JP3348891B2 - 不溶性担体及びその担体を用いる免疫学的検出方法 - Google Patents
不溶性担体及びその担体を用いる免疫学的検出方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、少なくとも表面が高分
子電解質錯体からなる免疫学的検出用の不溶性担体、及
びその不溶性担体を用いる免疫学的検出方法に関する。
子電解質錯体からなる免疫学的検出用の不溶性担体、及
びその不溶性担体を用いる免疫学的検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】臨床診断分野において、被検試料中の検
出対象物質を免疫学的に測定することは、日常的に汎用
されている手段であり、測定対象項目も各種抗原や抗
体、ポリペプチド類、ステロイド類、薬剤等のハプテン
等多岐に渡っている。生体液中に含まれるこれら成分の
量は極めて微量な場合が多く、これらを精度良く測定す
ることは、正確な疾病診断や治療効果の確認のため重要
なことで、分析機器の発展とともに、年々高精度化が進
んでいる。
出対象物質を免疫学的に測定することは、日常的に汎用
されている手段であり、測定対象項目も各種抗原や抗
体、ポリペプチド類、ステロイド類、薬剤等のハプテン
等多岐に渡っている。生体液中に含まれるこれら成分の
量は極めて微量な場合が多く、これらを精度良く測定す
ることは、正確な疾病診断や治療効果の確認のため重要
なことで、分析機器の発展とともに、年々高精度化が進
んでいる。
【０００３】具体的な測定方法としては、免疫比濁法、
放射免疫測定法、ラテックス凝集法、酵素免疫測定法
（ＥＩＡ）、固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光
免疫測定法、発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）等がある。特
に近年は、有機合成高分子であるポリスチレン等のいわ
ゆるラテックスや、無機物のガラスやシリカ等の不溶性
担体に検出対象物質と免疫学的に結合することのできる
免疫学的活性物質を担持し、被検試料中の検出対象物質
との間で免疫反応を行い、そのときの凝集反応や標識物
質による信号を目視的あるいは光学的な手段により検出
する方法が多用されている。
放射免疫測定法、ラテックス凝集法、酵素免疫測定法
（ＥＩＡ）、固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、蛍光
免疫測定法、発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）等がある。特
に近年は、有機合成高分子であるポリスチレン等のいわ
ゆるラテックスや、無機物のガラスやシリカ等の不溶性
担体に検出対象物質と免疫学的に結合することのできる
免疫学的活性物質を担持し、被検試料中の検出対象物質
との間で免疫反応を行い、そのときの凝集反応や標識物
質による信号を目視的あるいは光学的な手段により検出
する方法が多用されている。
【０００４】しかし、検出対象物質の多くはその含有量
が微量であり、また被検試料である生体液は、その由来
や種類によって性状や粘性等の物性、被検試料に含まれ
る組成成分等に大きな差があり多様である。そのためし
ばしば本来目的とする免疫学的反応とは無関係な反応、
いわゆる非特異的反応が発生し、それが測定結果に影響
を与えてしまうという問題点がある。
が微量であり、また被検試料である生体液は、その由来
や種類によって性状や粘性等の物性、被検試料に含まれ
る組成成分等に大きな差があり多様である。そのためし
ばしば本来目的とする免疫学的反応とは無関係な反応、
いわゆる非特異的反応が発生し、それが測定結果に影響
を与えてしまうという問題点がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】非特異的反応の原因は
種々考えられるが、その１つとして不溶性担体の材質や
表面構造の反応系への関与が挙げられる。例えば、現在
汎用されているラテックス粒子の大部分は、市販のポリ
スチレン製ラテックス粒子である。ポリスチレンは、ス
チレン系の芳香族ビニル化合物をモノマーとして、重合
開始剤としての乳化重合剤（例えば界面活性剤）や過硫
酸カリウム等の存在下、ラジカル重合機構による、いわ
ゆる乳化重合法等によって合成されている。また、スチ
レンモノマーと、例えば、アクリル酸やメタクリル酸等
の不飽和カルボン酸とを組み合わせて重合反応を行うこ
とにより生成ポリマーに親水性を付与したり、更に、生
成ポリマーの比重を調整するためにハロゲン原子含有ア
クリレート等も含めて重合反応を行う等、複雑な配合や
処理が施されている。従って、こうして得られた生成ポ
リマーは単にスチレン系ポリマーと総称されているもの
の、それらの組成や、表面官能基の種類及び量、更に親
和性や電荷等には大きな差異が存在する。このような担
体が有する多様な物性に対応して、検出対象物質以外の
物質が干渉し、非特異的反応が生じるものと考えられ
る。また、ラテックス粒子等の粒状体は、反応に用いる
前の保存中に自己凝集を起こす場合があり、これも担体
表面の物性が影響しているものと思われる。
種々考えられるが、その１つとして不溶性担体の材質や
表面構造の反応系への関与が挙げられる。例えば、現在
汎用されているラテックス粒子の大部分は、市販のポリ
スチレン製ラテックス粒子である。ポリスチレンは、ス
チレン系の芳香族ビニル化合物をモノマーとして、重合
開始剤としての乳化重合剤（例えば界面活性剤）や過硫
酸カリウム等の存在下、ラジカル重合機構による、いわ
ゆる乳化重合法等によって合成されている。また、スチ
レンモノマーと、例えば、アクリル酸やメタクリル酸等
の不飽和カルボン酸とを組み合わせて重合反応を行うこ
とにより生成ポリマーに親水性を付与したり、更に、生
成ポリマーの比重を調整するためにハロゲン原子含有ア
クリレート等も含めて重合反応を行う等、複雑な配合や
処理が施されている。従って、こうして得られた生成ポ
リマーは単にスチレン系ポリマーと総称されているもの
の、それらの組成や、表面官能基の種類及び量、更に親
和性や電荷等には大きな差異が存在する。このような担
体が有する多様な物性に対応して、検出対象物質以外の
物質が干渉し、非特異的反応が生じるものと考えられ
る。また、ラテックス粒子等の粒状体は、反応に用いる
前の保存中に自己凝集を起こす場合があり、これも担体
表面の物性が影響しているものと思われる。
【０００６】このような種々の特性を有する不溶性担体
を用いて免疫学的測定を行う場合には、最初に検出対象
物質と免疫学的に結合することのできる免疫学的活性物
質を不溶性担体に結合させる。その結合方法としては、
不溶性担体と免疫学的活性物質とを溶液中で接触させて
結合させる方法、いわゆる物理吸着法（不溶性担体の表
面疎水性と免疫学的活性物質の疎水性との相互作用によ
る疎水結合、又は不溶性担体表面のマイナス荷電と免疫
学的活性物質のプラス荷電部位との結合）と、不溶性担
体表面に架橋性基（例えば、アミノ基、カルボキシル基
又はチオール基）を導入し、免疫学的活性物質を共有結
合させる方法、いわゆる化学結合法とがある。
を用いて免疫学的測定を行う場合には、最初に検出対象
物質と免疫学的に結合することのできる免疫学的活性物
質を不溶性担体に結合させる。その結合方法としては、
不溶性担体と免疫学的活性物質とを溶液中で接触させて
結合させる方法、いわゆる物理吸着法（不溶性担体の表
面疎水性と免疫学的活性物質の疎水性との相互作用によ
る疎水結合、又は不溶性担体表面のマイナス荷電と免疫
学的活性物質のプラス荷電部位との結合）と、不溶性担
体表面に架橋性基（例えば、アミノ基、カルボキシル基
又はチオール基）を導入し、免疫学的活性物質を共有結
合させる方法、いわゆる化学結合法とがある。
【０００７】こうして免疫学的活性物質を結合させた不
溶性担体を用いて免疫学的測定を行う場合に、検出対象
物質以外の物質（例えば試料中に共存する種々のタンパ
ク質やその他の物質、あるいは検出系に用いる標識化抗
体等）が不溶性担体に対して干渉する、いわゆる非特異
的反応を抑制するために、抑制剤の添加や不溶性担体自
体の特性を変性する工夫が行われている。例えば、非特
異的反応の抑制剤として、哺乳動物の正常血清タンパク
質、アルブミン、スキムミルク、コラーゲン、ゼラチン
等を添加し、免疫学的活性物質が結合した不溶性担体表
面を処理することが一般的に行われている。また、不溶
性担体自体の製造法の改良については、例えば、特開昭
５４−５９９８８号、特開昭５６−６１４１０号、及び
特開昭６１−２１８９４６号各公報に種々の方法が開示
されている。
溶性担体を用いて免疫学的測定を行う場合に、検出対象
物質以外の物質（例えば試料中に共存する種々のタンパ
ク質やその他の物質、あるいは検出系に用いる標識化抗
体等）が不溶性担体に対して干渉する、いわゆる非特異
的反応を抑制するために、抑制剤の添加や不溶性担体自
体の特性を変性する工夫が行われている。例えば、非特
異的反応の抑制剤として、哺乳動物の正常血清タンパク
質、アルブミン、スキムミルク、コラーゲン、ゼラチン
等を添加し、免疫学的活性物質が結合した不溶性担体表
面を処理することが一般的に行われている。また、不溶
性担体自体の製造法の改良については、例えば、特開昭
５４−５９９８８号、特開昭５６−６１４１０号、及び
特開昭６１−２１８９４６号各公報に種々の方法が開示
されている。
【０００８】しかしながら、特に生体試料中に極めて微
量でしか含まれていない成分を定量する場合には、極め
て高感度の測定が要求されるのに対し、従来法による手
段では、検出対象物質以外の物質による干渉、すなわち
非特異的反応を充分に抑制することは困難であった。本
発明者は、従来技術の欠点を解消すべく種々研究を重ね
たところ、意外にも、高分子電解質錯体を用いて形成し
た不溶性担体、或いは、高分子電解質錯体で被覆した不
溶性担体を用いると、前記の非特異的反応を有効に抑制
して、測定精度を向上させ、生体試料中に極微量でしか
含まれていない検査対象物質を正確かつ高精度で検出な
いし測定することができることを見出した。本発明は、
こうした知見に基づくものである。
量でしか含まれていない成分を定量する場合には、極め
て高感度の測定が要求されるのに対し、従来法による手
段では、検出対象物質以外の物質による干渉、すなわち
非特異的反応を充分に抑制することは困難であった。本
発明者は、従来技術の欠点を解消すべく種々研究を重ね
たところ、意外にも、高分子電解質錯体を用いて形成し
た不溶性担体、或いは、高分子電解質錯体で被覆した不
溶性担体を用いると、前記の非特異的反応を有効に抑制
して、測定精度を向上させ、生体試料中に極微量でしか
含まれていない検査対象物質を正確かつ高精度で検出な
いし測定することができることを見出した。本発明は、
こうした知見に基づくものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】従って、本発明は、 （ａ１）一般式（Ｉ）
【化２３】 ［式中、Ｒ1及びＲ4はそれぞれ独立に炭素数１〜１０個
のアルキレン基、一般式
のアルキレン基、一般式
【化２４】 （式中、Ｒ11及びＲ12は、それぞれ独立に、炭素数１又
は２個のアルキレン基である）で表される基又はアリー
レン基であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6はそれぞれ独立
に炭素数１〜３個のアルキル基であるか、又はＲ1は式
中の２個の窒素原子及びＲ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6と一緒に
なって式
は２個のアルキレン基である）で表される基又はアリー
レン基であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6はそれぞれ独立
に炭素数１〜３個のアルキル基であるか、又はＲ1は式
中の２個の窒素原子及びＲ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6と一緒に
なって式
【化２５】 で表される基であってＲ4は前記と同じ意味であるもの
とし、そしてＸ1 -は対イオンであり、ｍは５以上の数で
ある］で表されるカチオンポリマー、 （ａ２）一般式（II）
とし、そしてＸ1 -は対イオンであり、ｍは５以上の数で
ある］で表されるカチオンポリマー、 （ａ２）一般式（II）
【化２６】 ［式中、Ａは一般式
【化２７】 （式中、Ｂは炭素数１又は２個のアルキレン基であり、
Ｒ21、Ｒ22及びＲ23はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ2 -は対イオンであ
る）で表される基であるか、一般式
Ｒ21、Ｒ22及びＲ23はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ2 -は対イオンであ
る）で表される基であるか、一般式
