JP3930808B2 - 抗ストレス機能、抗疲労機能、月経前期症候群及び月経痛緩和機能及び脳神経栄養因子としての機能を有する酵母由来機能性ペプチド及びその製造方法 - Google Patents
抗ストレス機能、抗疲労機能、月経前期症候群及び月経痛緩和機能及び脳神経栄養因子としての機能を有する酵母由来機能性ペプチド及びその製造方法 Download PDFInfo
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Description
あらゆる有機体はストレスを初めて知覚すればストレスに対抗して警告反応を起こして身体資源を動員する生理的覚醒反応を現すが、ストレスが続けば有機体は抵抗段階に入ってストレスに対する対応努力を行うことによって生理的変化は安定化する(Seyle,1956)という事実とに着眼して、酵母を最大増殖期まで増殖させた後、酵母が死滅しない範囲内で正常的な成長活動ができない範囲の適切な物理的または化学的ストレス、すなわち、高温、超音波または振動、pH変化などを成長培地に加えて抗ストレス物質(蛋白質、酵素)を多量生成、分泌させた後、酵母を自己消化や蛋白分解酵素により加水分解して得た酵母抽出物及び、これを限外ろ過膜で精製して得た酵母由来ペプチドが抗ストレス製剤や抗不安製剤、睡眠補助剤などの自律神経疾患治療及び予防剤、そしてストレスの形態と類似した症状を示すPMS及び月経痛緩和剤、及び脳神経栄養剤(天然神経栄養因子)としての機能があることを新しく見つけて本発明を完成するようになった。
タスクフォース オブ ザ ヨーロピアン ソサイエティ オブ カーディオロジー アンド ザ ノースアメリカン ソサイエティ オブ ペーシング アンド エレクトロフィジオロジー(Task Force of the European Society of Cardiology and the North American Society of Pacing and Electrophysiology)著 「ハート レート ヴァリアビリティ スタンダーズ オブ メジャーメント、フィジオロジカル インタープリテーション、アンド クリニカル ユース(Heart rate variability standards of measurement,physiological interpretation,and clinical use)」.1996年回報93、p.1043−1065. アイラクシネン、ケーイー、イリタロ、エー、ニーメラ、エムジェイ、ターヴァナイネン、ケーユー、フイクリ(Airaksinen,K.E.,Ylitalo,A.,Niemela,M.J.,Tahvanainen,K.U.,and Huikuri)著「エッチ ブイ ハート レート ヴァリアビリティ アンド オカーランス オブ ヴェントリキュラー エイリズミアス デュアリング バルーン オクルージョン オブ ア メジャー コロナリー アーテリー(H.V.Heart rate variability and occurrence of ventricular arrhythmias during balloon occlusion of a major coronary artery)」.1999年、アム ジェイ カーヂオール(Am.J.Cardiol)83巻、p.1000−1005 ブレックマン アイ アイ、ダーディモフ アイ ブイ (Brekhman I.I.,Dardymov I.V.)著「ロイディア(Lloydia)」32巻、1969年,p.46−51 マツモト ケイ、イシハラ ケイ、タナカ ケイ、イノウエ ケイ、フシキ ティー(Matsumoto K.,Ishihara K.,Tanaka K.,Inoue K.,Fushiki T.)著「ジャーナル オブ アプライド フィジオロジー(J.Appl.Phys.)」81巻,1996年、p.1843−1849 ホン ティー、マツモト ティー、キヨハラ エッチ、ヤマダ エッチ(Hong T.,Matsumoto T.,Kiyohara H.,Yamada H.)