米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンと水を添加した桑オガクズの培地より調製する。この桑オガクズ培地を栽培容器へ詰め込み、殺菌・冷却後、上記天然の子実体から公知の方法により分離した菌糸体を接種し、２０〜３０℃で ３〜６ヶ月間培養後、オガクズ培地に菌糸が蔓延したものを用いる。
【００１１】
本発明で使用する菌床に用いる米ぬかは、米ぬかであれば特に限定はなく、実施例では、太邦株式会社製の市販品を用いた。また、配合量についても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは菌床組成物中０．１〜２０重量％、更に好ましくは３.０〜１２重量％である。
【００１２】
本発明で使用する菌床に用いるトウモロコシデンプンは、トウモロコシデンプンであれば特に限定はなく、実施例では、三和澱粉株式会社製の市販品を用いた。また配合量ついても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは菌床組成物中０．１〜２０重量％、更に好ましくは１．０〜１０重量％である。
【００１３】
本発明で使用する菌床に用いる小麦デンプンは、小麦デンプンであれば特に限定はなく、実施例では、三和澱粉株式会社製の市販品を用いた。また配合量ついても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは菌床組成物中０．１〜２０重量％、更に好ましくは１．０〜１０重量％である。
【００１４】
本発明に用いる桑オガクズは、クワ属のクワであれば特に限定はないが、ヤマクワ（Ｍｏｒｕｓ ｂｏｍｂｙｃｉｓ Ｋｏｉｄｚ）、ハチジョウグワ（Ｍｏｒｕｓ ｋａｇａｙａｍａｅ Ｋｏｉｄｚ）、ノグワ（Ｍｏｒｕｓ ｔｉｌｉａｅｆｏｌｉａ Ｍａｋｉｎｏ）、シマグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ）等が利用できる。
【００１５】
本発明に用いるメシマコブ菌床の抽出物の調製法は、特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出することができる。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることが出来る。そのうち、水、エチルアルコール、１、３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適である。
【００１６】
メシマコブ菌床の抽出は、菌床をそのままあるいは乾燥したものを重量比で１〜１０００倍量、特に１０〜１００倍量の溶媒を用いることが出来る。常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好ましい。また、６０〜１００℃で０．５〜２４時間、加熱抽出しても良い。
【００１７】
以上のような条件で得られるメシマコブ菌床の抽出物は、ろ過等の処理をして、溶液のまま用いても良いが、更に必要により、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００１８】
【発明の実態】
以下、本発明によるキコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ〔Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．〕菌床の抽出物のチロシナーゼ活性抑制効果、メラニン産生抑制効果、にかかわる実施例について説明するが、本発明は、ここに記載された実施例に限定されるものではない。なお、実施例中の数字は、特に断りのない限り重量％を示す。
【００１９】
＜実施例１＞チロシナーゼ活性抑制効果の測定
皮膚の黒化には色素のメラニンが深く関与していると考えられる。すなわち、メラニンが紫外線などの外的刺激を受けて肌の皮膚組織で生産され、その結果、肌の黒化が促進され、シミ・ソバカス・色黒等の症状が引き起こされると考えられている。よって、肌の美白作用の確認法としメラニンの生成に関与するチロシナーゼ（酵素）の活性化を抑制することに着目し、今回、チロシナーゼ（シグマ社製）によるチロシナーゼ活性抑制試験を行った。以下、メシマコブ菌床の美白効果に関するチロシナーゼ活性抑制試験について説明する。
【００２０】
＜菌床培養の組成例１＞
本発明に係る菌床を表１に示した組成にて作製した。米ぬか、フスマは太邦株式会社のものを使用した。小麦デンプン、トウモロコシデンプンは三和澱粉工業株式会社のものを使用した。酵母エキスはアサヒビール株式会社のスーパーミーストパウダーＡ００１を使用した。
【００２１】
【表１】
【００２２】
＜菌床の作製法＞前記組成物に水を加え均一に混合し、オートクレーブにて滅菌する。滅菌後冷却した組成物に長崎県男女群島女島より採取した天然のメシマコブ子実体から無菌的に切片を切除した切片をPotato-Dextrose Broth(Difco社製)２．４％と寒天１．５％より調製したポテト・デキストロース寒天培地上に置き、２４℃で４週間培養後、菌糸を得た。得られた菌糸を表１に示した各菌床組成物に接種後２４℃で３ヶ月間培養し、培地中に菌糸が蔓延した状態の菌床を得た。
【００２３】
（ａ）試料の調製：メシマコブ菌床抽出物は、培養したメシマコブ菌床を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。陽性対照として用いたアルブチンは、市販の試薬を用いてＰＢＳ（−）溶液に溶解した。試料は全て、０．２μｍメンブレンフィルターで除菌ろ過を行った。メシマコブ菌床抽出物の濃度は１．０％濃度に調整した。