【化２８】 （式中、Ｒ24は炭素数１〜３個のアルキル基又はベンジ
ル基であり、Ｘ3 -は対イオンである）で表される基であ
るか、又は一般式
ル基であり、Ｘ3 -は対イオンである）で表される基であ
るか、又は一般式
【化２９】 （式中、Ｒ25は炭素数１又は２個のアルキル基であり、
Ｒ26、Ｒ27及びＲ28はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ4 -は対イオンであ
る）で表される基であり、ｎは１０以上の数である］で
表されるカチオンポリマー、 （ａ３）一般式（III）
Ｒ26、Ｒ27及びＲ28はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ4 -は対イオンであ
る）で表される基であり、ｎは１０以上の数である］で
表されるカチオンポリマー、 （ａ３）一般式（III）
【化３０】 （式中、ｖは３又は４であり、Ｒ91は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、Ｒ92は−Ｎ+Ｈ2Ｘ
5 -又は−Ｎ+ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2Ｘ6 -であり、Ｘ5 -及びＸ
6 -はそれぞれ独立に対イオンであり、ｔは２０〜１００
であり、そしてｒは１０以上の整数である）で表される
カチオンポリマー、及び （ａ４）カチオン性多糖類からなる群から選んだカチオ
ン性高分子電解質少なくとも１種と、 （ｂ１）一般式（IV）
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、Ｒ92は−Ｎ+Ｈ2Ｘ
5 -又は−Ｎ+ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2Ｘ6 -であり、Ｘ5 -及びＸ
6 -はそれぞれ独立に対イオンであり、ｔは２０〜１００
であり、そしてｒは１０以上の整数である）で表される
カチオンポリマー、及び （ａ４）カチオン性多糖類からなる群から選んだカチオ
ン性高分子電解質少なくとも１種と、 （ｂ１）一般式（IV）
【化３１】 （式中、ｕは１又は２であり、Ｒ81は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、ｓは２０〜１００
であり、そしてｑは１０以上の整数である）で表される
アニオンポリマー、 （ｂ２）一般式（Ｖ）
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、ｓは２０〜１００
であり、そしてｑは１０以上の整数である）で表される
アニオンポリマー、 （ｂ２）一般式（Ｖ）
【化３２】 （式中、Ｒ31は水素原子又はメチル基であり、Ｒ32は炭
素数６〜１８個のアルキル基であり、Ｙはカルボン酸基
若しくはその塩、スルホン酸基若しくはその塩、リン酸
基若しくはその塩、又は、カルボン酸基若しくはその
塩、スルホン酸基若しくはその塩又はリン酸基若しくは
その塩を含有するアリール基であり、ａは２０〜１００
の数であり、ｐは１０以上の数である）で表されるアニ
オンポリマー、及び （ｂ３）アニオン性多糖類からなる群から選んだアニオ
ン性高分子電解質少なくとも１種とを反応させる（但
し、前記カチオン性高分子電解質が、Ａが一般式
素数６〜１８個のアルキル基であり、Ｙはカルボン酸基
若しくはその塩、スルホン酸基若しくはその塩、リン酸
基若しくはその塩、又は、カルボン酸基若しくはその
塩、スルホン酸基若しくはその塩又はリン酸基若しくは
その塩を含有するアリール基であり、ａは２０〜１００
の数であり、ｐは１０以上の数である）で表されるアニ
オンポリマー、及び （ｂ３）アニオン性多糖類からなる群から選んだアニオ
ン性高分子電解質少なくとも１種とを反応させる（但
し、前記カチオン性高分子電解質が、Ａが一般式
【化３３】 で表される基である一般式（II）で表されるカチオンポ
リマーである場合には、前記アニオン性高分子電解質
は、一般式（Ｖ）で表されるアニオンポリマーでないも
のとする）ことによって得られる高分子電解質錯体によ
り、少なくとも表面が形成されていることを特徴とす
る、免疫学的検出用の不溶性担体に関する。また、本発
明は、前記不溶性担体を用いる免疫学的検出方法にも関
する。以下、本発明を詳述する。
リマーである場合には、前記アニオン性高分子電解質
は、一般式（Ｖ）で表されるアニオンポリマーでないも
のとする）ことによって得られる高分子電解質錯体によ
り、少なくとも表面が形成されていることを特徴とす
る、免疫学的検出用の不溶性担体に関する。また、本発
明は、前記不溶性担体を用いる免疫学的検出方法にも関
する。以下、本発明を詳述する。
【００１０】本発明に用いられる高分子電解質錯体（ｐ
ｏｌｙｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘ：以
下、ＰＥＣともいう）は、ＷＯ９２／０９１９８号公報
にも記載されているとおり、それ自体公知の物質であ
る。ＰＥＣは正荷電を有する高分子電解質であるカチオ
ンポリマーの溶液と負荷電を有する高分子電解質である
アニオンポリマーの溶液とを混合することにより瞬時に
形成することができる。こうして得られたＰＥＣは、特
殊な３元系溶媒（例えば、特定の組成からなる、水／ア
セトン／低分子塩）には溶解するが、一般的な溶媒には
不溶性である。ＰＥＣは、出発ポリマー（高分子電解
質）の種類、それらの混合比、調製条件などにより、多
様な性質を有する各種の高分子電解質錯体を提供するこ
とができる。
ｏｌｙｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ ｃｏｍｐｌｅｘ：以
下、ＰＥＣともいう）は、ＷＯ９２／０９１９８号公報
にも記載されているとおり、それ自体公知の物質であ
る。ＰＥＣは正荷電を有する高分子電解質であるカチオ
ンポリマーの溶液と負荷電を有する高分子電解質である
アニオンポリマーの溶液とを混合することにより瞬時に
形成することができる。こうして得られたＰＥＣは、特
殊な３元系溶媒（例えば、特定の組成からなる、水／ア
セトン／低分子塩）には溶解するが、一般的な溶媒には
不溶性である。ＰＥＣは、出発ポリマー（高分子電解
質）の種類、それらの混合比、調製条件などにより、多
様な性質を有する各種の高分子電解質錯体を提供するこ
とができる。
【００１１】本発明で用いられるカチオンポリマーは、
繰り返し単位中にＮ+ 原子を含有する高分子電解質であ
り、具体的には
繰り返し単位中にＮ+ 原子を含有する高分子電解質であ
り、具体的には
【００１２】（ａ１）一般式（Ｉ）
【化３４】 ［式中、Ｒ1及びＲ4はそれぞれ独立に炭素数１〜１０個
のアルキレン基、好ましくは炭素数２〜８個の直鎖又は
分枝鎖のアルキレン基、一般式
のアルキレン基、好ましくは炭素数２〜８個の直鎖又は
分枝鎖のアルキレン基、一般式
【化３５】 （式中、Ｒ11及びＲ12は、それぞれ独立に、炭素数１又
は２個のアルキレン基であり、好ましくはＲ11及びＲ12
はｐ位で結合しているものとする）で表される基又はア
リーレン基であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6はそれぞれ
独立に炭素数１〜３個のアルキル基であるか、又はＲ1
は式中の２個の窒素原子及びＲ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6と一
緒になって式
は２個のアルキレン基であり、好ましくはＲ11及びＲ12
はｐ位で結合しているものとする）で表される基又はア
リーレン基であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6はそれぞれ
独立に炭素数１〜３個のアルキル基であるか、又はＲ1
は式中の２個の窒素原子及びＲ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6と一
緒になって式
【化３６】 で表される基であってＲ4は前記と同じ意味であるもの
とし、そしてＸ1 -は対イオンであり、ｍは５以上の数で
ある］で表されるカチオンポリマー、即ち４級アンモニ
ウム塩ポリマー、
とし、そしてＸ1 -は対イオンであり、ｍは５以上の数で
ある］で表されるカチオンポリマー、即ち４級アンモニ
ウム塩ポリマー、
【００１３】（ａ２）一般式（II）
【化３７】 ［式中、Ａは一般式
【化３８】 （式中、Ｂは炭素数１又は２個のアルキレン基であり、
Ｒ21、Ｒ22及びＲ23はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ2 -は対イオンであ
る）で表される基であるか、一般式
Ｒ21、Ｒ22及びＲ23はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ2 -は対イオンであ
る）で表される基であるか、一般式
【化３９】 （式中、Ｒ24は炭素数１〜３個のアルキル基又はベンジ
ル基であり、Ｘ3 -は対イオンである）で表される基であ
るか、又は一般式
ル基であり、Ｘ3 -は対イオンである）で表される基であ
るか、又は一般式
【化４０】 （式中、Ｒ25は炭素数１又は２個のアルキル基であり、
Ｒ26、Ｒ27及びＲ28はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ4 -は対イオンであ
る）で表される基であり、ｎは１０以上の数である］で
表されるカチオンポリマー、即ち４級アンモニウム塩ポ
リマー、
Ｒ26、Ｒ27及びＲ28はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ4 -は対イオンであ
る）で表される基であり、ｎは１０以上の数である］で
表されるカチオンポリマー、即ち４級アンモニウム塩ポ
リマー、
【００１４】（ａ３）一般式（III)
【化４１】 （式中、ｖは３又は４であり、Ｒ91は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基；例えば、メチル基、イソ
プロピル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ヒドロキシ
メチル基、ヒドロキシエチル基、メチルチオエチル基、
メルカプトメチル基、５−イミダゾリルメチル基又は３
−イミダゾリルメチル基であり、Ｒ92は−Ｎ+Ｈ2Ｘ5 -又
は−Ｎ+ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2Ｘ6 -であり、Ｘ5 -及びＸ6 -は
それぞれ独立に対イオンであり、ｔは２０〜１００であ
り、そしてｒは１０以上の整数である）で表されるカチ
オンポリマー、即ち塩基性アミノ酸ポリマー、及び
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基；例えば、メチル基、イソ
プロピル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ヒドロキシ
メチル基、ヒドロキシエチル基、メチルチオエチル基、
メルカプトメチル基、５−イミダゾリルメチル基又は３
−イミダゾリルメチル基であり、Ｒ92は−Ｎ+Ｈ2Ｘ5 -又
は−Ｎ+ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2Ｘ6 -であり、Ｘ5 -及びＸ6 -は
それぞれ独立に対イオンであり、ｔは２０〜１００であ
り、そしてｒは１０以上の整数である）で表されるカチ
オンポリマー、即ち塩基性アミノ酸ポリマー、及び
【００１５】（ａ４）カチオン性多糖類 からなる群から選択された少なくとも１種の化合物であ
る。
る。
【００１６】本発明で用いられるアニオンポリマーは、
繰り返し単位中に−ＣＯＯ- 基、−ＳＯ3 - 基、−ＰＯ
3 Ｈ- 基又は−ＰＯ3 2- 基を含有する高分子電解質で
あり、具体的には
繰り返し単位中に−ＣＯＯ- 基、−ＳＯ3 - 基、−ＰＯ
3 Ｈ- 基又は−ＰＯ3 2- 基を含有する高分子電解質で
あり、具体的には
【００１７】（ｂ１）一般式（IV）
【化４２】 （式中、ｕは１又は２であり、Ｒ81は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基；例えば、メチル基、イソ
プロピル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ヒドロキシ
メチル基、ヒドロキシエチル基、メチルチオエチル基、
メルカプトメチル基、５−イミダゾリルメチル基又は３
−イミダゾリルメチル基であり、ｓは２０〜１００であ
り、そしてｑは１０以上の整数である）で表されるアニ
オンポリマー、即ち酸性アミノ酸ポリマー、
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基；例えば、メチル基、イソ
プロピル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ヒドロキシ