著「フィトメディスン(Phytomedicine)」5巻,1998年、p.353−360 パゲ ベ、パゲ エム、ノエル セ(Page B.,Page M.,Noel C.)著「インターナショナル ジャーナル オブ オンコロジー(Int.J.Oncol.)」3巻,1993年、p.473−476 ヘルシュコヴィッツ ベー ハー、ホルデン ハー テー、 ベランティ ヨット アー、ガファー アー(Herscowitz B.H.,Holden H.T.,Bellanti J.A.,Ghaffar A.)編「インダクション アンド コレクション オブ ペリトニール エクスウデーツ マクロファージズ(Induction and Collection of Peritoneal Exudates Macrophages)」1981年ニューヨーク(New York)マルセル デッカー社( Marcel Dekker Inc.)発行 ヒラノ ティー、タガ ティー、ナカノ エヌ、ヤスカワ ケー、カシワムラ エス、シミズ ケー、マカジマ ケー、ピュン ケー エッチ、キシモト ティー(Hirano T.,Taga T.,Nakano N.,Yasukawa K,Kashiwamura S.,Shimizu K.,Makajima K.,PyunK−H.、Kishimoto T.)著「プロシーディングス オブ ナショナル アカデミー オブサイエンス ユーエスエー(P.Natl.Acad.Sci.USA)」82巻、1985年,p.5490−5494 ウォン ジー ジー、ウィテック−ジャヌッティ ジェイ エス、テンプル ピー エー、クリッツ エル、フェレンツ ツェー、ヘヴィック エル エム、クラーク エス シー、イケブチ ケー、オガワ エム(Wong G.G.,Witek−Giannoutii J.S.,Temple P.A.,Kriz R.,Ferenz C.,Hewick R.M.,Clark S.C.,Ikebuchi K.,Ogawa M.)著「ジャーナル オブ イミュノロジー(J.Immun.)」140巻,1988年、p.3040−3044 オカノ エイ、スズキ シー、タカツキ エフ、アキヤマ ワイ、コイケ ケー、オザワ ケー、ヒラノ ティー、キシモト ティー、ナカハラ ティー、アサノ エス(Okano A.,Suzuki C.,Takatsuki F.,Akiyama Y.,Koike K.,Ozawa K.,Hirano T.,Kishimoto T.,Nakahara T.,Asano S.)著「トランスプランテーション(Transplantation)」48巻、1989年、p.495−498 アダムス ディー オー、ハミルトン ティー エー(Adams D.O.,Hamilton T.A.)著「アニュアル レビュー オブ イミュノロジー(Annu Rev.Immunol.)」2巻,1984年、p.283−318 フェラン エム エー、シュライベル エル デー(Farran M.A.,Schreiber R.D.)著「アニュアル レビュー オブ イミュノロジー(Annu.Rev.Immunol.)」22巻、1993年,p.571−611 カオ エッチ、ヴォルフ エル ゲー、メルツェル エム エス、クローフォード アール エム(Cao H.,Wolff R.G.,Meltzer M.S.,Crawford R.M.)著「ジャーナル オブ イミュノロジー(J.Immunol.)」143,巻、1989年、p.3524−3531 リレス ダブリュー シー、ファン フォルフィス ヴェー ツェー(Liles W.C.,Van Voorhis W.C.)著「ジャーナル オブ インフェクシャス ディジーズ(J.Infect.Dis.)」172巻,1995年、p.1573−1580 モスマン ティー、コフマン アール(Mosmann T.,Coffman R.)著「アニュアル レビュー オブ イミュノロジー(Ann.Rev.Immunol.)」7巻,1989年、p.145−173 ロッツ エム、ジリック エフ、カブリディス ピー、ツォーカス シー、ヒラノ ティー、キシモト ティー、カーソン ディー エー(Lotz M.,Jirik F.,Kabouridis P.,Tsoukas C.,Hirano T.,Kishimoto T.,Carson D.A.)著「ジャーナル オブ エクスペリメンタル メディスン(J.Exp.Med.)」167巻,1988年、p.1253−1258