（ｂ）測定方法：試験管にそれぞれＬ−チロシン溶液（濃度:0.3mg/mL）1mLと、マッキルベイン緩衝液（McIlvine Buffer Solution）（pH6.8）1mLとを入れておき、これらの各試験管に前記（ａ）で調製した各供試料の測定用溶液および対照液をそれぞれ0.9mL加え、これを37℃の恒温水槽中で10分間インキュベートする。前記インキュベートしたものにチロシナーゼ溶液（濃度:1mg/mL・マッキルベイン緩衝液）を0.1mL加えて、直ちに475nmにおける吸光度を経時的に測定する。（各測定時点での吸光度値として、チロシナーゼ溶液添加直後の吸光度に対しては添字０を、添加後Ｘ分インキュベート経過後の吸光度値に対しては添字ｘをそれぞれ付して示す）各吸光度値を数１に代入してチロシナーゼ活性抑制率を算出する。なお、この発明におけるのチロシナーゼ活性抑制率の算出には、反応液投入後10分後の吸光度を使用する。なお、この吸光度値はドーパクロム（メラニンの前駆物質）の生成量により測定されるものである。また、この値が高くなるに従って、チロシナーゼ活性の抑制が高くなっていることを示している。
【００２４】
【数１】
チロシナーゼ活性抑制率（％）＝（（Bx-B0）-（Ax-A0））×100/(Bx-B0)
B0 :対照溶液の添加直後における吸光度値、B10:対照溶液の10分後における吸光度値
A0 :試験溶液の添加直後における吸光度値、A10:試験溶液の10分後における吸光度値
【００２５】
表1に示した菌床組成物のチロシナーゼ活性抑制効果試験の測定結果を表２に示す。表２からも明確なように、桑オガクズ及び米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンをすべて添加した実施例１が、これらの添加物を２種組み合わせた比較例１、比較例２、比較例３と比較して、また、１種組み合わせた比較例４、比較例５、比較例６、桑オガクズだけからなる比較例７とそれぞれ比較して、最も効果が高いことが確認できた。即ち、上記の桑オガクスと添加物３種類をすべて添加した実施例１のチロシナーゼ活性抑制率は６７．８％であり、比較例１〜比較例７の組成物中、最も高いチロシナーゼ活性抑制率を示した。これに対して、桑オガクズと添加物を２種類組み合せた比較例１は、４９．７％、比較例２は、５１．２％、比較例３は、４４．６％であった。また、桑オガクズと添加物を１種組み合わせた比較例４は、４７．３％、比較例５は、４０．６％、比較例６は、４２．３％であった。さらに桑オガクズだけからなる比較例７は、３７．２％であった。以上の結果は、桑オガクズに米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加して培養することにより、チロシナーゼ活性抑制率が向上することを示すものである。
【００２６】
【表２】
【００２７】
＜実施例２＞メラニン産生抑制効果の測定
皮膚の黒化には色素のメラニンが深く関与していると考えられる。即ち、メラニンが紫外線などの外的刺激を受けて肌の皮膚組織で生産され、その結果、肌の黒化が促進され、シミ・ソバカス・色黒等の症状が引き起こされると考えられている。よって、肌の美白作用の確認法としメラニン産生抑制効果に着目し、マウスメラノーマ細胞によるメラニン産生抑制試験を行った。以下、メシマコブ菌床の美白効果に関するメラニン産生抑制試験について説明する。
【００２８】
＜菌床培養の組成例２＞
＜菌床の作製法＞組成物に水を加え均一に混合し、オートクレーブにて滅菌する。滅菌後冷却した組成物に長崎県男女群島女島より採取した天然のメシマコブ子実体から無菌的に切片を切除した切片をPotato-Dextrose Broth(Difco社製)２．４％と寒天１．５％より調製したポテト・デキストロース寒天培地上に置き、２４℃で４週間培養後、菌糸を得た。得られた菌糸を表４、表６、表８、表１０、表１２に示した実施例及び比較例組成物に接種後２４℃で３ヶ月間培養し、培地中に菌糸が蔓延した状態の菌床を得た。
【００２９】
＜試料の調製＞
実施例１：メシマコブ菌床抽出物は、メシマコブ菌床を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。溶媒を留去し、５％濃度になるように５０％エタノール水溶液に溶解した。陽性対照として用いたアルブチンは、市販の試薬を用いてＰＢＳ（−）溶液に溶解した。試料は全て、０．２μｍメンブレンフィルターで除菌ろ過を行った。
【００３０】
比較例３１（天然子実体の調整）：メシマコブ子実体の天然物は、長崎県男女群島女島より採取した物を用いた。このメシマコブ天然子実体を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。その後、溶媒を留去し、５％濃度になるように５０％エタノール水溶液に溶解、調整した。
【００３１】
比較例３２（培養菌糸抽出液の調整）：培養菌糸は、天然の子実体から、上記比較例３１と同方法にて分離した菌糸をチャペック培地にポリペプトン０．２％、酵母エキス０．１％を添加した培地で、２４℃で２週間通気培養し、培養して得られた菌糸を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。その後、溶媒を留去し、５％濃度になるように５０％エタノール水溶液に溶解、調整した。
【００３２】
比較例３３（菌糸培養液の調整）：菌糸培養液は、天然の子実体から、上記比較例３１と同方法にて分離した菌糸をチャペック培地にポリペプトン０．２％、酵母エキス０．１％を添加した培地で、２４℃で２週間通気培養し、培養物から得られた菌糸を除去した培養液を用いた。
【００３３】
＜細胞培養＞
培養液は、牛胎児血清５．０％を加えたダルベッコＭＥＭ（Ｄ−ＭＥＭ）培地を用いた。細胞は、マウスメラノーマＢ−１６ Ｆ−１０を８ｃｍφのシャーレに植え付けた。植え付け量は４×１０３／ｃｍ２とした。植え付けの翌日、実施例２で調製した抽出物試料を乾燥物濃度にして１００ｐｐｍの濃度になるよう添加を行い、添加後３日後に試験を終了した。
【００３４】
＜評価方法＞
直径８ｃｍシャーレに増殖した細胞をセルスクレーパーで集め、透明な遠心チューブに入れ３、０００ｒｐｍ、１０分遠心し細胞を集めた。集まった細胞ペレットを２Ｎ−ＮａＯＨ溶液に溶解し、４０５ｎｍの吸光度を測定した。それぞれ吸光度をコントロールと比較することにより、８段階表示をした。
