JP3452372B2 - 組換えベクター及びそれを用いてジャガイモにｐｖｙ−ｔに対する免疫性を付与する方法並びにｐｖｙ−ｔ免疫性ジャガイモ - Google Patents

組換えベクター及びそれを用いてジャガイモにｐｖｙ−ｔに対する免疫性を付与する方法並びにｐｖｙ−ｔ免疫性ジャガイモ

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ジャガイモにジャガイ
モＹウイルスえそ系統（以下、ＰＶＹ−Ｔという）に対
する免疫性を付与することができる新規な組換えプラス
ミド及びそれを用いてジャガイモにＰＶＹ−Ｔに対する
免疫性を付与する方法並びにＰＶＹ−Ｔ免疫性ジャガイ
モに関する。
【０００２】
【従来の技術】ＰＶＹ−Ｔは、タバコに激しいえそ症状
を表す、タバコ黄斑えそ病の病因であり、アブラムシに
より伝搬される。ＰＶＹ−Ｔに感染したジャガイモが栽
培されると、ＰＶＹ−Ｔがアブラムシにより伝搬され、
タバコに甚大な被害を及ぼす虞がある。ＰＶＹ−Ｔはジ
ャガイモに対してもモザイク病を引き起こす場合がある
が、病徴が軽微で不明瞭な品種も少なくなく、種芋栽培
では畑における病株除去が困難となり、感染源として残
る心配がある。ジャガイモ品種の中には、ＰＶＹ−Ｔを
接種しても、当代では接種葉にえそ斑点を現すが次代で
は無病徴で感染が認められない品種があり、これらの品
種を通常の交雑育種法により育種すればＰＶＹ−Ｔ抵抗
性ジャガイモが得られるかもしれない。しかしながら、
この方法で抵抗性品種を作出するためには１０年以上も
の長い年月が必要であると予想される。もし、遺伝子組
換え技術により、ジャガイモに対してＰＶＹ−Ｔ抵抗性
を付与することができれば、短期間でＰＶＹ−Ｔ抵抗性
ジャガイモを得ることができ、非常に有利である。
【０００３】従来より、植物にウイルス抵抗性を付与す
る方法として、ウイルスのコートタンパク質（以下、
「ＣＰ」ということがある）をコードする遺伝子を植物
に導入する方法が知られている（特開昭６２−２０１５
２７号、特開昭６２−２８５７９１号、植物細胞工学Vo
l. 4, No. 2 (1992) pp.101-109 、Bio/Technology 8,1
27-134 (1990)）。この方法によると、植物にウイルス
抵抗性が付与されるが、植物はウイルスのＣＰを産生す
る。植物がウイルスＣＰを生産すると、その生産のため
にアミノ酸及びエネルギーが費やされ、植物の生長がＣ
Ｐを生産しないものに比較して悪くなる。また、ジャガ
イモのような食用に供される植物がウイルスのＣＰを産
生すると、ＣＰによる味の変化及び健康への安全性も検
討されなければならない。従って、もし、ウイルスに対
して抵抗性を有するがＣＰを産生しない植物が得られれ
ば非常に有利である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、ＰＶＹ−ＴのＣＰを植物に産生させることなくＰＶ
Ｙ−Ｔに対する免疫性を植物に付与することができる組
換えベクター及びそれを用いてジャガイモにＰＶＹ−Ｔ
に対する免疫性を付与する方法並びにＰＶＹ−ＴのＣＰ
を生産しないＰＶＹ−Ｔ免疫性ジャガイモを提供するこ
とである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研
究の結果、キュウリモザイクウイルス（以下、「ＣＭ
Ｖ」ということがある）のＲＮＡ４のリーダー配列の下
流にＰＶＹ−ＴのＣＰをコードする遺伝子を挿入した組
換えベクターでジャガイモを形質転換することにより、
ＰＶＹ−ＴのＣＰを産生することなくＰＶＹ−Ｔに対し
て免疫性を有するジャガイモを得ることができることを
見出し本発明を完成した。
【０００６】すなわち、本発明は、プロモーターの下流
にキュウリモザイクウイルスのＲＮＡ４のリーダー配列
及びその下流にＰＶＹ−Ｔのコートタンパク質をコード
する遺伝子を有する組換えベクターを提供する。また、
本発明は、上記本発明の組換えベクターでジャガイモを
形質転換することから成る、ジャガイモにＰＶＹ−Ｔに
対する免疫性を付与する方法を提供する。さらにまた、
本発明は、上記本発明の方法により作出された、ＰＶＹ
−Ｔに対する免疫性を有するジャガイモを提供する。
【０００７】以下、本発明を詳細に説明する。
【０００８】本発明の組換えベクターに挿入されるＣＭ
ＶのＲＮＡ４のリーダー配列は文献新田ら（１９８８）
日本植物病理学会報５４：５１６−５２２に示されてお
り、下記実施例において用いた配列の塩基配列は下記に
示す通りである。 TCTAGAGTTATTGTCTACTGACTATATAGAGAGTGTGTGTGTGCTGTGTTTTCTCTTTTGTGTCGTAGAATT GAGTCGAGTCATG ＣＭＶのＲＮＡ４のリーダー配列は化学合成により、又
は、ＣＭＶから切り出したりＰＣＲで増幅したりするこ
とにより容易に調製することができる。
【０００９】上記ＣＭＶのＲＮＡ４のリーダー配列の下
流には、ＰＶＹ−Ｔのコートタンパク質をコードする遺
伝子が挿入される。ＰＶＹ−Ｔのコートタンパク質のア
ミノ酸配列及びそれをコードする遺伝子の塩基配列は公
知であり、下記実施例において用いたもののアミノ酸配
列及び遺伝子の塩基配列をそれぞれ図２及び図３に示