の典型的な構造であって、最も容易に観察できるが、これらは小腸粘膜にあるリンパ小節の集合体であって、小腸の腸間膜側に沿って位置しており、回腸で最も明らかである。バイエル板で活性化した免疫細胞はIL−6及びGM−CSF(Granulocyte macrophage−colony stimulating factor)をはじめとする多様なサイトカイン類を生産することによって、骨髄細胞だけでなく白血球や他の造血系細胞の成長、移動、分化などを調節して免疫反応や炎症反応を調節する。このような点に基づいて下記実験例では本発明のミネラル強化酵母の抽出物がバイエル板細胞を活性化させて生産したサイトカイン類が骨髄細胞を増殖させる程度を評価することによって免疫増強活性を決定しようとした。
食品等級の酵母菌であるサッカロミセスセレビシエ菌株(ゼニコー株式会社の生イーストを購入して使用)をYM培地で24℃、酸素供給下で48時間培養した。
1)酵母の改良菌株選別
生命工学研究所(KCTC)から分譲された食品等級のサッカロミセスセレビシエ7904菌株を45kHzの連続的な超音波及び水中ポンプを通じた落差幅を利用して振動を加えるストレス条件下で48時間培養した後、このストレス条件下で生き残った酵母をYM寒天プレート(酵母抽出物3g、麦芽抽出物3g、ペプトン5g、グルコース10g、寒天15g/L)にスクリーニングしてプレート上で最も速く成長してかつ大きいコロニーを形成するものを改良菌株として選別した。
このように選別された改良菌株をYM培地で24℃、酸素供給下の醗酵槽で48時間培養し、その培養液を15,000rpmで15分間遠心分離して上澄み液を除去して残る沈殿物である酵母ペーストを1%ペプトン緩衝液で10倍希釈した後、超音波発生装置及び振動装置が付着された醗酵槽で35℃〜45℃の高温で45Khzの超音波を5分間隔で30秒間加える行為を合計で8時間反復し、水中ポンプを利用して落差を利用した振動を与えつつ酵母がストレスによって分泌する抗ストレス物質の生成を促進しながら8時間培養した。
上記の2)で培養された培養液を50℃の高温で酵母が自体的に溶解させる自己消化酵素を利用して自己消化を実施した。これと共に酵母蛋白質のペプチドへの加水分解を促進するために蛋白質分解酵素(パパイン30,000)1%を添加して初期pH4.0で48時間加水分解を行って蛋白質をペプチドに溶解した。
前記3)のように自己消化及び加水分解されたものを15,000rpmで遠心分離して水溶液状態の上澄み液だけを分離、収得して”試料2”として下記の実験例で使用し、
沈殿物は”試料3”としてやはり下記の実験例で使用した。このように収得された上澄み
液及び沈殿物を凍結乾燥させて粉末状の酵母抽出物及び沈殿物を得た。
前記実施例2と同じ方法で酵母抽出物を製造するが、最終的に得られた上澄み液を超微細ろ過装置により限外ろ過膜(MWCO=10,000)を通過させて分離、精製した後、凍結乾燥させて分子量10、000以下の精製された天然酵母ペプチドを製造した。
成分分析
実施例2で製造した酵母加水分解物の一般成分はAOAC法によって測定した。水分は105℃で熱風循環乾燥法により、粗蛋白質はマイクロケルダール(microKjeldahl)法により、粗脂肪はソックスレー(soxhlet)抽出法により、粗灰分は550℃で灰化して定量した。
実施例2で収得された上澄み液(試料2)を凍結乾燥させた粉末に、当帰、丹蔘、鬱金、蓬朮、ハッカ、及び高麗人参を各々同一重量の割合で粉末化した後、よく混合して生薬材料を準備した。