【００３５】
＜判定基準＞
表３に結果の判定基準を示す。メラニン量はコントロールと比較した吸光度値の割合で示した。なおアルブチンは、メラニン産生抑制の陽性対照物質として示している。
【００３６】
【表３】
【００３７】
本発明に係る菌床を表４に示した組成にて作製し、試料を調製した。
表４に示した菌床組成物及び天然の子実体、培養菌糸抽出液、菌糸培養液を用い場合のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表５に示す。表５より明らかなように、本発明に係わる桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加した実施例１はメラニン産生抑制の判定が１であり、最も高いメラニン産生抑制効果が認められ、天然のメシマコブ子実体を用いた比較例３１は、メラニン産生抑制の判定が２であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。このメラニン産生抑制効果は、メラニン産生抑制効果の高いことで知られているアルブチンの効果（判定３）を上回る高い値である。また、メシマコブ培養菌糸抽出液を用いた比較例３２及びメシマコブ菌糸培養液を用いた比較例３３は、メラニン産生抑制の判定がともに６であり、メラニン産生抑制効果はほとんど認められなかった。同様に桑オガクズの代わりに広葉樹オガクズを添加した比較例８もメラニン産生抑制の判定が８であり、メラニン産生抑制する作用が認められなかった。
【００３８】
この様に、本発明の菌床組成物である桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加した実施例１のメラニン産生抑制効果は、高いメラニン産生抑制効果があるとされているアルブチン及び天然のメシマコブ子実体と比較しても高い効果を示している。そして、桑オガクズを添加して培養した菌床の抽出物には広葉樹を添加して培養した菌床の抽出物には見られない高いメラニン産生抑制効果を認めた。
【００３９】
【表４】
【００４０】
【表５】
【００４１】
発明に係る菌床を表６に示した組成にて作製し、試料を調製した。表６に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表７に示す。表７に示されているように、桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを全て添加した実施例２は、桑オガクズに添加物を２種組み合わせた比較例１１、比較例１２と、桑オガクズに添加物を１種組み合わせた比較例１５、桑オガクズだけからなる比較例７と比較して、最も効果が高いことが確認できた。すなわち上記桑オガクズと３種類の添加物を全て添加した実施例２は、メラニン産生抑制の判定が１であった。
【００４２】
これに対し、桑オガクズに添加物を２種組み合わせた比較例１１、比較例１２は、メラニン産生抑制の判定が２、比較例９は、メラニン産生抑制の判定が２であった。桑オガクズに添加物を１種組み合わせた比較例１５は、メラニン産生抑制の判定が４であった。桑オガクズだけからなる比較例７は、メラニン産生抑制の判定が５であった。実施例２の桑オガクズに添加した添加物３種の内、小麦デンプンの代わりにフスマを同量添加した比較例１０は、メラニン産生抑制の判定が３であり、小麦デンプン添加のものより低かった。比較例１２の桑オガクズに添加した添加物２種の内、小麦デンプンの代わりにフスマを同量添加した比較例１３は、メラニン産生抑制の判定が４であり、小麦デンプン添加のものより低かった。以上の結果は、フスマを添加して培養することでは、メラニン産生抑制効果が向上しないことを示している。実施例２の桑オガクズに添加した添加物３種の内、小麦デンプンの代わりに酵母エキスを添加した比較例９は、メラニン産生抑制の判定が２であり、小麦デンプン添加のものより低かった。比較例１１の桑オガクズに添加した添加物２種の内、トウモロコシデンプンの代わりに酵母エキスを添加した比較例１４は、メラニン産生抑制の判定が４であり、トウモロコシデンプン添加のものより低かった。比較例１５の桑オガクズに添加した添加物２種の内、米ぬかの代わりに酵母エキスを添加した比較例１６は、メラニン産生抑制の判定が５であり、米ぬか添加のものより低かった。以上の結果は、酵母エキスを添加して培養することでは、メラニン産生抑制効果が向上しないことを示している。以上の結果は、桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加して培養することが、他の添加物を用いて培養したものに比較してメラニン産生抑制効果が明らかに向上することを示している。
【００４３】
【表６】
【００４４】
【表７】
【００４５】
次に、米ぬかの最適添加量を決定する為に、桑オガクズと米ぬかからなる菌床を調製した。即ち、桑オガクズの量は同じで、米ぬかの添加量を変えた表８の組成物を調製した。表８に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表９に示す。表９に示したように、米ぬかが無配合の比較例７は、メラニン産生抑制の判定が５であった。一方、米ぬかの添加量が１％の比較例１７は、メラニン産生抑制の判定が５であり、米ぬか無添加のものと変わらなかった。一方、米ぬか添加量が、３％の比較例１８、６％の比較例１９、１２％の比較例２０のメラニン産生抑制の判定はいずれも４であり、米ぬか無添加の組成物と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。さらに米ぬか添加量２４％の比較例２１のメラニン産生抑制の判定は５であり、米ぬか無添加のものと同等であった。以上の結果は、米ぬかの添加量は、３〜１２％がメラニン産生抑制効果が高いことを示している。