す。コートタンパク質をコードする遺伝子はＰＶＹ−Ｔ
から常法（ＰＣＲ法等）により容易に調製することがで
きる。
【００１０】上記ＣＭＶのＲＮＡ４のリーダー配列及び
ＰＶＹ−Ｔのコートタンパク質をコードする遺伝子は、
プロモーターの下流に挿入される。プロモーターは植物
細胞内で転写を行わしむることができる公知のいずれの
プロモーターでもよい。好ましい例としてカリフラワー
モザイクウイルスの３５Ｓプロモーターを挙げることが
できるがこれに限定されるものではない。
【００１１】本発明の組換えベクターは、ジャガイモを
形質転換することができ、ジャガイモ細胞内で複製し得
るいずれのベクターをもベースにすることができる。ベ
クターは上記プロモーターの他にジャガイモ細胞内で機
能する複製開始点を有し、また、ターミネーター及び薬
剤耐性のような適当な選択マーカーを有することが好ま
しい。このようなベクターは市販されており、下記実施
例においては米国クローンテック社から市販されている
植物発現プラスミドベクターｐＢＩ１２１をベースに用
いている。上記ＣＭＶのＲＮＡ４のリーダー配列及びＰ
ＶＹ−ＴのＣＰ遺伝子をｐＢＩ１２１に組み込んだ、下
記実施例において作製された本発明の組換えベクターの
一例の遺伝子地図を図１に示す。
【００１２】なお、一般にＤＮＡにわずかな置換、欠失
又は挿入が生じてもその機能に実質的に影響しないこと
があることは当業者においてよく認識されている。従っ
て、上記したＣＭＶのＲＮＡ４のリーダー配列又は図２
及び図３に示したＰＶＹ−ＴのＣＰのアミノ酸配列若し
くは遺伝子配列にわずかな置換、欠失又は挿入が生じた
ものであっても、この明細書に記載した方法でジャガイ
モを形質転換することができ、それによってジャガイモ
にＰＶＹ−ＴのＣＰを産生することなくＰＶＹ−Ｔに対
する免疫性を付与することができるものは、この明細書
の特許請求の範囲に言う「キュウリモザイクウイルスの
ＲＮＡ４のリーダー配列」又は「ジャガイモＹウイルス
えそ系統のコートタンパクをコードする遺伝子」に含ま
れるものと解釈する。例えば、ＰＶＹ−ＴのＣＰに関
し、オランダで分離されたＰＶＹ−Ｔ（文献：Van Der
Vlugt et al., (1989) J. Gen. Virology 70, 229-233
）や北海道大学で発表されたＰＶＹ−Ｔ（文献：大島
一里ら（１９９１）日本植物病理学会報５７，６１５−
６２２）は図２に示す、下記実施例で用いたＰＶＹ−Ｔ
のＣＰのアミノ酸配列とは２又は３アミノ酸異なってい
るが、これらの配列をコードする配列も本発明で言う
「ジャガイモＹウイルスえそ系統のコートタンパクをコ
ードする遺伝子」に含まれることは言うまでもない。
【００１３】本発明の組換えベクターは、上記したベー
スとなるベクターに上記ＣＭＶのＲＮＡ４のリーダー配
列及びＰＶＹ−ＴのＣＰをコードする配列を常法により
制限酵素を駆使して挿入することにより容易に調製する
ことができる。なお、具体的な調製方法の一例は下記実
施例に詳述されている。
【００１４】本発明の組換えベクターでジャガイモを形
質転換する方法としては、まず、本発明の組換えベクタ
ーで、植物に対して強力な感染力を有するアグロバクテ
リウム・ツメファシエンス（Agrobacterium tumefacien
s)を形質転換し、これをジャガイモに接種して感染させ
る方法が好ましいがこれに限定されるものではない。ア
グロバクテリウム・ツメファシエンスの形質転換方法自
体は公知であり、例えば凍結融解法（文献：G. An et a
l., (1988) Binary Vectors, In Plant Molecular Biol
ogy Manual A3, Kluwer Academic, Dordrecht pp.1-19
）により行うことができる。
【００１５】下記実施例において具体的に示されるよう
に、本発明の組換えベクターでジャガイモを形質転換す
ることにより、ジャガイモにＰＶＹ−Ｔに対する免疫性
を付与することが可能になった。しかも、本発明の方法
により免疫性を付与されたジャガイモでは、ＰＶＹ−Ｔ
のＣＰ遺伝子の転写は行われるがＣＰは産生されない。
また、本発明の方法により作出されたジャガイモは正常
なジャガイモと比較して形態も全く変わらない。
【００１６】以下、本発明を実施例に基づきさらに具体
的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定さ
れるものではない。
【００１７】
【実施例】
(1) ＰＶＹ−ＴのＣＰ遺伝子の単離 ＰＶＹ−Ｔに感染した葉の凍結乾燥標品（宇田川・都
丸、１９７２、日本植物学会報３８、２１０）をタバコ
葉に接種して増殖させ、全身感染タバコ葉磨砕汁液から
分画遠心法により精製ウイルスを得た。精製ウイルスに
最終濃度１％のドデシル硫酸ナトリウムを加えてＣＰと
ＲＮＡを解離させ、ショ糖密度勾配遠心（０−３２．５
％ショ糖、３９０００ｒｐｍ、４時間）によりＲＮＡの
みを分離し、最終濃度７０％になるようにエタノールを
加えてＲＮＡを沈殿させて遠心分離を行ったＰＶＹ−Ｔ
のＲＮＡを得た。得られたＲＮＡにプライマー１（表
１）を加え、Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素（米国ＢＲＬ社製）