飲料の製造
1)ろ過及び精製
前記実施例2で収得された上澄み液を同量の活性炭(上澄み液重量の5%)と混合した後、約20倍の量の水に入れて攪拌した。このように攪拌されたものを加圧殺菌器に入れて121℃で15分間殺菌した後2回減圧ろ過した。脱色脱臭された無色の精製された酵母抽出物を得た。
前記1)で製造された酵母抽出物を70重量部の水に希釈して、ここに液状果糖7重量部、ブドウ糖4重量部、そして梅の実果汁濃縮液5.9重量部を添加して飲料組成物を製造した。
酵母抽出物で抗ストレス飲料を製造する時、素材酵母自体はあまり好まれない点を補うために、この好み度を高めるために甘味剤及び酸味剤を添加し、この好み度相乗效果及び適正配合比率の選定のために5段階評点法(1:とてもきらい、3:普通、5:とても良い)で官能検査を実施して下記表3にその結果を表した。
以下、本発明の酵母抽出の抗ストレス活性、抗疲労活性、自律神経調節機能、PMS及び月経痛緩和効果などを試験した。
抗ストレス活性試験(1)(高麗大学生命工学院金キョンミ博士の実験)
抗ストレス活性試験のための実験動物には約180g重量の5周齢のの雄Sprague−Dawley系(以下、SD)ラット(バイオリンク(株)から購入)を利用し、これを購入した後一週間、照明時間を朝7時から夕方7時まで12時間にし、室内温度は18〜23℃に調節された部屋に適応させた後、本実験に使用した。飼料は固形飼料(動物実験用飼料、(株)第一製糖から購入)を使用して給水は水道水を使用し、飼料及び給水は制限しなかった。試料は3種類を使用したが、一般的な酵母抽出物の製造方法により50℃の高温下で加水分解させた試料、すなわち、前記実施例1で製造されたものを試料1、超音波及び振動を加えた後に加水分解させたものを遠心分離した上澄み液、すなわち、実施例2の上澄み液を試料2、実施例3で遠心分離後に沈殿された沈殿物を試料3として、試料1、2、3いずれも凍結乾燥させて粉末とした後に実験した。
ストレス対照群から有意的に差がある:a P<0.1、b P<0.05
また、ストレスを受けた時には脾臟をはじめとするいろいろな免疫機関の肥大及び免疫細胞の減少だけでなくLDHの血中酵素の変化が現れると知られているが、ストレスによる血中コルチコステロイドの増加は脂質代謝に影響を与えて血中コレステロールの数値を高める。このような事実から、本研究でも試料の抗ストレス効果を検討するために血清のうちLDH、GOT(Glutamate oxaloacta tetransaminase)、GPT(Glutamate pyruvate transaminase)、ALPの活性℃及び総コレステロールを測定した。その結果を下記の表5に表した。
ストレス対照群から有意的に差がある:a P<0.05、b P<0.01
抗疲労効果試験(高麗大学生命工学院金キョンミ博士の実験)
本発明の酵母抽出物の抗ストレス活性度を測定するために抗ストレス因子と密接な関係がある水泳持久力測定を通じた抗疲労効果を測定した。水泳持久力測定にはデータの再現性及び信頼性が高い図4に示されたものと同じマウス用持久力測定装置(流水プール運動装置、松本ら、1996)を利用し、実験用マウスとしては約28g重量の7周齢の雄マウス(Male ICR mice:韓国国際実験動物センターから購入)を利用して一週間、照明時間を朝7時から夕方7時まで12時間にし、室内温度は22〜24℃、湿度50%に調節された部屋(33×23×12cm、3頭/部屋)に適応させた後に本実験に使用したが、飼料は固形飼料(第一製糖から購入)を使用して給水は水道水を使用し、飼料及び給水は制限しなかった。本実験では、対照群マウスは固形飼料を経口投与(1g/kg)し、実験群マウスは50℃の高温下で加水分解させて得た、実施例1で製造されたものと同じ酵母抽出物を試料として経口投与(1g/kg)して総9日間3回水泳時間を測定した。対照群及び試験群のマウスは各6頭ずつ使用して、前記マウスの水泳持久力を測定するために図4のアクリルプラスチック水泳場(90×45×45cm)に35cm深さの水を満たして34℃に維持させ、水の流れはポンプで8L/mに電圧を調節して維持し、流量計(type F45500,Blue white Co,Westminster,CA,USA)で測定して適当な条件を維持させた。