メチル基、ヒドロキシエチル基、メチルチオエチル基、
メルカプトメチル基、５−イミダゾリルメチル基又は３
−イミダゾリルメチル基であり、ｓは２０〜１００であ
り、そしてｑは１０以上の整数である）で表されるアニ
オンポリマー、即ち酸性アミノ酸ポリマー、
【００１８】（ｂ２）一般式（Ｖ）
【化４３】 （式中、Ｒ31は水素原子又はメチル基であり、Ｒ32は炭
素数６〜１８個のアルキル基、好ましくは炭素数６〜１
４個の直鎖若しくは分枝鎖のアルキル基であり、Ｙはカ
ルボン酸基若しくはその塩、スルホン酸基若しくはその
塩、リン酸基若しくはその塩、又は、カルボン酸基若し
くはその塩、スルホン酸基若しくはその塩又はリン酸基
若しくはその塩を含有するアリール基であり、ａは２０
〜１００、好ましくは５０〜１００の数であり、ｐは１
０以上の数である）で表されるアニオンポリマー、即ち
アクリル酸系ポリマー、及び （ｂ３）アニオン性多糖類からなる群から選択された少
なくとも１種の化合物である。但し、前記カチオン性高
分子電解質が、Ａが一般式
素数６〜１８個のアルキル基、好ましくは炭素数６〜１
４個の直鎖若しくは分枝鎖のアルキル基であり、Ｙはカ
ルボン酸基若しくはその塩、スルホン酸基若しくはその
塩、リン酸基若しくはその塩、又は、カルボン酸基若し
くはその塩、スルホン酸基若しくはその塩又はリン酸基
若しくはその塩を含有するアリール基であり、ａは２０
〜１００、好ましくは５０〜１００の数であり、ｐは１
０以上の数である）で表されるアニオンポリマー、即ち
アクリル酸系ポリマー、及び （ｂ３）アニオン性多糖類からなる群から選択された少
なくとも１種の化合物である。但し、前記カチオン性高
分子電解質が、Ａが一般式
【化４４】
で表される基である一般式（II）で表されるカチオンポ
リマーである場合には、前記アニオン性高分子電解質
は、一般式（Ｖ）で表されるアニオンポリマーでないも
のとする。
リマーである場合には、前記アニオン性高分子電解質
は、一般式（Ｖ）で表されるアニオンポリマーでないも
のとする。
【００１９】前記一般式（Ｉ）のカチオンポリマー（ａ
１）の具体例を挙げれば、第４級ポリエチレンイミンク
ロライド、ポリ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−
アルキレン−ｐ−キシリレンジアンモニウムクロライ
ド）、ポリ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−アル
キレン−ジアンモニウムジクロライド）、ポリ（Ｎ，
Ｎ，−ジメチル−３−ヒドロキシプロピルアンモニウム
クロライド）、ポリ（２−ヒドロキシ−３−メタクロイ
ルオキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライ
ド）、ポリ（２−メタクロイルオキシエチルトリメチル
アンモニウムクロライド）、ポリ（グリシジルトリメチ
ルアンモニウムクロライド）、ポリ〔（ジメチルイミニ
オ）エチレン（ジメチルイミニオ）メチレン−１，４−
フェニレンメチレンジクロライド〕〔一般に、２Ｘと称
される〕、ポリ〔（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレン
（ジメチルイミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメ
チレンジクロライド〕〔一般に、６Ｘと称される〕、ポ
リ〔（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレンクロライド〕
〔一般に、６，６と称される〕、ポリ（Ｎ−エチル−４
−ビニルピリジニウムブロマイド）、ポリ（ジメチルジ
アリルアンモニウムクロライド）等である。
１）の具体例を挙げれば、第４級ポリエチレンイミンク
ロライド、ポリ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−
アルキレン−ｐ−キシリレンジアンモニウムクロライ
ド）、ポリ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−アル
キレン−ジアンモニウムジクロライド）、ポリ（Ｎ，
Ｎ，−ジメチル−３−ヒドロキシプロピルアンモニウム
クロライド）、ポリ（２−ヒドロキシ−３−メタクロイ
ルオキシプロピルトリメチルアンモニウムクロライ
ド）、ポリ（２−メタクロイルオキシエチルトリメチル
アンモニウムクロライド）、ポリ（グリシジルトリメチ
ルアンモニウムクロライド）、ポリ〔（ジメチルイミニ
オ）エチレン（ジメチルイミニオ）メチレン−１，４−
フェニレンメチレンジクロライド〕〔一般に、２Ｘと称
される〕、ポリ〔（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレン
（ジメチルイミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメ
チレンジクロライド〕〔一般に、６Ｘと称される〕、ポ
リ〔（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレンクロライド〕
〔一般に、６，６と称される〕、ポリ（Ｎ−エチル−４
−ビニルピリジニウムブロマイド）、ポリ（ジメチルジ
アリルアンモニウムクロライド）等である。
【００２０】前記一般式（II）のカチオンポリマー（ａ
２）の具体例を挙げれば、ポリ（ビニルベンジルトリメ
チルアンモニウムクロライド）、ポリビニルピリジウム
クロライド、ポリ（Ｎ−ベンジル−４−ビニルピリジウ
ムクロライド）等である。前記一般式（III)のカチオン
ポリマー（ａ３）の具体例を挙げれば、ポリリジン、ポ
リアルギニン又はこれらポリマーを構成する単量体のコ
ポリマー、更に、これら単量体とグリシン、アラニン、
フェニルアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイ
ン、ヒスチジン、プロリン、及び／又はトリプトファン
などとのコポリマーである。カチオン性多糖類（ａ４）
の具体例としては、ＷＯ９２／０９１９８号公報に記載
されているように、キトサン及びその誘導体、並びに中
性多糖類のジエチルアミノエチル誘導体を挙げることが
できる。中性多糖類としては、デキストラン、セルロー
ス、マンナン、スターチ又はアガロース等を挙げること
ができる。これら誘導体のジエチルアミノエチル置換度
は、糖残基１個当たり０．５〜２．０基、好ましくは
０．７〜１．５基であり、重合度は、５０〜５００、好
ましくは１００〜１０００である。なお、ジエチルアミ
ノエチル基の窒素原子とアニオンポリマーのアニオン基
とが結合する。
２）の具体例を挙げれば、ポリ（ビニルベンジルトリメ
チルアンモニウムクロライド）、ポリビニルピリジウム
クロライド、ポリ（Ｎ−ベンジル−４−ビニルピリジウ
ムクロライド）等である。前記一般式（III)のカチオン
ポリマー（ａ３）の具体例を挙げれば、ポリリジン、ポ
リアルギニン又はこれらポリマーを構成する単量体のコ
ポリマー、更に、これら単量体とグリシン、アラニン、
フェニルアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソ
ロイシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイ
ン、ヒスチジン、プロリン、及び／又はトリプトファン
などとのコポリマーである。カチオン性多糖類（ａ４）
の具体例としては、ＷＯ９２／０９１９８号公報に記載
されているように、キトサン及びその誘導体、並びに中
性多糖類のジエチルアミノエチル誘導体を挙げることが
できる。中性多糖類としては、デキストラン、セルロー
ス、マンナン、スターチ又はアガロース等を挙げること
ができる。これら誘導体のジエチルアミノエチル置換度
は、糖残基１個当たり０．５〜２．０基、好ましくは
０．７〜１．５基であり、重合度は、５０〜５００、好
ましくは１００〜１０００である。なお、ジエチルアミ
ノエチル基の窒素原子とアニオンポリマーのアニオン基
とが結合する。
【００２１】前記一般式（IV）のアニオンポリマー（ｂ
１）の具体例を挙げれば、ポリグルタミン酸、ポリアス
パラギン酸又はこれらポリマーを構成する単量体のコポ
リマー、更に、これら単量体とグリシン、アラニン、フ
ェニルアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロ
イシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイ
ン、ヒスチジン、プロリン、及び／又はトリプトファン
などとのコポリマーである。なお、一般式（III)及び
（IV）で示されるポリアミノ酸は、一般的な酸無水物モ
ノマー法、活性エステル化法、メリーフィールド法等に
よって合成することができる。
１）の具体例を挙げれば、ポリグルタミン酸、ポリアス
パラギン酸又はこれらポリマーを構成する単量体のコポ
リマー、更に、これら単量体とグリシン、アラニン、フ
ェニルアラニン、チロシン、バリン、ロイシン、イソロ
イシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイ
ン、ヒスチジン、プロリン、及び／又はトリプトファン
などとのコポリマーである。なお、一般式（III)及び
（IV）で示されるポリアミノ酸は、一般的な酸無水物モ
ノマー法、活性エステル化法、メリーフィールド法等に
よって合成することができる。
【００２２】前記一般式（Ｖ）のアニオンポリマー（ｂ
２）の具体例を挙げれば、ポリアクリル酸、ポリメタク
リル酸、ポリイタコン酸モノエステル、ポリマレイン酸
モノエステル、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンス
ルホン酸、これらポリマーを構成する単量体のいずれか
２種以上のコポリマー、更に、これら単量体とその単量
体のカルボキシル基にエステル結合によって結合した炭
素数６〜１８個のアルキル基を有するカルボン酸誘導体
とのコポリマーである。
２）の具体例を挙げれば、ポリアクリル酸、ポリメタク
リル酸、ポリイタコン酸モノエステル、ポリマレイン酸
モノエステル、ポリビニルスルホン酸、ポリスチレンス
ルホン酸、これらポリマーを構成する単量体のいずれか
２種以上のコポリマー、更に、これら単量体とその単量
体のカルボキシル基にエステル結合によって結合した炭
素数６〜１８個のアルキル基を有するカルボン酸誘導体
とのコポリマーである。
【００２３】アニオン性多糖類（ｂ３）の具体例として
は、ＷＯ９２／０９１９８号公報に記載されているよう
に、ヒアルロン酸及びその誘導体、アルギン酸及びその
誘導体、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸
Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｂ（デルマタン硫酸）及びその
誘導体、コンドロイチン硫酸Ｄ及びその誘導体、コンド
ロイチン硫酸Ｅ及びその誘導体、ヘパラン硫酸及びその
誘導体、ヘパリン及びその誘導体、κ−カラギナン及び
その誘導体、λ−カラギナン及びその誘導体、セルロー
ス誘導体、キチン誘導体、カルボキシメチルスターチ及
びその誘導体、アミロース誘導体、アミロペクチン誘導
体、β−１，３’−グルカン誘導体（例えばカードラ
ン）、β−１，２’−グルカン誘導体、β−１，３’
−；β−１，６’−グルカン誘導体（例えばレンチナ
ン、シゾフィラン、コリオラン）、デキストラン誘導
体、プルラン誘導体、アガロース誘導体、β−１，４’
−ガラクタン誘導体、マンナン誘導体及びイヌリン誘導
体を挙げることができる。
は、ＷＯ９２／０９１９８号公報に記載されているよう
に、ヒアルロン酸及びその誘導体、アルギン酸及びその
誘導体、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸
Ｃ、コンドロイチン硫酸Ｂ（デルマタン硫酸）及びその
誘導体、コンドロイチン硫酸Ｄ及びその誘導体、コンド
ロイチン硫酸Ｅ及びその誘導体、ヘパラン硫酸及びその
誘導体、ヘパリン及びその誘導体、κ−カラギナン及び
その誘導体、λ−カラギナン及びその誘導体、セルロー
ス誘導体、キチン誘導体、カルボキシメチルスターチ及
びその誘導体、アミロース誘導体、アミロペクチン誘導
体、β−１，３’−グルカン誘導体（例えばカードラ
ン）、β−１，２’−グルカン誘導体、β−１，３’
−；β−１，６’−グルカン誘導体（例えばレンチナ
ン、シゾフィラン、コリオラン）、デキストラン誘導
体、プルラン誘導体、アガロース誘導体、β−１，４’
−ガラクタン誘導体、マンナン誘導体及びイヌリン誘導
体を挙げることができる。
【００２４】これらのカチオン性高分子電解質とアニオ
ン性高分子電解質とを通常の方法で反応させることによ
って容易にＰＥＣを調製することができる。即ち、前記
のカチオンポリマー及びアニオンポリマーの各水溶液
（好ましくは、イオン席として１０-5モル／リットル〜
１０-2モル／リットル）を、カチオンポリマーのカチオ