を用いて商品に添付された指示書に記載された条件でｃ
ＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡにプライマー１及
び２（表１）を加えた後、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ
（宝酒造社製）を用いて指示書に添付の緩衝液中で９３
℃、１分間、４２℃、１分間、７２℃、１分間のサイク
ル３０回のポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣ
Ｒ）を行って、ＣＰ遺伝子を増幅した。増幅したＤＮＡ
を制限酵素ＳｓｔＩ及びＸｂａＩを加えて両末端を切断
し、１．２％アガロース電気泳動後、ＤＥＡＥセルロー
スメンブレンＮＡ４５（米国Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＆Ｓ
ｃｈｕｅｌｌ社製）を用いて回収した。回収したＤＮＡ
を制限酵素ＳｓｔＩ及びＸｂａＩで切断したｐＢｌｕｅ
ｓｃｒｉｐｔ II ＳＫ（＋）（米国Ｓｔｒａｔａｇｅ
ｎｅ社製）に挿入し、大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し
た。得られたコロニーからプラスミド（ｐＰＴＣＰ）を
抽出し、制限酵素ＳｓｔＩ及びＸｂａＩで切断したとこ
ろ、約０．８ｋｂのＰＶＹ−ＴＣＰ遺伝子が確認され
た。
【００１８】(2) ＰＶＹ−ＴのＣＰの塩基配列の決定 プラスミド（ｐＰＴＣＰ）を０．４Ｍ ＮａＯＨ（３７
℃、５分間）を用いて変性し、エタノール沈殿して乾固
後、Ｔ７ＤＮＡポリメラーゼシーケンシングキット（フ
ァルマシア社製）でプライマー（Ｍ４、ＲＶ、宝酒造）
を用いて塩基配列の決定を行った。
【００１９】(3) ＣＭＶのＲＮＡ４リーダー配列の挿入 プラスミドｐＰＴＣＰで形質転換した大腸菌ＢＷ３１３
を液体培養し、６００ｎｍにおける吸光度が０．４にな
った時点でヘルパーファージＭ１３Ｋ０７を加え、カナ
マイシン（７０μｇ／ｍｌ）の存在下で一晩培養し、培
養液を１５０００ｒｐｍ、１５分間遠心し、上清にポリ
エチレングリコール６０００とＮａＣｌを最終濃度４
％、０．５Ｍになるように加え、氷上で１時間静置した
後、１５０００ｒｐｍ、１５分間遠心してファージを沈
殿させた。回収されたファージをＴＥ（１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．０）に懸濁
し、水飽和フェノール・クロロホルムを等量加え、５分
間撹拌後、１５０００ｒｐｍ、１５分間遠心して上清を
エタノール沈殿し、鋳型ＤＮＡを得た。鋳型ＤＮＡにプ
ライマー３（表１）を加え、部位特異的組換えキット、
Ｍｕｔａｎ−Ｋ（宝酒造社製）を用いてＣＭＶのＲＮＡ
４のリーダー配列の一部を導入し、ｐＰＴＣＰ（ＣＭ）
を得た。さらにｐＰＴＣＰ（ＣＭ）を上記の方法で再度
鋳型とし、プライマー４（表１）を用いて残りのリーダ
ー配列を導入した。得られたプラスミドの塩基配列を上
記と同様に決定した。決定された塩基配列を図４に示
す。図４から、ＰＶＹ−ＴのＣＰ遺伝子の上流にＣＭＶ
のＲＮＡ４のリーダー配列を持つプラスミドｐＰＴＣＰ
（ＣＭＬ）が得られたことが確認された。
【００２０】
【表１】 表１ 使用したプライマーの塩基配列 ──────────────────────────────────── プライマー１：5'AAAATCTAGATGAAATGACACAATCGATGCAGGAGGA3' プライマー２：5'TTTTGAGCTCTCACATGTTCTTCACTCCAAGTAGAG3' プライマー３：5'GGGGATCCACTAGTTCTAGAGTTTTCTCTTTTGTGTCGTAGAATTGAGTCGAGTCA TGGGAAATGACACAATCGATGCAGGAGGA3' プライマー４：5'GGGATCCACTAGTTCTAGAGTTATTGTCTACTGACTATATAGAGAGTGTGTGTGTG CTGTGTTTTCTCTTTTGTGTGT3' ────────────────────────────────────
【００２１】(4) 植物形質転換用ベクターの構築 植物発現ベクターｐＢＩ１２１（米国クローンテック社
製）のβ−グルクロニダーゼ遺伝子を制限酵素ＸｂａＩ
及びＳｓｔＩで除去し、０．８％アガロース電気泳動を
行い、ベクター断片を回収した。回収したｐＢＩ１２１
由来の断片とＸｂａＩ及びＳｓｔＩで十分に消化したｐ
ＰＴＣＰ（ＣＭＬ）とをライゲーションし、大腸菌ＪＭ
１０９を形質転換し、３０μｇ／ｍｌのカナマイシンを
含むＬＢプレート上にコロニーを形成させ、植物形質転
換用ベクターｐＢＩＰＴ（ＣＭＬ）（図１）を得た。
【００２２】 (5) Agrobacterium tumefaciens の形質転換 凍結融解法により、Agrobacterium tumefaciens LBA440
4 （ホックマンら、Nature 303:179-183, 1983) をＰＶ
Ｙ−ＴＣＰ発現ベクターｐＢＩＰＴ（ＣＭＬ）で形質転
換した。