【００４６】
【表８】
【００４７】
【表９】
【００４８】
次に、小麦デンプンの最適添加量を決定する為に、桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプンからなる菌床を調製した。即ち、桑オガクズと米ぬかの量は同じで、小麦デンプンの添加量を変えた表１０の組成物を調製した。表１０に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表１１に示す。表１１に示したように、小麦デンプンが無配合の比較例１５は、メラニン産生抑制の判定が５であった。一方、小麦デンプンの添加量が１％の比較例２２は、メラニン産生抑制の判定が３であり、小麦デンプン無添加の比較例と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。また、小麦デンプン添加量が、４％の比較例２３、１０％の比較例２４のメラニン産生抑制の判定はいずれも２であり、小麦デンプン無添加の組成物と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。さらに小麦デンプン添加量１２％の比較例２５のメラニン産生抑制の判定は５であり、小麦デンプン無添加のものと同等であった。以上の結果は、小麦デンプンの添加量は、１〜１０％がメラニン産生抑制効果が高いことを示している。
【００４９】
【表１０】
【００５０】
【表１１】
【００５１】
次に、トウモロコシの最適添加量を決定する為に、桑オガクズと米ぬか及びトウモロコシデンプンからなる菌床を調製した。即ち、桑オガクズと米ぬかの量は同じで、トウモロコシデンプンの添加量を変えた表１２の組成物を調製した。表１２に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表１３に示す。表１３に示したように、トウモロコシデンプンが無配合の比較例１５は、メラニン産生抑制の判定が５であった。一方、トウモロコシデンプンの添加量が１％の比較例２６は、メラニン産生抑制の判定が４であり、２％の比較例２７は、メラニン産生抑制の判定が２であり、４％の組成物２８は、メラニン産生抑制の判定が３であり、１０％の比較例２９は、メラニン産生抑制の判定が４であり、トウモロコシデンプン無添加の組成物と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。さらにトウモロコシデンプン添加量１２％の比較例３０のメラニン産生抑制の判定は５であり、トウモロコシデンプン無添加のものと同等であった。以上の結果は、トウモロコシデンプンの添加量は、１〜１０％がメラニン産生抑制効果が高いことを示している。
【００５２】
【表１２】
【００５３】
【表１３】
【００５４】
【発明の効果】
桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンからなる組成物にキコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ（Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．）を培養することにより、天然の子実体及び公知であるアルブチンと比較して、高い美白効果有する培養物を提供することができた。
【発明の属する技術分野】
本発明は、美白効果を向上させるキノコの菌床培養方法に関するものであり、更に詳しくは、キコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ（Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．）の美白効果を向上させるための菌床培養方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
メシマコブは抗腫瘍作用を持つことから、従来から健康食品または漢方薬として利用されている。しかし、その供給源としての天然の子実体は入手が難しく、また入手した後も、子実体の個体差による有用性の変動や量産化等実用面での問題点が多い。これらの問題点を回避する方法として、メシマコブの菌糸を液体培養し、その培養液及び培養菌糸が入浴剤、頭髪料及び皮膚外用剤に利用されている。（例えば、特許文献１、特許文献２、及び特許文献３参照。）
【０００３】
一方近年になって、メシマコブの栽培方法が検討され、一定の条件下で子実体が得られるようになってきた。これにより、天然の子実体において問題点として上がっていた個体差による有用性の変動が回避され、大量供給源の確保を可能にした。（例えば、特許文献４、及び特許文献５参照。）
【０００４】
担子菌類は、胞子が発芽した後、菌糸が成長し、ある特定条件下で子実体が形成される。一般には、この菌糸から分化した子実体が「キノコ」と呼ばれ、市場に出回っているのは菌糸から子実体への栽培が確立したものである。スーパー等で販売されているマイタケ等が一般に良く知られている。また、担子菌類は、菌糸や子実体自体に含まれる成分や代謝物は、摂取する有機物の種類により、分化の段階によってもその種類や量が変動することが知られており、培養、栽培した場合は、培地組成によって大きく左右される。そして、キノコ愛好家の中では、「天然物のマイタケは栽培物より香りが強く、味も良いため、一度食べたら忘れられない。」と言われている。これは、人工の栽培物が天然に生息・発生した子実体とは成分的にも大きく異なることに起因していると考えられている。
【０００５】
上述したように、菌糸は子実体とは形態的にも成分的にも大きく異なっている。更に本発明で言う菌床は、オガクズ培地に菌糸を接種し、培養後オガクズ培地中に菌糸が蔓延した状態のものを指している。これは一般的に、子実体栽培用として調製されたものであって、菌糸の増殖・増産を目的として行われている液体培養物とは明らかに成分的に異なったものである。
【０００６】