ン席とアニオンポリマーのアニオン席との濃度比（カチ
オン席／アニオン席）が０．２５〜４．０の範囲内、好
ましくは０．４〜２．５の範囲内で、水溶液中で混合し
て反応させれば良い。カチオン席とアニオン席の濃度比
が０．２５〜４．０の範囲外になると、ＰＥＣが形成さ
れ難くなるので好ましくない。各ポリマーを溶解する溶
媒としては、精製水や各種緩衝液（例えばリン酸緩衝液
等）、あるいはそれらと水混和性有機溶媒（例えばメタ
ノール、エタノール、アセトン等）との混合液を用いる
ことができる。この反応は比較的活性が高いので、溶液
のｐＨ、イオン強度、温度などは比較的広い範囲である
ことができるが、一般的にはｐＨ３〜９、イオン強度０
〜１．０及び０〜１００℃で実施する。こうして得られ
る高分子電解質錯体を直接不溶性担体として形成する
か、あるいは適当な基材（例えば、ポリスチレン、赤血
球、シリカ、ガラス、ゼラチン、又は従来の不溶性担体
材料）に被覆することによって、免疫学的検出用の不溶
性担体として用いることができる。
ン性高分子電解質とを通常の方法で反応させることによ
って容易にＰＥＣを調製することができる。即ち、前記
のカチオンポリマー及びアニオンポリマーの各水溶液
（好ましくは、イオン席として１０-5モル／リットル〜
１０-2モル／リットル）を、カチオンポリマーのカチオ
ン席とアニオンポリマーのアニオン席との濃度比（カチ
オン席／アニオン席）が０．２５〜４．０の範囲内、好
ましくは０．４〜２．５の範囲内で、水溶液中で混合し
て反応させれば良い。カチオン席とアニオン席の濃度比
が０．２５〜４．０の範囲外になると、ＰＥＣが形成さ
れ難くなるので好ましくない。各ポリマーを溶解する溶
媒としては、精製水や各種緩衝液（例えばリン酸緩衝液
等）、あるいはそれらと水混和性有機溶媒（例えばメタ
ノール、エタノール、アセトン等）との混合液を用いる
ことができる。この反応は比較的活性が高いので、溶液
のｐＨ、イオン強度、温度などは比較的広い範囲である
ことができるが、一般的にはｐＨ３〜９、イオン強度０
〜１．０及び０〜１００℃で実施する。こうして得られ
る高分子電解質錯体を直接不溶性担体として形成する
か、あるいは適当な基材（例えば、ポリスチレン、赤血
球、シリカ、ガラス、ゼラチン、又は従来の不溶性担体
材料）に被覆することによって、免疫学的検出用の不溶
性担体として用いることができる。
【００２５】本発明においては、カチオンポリマーとア
ニオンポリマーとの配合比を変化させることにより、生
成するＰＥＣの荷電バランスを容易に変更し、調整する
ことができる。即ち、種々の荷電バランスを有するＰＥ
Ｃを用いることにより、例えば、それを被覆した不溶性
担体の表面電荷を調整し、結合させる免疫学的活性物質
の固定化効率の向上や、非特異的反応の抑制などを、不
溶性担体の調製時に適宜選択することが可能となる。本
発明で用いるＰＥＣの荷電バランスは、−６〜＋６の範
囲が好ましい。ここで、荷電バランスとは、ＰＥＣの荷
電状態を、その出発原料であるカチオンポリマー及びア
ニオンポリマーの、各々のカチオン席及びアニオン席の
濃度比で表現するものである。例えば、使用するカチオ
ンポリマーのカチオン席及びアニオンポリマーのアニオ
ン席の濃度比が等しい場合は、生成するＰＥＣの荷電バ
ランスは±０となる。濃度比がこれより大きければ（即
ち、カチオン席の濃度の方が高ければ）荷電バランスは
プラスとなり、小さければ（即ち、アニオン席の方が高
ければ）マイナスとなる。また、濃度比が１．５の場合
は荷電バランスは＋２となり、濃度比が０．５の場合は
荷電バランスは−３．３となる。荷電バランスの調整
は、等濃度のカチオンポリマー溶液及びアニオンポリマ
ー溶液の混合量を変化させることによって容易に行うこ
とができる。
ニオンポリマーとの配合比を変化させることにより、生
成するＰＥＣの荷電バランスを容易に変更し、調整する
ことができる。即ち、種々の荷電バランスを有するＰＥ
Ｃを用いることにより、例えば、それを被覆した不溶性
担体の表面電荷を調整し、結合させる免疫学的活性物質
の固定化効率の向上や、非特異的反応の抑制などを、不
溶性担体の調製時に適宜選択することが可能となる。本
発明で用いるＰＥＣの荷電バランスは、−６〜＋６の範
囲が好ましい。ここで、荷電バランスとは、ＰＥＣの荷
電状態を、その出発原料であるカチオンポリマー及びア
ニオンポリマーの、各々のカチオン席及びアニオン席の
濃度比で表現するものである。例えば、使用するカチオ
ンポリマーのカチオン席及びアニオンポリマーのアニオ
ン席の濃度比が等しい場合は、生成するＰＥＣの荷電バ
ランスは±０となる。濃度比がこれより大きければ（即
ち、カチオン席の濃度の方が高ければ）荷電バランスは
プラスとなり、小さければ（即ち、アニオン席の方が高
ければ）マイナスとなる。また、濃度比が１．５の場合
は荷電バランスは＋２となり、濃度比が０．５の場合は
荷電バランスは−３．３となる。荷電バランスの調整
は、等濃度のカチオンポリマー溶液及びアニオンポリマ
ー溶液の混合量を変化させることによって容易に行うこ
とができる。
【００２６】ＰＥＣの調製時における溶液のｐＨ、塩濃
度、水混和性有機溶媒の含有量を変化させることで、生
成ＰＥＣの物性（例えば、硬度や弾性）を自由に調整す
ることが可能で、粒子状、板状、フィルム状等の成型も
容易に行えるため、ＰＥＣ自体で本発明の不溶性担体全
体を形成することができる。
度、水混和性有機溶媒の含有量を変化させることで、生
成ＰＥＣの物性（例えば、硬度や弾性）を自由に調整す
ることが可能で、粒子状、板状、フィルム状等の成型も
容易に行えるため、ＰＥＣ自体で本発明の不溶性担体全
体を形成することができる。
【００２７】また、ＰＥＣは種々の材質に対して簡便且
つ容易に被覆できる性質を有しているので、適当な基材
の全表面をＰＥＣで被覆して本発明の不溶性担体を製造
することもできる。基材としては、ポリスチレン若しく
はポリ塩化ビニール等の合成高分子化合物、赤血球等の
有機材料、シリカなどの無機材料、又は紙類等を用いる
ことができ、更に、従来法において不溶性担体として用
いられている担体それ自体をＰＥＣで被覆して使用する
こともできる。例えば、ラテックス凝集法で不溶性担体
として用いるラテックス粒子は、その粒径によって測定
感度が変動するので、市販品ではその粒径がすでに管理
された状態になっている。従って、それらの市販品を基
材として用い、ＰＥＣで被覆すると、粒径が管理された
本発明による不溶性担体を簡便に製造することができ
る。
つ容易に被覆できる性質を有しているので、適当な基材
の全表面をＰＥＣで被覆して本発明の不溶性担体を製造
することもできる。基材としては、ポリスチレン若しく
はポリ塩化ビニール等の合成高分子化合物、赤血球等の
有機材料、シリカなどの無機材料、又は紙類等を用いる
ことができ、更に、従来法において不溶性担体として用
いられている担体それ自体をＰＥＣで被覆して使用する
こともできる。例えば、ラテックス凝集法で不溶性担体
として用いるラテックス粒子は、その粒径によって測定
感度が変動するので、市販品ではその粒径がすでに管理
された状態になっている。従って、それらの市販品を基
材として用い、ＰＥＣで被覆すると、粒径が管理された
本発明による不溶性担体を簡便に製造することができ
る。
【００２８】更に、本発明者が見出したところによれ
ば、ＰＥＣには免疫学的活性物質を保護する機能もあ
る。例えば、不溶性担体に結合させるべき免疫学的活性
物質をＰＥＣ液に取り込ませた後で、基材に被覆するこ
とも可能である。従って、ＰＥＣを用いた本発明による
不溶性担体の代表的な調製方法としては、以下の方法を
挙げることができる。 （１）基材（特には、従来法における不溶性担体）に免
疫学的活性物質を結合させ、続いてＰＥＣを被覆する方
法。 （２）基材にＰＥＣを被覆し、続いて免疫学的活性物質
を結合する方法。 （３）アニオンポリマー溶液とカチオンポリマー溶液と
を混合した後に、免疫学的活性物質を添加し、その混合
液と基材とを接触させる方法。 （４）アニオンポリマー溶液とカチオンポリマー溶液と
免疫学的活性物質含有液とを同時に添加して混合し、そ
の混合液と基材とを接触させる方法。 （５）カチオンポリマー溶液に免疫学的活性物質含有液
を添加し、その混合液と基材とを接触させ、続いてアニ
オンポリマー溶液を添加して混合する方法。 （６）アニオンポリマー溶液に免疫学的活性物質含有液
を添加し、その混合液と基材とを接触させ、続いてカチ
オンポリマー溶液を添加して混合する方法。
ば、ＰＥＣには免疫学的活性物質を保護する機能もあ
る。例えば、不溶性担体に結合させるべき免疫学的活性
物質をＰＥＣ液に取り込ませた後で、基材に被覆するこ
とも可能である。従って、ＰＥＣを用いた本発明による
不溶性担体の代表的な調製方法としては、以下の方法を
挙げることができる。 （１）基材（特には、従来法における不溶性担体）に免
疫学的活性物質を結合させ、続いてＰＥＣを被覆する方
法。 （２）基材にＰＥＣを被覆し、続いて免疫学的活性物質
を結合する方法。 （３）アニオンポリマー溶液とカチオンポリマー溶液と
を混合した後に、免疫学的活性物質を添加し、その混合
液と基材とを接触させる方法。 （４）アニオンポリマー溶液とカチオンポリマー溶液と
免疫学的活性物質含有液とを同時に添加して混合し、そ
の混合液と基材とを接触させる方法。 （５）カチオンポリマー溶液に免疫学的活性物質含有液
を添加し、その混合液と基材とを接触させ、続いてアニ
オンポリマー溶液を添加して混合する方法。 （６）アニオンポリマー溶液に免疫学的活性物質含有液
を添加し、その混合液と基材とを接触させ、続いてカチ
オンポリマー溶液を添加して混合する方法。
【００２９】ＰＥＣを基材に被覆させるには、例えば、
塗布、噴霧又は浸漬などの方法で行うことができる。Ｐ
ＥＣ溶液を基材に単に接触させるだけでも良い。例え
ば、カチオンポリマー溶液とアニオンポリマー溶液とを
混合し、その混合溶液に基材を０．５〜４８時間程度浸
漬しておき、こうして処理したＰＥＣ被覆基材を生理食
塩水や精製水で洗浄し、室温で風乾するか、或いは５０
〜１００℃程度に加温し乾燥する。また、基材としてス
チレンビーズやラテックス等を用いる場合は、ＰＥＣを
被覆させたのち、遠心分離法などで洗浄し、風乾するこ
となく、洗浄液あるいは適当な緩衝液などの溶液中にそ
のまま保存しておくだけでも良い。ＰＥＣ溶液に基材を
浸漬する際、基材の材料やそれに結合する免疫学的活性
物質の特性などにより必要に応じて塩濃度や温度を適宜
調整することもできる。例えば、ポリスチレンビーズを
ＰＥＣ溶液に浸漬するとき、例えばＮａＣｌ等の塩を
０．０１〜５Ｍ、温度を０〜１００℃の雰囲気範囲でＰ
ＥＣを生成し、基材と接触させ、浸漬することによっ
て、基材へのＰＥＣの被覆処理時間を短縮（例えば温度
を高めることによる）したり、逆に、免疫学的活性物質
が結合されている基材にＰＥＣを被覆するときには、免
疫学的活性物質の活性を損なうことのない、温和な条件
下でＰＥＣを被覆することもできる。
塗布、噴霧又は浸漬などの方法で行うことができる。Ｐ
ＥＣ溶液を基材に単に接触させるだけでも良い。例え
ば、カチオンポリマー溶液とアニオンポリマー溶液とを
混合し、その混合溶液に基材を０．５〜４８時間程度浸
漬しておき、こうして処理したＰＥＣ被覆基材を生理食
塩水や精製水で洗浄し、室温で風乾するか、或いは５０
〜１００℃程度に加温し乾燥する。また、基材としてス
チレンビーズやラテックス等を用いる場合は、ＰＥＣを
被覆させたのち、遠心分離法などで洗浄し、風乾するこ
となく、洗浄液あるいは適当な緩衝液などの溶液中にそ
のまま保存しておくだけでも良い。ＰＥＣ溶液に基材を
浸漬する際、基材の材料やそれに結合する免疫学的活性
物質の特性などにより必要に応じて塩濃度や温度を適宜
調整することもできる。例えば、ポリスチレンビーズを
ＰＥＣ溶液に浸漬するとき、例えばＮａＣｌ等の塩を
０．０１〜５Ｍ、温度を０〜１００℃の雰囲気範囲でＰ
ＥＣを生成し、基材と接触させ、浸漬することによっ
て、基材へのＰＥＣの被覆処理時間を短縮（例えば温度
を高めることによる）したり、逆に、免疫学的活性物質
が結合されている基材にＰＥＣを被覆するときには、免
疫学的活性物質の活性を損なうことのない、温和な条件
下でＰＥＣを被覆することもできる。
【００３０】本明細書において、検出対象物質とは、免
疫学的反応により検出することのできる生理活性物質を
いい、特には生体成分中に含まれる生理活性物質をい
う。具体的には、タンパク質、酵素、多糖類、脂質、核
酸などがあり、それには例えば、各種抗原、抗体、レセ
プターなどが挙げられる。より具体的には、フィブリノ
ーゲン、アルブミン、Ｃ反応性タンパク質、抗ストレプ
トリジンＯ、リウマチ因子、アルファ−フェトプロテイ
ン（ＡＦＰ）、梅毒トレポネーマ抗体、ＨＢｓ抗体、Ｈ
Ｂｃ抗体、ＨＢｅ抗体、ＨＴＬＶ−１に対する抗体、Ｈ
ＩＶに対する抗体等がある。更に低分子化合物であるハ
プテン、例えばホルモン、抗てんかん薬などの各種薬剤
並びにハプテンに対する抗体をいう。従って、これらと
免疫学的に結合することのできる免疫学的活性物質と