【００２３】(6) ジャガイモの形質転換 (5) で得られたAgrobacterium tumefaciens LBA4404 (p
BIPT(CML))を用いてジャガイモの形質転換を行った。形
質転換にはメークィン、トヨシロ、男爵薯、Ｓａｃｏ
（米国品種）を供試した。これらのウイルスフリーの植
物体をＬｉｎｓｍａｉｅｒ ａｎｄ Ｓｋｏｏｇ（１９
６５）の無機塩類、３０ｇ／ｌのショ糖及び寒天（０．
８％）を含む培地で無菌増殖し、無菌植物の葉を０．６
〜１．０ｘ０．５〜１．０ｃｍの大きさに、また、茎の
場合は０．５〜２．０ｃｍに切断した（節が含まれても
含まれなくてもどちらでもよい）。これらの葉及び茎と
Agrobacterium tumefaciens LBA4404 (pBIPT(CML))約１
０8 細胞とをＬｉｎｓｍａｉｅｒ ａｎｄ Ｓｋｏｏｇ
の無機塩類、３０ｇ／ｌのグルコースより成る液体培地
で２５℃、４８時間共存培養した。そして、葉及び茎の
断片をセフォタキシム２５０ｍｇ／ｌ含む滅菌水で洗浄
し（２〜３回）、細菌を洗い落とした後、表２及び表３
に示す再分化培地に置床した。表３の再分化培地（ＬＳ
ＺＫ１００）の場合、培養約２０日後、着床した葉及び
茎の断片からカナマイシン耐性カルスが出現し、これら
のカルスを上記培地上でさらに１０〜３０日培養した結
果、カナマイシン耐性を示す葉茎が出現した。さらに、
再分化した葉茎を切断し、Ｌｉｎｓｍａｉｅｒ ａｎｄ
Ｓｋｏｏｇの無機塩類、３０ｇ／ｌのショ糖、２５０
ｍｇ／ｌのセフォタキシム及び１００ｍｇ／ｌのカナマ
イシンを含む寒天（０．８％）で増殖した。また、表２
の再分化培地（ＫＳ１）の場合は、カルス化及び再分化
がＬＳＺＫ１００に比べ遅くなる傾向を示した。以上の
方法で得られた形質転換体の種類と数を表４に示す。
【００２４】
【表２】 表２ 再分化培地（ＫＳ１培地）の組成 ─────────────────────────────────── 成分 濃度（ｍｇ／ｌ） ─────────────────────────────────── ＭＳ培地* からＮＨ4 ＮＯ3 を除いた培地 ＮＨ4 ＮＯ3 ３００．０ インドール酢酸（ＩＡＡ） ０．３ ゼアチン ２．０ ココナツ水** ２．０(%) ショ糖 ３０００．０ マニトール ３５０００．０ カナマイシン １００．０ セフォタキシム ２５０．０ ジェランガム（ゲルライト） ２０００．０ （ｐＨ５．８） ─────────────────────────────────── ＊：Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ ａｎｄ Ｓｋｏｏｇ培地（１
９６２） ＊＊：ＧＩＢＣＯ社製
【００２５】
【表３】 表３ 再分化培地（ＬＳＺＫ１００培地）の組成 ─────────────────────────────────── 成分 濃度（ｍｇ／ｌ） ─────────────────────────────────── ＬＳ基礎培地 ミオイノシトール １００．０ チアミン塩酸 １．０ インドール酢酸（ＩＡＡ） ０．１ ゼアチン・リボシド １．０ ショ糖 ２００００．０ カナマイシン １００．０ セフォタキシム ２５０．０ 寒天 ８０００．０ （ｐＨ５．８） ───────────────────────────────────
【００２６】
【表４】 表４ ────────────────────────────── 供試品種 個体数 ────────────────────────────── メークィン（国内品種） ６４ トヨシロ（国内品種） ２８ 男爵薯（国内品種） ６ Ｓａｃｏ（米国品種） ５３ ──────────────────────────────
【００２７】(7) 形質転換体のＰＶＹ−Ｔ抵抗性検定 上記で作出した形質転換体のうち、メークィン、トヨシ
ロ、男爵薯及びＳａｃｏについて、ＰＶＹ−Ｔを人工接
種し、ＥＬＩＳＡ及び指標植物のタバコＢＹ４号を用い
てウイルスの保毒程度を調査した。すなわち、ＰＶＹ−
Ｔの指標植物であるタバコＢＹ４号にＰＶＹ−Ｔの精製
ウイルス粒子を接種し、２週間後、えそ症状を確認した
後に、感染葉をサンプリングし、生重に対して２〜１０
倍のＰＢＳ−Ｔバッファー（リン酸バッファー０．０２
Ｍ）で希釈後、ホモジナイズし、その磨砕液を各々の形
質転換体に接種した。供試する形質転換体は鉢上げ後、
１６時間照明で昼２３℃、夜１７℃で調製されたインキ
ュベーター内で栽培され、鉢上げ２〜３週間後に人工接
種を行った。人工接種は、供試植物の上位葉から中位葉
の５枚の葉に対して、６００メッシュのカーボランダム
と所定濃度のウイルス磨砕液を混合したものを塗布する
ことにより行った。接種後、経時的（１週間〜２カ月）
に葉をサンプリングし、ホモジナイズした磨砕液中のウ
イルス量をＥＬＩＳＡで定量した。ＥＬＩＳＡは常法に
基づき行った。すなわち、一次抗体として抗ＰＶＹ−Ｔ
ポリクローナル抗体を用い、これをマイクロタイタープ
レートのウェルに固定し、ブロッキング後、検体をウェ
ルに加えて反応させた後、二次抗体としてアルカリフォ
スファターゼで標識した抗ＰＶＹ−Ｔモノクローナル抗
体を加え、反応、洗浄後、基質としてｐ−ニトロフェニ
ルリン酸二ナトリウムを加え、４０５ｎｍでの吸光度を
測定した。また、タバコを指標植物とした場合、ＰＶＹ