以上のように、液体培養により得られた菌糸と、子実体の構成組織として存在する菌糸、また菌床培養により得られた菌糸では各々含有する成分が大きく異なっていると考えられ、また、同じ菌床培養物においても、菌床に添加する組成物により、培養菌糸の成分は、大きく異なってくると考えられている。また、キコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブには、美白効果を有することが知られている。（例えば、特許文献６参照）しかし、従来の液体培養等の方法では、その美白効果が十分ではなく、高い美白効果が得られる培養方法の確立が望まれていた。
【０００７】
【特許文献１】
特開昭６１−１２９１１３号公報
【特許文献２】
特開平０７−３１６０２６号公報
【特許文献３】
特開平０７−３１６０３５号公報
【特許文献４】
特開平１１−２６２３２９号公報
【特許文献５】
特開２０００−２３６７４５号公報
【特許文献６】
特開２００３−７３２２５号公報
【０００８】
【問題を解決する手段】
本発明者等は、鋭意研究を重ねた結果、キコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ（Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．）の菌床培養方法として、桑オガクズにその添加剤として、米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンからなる組成分による培養抽出物を用いることで、高い美白効果が得られることを見いだした。また、特定の培養組成条件で培養することにより、美白効果が向上することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００９】
一般的に菌床に用いられる組成物は、オガクズと、栄養分として、米ぬか（生ぬかまたは脱脂ぬか）、トウモロコシぬか、フスマ等が用いられてきた。しかし、本発明者等は種々の栄養物を検討する過程において、栄養物の多い菌床組成物は、培養された菌床培養物の抽出物の美白効果が弱く、栄養分の種類と量を特定することにより、飛躍的に美白効果が向上することをも見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明で使用するメシマコブ菌床は、特定の配合量の米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンと水を添加した桑オガクズの培地より調製する。この桑オガクズ培地を栽培容器へ詰め込み、殺菌・冷却後、上記天然の子実体から公知の方法により分離した菌糸体を接種し、２０〜３０℃で ３〜６ヶ月間培養後、オガクズ培地に菌糸が蔓延したものを用いる。
【００１１】
本発明で使用する菌床に用いる米ぬかは、米ぬかであれば特に限定はなく、実施例では、太邦株式会社製の市販品を用いた。また、配合量についても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは菌床組成物中０．１〜２０重量％、更に好ましくは３.０〜１２重量％である。
【００１２】
本発明で使用する菌床に用いるトウモロコシデンプンは、トウモロコシデンプンであれば特に限定はなく、実施例では、三和澱粉株式会社製の市販品を用いた。また配合量ついても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは菌床組成物中０．１〜２０重量％、更に好ましくは１．０〜１０重量％である。
【００１３】
本発明で使用する菌床に用いる小麦デンプンは、小麦デンプンであれば特に限定はなく、実施例では、三和澱粉株式会社製の市販品を用いた。また配合量ついても有効量配合されていれば特に限定はないが、好ましくは菌床組成物中０．１〜２０重量％、更に好ましくは１．０〜１０重量％である。
【００１４】
本発明に用いる桑オガクズは、クワ属のクワであれば特に限定はないが、ヤマクワ（Ｍｏｒｕｓ ｂｏｍｂｙｃｉｓ Ｋｏｉｄｚ）、ハチジョウグワ（Ｍｏｒｕｓ ｋａｇａｙａｍａｅ Ｋｏｉｄｚ）、ノグワ（Ｍｏｒｕｓ ｔｉｌｉａｅｆｏｌｉａ Ｍａｋｉｎｏ）、シマグワ（Ｍｏｒｕｓ ａｕｓｔｒａｌｉｓ）等が利用できる。
【００１５】
本発明に用いるメシマコブ菌床の抽出物の調製法は、特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて低温下から加温下で抽出することができる。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１、３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることが出来る。そのうち、水、エチルアルコール、１、３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適である。
【００１６】
メシマコブ菌床の抽出は、菌床をそのままあるいは乾燥したものを重量比で１〜１０００倍量、特に１０〜１００倍量の溶媒を用いることが出来る。常温抽出の場合には、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好ましい。また、６０〜１００℃で０．５〜２４時間、加熱抽出しても良い。
【００１７】
以上のような条件で得られるメシマコブ菌床の抽出物は、ろ過等の処理をして、溶液のまま用いても良いが、更に必要により、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることが出来る。
【００１８】
【発明の実態】
以下、本発明によるキコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ〔Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．〕菌床の抽出物のチロシナーゼ活性抑制効果、メラニン産生抑制効果、にかかわる実施例について説明するが、本発明は、ここに記載された実施例に限定されるものではない。なお、実施例中の数字は、特に断りのない限り重量％を示す。