自律神経機能活性実験
抗不安症患者を対象として実施例1で製造した酵母抽出物投与時の自律神経機能検査を実施した。一般的にストレス抑制力は交感神経及び副交感神経の伸縮性と密接な関係があるために、拍動の変化を測定して得たTPはストレス抑制指標として重要な意味を有する。TPはVLF(very low frequency)、LF(low frequency)とHF(high frequency)を含む5分間のあらゆるパワーを意味する。これは基本的な影響因子である交感神経の活動と共に自律神経系の全体的な活動を反映する。このような意味を有する指標を各々測定した結果(図6)、SCP−20経口投与群は確実な自律神経調節機能の効果を表し、擬薬投与時にTPの値にはあまり変化がなかった。これは自律神経調節機能の向上を意味することであってストレス及びその他の痛み誘発物質に対する対応調節能力が強化されたことを意味する。またストレス及び痛みが主原因である月経前症候群にも効果があると見なされる。
バイエル板を通じた骨髄細胞増殖活性
Hongらの方法により前記活性を測定した。サッカロミセスセレビシエから得られた本発明の酵母加水分解産物を他の投与量でC3H/HeJマウス(大韓バイオリンク社、韓国)に経口投与し、対照群として前記マウスに蒸溜水を投与した。連続7日間経口投与した後、5%FBS(RPMI1640−FBS)で補強されたRPMI 1640培地内のバイエル板細胞の懸濁液をC3H/HeJマウスの小腸から製造した。200μlアリコートの細胞懸濁液(2X106細胞/ml)を5%CO2−95%空気の湿った雰囲気、37℃で5日間培養した。得られた培養上澄み液(50μl)を同じインキュベータで6日間、未処理されたC3H/HeJマウスから得られた骨髄細胞懸濁液(2.5X105細胞/ml)と共に培養した。20μlのAlama BlueTM溶液を添加した後、前記細胞を5〜24時間連続培養して、spectrafluor Plus(Tecan,Austria)を使用して544nmの励起波長及び590nmの放出波長で培養中蛍光強度を測定して細胞数を計数した。投与量依存方法により骨髄細胞を増殖させた結果、一日2.0g/kg以上でほとんど安定水準に到達した(図8)。本発明の酵素加水分解産物(一日2.0g/kg)がバイエル板細胞を刺激するために使われれば、骨髄細胞の数はAlamar BlueTM還元試験で測定した結果、2.0倍まで増加した(図8)。このような観察結果を通じていくつの種類の成長因子が増殖反応に寄与することが分かる。通常の活性化T細胞のようなリンパ球はIL−6のような成長因子を分泌すると知られており、このような成長因子は造血細胞の増殖を刺激して顆粒球またはマクロファージに対する差を誘発する。本発明の酵母加水分解産物がバイエル板細胞からIL−6分泌を増加させるかどうかを調べるために、他の投与量で7日間前記酵母加水分解産物を投与したC3H/HeJのバイエル板細胞を5日間培養した後、IL−6のレベルを測定した。前記IL−6含量はバイエル板細胞に酵母加水分解産物が投与された場合に調節された培地で顕著に増加した(一日2.0g/kg、2.3倍)(表6)。このような結果を通じてIL−6が骨髄細胞の増殖に部分的に寄与することが分かる。IL−6が多機能性造血成長因子であるためにこれらは顆粒球造血を刺激する。
b 7日間異なる投与量でSCP−20を供給したC3H/HeJマウス(n=4)からバイエル板細胞を得た後、試験管内で5日間4X105細胞/ウェルの密度でプーリング及び培養した。得られた無細胞上澄み液をIL−6に対してELISAで測定した。