−Ｔを接種した各種ジャガイモ形質転換体の磨砕液を１
０倍又は１００倍に希釈し、タバコＢＹ４に接種し、２
〜３週間後に発病調査を行った。ＥＬＩＳＡ及び指標植
物の検定結果はほぼ一致していた。以上の結果から、表
５に示すように、形質転換体の中には抵抗性や免疫性の
系統が得られた。ここで抵抗性系統とはウイルス人工接
種後、ウイルスの増殖は認められたがウイルス量が罹病
性より少なかったものとする。免疫性系統とは人工接種
後もウイルスの増殖が全く認められなかったものとす
る。従って、本実験の結果、発病も保毒も認められない
免疫性個体が得られた。
【００２８】
【表５】 表５ 各品種の形質転換体を供試したＰＶＹ−Ｔの接種試験結果 ─────────────────────────────────── 供試品種 調査系統数 罹病性系統数 抵抗性系統数 免疫性系統数 ─────────────────────────────────── メークィン ５１ ４１ ２ ８ 男爵薯 ３ ３ ０ ０ Ｓａｃｏ １６ １０ １ ５ トヨシロ ３ １ ０ ２ ───────────────────────────────────
【００２９】さらに免疫性系統に対して、タバコ（ＢＹ
４）の感染葉を接種源とし、約１００μｇ／ｍｌのウイ
ルスを形質転換体に接種した場合でも保毒は認められな
かった（ＥＬＩＳＡでのウイルス検出限界値は約１０ｎ
ｇ）。また、ＰＶＹ−Ｔのモノクローナル抗体を供試
し、ＥＬＩＳＡでＣＰの産生量を調査した結果、メーク
ィン、トヨシロ及びＳａｃｏの免疫性形質転換体からい
ずれもコートタンパク質は検出されなかった（ＥＬＩＳ
Ａでのコートタンパク質検出限界値は約１０ｎｇ）。ま
た、罹病性品種の保毒程度を調査した結果、メークィン
の場合、生重１ｇあたり５〜１０μｇのウイルス粒子が
検出された。
【００３０】なお、免疫性系統に対して、上記と同様に
ＰＶＹ普通系統、ＰＶＳ、ＰＶＸを接種した結果、全て
において抵抗性は認められなかった。
【００３１】 (8) ノーザン分析によるＣＰ遺伝子の転写の確認 (7) で選抜したメークィンの形質転換体で、ＰＶＹ−Ｔ
に対して免疫性を示すＹＡ４８、ＹＡ５１及びトヨシロ
の形質転換体のＹＦ１について、ノーザン分析によるＣ
Ｐ遺伝子のｍＲＮＡ転写の確認を行った。まず、これら
の３個体の葉より全ＲＮＡを抽出し、トーマスの方法
（トーマス、Proc. Natl. Acad. Sci. USA77:5201-5205
(1980)) に従い、グリオキサルとジメチスルホキサイ
ドでＲＮＡを変性させた後、アガロースゲル電気泳動に
より分離した。次にこれらのＲＮＡをナイロン膜、ジー
ンスクリーンプラス（デュポン社製）に移行させ、プラ
スミドｐＢＩＰＴ（ＣＭＬ）のＸｂａＩ、ＳａｃＩ断片
約０．７ｋｂをランダムプライム法（アマシャム社製）
により32Ｐ標識したプローブを用いてノーザン分析を行
った。ノーザン分析の結果、ＹＡ４８、ＹＡ５１及びＹ
Ｆ１について１．０〜１．４ｋｂのｍＲＮＡの転写が認
められた。これは予想されるＣＰ遺伝子から転写される
ｍＲＮＡの大きさと一致するものである。また、対照と
して用いた親品種のメークィンとトヨシロにはこのよう
なｍＲＮＡの転写は認められなかった。この結果は、こ
れらの３個体においてＣＰ遺伝子のｍＲＮＡが転写され
ていることを示している。
【００３２】(9) 形質転換体の形態 (7) で得られた形質転換体とその親品種（非形質転換
体）を昼２３℃、夜１７℃で調製した閉鎖系温室内で栽
培した結果、上記の免疫性形質転換体の全てに関して、
形態及び生育特性は親品種と変わらず、塊茎の形も親品
種と同様で正常であった。
【００３３】
【発明の効果】以上、詳述したように、本発明により、
ＰＶＹ−ＴのＣＰを産生することなくＰＶＹ−Ｔに対し
て免疫性（すなわち、ＰＶＹ−Ｔを接種しても発病も保
毒も認められない）を有するジャガイモが初めて作出さ
れた。本発明は、ＰＶＹ−Ｔによるタバコ黄斑えそ病及
びＰＶＹ−Ｔが関与するジャガイモのウイルス病の防除
に有効である。
【００３４】
【配列表】
配列番号：１ 配列の長さ：２６７ 配列の型：アミノ酸 起源：ＰＶＹ−Ｔのコートタンパク質 配列 Gly Asn Asp Thr Ile Asp Ala Gly Gly Ser Thr Lys Lys Asp Val Lys 1 5 10 15 Gln Glu Gln Gly Ser Ile Gln Pro Asn Leu Asn Lys Glu Lys Glu Lys 20 25 30 Asp Leu Asn Val Gly Thr Ser Gly Thr His Thr Val Pro Arg Ile Lys 35 40 45 Ala Ile Thr Ser Lys Met Arg Met Pro Lys Ser Lys Gly Ala Thr Val 50 55 60 Leu Asn Leu Glu His Leu Leu Glu Tyr Ala Pro Gln Gln Ile Asp Ile 65 70 75 80 Ser Asn Thr Arg Ala Thr Gln Ser Gln Phe Asp Thr Trp Tyr Glu Ala 85 90 95 Val Gln Leu Ala Tyr