【００１９】
＜実施例１＞チロシナーゼ活性抑制効果の測定
皮膚の黒化には色素のメラニンが深く関与していると考えられる。すなわち、メラニンが紫外線などの外的刺激を受けて肌の皮膚組織で生産され、その結果、肌の黒化が促進され、シミ・ソバカス・色黒等の症状が引き起こされると考えられている。よって、肌の美白作用の確認法としメラニンの生成に関与するチロシナーゼ（酵素）の活性化を抑制することに着目し、今回、チロシナーゼ（シグマ社製）によるチロシナーゼ活性抑制試験を行った。以下、メシマコブ菌床の美白効果に関するチロシナーゼ活性抑制試験について説明する。
【００２０】
＜菌床培養の組成例１＞
本発明に係る菌床を表１に示した組成にて作製した。米ぬか、フスマは太邦株式会社のものを使用した。小麦デンプン、トウモロコシデンプンは三和澱粉工業株式会社のものを使用した。酵母エキスはアサヒビール株式会社のスーパーミーストパウダーＡ００１を使用した。
【００２１】
【表１】
＜菌床の作製法＞前記組成物に水を加え均一に混合し、オートクレーブにて滅菌する。滅菌後冷却した組成物に長崎県男女群島女島より採取した天然のメシマコブ子実体から無菌的に切片を切除した切片をPotato-Dextrose Broth(Difco社製)２．４％と寒天１．５％より調製したポテト・デキストロース寒天培地上に置き、２４℃で４週間培養後、菌糸を得た。得られた菌糸を表１に示した各菌床組成物に接種後２４℃で３ヶ月間培養し、培地中に菌糸が蔓延した状態の菌床を得た。
【００２３】
（ａ）試料の調製：メシマコブ菌床抽出物は、培養したメシマコブ菌床を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。陽性対照として用いたアルブチンは、市販の試薬を用いてＰＢＳ（−）溶液に溶解した。試料は全て、０．２μｍメンブレンフィルターで除菌ろ過を行った。メシマコブ菌床抽出物の濃度は１．０％濃度に調整した。
（ｂ）測定方法：試験管にそれぞれＬ−チロシン溶液（濃度:0.3mg/mL）1mLと、マッキルベイン緩衝液（McIlvine Buffer Solution）（pH6.8）1mLとを入れておき、これらの各試験管に前記（ａ）で調製した各供試料の測定用溶液および対照液をそれぞれ0.9mL加え、これを37℃の恒温水槽中で10分間インキュベートする。前記インキュベートしたものにチロシナーゼ溶液（濃度:1mg/mL・マッキルベイン緩衝液）を0.1mL加えて、直ちに475nmにおける吸光度を経時的に測定する。（各測定時点での吸光度値として、チロシナーゼ溶液添加直後の吸光度に対しては添字０を、添加後Ｘ分インキュベート経過後の吸光度値に対しては添字ｘをそれぞれ付して示す）各吸光度値を数１に代入してチロシナーゼ活性抑制率を算出する。なお、この発明におけるのチロシナーゼ活性抑制率の算出には、反応液投入後10分後の吸光度を使用する。なお、この吸光度値はドーパクロム（メラニンの前駆物質）の生成量により測定されるものである。また、この値が高くなるに従って、チロシナーゼ活性の抑制が高くなっていることを示している。
【００２４】
【数１】
チロシナーゼ活性抑制率（％）＝（（Bx-B0）-（Ax-A0））×100/(Bx-B0)
B0 :対照溶液の添加直後における吸光度値、B10:対照溶液の10分後における吸光度値
A0 :試験溶液の添加直後における吸光度値、A10:試験溶液の10分後における吸光度値
【００２５】
表1に示した菌床組成物のチロシナーゼ活性抑制効果試験の測定結果を表２に示す。表２からも明確なように、桑オガクズ及び米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンをすべて添加した実施例１が、これらの添加物を２種組み合わせた比較例１、比較例２、比較例３と比較して、また、１種組み合わせた比較例４、比較例５、比較例６、桑オガクズだけからなる比較例７とそれぞれ比較して、最も効果が高いことが確認できた。即ち、上記の桑オガクスと添加物３種類をすべて添加した実施例１のチロシナーゼ活性抑制率は６７．８％であり、比較例１〜比較例７の組成物中、最も高いチロシナーゼ活性抑制率を示した。これに対して、桑オガクズと添加物を２種類組み合せた比較例１は、４９．７％、比較例２は、５１．２％、比較例３は、４４．６％であった。また、桑オガクズと添加物を１種組み合わせた比較例４は、４７．３％、比較例５は、４０．６％、比較例６は、４２．３％であった。さらに桑オガクズだけからなる比較例７は、３７．２％であった。以上の結果は、桑オガクズに米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加して培養することにより、チロシナーゼ活性抑制率が向上することを示すものである。
【００２６】
【表２】
＜実施例２＞メラニン産生抑制効果の測定
皮膚の黒化には色素のメラニンが深く関与していると考えられる。即ち、メラニンが紫外線などの外的刺激を受けて肌の皮膚組織で生産され、その結果、肌の黒化が促進され、シミ・ソバカス・色黒等の症状が引き起こされると考えられている。よって、肌の美白作用の確認法としメラニン産生抑制効果に着目し、マウスメラノーマ細胞によるメラニン産生抑制試験を行った。以下、メシマコブ菌床の美白効果に関するメラニン産生抑制試験について説明する。
【００２８】
＜菌床培養の組成例２＞
＜菌床の作製法＞組成物に水を加え均一に混合し、オートクレーブにて滅菌する。滅菌後冷却した組成物に長崎県男女群島女島より採取した天然のメシマコブ子実体から無菌的に切片を切除した切片をPotato-Dextrose Broth(Difco社製)２．４％と寒天１．５％より調製したポテト・デキストロース寒天培地上に置き、２４℃で４週間培養後、菌糸を得た。得られた菌糸を表４、表６、表８、表１０、表１２に示した実施例及び比較例組成物に接種後２４℃で３ヶ月間培養し、培地中に菌糸が蔓延した状態の菌床を得た。