c 7日間異なる投与量でSCP−20を供給したICRマウス(n=4)からバイエル板細胞を得た後、試験管内で2日間2X105細胞/ウェルの密度でプーリング及び培養した。得られた無細胞上澄み液をIL−6に対してELISAで測定した。
* p<0.05:対照群及び試料間の有意水準
データを4回実験の平均±標準偏差の対照群の百分率で表示した。
マクロファージ−刺激活性及びIL−6の製造
1)マクロファージ−刺激活性
異なる投与量で本発明の酵母加水分解産物を経口投与したICRマウス(雄、大韓バイオリンク社、忠▲清▼北道、韓国)をi.pを通じて1mlの3%チオグリコレート液体培地に無菌的に注入した。腹膜滲出物細胞を5mM HEPES、ペニシリン(100U/ml)及びストレプトマイシン(100μg/ml)を含む冷たいRPMI−1460培地(Gibco,Grand island,NY)5mlを注入して培養した。前記細胞懸濁液を1X106細胞/mlに調整した後、湿っているチャンバで37℃で培養し、前記マクロファージ刺激活性をマクロファージから得られた酸ホスフェートの活性を基準に細胞間リソソーム酵素の試験システムを使用して測定した(Bio−Rad,Model 3550−UV)。
前記多重抗体サンドウィッチ原理を採用するELISA(enzyme−linked immunosorbent assay)を使用した。50μlの重炭酸塩バッファ(pH8.5)に溶解した2μgの精製した抗マウスIL−6 mAb(モノクローナル抗体)(clone MP5−20F3,PharMingen,San Diego,CA)を96プレートの各ウェルに接着させた後、接着されていない抗体を0.05%ツイーン20(PBSツイーン(Tween))を含むPBSで4回洗浄して除去した。試料100μlを抗体コーティングされたウェルに加え、10%FBSを含むPBSにおいて各100μlのビオチニル化の抗マウスIL−6mAb(MP5−32C11,PharMingen)を同じウェルに加えた。前記プレートをPBSツイーンで6回洗浄した後、アルカリ性フォスファターゼ−ラベル付きのストレプトアビジン(Gibco,Grand Island,NY)を各ウェルに加えた。各ウェルを150μlの色原体基質溶液(1mlの10%ジエタノールアミンバッファに溶解した1mgのp−ニトロフェニル二ナトリウム塩、pH9.8)と共に培養した後、405nmで吸光度を測定した。
の値を統計的意義があるものと考慮した。
本発明の酵母加水分解産物を一日0.5、1.0及び2.0g/kgを7日間投与した結果、マクロファージリソソーム酵素の相対活性において投与量の依存的増加を表した(図9)。相対活性における著しい増加は一日0.5g/kgで現れ(塩水対照群の1.3倍)、このような結果を通じて本発明の酵母加水分解産物の経口投与がマクロファージの刺激応答を増加させるということが分かる。また、T細胞からIL−2生成を増加させて造血細胞の増殖を刺激するIL−6分泌、に対する異なる投与量で本発明の酵母加水分解産物を経口投与した効果をマウスで調べた。本発明の酵母加水分解産物の経口投与は対照群と比較して著しく、かつ投与量を依存的に増加させると明らかになり、本発明の酵素加水分解産物は一日2.0g/kgでIL−6生成を最も大きく刺激した(1.9倍)(表6)。
臨床実験(黄ウォンジュン神経精神科専門医の臨床実験)
本発明の人体に対する抗ストレス効果を臨床試験するために、1.不眠症がある患者、2.不安症がある患者、3.頭痛がある患者など神経精神科的患者群を対象にベースライン投薬3日後に脳機能検査を行った後(2001年2月6日)、それぞれの患者に3日間一日に本発明の酵母抽出物500mgを服用させた後、脳機能検査を実施した(2001年2月9日)。その結果を図6A及び図6Bに図示した。
臨床実験(黄ウォンジュン神経精神科専門医の臨床実験)
実施例5により製造されたカプセルを20〜35才の女性30人、特に、PMS、月経痛、冷症などがある女性に月経前、または月経痛がある月経中に1回1〜2カプセルずつ、1日2〜3回服用させた。