Asn Ile Gly Glu Thr Glu Met Pro Thr Val Met 100 105 110 Asn Gly Leu Met Val Trp Cys Ile Glu Asn Gly Thr Ser Pro Asn Ile 115 120 125 Asn Gly Val Trp Val Met Met Asp Gly Asp Glu Gln Val Glu Tyr Pro 130 135 140 Leu Lys Pro Ile Val Glu Asn Ala Lys Pro Thr Leu Arg Gln Ile Met 145 150 155 160 Ala His Phe Ser Asp Val Ala Glu Ala Tyr Ile Glu Met Arg Asn Lys 165 170 175 Lys Glu Pro Tyr Met Pro Arg Tyr Gly Leu Val Arg Asn Leu Arg Asp 180 185 190 Gly Ser Leu Ala Arg Tyr Ala Phe Asp Phe Tyr Glu Val Thr Ser Arg 195 200 205 Thr Pro Val Arg Ala Arg Glu Ala His Ile Gln Met Lys Ala Ala Ala 210 215 220 Leu Lys Ser Ala Gln Ser Arg Leu Phe Gly Leu Asp Gly Gly Ile Ser 225 230 235 240 Thr Gln Glu Glu Asn Thr Glu Arg His Thr Thr Glu Asp Val Ser Pro 245 250 255 Ser Met His Thr Leu Leu Gly Val Lys Asn Met 260 265
【００３５】配列番号：２ 配列の長さ：８０１ 配列の型：核酸 起源：ＰＶＹ−Ｔのコートタンパク質遺伝子 配列 GGA AAT GAC ACA ATC GAT GCA GGA GGA AGC ACT AAG AAA GAT GTA AAA 48 CAA GAG CAA GGT AGC ATT CAA CCA AAT CTC AAC AAG GAA AAG GAA AAG 96 GAC TTG AAT GTT GGA ACA TCT GGA ACT CAC ACT GTG CCA CGA ATT AAA 144 GCT ATC ACG TCC AAA ATG AGA ATG CCC AAG AGT AAG GGT GCA ACT GTA 192 CTA AAT TTG GAA CAC TTA CTC GAG TAT GCT CCA CAG CAA ATT GAC ATC 240 TCA AAT ACT CGA GCA ACT CAA TCA CAG TTT GAT ACA TGG TAT GAA GCA 288 GTA CAA CTT GCA TAC AAC ATA GGA GAA ACT GAA ATG CCA ACT GTG ATG 336 AAT GGG CTT ATG GTT TGG TGC ATT GAA AAT GGA ACC TCG CCA AAT ATC 384 AAT GGA GTT TGG GTT ATG ATG GAT GGA GAT GAA CAA GTC GAA TAC CCA 432 CTG AAA CCA ATC GTT GAG AAT GCA AAA CCA ACA CTT AGG CAA ATC ATG 480 GCA CAT TTC TCA GAT GTT GCA GAA GCG TAT ATA GAA ATG CGC AAC AAG 528 AAG GAA CCA TAT ATG CCA CGA TAT GGT TTA GTT CGT AAT CTG CGC GAT 576 GGA AGT TTG GCT CGC TAT GCT TTT GAC TTT TAT GAA GTT ACA TCA CGG 624 ACA CCA GTG AGG GCT AGA GAG GCA CAC ATT CAA ATG AAG GCC GCA GCT 672 TTA AAA TCA GCT CAA TCT CGA CTT TTC GGA TTG GAT GGT GGC ATT AGT 720 ACA CAA GAG GAA AAC ACA GAG AGG CAC ACC ACC GAG GAT GTT TCT CCA 768 AGT ATG CAT ACT CTA CTT GGA GTG AAG AAC ATG 801