【００２９】
＜試料の調製＞
実施例１：メシマコブ菌床抽出物は、メシマコブ菌床を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。溶媒を留去し、５％濃度になるように５０％エタノール水溶液に溶解した。陽性対照として用いたアルブチンは、市販の試薬を用いてＰＢＳ（−）溶液に溶解した。試料は全て、０．２μｍメンブレンフィルターで除菌ろ過を行った。
【００３０】
比較例３１（天然子実体の調整）：メシマコブ子実体の天然物は、長崎県男女群島女島より採取した物を用いた。このメシマコブ天然子実体を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。その後、溶媒を留去し、５％濃度になるように５０％エタノール水溶液に溶解、調整した。
【００３１】
比較例３２（培養菌糸抽出液の調整）：培養菌糸は、天然の子実体から、上記比較例３１と同方法にて分離した菌糸をチャペック培地にポリペプトン０．２％、酵母エキス０．１％を添加した培地で、２４℃で２週間通気培養し、培養して得られた菌糸を５０％エタノール水溶液で常温にて７２時間抽出した。その後、溶媒を留去し、５％濃度になるように５０％エタノール水溶液に溶解、調整した。
【００３２】
比較例３３（菌糸培養液の調整）：菌糸培養液は、天然の子実体から、上記比較例３１と同方法にて分離した菌糸をチャペック培地にポリペプトン０．２％、酵母エキス０．１％を添加した培地で、２４℃で２週間通気培養し、培養物から得られた菌糸を除去した培養液を用いた。
【００３３】
＜細胞培養＞
培養液は、牛胎児血清５．０％を加えたダルベッコＭＥＭ（Ｄ−ＭＥＭ）培地を用いた。細胞は、マウスメラノーマＢ−１６ Ｆ−１０を８ｃｍφのシャーレに植え付けた。植え付け量は４×１０３／ｃｍ２とした。植え付けの翌日、実施例２で調製した抽出物試料を乾燥物濃度にして１００ｐｐｍの濃度になるよう添加を行い、添加後３日後に試験を終了した。
【００３４】
＜評価方法＞
直径８ｃｍシャーレに増殖した細胞をセルスクレーパーで集め、透明な遠心チューブに入れ３、０００ｒｐｍ、１０分遠心し細胞を集めた。集まった細胞ペレットを２Ｎ−ＮａＯＨ溶液に溶解し、４０５ｎｍの吸光度を測定した。それぞれ吸光度をコントロールと比較することにより、８段階表示をした。
【００３５】
＜判定基準＞
表３に結果の判定基準を示す。メラニン量はコントロールと比較した吸光度値の割合で示した。なおアルブチンは、メラニン産生抑制の陽性対照物質として示している。
【００３６】
【表３】
本発明に係る菌床を表４に示した組成にて作製し、試料を調製した。
表４に示した菌床組成物及び天然の子実体、培養菌糸抽出液、菌糸培養液を用い場合のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表５に示す。表５より明らかなように、本発明に係わる桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加した実施例１はメラニン産生抑制の判定が１であり、最も高いメラニン産生抑制効果が認められ、天然のメシマコブ子実体を用いた比較例３１は、メラニン産生抑制の判定が２であり、高いメラニン産生抑制効果が認められた。このメラニン産生抑制効果は、メラニン産生抑制効果の高いことで知られているアルブチンの効果（判定３）を上回る高い値である。また、メシマコブ培養菌糸抽出液を用いた比較例３２及びメシマコブ菌糸培養液を用いた比較例３３は、メラニン産生抑制の判定がともに６であり、メラニン産生抑制効果はほとんど認められなかった。同様に桑オガクズの代わりに広葉樹オガクズを添加した比較例８もメラニン産生抑制の判定が８であり、メラニン産生抑制する作用が認められなかった。
【００３８】
この様に、本発明の菌床組成物である桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加した実施例１のメラニン産生抑制効果は、高いメラニン産生抑制効果があるとされているアルブチン及び天然のメシマコブ子実体と比較しても高い効果を示している。そして、桑オガクズを添加して培養した菌床の抽出物には広葉樹を添加して培養した菌床の抽出物には見られない高いメラニン産生抑制効果を認めた。
【００３９】
【表４】
【表５】
発明に係る菌床を表６に示した組成にて作製し、試料を調製した。表６に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表７に示す。表７に示されているように、桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを全て添加した実施例２は、桑オガクズに添加物を２種組み合わせた比較例１１、比較例１２と、桑オガクズに添加物を１種組み合わせた比較例１５、桑オガクズだけからなる比較例７と比較して、最も効果が高いことが確認できた。すなわち上記桑オガクズと３種類の添加物を全て添加した実施例２は、メラニン産生抑制の判定が１であった。
【００４２】