は、前記物質のもう一方の免疫学的パートナーをいう。
また、本明細書において被検試料とは、前記の検出対象
物質を含むおそれのある試料であれば特に限定されるも
のではないが、特には血液、血清、血漿、尿、唾液、髄
液等の生体液や、細胞及び組織抽出物等をいう。
疫学的反応により検出することのできる生理活性物質を
いい、特には生体成分中に含まれる生理活性物質をい
う。具体的には、タンパク質、酵素、多糖類、脂質、核
酸などがあり、それには例えば、各種抗原、抗体、レセ
プターなどが挙げられる。より具体的には、フィブリノ
ーゲン、アルブミン、Ｃ反応性タンパク質、抗ストレプ
トリジンＯ、リウマチ因子、アルファ−フェトプロテイ
ン（ＡＦＰ）、梅毒トレポネーマ抗体、ＨＢｓ抗体、Ｈ
Ｂｃ抗体、ＨＢｅ抗体、ＨＴＬＶ−１に対する抗体、Ｈ
ＩＶに対する抗体等がある。更に低分子化合物であるハ
プテン、例えばホルモン、抗てんかん薬などの各種薬剤
並びにハプテンに対する抗体をいう。従って、これらと
免疫学的に結合することのできる免疫学的活性物質と
は、前記物質のもう一方の免疫学的パートナーをいう。
また、本明細書において被検試料とは、前記の検出対象
物質を含むおそれのある試料であれば特に限定されるも
のではないが、特には血液、血清、血漿、尿、唾液、髄
液等の生体液や、細胞及び組織抽出物等をいう。
【００３１】免疫学的活性物質は、従来公知の手段によ
り調製し、入手することができる。例えば、被検試料中
の或る抗原物質を測定する場合には、それを特異的に認
識し得る抗血清やポリクローナル抗体あるいはモノクロ
ーナル抗体等の免疫学的活性物質あるいはそれを含む生
成物を、従来公知の操作（例えば哺乳動物への免疫等）
により調製することができる。それらの免疫学的活性物
質を、予めＰＥＣ未被覆の基材に結合させる場合、ある
いは、ＰＥＣ被覆済の不溶性担体に結合させる場合は、
共に公知の物理吸着法あるいは化学結合法を用いること
ができる。
り調製し、入手することができる。例えば、被検試料中
の或る抗原物質を測定する場合には、それを特異的に認
識し得る抗血清やポリクローナル抗体あるいはモノクロ
ーナル抗体等の免疫学的活性物質あるいはそれを含む生
成物を、従来公知の操作（例えば哺乳動物への免疫等）
により調製することができる。それらの免疫学的活性物
質を、予めＰＥＣ未被覆の基材に結合させる場合、ある
いは、ＰＥＣ被覆済の不溶性担体に結合させる場合は、
共に公知の物理吸着法あるいは化学結合法を用いること
ができる。
【００３２】こうして調製された免疫学的活性物質を結
合した本発明の不溶性担体は、従来公知の不溶性担体と
全く同様の態様で使用することができる。例えば、免疫
学的活性物質を結合した本発明の不溶性担体を、被検試
料に直接あるいは被検試料の処理液と接触させ、それに
伴う免疫反応を従来公知の手段により検出することによ
り、被検試料中の検出対象物質を正確に測定することが
できる。例えば、ラテックス凝集法、酵素免疫測定法、
固相酵素測定法、蛍光免疫測定法、発光免疫測定法、金
属コロイド免疫測定法等の従来の不溶性担体を用いる免
疫学的検出法全般への応用が可能である。この際に、従
来公知の非特異的反応抑制剤（例えば、スキムミルク、
アルブミン又は界面活性剤）を併用しても構わない。
合した本発明の不溶性担体は、従来公知の不溶性担体と
全く同様の態様で使用することができる。例えば、免疫
学的活性物質を結合した本発明の不溶性担体を、被検試
料に直接あるいは被検試料の処理液と接触させ、それに
伴う免疫反応を従来公知の手段により検出することによ
り、被検試料中の検出対象物質を正確に測定することが
できる。例えば、ラテックス凝集法、酵素免疫測定法、
固相酵素測定法、蛍光免疫測定法、発光免疫測定法、金
属コロイド免疫測定法等の従来の不溶性担体を用いる免
疫学的検出法全般への応用が可能である。この際に、従
来公知の非特異的反応抑制剤（例えば、スキムミルク、
アルブミン又は界面活性剤）を併用しても構わない。
【００３３】
【作用】一般に、不溶性担体を用いる免疫学的反応にお
ける非特異反応の要因としては、不溶性担体それ自体が
有する親水性、疎水性、化学構造、荷電、表面若しくは
界面自由エネルギー、又は微細構造等による影響が考え
られる。他方、ＰＥＣは親水性のミクロドメイン構造、
表面の水の構造変化、あるいは荷電バランス等の変化に
よって著しく多様な性質を示すが、これらの物性のコン
トロールに自由度が高い。従って、こうしたコントロー
ル可能な物性を不溶性担体に付与することにより、前記
の非特異反応の要因を抑制することができる。更に、Ｐ
ＥＣは、不溶性担体に固定される免疫学的活性物質の活
性を維持する特性も有している。
ける非特異反応の要因としては、不溶性担体それ自体が
有する親水性、疎水性、化学構造、荷電、表面若しくは
界面自由エネルギー、又は微細構造等による影響が考え
られる。他方、ＰＥＣは親水性のミクロドメイン構造、
表面の水の構造変化、あるいは荷電バランス等の変化に
よって著しく多様な性質を示すが、これらの物性のコン
トロールに自由度が高い。従って、こうしたコントロー
ル可能な物性を不溶性担体に付与することにより、前記
の非特異反応の要因を抑制することができる。更に、Ｐ
ＥＣは、不溶性担体に固定される免疫学的活性物質の活
性を維持する特性も有している。
【００３４】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に具体的に説
明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。以下の実施例に記載の平均分子量は蒸気圧降下法で
測定した数平均分子量である。なお、Ａｂは抗体の略称
である。また、以下の実施例において使用したポリマー
及びその略称は次のとおりである。（ａ）カチオンポリマー ６Ｘ：ポリ［（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレン（ジ
メチルイミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメチレ
ンジクロライド（平均分子量約10000 ） ２Ｘ：ポリ［（ジメチルイミニオ）エチレン（ジメチル
イミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメチレンジク
ロライド（平均分子量約6000） ＰＶＢＭＡ：ポリ（ビニルベンジルトリメチルアンモニ
ウムクロライド）（平均分子量約15000 ） ＰＬＬ：ポリ（Ｌ−リジン）（平均分子量約3000） キトサン：（脱アセチル化度１００％、平均分子量約20
00）（ｂ）アニオンポリマー ＣＬＡ：アクリル酸／ラウリルアクリレートのランダム
共重合体（アクリル酸含量約８０モル％、平均分子量約
10000 ） ＣＯＡ：アクリル酸／２−エチルヘキシルアクリレート
のランダム共重合体（アクリル酸含量約６０モル％、平
均分子量約8000） ＰＧＡ：ポリグルタミン酸（平均分子量約4000） Ａｌｇ：アルギン酸ナトリウム（平均分子量約4000）
明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。以下の実施例に記載の平均分子量は蒸気圧降下法で
測定した数平均分子量である。なお、Ａｂは抗体の略称
である。また、以下の実施例において使用したポリマー
及びその略称は次のとおりである。（ａ）カチオンポリマー ６Ｘ：ポリ［（ジメチルイミニオ）ヘキサメチレン（ジ
メチルイミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメチレ
ンジクロライド（平均分子量約10000 ） ２Ｘ：ポリ［（ジメチルイミニオ）エチレン（ジメチル
イミニオ）メチレン−１，４−フェニレンメチレンジク
ロライド（平均分子量約6000） ＰＶＢＭＡ：ポリ（ビニルベンジルトリメチルアンモニ
ウムクロライド）（平均分子量約15000 ） ＰＬＬ：ポリ（Ｌ−リジン）（平均分子量約3000） キトサン：（脱アセチル化度１００％、平均分子量約20
00）（ｂ）アニオンポリマー ＣＬＡ：アクリル酸／ラウリルアクリレートのランダム
共重合体（アクリル酸含量約８０モル％、平均分子量約
10000 ） ＣＯＡ：アクリル酸／２−エチルヘキシルアクリレート
のランダム共重合体（アクリル酸含量約６０モル％、平
均分子量約8000） ＰＧＡ：ポリグルタミン酸（平均分子量約4000） Ａｌｇ：アルギン酸ナトリウム（平均分子量約4000）
【００３５】実施例１：α−フェトプロテインの測定 （１）ビーズ状担体（ビーズ／Ａｂ／ＰＥＣ）の調製 カチオンポリマーである６Ｘを１７３．５μｇ／ｍｌの
濃度（イオン席として１０-3Ｍ；以下１０-3ＵＭとい
う）となるように０．１５Ｍ−ＮａＣｌ含有１０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）（以下ＰＢＳともいう）を用
いて調整し、６Ｘ溶液とした。また、アニオンポリマー
であるＣＬＡを１６５．６μｇ／ｍｌの濃度（１０- 3
ＵＭ）となるようにＰＢＳを用いて調整し、ＣＬＡ溶液
とした。ポリスチレンビーズ〔直径６．３５ｍｍ：セキ
スイ化学工業（株）〕１個に対し、抗ヒトα−フェトプ
ロテインＦ（ａｂ’）2 抗体〔抗ヒトＡＦＰ抗体：
（株）ヤトロン〕溶液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）０．５
ｍｌを加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水
で３回洗浄した。前記の６Ｘ溶液０．２５ｍｌと前記の
ＣＬＡ溶液０．２５ｍｌを混合してＰＥＣ溶液を調製し
た。その溶液に抗体感作ビーズ１個を加え、５６℃で３
０分間振盪した後、生理食塩水で３回洗浄した。得られ
たビーズ状担体を生理食塩水中で保存し、後記の測定に
用いた。（２）ビーズ状担体（ビーズ／ＰＥＣ＋Ａｂ）の調製 前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌと前項（１）のＣＬ
Ａ溶液０．２５ｍｌを混合してＰＥＣ溶液を調製した
後、前項（１）の抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（４ｍｇ／ｍ
ｌ：ＰＢＳ）１μｌ（終濃度８μｇ／ｍｌ）を加えた。
この溶液に、前項（１）のポリスチレンビーズ１個を加
え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水で３回洗
浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中で保存
し、後記の測定に用いた。（３）ビーズ状担体（ビーズ／カチオンポリマー＋アニ
オンポリマー＋Ａｂ）の調製 前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌと前項（１）のＣＬ
Ａ溶液０．２５ｍｌと前項（１）の抗ヒトＡＦＰ抗体
（４ｍｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）溶液１μｌを同時に加えて混
合した。この溶液に、前項（１）のポリスチレンビーズ
１個を加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水
で３回洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中
で保存し、後記の測定に用いた。
濃度（イオン席として１０-3Ｍ；以下１０-3ＵＭとい
う）となるように０．１５Ｍ−ＮａＣｌ含有１０ｍＭリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７．０）（以下ＰＢＳともいう）を用
いて調整し、６Ｘ溶液とした。また、アニオンポリマー
であるＣＬＡを１６５．６μｇ／ｍｌの濃度（１０- 3
ＵＭ）となるようにＰＢＳを用いて調整し、ＣＬＡ溶液
とした。ポリスチレンビーズ〔直径６．３５ｍｍ：セキ
スイ化学工業（株）〕１個に対し、抗ヒトα−フェトプ
ロテインＦ（ａｂ’）2 抗体〔抗ヒトＡＦＰ抗体：
（株）ヤトロン〕溶液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）０．５
ｍｌを加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水
で３回洗浄した。前記の６Ｘ溶液０．２５ｍｌと前記の
ＣＬＡ溶液０．２５ｍｌを混合してＰＥＣ溶液を調製し
た。その溶液に抗体感作ビーズ１個を加え、５６℃で３
０分間振盪した後、生理食塩水で３回洗浄した。得られ
たビーズ状担体を生理食塩水中で保存し、後記の測定に
用いた。（２）ビーズ状担体（ビーズ／ＰＥＣ＋Ａｂ）の調製 前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌと前項（１）のＣＬ
Ａ溶液０．２５ｍｌを混合してＰＥＣ溶液を調製した
後、前項（１）の抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（４ｍｇ／ｍ