【００３６】配列番号：３ 配列の長さ：８９５ 配列の型：核酸 配列 TCTAGAGTTA TTGTCTACTG ACTATATAGA GAGTGTGTGT GTGCTGTGTT TTCTCTTTTG 60 TGTCGTAGAA TTGAGTCGAG TCATG GGA AAT GAC ACA ATC GAT GCA GGA GGA 112 AGC ACT AAG AAA GAT GTA AAA CAA GAG CAA GGT AGC ATT CAA CCA AAT 160 CTC AAC AAG GAA AAG GAA AAG GAC TTG AAT GTT GGA ACA TCT GGA ACT 208 CAC ACT GTG CCA CGA ATT AAA GCT ATC ACG TCC AAA ATG AGA ATG CCC 256 AAG AGT AAG GGT GCA ACT GTA CTA AAT TTG GAA CAC TTA CTC GAG TAT 304 GCT CCA CAG CAA ATT GAC ATC TCA AAT ACT CGA GCA ACT CAA TCA CAG 352 TTT GAT ACA TGG TAT GAA GCA GTA CAA CTT GCA TAC AAC ATA GGA GAA 400 ACT GAA ATG CCA ACT GTG ATG AAT GGG CTT ATG GTT TGG TGC ATT GAA 448 AAT GGA ACC TCG CCA AAT ATC AAT GGA GTT TGG GTT ATG ATG GAT GGA 496 GAT GAA CAA GTC GAA TAC CCA CTG AAA CCA ATC GTT GAG AAT GCA AAA 544 CCA ACA CTT AGG CAA ATC ATG GCA CAT TTC TCA GAT GTT GCA GAA GCG 592 TAT ATA GAA ATG CGC AAC AAG AAG GAA CCA TAT ATG CCA CGA TAT GGT 640 TTA GTT CGT AAT CTG CGC GAT GGA AGT TTG GCT CGC TAT GCT TTT GAC 688 TTT TAT GAA GTT ACA TCA CGG ACA CCA GTG AGG GCT AGA GAG GCA CAC 736 ATT CAA ATG AAG GCC GCA GCT TTA AAA TCA GCT CAA TCT CGA CTT TTC 784 GGA TTG GAT GGT GGC ATT AGT ACA CAA GAG GAA AAC ACA GAG AGG CAC 832 ACC ACC GAG GAT GTT TCT CCA AGT ATG CAT ACT CTA CTT GGA GTG AAG 880 AAC ATG TGAGAGCTC 895
Ａ
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の組換えベクターの一実施例であるｐＢ
ＩＰＴ（ＣＭＬ）の遺伝子地図である。
【図２】本発明の実施例において用いられたＰＶＹ−Ｔ
のＣＰのアミノ酸配列を示す図である。
【図３】本発明の実施例において用いられたＰＶＹ−Ｔ
のＣＰ遺伝子の塩基配列を示す図である。
【図４】本発明の実施例において作製されたｐＢＩＰＴ
（ＣＭＬ）中に挿入されたＤＮＡ断片の決定された塩基
配列を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 林 由美子 神奈川県横浜市緑区梅が丘６の２ 日本 たばこ産業株式会社生命科学研究所内 (56)参考文献 特表 平４−500151（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，1985，Ｖｏ ｌ．97，Ｎｏ．１，ｐ．161−171 日植病報，1988，Ｖｏｌ．54，Ｎｏ. ４，ｐ．516−522 Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，米国, 1990年，Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．２，ｐ. 127−134 Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，1989 年，Ｖｏｌ．79，Ｎｏ．11，ｐ．1284− 1290 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤ Ｓ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (3)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 プロモーターの下流にキュウリモザイク
    ウイルスのＲＮＡ４のリーダー配列及びその下流にジャ
    ガイモＹウイルスえそ系統のコートタンパク質をコード
    する遺伝子を有する組換えベクター。
  2. 【請求項２】 請求項１記載の組換えベクターでジャガ
    イモを形質転換することから成る、ジャガイモにジャガ
    イモＹウイルスえそ系統に対する免疫性を付与する方
    法。
  3. 【請求項３】 請求項２記載の方法により作出された、
    ジャガイモＹウイルスえそ系統に対する免疫性を有する
    ジャガイモ。
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ES93308359T ES2141751T3 (es) 1992-10-21 1993-10-20 Vector recombinante, metodo para dar a una planta de patata inmunidad contra el pvy-t y planta de patata.