A)身体症状
1)力がないとか疲労感を感じる。
2)食欲が増加したり減少する。
3)乳房が腫れたり痛い。
4)頭が痛い。
5)むかついたりはく。
6)目眩がする。
7)からだが腫れる。
8)腹が痛いか不便であり、間歇的な腹部けいれんがある。
9)不眠症がある。
10)性的な活動や興味が変わる。
B)情緒症状
1)一日にもいろいろな感情の変化が多い。
2)心が不安でそわそわする。
3)神経が鋭敏になったり落ち着かない
4)悲しかったり憂鬱である。
5)ちょっとしたことで小言を言ったり口喧嘩をする。
6)しゃくにさわればヒステリックになる。
7)罪責感を感じる。
8)他人の欠点や間違いが理解できない(または我慢できない)。
9)不愉快な事件についてじっくり考えたり心配する。
10)むっつりしている。
C)行動症状
1)行動が鈍くなったりぎこちない。
2)失敗や事故を犯す(倒れたり刀で切ったり偶然に物を破損)
3)死亡や自殺について考える(または寝入って永遠に目覚めたくない)。
4)しゃべりたくなかったり歩き回りたくない。
5)薬物乱用(覚醒剤、鎮静剤など)をする(またはタバコや酒を多く食べる)。
6)乱暴になったりいじめる。
7)家庭や職場での能力発揮や社会的な活動が減少する。
8)社会活動を避けて家の中に一人でいることを願う。
9)家事(清掃、洗濯など)を怠る。
10)余暇活動(趣味生活、TV視聴、読書など)で送る時間が少ない。
その平均的な変化度は下の表の通りである。
Claims (10)
- 次の段階を含む酵母抽出物の製造方法:
1)酵母が死滅しない範囲内で高温、超音波、振動、またはpH変化を加えつつ培養して生き残った菌株だけを選別する段階と、
2)前記選別された酵母菌株を最大増殖期まで培養する段階と、
3)前記培養された酵母を35℃〜70℃の温度で自己消化させる段階と、
4)前記自己消化と同時に、あるいは後に蛋白質分解酵素をさらに添加して酵母蛋白質を加水分解させる段階と、
5)前記加水分解されたものを遠心分離して上澄み液だけを分離して取る段階。 - 酵母を自己消化させる前に酵母が死滅しない範囲内で高温、超音波、振動、またはpH変化の適切な物理的または化学的ストレスを加えてストレスに耐えるための代謝物質の分泌を誘導する段階をさらに含む、請求項1に記載の酵母抽出物の製造方法。
- 請求項1または2の方法により得られた酵母抽出物を限外ろ過して10,000Da以下の分子量を有するペプチドを取る段階を含む酵母ペプチドの製造方法。
- 請求項1または2の方法により得られた酵母抽出物を活性炭と共に水に入れて攪拌した後加圧殺菌する段階と、このように殺菌されたものを減圧ろ過して無色に精製する段階と、を含む、機能性飲料の製造方法。
- 請求項1ないし4のいずれか1項の製造方法によって得られた酵母抽出物を有効成分として含む月経前期症候群及び月経痛緩和用組成物。
- 請求項1ないし4のいずれか1項の製造方法によって得られた酵母抽出物10ないし90重量%、キトサン5ないし80重量%、及び生薬材料粉末5ないし80重量%を含む、請求項5に記載の月経前期症候群及び月経痛緩和用組成物。
- 前記キトサンは、分子量300,000Da以上の水溶性高分子キトサンである、請求項6に記載の月経前期症候群及び月経痛緩和用組成物。
- 前記生薬材料は、当帰、丹蔘、鬱金、蓬朮、ハッカ、甘草、ショウガ、天麻、白朮、センキュウ(Cnidium officinale)、桂皮及び高麗人参で構成される群から選択される一つ以上である、請求項6に記載の月経前期症候群及び月経痛緩和用組成物。
- 請求項1ないし4のいずれか1項の製造方法によって得られた酵母抽出物を含む、月経前期症候群及び月経痛緩和機能性飲料。
- 請求項1ないし4のいずれか1項の製造方法によって得られた酵母抽出物0.1ないし10重量%、通常の飲料添加物10ないし25重量%、残りの重量%の水を含む、請求項9に記載の機能性飲料。
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