ｌ：ＰＢＳ）１μｌ（終濃度８μｇ／ｍｌ）を加えた。
この溶液に、前項（１）のポリスチレンビーズ１個を加
え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水で３回洗
浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中で保存
し、後記の測定に用いた。（３）ビーズ状担体（ビーズ／カチオンポリマー＋アニ
オンポリマー＋Ａｂ）の調製 前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌと前項（１）のＣＬ
Ａ溶液０．２５ｍｌと前項（１）の抗ヒトＡＦＰ抗体
（４ｍｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）溶液１μｌを同時に加えて混
合した。この溶液に、前項（１）のポリスチレンビーズ
１個を加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水
で３回洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中
で保存し、後記の測定に用いた。
【００３６】（４）ビーズ状担体（ビーズ／（カチオン
ポリマー＋Ａｂ）＋アニオンポリマー）の調製 前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌに前項（１）の抗ヒ
トＡＦＰ抗体（４ｍｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）溶液１μｌを加
えて混合した後、前項（１）のポリスチレンビーズ１個
を加えた。更に前項（１）のＣＬＡ溶液０．２５ｍｌを
加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水で３回
洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中で保存
し、後記の測定に用いた。（５）ビーズ状担体（ビーズ／（アニオンポリマー＋Ａ
ｂ）＋カチオンポリマー）の調製 前項（１）のＣＬＡ溶液０．２５ｍｌに前項（１）の抗
ヒトＡＦＰ抗体（４ｍｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）溶液１μｌを
加えて混合した後、前項（１）のポリスチレンビーズ１
個を加えた。更に前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌを
加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水で３回
洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中で保存
し、後記の測定に用いた。（６）従来ビーズ（ＰＥＣ未コート）の調製 前項（１）のポリスチレンビーズ１個に対し、前項
（１）の抗ヒトＡＦＰ抗体液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）
０．５ｍｌを加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理
食塩水で３回洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食
塩水中で保存し、後記の測定に用いた。（７）ＡＦＰの測定 ０．１％変性ウシアルブミン含有ＰＢＳ（以下ｄ−ＢＳ
Ａともいう）でＡＦＰ標準溶液〔（株）ヤトロン〕を希
釈し、ＡＦＰとして０〜４０ｎｇ／ｍｌの各希釈列を調
製した。各希釈列４００μｌに前記（１）〜（６）の操
作によって調製した各不溶性担体１個を加え、３７℃で
１時間静置した後、生理食塩水で２回洗浄した。そこに
ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（８μｇ／
ｍｌ：ｄ−ＢＳＡ）４００μｌを加え、３７℃で１時間
静置し、生理食塩水で３回洗浄した。処理した不溶性担
体を新しい容器に移し、発色液としての０．２５％ｏ−
フェニレンジアミンと０．０１５％Ｈ2 Ｏ2 とを含む
０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）４００μｌを加
えて、室温で２５分間静置して発色させた。１Ｎ−ＨＣ
ｌを加えて発色を停止させ、波長４９２ｎｍにおける吸
光度を測定した。その結果を、前項（１）〜（５）の担
体と前項（６）の担体とを比較してそれぞれ図１〜図５
に示す。図１〜５から明らかなとおり、ＰＥＣで処理し
たいずれのポリスチレンビーズも、従来法と比較してブ
ランク値は低減し、かつ実効感度（ΔＥ：サンプルの吸
光度−ブランク値）が上昇することが確認された。
ポリマー＋Ａｂ）＋アニオンポリマー）の調製 前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌに前項（１）の抗ヒ
トＡＦＰ抗体（４ｍｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）溶液１μｌを加
えて混合した後、前項（１）のポリスチレンビーズ１個
を加えた。更に前項（１）のＣＬＡ溶液０．２５ｍｌを
加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水で３回
洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中で保存
し、後記の測定に用いた。（５）ビーズ状担体（ビーズ／（アニオンポリマー＋Ａ
ｂ）＋カチオンポリマー）の調製 前項（１）のＣＬＡ溶液０．２５ｍｌに前項（１）の抗
ヒトＡＦＰ抗体（４ｍｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）溶液１μｌを
加えて混合した後、前項（１）のポリスチレンビーズ１
個を加えた。更に前項（１）の６Ｘ溶液０．２５ｍｌを
加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理食塩水で３回
洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食塩水中で保存
し、後記の測定に用いた。（６）従来ビーズ（ＰＥＣ未コート）の調製 前項（１）のポリスチレンビーズ１個に対し、前項
（１）の抗ヒトＡＦＰ抗体液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）
０．５ｍｌを加え、５６℃で３０分間振盪した後、生理
食塩水で３回洗浄した。得られたビーズ状担体を生理食
塩水中で保存し、後記の測定に用いた。（７）ＡＦＰの測定 ０．１％変性ウシアルブミン含有ＰＢＳ（以下ｄ−ＢＳ
Ａともいう）でＡＦＰ標準溶液〔（株）ヤトロン〕を希
釈し、ＡＦＰとして０〜４０ｎｇ／ｍｌの各希釈列を調
製した。各希釈列４００μｌに前記（１）〜（６）の操
作によって調製した各不溶性担体１個を加え、３７℃で
１時間静置した後、生理食塩水で２回洗浄した。そこに
ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（８μｇ／
ｍｌ：ｄ−ＢＳＡ）４００μｌを加え、３７℃で１時間
静置し、生理食塩水で３回洗浄した。処理した不溶性担
体を新しい容器に移し、発色液としての０．２５％ｏ−
フェニレンジアミンと０．０１５％Ｈ2 Ｏ2 とを含む
０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）４００μｌを加
えて、室温で２５分間静置して発色させた。１Ｎ−ＨＣ
ｌを加えて発色を停止させ、波長４９２ｎｍにおける吸
光度を測定した。その結果を、前項（１）〜（５）の担
体と前項（６）の担体とを比較してそれぞれ図１〜図５
に示す。図１〜５から明らかなとおり、ＰＥＣで処理し
たいずれのポリスチレンビーズも、従来法と比較してブ
ランク値は低減し、かつ実効感度（ΔＥ：サンプルの吸
光度−ブランク値）が上昇することが確認された。
【００３７】実施例２：α−フェトプロテインの測定 カチオンポリマー−アニオンポリマーの組み合わせとし
て、6X-COA、2X-CLA、PVBMA-COA 、PVBMA-CLA 、PLL-PG
A 、6X-Alg、キトサン-Alg、及びキトサン-COAの組み合
わせを用い、実施例１（１）と同様の操作によりＰＥＣ
被覆ビーズ状担体を調製し、ＡＦＰの測定を行った結
果、種々の組み合わせのＰＥＣで処理したポリスチレン
ビーズも、従来法と比較してブランク値の低減やＳ／Ｎ
比の上昇などで良好な結果を示した。
て、6X-COA、2X-CLA、PVBMA-COA 、PVBMA-CLA 、PLL-PG
A 、6X-Alg、キトサン-Alg、及びキトサン-COAの組み合
わせを用い、実施例１（１）と同様の操作によりＰＥＣ
被覆ビーズ状担体を調製し、ＡＦＰの測定を行った結
果、種々の組み合わせのＰＥＣで処理したポリスチレン
ビーズも、従来法と比較してブランク値の低減やＳ／Ｎ
比の上昇などで良好な結果を示した。
【００３８】実施例３：α−フェトプロテインの測定
（荷電バランスによる差） （１）ＰＥＣ被膜ビーズ状担体（ビーズ／ＰＥＣ／Ａ
ｂ）の調製 カチオンポリマーであるＰＶＢＭＡを２１１．５μｇ／
ｍｌの濃度（１０-3ＵＭ）となるようにＰＢＳを用いて
調整し、ＰＶＢＭＡ溶液とした。また、アニオンポリマ
ーであるＣＬＡを実施例１（１）と同様にＰＢＳで濃度
１０-3ＵＭに調整し、ＣＬＡ溶液とした。前記のＰＶＢ
ＭＡ溶液２ｍｌとＣＬＡ溶液１ｍｌを混合して荷電バラ
ンスが＋３．３のＰＥＣ溶液を調製した。この溶液０．
５ｍｌに対し、実施例１で用いたポリスチレンビーズ１
個を加え、５６℃で１時間振盪した後、生理食塩水で３
回洗浄した。ＰＥＣ被覆ビーズ状担体１個に対し、実施
例１の抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）
０．５ｍｌを加え、４℃で一昼夜放置した後、生理食塩
水で３回洗浄した。調製した不溶性担体を生理食塩水中
で保存し、後記の測定に用いた。同様に、ＰＶＢＭＡ溶
液１．２ｍｌとＣＬＡ溶液１ｍｌからのＰＥＣ（荷電バ
ランス＋０．９）、ＰＶＢＭＡ溶液１ｍｌとＣＬＡ溶液
１ｍｌからのＰＥＣ（荷電バランス±０）、ＰＶＢＭＡ
溶液１ｍｌとＣＬＡ溶液１．２ｍｌからのＰＥＣ（荷電
バランス−０．９）、及びＰＶＢＭＡ溶液１ｍｌとＣＬ
Ａ溶液２ｍｌからのＰＥＣ（荷電バランス−３．３）の
各溶液を用いて、前記と同様の操作により各ビーズを調
製した。（２）従来法ビーズ（ＰＥＣ未コート）の調製 実施例１で用いたポリスチレンビーズ１個に対し、実施
例１の抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）
０．５ｍｌを加え、４℃で一昼夜放置した後、生理食塩
水で３回洗浄した。こうして調製した不溶性担体を生理
食塩水中で保存し、後記の測定に用いた。（３）ＡＦＰの測定 前記の操作によって調製した各不溶性担体を用いて、実
施例１（７）と同様の操作でＡＦＰを測定した。その結
果を図６〜１０に示す。荷電バランスが＋３．３のＰＥ
Ｃを用いて調製したビーズ（図６）では、従来法と実効
感度は同程度（ブランク値は上昇）であったが、その他
の荷電バランスを有するＰＥＣを用いた担体は、従来法
と比較してブランク値は低減し、かつ実効感度が上昇す
ることが確認された。
（荷電バランスによる差） （１）ＰＥＣ被膜ビーズ状担体（ビーズ／ＰＥＣ／Ａ
ｂ）の調製 カチオンポリマーであるＰＶＢＭＡを２１１．５μｇ／
ｍｌの濃度（１０-3ＵＭ）となるようにＰＢＳを用いて
調整し、ＰＶＢＭＡ溶液とした。また、アニオンポリマ
ーであるＣＬＡを実施例１（１）と同様にＰＢＳで濃度
１０-3ＵＭに調整し、ＣＬＡ溶液とした。前記のＰＶＢ
ＭＡ溶液２ｍｌとＣＬＡ溶液１ｍｌを混合して荷電バラ
ンスが＋３．３のＰＥＣ溶液を調製した。この溶液０．
５ｍｌに対し、実施例１で用いたポリスチレンビーズ１
個を加え、５６℃で１時間振盪した後、生理食塩水で３
回洗浄した。ＰＥＣ被覆ビーズ状担体１個に対し、実施
例１の抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）
０．５ｍｌを加え、４℃で一昼夜放置した後、生理食塩
水で３回洗浄した。調製した不溶性担体を生理食塩水中
で保存し、後記の測定に用いた。同様に、ＰＶＢＭＡ溶
液１．２ｍｌとＣＬＡ溶液１ｍｌからのＰＥＣ（荷電バ
ランス＋０．９）、ＰＶＢＭＡ溶液１ｍｌとＣＬＡ溶液
１ｍｌからのＰＥＣ（荷電バランス±０）、ＰＶＢＭＡ
溶液１ｍｌとＣＬＡ溶液１．２ｍｌからのＰＥＣ（荷電
バランス−０．９）、及びＰＶＢＭＡ溶液１ｍｌとＣＬ
Ａ溶液２ｍｌからのＰＥＣ（荷電バランス−３．３）の
各溶液を用いて、前記と同様の操作により各ビーズを調
製した。（２）従来法ビーズ（ＰＥＣ未コート）の調製 実施例１で用いたポリスチレンビーズ１個に対し、実施