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US08/558,935 US6228637B1 (en) 1992-10-21 1995-11-13 Recombinant vector, method for giving immunity against PVY-T to potato plant, and potato plant having immunity against PVY-T

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2147355A1 (en) * 1993-08-19 1995-02-23 Toru Hiyoshi Dna encoding atp-dependent fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase originating from plant, recombinant vector containing the same and method for changing sugar content in plant cells under low temperature
WO2003097841A1 (fr) * 2002-05-22 2003-11-27 Japan Tobacco Inc. Vecteur de silençage genique et procede de silençage genique utilisant ce vecteur
US20050132440A1 (en) * 2002-05-22 2005-06-16 Japan Tobacco Inc. Gene silencing vector and gene silencing method using the same
WO2013192613A2 (en) * 2012-06-22 2013-12-27 J.R. Simplot Company Pvy resistance
CN104131032B (zh) * 2014-07-28 2015-12-09 湖南农业大学 一种使烟草获得马铃薯y病毒抗性的方法及vigs载体
CN110501508B (zh) * 2019-08-31 2023-06-20 贵州大学 Pvy-cp作为筛选防治马铃薯y病毒的药物的靶标及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1989005858A1 (en) * 1987-12-21 1989-06-29 The Upjohn Company Cucumber mosaic virus coat protein gene
FR2631973B1 (fr) * 1988-05-30 1992-12-11 Agronomique Inst Nat Rech Sequence nucleotidique complete de l'adn complementaire de l'arn genomique de potyvirus, genes codant pour la proteine de capside de potyvirus et applications de ces genes a la creation de plantes transgeniques resistantes aux potyvirus
EP0429483B1 (en) * 1988-08-19 1997-11-12 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Potyvirus coat protein genes and plants transformed therewith
US4970168A (en) * 1989-01-27 1990-11-13 Monsanto Company Virus-resistant plants
IT1283631B1 (it) * 1996-05-09 1998-04-23 Metapontum Agrobios Srl Metodo per la preparazione di piante transgeniche resistenti ad in- fezioni virali e piante cosi' ottenute

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，米国，１９９０年，Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．２，ｐ．１２７−１３４
Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８５，Ｖｏｌ．９７，Ｎｏ．１，ｐ．１６１−１７１
Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８９年，Ｖｏｌ．７９，Ｎｏ．１１，ｐ．１２８４−１２９０
日植病報，１９８８，Ｖｏｌ．５４，Ｎｏ．４，ｐ．５１６−５２２

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