これに対し、桑オガクズに添加物を２種組み合わせた比較例１１、比較例１２は、メラニン産生抑制の判定が２、比較例９は、メラニン産生抑制の判定が２であった。桑オガクズに添加物を１種組み合わせた比較例１５は、メラニン産生抑制の判定が４であった。桑オガクズだけからなる比較例７は、メラニン産生抑制の判定が５であった。実施例２の桑オガクズに添加した添加物３種の内、小麦デンプンの代わりにフスマを同量添加した比較例１０は、メラニン産生抑制の判定が３であり、小麦デンプン添加のものより低かった。比較例１２の桑オガクズに添加した添加物２種の内、小麦デンプンの代わりにフスマを同量添加した比較例１３は、メラニン産生抑制の判定が４であり、小麦デンプン添加のものより低かった。以上の結果は、フスマを添加して培養することでは、メラニン産生抑制効果が向上しないことを示している。実施例２の桑オガクズに添加した添加物３種の内、小麦デンプンの代わりに酵母エキスを添加した比較例９は、メラニン産生抑制の判定が２であり、小麦デンプン添加のものより低かった。比較例１１の桑オガクズに添加した添加物２種の内、トウモロコシデンプンの代わりに酵母エキスを添加した比較例１４は、メラニン産生抑制の判定が４であり、トウモロコシデンプン添加のものより低かった。比較例１５の桑オガクズに添加した添加物２種の内、米ぬかの代わりに酵母エキスを添加した比較例１６は、メラニン産生抑制の判定が５であり、米ぬか添加のものより低かった。以上の結果は、酵母エキスを添加して培養することでは、メラニン産生抑制効果が向上しないことを示している。以上の結果は、桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを添加して培養することが、他の添加物を用いて培養したものに比較してメラニン産生抑制効果が明らかに向上することを示している。
【００４３】
【表６】
【表７】
次に、米ぬかの最適添加量を決定する為に、桑オガクズと米ぬかからなる菌床を調製した。即ち、桑オガクズの量は同じで、米ぬかの添加量を変えた表８の組成物を調製した。表８に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表９に示す。表９に示したように、米ぬかが無配合の比較例７は、メラニン産生抑制の判定が５であった。一方、米ぬかの添加量が１％の比較例１７は、メラニン産生抑制の判定が５であり、米ぬか無添加のものと変わらなかった。一方、米ぬか添加量が、３％の比較例１８、６％の比較例１９、１２％の比較例２０のメラニン産生抑制の判定はいずれも４であり、米ぬか無添加の組成物と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。さらに米ぬか添加量２４％の比較例２１のメラニン産生抑制の判定は５であり、米ぬか無添加のものと同等であった。以上の結果は、米ぬかの添加量は、３〜１２％がメラニン産生抑制効果が高いことを示している。
【００４６】
【表８】
【表９】
次に、小麦デンプンの最適添加量を決定する為に、桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプンからなる菌床を調製した。即ち、桑オガクズと米ぬかの量は同じで、小麦デンプンの添加量を変えた表１０の組成物を調製した。表１０に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表１１に示す。表１１に示したように、小麦デンプンが無配合の比較例１５は、メラニン産生抑制の判定が５であった。一方、小麦デンプンの添加量が１％の比較例２２は、メラニン産生抑制の判定が３であり、小麦デンプン無添加の比較例と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。また、小麦デンプン添加量が、４％の比較例２３、１０％の比較例２４のメラニン産生抑制の判定はいずれも２であり、小麦デンプン無添加の組成物と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。さらに小麦デンプン添加量１２％の比較例２５のメラニン産生抑制の判定は５であり、小麦デンプン無添加のものと同等であった。以上の結果は、小麦デンプンの添加量は、１〜１０％がメラニン産生抑制効果が高いことを示している。
【００４９】
【表１０】
【表１１】
次に、トウモロコシの最適添加量を決定する為に、桑オガクズと米ぬか及びトウモロコシデンプンからなる菌床を調製した。即ち、桑オガクズと米ぬかの量は同じで、トウモロコシデンプンの添加量を変えた表１２の組成物を調製した。表１２に示した菌床組成物のメラニン産生抑制効果試験の測定結果を表１３に示す。表１３に示したように、トウモロコシデンプンが無配合の比較例１５は、メラニン産生抑制の判定が５であった。一方、トウモロコシデンプンの添加量が１％の比較例２６は、メラニン産生抑制の判定が４であり、２％の比較例２７は、メラニン産生抑制の判定が２であり、４％の組成物２８は、メラニン産生抑制の判定が３であり、１０％の比較例２９は、メラニン産生抑制の判定が４であり、トウモロコシデンプン無添加の組成物と比較して、メラニン産生抑制効果が高いことがわかった。さらにトウモロコシデンプン添加量１２％の比較例３０のメラニン産生抑制の判定は５であり、トウモロコシデンプン無添加のものと同等であった。以上の結果は、トウモロコシデンプンの添加量は、１〜１０％がメラニン産生抑制効果が高いことを示している。
【００５２】
【表１２】
【表１３】
【発明の効果】
桑オガクズと米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンからなる組成物にキコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属のメシマコブ（Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．）を培養することにより、天然の子実体及び公知であるアルブチンと比較して、高い美白効果有する培養物を提供することができた。
Claims (1)
- キコブタケ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ）属メシマコブ（Ｐ．ｙｕｃａｔｅｎｓｉｓ（Ｍｕｒｒ．）Ｉｍａｚ．）のキノコの美白効果を向上させる培養方法において、桑オガクズ及び米ぬか及び小麦デンプン及びトウモロコシデンプンを配合した菌床を用い、菌床全体に対し小麦デンプンを１〜１０重量％及びトウモロコシデンプンを２〜４重量％配合することを特徴とする菌床培養方法。
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