例１の抗ヒトＡＦＰ抗体溶液（８μｇ／ｍｌ：ＰＢＳ）
０．５ｍｌを加え、４℃で一昼夜放置した後、生理食塩
水で３回洗浄した。こうして調製した不溶性担体を生理
食塩水中で保存し、後記の測定に用いた。（３）ＡＦＰの測定 前記の操作によって調製した各不溶性担体を用いて、実
施例１（７）と同様の操作でＡＦＰを測定した。その結
果を図６〜１０に示す。荷電バランスが＋３．３のＰＥ
Ｃを用いて調製したビーズ（図６）では、従来法と実効
感度は同程度（ブランク値は上昇）であったが、その他
の荷電バランスを有するＰＥＣを用いた担体は、従来法
と比較してブランク値は低減し、かつ実効感度が上昇す
ることが確認された。
【００３９】実施例４：血清由来非特異的反応の抑制効
果 実施例１で用いたポリスチレンビーズ１個に対して、カ
チオンポリマーである６Ｘを１７３．５μｇ／ｍｌの濃
度（１×１０-3ＵＭ）となるようにＰＢＳを用いて調整
して６Ｘ溶液とした。また、アニオンポリマーであるＣ
ＬＡを実施例１（１）と同様にＰＢＳで濃度１０-3ＵＭ
に調整し、ＣＬＡ溶液とした。６Ｘ溶液とＣＬＡ溶液と
を等量混合してＰＥＣ溶液を調製し、実施例１で用いた
ポリスチレンビーズ１個に対してそのＰＥＣ溶液０．５
ｍｌを加え、５６℃で３０分間振盪し、生理食塩水で３
回洗浄し、ＰＥＣ被覆ビーズ状担体を作成した。次に、
ヒト血清１００μｌにｄ−ＢＳＡ３００μｌと前記の操
作によって調製したポリスチレンビーズ１個とを加え、
３７℃で１時間静置した後、生理食塩水で２回洗浄し
た。そこにペルオキシダーゼ標識抗ヤギＩｇＧ抗体溶液
（８μｇ／ｍｌ）４００μｌを加え、３７℃で１時間静
置し、生理食塩水で３回洗浄した。処理した不溶性担体
を新しい容器に移し、発色液としての０．２５％ｏ−フ
ェニレンジアミンと０．０１５％Ｈ2 Ｏ2 とを含む０．
１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）４００μｌを加え
て、室温で２５分間静置して発色させ、１Ｎ−ＨＣｌ
（３ｍｌ）を加えて反応を停止させ、波長４９２ｎｍに
おける吸光度を測定した。対照試験としてはＰＥＣ未コ
ートのポリスチレンビーズを用いて同様の操作を行っ
た。その結果を表１に示す。
果 実施例１で用いたポリスチレンビーズ１個に対して、カ
チオンポリマーである６Ｘを１７３．５μｇ／ｍｌの濃
度（１×１０-3ＵＭ）となるようにＰＢＳを用いて調整
して６Ｘ溶液とした。また、アニオンポリマーであるＣ
ＬＡを実施例１（１）と同様にＰＢＳで濃度１０-3ＵＭ
に調整し、ＣＬＡ溶液とした。６Ｘ溶液とＣＬＡ溶液と
を等量混合してＰＥＣ溶液を調製し、実施例１で用いた
ポリスチレンビーズ１個に対してそのＰＥＣ溶液０．５
ｍｌを加え、５６℃で３０分間振盪し、生理食塩水で３
回洗浄し、ＰＥＣ被覆ビーズ状担体を作成した。次に、
ヒト血清１００μｌにｄ−ＢＳＡ３００μｌと前記の操
作によって調製したポリスチレンビーズ１個とを加え、
３７℃で１時間静置した後、生理食塩水で２回洗浄し
た。そこにペルオキシダーゼ標識抗ヤギＩｇＧ抗体溶液
（８μｇ／ｍｌ）４００μｌを加え、３７℃で１時間静
置し、生理食塩水で３回洗浄した。処理した不溶性担体
を新しい容器に移し、発色液としての０．２５％ｏ−フ
ェニレンジアミンと０．０１５％Ｈ2 Ｏ2 とを含む０．
１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６．０）４００μｌを加え
て、室温で２５分間静置して発色させ、１Ｎ−ＨＣｌ
（３ｍｌ）を加えて反応を停止させ、波長４９２ｎｍに
おける吸光度を測定した。対照試験としてはＰＥＣ未コ
ートのポリスチレンビーズを用いて同様の操作を行っ
た。その結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】 表１の結果のとおり、本来は発色すべきでない条件下に
おいても、ＰＥＣ未コートビーズでは、血清中の検出対
象物質以外の物質の干渉によって発色が起こっており、
同様の干渉はＰＥＣ被覆ビーズ状担体では効率的に抑制
されることが確認された。前記実施例１〜３に示した組
み合わせのうち、６Ｘ−ＣＬＡの組み合わせ以外のもの
にも同様の効果が認められ、本発明の有用性を確認する
ことができた。
おいても、ＰＥＣ未コートビーズでは、血清中の検出対
象物質以外の物質の干渉によって発色が起こっており、
同様の干渉はＰＥＣ被覆ビーズ状担体では効率的に抑制
されることが確認された。前記実施例１〜３に示した組
み合わせのうち、６Ｘ−ＣＬＡの組み合わせ以外のもの
にも同様の効果が認められ、本発明の有用性を確認する
ことができた。
【００４１】実施例５：α1 −アンチキモトリプシンの
測定 抗ヒトα1 −アンチキモトリプシン抗体〔（株）医学生
物学研究所〕を公知の手段によりペプシン消化し、抗ヒ
トα1 −アンチキモトリプシンＦ（ａｂ’）2抗体（抗
ヒトα1 −ＡＣＴ抗体）を調製した。ポリスチレンビー
ズ〔直径６．３５ｍｍ；セキスイ化学工業（株）〕１個
に、その抗ヒトα1 −ＡＣＴ抗体溶液（１２．５μｇ／
ｍｌ）０．５ｍｌを加え、３７℃で２時間振盪してビー
ズに抗体を結合し、生理食塩水で３回洗浄した。カチオ
ンポリマーである６Ｘを１×１０-3ＵＭとなるようにＰ
ＢＳを用いて調整して６Ｘ溶液とした。また、カチオン
ポリマーであるＰＶＢＭＡを１×１０-3ＵＭとなるよう
にＰＢＳを用いて調整してＰＶＢＭＡ溶液とした。更
に、アニオンポリマーであるＣＯＡを１×１０-3ＵＭと
なるようにＰＢＳを用いて調整してＣＯＡ溶液とした。
６Ｘ溶液とＣＯＡ溶液とを等量混合して６Ｘ−ＣＯＡの
組み合わせからなるＰＥＣを調製し、その０．５ｍｌを
先の抗ヒトα1 −ＡＣＴ抗体を結合したビーズに添加
し、３７℃で４時間振盪した後、生理食塩水で３回洗浄
し、後記の測定に用いた。同様にＰＶＢＭＡ溶液とＣＯ
Ａ溶液とを等量混合してＰＶＢＭＡ−ＣＯＡの組み合わ
せのＰＥＣを調製し、前記と同様の操作によりビーズを
処理し、後記の測定に用いた。
測定 抗ヒトα1 −アンチキモトリプシン抗体〔（株）医学生
物学研究所〕を公知の手段によりペプシン消化し、抗ヒ
トα1 −アンチキモトリプシンＦ（ａｂ’）2抗体（抗
ヒトα1 −ＡＣＴ抗体）を調製した。ポリスチレンビー
ズ〔直径６．３５ｍｍ；セキスイ化学工業（株）〕１個
に、その抗ヒトα1 −ＡＣＴ抗体溶液（１２．５μｇ／
ｍｌ）０．５ｍｌを加え、３７℃で２時間振盪してビー
ズに抗体を結合し、生理食塩水で３回洗浄した。カチオ
ンポリマーである６Ｘを１×１０-3ＵＭとなるようにＰ
ＢＳを用いて調整して６Ｘ溶液とした。また、カチオン
ポリマーであるＰＶＢＭＡを１×１０-3ＵＭとなるよう
にＰＢＳを用いて調整してＰＶＢＭＡ溶液とした。更
に、アニオンポリマーであるＣＯＡを１×１０-3ＵＭと
なるようにＰＢＳを用いて調整してＣＯＡ溶液とした。
６Ｘ溶液とＣＯＡ溶液とを等量混合して６Ｘ−ＣＯＡの
組み合わせからなるＰＥＣを調製し、その０．５ｍｌを
先の抗ヒトα1 −ＡＣＴ抗体を結合したビーズに添加
し、３７℃で４時間振盪した後、生理食塩水で３回洗浄
し、後記の測定に用いた。同様にＰＶＢＭＡ溶液とＣＯ
Ａ溶液とを等量混合してＰＶＢＭＡ−ＣＯＡの組み合わ
せのＰＥＣを調製し、前記と同様の操作によりビーズを
処理し、後記の測定に用いた。
【００４２】α1 −ＡＣＴ標準溶液〔（株）医学生物学
研究所〕を０．１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ
（以下ＢＳＡ−ＰＢＳともいう）で希釈し、α1 −ＡＣ
Ｔとして０〜２０ｎｇ／ｍｌの各希釈列を調製した。各
希釈列４００μｌに前記の操作によって調製した各ビー
ズ状不溶性担体１個を加え、３７℃で１時間静置した
後、生理食塩水で２回洗浄した。そこにペルオキシダー
ゼ標識抗ヒトα1 −ＡＣＴ抗体溶液（２３μｇ／ｍｌ）
４００μｌを加え、３７℃で１時間静置し、生理食塩水
で３回洗浄した。処理した不溶性担体を新しい容器に移
し、発色液としての０．２５％ｏ−フェニレンジアミン
と０．０１５％Ｈ2 Ｏ2 とを含む０．１Ｍクエン酸緩衝
液（ｐＨ６．０）４００μｌを加えて、室温で２５分間
静置して発色させ、１Ｎ−ＨＣｌを加えて反応を停止さ
せて、波長４９２ｎｍにおける吸光度を測定した。その
結果を図１１に示す。どちらのＰＥＣによってもブラン
ク値が低減し、実効感度の上昇が認められた。
研究所〕を０．１％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ
（以下ＢＳＡ−ＰＢＳともいう）で希釈し、α1 −ＡＣ
Ｔとして０〜２０ｎｇ／ｍｌの各希釈列を調製した。各
希釈列４００μｌに前記の操作によって調製した各ビー
ズ状不溶性担体１個を加え、３７℃で１時間静置した
後、生理食塩水で２回洗浄した。そこにペルオキシダー
ゼ標識抗ヒトα1 −ＡＣＴ抗体溶液（２３μｇ／ｍｌ）
４００μｌを加え、３７℃で１時間静置し、生理食塩水
で３回洗浄した。処理した不溶性担体を新しい容器に移
し、発色液としての０．２５％ｏ−フェニレンジアミン
と０．０１５％Ｈ2 Ｏ2 とを含む０．１Ｍクエン酸緩衝
液（ｐＨ６．０）４００μｌを加えて、室温で２５分間
静置して発色させ、１Ｎ−ＨＣｌを加えて反応を停止さ
せて、波長４９２ｎｍにおける吸光度を測定した。その
結果を図１１に示す。どちらのＰＥＣによってもブラン
ク値が低減し、実効感度の上昇が認められた。
【００４３】
【発明の効果】本発明による、少なくとも表面が特定の
高分子電解質錯体からなる不溶性担体を用いると、従来
の免疫学的検出法における非特異的反応を有効に抑制し
て、測定精度を向上させ、生体試料中に極微量でしか含
まれていない検査対象物質を正確かつ高精度で検出ない
し測定することができる。
高分子電解質錯体からなる不溶性担体を用いると、従来
の免疫学的検出法における非特異的反応を有効に抑制し
て、測定精度を向上させ、生体試料中に極微量でしか含
まれていない検査対象物質を正確かつ高精度で検出ない
し測定することができる。
【図１】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例１（１）〕と
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
【図２】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例１（２）〕と
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
【図３】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例１（３）〕と
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
【図４】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例１（４）〕と
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
【図５】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例１（５）〕と
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
従来のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりＡＦＰ
を測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフであ
る。
【図６】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例３（１）：荷
電バランス＝＋３．３〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを
用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光
度の変化を示すグラフである。
電バランス＝＋３．３〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを
用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光
度の変化を示すグラフである。
【図７】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例３（１）：荷
電バランス＝＋０．９〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを
用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光
度の変化を示すグラフである。
電バランス＝＋０．９〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを
用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光
度の変化を示すグラフである。
【図８】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例３（１）：荷
電バランス＝±０〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを用い
てＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光度の
変化を示すグラフである。
電バランス＝±０〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを用い
てＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光度の
変化を示すグラフである。
【図９】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例３（１）：荷
電バランス＝−０．９〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを
用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光
度の変化を示すグラフである。
電バランス＝−０．９〕と従来のＰＥＣ非被覆担体とを
用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸光
度の変化を示すグラフである。
【図１０】本発明のＰＥＣ被覆担体〔実施例３（１）：
荷電バランス＝−３．３〕と従来のＰＥＣ非被覆担体と
を用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸
光度の変化を示すグラフである。
荷電バランス＝−３．３〕と従来のＰＥＣ非被覆担体と
を用いてＥＩＡによりＡＦＰを測定した場合の濃度と吸
光度の変化を示すグラフである。
【図１１】本発明のＰＥＣ被覆担体（実施例５）と従来
のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりα1 −ＡＣ
Ｔを測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフで
ある。
のＰＥＣ非被覆担体とを用いてＥＩＡによりα1 −ＡＣ
Ｔを測定した場合の濃度と吸光度の変化を示すグラフで
ある。
フロントページの続き (72)発明者 阿部 康次 長野県上田市中央２丁目14番10号 (56)参考文献 Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．，１（５) （1990）ｐ531〜533 Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ Ｉｎｔｅｒｆａ ｃｅ Ｓｃｉ．，147（２）（1991）ｐ. 450〜456
Claims (3)
- 【請求項１】 （ａ１）一般式（Ｉ） 【化１】 ［式中、Ｒ1及びＲ4はそれぞれ独立に炭素数１〜１０個
のアルキレン基、一般式 【化２】 （式中、Ｒ11及びＲ12は、それぞれ独立に、炭素数１又
は２個のアルキレン基である）で表される基又はアリー
レン基であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6はそれぞれ独立
に炭素数１〜３個のアルキル基であるか、 又はＲ1は式中の２個の窒素原子及びＲ2、Ｒ3、Ｒ5及び
Ｒ6と一緒になって式 【化３】 で表される基であってＲ4は前記と同じ意味であるもの
とし、そしてＸ1 -は対イオンであり、ｍは５以上の数で
ある］で表されるカチオンポリマー、 （ａ２）一般式（II） 【化４】 ［式中、Ａは一般式 【化５】 （式中、Ｂは炭素数１又は２個のアルキレン基であり、 Ｒ21、Ｒ22及びＲ23はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ2 -は対イオンであ
る）で表される基であるか、一般式 【化６】 （式中、Ｒ24は炭素数１〜３個のアルキル基又はベンジ
ル基であり、Ｘ3 -は対イオンである）で表される基であ
るか、又は一般式 【化７】 （式中、Ｒ25は炭素数１又は２個のアルキル基であり、
Ｒ26、Ｒ27及びＲ28はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ4 -は対イオンであ
る）で表される基であり、ｎは１０以上の数である］で
表されるカチオンポリマー、 （ａ３）一般式（III） 【化８】 （式中、ｖは３又は４であり、Ｒ91は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、Ｒ92は−Ｎ+Ｈ2Ｘ
5 -又は−Ｎ+ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2Ｘ6 -であり、Ｘ5 -及びＸ
6 -はそれぞれ独立に対イオンであり、ｔは２０〜１００
であり、そしてｒは１０以上の整数である）で表される
カチオンポリマー、及び （ａ４）カチオン性多糖類からなる群から選んだカチオ
ン性高分子電解質少なくとも１種と、 （ｂ１）一般式（IV） 【化９】 （式中、ｕは１又は２であり、Ｒ81は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、ｓは２０〜１００
であり、そしてｑは１０以上の整数である）で表される
アニオンポリマー、 （ｂ２）一般式（Ｖ） 【化１０】 （式中、Ｒ31は水素原子又はメチル基であり、Ｒ32は炭
素数６〜１８個のアルキル基であり、Ｙはカルボン酸基
若しくはその塩、スルホン酸基若しくはその塩、リン酸
基若しくはその塩、又は、カルボン酸基若しくはその
塩、スルホン酸基若しくはその塩又はリン酸基若しくは
その塩を含有するアリール基であり、ａは２０〜１００
の数であり、ｐは１０以上の数である）で表されるアニ
オンポリマー、及び （ｂ３）アニオン性多糖類からなる群から選んだアニオ
ン性高分子電解質少なくとも１種とを反応させる（但
し、前記カチオン性高分子電解質が、Ａが一般式 【化１１】 で表される基である一般式（II）で表されるカチオンポ
リマーである場合には、前記アニオン性高分子電解質
は、一般式（Ｖ）で表されるアニオンポリマーでないも
のとする）ことによって得られる高分子電解質錯体によ
り、少なくとも表面が形成されていることを特徴とす
る、免疫学的検出用の不溶性担体。 - 【請求項２】 検出対象物質と免疫学的に結合すること
のできる免疫学的活性物質を前記検出対象物質と結合可
能な状態で表面に固定して含み、 （ａ１）一般式（Ｉ） 【化１２】 ［式中、Ｒ1及びＲ4はそれぞれ独立に炭素数１〜１０個
のアルキレン基、一般式 【化１３】 （式中、Ｒ11及びＲ12は、それぞれ独立に、炭素数１又
は２個のアルキレン基である）で表される基又はアリー
レン基であって、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6はそれぞれ独立
に炭素数１〜３個のアルキル基であるか、 又はＲ1は式中の２個の窒素原子及びＲ2、Ｒ3、Ｒ5及び
Ｒ6と一緒になって式 【化１４】 で表される基であってＲ4は前記と同じ意味であるもの
とし、そしてＸ1 -は対イオンであり、ｍは５以上の数で
ある］で表されるカチオンポリマー、 （ａ２）一般式（II） 【化１５】 ［式中、Ａは一般式 【化１６】 （式中、Ｂは炭素数１又は２個のアルキレン基であり、 Ｒ21、Ｒ22及びＲ23はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ2 -は対イオンであ
る）で表される基であるか、一般式 【化１７】 （式中、Ｒ24は炭素数１〜３個のアルキル基又はベンジ
ル基であり、Ｘ3 -は対イオンである）で表される基であ
るか、又は一般式 【化１８】 （式中、Ｒ25は炭素数１又は２個のアルキル基であり、
Ｒ26、Ｒ27及びＲ28はそれぞれ独立に水素原子又は炭素
数１〜３個のアルキル基であり、Ｘ4 -は対イオンであ
る）で表される基であり、ｎは１０以上の数である］で
表されるカチオンポリマー、 （ａ３）一般式（III） 【化１９】 （式中、ｖは３又は４であり、Ｒ91は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、Ｒ92は−Ｎ+Ｈ2Ｘ
5 -又は−Ｎ+ＨＣ（ＮＨ）ＮＨ2Ｘ6 -であり、Ｘ5 -及びＸ
6 -はそれぞれ独立に対イオンであり、ｔは２０〜１００
であり、そしてｒは１０以上の整数である）で表される
カチオンポリマー、及び （ａ４）カチオン性多糖類からなる群から選んだカチオ
ン性高分子電解質少なくとも１種と、 （ｂ１）一般式（IV） 【化２０】 （式中、ｕは１又は２であり、Ｒ81は水素原子；炭素数
１〜４個のアルキル基；ヒドロキシ基、メルカプト基若
しくは炭素数１〜３個のアルキルチオ基で置換された炭
素数１〜４個のアルキル基；又はイミダゾリルメチル基
若しくはインドリルメチル基であり、ｓは２０〜１００
であり、そしてｑは１０以上の整数である）で表される
アニオンポリマー、 （ｂ２）一般式（Ｖ） 【化２１】 （式中、Ｒ31は水素原子又はメチル基であり、Ｒ32は炭
素数６〜１８個のアルキル基であり、Ｙはカルボン酸基
若しくはその塩、スルホン酸基若しくはその塩、リン酸
基若しくはその塩、又は、カルボン酸基若しくはその
塩、スルホン酸基若しくはその塩又はリン酸基若しくは
その塩を含有するアリール基であり、ａは２０〜１００
の数であり、ｐは１０以上の数である）で表されるアニ
オンポリマー、及び （ｂ３）アニオン性多糖類からなる群から選んだアニオ
ン性高分子電解質少なくとも１種とを反応させる（但
し、前記カチオン性高分子電解質が、Ａが一般式 【化２２】 で表される基である一般式（II）で表されるカチオンポ
リマーである場合には、前記アニオン性高分子電解質
は、一般式（Ｖ）で表されるアニオンポリマーでないも
のとする）ことによって得られる高分子電解質錯体によ
り、少なくとも表面が形成されていることを特徴とす
る、不溶性担体。 - 【請求項３】 請求項２に記載の不溶性担体と被検試料
とを接触させて免疫学的反応を誘起させ、その反応に由
来する検出可能な変化を検出することを特徴とする、被
検試料中の検出対象物質を免疫学的に検出する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33804792A JP3348891B2 (ja) | 1992-11-25 | 1992-11-25 | 不溶性担体及びその担体を用いる免疫学的検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP33804792A JP3348891B2 (ja) | 1992-11-25 | 1992-11-25 | 不溶性担体及びその担体を用いる免疫学的検出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06160394A JPH06160394A (ja) | 1994-06-07 |
| JP3348891B2 true JP3348891B2 (ja) | 2002-11-20 |
Family
ID=18314421
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP33804792A Expired - Fee Related JP3348891B2 (ja) | 1992-11-25 | 1992-11-25 | 不溶性担体及びその担体を用いる免疫学的検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3348891B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4706502B2 (ja) * | 2006-02-27 | 2011-06-22 | 住友ベークライト株式会社 | 固相担体の製造方法 |
| JP7025413B2 (ja) * | 2017-04-25 | 2022-02-24 | デンカ株式会社 | 膜担体及びその製造方法並びに液体試料検査キット |
-
1992
- 1992-11-25 JP JP33804792A patent/JP3348891B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．，１（５）（１９９０）ｐ５３１〜５３３ |
| Ｊ．Ｃｏｌｌｏｉｄ Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ Ｓｃｉ．，１４７（２）（１９９１）ｐ．４５０〜４５６ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06160394A (ja) | 1994-06-07 |
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